ФГБОУ ВО «КАЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ

КАФЕДРА МЕДИЦИНСКОЙ БИОЛОГИИ И ГЕНЕТИКИ

МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ КЛЕТКИ

Часть 1. Световая микроскопия.
Строение и функция клеточного ядра. ДНК

Учебное пособие

Казань 2016
 УДК 611:018(075.8)
ББК 28.05+28.06
М

Печатается по решениюЦентрального координационно-методического совета

Казанского государственного медицинского университета.

Авторы:
проф., д.м.н. Исламов Р.Р., проф., д.м.н. Волков Е.М., к.б.н., доц. Кошпаева Е.С.,
асс., к.б.н. Пахалина И.А., Колочкова Е.В., к.б.н., доц. Бойчук Н.В.

Под редакцией д.м.н. профессора Исламова Р.Р.

Рецензенты:
Зав. кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии Казанского
государственного медицинского университета проф. Челышев Ю.А.
Зав. кафедрой биологии Волгоградского государственного медицинского
университета д.м.н., доцент Снигур Г.Л.

Молекулярная биология клетки. Часть 1. Световая микроскопия. Строение

и функция клеточного ядра. ДНК. Учебное пособие, переработанное и
дополненное / Исламов Р.Р., Волков Е.М., Кошпаева Е.С., Пахалина И.А.,
Колочкова Е.В., Бойчук Н.В. – Казань: КГМУ, 2016. – 42 с.

Учебное пособие составлено в соответствии с Федеральным

государственным образовательным стандартом высшего образования (ФГОС
ВО) и типовой Учебной программой по дисциплине
«Биология». В 1 части учебного пособия «Световая микроскопия. Строение
и функция ядра. ДНК» изложены цели и задачи изучения данной темы,
указаны формируемые компетенции, приведён теоретический обзор,
изложенный в лаконичной и рубрицированной форме и имеющий
медицинскую направленность. Практические навыки включают правила
работы с прямым световым и стереоскопическим микроскопами, анализ
особенностей строения ядра в различных клеточных типах, лабораторную
работу по выявлению полового хроматина. Учебное пособие включает
типовые тестовые вопросы, вопросы самоконтроля и справочник терминов.
Учебное пособие предназначено для студентов младших курсов
медицинских факультетов и медицинских вузов.

© Казанский государственный медицинский университет, 2016

 4

Часть 1

СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ.
СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИЯ КЛЕТОЧНОГО ЯДРА. ДНК

Целью публикации настоящего учебного пособия является

систематизация знаний о современных методах световой
микроскопии биологических объектов, морфологических
особенностях клеточного ядра, основных закономерностях
организации ядерной ДНК. В учебном пособие включена
современная информация о молекулярном строении ядра, которая
не представлена в учебниках, используемых студентами в качестве
основной литературы.
Задачей учебного пособия является ознакомление студентов с
принципами работы прямого светового и стереоскопического
микроскопов; помочь студентам освоить алгоритм работы с
микроскопом при использовании объективов разного увеличения; с
помощью схематических изображений и рисунков способствовать
изучению микропрепаратов и зарисовать примеры организации ядер
в разных клеточных типах; научить студентов методу выявления
полового хроматина в эпителиальных клетках слизистой оболочки
щеки.

Формируемые компетенции
• Лечебный факультет, дисциплина «Биология» – ОПК-1, ОПК-7
• Педиатрический факультет, дисциплина «Биология» – ОК-4, ПК-20,
ПК-21
• Стоматологический факультет, дисциплина «Биология» – ОПК-1,
ОПК-7
• Медико-профилактический факультет, дисциплина «Биология,
экология» – ОК-7, ПК-6
• Медико-биологический факультет, дисциплина «Биология» - ОК-
1, ПК-27, дисциплина «Биология, эволюционная биология» – ОК1,
ПК2

Студент должен знать:

1. Устройство и назначение прямого светового микроскопа и
стереоскопчического микроскопов.
2. Последовательность операций при установке прямого светового
 5

микроскопа в рабочее положение.

3. Правила работы при малом и большом увеличениях микроскопа.
4. Основные правила, которые нужно соблюдать при работе с макро-
и микрометрическим винтом и револьвером.
5. Правила работы с микроскопом при использовании
иммерсионного объектива.
6. Особенности работы со стереоскопическим микроскопом.
7. Микроскопическое строение интерфазного ядра клетки человека
(хроматин, ядрышко, нуклеоплазма, ядерная оболочка).
8. Функции клеточного ядра.
9. Молекулярное строение ДНК.

Студент должен уметь:

1. Пользоваться учебной, научной, научно-популярной
литературой, ресурсами Интернет для получения знаний по
изучаемой теме.
2. Выбирать метод световой микроскопии от поставленной задачи.
3. Работать с лабораторным светооптическим микроскопом,
используя объективы разного увеличения.
4. Находить и устранять ошибки, возникающие при
микроскопировании.
5. Идентифицировать клеточное ядро и его структуры под
микроскопом в изучаемых микропрепаратах.
6. Выявлять половой хроматин в эпителиальных клетках слизистой
оболочки щеки.
7. Зарисовывать изображение микропрепарата с соблюдением
предъявляемых к рисунку требований.
8. Различать морфологические особенности ядер лейкоцитов в
мазке крови человека.

Студент должен владеть:

1. Навыками работы с микроскопом.
2. Навыками приготовления временных микропрепаратов.
3. Навыками отображения изучаемых объектов в рисунке.
Оснащение занятия:
1. Мультимедийная презентация по теме.
2. Таблицы:
• прямой световой микроскоп
• клетки крови лягушки
• клетки крови человека.
3. Микроскопы:
• прямой световой монокулярный
• прямой световой бинокулярный
• прямой световой стереоскопический
• объективы суховоздушные и иммерсионные
4. Микропрепараты:
• мазок крови лягушки
• мазок крови человека
• клеточная культура фибробластов
5. Студенческий лабораторный набор для выявления полового
хроматина в эпителиальных клетках слизистой оболочки щеки.

Хронологическая карта занятия:

1. Организационная часть.
2. Тестовый контроль базового уровня знаний.
3. Объяснение практического задания.
4. Самостоятельная работа.
5. Проверка выполненных работ в альбомах.
6. Контроль конечного уровня знаний.
7. Установка задания для подготовки к следующей теме.
 ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ ОБЗОР

МИКРОСКОПИЯ ЖИВЫХ СИСТЕМ В БИОЛОГИИ

Биология — дословно в переводе с греческого языка — учение о
жизни. Термин «биология» ввёл в обращение Жан Батист Ламарк в
1802 г. Он сделал это одновременно и независимо от немецкого
учёного Готфрида Рейнхольда Тревирануса. В настоящем
понимании биология — наука о живых системах (организмах).
Живые системы в результате миллиардов лет эволюции произошли
из неживого и обладают качественно новым свойством «жизнь».
Биология изучает закономерности развития, строения и
жизнедеятельности всех живых систем от вирусов до высших
растений и животных. Важнейшим методом биологии является
изучение объектов с применением увеличивающих приборов, таких,
как светооптический микроскоп. Этот старейший инструмент
произвёл революцию в биологии, дав возможность открыть
клеточное строение живых организмов. Одним из претендентов на
звание изобретателя микроскопа считается итальянский физик
Галилео Галилей, сконструировавший в 1609 г. зрительную трубу с
двояковыпуклой и двояковогнутой линзами и нацеливший её в небо.
Изучая небесные тела, Галилей решил изменить положение линз в
зрительной трубе таким образом, чтобы с её помощью можно было
рассматривать предметы, расположенные прямо перед зрительной
трубой. В 1624 г. он усовершенствовал увеличительный прибор,
которому друг Галилея Джованни Фабер в 1625 г. дал название
«микроскоп» по аналогии с телескопом. В 1665 г. английский
естествоиспытатель Роберт Гук сконструировал собственный
микроскоп, при помощи которого стал изучать растения, в
частности, кору пробкового дерева. В результате этого
исследования появился термин «клетка». Голландский натуралист
Антони ван Левенгук — первый, кто сумел привлечь к микроскопу
внимание биологов. Он открыл мир одноклеточных организмов, о
чём в 1673 г. доложил Лондонскому королевскому обществу.

Устройство прямого светового микроскопа

Микроскоп состоит из оптической, осветительной и
механической систем (рис. 1-1).
• Механическая система служит для управления оптической и
осветительной системами. К ней относятся основание,
тубусодержатель, предметный столик, тубус (зрительная труба),
револьвер, макрометрический винт, микрометрический винт, коробка
с механизмом микрометрической фокусировки, кронштейн
конденсора, головка тубусодержателя.

Основание выполняется в виде тяжёлой отливки, обычно имеет

подковообразную форму. К основанию на шарнире прикреплён
тубусодержатель, несущий все остальные части микроскопа. На
тубусодержателе укреплён предметный столик, на который
помещается изучаемый препарат. На столике имеются клеммы-
зажимы для закрепления препарата. С тубусодержателем подвижно
связан тубус, в его верхний конец вставляется окуляр. В верхней
части тубусодержателя укреплена головка, с которой соединён
револьвер — круглая вращающаяся пластинка. В ней имеются 4
отверстия с резьбой для ввинчивания объективов. Револьвер имеет
защёлкивающий механизм, который обеспечивает фиксацию
центрированного положения объектива. Вращая револьвер, можно
установить под тубус нужный объектив. Для наведения на резкость
тубус необходимо поднимать

Тубус

Тубусодержатель

Штатив
(основание)

Рис. 1-1. Прямой световой микроскоп. Этот оптический прибор

позволяет наблюдать мелкие объекты. Увеличение изображения
достигается системой линз объектива и окуляра. Зеркало, конденсор
и диафрагма направляют световой поток и регулируют освещение
объекта. Механическая часть микроскопа включает основание,
предметный столик, макро- и микрометрический винты, тубус,
тубусодержатель [из Alberts B. et al, 1989].

или опускать. Для этого существуют макрометрический (для

первоначальной фокусировки) и микрометрический (для тонкой
фокусировки) винты.
• Оптическая система даёт увеличенное перевёрнутое
изображение исследуемого материала. К ней относятся окуляр и
объективы. Они состоят из системы линз, заключённых в
металлическую оправу. Окуляр вставляется в верхний конец
тубуса. Увеличение окуляра определяется цифрой, указанной на
оправе (7х, 10х, 15х). Объективы ввинчиваются в револьвер.
Увеличение объектива обозначено цифрой на боковой части
оправы объектива (4х, 8х, 10х, 40х, 90х, 100х). Объективы 4х, 8х,
10х, 40х — это сухие объективы, т.к. между фронтальной линзой
объектива и препаратом находится воздух. Объективы с водной
(увеличение 40х, 60х) и масляной (увеличение 90х, 100х)
иммерсией относятся к погружным. При работе с ними на
препарат наносится капля воды или иммерсионного масла, при
этом фронтальная линза объектива погружается в эту каплю.
Объектив с водной иммерсией на оправе имеет белую полоску,
объектив с масляной иммерсией — чёрную полоску (табл. 1-1).
Инвертированные микроскопы отличаются от прямых тем, что
объектив в них располагается под предметным столиком, на
котором находится объект исследования. Инвертированный
микроскоп применяют для исследования культуры
микроорганизмов, клеток, тканей, или органов.

Таблица 1-1. Характеристика объективов

 Осветительная система предназначена для направления
световых лучей на рассматриваемый объект. Она состоит из
зеркала и конденсора с диафрагмой, откидной линзой и съёмным
светофильтром. Зеркало подвижно укреплено в нижней части
тубусодержателя и может вращаться, что позволяет осветить
объект, пользуясь различными источниками света. Зеркало имеет
две отражающие поверхности: вогнутую и плоскую. Первая
используется при слабом и рассеянном освещении, её
рекомендуется употреблять при работе без конденсора и с малым
увеличением. Плоская поверхность зеркала применяется при
сильном и равномерном освещении. Ею пользуются при работе с
конденсором и большим увеличением. Конденсор служит для
собирания лучей света в сходящийся пучок. Система
вмонтированных линз позволяет добиться различной степени
концентрации световых лучей.
При работе с объективами малого увеличения рекомендуется
опустить конденсор при помощи рукояток вниз и использовать
откидную линзу.
При работе с объективами 40х и 90х конденсор должен быть
поднят до упора и откидная линза конденсора выведена из хода
лучей. Непосредственно под линзой конденсора расположена
ирисовая диафрагма. Она служит для регулирования величины
проходящего пучка лучей. Диафрагма состоит из подвижных
металлических пластинок, веерообразно налегающих друг на
друга. Движением рычага можно сдвигать и раздвигать пластинки,
изменяя диаметр отверстия между ними и тем самым регулируя
освещенность поля зрения микроскопа. В нижней части
конденсора расположены откидная линза и рамка для
светофильтра.
• Увеличение микроскопа — физическое свойство линз объектива
и окуляра. Увеличение микроскопа приблизительно оценивают
как произведение увеличения объектива и увеличения окуляра.
• Разрешающая сила, определяющая возможность прибора
давать
отдельное изображение каждой из двух близлежащих точек
изучаемого объекта, зависит от предела разрешения, то есть
минимального расстояния между двумя точками, при котором
еще можно различить каждую из них. Предел разрешения
вычисляется с помощью формулы:
 Подчёркиваем, что разрешающая сила связана обратной
зависимостью с пределом разрешения, то есть она тем больше,
чем меньше этот предел. Повысить разрешение микроскопа
можно за счёт увеличения апертуры. Увеличить апертуру можно
путём увеличения коэффициента преломления. Коэффициент
преломления жидких сред (иммерсионные среды) больше
коэффициента преломления воздуха (n = 1,0). В микроскопии
используют несколько иммерсионных сред: масляную,
глицериновую, водную. Так как Sinα < 1, а показатель
преломления большинства материалов, применяющихся в
оптических приборах, не превышает 1,6, максимальная численная
апертура линз при масляной иммерсии равна 1,4. Масло улучшает
видимость объекта, т.к. оно имеет близкий к стеклу показатель
преломления света и большая часть лучей, проходящих через
препарат, попадает в объектив. Исходя из этого и на основании
вышеприведённой формулы, можно вычислить максимально
возможное разрешение при использовании световой волны
видимого света. Теоретически возможный предел разрешения для
обычных светооптических микроскопов, работающих в
проходящем свете, составляет примерно 0,25 мкм.
• Оптические артефакты. Объектив состоит из нескольких
стеклянных линз. Первая линза — сферическая или
полусферическая — предназначена для получения увеличенного
изображения. Все остальные линзы корригируют оптические
артефакты (аберрации).
Хроматические аберрации. Фокусное расстояние линзы для
лучей разной длины волны различно. Поэтому при
 использовании немонохроматического света формируемое
линзой изображение предмета имеет окрашенные края.
Хроматические аберрации устраняют ахроматические и
апохроматические объективы.
Сферические аберрации. Различие оптических свойств
центральной и периферической частей сферической линзы —
причина сферических аберраций. Их устраняют
апохроматические объективы. Сферическая линза не позволяет
одновременно фокусировать изображение по всему полю. Для
устранения этого недостатка применяют специальные
объективы — планахроматы и планапохроматы. Наилучшим
объективом считают планапохромат с высокой числовой
апертурой.

Устройство стереоскопического микроскопа

Стереоскопический микроскоп даёт прямое объёмное
(трёхмерное) изображение и позволяет, благодаря своим оптико-
техническим характеристикам, выполнять препаровальные работы в
эксперименте, а также проводить хирургические манипуляции в
клинике (табл. 1-2).
Оптическая часть микроскопа включает окуляр с различной
степенью увеличения (6х, 8х, 12,5х, 14х) и объектив со сменными
линзами (увеличение 0,6х, 1х, 2х, 3х, 4х, 7х).
Осветительная часть состоит из поворотного отражателя, имеющего
с одной стороны плоское, с другой — матовое стекло. Иногда к
микроскопу придается трансформатор и осветитель с коллектором.
К механической системе относят штатив, предметный столик, 2
окулярные трубки, кремальеры (винты для регулировки резкости),
рукоятку переключения со шкалой, на которой нанесены цифры
увеличения объектива.

Таблица 1-2. Сравнительные характеристики прямого

светооптического и стереоскопического микроскопов

Главное отличие стереоскопического микроскопа от микроскопа

с плоским двухмерным изображением заключается в принципе
построения оптической схемы для наблюдения объекта двумя
глазами. Изображение формируется на основе бинокулярного
зрения, позволяющего воспринимать объект в трёхмерном
пространстве. Для получения трёхмерной геометрической проекции
изображения оптическая схема стереоскопического микроскопа
(схема по Грену или схема по Аббе) позволяет изучать объект под
двумя разными углами, где каждый угол формирует свой поток
света, свою ветвь наблюдения в одном и том же поле
зрения. Для получения прямого действительного изображения
объекта в оптическую схему микроскопа также включены
оборачивающие призменные или линзовые системы.

Специальные виды световой микроскопии

Темнопольная микроскопия. Лучи от осветителя падают на
объект сбоку, а в оптическую систему микроскопа поступают
только рассеянные лучи. Наблюдаемый объект выглядит как
освещённый на тёмном поле. Темнопольная микроскопия позволяет
исследовать, например, неокрашенные живые одноклеточные
организмы.
Фазово-контрастная микроскопия применяется для
исследования прозрачных (неокрашенных) биологических объектов,
структуры которых имеют разную оптическую плотность. Для
фазово-контрастной микроскопии применяются специальные
окуляры и конденсор, или специализированный фазово-контрастный
микроскоп.
Поляризационная микроскопия — метод исследования объекта
в
поляризованном свете с помощью специализированного
микроскопа, предназначена для формирования изображения
неокрашенных анизотропных структур (например, коллагеновые
волокна и миофибриллы).
Интерференционная микроскопия — метод
интерференционного контраста, основанный на интерференции
световых волн, прошедших через неокрашенный объект.
Специальная интерференционная оптика (оптика Номарского)
применяется в микроскопах с дифференциальным
интерференционным контрастом.
Люминесцентная микроскопия применяется для обнаружения
флюоресцирующих (люминесцирующих) объектов. В
люминесцентном микроскопе свет от мощного источника проходит
через два фильтра. Один фильтр задерживает свет перед образцом и
пропускает свет длины волны, возбуждающей флюоресценцию
образца. Другой фильтр пропускает свет длины волны, излучаемой
флюоресцирующим объектом. Таким образом, флюоресцирующие
объекты поглощают свет одной длины волны и излучают в другой
области спектра.

КЛЕТОЧНОЕ ЯДРО
К надцарству (домену) эукариот принадлежат животные, растения
и грибы, клетки которых, в отличии от прокариот (надцарство
безъядерных клеток — бактерии и археи), имеют ядро. Ядро
содержит наследственную информацию, закодированную в молекуле
ДНК. В ядре происходит удвоение (репликация) молекул ДНК при
делении клетки (митозе и мейозе) и синтез (транскрипция) РНК на
молекуле ДНК. Синтез рибосомальной РНК и образование
субъединиц рибосом происходит в специализированной структуре
ядра — ядрышке.
Ядро (nucleus) — самая крупная органелла эукариотической
клетки диаметром от 3 до 10 мкм. Ядро может быть различной
формы (например, округлое, овальное, палочковидное, бобовидное,
сегментированное). Как правило, клетка имеет одно ядро, однако
встречаются двуядерные (клетки печени) и многоядерные клетки
(остеокласты — макрофаги костной ткани), а также многоядерные
структуры (поперечно-полосатое скелетное мышечное волокно).
Эритроциты млекопитающих в ходе эволюции утратили ядро.
Ядро состоит из хроматина, ядрышка и нуклеоплазмы,
окружённых ядерной оболочкой.

Хроматин
Термином «хроматин» обозначают комплекс ядерной
двуцепочечной ДНК с белками (гистоны, негистоновые белки).
Хроматин представлен хроматиновыми волокнами диаметром 11 нм,
состоящими из сферических структурных единиц — нуклеосом (рис.
1-2). Гистоны (H2A, H2B, H3 и H4) в составе нуклеосом содержат
большое количество положительно

Рис. 1-2. Организация хроматина. В неконденсированном

хроматине двойная спираль ДНК лежит на поверхности октамера
гистонов (две копии гистонов H2A, H2B, H3 и H4), образуя
нуклесомы. Нуклеосомы, разделённые интервалами в 200 пар
оснований, формируют хроматиновые волокна диаметром 11 нм. В
конденсированном хроматине дополнительно присутствует гистон
H1, соединяющий нуклеосомы с образованием хроматиновых
волокон диаметром 30 нм. Во время митоза хроматин полностью
конденсируется, формируя видимые хромосомы [из: Widnell C.C.,
Pfeninger K.H., 1990 и Trifonov E.N., 1981].
заряженных аминокислот аргинина и лизина, что увеличивает
аффиность гистонов к отрицательно заряженной ДНК. Соотношение
ДНК и белков в хроматине составляет 1:1. Различают гетеро- и
эухроматин.
• Гетерохроматин — транскрипционно неактивный,
конденсированный хроматин интерфазного ядра. При световой
микроскопии выявляется в виде базофильных глыбок, на
электронограммах — как скопление плотных гранул.
Располагается преимущественно по периферии ядра и вокруг
ядрышек, составляет 10% от общего хроматина. Типичный пример
гетерохроматина — тельце Барра. Во всех соматических клетках
генетически женского организма одна из X-хромосом
инактивирована и известна как половой хроматин (тельце Барра).
• Эухроматин — менее конденсированная (диспергированная)
часть хроматина, локализуется в более светлых участках ядра
между гетерохроматином. Эухроматин составляет 90% от общего
хроматина, где 10% — транскрипционно активная часть и 80% —
неактивная.

Ядрышко
Ядрышко (nucleolus) — округлой формы тельце диметром 1—5
мкм. Оно не является самостоятельной органеллой; это компактная
структура в ядре интерфазных клеток, содержащая петли ДНК 13,
14, 15, 21 и 22 хромосом (рис. 1-3). Плотный фибриллярный
компонент (pars fibrosa) состоит из транскрипционно активных
участков ДНК. Гранулярный компонент (pars granulosa) содержит
незрелые предшественники рибосомных субъединиц (СЕ).
Основные функции ядрышка — синтез рРНК (транскрипция и
процессинг рРНК) и образование СЕ рибосом. В клетке может быть
от 1 до 5.
При помощи РНК-полимеразы I на ДНК-матрице синтезируется
45S-предшественник рРНК. Далее 45S-предшественник рРНК
взаимодействует с рибосомными белками с последующим
разделением на 28S, 18S и 5,8S рРНК. Рибонуклеопротеины,
содержащие 28S и 5,8S рРНК, затем объединяются с 5S РНК,
синтезирующейся вне ядрышка, и образуют большую СЕ рибосомы.
Рибонуклеопротеины, содержащие 18S рРНК, формируют малую СЕ
рибосомы (рис. 1-4).
Ядерная оболочка
Ядерная оболочка состоит из внутренней и наружной ядерной
мембраны и ядерной пластинки.
• На поверхности наружной ядерной мембраны расположены
рибосомы, где синтезируются белки, поступающие в
перинуклеарную цистерну.

Рис. 1-3. Строение и функция ядрышка. А — Ядрышко

содержит петли ДНК 13, 14, 15, 21 и 22 хромосом. Б —
Транскрипция рибосомальной РНК происходит в ядрышковых
организаторах, которые содержат кодирующие рРНК сотни
одинаковых генов, расположенных друг за другом.
Рибонуклеиновые нити перпендикулярно отходят от ДНК, формируя
структуры, напоминающие ветви ёлки. РНК полимераза I
обеспечивает транскрипцию 45S-предшественника рРНК (5S РНК
транскрибируется вне ядрышка) [по Dudek R.W., 2004].

• Перинуклеарная цистерна локализуется между наружной и

внутренней мембранами, шириной в 20–40 нм. В местах слияния
двух мембран расположены ядерные поры.
• Внутренняя ядерная мембрана снаружи граничит с
перинуклеарной цистерной, изнутри отделена от содержимого
ядра ядерной пластинкой.
• Ядерная пластинка толщиной 80–300 нм содержит белки
промежуточных филаментов — ламины A, B и C, участвует в
организации ядерной оболочки и перинуклеарного хроматина.
Мутация гена, кодирующего ламин А, вызывает прогерию
Хатчинсона-Гилфорда. Заболевание приводит к смерти к 13
годам от ускоренного старения.
• Комплекс ядерной поры образован 8 белковыми гранулами,
сформированных примерно из 100 разных белков, которые
контролируют ядерный импорт (факторы транскрипции) и экспорт
(РНК) (рис. 1-5).

Рис. 1-4. Участие ядрышка в образовании рибосом. Здесь

осуществляются транскрипция и процессинг рРНК. Сначала при
помощи РНК- полимеразы I на ДНК-матрице синтезируется 45S-
предшественник рРНК. Далее 45S-предшественник рРНК
взаимодействует с рибосомными белками с последующим
разделением на 28S, 18S и 5,8S рРНК. Рибонуклеопротеины,
содержащие 28S и 5,8S рРНК, затем объединяются с 5S РНК,
синтезирующейся вне ядрышка, и образуют большую СЕ рибосомы.
Рибонуклеопротеины, содержащие 18S рРНК, формируют малую СЕ
рибосомы [из Alberts B et al, 1989].
Рис. 1-5. Комплекс ядерной поры в оболочке ядра образован 8
белковыми гранулами, расположенными по краю поры и
соединяющими внутреннюю и наружную ядерные мембраны. Часто в
центре поры находится вновь образованная субъединица рибосомы,
переносимая из ядра в цитоплазму [из Stevens A., Loewe J., 1992].

Нуклеоплазма
Нуклеолазма заключена в ядерную оболочку, состоит из ядерного
матрикса (рибонуклеопротеиновая сеть) и ядерных частиц
(ассоциатов разных молекул — АТФазы, ГТФазы, НАД-
пирофосфатазы, ДНК- и РНК- полимеразы, факторов транскрипции,
ядерных рецепторов).

Ядерная ДНК
Молекула ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) состоит из
двух (смысловой и антисмысловой) спирально закрученных
полинуклеотидных цепей (рис. 1-6). Полинуклеотидная цепь
представляет собой биополимер, состоящий из нуклеотидов.
Нуклеотид образует остаток фосфорной кислоты, присоединённый
по 5'-положению к сахару дезоксирибозе, который через
гликозидную связь (C–N) по 1'-положению связан одним из четырёх
азотистых оснований (рис. 1-7).
• Нуклеотиды — фосфатные эфиры нуклеозидов. Нуклеотиды
существуют в виде моно-, ди- и трифосфатов. Монофосфатный
эфир (нуклеозидмонофосфат) входит в состав полинуклеотидной
цепи. Три- фосфатные эфиры (нуклеозидтрифосфаты) участвуют в
биосинтезе ДНК.
 21

Рис. 1-6. Молекула ДНК. Две полинуклеотидные цепи закручены

одна вокруг другой в виде двойной спирали. По правилу Уотсона–
Крика (комплементарного спаривания нуклеотидов) две
антипараллельные полинуклеотидные цепи соединены водородными
связями в парах A–T и G–C. Пара A–T связана двумя, а пара G–C —
тремя водородными связями [из Garrett R.H., Grisham C.M, 2007].

Пиримидиновые основания

Пуриновые основания
 22

Рис. 1-7. Молекулы, участвующие в синтезе ДНК. [из Garrett R.H.,

Grisham C.M, 2007].
 23

Рис. 1-8 Полинуклеотид. Ковалентные фосфодиэфирные связи

соединяют 3’-атом углерода дезоксинуклеозидмонофосфата
полинуклеотидной цепи с 5’-атомом углерода свободного
дезоксинуклеозидтрифосфата. [из Garrett R.H., Grisham C.M, 2007].

• Нуклеозиды — N гликозильные производные (N гликозиды)

разных азотистых оснований (пурины, пиримидины), содержащих
дезоксирибозу в молекуле дезоксирибонуклеиновой кислоты или
рибозу в молекуле рибонуклеиновой кислоты. Нуклеозиды —
дезоксиаденозин, дезоксигуанозин, дезоксицитидин,
дезокситимидин, уридин (в молекуле РНК).
• Пуриновые основания — аденин (A) и гуанин (G).
• Пиримидиновые основания — цитозин (C), тимин (T) и урацил
(U), присутствующий только в молекуле РНК.
• Полинуклеотидная цепь. При помощи фосфодиэфирных связей
нуклеотиды образуют полинуклеотидную цепь, при этом
ковалентные фосфодиэфирные связи соединяют 5’ атом углерода
присоединяющегося нуклеотида с 3’ атомом углерода нуклеотида
растущей цепи (рис. 1-6).
 24

• Двойная спираль ДНК. Две антипараллельные (5’-конец одной

цепи располагается напротив 3’-конца другой) комплементарные
цепи полинуклеотидов, соединённые водородными связями в парах
A–T и G–C, образуют двухцепочечную молекулу ДНК. Молекула
ДНК спирально закручена вокруг своей оси. На один виток ДНК
приходится приблизительно 10 пар оснований.
• Смысловая цепь ДНК. Последовательность нуклеотидов в цепи
кодирует наследственную информацию.
• Антисмысловая цепь по сути является копией смысловой цепи
ДНК.
Служит матрицей для синтеза мРНК (информацию о первичной
структуре белка), тРНК, рРНК, регуляторной РНК.
Хранение и реализация генетической информации (транскрипция
→ процессинг → трансляция → посттрансляционная модификация),
а также ряд других функций ядра происходят при участии ядерной
ДНК и разных видов РНК. Ядерная ДНК содержит гены —
специфические последовательности нуклеотидов, несущие
информацию о белках и РНК. Гены человека занимают всего 3% от
всей ДНК; более 90% ДНК выполняет регуляторную функцию.
Количество генов, обнаруженных в геноме человека, составляет
примерно 24000.
 ПРАКТИЧЕСКИЕ НАВЫКИ

I. СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ. ПРАВИЛА РАБОТЫ С

ПРЯМЫМ СВЕТОВЫМ МИКРОСКОПОМ

Установка прямого светового микроскопа в рабочее положение

Микроскоп переносят двумя руками, поддерживая правой рукой
тубусодержатель и левой рукой — основание. Чтобы не выпал
окуляр, микроскоп всегда должен находиться в вертикальном
положении. Микроскоп ставят на стол, располагая его зеркалом в
сторону источника света.
Для приведения микроскопа в рабочее положение необходимо
проделать следующие операции.
1. Осторожно вращая револьвер, плавно подвести под тубус
объектив малого увеличения (8х). Правильная установка
объектива под тубусом определяется фиксатором, расположенным
внутри револьвера.
2. Вращая макровинт, поставить объектив над отверстием
предметного столика на расстоянии 1,5–2 см от плоскости
предметного столика.
3. Поднять конденсор и открыть диафрагму.
4. Хорошо осветить поле зрения, смотря левым глазом в окуляр,
вращая зеркало с вогнутой поверхностью по направлению к
источнику света до появления равномерного освещения. Правый
глаз при этом должен быть открыт.

Работа при малом увеличении (объектив 8х)

Перед исследованием микропрепарат рекомендуется рассмотреть
невооружённым глазом (ad oculi) и определиться с расположением
объекта на предметном стекле. Далее следует выполнить следующие
операции.
1. Положить на предметный столик микропрепарат покровным
стеклом вверх так, чтобы объектив находился непосредственно
над объектом.
2. Вращением макровинта опустить объектив на расстояние
примерно 0,5 см от препарата. За перемещением объектива
наблюдать сбоку, наклонив голову на уровне предметного столика.
3. Смотря в окуляр левым глазом, вращением макровинта к себе
медленно поднять тубус до появления четкого изображения объекта.
Фокусное расстояние при данном увеличении составляет примерно 1
см.
4. Изучить препарат, рассматривая его одним глазом, стараясь при
этом не закрывать второй глаз.

Работа при большом увеличении (объектив 40х)

К изучению микропрепарата при большом увеличении переходят
после его визуализации при малом увеличении. Для этого
необходимо проделать следующее.
1. Центрировать микропрепарат. Для этого изучаемое место
микропрепарата нужно выставить под малым увеличением в
центр поля зрения, поскольку при большом увеличении будет
виден лишь центральный участок видимого при малом
увеличении микропрепарата. При этом следует помнить, что
микроскоп даёт перевёрнутое (обратное) изображение.
2. Слегка приподнять тубус, вращая макровинт на себя.
3. С помощью револьвера заменить объектив малого увеличения
(8х) на объектив большего увеличения (40х).
4. Под визуальным контролем (глядя сбоку) и вращая макровинт от
себя, опустить тубус с объективом почти вплотную к препарату, но
не до соприкосновения с покровным стеклом.
5. Глядя в окуляр, вращением макровинта на себя очень медленно
поднимать тубус до появления изображения. Фокусное расстояние
при объективе 40х составляет примерно 1 мм. При слишком
быстром вращении винта изображение объекта можно легко
пропустить.
6. После появления изображения дальнейшую фокусировку
осуществляют микрометрическим винтом, вращая этот винт на пол
оборота вперед или назад, но не поворачивая его полностью.
7. Рассмотреть микропрепарат, слегка вращая микровинт влево или
вправо. Этим достигается возможность рассмотрения структур на
разной глубине объекта, что обусловлено толщиной микропрепарата
(среза).
8. После окончания изучения микропрепарата тубус слегка
приподнять вверх при помощи макровинта.
9. Объектив 40х заменить на объектив 8х.
10. Снять микропрепарат с предметного столика.

Завершение работы с микроскопом

Закончив микроскопирование, следует проделать следующее.
1. Убрать микропрепарат с предметного столика.
2. Установить объектив с малым увеличением.
3. Вращением макровинта опустить объектив на расстояние до 1–2
см от предметного столика.
4. Держа одной рукой тубусодержатель, а другой поддерживая
снизу
основание, перенести микроскоп в место его хранения.
Проблемы, возникающие при микроскопировании
Часто встречающиеся проблемы, возникающие при
самостоятельной работе с микроскопом, и способы их устранения
представлены в таблице 1-3.

Таблица 1-3. Возможные проблемы и способы их решения при

микроскопировании
Формирование самостоятельных навыков изучения
микропрепаратов с помощью прямого светового
микроскопа

1. Кожица лука
Используйте объектив малого увеличения (8х) для центровки
объекта. В поле зрения видны плотные расположенные ряды
растительных клеток. С помощью револьвера установите объектив
большего увеличения (40х) и изучите строение растительной клетки.
Растительная клетка кожицы лука имеет прямоугольную форму.
Границы между клетками образованы клеточной оболочкой,
обеспечивающей постоянство формы клеток. Цитоплазма содержит
крупные прозрачные вакуоли, заполненные клеточным соком. В
центре, или оттеснённое вакуолями на периферию клетки,
располагается округлое ядро синего цвета (рис. 1-8, А).
 Зарисовать растительную клетку и обозначить: ядро, вакуоли,
клеточную оболочку.

2. Мазок крови лягушки

При малом увеличении микроскопа рассмотрите препарат крови
лягушки. В поле зрения преимущественно видны эритроциты. С
помощью револьвера замените объектив малого увеличения (8х) на
объектив

Рис. 1-8. А — растительные клетки кожицы лука; Б —

эритроциты крови лягушки.
большего увеличения (40х) и изучите строение эритроцита крови
лягушки. Эритроцит лягушки имеет вытянутую овальную форму,
цитоплазма окрашена в розовый цвет. В центре клетки располагается
крупное овальное ядро синего цвета (рис. 1-8, Б).
Зарисовать эритроцит и обозначить: ядро, цитоплазму,
клеточную мембрану.

II. МИКРОПРЕПАРАТЫ. ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ

ЯДЕР И ЯДЕРНЫХ СТРУКТУР В РАЗНЫХ КЛЕТОЧНЫХ
ТИПАХ

1. Клеточная культура фибробластов

Название клетки произошло от лат. fibra — волокно и греч. blastos
— зародыш; т.е. клетка, образующая волокна. При изучении
микропрепарата под малым увеличением видны плоские
отростчатые клетки различной формы (от веретеновидной до
звёздчатой) (рис. 1-9). Ядро крупное, овальной формы, имеет
базофильное (синее) окрашивание. Базофильный краситель
(гематоксилин) синего цвета связывается с кислотами (ДНК и РНК),
окрашивая ядро. При большем увеличении на фоне
преимущественно диспергированного хроматина (эухроматин)
хорошо заметны 1–2 ядрышка. Строение ядра фибробласта
характерно для клетки с интенсивной синтетической активностью,
на что также указывает присутствие и других органелл. Цитоплазма
содержит в большом количестве цистерны гранулярной
эндоплазматической сети, хорошо выраженный комплекс Гольджи,
многочисленные секреторные гранулы и митохондрии. Фибробласт
активно синтезирует белки межклеточного матрикса, например,
коллаген для образования коллагеновых волокон.
 Рис. 1-9. Схематическое строение (А) и микропрепарат (Б)
фибробласта. Фибробласт (активная форма клетки) содержит
хорошо выраженные органеллы: гранулярную эндоплазматическую
сеть, комплекс Гольджи, митохондрии. Крупное овальное ядро с
выраженным ядрышком занимает центральное положение вдоль
продольной оси клетки. Фибробласт образует длинные отростки.

2. Мазок крови человека

В мазке крови хорошо различимы: эритроциты (безъядерные
клетки, имеющие форму двояковогнутого диска), ядерные
шарообразные лейкоциты (лимфоциты, моноциты, нейтрофилы,
эозинофилы, базофилы) и тромбоциты (двояковыпуклые пластинки).
При малом увеличении всё поле зрения занимают эритроциты, среди
которых встречаются единичные лейкоциты. Для детального
изучения клеток крови применяют большое увеличение (рис. 1-10).
Эритроцит. Из-за высокого содержания щелочного белка
гемоглобина (Hb) клетка окрашена в розовый цвет кислым
красителем эозином (ацидофилия). Слабое окрашивание
центральной части клетки обусловлено формой эритроцита
(двояковогнутый диск). Ядро отсутствует.
Лейкоциты:
• Лимфоцит. Базофильное ядро сферическое или с небольшой
боковой выемкой; преимущественно содержит плотно
сконденсированный хроматин. Ядро лимфоцита занимает почти весь
объём клетки, так что цитоплазма окружает клетку в виде узкого
кольца.
• Нейтрофил. Ядро имеет дольчатое (сегментированное) строение
— 3–5 сегментов, соединённых перемычкой. Конденсированный
хроматин расположен вдоль внутренней поверхности ядерной
мембраны, эухроматин занимает центральную область дольки.

• Моноцит — самая крупная клетка крови. Базофильное ядро

подковообразной (бобовидной) формы расположено
эксцентрично, имеет пятнистый вид из-за неравномерно
распределённого конденсированного и неконденсированного
хроматина.

Рис. 1-10. Клетки крови. Верхняя панель. А — эритроцит; Б —

нейтрофил; В — лимфоцит; Г — моноцит [по Lentz T.L., 1971].
Нижняя панель. Препарат мазка крови человека.
III. ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА. ПОЛОВОЙ ХРОМАТИН
Половой хроматин (тельце Барра) — конденсированный хроматин
(гетерохроматин), содержащий ДНК одной из двух Х-хромосом в
ядрах клеток женского организма. В медицинской практике при
экспресс-диагностике половой хроматин определяют в
эпителиальных клетках слизистой оболочки щеки или в мазке
периферической крови. В ядрах эпителиальных клеток половой
хроматин выявляется в виде компактной глыбки хроматина,
называемой тельцем Барра. В лейкоцитах периферической крови
половой хроматин выявляется в виде «барабанных палочек» —
глыбок хроматина, связанных тонкой нитью с ядром клетки.
Исследование полового хроматина, кроме половой принадлежности,
позволяет также установить аномалии в числе Х-хромосом (рис. 1-
11).

Выявление полового хроматина в эпителиальных клетках

слизистой оболочки щеки женского организма
• Протокол приготовления микропрепарата.
1. Осторожно несколько раз надкусить слизистую оболочку щеки
и тщательно прополоскать рот питьевой водой.
2. Стерильным шпателем соскоблить эпителий и нанести
содержимое соскоба тонким слоем на предметное стекло.
3. До высыхания материала на мазок нанести 1-2 капли
гистологического красителя (ацетоорсеина) и накрыть мазок
покровным стеклом.
4. Через 5-6 секунд окрашивания краситель удалить. Для этого
покровное стекло накрыть кусочком фильтровальной бумаги и
двумя большими пальцами умеренно надавить на покровное
стекло.

Рис. 1-11. Половой хроматин в ядре эпителиальной клетки

сли- зистой оболочки щеки человека. А — мужчина (46ХY); Б —
женщина (46ХХ). Овальной формы (0,7–1,2 мкм) тельце Барра
локализуется рядом с внутренней ядерной мембраной.

5. Центрировать препарат под малым увеличением. Изучить

препарат с помощью иммерсионного объектива.
• При изучении препарата нужно учитывать следующее:
1. клетка должна иметь овальное или округлое, слегка
окрашенное ядро;
2. ядерная мембрана должна быть четкой, ненарушенной;
3. ядра не должны перекрывать друг друга;
4. только тёмноокрашенные тельца, находящиеся в контакте с
ядерной мембраной, нужно расценивать как половой хроматин,
или тельце Бара;
5. исследуют примерно 100 окрашенных ядер. В норме половой
хроматин встречается в 30—40% ядер.
• Записать ход работы в рабочей тетради. Зарисовать
эпителиальные клетки слизистой оболочки щеки с половым
хроматином и без полового хроматина. На рисунках отметить
следующее:
1. эпителиальная клетка;
2. ядро;
3. половой хроматин (тельце Барра).
• Сформулировать выводы лабораторной работы и ответить на
следующие вопросы:
1. Что представлено в виде глыбки полового хроматина?
2. Почему в клетках мужчин, как правило, тельце Барра
отсутствует?
 ТИПОВЫЕ ТЕСТОВЫЕ ВОПРОСЫ
Пояснение. За каждым из перечисленных вопросов или
незаконченных утверждений следуют обозначенные буквой ответы
или завершения утверждений. Выберите один ответ или завершение
утверждения, наиболее соответствующее каждому случаю.
1. Ядро. Верно всё, КРОМЕ:
(А) обеспечивает хранение и реализацию генетической
информации
(Б) кодирующая ДНК занимает 3% от ядерного генома
(В) содержит примерно 24000 генов
(Г) наследственную информацию кодирует смысловая цепь
(Д) ДНК находится в кольцевой форме
2. Строение ядра. Верно всё, КРОМЕ:
(А) ядерная оболочка образована внутренней и наружной
ядерными
мембранами и ядерной пластинкой
(Б) в организации ядрышка участвуют петли аутосом
(В) ядерные частицы нуклеоплазмы — ферменты синтеза ДНК и
РНК (Г) форма зависит от формы клетки
(Д) половой хроматин — конденсированная Х-хромосома
женского организма
3. Молекула ДНК. Верно всё, КРОМЕ:
(А) состоит из смысловой и антисмысловой спирально
закрученных
полинуклеотидных цепей
(Б) антипараллельные цепи полинуклеотидов соединены
фосфодиэфирными связями
(В) полинуклеотидная цепь представляет собой биополимер,
состоящий из дезоксинуклеотидмонофосфатов
(Г) наследственную информацию кодирует смысловая цепь
(Д) антисмысловая цепь служит матрицей для синтеза мРНК
4. Ядерная пластинка. Верно всё, КРОМЕ:
(А) отделяет внутреннюю ядерную мембрану от содержимого ядра
(Б) состоит из белков промежуточных филаментов — ламинов
(В) участвует в организации ядерной оболочки
(Г) формирует перинуклеарный хроматин
(Д) участвует в синтезе белков, поступающих в перинуклеарные
цистерны
 5. Комплекс ядерной поры. Верно всё, КРОМЕ:
(А) встроен во внутреннюю ядерную мембрану
(Б) содержит белок-рецептор, контролирующий перенос белковых
молекул из цитоплазмы в ядро
(В) рецептор ядерной поры может увеличивать диаметр канала
поры
(Г) белковые гранулы ядерной поры, расположенные по
окружности вблизи края поры
(Д) большая центральная гранула состоит из СЕ рибосом
6. Нуклеотид ДНК содержит:
(А) рибозу, тимин
(Б) рибозу, урацил, остаток фосфорной кислоты
(В) дезоксирибозу, урацил, остаток фосфорной кислоты
(Г) дезоксирибозу, гуанин
(Д) дезоксирибозу, тимин, остаток фосфорной кислоты
7. Как называется структура, состоящая из 8 гистоновых белков,
на которую накручена нить ДНК?
(А) Нуклеосома
(Б) Хроматин
(В) Теломера
(Г) Ядрышко
(Д) Центромера
Пояснение. Каждый из нижеприведённых вопросов содержит
четыре варианта ответов, из которых правильными могут быть
один или сразу несколько. Выберите:
A — если правильны ответы 1, 2 и 3
Б — если правильны ответы 1 и 3
В — если правильны ответы 2 и 4
Г — если правилен ответ 4
Д — если правильны ответы 1, 2, 3 и 4
8. К световой микроскопии относятся:
(1) лазерная
(2) фазово-контрастная
(3) люминисцентная
(4) темнопольная
9. К пуриновым основаниям относятся:
(1) аденин (2) тимин (3)
гуанин (4) цитозин
10. Молекула ДНК состоит из:
 (1) нуклеозидмонофосфатов
(2) дезоксинуклеозидтрифосфатов
(3) нуклеозидтрифосфатов
(4) дезоксинуклеозидмонофосфатов

Ответы к тестовым вопросам

1 – Д, 2 – В, 3 – Б, 4 – Д, 5 – А, 6 – Д, 7 – А, 8 – В, 9 – Б, 10 – Г

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

1.Почему препарат кладётся покровным стеклом вверх, а не вниз?
2.Чему равно фокусное расстояние объективов 8х и 40х?
3.Для чего необходимо знать фокусное расстояние объективов?
4.Почему перед наводкой объектива на резкость, опуская объектив
нанекоторое расстояние от препарата, мы смотрим сбоку на него, а
не
в окуляр?
5. Когда и с какой целью можно использовать конденсор?
6. Для чего и с какой целью используется диафрагма?
7. Что такое иммерсионное масло и для чего оно используется?
8. Есть ли предел увеличения светооптических микроскопов?
9. Что такое фокусное «расстояние» объективов?
10. Существует ли зависимость фокусного «расстояния» от
разрешающей способности объективов?
11. В чем удобство использования стереоскопических микроскопов?
12. Какое основное правило необходимо соблюдать при работе с
микрометрическим винтом?
13. Какое правило необходимо соблюдать при работе с
револьвером микроскопа при смене объективов?
14. Студент не зафиксировал объектив в гнезде револьвера. Как это
отразится на поле зрения микроскопа?
15. С применения какого объектива необходимо начинать работу с
микроскопом?
16. Что означает термин «центровка» препарата?
17. Что означает разрешающая способность объектива?
18. Как устроен инвертированный микроскоп?
19. Что такое флуоресцентная микроскопия?
20. В каких случаях применяется контрастная микроскопия?
21. В чём преимущество стереоскопических микроскопов над
прямыми световыми?
 22. Что такое лазерная конфокальная микроскопия?
23. Какие типы электронных микроскопов вы знаете?
24. Какие особенности изображения можно получить с
использованием просвечивающих и сканирующих электронных
микроскопов?
25. Из каких молекул синтезируется ДНК?
26. Какими связями соединены полинуклеотидные цепи в
двуцепочечной молекуле ДНК?
27. Назовите структурный компонент клетки, в котором образуются
рРНК, участвующие в синтезе белка.
28. Назовите структурный компонент клетки, окружённый двумя
мемб ранами; с внутренней мембраной связан хроматин, на наружной
мем- бране локализуются рибосомы.
29. Какой структурный компонент клетки содержит хроматин?
30. Что содержится в нуклеоплазме?
31. Какой сахар входит в состав ДНК и РНК?
32. Чем образован половой хроматин?
33. Дайте определение понятию хроматин.
34. Что такое гетерохроматин и эухроматин?
35. Что такое ядрышковые организаторы?
36. Что такое нуклеосома, каково её строение?
37. Назовите три основные функции ядра клетки.
38. Где в клетке происходит синтез рибосомальной РНК?
39. Что такое комплекс ядерной поры?
40. Что такое нуклеотид?
41. Каково строение ядрышка ядра?
42. Что такое нуклеозиды?
43. Что такое нуклеоплазма?
44. Чем отличается ДНК от РНК?
45. Назовите виды химических связей, которые принимают участие
в
формировании полинуклеотиднной цепи.
46. Сформулируйте правило Уотсона-Крика.
47. Сколько хромосом в соматической клетке человека? Сколько
хромосом в половой клетке человека?
48. Что такое азотистые основания?
49. Какие клетки человека не имеют ядра?
50. Какая из двух (смысловая или антисмысловая)
полинуклеотидных цепей ДНК является матрицей для транскрипции
РНК?
 СПРАВОЧНИК ТЕРМИНОВ
Аберрация — оптический артефакт, погрешность изображения
оптических систем, а. проявляется тем, что оптические изображения
в ряде случаев не вполне отчётливы, неточно соответствуют объекту
или оказываются окрашенными.
Аберрация сферическая — различие оптических свойств
центральной и периферической частей сферической линзы, которое
не позволяет одновременно фокусировать изображение по всему
полю. А.с. устраняют апохроматические объективы — планахроматы
и планапохроматы.
Аберрация хроматическая — фокусное расстояние линзы для
лучей разной длины волны различно. Поэтому при использовании
немонохроматического света формируемое линзой изображение
предмета имеет окрашенные края. Хроматические аберрации
устраняют ахроматические и апохроматические объективы.
Аденин — пуриновое основание; входит в состав РНК и ДНК
нуклеотидов и играет важную роль в метаболизме клетки.
Азотистые основания — гетероциклические органические
соединения — производные пиримидина и пурина, входящие в
состав нук- леиновых кислот.
Антипараллельность цепей ДНК — противоположная
направленность двух нитей двойной спирали ДНК; одна нить имеет
направление от 5' к 3', другая — от 3' к 5'.
Артефакт — искусственно созданный факт, связанный с
использованием ограниченных методов исследования; хотя а. и
обусловлен реальным существованием чего-то, но это что-то
отражено неадекватно. Классический пример а. — нейрофибриллы
в нейронах и глиоцитах, описанные методами импрегнации солями
серебра. На самом деле эти структуры реально не существуют, им
соответствуют элементы цитоскелета в виде микротрубочек,
нейрофиламентов и микрофиламентов.
Белки гистоновые (гистоны) — сильно основные белки,
связывающиеся непосредственно с ДНК. Гистоны принимают
участие в структурной организации хроматина, нейтрализуя за счет
положительных зарядов аминокислотных остатков отрицательно
заряженные фосфатные группы ДНК, что делает возможной
плотную упаковку ДНК в ядре.
Ген — единица наследственности, занимающая специфическое
место (локус) в хромосоме, способна к самовоспроизведению в
клеточном цикле; структурный г. в виде последовательности
нуклеотидов содержит информацию о последовательности
аминокислот пептидной цепи.
Геном (ген+хромосома) человека — полный набор генов,
определяющих наш внешний вид и внутреннее строение, —
упакован в 23 пары хромосом. Хромосомы нумеруют в порядке
уменьшения их размера от самой большой (1-й), до самой маленькой
(22- й) пары. Но из этого ряда выпадают половые хромосомы: у
женщин — две большие хромосомы X, а у мужчин — одна X, а
другая, маленькая, Y. По своему размеру хромосома X находится
между 7-й и 8-й хромосомами, а хромосома Y — самая маленькая в
геноме. Гаплоидный набор — 23 хромосомы (22 + Y, 22 + X) —
характерен для гамет. Диплоидный набор (44 + XY, 44 + XX) — для
соматических клеток.
Гетерохроматин — участки хроматина, находящиеся в течение
клеточного цикла в конденсированном (компактном) состоянии.
Особенностью гетерохроматиновой ДНК является низкая
транскрибируемость.
Гуанин — азотистое основание, аминопроизводное пурина,
является составной частью нуклеиновых кислот.
Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) — макромолекула,
обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и
реализацию генетической программы развития и
функционирования живых систем (организмов).
Диафрагма ирисовая — деталь микроскопа, расположенная
между зеркалом и конденсором. Служит для изменения диаметра
светового потока, направляемого зеркалом через конденсор на
объект.
Иммерсионный объектив — погружной объектив светового
микроскопа, для эксплуатации которого необходима замена
воздушной прослойки между ним и препаратом на другую
оптическую среду — иммерсию (вода, кедровое масло и т.д.). К
иммерсионным объективам относятся объективы с увеличением
40х, 90х, 100х.
Конденсор (лат. condenso — уплотняю) — линзовая, зеркальная
или зеркально-линзовая оптическая система, собирающая лучи от
источника света и направляющая их на рассматриваемый или
проецируемый предмет.
 Лазерная конфокальная микроскопия — метод конфокальной
сканирующей микроскопии позволяет получить оптические срезы
путём послойного сканирования объектов по глубине (наподобие
томографии) и производить пространственную реконструкцию
флуоресцирующего объекта. Условие конфокальности, совпадение
фокусов диафрагмы детектора и освещающего объект света,
выполняется, если один и тот же объектив используется и для
освещения объекта, и для детекции изображения. Другим важным
условием этого метода является применение диафрагмы детектора с
минимальным диаметром, что требует использование мощного
источника света, а именно систему лазеров. Большое количество
шаговых двигателей управляют положением объекта в фокусе
конфокального микроскопа как в плоскости XY, так и по оси Z.
Конфокальный микроскоп управляется от компьютера, а
изображение объекта можно увидеть только на дисплее. Каждый
оптический срез запоминается как отдельный рисунок, после чего с
помощью компьютерной программы воссоздается трёхмерное
изображение объекта.
Лайонизация — механизм компенсации дозы генов X хромосомы
у женщин объясняет гипотеза Мэри Лайон. Согласно гипотезе,
инактивация X хромосомы происходит в раннем эмбриогенезе,
осуществляется случайным образом (инактивированной может быть
либо отцовская,
либо материнская X хромосома), затрагивает целиком всю X
хромосому и характеризуется устойчивостью, передаваясь
клеточным потомкам. Клетки женского организма по экспрессии
генов X хромосомы мозаичны.
Мазок — способ подготовки материала для цитологического
исследования. Известны мазки гематологические (например, крови и
красного костного мозга) и гинекологические (например, ПАП
мазок), мазки-отпечатки (например, слизистой оболочки щеки для
определения тельца Барра).
Макрометрический винт (кремальера, зубчатка, макровинт)
— деталь микроскопа, которая служит для предварительной
ориентировочной установки изображения рассматриваемого
объекта на фокус.
Нуклеосома — структурная единица хроматина. В н. неконденси-
рованного хроматина содержится по две копии гистонов H2A, H2B,
H3
 и H4. Двойная спираль ДНК лежит на поверхности октамера
гистонов и накручена на него. В конденсированном хроматине
дополнительно присутствует гистон H1, соединяющий нуклеосомы.
Нуклеозид — N гликозильные производные (N гликозиды) разных
азотистых оснований.
Нуклеоплазма — полужидкое ве-щество, представляющее собой
коллоидный раствор белков, нуклеиновых кислот, углеводов,
ферментов, минеральных солей; заполняет пространство между
ядерными, структурами, участвует в транспорте, нуклеиновых
кислот, субчастиц рибосом, ферментов, факторов транскрпиции.
При делении клетки смешивается с гиалоплазмой. По окончании
деления в телофазе концентрируется в ядре.
Нуклеотид — соединение пуринового или пиримидинового
основания, сахара (обычно рибозы или дезоксирибозы) и фосфатной
группы.
Объектив — оптическое устройство, предназначенное для
создания увеличенного изображения объекта.
Окуляр — оптическая система, расположенная непосредственно
перед глазом и предназначенная для рассматривания изображения,
образованного предыдущей оптической системой.
Просвечивающая электронная микроскопия — метод
исследования объекта с помощью прибора, в котором вместо света
используется пучок электронов, а для получения изображения
применяются магнитные линзы, управляющие движением
электронов. При создаваемой высокой разности потенциалов
(ускоряющем напряжении 50"600 кВ) электроны, составляющие
пучок, имеют очень малую длину волны, что позволяет получать
изображение изучаемого объекта с высоким разрешением.
Теоретически разрешение просвечивающего электронного
микроскопа составляет 0,002 нм. Реальное разрешение современных
микроскопов приближается к 0,1 нм. Для биологических объектов
разрешение ПЭМ на практике составляет 2 нм.
Разрешающая способность микроскопа — наименьшее
расстояние между двумя точками предмета, при котором они
различимы как отдельные объекты (т.е. воспринимаются в
микроскопе как две точки).
Револьвер — деталь микроскопа, предназначенная для быстрой
смены объективов, которые ввинчиваются в его гнезда.
Центрированное положение объектива обеспечивает защелка,
расположенная внутри револьвера.
РНК (рибонуклеиновая кислота) — макромолекула, состоящая
из остатков рибонуклеозидов, соединённых фосфатом в
направлении от 3'-гидроксила одного остатка к 5'-гидроксилу
следующего; присутствует во всех эукариотических клетках (в ядре
и цитоплазме), а также во многих вирусах
РНК матричная, мРНК (информационная, иРНК) — вид РНК,
с которой в рибосомах синтезируется белок.
РНК рибосомная (рРНК) — РНК, входящая в состав рибосом и
по- лирибосом.
РНК транспортная (тРНК) — РНК, существующая по крайней
мере в виде 20 различных молекул, каждая из которых способна
связываться с одной из аминокислот, а своими антикодонами с
определёнными участками (кодонами) на мРНК.
Сканирующая электронная микроскопия — метод получения
изображения поверхности объекта с высоким (до 0,4 нанометра)
про странственным разрешением с помощью растрового
(сканирующего) электронного микроскопа. В ходе исследования
электронный луч фокусируется на небольшом участке объекта.
Передвигая сфокусированный луч над объектом, получают
общую картину изучаемой поверхности.
Тельце Бара — во всех соматических клетках генетически
женского
организма одна из X хромосом инактивирована и известна как
половой хроматин (тельце Барра). Инактивация Х хромосомы —
лайонизация.
Темнопольная микроскопия — вид световая микроскопия в
которой используют специальный конденсор, выделяющий
контрастирующие структуры неокрашенного материала.
Темнопольная микроскопия позволяет наблюдать живые объекты.
Наблюдаемый объект выглядит как освещённый на тёмном поле.
При этом лучи от осветителя падают на объект сбоку, а в линзы
микроскопа поступают только
рассеянные лучи.
Тимин (5-метилурацил) — производное пиримидина, одно из
четырёх азотистых оснований. Входит в состав ДНК,
комплементарно связывается с аденином, образует две
водородные связи.
Транскрипция — синтез РНК на ДНК-матрице; осуществляется
 РНК-полимеразой.
Трансляция — перевод генетического кода с нуклеотидов мРНК
на
аминокислотную последовательность полипептидной цепи в
рибосомах.
Тубус микроскопа — узел, служащий для установки объективов и
окуляров на определенном расстоянии друг от друга. Он
представляет
собой трубку, в верхней части которой находится окуляр или
окуляры, а
в нижней — устройство для крепления и смены объективов. Обычно
это револьвер с несколькими гнездами для быстрой смены
объективов различного увеличения.
Урацил (2,4-диоксопиримидин) — пиримидиновое основание,
входит в состав нуклеотида рибонуклеиновых кислот и, как правило,
отсутствует в дезоксирибонуклеиновых кислотах. В составе
нуклеиновых кислот может комплементарно связываться с
аденином, образуя две водородных связи.
Фазово-контрастная микроскопия — вид световой
микроскопии, позволяющий изучать живые и неокрашенные
объекты. При прохождении света через окрашенные объекты
изменяется амплитуда световой волны, а при прохождении света
через неокрашенные — фаза световой волны, что и используют для
получения высококонтрастного изображения в фазово-контрастной
микроскопии.
Фокусное расстояние — это расстояние между линзой объектива
и
препаратом при котором можно четко видеть изображение предмета.
Флуоресцентная микроскопия — принцип действия основан на
использовании явления люминесценции наблюдаемых объектов,
возникающей под действием света определенного спектрального
состава. Освещение объектов для возбуждения люминесценции
производится сверху через объектив микроскопа. В
люминсцентных микроскопах источником света служит ртутная
лампа. Одним из видов флуоресцентной микроскопии является
лазерная конфокальная микроскопия.
Хроматин — генетический материал в ядре, образован
дезоксирибонуклеопротеином; в фазе между митотическими
делениями — гетерохроматин (хорошо различимые
конденсированные глыбки) или как эухроматин —
диспергированный (плохо или совсем не окрашивающийся
материал). В ходе митоза х. представлен в виде хромосом.
Хромосома — структурный элемент клеточного ядра,
содержащий ДНК и белки, различимый в виде образования
определенного размера и формы только во время деления клетки.
Самоудвоение и закономерное распределение хромосом по
дочерним клеткам обеспечивает передачу наследственной
информации.
Хромосомы гомологичные — парные хромосомы из
диплоидного набор хромосом, одинаковые по структуре и набору
генов. Одна из них имеет материнское происхождение, другая —
отцовское.
Хромосомы не гомологичные — хромосомы из диплоидного
набор хромосом, которые отличаются друг от друга по структуре и
набору генов.
Цитозин (2-окси-4-аминопиримидин) — пиримидиновое
основание. Присутствует во всех живых клетках в составе
нуклеиновых кислот
(ДНК и РНК). Входит в состав некоторых коферментов.
Эухроматин — участки хромосом, сохраняющие
деспирализованное состояние в интерфазном ядре и
спирализующиеся при делении клеток (в профазе). Эухроматин
отличается от гетерохроматина менее плотной упаковкой ДНК,
меньшим содержанием метилированных оснований, большим
количеством негистоновых белков (факторы транскрипции,
ферменты) и ацетилированных молекул гистонов.
Ядро (лат. nucleus) — это один из структурных компонентов
эукариотической клетки, содержащий генетическую информацию
(молекулы-ДНК), осуществляющий основные функции: хранение,
передача и реализация генетической информации с обеспечением
синтеза белка. Ядро состоит из хроматина, кариоплазмы (или
нуклеоплазмы) и ядерной оболочки.
Ядрышко — это высокоорганизованная структура внутри ядра, в
составе которого входят петли ДНК разных хромосом, содержащие
тан- демно повторяющиеся гены рРНК. Я. — место синтеза
рибосомной РНК и формирования рибосомных субчастиц.
Ядрышковые организаторы — участки хромосом (13, 14, 15, 21,
22), образующие внутри клеточного ядра так называемое
ядрышко.
 ЛИТЕРАТУРА

Основная
1. Биология. Ярыгин В.Н. «ГЭОТАР-Медиа», 2011.- Т.1 – 736с.; Т.2-
560с.
2. Биология. Пехов А.П. «ГЭОТАР-Медиа», 2011.- 656c

Дополнительная
1. Молекулярная биология клетки. Б. Альбертс, Д. Брей, Дж. Льюис,
М. Рэфф, К. Робертс, Дж. Уотсон. НИЦ “Регуляторная и хаотическая
динамика”, 2013.- Т.1 – 808с., Т.2 – 992с., Т.3 – 1052с.

Использованная

1. Гистология. Цитология. Эмбриология.: издание четвёртое,

переработанное / Э.Г. Улумбеков Ю.А. Челышев Р.Р. Исламов
Н.В. Бойчук. – Москва: Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа»,
2015 г. – 608 с.
2. Гистология. Комплексные тесты: вопросы и пояснения (учебное
пособие)/ //Изд-во: ГЭОТАР – Медиа, 2007.
Оглавление с
тр
Компетенции.............................................................................................3
Теоретический
обзор..................................................................................6
Микроскопия живых систем в
биологии..................................................6
Клеточное
ядро.........................................................................................12
Практические
навыки...............................................................................22
Типовые тестовые
вопросы......................................................................31
Вопросы для
самоконтроля......................................................................33
Справочник
терминов...............................................................................35
Литература............... ..................................................................................4
1

Вёрстка — Рашитов Л.Ф. Художник — Капарулина А.С.