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manual de prácticas con doce prácticas que pretende ser una guía en la
microbiológicos en cárnicos.
ética profesional, aplicando las normas de seguridad e higiene y las del cuidado
1
PRACTICA No. 1 (S-1)
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
1. Material de cristalería.
3
Uso. Verter los líquidos a medir en el matraz en forma lenta; llevar a la
marca (aforo) cuidando que el menisco quede sobre la marca; colocar el
tapón al matraz y agita para homogenizar la solución, invirtiendo y rotando
el matraz; si la solución se va a quedar en el matraz, etiquétalo en forma
adecuada; decantar de manera adecuada los líquidos al llenarlos o
vaciarlos.
Elabora una secuencia gráfica del uso del vaso de precipitados.
4
b) Llena el siguiente cuadro con los datos del reactivo: Fosfato de potasio
monobásico que utilizaras como ejemplo en el uso de la balanza y de la autoclave.
c) Llena el siguiente cuadro con los datos del peso del reactivo Fosfato de potasio
monobásico (los datos de tres equipos de trabajo).
Promedio
Desv. estándar
4. Operación de la autoclave.
Las formas más comunes de esterilización del material son por calor húmedo y
seco. El mejor procedimiento es el calentamiento bajo presión, dado que a
presiones superiores a la atmosférica la temperatura puede incrementar arriba de
los 100° C, disminuyendo así el tiempo necesario para la esterilización del
material. En la esterilización por calor seco se utilizan las estufas o muflas a
temperaturas mayores de 100° C. La técnica usada para evitar la contaminación
durante las manipulaciones se llama técnica aséptica.
Se requiere habilidad para tener éxito en el laboratorio de microbiología. El
problema más común son los gérmenes que pululan en el aire, dado que el aire
siempre contiene partículas de polvos que generalmente llevan una población de
microorganismos, por lo que cuando se abren los recipientes, deben manejarse en
tal forma que no penetre el aire contaminado.
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b. Tubos de ensaye. Coloque los tubos bien lavados deposítelos en
recipientes adecuados, y proceda a esterilizar en horno, a 150°-300° C
durante 1- 1 ½ horas.
c. Matraces. Tape el cuello del matraz con algodón, lo suficientemente
apretado para evitar que se destape. Como protección coloque un gorrito
de papel de estraza. Esterilícelos en autoclave a 1.5 atmosferas de presión
por 15 minutos.
CUESTIONARIO
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4. ¿Cuál es el problema más común con el que te enfrentas (en cuanto a
asepsia) en tu trabajo en el laboratorio de microbiología?
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6 ¿Cuáles son las formas más comunes de esterilización del material de
laboratorio de microbiología?
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7¿Cuáles son las formas más comunes de esterilización del área de trabajo?
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FIRMA DEL ALUMNO
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PRÁCTICA No. 2 (S-1)
FUNDAMENTACIÓN
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La normalidad y molaridad de la solución al ser definidas en función del
volumen pueden variar apreciablemente cuando varía la temperatura, debido a la
dependencia del volumen con la temperatura.
Las soluciones porcentuales se definen como la composición centesimal en
peso basada en 100 g de solución. Se presentan tres casos principales:
porcentaje peso-volumen (P/V), porcentaje peso-peso (P/P) y porcentaje volumen-
volumen (V/V).
OBJETIVO
Capacitar al alumno en las diversas formas que existen para preparar y
expresar las concentraciones de las soluciones.
MATERIAL
Tres matraces aforados de 100 ml, 1 balanza analítica, 1 pipeta de 10 ml, 1
probeta de 100 ml, ácido sulfúrico concentrado (H2SO4), ácido clorhídrico
concentrado (HCl), azul de metileno, rojo de metilo y etanol.
PROCEDIMIENTO
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Ejemplos:
1.0 N -------( )
2.0 N ------- X
X= ___________mL.
1.0 ml __________ ( )
11
X __________ ( )
X= _____________________ml.
CUESTIONARIO
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3.- Cuando usas ácido en tus preparaciones de reactivos, que premisa
debes de tomar en cuenta.
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FIRMA DEL ALUMNO
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PRÁCTICA No. 3 (S-2)
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
PROCEDIMIENTO
2 2.5
3 1.25
4 0.625
5 0.315
6 0.156
7 0
CUESTIONARIO
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Elabora el diagrama de flujo de la práctica realizada y pega la grafica resultante de
la curva de calibración.
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FIRMA DEL ALUMNO
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PRÁCTICA No. 4 (S-2)
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
Elaborar perfiles sensoriales para los productos cárnicos del taller de alimentos del
CBTis No. 51 y compararlos con productos de la competencia, empleando una
prueba descriptiva de perfil sensorial (sabor y textura).
MATERIAL
1 Vaso de precipitados de 250 ml, 1 balanza granataria, 1 vidrio de reloj, 1 estufa,
1 desecador, silica gel, 1 cápsula de porcelana, 1 horno, 1 pinzas de combustión,
1 guantes, 1 balanza analítica, 1 mortero con pistilo, 1 tubo de ensayo de 18 x 20
mm, 1 pipeta graduada de 5 ml, ácido nítrico concentrado (HNO3), ácido nítrico 2
M (HNO3, 2 M) 1 termómetro, 1 recipiente para baño de arena, 1 tubo para
centrífuga y 1 centrífuga.
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PROCEDIMIENTO
18
Tabla 1. Parámetros seleccionados para evaluar la calidad del producto
CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las características del área de prueba para estos análisis de
caracterización sensorial?
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2. ¿Cuáles son los atributos principales que se evalúan?
3. Elabora una tabla con los datos obtenidos de la calidad sensorial del
producto elaborado en el TA-CBTis 51 y el de la competencia
4. Con los datos elabora una grafica como la del ejemplo del perfil sensorial de
los diferentes alimentos.
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FIRMA DEL ALUMNO
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
MATERIAL
Hidróxido de amonio al 88%, Acido nítrico diluido 1:2, Acido clorhídrico 5 N, Vasos
de precipitados de 500 ml, Agitador de vidrio, Matraces volumétricos de 100, 250
y 1000 ml, Bureta de 50 ml graduada en décimas de ml, Pipetas de 5, 10 y 25 ml
graduadas en décimas de ml y volumétricas de la misma capacidad, Frascos para
guardar los reactivos, Papel milimétrico para graficar, Cápsula o crisol de
porcelana, Mechero de Bunsen, Triángulo de porcelana, Pinzas para crisol,
Embudo, Soporte universal y anillo, Papel filtro, Papel indicador de pH,
potenciómetro, espectrofotómetro, sulfanilamida y NED.
PROCEDIMIENTO
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CUESTIONARIO
3. Llena el siguiente cuadro con los datos que resultaron de los análisis
practicados a los alimentos cárnicos elaborados en el TA-CBTis 51
4. Elabora los diagramas de flujo para cada uno de los análisis practicados
al producto cárnico.
5. En las Normas Oficiales Mexicanas, que se muestran en la siguiente
relación de documentos que puedes consultar, encontrarás la secuencia
de pasos para la realización de los análisis proximales a los productos
cárnicos, en un archivo de Word anota los pasos para cada uno de los
análisis y súbela a la plataforma de WWW.CBTis051.edu.mx
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http://revistaveterinaria.fmvz.unam.mx/fmvz/revvetmex/a1999/rvmv30n1/rvm3
0106.pdf
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FIRMA DEL ALUMNO
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PRÁCTICA No. 6 (S-3)
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
El alumno preparará los siguientes medios: caldo lactosado (CL), Agar métodos
estándar, caldo verde brillante bilis y caldo E.C.(Escherichia coli).
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
Caldo lactosado.
Usado en investigación de microorganismos coliformes y fermentación de la
lactosa por microorganismos comunes.
Preparación:
Suspender 13 gramos del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar
perfectamente y distribuir (10 ml) en tubos con campana Durham. Esterilizar a 121
grados por 15 minutos. Preparar 8 tubos (4 sencillos y 4 dobles).
Nota. Usar tubos con rosca y tapón de plástico de 20 x 150 mm , el pH del medio debe de
ajustarse a 6.9 ± 0.2 ajustándose con soluciones de ácido clorhídrico 0.1 N e hidróxido de
sodio 0.1 N según sea el caso.
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Disolver 40 gramos del polvo en un litro de agua destilada y distribuir en tubos con
porciones de 10 ml (preparar 5 tubos). Ajustar el pH 7.2 ± 0.2. Esterilizar a 121
grados durante 15 minutos.
Nota: Por cada tubo que te salga positivo de la prueba con caldo lactosado (CL) se usa un
tubo de verde brillante bilis.
CUESTIONARIO
4. ¿Porque los medios deben retirarse del autoclave tan pronto como sea
posible después de la esterilización?
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5. ¿Porque por cada tubo que te salga positivo de la prueba con caldo
lactosado (CL) se usa un tubo de verde brillante bilis?
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FIRMA DEL ALUMNO
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
MATERIAL
9 tubos de ensaye de 16 x 150 mm, 10 pipetas de 1 ml, 9 cajas de petri, 1
mechero, 1 tripie, 1 tela de asbesto, 1 espátula, 1 probeta de 250 ml, 1 piseta, 1
frasco estéril de boca ancha,1 gradilla, Agar para métodos estándar y solución
buffer de fosfato.
PROCEDIMIENTO
CUESTIONARIO
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Desventajas:_____________________________________________________
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FIRMA DEL ALUMNO
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
CUESTIONARIO
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FUNDAMENTACIÓN
2. Microorganismos termófilos:
a) Esporas del agriado plano
b) Termófilos anaerobios que producen sulfhídrico
c) Termófilos anaerobios que no producen sulfhídrico
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Para su preparación se pone el hígado picado en agua y se calienta a
ebullición y dejar a fuego lento durante una hora. Enfriar, retirar la capa de grasa,
ajustar el pH a 7.0 y hervir otros 10 minutos.
Filtrar a través de gasa o manta de cielo presionando para quitar el exceso
de líquido. Agregar al caldo la peptona, el fosfato y el almidón soluble.
Ajustar el pH de 7.0 y llevar el volumen del caldo a 1000 ml con agua
destilada y filtrar a través de papel filtro grueso; en este paso el caldo y la carne
pueden guardarse en el refrigerador, si el medio no se puede terminar el mismo
día.
Caldo púrpura que se compone de:
Agar - agar y parafina. Se compra ya preparado.
OBJETIVO
Investigar en los alimentos (atún y/o sardina) el grado de contaminación por
microorganismos patógenos.
MATERIAL
1 lata de atún, 1 lata de sardina, 8 tubos de 22 x 175 mm, 1 gradilla, 1
mechero, abrelatas(estéril), algodón, caldo hígado, caldo púrpura, agar - agar al
2%, parafina 40:60.
PROCEDIMIENTO
CUESTIONARIO
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1. ¿Cuáles son las principales causas de las alteraciones microbianas en los
alimentos enlatados?
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FIRMA DEL ALUMNO
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PRÁCTICA No. 10 (S-3)
FUNDAMENTACION
Los miembros del género Salmonella han sido estudiados como patógenos
de origen alimentario. Aunque algunas veces se denomina envenenamiento
alimentario, es una enfermedad gastrointestinal debida a la diseminación
alimentaria de Salmonella y es mas adecuado llamarla infección alimentaria por
Salmonella, porque los síntomas aparecen solo después de que el patógeno crece
en el intestino (por lo que los síntomas pueden experimentarse después de varios
días de comer el alimento contaminado) los síntomas de la salmonelosis incluyen
la aparición súbita de dolor de cabeza, escalofrío, vomito y diarrea, seguido de
fiebres que persisten varios días. El diagnostico se hace por los síntomas y por el
cultivo del organismo de las heces. Prácticamente todas las especies de
Salmonella son patógenos para el hombre: una, Salmonella typhi, causa la
enfermedad seria llamada fiebre tifoidea, tanto que una pequeña cantidad de otras
especies causan gastroenteritis transmitida por los alimentos.
Salmonella typhimurium es la causa más común de salmonelosis en el
hombre. Las destinos últimos de las Salmonellas transmitidas en los alimentos son
el hombre y los animales de sangre caliente. El organismo llega a los alimentos
por contaminación de quienes manejan estos; en el caso de alimentos como
huevos, o la carne, el origen de la contaminación puede ser el animal que produce
el alimento. Los alimentos más comunes comprometidos son la carne y los
productos de carne ( por ejemplo pasteles de carne, salchichas, carnes curadas),
las aves, los huevos, la leche, los productos lácteos y los mariscos. Si los
alimentos se cocinan en forma apropiada, el microorganismo morirá y no habrá
ningún problema, pero muchos de estos productos se comen sin cocinar o
parcialmente cocinados. Se han rastreado cepas de Salmonella que ocasionan
gastroenteritis transmitidas por los alimentos en los productos hechos con huevos
crudos como natillas, pasteles de crema, merengues, tarta y ponche de huevo.
Los alimentos previamente cocinados que han sido calentados y conservados sin
refrigeración, o los alimentos refrigerados un tiempo después de abrir la lata,
presentan el desarrollo de Salmonella si han estado contaminados por un
manejador de alimentos infectado.
Las infecciones por Salmonella son más comunes en verano que en
invierno, debido probablemente a que las condiciones ambientales son más
favorables para su desarrollo en los alimentos.
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OBJETIVO
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
Aislamiento de Salmonella:
1. Cerrar firmemente el tapón de roscas de los matraces con los cultivos de pre-
enriquecimiento y agitar suavemente, transferir respectivamente 1 ml de la
muestra a un tubo que contenga 10 ml de caldo tetrationato y a otro con 10 ml con
caldo selenito. Como alternativa en sustitución del caldo tetrationato puede
emplearse el medio Vassiliadis- Rappaport.
2. Incubar de 18 a 24 horas a 35°C o para alimentos fuertemente contaminados a
42°C por el mismo periodo. Estriar los productos que fueron directamente
enriquecidos en medios selectivos.
3. Mezclar el tubo con caldo selenito cistina y estriar en agar xilosa lisina
desoxicolato ( XLD), agar verde brillante ( VB ) y una tercera caja con cualquiera
de los medios selectivos adicionales ( agar enterico Hektoen, agar sulfito de
bismuto o agar SS).
4. Efectuar el mismo procedimiento para el caldo tetrationato.
5. Incubar las placas 24 +/- 2 horas a 35 °C.
6. Examinar las placas para investigar la presencia de colonias típicas de
Salmonella, de acuerdo con las siguientes características:
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CUESTIONARIO.
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5. ¿Por qué las infecciones por Salmonella son más comunes en verano que
en invierno?
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FIRMA DEL ALUMNO
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PRÁCTICA No. 11 (S-3)
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
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En caso contrario prolongar hasta 5 días la incubación y entonces
proceder al recuento final de cada colonia, reportar el número obtenido a
los 3 días haciendo notar en el informe este periodo de incubación.
8. Contar el numero de colonias de hongos y levaduras multiplicar por la
inversa de la dilución hecha considerar la alícuota de la muestra y
determinar el número de hongos y levaduras por g de muestra.
CUESTIONARIO
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FIRMA DEL ALUMNO
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PRÁCTICA No. 12 (S-3)
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVO
El alumno practicará un análisis microbiológico completo de el alimento camarón
crudo.
MATERIAL
1 Licuadora, 1 rosca, 1 cuchara grande, 1 paquete de pipetas (5-1), 1 molde, 1
guante, 1 frasco ambar,1 frasco con agua de diluyente de 90 ml, 2 aguas de
diluyente de 9ml, 1 CLS 225 ml, 2 CE, 9 tubos de caldo lauril, 2 PDA.
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PROCEDIMIENTO
1.- Tomar 10 gr de la muestra a analizar y licuar con 90 ml de agua de diluyente
2.- Tomar 1 ml de la muestra y colocarlo en cada una de las 4 cajas de petri.
3.- Añadir el agar Cuenta Estándar a dos cajas
4.- Añadir el PDA a las 2 cajas restantes.
5.- Tomar .1, 1 y 10 ml de la muestra y colocarlos en los tubos con caldo lauril.
5.-Incubar las muestras a su temperatura ideal para su crecimiento.
6.-Se toman 25 g de la muestra a analizar.
7.- Se añade 225 ml de CLS (medio de enriquecimiento).
8.- Se licua durante 1 minuto.
9.- Se transfiere a un frasco estéril de boca ancha dejándolo reposar durante
1hora.
10.- Se ajusta el pH a 6.8
11.- Se incuba 24 h a 35 °C
CUESTIONARIO
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BIBLIOGRAFÍA
Atlas Ronald M., Microbiología Fundamentos y Aplicaciones. Ed. CECSA, 1a. ed.
México, D.F. 887p.
Ayres H. Gilbert, Análisis químico cuantitativo. Ed. Harla, 2da. ed. México, D.F.
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cualitativa, Ed. PARANINFO , Madrid, 1972.
43
Luna Rangel, Fundamentos de química analítica, Vols. I y II Ed. Limusa, 1991,
México, D.F.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the
folin fenol reagent. J. Biol Chem 1951: 193:265-275
Orozco D. Fernando, Análisis químico cuantitativo. Ed. Porrua, 1989, México D.F.
Pearson A, Tauber F. Processed meats. 2nd ed. New York. Van Nostrand Reinhold,
1973
44
W. C. Frazier y D.C. Westhoff., 2000. Microbiología de los alimentos, Ed. Acribia,
España
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/213ssa102.html
WWW.CBTis051.edu.mx
http://revistaveterinaria.fmvz.unam.mx/fmvz/revvetmex/a1999/rvmv30n1/rvm30106
.pdf
45