1

ФГБОУ ВО «КАЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВА
ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ
КАФЕДРА МЕДИЦИНСКОЙ БИОЛОГИИ И ГЕНЕТИКИ

ОБЩАЯ ГЕНЕТИКА

Часть 1. Структура и экспрессия гена

Учебное пособие

Казань 2016
 2

УДК 611:018(075.8)
ББК 28.05+28.06
Печатается по решению
Центрального координационно-методического совета
Казанского государственного медицинского университета.

Авторы:
Исламов Р.Р., Кошпаева Е.С., Колочкова Е.В., Бойчук Н.В.
Под общей редакцией: проф. Исламова Р.Р.

Рецензенты:
Зав. кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии Казанского
государственного медицинского университета проф. Челышев Ю.А.
Зав. кафедрой биологии Башкирского государственного
медицинского университета проф. Викторова Т.В.

Общая генетика. Часть 1. Cтруктура и экспрессия гена. Учебное

по- собие/ Исламов Р.Р., Кошпаева Е.С., Колочкова Е.В., Бойчук Н.В.
– Казань: КГМУ, 2016. – 45 с.

Учебное пособие составлено в соответствии с Федеральным

Государственным образовательным стандартом высшего
образования (ФГОС ВО) и типовой Учебной программой по
дисциплине «Биология». В 1 части «Cтруктура и экспрессия гена»
учебного пособия «Общая генетика» изложены цели и задачи данной
темы, указаны формируемые компетенции, приведён теоретический
обзор изучаемого материала, изложенный в лаконичной,
рубрицированной форме и имеющий медицинскую направленность.
Практические навыки включают усвоение правила реализации
наследственной информации, виртуальную лабораторию по
иммуногистохимии, изучение экспрессии генов терминальной
дифференцировки клетки с помощью иммуногистохимического
метода, решение ситуационных задач по теме. Учебное пособие
включает типовые тестовые вопросы, вопросы самоконтроля и
справочник терминов.
Учебное пособие предназначено для студентов младших курсов
медицинских факультетов и медицинских вузов.
 3

© Казанский государственный медицинский университет, 2016

Часть 1
СТРУКТУРА И ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА

Целью публикации настоящего учебного пособия является

систематизация знаний студентов о строение гена и о генетическом
коде. В учебном пособии приводится обзор современной литературы
о классификации и функции генов. В учебное пособие включена
новейшая информация о механизмах регуляции экспрессии гена,
которая не представлена в учебниках, используемых студентами.
Задачей учебного пособия является ознакомление студентов с
современными представлениями об экспрессии гена (транскрипции,
процессировании и трансляции), выработка навыков решения
ситуационных задач, выработка навыков выявления продуктов
экспрессии генов в медицинской практике.

Формируемые компетенции
• Лечебный факультет, дисциплина «Биология» – ОПК-1, ОПК-7
• Педиатрический факультет, дисциплина «Биология» – ОК-4,
ПК-20, ПК-21
• Стоматологический факультет, дисциплина «Биология» – ОПК-
1, ОПК-7
• Медико-профилактический факультет, дисциплина «Биология,
экология» – ОК-7, ПК-6
• Медико-биологический факультет, дисциплина «Биология» -
ОК-1, ПК-27, дисциплина «Биология, эволюционная биология» – ОК-
1, ПК-2

Студент должен знать:

1. Основные понятия молекулярной генетики.
2. Экзон-интронное строение гена.
3. Сущность генетического кода.
4. Значение центральной догмы молекулярной биологии.
5. Молекулярные механизмы регуляции экспрессии гена на
уровне транскрипции, процессинга, трансляции мРНК.
6. Механизм РНК-интерференции.
 4

Студент должен уметь:

1. Пользоваться учебной, научной, научно-популярной
литературой, сетью Интернет для получения знаний по данной теме.
2. Идентифицировать процессы транскрипции, процессинга и
трансляции по микрофотографиям, рисункам и схемам.
4. Решать ситуационные задачи по молекулярной генетике.
5. Применять полученные знания для анализа экспрессии генов в
медицинской практике.

Студент должен владеть:

1. Навыками устного и письменного описания стадий экспрессии
гена.
2. Навыками отображения изучаемых объектов в рисунке.
3. Подходами к решению генетических задач.

Оснащение занятия
1. Мультимедийная презентация по теме
2. Таблицы:
• Генетический код
• Транскрипция
• Трансляция
• Строение и регуляция экспрессии гена эукариот
3. Микроскопы
• Прямой световой монокулярный
• Прямой световой бинокулярный
4. Микропрепараты. Иммуногистохимическое выявление
продуктов экспрессии генов терминальной дифференцировки.
• Поперечный срез спинного мозга крысы.
Иммуногистохимическое выявление холинацетилтрансферазы в
двигательных нейронах.
• Поперечный срез быстрой и медленной скелетной мышцы
морской свинки.
• Иммуногистохимическое выявление тяжёлых цепей быстрого
миозина в мышечных волокнах.

Хронологическая карта занятия:

1. Организационная часть.
2. Письменный тестовый контроль базового уровня знаний.
3. Разбор теоретического материала.
 5

4. Самостоятельная работа студентов и текущий контроль за

выполнением заданий.
5. Проверка выполненных работ в тетрадях и альбомах.
6. Установка задания для подготовки к следующей теме.

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ ОБЗОР
Ген – участок ДНК, с которого копируется РНК. Термин «ген»
был предложен в 1909 году датским ботаником Вильгельмом
Йогансеном. В 1920 году Ганс Винклер ввёл понятие генома –
совокупность генов, заключённых в гаплоидном наборе хромосом
организмов одного биологического вида. Геном человека длиной 3,3
млрд п.н. расшифрован в 2003 году, содержит примерно от 20000 до
25000 генов. Окончательное количество генов не установлено.

СТРУКТУРА ГЕНА
Размеры генов варьируют от 250 п.н. (ген IGF2 – инсулин-
подобный фактор роста II, 67 аминокислот) до 2 200 000 п.н. (ген
DMD – дистрофин, 3685 аминокислот). Общепринятая модель
строения гена — экзон-интронная структура (рис. 1-1).
Экзон – последовательность ДНК, которая представлена в
зрелой РНК. В составе гена должен присутствовать как минимум
один экзон (гены тРНК, гистонов). Максимальное количество
экзонов представлено в гене мышечного белка титина – 364 экзона. В
среднем в гене сдержится 8 экзонов.
• Фактор инициации транскрипции 5'-ACTT(T/C)TG-3' входит в
состав первого экзона.
• Фактор терминации транскрипции (менее определённая
последовательность) входит в состав последнего экзона.
Интрон – последовательность ДНК, включённая между
экзонами, не входит в состав зрелой РНК. Интроны имеют
определенные нуклеотидные последовательности, определяющие их
границы с экзонами: на 5' конце — GU последовательность, на 3'
конце – AG. Интроны содержат регуляторные элементы экспрессии
гена и могут кодировать регуляторные РНК (miRNA).
Сигнал полиаденилирования 5'-AATAAA-3' входит в состав
последнего экзона, начинается сразу после стоп-кодона (ТАА, TAG,
TGA). Поли(А) сайты защищают мРНК от деградации.
5'- и 3'-фланкирующие последовательности. Копирование гена
происходит в направлении 5' → 3'; на флангах (границах) находятся
 6

специфические сайты, ограничивающие ген и содержащие

регулятор- ные элементы его транскрипции.
Регуляторные элементы – промотор, энхансеры, сайленсеры,
инсуляторы – могут находиться за пределами сайта транскрипции и
быть общими для нескольких генов.

Рис. 1-1. Структура и экспрессия гена [из Boron W.F., Boulpaep

E.L., 2003].

• Промотор (от англ. promoter – активатор, ускоритель) – цис-

регуляторная последовательность в 5'-области гена, определяющая
место прикрепления РНК-полимеразы и интенсивность (частоту)
транскрипции мРНК. Содержит ТАТА-бокс для связывания
основного фактора транскрипции TFIID. Проксимальнее ТАТА-бокса
содержатся GC бокс (5'-GGGCGG-3') и CAAT бокс (5'-CCAAT-3') для
связывания дополнительных специфических белков, активирующих
экспрессию генов. Активация только промотора недостаточна для
экспрессии гена на физиологически значимом уровне.
• Энхансеры (от англ. enhance – усиливать) – цис-позитивные
регуляторные элементы и сайленсеры (от англ. silence –
успокаивать) – цис-негативные регуляторные элементы состоят из 6-
12 нуклеотидов, специфически взаимодействующих с белками.
Энхансеры связываются с белками активаторами и усиливают
 7

экспрессию гена. Сайленсеры связываются с белками репрессорами и

блокируют экспрессию гена. Энхансеры и сайленсеры локализуются
в 5'- или 3'- фланкирующих участках, интронах. Активность не
зависит от их ориентации или локализации. Кроме того, они могут
находиться на больших расстояниях от промотора (несколько сотен
п.н.) и взаимодействуют с ним за счёт образования петель ДНК.
• Инсуляторы (англ. MAR – matrix attachment regions). Образуют
дискретные функциональные домены – петли хромосом,
ограничивающие влияние соседних регуляторных элементов. В
состав петли могут входить специфические последовательности,
контролирущие локус (англ. LCR — locus-control region) –
позитивные цис-элемен- ты, регулирующие активность нескольких
генов (рис. 1-2).
Последовательность LCR впервые открыта в гене β-глобина.
Семейство генов β-глобина включает 5 генов (ε, γG, γA, δ, β) на
хромосоме 11. Гены активируются последовательно от 5'- к 3'- концу
в онтогенезе в эритроидных клетках. β глобин экспрессируется в
желточном мешке, γG- и γA-глобины в печени плода, ε - и δ -глобины
в красном костном мозге в постнатальном периоде.

Рис. 1-2. Регуляторные элементы [из Boron W.F., Boulpaep

E.L., 2003].

LCR связывает факторы транскрипции GATA1 и NF-E2, изменя-

ет форму хроматина, делая его доступным для факторов транс-
 8

крипции, и выступает в роли энхансера.

Талассемия – гетерогенная группа генетических дефектов,
характеризующихся отсутствием или сниженной экспрессией генов,
кодирующих α- (α-талассемия) или β- (β-талассемия) цепи глобинов.
При мутациях генов нарушается или полностью блокируется
образование одной или нескольких цепей глобина, что приводит к
развитию анемии. В случае β-талассемии мутации могут затрагивать
LCR.

Таблица 1. Генетический код. В таблице представлены первое,

второе и третье основание кодона. Названия оснований даются в
двух вариантах. Без скобок указаны нуклеотиды РНК, в скобках
указаны нукле- отиды ДНК.

Природа генетического кода

В 1961 году Френсис Крик предложил четыре свойства
генетического кода:
• три азотистых основания (триплет) кодируют одну
аминокислту;
• триплеты генетического кода не перекрываются;
• последовательности триплетов считываются с определенной
начальной точки, знаки препинания внутри кодирующей
последовательности отсутствуют;
• одна аминокислота может быть закодирована разными
 9

триплетами – вырожденность (избыточность) генетического кода. 61

кодон кодирует 20 аминокислот. УАА, УАГ и УГА-нонсенс-кодоны
(стоп-кодоны).
Таблица 2. Аминокислоты и соответствующие им сокращённые
названия и кодоны

Таблица 2. Аминокислоты и соответствующие им сокращённые

названия и кодоны (окончание)
 10

Классификация генов
Гены по компартментной локализации в клетке разделяются на
ядерные и митохондриальные. Среди ядерных генов принято
различать:
• Белок кодирующие гены:
Гены «домашнего хозяйства» (репликация, репарация, синтез
белка, синтез АТФ).
Гены терминальной дифференцировки кодируют
специфическиебелки в конкретном клеточном типе и его фенотипах.
Гены факторов транскрипции контролируют активность генов
«домашнего хозяйства» и генов клеточной дифференцировки.
• Белок некодирующие гены:
 11

Обеспечивающие синтез белка (рРНК, тРНК, мяРНК).

Регулирующие синтез белка (микроРНК).

ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА
Это реализация наследственной информации, закодированной в
гене, в функциональный продукт – РНК или белок. Экспрессия генов
включает процессы транскрипции, процессинга (кэпирование,
сплайсинг, полиаденилирование), экспорта зрелой РНК в
цитоплазму, трансляции мРНК (синтез белка на рибосомах),
деградации мРНК.
Транскрипция (от лат. transcriptio – переписывание) – синтез
РНК на матрице ДНК. Транскрипция состоит из стадий инициации,
элонгации и терминации.
• ДНК упакована в ядре в составе эухроматина или
гетерохроматина. Чтобы белки активаторы и ферменты
транскрипции достигли своих сайтов связывания на ДНК, хроматин
должен «раскрыться». Это достигается эпигенетическими
процессами, например, метилирование/деметилирование ДНК,
ацетилирование/деацетилирование гистонов.
• РНК полимераза II связывается с промотором в точке
инициации транскрипции через основные факторы транскрипции.
Основные факторы транскрипции (рис. 1-3). TFIID – первый
белок, прикрепляющийся к ТАТА-боксу промотора гена и
определяющий правильную точку начала транскрипции. TFIIA,
TFIIB, pol II TFIIF, TFIIE, TFIIH и TFIIJ последовательно
связываются с TFIID, обеспечивая связь РНК-полимеразы II с ДНК.
Специфические факторы транскрипции требуются для
актива-ции транскрипционной машины. Регуляторные белки
взаимодействуют с цис-элементами (энхансерами), расположенными
за пределами промотора. Благодаря гибкости молекулы ДНК
образуются петли ДНК, позволяющие взаимодействовать энхансеру
и промотору с последующей активацией транскрипции гена. К этим
факторам относятся рецепторы стероидных и тиреоидных гормонов,
ретиноидов, витамина D, CREB (белок, взаимодействующий с
цАМФ-чувствительным элементом), c-Myc, АР-1 (c-Jun/c-Fos).
Синтез первичного транскрипта (про-мРНК) осуществляется с
помощью РНК полимеразы II, которая движется по ДНК матрице в
направлении от 3' к 5' концу. Синтез РНК протекает по правилу
 12

Уотсона-Крика (комплементарного спаривания нуклеотидов) на

матрице ДНК в направлении от 5'- к 3'- концу, при этом вместо
тимина в молекулу РНК встраивается урацил. Для того, чтобы
получить копию смысловой цепи ДНК, синтез РНК происходит с
антисмысловой цепи. Расположение смысловой и антисмысловой
последовательности для каждого гена между двумя
антипараллельными цепями полинуклеотидов в двухцепочечной
молекуле ДНК индивидуально. Синтез про-мРНК прекращается в
точке терминации последнего экзона.

Рис. 1-3. Факторы транскрипции [из Boron W.F., Boulpaep E.L.,

2003].
 13

Процессинг (посттранскрипционная модификация мРНК).

Процессирование про-мРНК (созревание мРНК) включает процессы
сплайсинга, кэпирования 5'-конца РНК, удаление нуклеотидов на 3'-
конце, образование полиаденинового хвоста.
• Сплайсинг (от англ. splice — соединять концы чего-либо) –
процесс созревания РНК, в котором происходит удаление из про-
мРНК интронов и соединение друг с другом экзонов.
Малые ядерные РНК (мяРНК, small nuclear RNA, snRNA) – класс
РНК, образуют комплексы со специфическими белками (малые
ядерные рибонуклеопротеины), обладают ферментативной
активностью (рибозимы), вырезают интроны и соединяют вместе
экзоны.
Сплайсосома формируется в месте вырезания интрона, состоит
из последовательно присоединяющихся мяРНК (U1, U2….U12) и
белков. U1 узнает 5'-место сплайсинга и 3'-место сплайсинга по
специальным фланкирующим последовательностям нуклеотидов в
интроне: на 5’ конце – GU последовательность, на 3’ конце – AG
последовательность.
Альтернативный сплайсинг позволяет получить различные бел-
ковые продукты с одного гена (рис. 1-4). Ген кальцитонина может
кодировать гормон кальцитонин и относящийся к кальцитониновому
гену пептид aльфа. В С-клетках щитовидной железы в результате
сплайсинга объединяются экзоны 1-4, которые кодируют
кальцитонин. В чувствительных нейронах процессируется мРНК, в
которой отсутствует экзон 4, но прибавляются экзоны 5 и 6. В
результате вместо кальцитонина клетки синтезируют отно- сящийся
к кальцитониновому гену пептид aльфа.
 14

Рис. 1-4. Альтернативный сплайсинг [из: Сингер М., Берг П.,

1998].

Создание кэп-сайта. Присоединение к 5'-концу про-мРНК 7-

метил-гуанозина. Кэпирование защищает транскрипт от деградации
экзонуклеазами, способствует экспорту мРНК из ядра в цитоплазму
и обеспечивает связывание мРНК с рибосомой.
Полиаденилирование. На первом этапе происходит
расщепление: с помощью эндонуклеазы удаляются 20 нуклеотидов
на 3'-конце про-мРНК до сайта инициации полиаденилирования (5'-
AAUAAA-3'). На втором этапе с помощью поли(А)полимеразы к 3'-
концу присоединяются адениновые основания (100-200 оснований),
образуется полиадениновый «хвост», защищающий мРНК от
деградации экзонуклеазами.
Зрелая мРНК состоит из экзонов, содержит 5'- и 3'-
нетранслируемые концы. 5'-нетранслируемый конец кэпирован, 3'-
нетранслируемый конец защищён полиадениновым «хвостом».
Экспорт зрелой мРНК в цитоплазму происходит через комплекс
ядерной поры с участием экспортинов и ГТФазы Ran.
 15

Рис.1-5. Строение транспортной РНК. А. Структурная модель

тРНК. Б. Конформационная модель тРНК [из: Колман Я., Рем К.-Г.,
2000].

Трансляция (от лат. translatio – перевод) – перевод

последовательности нуклеотидов мРНК в последовательность
аминокислот (синтез белка) на рибосомах с помощью тРНК.
тРНК (рис. 1-5) – второй генетический код. Транспортная
РНК (тРНК) содержит 70-90 нуклеотидов, формирующих
вторичную структуру «клеверный лист». тРНК доставляет
аминокислоты к ри- босоме, где они присоединяются к растущей
полипептидной цепи (рис. 1-6). 3'- конец тРНК (акцептор) содержит
сайт для прикрепле-ния аминокислоты. Аминоацил-тРНК-синтетаза
присоединяет спе- цифичную аминокислоту (АК) к молекуле тРНК с
образованием ами- ноацил-тРНК. Для каждой аминокислоты
существует своя аминоа- цил-тРНК-синтетаза. Другой конец тРНК
содержит антикодон из трёх нуклеотидов, который узнаёт
соответствующий кодон мРНК и спаривается с ним в А-участке
рибосомы. Избыточность генетичес- кого кода предполагает
существование для одной аминокислоты не- скольких тРНК.
Поэтому тРНК несут 48 разных антикодонов.
Рибосома состоит из большой и малой субъединицы (СЕ),
содержащих различные типы рРНК и белки (рис. 1-6). Малая СЕ
связывается с мРНК и активированными тРНК. Пептидилтрансфераза
в большой СЕ катализирует образование пептидных связей и
присоединение аминокислот к растущей полипептидной цепи.
Рибосомы, как и малые ядерные РНК, относятся к рибозимам.
 16

Рибосомы подразделяют на митохондриальные и более крупные

цитоплазматические.

Рис. 1-6. Рибосома. А. Рибосома 80S состоит из большой и

малой субъединиц (СЕ). Большая СЕ содержит 5S, 28S и 5,8S РНК и
~ 49 белков, малая СЕ включает 18S РНК и ~ 33 белка. Б. Рибосома
имеет три различных участка связывания РНК – один для мРНК и два
для тРНК. Пептидил-тРНК-связывающий участок (P участок)
удерживает молекулу тРНК, присоединённую к растущему концу
полипептидной цепи; расположенный рядом аминоацил-тРНК-
связывающий участок (А-участок) фиксирует только что
поступившую в рибосому молекулу тРНК с аминокислотой (аа) [из
Alberts B. et al, 1989]. В. Трансляция состоит из трёх многократно
повторяющихся этапов. На первом этапе рибосома уже соединила
три аминокислоты (на рисунке обозначены 1, 2, 3) в полипептидную
цепь. Фермент аминоацил-тРНК-синтетаза связывает аминокислоту
4 со своей специфичной тРНК. Комплекс “тРНК-аминокислота”
присоединяется к А-участку рибосомы. На втором этапе происходит
присоединение поступившей в рибосому аминокислоты 4 к
растущей полипептиной цепи в Р-участке рибосомы, обладающим
ферментативной (пептидилтрансферазной) активностью; малая СЕ
способствует освобождению А-участка. На третьем этапе тРНК,
принесшая аминокислоту 3 удаляется из рибосомы, которая готова
принять аминокислоту 5 следующего цикла синтеза белка [из: Dudek
 17

RW, 2004].
Полирибосома (полисома) – комплекс нескольких рибосом,
расположенных на одной молекуле мРНК. Полирибосомы, как и
отдельные рибосомы, находятся в цитоплазме в свободном состоянии
или прикреплены к мембранам эндоплазматической сети. Свободные
полирибосомы синтезируют белки и ферменты для самой клетки
(конститутивный синтез), а полирибосомы гранулярной
эндоплазматической сети – предназначенные для хранения или
выведения из клетки (синтез на экспорт).
Митохондриальные рибосомы (60S) состоят из 45S и 35S СЕ,
содержащих соответственно 16S и 12S рРНК, кодируемые
митохондриальной ДНК. Эта ДНК содержит последовательности для
митохондриальных мРНК и тРНК. Большинство ферментов,
участвующих в трансляции митохондриальной мРНК, кодируется
ядерной ДНК.
Синтез белка на рибосомах ЭС. Зрелая мРНК из ядра
экспортируется в цитоплазму и соединяется с рибосомами. Молекула
мРНК продвигается сквозь рибосому в направлении от 5'- к 3'-концу,
и её нуклеотидная последовательность транслируется в
соответствующую последовательность аминокислот синтезируемой
белковой цепи. Синтез полипептидной цепи включает следующие
этапы (рис. 1-7):
Синтез белка начинается со стартового или инициаторного AUG-
кодона, который распознаётся рибосомой и привлекает
инициаторную аминоацил-тРНК, транспортирующую метионин.
Синтез сигнального пептида.
Прикрепление рибонуклеопротеиновой частицы к сигнальному
пептиду.
Взаимодействие рибонуклеопротеиновой частицы со своим
рецептором в мембране ЭС.
Связывание рибосомы с транслоконом.
Сигнальная пептидаза отрезает сигнальный пептид.
Элонгация полипептидной цепи.
Терминирующие кодоны (UAA, UAG, UGA) контролируют
отделение от рибосомы готового полипептида и мРНК.
Терминирующие кодоны не имеют соответствующих тРНК.
Антибиотики, ингибирующие трансляцию белка. Различия
между рибосомами бактерий (50S и 30S) и млекопитающих (60S и
40S) обуславливает избирательное взаимодействие антибиотиков
 18

этой группы с бактериальными рибосомами.

Рис. 1-7. Синтез белка на рибосомах [из: Boron W.F., Boulpaep

E.L., 2003].

Тетрациклины образуют комплексы с рибосомой 30S, угнетая

начальную стадию трансляции белка.
Аминогликозидные антибиотики (стрептамицин, гентамицин
амикацин) повышают сродство молекулы тРНК с А-участком
рибосомы 50S, что приводит к ошибочному считыванию
генетической информации и, как следствие, к синтезу
функционально неактивного белка.
Макролиды (эритромицин, кларитромицин, рокситромицин)
связываются с рибосомой 50S и ингибируют пептидилтрансферазу,
блокируя наращивание полипептидной цепи.
Циклогексимид ( 4- {( 2R ) - 2- [ ( 1S , 3S , 5S ) - 3, 5- dime t
hyl- 2-oxocyclohexyl]-2-hydroxyethyl}piperidine-2,6-dione) – продукт
жизнедеятельности Streptomyces griseus, ингибитор синтеза белка
эукариот. Циклогексимид подавляет активность
пептидилтрансферазы рибосомы 60S, прекращая сборку
полипептидной цепи. Из-за выраженного токсического и
тератогенного эффектов циклогексимид применяют только в
экспериментальной медицине.

Посттрансляционная модификация
После синтеза на рибосоме белки подвергаются
посттрансляционной модификации, завершающей процесс
экспрессии гена и вместе с альтернативным сплайсингом
увеличивающей разнообразие белков в клетке. Известно более
двухсот вариантов посттрансляционной модификации белков,
 19

например, протеолиз, гликозилирование, ацетилирование,

фосфорилирование, карбоксилирование и др.
Ген POMC (2p23) кодирует белок пре-проопиомеланокортин
(пре-POMC), состоящий из 285 аминокислотных остатков. После
удаления сигнального пептида остаётся белок из 241 остатка
аминокислот, который далее расщепляется на меньшие полипептиды
(меланокортины) с разными функциями (рис. 1-8). Модификация
POMC включает гликозилирование, ацетилирование и
протеолитическое расщепление в тканепецифических сайтах (Arg-
Lys, Lys-Arg, или Lys-Lys). Гены, кодирующие ферменты
расщепления POMC (прогормон конвертаза 1, прогормон конвертаза
2, карбоксипептидаза E, пептидил α-амидатинг-монооксигеназа, N-
ацетилтрансфераза и пролилкарбоксипептидаза) характеризуются
дифференциальной экспрессией. В результате посттрансляционной
модификации молекулы проопиомеланокортина образуются
адренокортикотропный гормон (АКТГ), α-, β- и γ-
меланоцитостимулирующие гормоны (меланотропины, МСГ) и β-
эндорфин. АКТГ связывается с рецептором меланокортина 2 типа
(MC2R) и стимулирует секрецию гормона кортизола. Кортизол
регулирует уровень сахара в крови, защищает от стресса, подавляет
воспалительные реакции. α-МСГ связывается с рецептором
меланокортина 1 типа (MC1R) в клетках, синтезирующих пигмент
меланин (меланоцитах). β-МСГ через рецептор меланокортина 4 типа
(MC4R) участвует в регулировании веса тела. Сигнальный путь через
MC4R в нейронах мозга поддерживает баланс между полученной и
потраченной энергией. γ-МСГ связывается с рецептором
меланокортина 3 типа (MC3R), считается, что γ-МСГ регулирует
содержание ионов натрия, и как следствие, кровяное давление. β-
эндорфин взаимодействует с опиоидными рецепторами, снимающие
болевую чувствительность.

Рис. 1-8. Проопиомеланокортин (POMC) и его производные.

 20

Меланокортины, АКТГ, α-, β- и γ-МСГ образуются в результате

посттрансляционного процессирования POMC, который также
является предшественником опиоидных гормонов (β-эндорфин),
липотропинов, кортикотропиноподобного пептида (CLIP). МСГ –
меланоцитостимулирующий гормон; NT-NH2-концевой фрагмент;
JP-пептид соединения [Catania A. et al., 2004].

ДЕГРАДАЦИЯ мРНК
Регуляция экспрессии генов на транскрипционном и
посттранскрипционном уровнях происходит с помощью механизма
РНК-интерференции. РНК-интерференция – подавление экспрессии
генов (деградация мРНК), индуцированное короткими
интерферирующими РНК (siRNA – short interfering RNA). К коротким
интерферирующим РНК относятся малая интерферирующая РНК
(siRNA – small interfering RNA) и микроРНК (miRNA – microRNA)
(рис. 1-9).

Рис. 1-9. Деградация мРНК [из: Fire A. Z., Mello C. C., 2006].

Малая интерферирующая РНК. РНК-интерференция с

помощью siRNA является защитным механизмом против РНК
вирусов и мобильных элементов (транспозонов).
Механизм посттранскрипционного ингибирования экспрессии
 21

гена на уровне блокады трансляции белка-мишени путём деградации

его мРНК начинается с транскрипции длинной двухцепочечной РНК
(обычно >200 п.н.) вирусного или эндогенного (транспозоны)
происхождения. Эндогенная рибонуклеаза III
(Dicer) процессирует длинную двухцепочечную РНК с
образованием siRNA длиной в 19–23 п.н. Далее двухцепочечная
siRNA попадает в протеиновый комплекс RISC (Ribonucleic Acid
Induced Silencing Complex). RISC «раскручивает» двойную спираль
siRNA и освобождается от смысловой нити siRNA. Антисмысловая
нить в составе белкового комплекса прикрепляется к
комплементарному участку мРНК-мишени и RISC разрезает мРНК.
Клеточные нуклеазы заканчивают деградацию мРНК, прекращая
синтез белка. Реакция RISC – каталитическая, она повторяется
несколько раз, обеспечивая очень эффективное и долговременное
ингибирование экспрессии определённого гена. Кроме того, siRNA
может функционировать как праймер для синтеза дополнительных
длинных двухцепочечных молекул РНК, усиливая эффект siRNA,
участвующей в ингибировании экспрессии гена.
МикроРНК. РНК-интерференция с помощью miRNA является
механизмом подавления экспрессии генов (замалчивание гена) на
транскрипционном и посттранскрипционном уровнях. miRNA
экспрессируются в виде отдельных генов – 60%, в составе кластеров
– 15%, в интронах – 25%.
Синтез зрелой двухцепочечной микроРНК происходит в
несколько этапов. Сначала с гена микроРНК транскрибируется
протяжённый первичный транскрипт (Pri-miRNA), который может
содержать в себе несколько копий miRNA. Далее в ходе сплайсинга
первичного транскрипта образуются отдельные зашпиленные РНК
(Prе-miRNA) длиной 70 п.н., которые экспортируются в
цитоплазму. В цитоплазме Dicer вырезает из предшественника
зрелую одноцепочечную miRNA длиной 21-25 нуклеотидов. Любая
из нитей miRNA потенциально может включиться в комплекс RISC, в
составе которого miRNA по принципу комплементарного спаривания
распознаёт свою специфическую мРНК в 3'-нетранслируемом конце
молекулы. В случае полной комплементарности ферменты комплекса
RISC разрезают РНК-мишень с последующей её деградацией. При
неполной комплементарности miRNA блокирует трансляцию мРНК-
мишени без её деградации.
Одна miRNA может блокировать транскрипцию нескольких
 22

сотен мРНК (деградация мРНК).

Одна miRNA может блокировать трансляцию с нескольких
сотен мРНК (приостановка синтеза белка).
По данным базы данных miRBase у человека описано 721
miRNA.

ПРАКТИЧЕСКИЕ НАВЫКИ
1. Центральная догма молекулярной биологии Френсиса
Крика
Основными звеньями центральной догмы молекулярной
биолгии, сформулированной Френсисом Криком в 1958 году,
являются:
- генетический код (64 кодона),
- антипараллельные (смысловая и антисмысловая) нити ДНК,
- комплементарность мРНК антисмысловой нити,
- антикодон тРНК, распознающий кодон мРНК,
- 20 аминокислот, где каждая имеет свою тРНК.
Согласно догме реализация наследственной информации
происходит в направлении: ДНК→мРНК→белок, что является
универсальным механизмом экспрессии гена для всех эукариот (рис.
1-10).

Рис. 1-10. Центральная догма молекулярной биологии [из:

Fire A. Z., Mello C. C., 2006].
 23

Решите ситуационные задачи, основываясь на центральной

биологической догме Френсиса Крика.
1. Найдите триплеты ДНК, мРНК, антикодон тРНК. Какую
амино- кислоту транспортирует эта тРНК?
ДНК 5' -……..АЦГ……..-3'
3'-………???....…...-5'
мРНК 5'-………??? ..…....-3'
антикодон тРНК 3'-???-5'
аминокислота ?
2. Найдите триплеты ДНК, мРНК, антикодон тРНК.
ДНК 5'-……???…….-3'
3'-……???…….-5'
мРНК 5'-…...??? …....-3'
антикодон тРНК 3'-???-5'
аминокислота метионин
3. Проанализируйте фрагменты молекул, определите их
название, обоснуйте ваш выбор. Существует ли взаимосвязь между
представленными фрагментами молекул?

(1) ГЦЦ-ААУ-ЦУГ-УГГ-ГУЦ-АЦГ-ЦЦА
(2) ЦГГ-ТТА-ГАЦ-АЦЦ-ЦАГ-ТГЦ-ГГТ
(3) ала-иле-лей-три-фен-тре-про

4. Молекула тРНК имеет антикодон УГЦ. Какую аминокислоту

транспортирует в рибосому эта тРНК?

5. В биосинтезе полипептида участвуют молекулы тРНК с

антикодонами УГА, АУГ, АГУ, ГГЦ. Определите нуклеотидную
последовательность смысловой цепи ДНК, последовательность
мРНК и аминокислотную последовательность полипептида.
Установите число нуклеотидов, содержащих аденин (А), гуанин (Г),
тимин (Т), цитозин (Ц) в двухцепочечной молекуле ДНК.

2. ВИРТУАЛЬНАЯ ЛАБОРАТОРИЯ.
ИММУНОГИСТОХИМИЯ

1. Введение
 24

Принцип проведения иммуногистохимической реакции основан

на специфическом взаимодействии меченых антител (АТ) с
тканевыми антигенами (Аг). АТ метят различными способами:
флюорохромами (флюоресцеин, родамин и др.), при помощи
ферментной реакции (пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза) или
электроноплотными частицами (ферритин, коллоидное золото).
Применяют два варианта иммуногистохимических реакций: прямой
и непрямой (рис. 1-11). При двойной иммуногистохимической
реакции, когда одновременно применяют разные АТ,
конъюгированные с различными флюорохромами или ферментами на
одном срезе можно выявить взаимное расположение двух молекул-
мишеней.

Рис. 1-11. Иммуногистохимическая реакция. А. Прямой метод

предполагает использование меченых АТ против интересующего Аг.
АТ взаимодействуют с Аг в местах их локализации. Эти места
выявляют при помощи метки, связанной с АТ. Б. Непрямой метод
предполагает использование двух различных АТ. Первые АТ
реагируют с Аг ткани. Связанные с меткой вторые АТ специфически
взаимодействуют с первыми АТ, которые для вторых АТ являются
Аг. Метод значительно чувствительнее прямого, т.к. с каждой
молекулой первых АТ связывается несколько молекул вторых АТ,
содержащих метку (например, пероксидазу хрену).

2. Протокол непрямого иммунопероксидазного метода

1. Подготовка биопсийного материала. На практике для
иммуногистохимии готовят криостатаные срезы из замороженной
ткани или парафиновые срезы из фиксированной формалином и
пропитанной парафином ткани.
 25

2. Подготовка срезов к иммуногистохимической реакции

заключается в демаскировке целевых АГ. После фиксации в
формалине АГ необходимо демаскировать – восстановить нативную
структур белка (АГ). Демаскировку АГ проводят путём обработки
срезов протеолитическими ферментами (трипсин, протеиназа К,
проназа) или нагреванием в микроволновой печи или на водяной
бане в 10 мМ цитратном буфере при рН = 6,0.
3. Блокирование эндогенной пероксидазной активности.
Многие клеточные типы имеют собственную пероксидазу, а
поскольку в иммуногистохимической реакции применяется
пероксидаза, то для устранения ложноположительной реакции
проводится инактивация эндогенной пероксидазы в 3% растворе
перекиси водорода.
4. Инкубация с первичными АТ. Для выявления целевого АГ
на срезы наносят коммерческие АТ (иммуноглобулины, полученные
путём иммунизации лабораторного животного целевым АГ), которые
специфически связываются с АГ.
5. Отмывка срезов с целью удаления не связавшихся первичных
АТ.
6. Инкубация со вторичными АТ, конъюгированными с
ферментом пероксидазой хрена. Вторичные АТ (иммуноглобулины)
специфически связываются с первичными АТ.
7. Отмывка срезов с целью удаления не связавшихся вторичных
АТ.
8. Визуализация иммунопреципитата (комплекса АГ-АТ).
Гистохимическое выявление активности пероксидазы хрена,
конъюгированной со вторичными АТ, в присутствии перекиси
водорода и хромогенного субстрата диаминобензидина. В месте
локализации комплекса АГ-АТ образуется нерастворимый осадок
коричневого цвета.
9. Окрашивание срезов гистологическими красителями для
получения полной морфологической картины ткани, например
гематоксилином и эозином.
10. Заключение. Срезы промывают и заключают в
водорастворимые среды или канадский бальзам.
11. Интерпретация результатов. Микропрепараты изучают под
световым микроскопом. Иммуногистохимическая реакция в месте
локализации целевого АГ представляет собой осадок коричневого
цвета.
 26

3. Иммуноэкспрессия генов терминальной дифференцировки

1. Иммуногистохимическое выявление
холинацетилтрансферазы в двигательных нейронах спинного
мозга.

Мотонейроны спинного мозга принадлежат к популяции

холинэргических нервных клеток. Синтез ацетилхолина (АХ)
происходит в нервной терминали из холина и ацетил-КоА при
помощи фермента холинацетилтрансферазы (ХАТ). ХАТ является
надёжным маркёром для типирования холинэргических нейронов
(рис. 1-12). Снижение экспрессии ХАТ в мотонейронах спинного
мозга показано при нейродегенеративных заболеваниях (например,
боковой амиотрофический склероз, хорея Хантингтона), одним из
патогномоничных признаков которых является прогрессирующая
мышечная слабость. Мутация гена, кодирующего ХАТ,
обуславливает развитие миастенического синдрома, который также
характеризуется внезапными эпизодическими кризами мышечной
слабости.

2. Иммуногистохимическое выявление тяжёлых цепей

быстрого миозина в скелетной мышце.
Скорость сокращения мышечного волокна определяется типом
миозина. Изоформа миозина, обеспечивающая высокую скорость
сокращения – быстрый миозин, изоформа миозина с меньшей
скоростью сокращения – медленный миозин. Общепринято, что
волокна, типируемые по быстрому миозину, имеют высокую
активность АТФазы миозина и относятся к волокнам типа II.
Мышечные волокна, экспрессирующие медленный миозин,
классифицируются как волокна типа I с низкой активностью АТФазы
миозина. Таким образом, иммуногистохимическое типирование
волокон по качественному составу миозина и выявление активности
АТФазы миозина отражают скоростные характеристики мышечных
волокон (рис. 1-13).
 27

Рис. 1-12. Иммуногистохимическая реакция с АТ против ХАТ

на поперечных срезах поясничного отдела спинного мозга
крысы. Иммунопероксидазным методом выявлена ХАТ. Осадок
иммуногистохимической реакции локализуется только в перикарионе
и отростках двигательных холинэргических нейронов в передних
рогах спинного мозга. Все другие клеточные типы спинного мозга
иммунонегативны.

Рис. 1-13. Иммуногистохимическое типирование быстрой и

медленной мышц морской свинки. Криостатные срезы готовили из
свежезамороженной в жидком азоте мышечной ткани. Поперечные
срезы камбаловидной (медленной) мышцы морской свинки
монтировали на одном предметном стекле вместе с поперечными
срезами подошвенной (быстрой) мышцы. Иммунопероксидазным
методом с помощью АТ против тяжёлых цепей быстрого миозина
выявлена положительная иммуногистохимическая реакция в
быстрых волокнах подошвенной мышце и отсутствует в гомогенно
медленной камбаловидной мышце. Анализ иммуногистохимической
реакции указывает, что в медленной мышце отсутствует экспрессия
гена тяжёлых цепей быстрого миозина. В быстрой мышце ген
быстрого миозина экспрессируется в быстрых мышечных волокнах и
отсутствует в медленных. Таким образом, каждая мышца уникальна
по спектру входящих в её состав типов мышечных волокон. Этот
 28

спектр генетически детерминирован (отсюда практика типирования

мышечных волокон при отборе спортсменов-бегунов – спринтеров и
стайеров). У бегунов-стайеров преобладают медленные волокна, у
бегунов-спринтеров – быстрые.

3. СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ С ОТВЕТАМИ И

ПОЯСНЕНИЯМИ
1. Молекулярный вес аминокислотных остатков, входящих в
состав белка, равен в среднем 110 Да, а нуклеотидных остатков ДНК
– около 330 Да. Чему равна молекулярная масса фрагмента
двухцепочечной вирусной ДНК, кодирующего белок с общей
молекулярной массой 330 кДа?

Решение: Общая молекулярная масса белков равна 330 кДа, что

соот- ветствует 330000 Да. Если одна аминокислота, в составе белка
в сред- нем весит 110 Да, то 330000/ 110 = 3000 – это количество
всех амино- кислотных остатков.
Так как генетический код триплетен, то количество нуклеотидов
в мРНК, шифрующей данный белок, будет: 3000 х 3 = 9000.
Так как в ДНК, с которой транскрибировалась мРНК две цепи, то
количество нуклеотидов ДНК будет 9000 х 2 = 18000.
Если молекулярная масса одного нуклеотида в ДНК около 330
Да, то общая молекулярная масса будет: 18000 х 330 = 5940000 Да.

Ответ: молекулярная масса фрагмента двухцепочечной вирусной

ДНК равна 5940000 Да

2. Фермент триптофансинтетаза синтезирует аминокислоту

триптофан. Этот фермент состоит из двух пар субъединиц: 2α2β.
Молекулярная масса субъединицы α равна 29500 Да, а β – 95000 Да.
Какова молекулярная масса всей триптофансинтетазы? Сколько
приблизительно аминокислотных остатков входит в состав этого
фермента, если известно, что молекулярная масса одного
аминокислотного остатка составляет в среднем 110 Да?

Ответ: (2 х 29500 + 2 х 95000) / 110 = 2490 аминокислот входит

в состав триптофансинтетазы.

3. Белок состоит из 100 аминокислот. Установите, во сколько раз

 29

молекулярная масса участка гена, кодирующего данный белок,

превы- шает молекулярную массу белка, если средняя молекулярная
масса аминокислотного остатка – 110 Да, а нуклеотида – 330 Да.
Ответ поясните.

Ответ: 100 х 110 = 11000 – молекулярная масса белка;

100 х 3 = 300 х 2 = 600 х 330 = 198000 – молекулярная масса
гена, кодирующего данный белок;

198000/11000 ~ в 18 раз ген тяжелее кодируемого им белка.

4. Какова молекулярная масса белка, содержащего 99 пептидных

связей, при условии, что молекулярная масса одного
аминокислотного остатка составляет в среднем 110 Да?

Ответ: 99 пептидных связей в белке образуется между 100

аминокислотами. Тогда молекулярная масса белка будет равна - 100
х 110 = 11000 Да.

5. Небольшой пептид состоит из 40 аминокислотных остатков.

Сколько пар нуклеотидных остатков входит в состав фрагмента
двухцепочечной молекулы ДНК, несущего информацию о первичной
структуре этого белка?

Ответ: 40 х 3 = 120 х 2 = 240 нуклеотидных остатков

двухцепочечной молекулы ДНК.

6. Сколько разных пептидов, состоящих из 5 аминокислотных

остатков, может быть синтезировано из аминокислот 20 видов, при
условии, что каждая из них встречается в синтезируемом белке
только один раз?

Ответ: Так как аминокислота встречается в пептиде из 5

аминокислотных остатков всего один раз, а общее число видов их в
клетке 20, то 20 х 19 х 18 х 17 х 16 = 1860480 пептидов.

7. В трансляции участвовало 30 молекул тРНК. Определите

число аминокислотных остатков, входящих в состав синтезируемого
белка, а также число триплетов и нуклеотидов в участке гена,
 30

который кодирует этот белок.

Ответ: Одна тРНК переносит одну аминокислоту, поэтому

количество аминокислотных остатков, входящих в состав
синтезируемого белка, равно 30. Число триплетов мРНК, с которыми
взаимодействуют антикодоны тРНК, также равно количеству тРНК –
30. Нуклеотидов в мРНК будет 30 х 3 = 90, т.к. генетический код
триплетен. Двухцепочечная ДНК содер- жит 90 х 2 = 180 нуклеотидов
в участке гена, который кодирует этот белок.

8. Сколько нуклеотидов содержит ген (обе цепи ДНК), в котором

запрограммирован белок из 500 аминокислот? Какую он имеет длину
(расстояние между нуклеотидами в ДНК составляет 0,34 нм)? Какое
время понадобится для синтеза этого белка, если скорость
передвижения ри- босомы по мРНК составляет 6 триплетов в
секунду?

Ответ: 500 х 3 = 1500 х 2 = 3000 нуклеотидов содержит ген (обе

цепи ДНК), в котором запрограммирован данный белок. Его длина
1500 х 0,34 = 540 нм. На мРНК содержится 500 триплетов, значит,
время, которое понадобится для трансляции данной мРНК, примерно
равно 500/ 6 = 83 сек или 1 мин и 23 сек.

9. Участок одной из двух цепей молекулы ДНК содержит 300

нуклеотидов с А, 100 с Т, 150 с Г и 200 с Ц. Какое число нуклеотидов
с А, Т, Г, Ц содержится в двух цепях молекулы ДНК? Сколько
аминокислот должен содержать белок, кодируемый этим участком
молекулы ДНК?

Ответ: По правилу комплементарности А – Т во второй цепи

будет содержаться 100 нуклеотидов с А. Общее количество А в двух
цепях будет – 300 + 100 = 400. Общее количество Т - 100 + 300 = 400.
Общее количество Ц – 200 + 150 = 350. Общее количество Г – 150 +
200 = 350. Белок будет содержать – 300 + 100 + 150 + 200 = 750/ 3
(т.к. ген. Код триплетен) = 250 АК.

10. Наследственный материал вируса гепатита D представляет

со- бой молекулу РНК, являющуюся рибозимом. Во время
транскрипции она претерпевает редактирование, приводящее к
 31

превращению кодона УАГ в УГГ. Объясните, почему после

редактирования в ходе трансляции начинает синтезироваться более
длинный белок.

Ответ: Кодон УАГ является терминирующим. На нём процесс

трансляции заканчивается.

11. Две цепи молекулы ДНК удерживаются друг возле друга

водородными связями. Определите число нуклеотидов с аденином,
тимином, цитозином и гуанином в молекуле ДНК, в которой 30
нуклеотидов соединяются между собой 2 водородными связями, а 20
нуклеотидов – 3 водородными связями.

Ответ: А и Т соединяются двумя водородными связями, поэтому

их по 15, т.к. 30/2 = 15. Г и Ц соединяются тремя водородными
связями – их по 10, т.к. 20/2 = 10.

12. Ген содержит 5 экзонов, которые представляют собой

следую- щие последовательности: 1 – 93, 2 – 36, 3 – 150, 4 – 66, 5 – 48
нуклеотидов. Сколько аминокислотных остатков будет содержать
белок, транслированный с мРНК, которая после альтернативного
сплайсинга содержит только 1, 2 и 4 экзоны этого гена?

Ответ: Найдем общее количество нуклеотидов мРНК после

альтернативного сплайсинга: 93 + 36 + 66 = 135. Так как
генетический код триплетен, то количество аминокислотных
остатков будет – 135/ 3 = 65.

13. Ген содержит 5 экзонов, причем 1 экзон содержит 69

нуклеотидов, 2 – 90, 3 – 123, 4 – 36, 5 – 81. Расположенные между
ними интроны а, в, с и д содержат, соответственно, 120, 129, 96 и 303
нуклеотидов. Произошла мутация в одном из интронов и в ходе
трансляции образовался белок из 165 аминокислотных остатков.
Назовите этот интрон. Объясните ответ.

Ответ: 165 х 3 = 495 – мРНК, кодирующая мутантный белок.

69 + 90 + 123 + 36 + 81 = 399 - мРНК, кодирующая нормальный
белок.
495 – 399 = 96 – мутация произошла в третьем интроне – с.
 32

14. Серповидноклеточная анемия – генетическое заболевание,

обусловленное заменой одного нуклеотида в кодоне, шифрующем
шестую аминокислоту в β-цепи молекулы гемоглобина. Мутация
затрагивает участок ЦЦТГАГГ. Существует нуклеаза, которая узнает
ЦЦТГАГГ последовательности и расщепляет молекулу ДНК в этих
участках. Эта нуклеотидная последовательность изменена в
мутантном гене, поэтому нуклеаза не расщепляет ДНК в этом
участке. У здоровых людей при проведении диагностической
процедуры нуклеаза расщепляет ДНК в трех местах на четыре
фрагмента следующей длины: 256, 201, 181 и 88 тысяч пар
нуклеотидов. У гомозигот по мутантному аллелю образуется всего
три фрагмента длиной 382, 256 и 88 тысяч пар нуклеотидов. Какой из
этих трёх фрагментов содержит мутантный участок гена?

Ответ: При сравнении фрагментов у мутантов выявляется

фрагмент 382, который отсутствует у здоровых людей. Если взять
фрагмент 201 и сложить его с фрагментом 182 у здоровых людей, то
получается 382. Это и есть мутантный участок гена.

15. Рестриктазы разрезают молекулу ДНК на несколько

фрагментов. Имеется рестриктазa EcoR1, она узнает нуклеотидную
последовательность
5'-ГААТТЦ-3'
3'-ЦТТААГ-5'
и расщепляет её между А и Г в каждой нуклеотидной цепи
сайта рестрикции. На данном участке молекулы ДНК имеется 3
таких сайта рестрикции. Сколько рестрикционных фрагментов
образуется после воздействия на ДНК рестриктазой EcoR1? Как они
изменятся по количеству и длине, если произойдет мутация в одном
из сайтов рестрикции: А заменится на Т?

Ответ: По условию рестриктазой EcoR1 разрезают молекулу

ДНК в каждом указанном сайте рестрикции. Если таких сайтов три,
то образующихся после расщепления рестриктов будет четыре. Если
произойдёт мутация в одном из сайтов узнавания, то этот участок
ДНК разрезаться не будет и рестриктаза EcoR1 разрежет ДНК только
на три рестрикта (т.к. узнает только 2 сайта), а один из
образованных рестриктов будет длиннее.
 33

16. Синдром фригильной (ломкой) Х-хромосомы обусловлен

доминантной мутацией динамического типа, связанной с
увеличением чисъла копий тринуклеотидного повтора ЦГГ.
Увеличение числа копий происходит в ходе редупликации ДНК во
время клеточных делений. У здоровых детей и взрослых число копий
триплетного повтора варьирует от 6 до 54, а у больных - от 200 до
1800. Анализ ДНК трёх новорождённых показал, что у первого
ребенка в указанной области присутствует 350, у второго – 780, а у
третьего – 42 ЦГГ-повтора. Кто из детей будет здоров, а кто может
заболеть? Кто заболеет в более раннем возрасте?

Ответ: Третий ребёнок здоров, т.к. имеет 42 ЦГГ повтора, а это

входит в границу нормы от 6 до 54. Остальные дети могут
заболеть, причём второй ребенок – в более раннем возрасте, т.к.
содержит наибольшее (780) число повторов.

17. Предположим, что метилированию подвергаются остатки

цитозина, расположенных перед гуанином, в одном из участков ДНК.
Одна из цепочек этого участка содержит 120 остатков аденина, 30 –
гуанина, 80 – цитозина и 70 – тимина. Только 60% всех цитозинов
расположены перед гуанином. Сколько метильных групп
понадобится для метилирования этого участка ДНК?

Ответ: Г комплементарен Ц. Значит, общее количество гуанина

80 (1-ая цепь) + 30 (2-я цепь) = 110.
Только 60% всех цитозинов распложены перед гуанином.
Составляем пропорцию и вычисляем количество метильных групп:-
110 х 60% / 100% = 66.
66 метильных групп понадобится для метилирования этого
участка ДНК.

18. Синдром фригильной (ломкой) Х-хромосомы обусловлен

доминантной мутацией динамического типа, связанной с
увеличением числа копий тринуклеотидного повтора ЦГГ.
Увеличение числа копий происходит в ходе редупликации ДНК во
время клеточных делений. У здоровых детей и взрослых число копий
триплетного повтора варьирует от 6 до 54, а у больных - от 200 до
1800. У больных весь участок гена, содержащий повтор, очень
 34

метилирован по цитозину. Сколько метильных групп потребуется

для метилирования участка 2-х цепочечной молекулы ДНК, который
в своей значащей (смысловой) цепи содержит 300 повторов ЦГГ?

Ответ: 300 Ц в одной цепи, 300 + 300 = 600 Ц во второй цепи, по

правилу комплементарности оснований. Всего 900 Ц. Значит,
потребуется 900 метильных групп.
19. Вычислите, тяжелее белок или кодирующая часть его гена?
Ответ: Предположим, что количество аминокислот в белке-
мишени равняется Х, тогда масса этого белка составит 110xХ.
Количество нуклеотидов в экзонах гена, кодирующего этот белок,
составляет 3Х, а молекулярная масса, следовательно, равняется
330x3Х. 110Х < 330 x 3Х.
Кодирующие участки гена тяжелее белка.

ТИПОВЫЕ ТЕСТОВЫЕ ВОПРОСЫ

Пояснение. За каждым из перечисленных вопросов или незакон-
ченных утверждений следуют обозначенные буквой ответы или
завершения утверждений. Выберите один ответ или завершение
утверждения, наиболее соответствующее каждому случаю.

1. Экзон-интронная модель гена. Всё верно, кроме:

(А) ген начинается с интрона
(Б) между экзонами располагается один интрон
(В) ген заканчивается экзоном
(Г) интроны вырезаются при сплайсинге
(Д) в среднем ген содержит 8 экзонов
2. Сколько пептидных связей входит в состав белка,
содержащего
20 аминокислотных остатков?
(А) 10
(Б) 19
(В) 20
(Г) 21
(Д) 60
3. Как называется регуляторный элемент, блокирующий
транскрипцию?
(А) Сайленсер
(Б) Инсулятор
 35

(В) Терминатор
(Г) Энхансер
(Д) Промотор
4. Укажите событие, которое НЕ происходит при процессинге
молекулы про-мРНК:
(А) кэпирование
(Б) полиаденирование
(В) удаление нуклеотидов на 3'-конце
(Г) сплайсинг
(Д) транскрипция
5. Изучите рисунок. Как называется структура, обозначенная
цифрой 1?

(А) Промотор
(Б) Интрон
(В) Экзон
(Г) Инсулятор
(Д) Терминатор
6. Фермент РНК-полимераза всегда ведет синтез РНК в
направлении:
(А) 5' → 3' на каждой из цепей ДНК
(Б) 3' → 5' на каждой из цепей ДНК
(В) 5' → 3' на смысловой и 3' ? 5' на антисмысловой цепях ДНК
(Г) 3' → 5' на смысловой и 5' ? 3' на антисмысловой цепях ДНК
(Д) 5' → 3' на антисмысловой цепи ДНК
7. Геном человека содержит:
(А) 100000 генов
(Б) 25000 генов
(В) 50000 генов
(Г) 6000 генов
(Д) 12000 генов
8. Как называется участок молекулы ДНК, с которым
связывается фермент РНК-полимераза?
(А) Кодон
(Б) Промотор
 36

(В) Экзон
(Г) Триплет
(Д) Интрон
9. Представим, что РНК-зонд имеет последовательность 5'-
ААГЦУ-3'. С какой последовательностью нуклеотидов в
вирусной РНК будет связываться этот зонд?
(А) 5'-ТТЦГА-3'
(Б) 5'-УУЦГА-3'
(В) 5'-АГЦУУ-3'
(Г) 5'-ГГАТЦ-3'
(Д) 3'-ТТЦГА-5'
10. РНК-интерференцию обеспечивает:
(А) мяРНК
(Б) микроРНК
(В) тРНК (Г) рРНК (Д) мРНК

Ответы к тестовым вопросам

1–А 3–В 5–А 7–Б 9–Б
2 – Б 4 – В 6 – Б 8 – Б 10 – Б

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

1. Что такое ген?
2. Что такое геном?
3. Назовите физический размер (п.н.) генома человека. Сколько
генов он содержит?
4. Что такое транскрипция?
5. Что такое процессинг?
6. Что такое трансляция?
7. Что такое альтернативный сплайсинг?
8. В чем отличие энхансера от сайленсера. Какое азотистое
основание содержат эти нуклеотиды?
14. Объясните экзон-интронную структуру гена.
15. Что такое гены «домашнего хозяйства»?
16. В чем отличие между генами и мРНК?
17. Объясните процесс синтеза белка на рибосомах.
18. Какие типы РНК требуются для синтеза белка?
19. Сколько кодонов в генетическом коде?
20. Сколько нуклеотидов генетического кода кодируют одну
аминокислоту?
 37

21. Объясните строение рибосомы и механизм синтеза

полипептида.
22. Что такое РНК-интерференция?
23. Какие типы РНК относятся к коротким интерферирующим
РНК?
24. Каким образом осуществляется инициация и терминация
трансляции?
25. Объясните механизм действия антибиотиков.
26. В чём заключается роль инсуляторов?
27. В чём заключается центральная догма молекулярной
биологии?
28. Как называется цепь ДНК эукариот, непосредственно на
которой происходит синтез про-мРНК?
29. Назовите основные этапы экспрессии гена.
30. Назовите основной фермент транскрипции у эукариот.
31. Что такое ТАТА-бокс? Где он расположен и в чем его
основная функция?
32. Что такое специфические факторы транскрипции?
33. Что такое основные факторы транскрипции?
34. Каким образом осуществляется присоединение строго
определённой аминокислоты к тРНК с соответствующим
антикодоном? К каким последствиям может привести нарушение
этого процесса?
35. Каким образом универсальность генетического кода
доказывает существование эволюции?
36. Что означает такое свойство генетического кода, как
вырожденность?
37. Что означает такое свойство генетического кода, как
неперекрываемость?
38. Что означает такое свойство генетического кода, как
триплетность?
39. Каким образом появляются мутации «сдвига рамки
считывания»? Иллюстрацией какого свойства генетического кода они
являются?
40. Что такое сплайсосома?
41. Что такое антикодон? Какая роль в процессе трансляции
отводится тРНК?
42. Одинакова ли генетическая информация в клетках печени,
почек, мышц и нейронах одного организма? Каким образом
 38

реализуется генетическая информация в этих клетках?

43. Чем обусловлено избирательное действие антибиотиков на
клетки эукариот и прокариот?
44. Назовите средний молекулярный вес АК и нуклеотида.
45. Какую роль выполняют рибосомы в процессе синтеза белка?
46. Что такое дифференциальная экспрессия гена?
47. Какой тип РНК участвует в процессинге мРНК?
48. Что такое рибозимы? Примеры, функция.
49. Какое значение имеет кэпирование 5'-конца мРНК?
50. Какое значение имеет полиаденилирование 3'-конца мРНК?
 39

СПРАВОЧНИК ТЕРМИНОВ
Аллель – набор из двух или более генов, занимающих
одинаковые позиции (локусы) в гомологичных хромосомах.
Анемия – любое состояние, при котором количество
эритроцитов, содержание гемоглобина и гематокрит снижены
относительно нормы; это относится к концентрации переносящего
кислород материала в определённом объёме крови.
Антикодон – триплет неспаренных нуклеотидов в составе тРНК,
узнаёт соответствующий кодон мРНК и спаривается с ним. Так тРНК
переводит последовательность нуклеотидов в последовательность
аминокислот в ходе синтеза полипептидной цепи.
Вырожденность (избыточность) – свойство генетического кода,
кодирование одной и той же аминокислоты несколькими вариантами
нуклеотидных триплетов.
Ген – единица наследственности (участок ДНК), занимающая
специфическое место (локус) в хромосоме, способна к
самовоспроизведению в клеточном цикле.
структурный г. – ген, представленный в виде ряда нуклеоти-
дов, кодирует последовательность аминокислот полипептидной цепи
или РНК.
экспрессия г. – считывание генетического кода с матрицы ДНК
и трансляция полученной информации в виде последовательности
ами- нокислот в полипептидной цепи белка или РНК. Экспрессия г.
проте- кает по схеме: транскрипция (синтез первичного транскрипта
на мат- рице ДНК) → процессинг (образование мРНК) → трансляция
(считы- вание информации с мРНК) → сборка полипептидной цепи
(включе- ние аминокислот в полипептидную цепь на рибосомах) →
посттранс- ляционная модификация – добавление к полипептиду
разных хими- ческих группировок, например, фосфатных
(фосфорилирование, карбоксильных (карбоксилирование) и т.д.).
Генетический код – способ кодирования последовательности
аминокислот в молекуле полипептидной цепи при помощи
последовательности нуклеотидов.
Гистоны – ядерные белки, участвующие в сборке и организации
нитей ДНК в виде хромосом. При этом г. нейтрализуют (за счёт
поло- жительных зарядов аминокислотных остатков) отрицательно
заряженные фосфатные группы ДНК, что делает возможной плотную
упаковку ДНК. Различают 5 типов г.: H1/Н5, H2A, H2B, H3, H4.
 40

ацетилирование г. – реакция нейтрализации положительного

заряда г., что «разрыхляет» связь ДНК с г. и “обнажает” ген для
взаимодействия с белками, инициирующими транскрипцию гена.
NH2-концы г. содержат остатки лизина, обусловливающие
положительный заряд г. и прочное взаимодействие с отрицательно
заряженной молекулой ДНК. В таком состоянии ДНК транскрипция
гена невозможна.
Дифференцировка – проявление различий между клетками
(внешнее выражение детерминации) в виде формирования
морфологических и функциональных признаков специализации
клеток. Применительно к клетке (цитодифференцировка) и в более
узком смысле – созревание данной клетки и превращение её в
высокоспециализированную. Результат д. – специализированная
клетка конкретной морфологии, выполняющая определённую
функцию (состояние терминальной д.).
ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) – полимер, состоящий
из повторяющихся блоков – нуклеотидов. Связи между
нуклеотидами образуются за счёт дезоксирибозы и фосфатной
группы (фосфодиэфирные связи). Макромолекула ДНК представляет
собой «двойную спираль», образованную двумя цепями нуклеотидов,
ориентированных азотистыми основаниями друг к другу. ДНК
обеспечивает хранение, передачу и реализацию генетической
информации.
антисмысловая (матричная) цепь ДНК – цепь молекулы ДНК,
комплементарная цепи информационной РНК (мРНК), то есть
транскрибируемая цепь. Служит матрицей для синтеза мРНК.
метилирование ДНК – присоединение метильной группы к
цитозину ДНК с участием метилазы (ДНК-метилтрансферазы), что
приводит к изменению конформации молекулы ДНК без нарушения
нуклеотидной последовательности. В результате блокируется
транскрипция мРНК.
репарация ДНК – исправление повреждений молекулы ДНК,
восстанавливающее её первоначальную структуру. Репарация может
осуществляться с участием ферментов (ДНК-геликаза; ДНК-
полимераза; ДНК-лигаза).
смысловая цепь ДНК – цепь молекулы ДНК, последователь-
ность оснований которой идентична иРНК, образующейся в
результате транскрипции данного участка ДНК; кодирует
информацию о первичной структуре белка и РНК (тРНК, рРНК,
 41

интерферирующей РНК).
фланкирующая последовательность (англ. flanking – фланки-
рующий) ДНК – любая последовательность нуклеотидов,
расположен- ная рядом (на фланге) с другой последовательностью. К
5'- и 3'-концу основной полинуклеотидной цепи прилегают 5'- и 3'-
ф.п. ДНК, соот- ветственно.
Инициация – серия молекулярных событий, приводящих к
запуску экспрессии генов.
Интрон – некодирующая последовательность между экзонами.
После синтеза РНК на ДНК-матрице (транскрипция)
последовательности РНК, комплементарные последовательностям
интронов, удаляются при помощи специальных ферментов, а
оставшиеся последовательности сближаются (сплайсинг).
Кодон – последовательность из трёх смежных нуклеотидов
(трип- лет), кодирующая какую-либо аминокислоту или терминацию
трансляции. Последовательность кодонов определяет
последовательность аминокислот в полипептидной цепи
кодируемого белка.
Кэпирование – первый этап процессинга (созревания) РНК. К.
происходит во время синтеза молекулы пре-мРНК в ядре, когда
транскрипт достигает длины 25–30 нуклеотидов. В ходе к.
происходит присоединение к 5'-концу транскрипта 7-метилгуанозина
и метилирование остатков рибозы двух первых нуклеотидов. К.
защищает 5'-конец первичного транскрипта от действия рибонуклеаз,
специфически разрезающих фосфодиэфирные связи в направлении
5”-3'. К. осуществляется тремя ферментами: РНК-трифосфатазой,
гуанилтрансферазой и гуанил-7-метилтрансферазой.
Мутация — стойкое изменение генетического материала,
происходящее под влиянием внешней или внутренней среды. В
основном м. возникают в ходе репликации, репарации,
рекомбинации ДНК. Спонтанные м. возникают самопроизвольно на
протяжении всей жизни оргаизма. Индуцированные м. –
наследуемые изменения генома, возникающие в результате
мутагенных воздействий.
Нуклеотид – 1. Соединение пуринового или пиримидинового ос-
нования, сахара (обычно рибозы или дезоксирибозы) и фосфатной
группы. 2. В широком смысле любое соединение, содержащее
гетероцикл, связанный с фосфорилированной молекулой сахара с
помощью N-гликозидной связи. Нуклеотиды – фосфатные эфиры
 42

нуклеозидов.
Нуклеозид – соединение сахара (обычно рибозы или
дезоксирибозы) с пуриновым или пиримидиновым основанием с
помощью N-гликозидной связи.
Полиаденилирование – ферментативное присоединение
остатков аденина с образованием “полиаденильного хвоста” к 3'-
концу мРНК во время её процессинга перед выходом в цитоплазму;
мРНК гистонов не претерпевают п.
Полинуклеотид – цепь из нуклеотидов, в которой ковалентные
фосфодиэфирные связи соединяют 5' атом углерода одного
нуклеотида с 3' атомом углерода следующего нуклеотида цепи.
Последовательность нуклеотидов в цепи кодирует наследственную
информацию.
Промотор – специфический сайт молекулы ДНК, с которого
начинается синтез полимера. П. определяет место прикрепления
РНК-полимеразы и интенсивность (частоту) транскрипции мРНК.
Процессинг (посттранскрипционные модификации РНК) – сово-
купность процессов превращения первичного транскрипта РНК в
зрелую РНК.
Репрессия – подавление активности генов, чаще всего путём
бло- кирования их транскрипции.
Рибозим (от «рибонуклеиновая кислота» и «энзим») – молекула
РНК, обладающая каталитической активностью. Р. способны
расщеплять самих себя или другие молекулы РНК; формирование
пептидной связи при образовании молекулы белка происходит при
помощи рРНК рибосомы; малые ядерные РНК (мяРНК) участвуют в
сплайсинге (созревании РНК).
РНК (рибонуклеиновая кислота) – макромолекула, состоящая
из остатков рибонуклеозидов, соединённых фосфатом в
направлении от 3'-гидроксила одного остатка к 5'-гидроксилу
следующего.
РНК-полимераза – ДНК-зависимая РНК-полимераза,
осуществляющие синтез молекул РНК на матрице ДНК, то есть
осуществляющая транскрипцию.
Сайленсер – участок ДНК, с которым связываются молекулы
реп- рессоры, что приводит к снижению или к полному подавлению
синте- за РНК РНК-полимеразой.
Сайт – участок молекулы ДНК или белка.
Сплайсинг – один из этапов процессинга пре-мРНК, в
 43

результате которого происходит удаление из молекулы РНК

интронов и сближение (соединение) оставшихся участков, несущих
генетическую информацию (экзонов), в одну молекулу.
Осуществляется с помощью мяРНК.
TATA-бокс – специфическая последовательность нуклеотидов
(цис-регуляторный элемент) 5'-TATAAA-3', присутствующая в
промоторных областях генов эукариот; участвует в инициации
транскрипции, обеспечивая ориентацию РНК-полимеразы
относительно промотора. Функционально эквивалентен боксу
Прибнова у прокариот.
Терминация – остановка синтеза полипептидной цепи при
достижении терминирующего кодона в мРНК; также т. завершение
синтеза РНК в процессе транскрипции или ДНК в процессе
репликации.
Транскрипция – синтез молекул мРНК на матричной ДНК,
первый этап реализации генетической информации в клетке. При
транскрипции РНК-полимераза II присоединяется к промотору —
специфическому сайту молекулы ДНК, с которого начинается синтез
полимера.
Транскрипт – продукт транскрипции, т.е. РНК,
синтезированная на матрице ДНК и комплементарная одной из его
нитей.
Транслокон (транслокатор) – белковый комплекс,
участвующий в переносе (транслокации) синтезируемой
полипептидной цепи в эндоплазматическую сеть, а также в переносе
полипептидов из эндоплазматической сети в цитоплазму с участием
гуанозинтрифосфата (ГТФ).
Трансляция – процесс синтеза полипептида, определяемый
матричной РНК.
Транспозон – мобильная последовательность ДНК, способная к
перемещениям (транспозиции) внутри генома. Т., встраиваясь в
геном, могут вызывать мутации и хромосомные перестройки. Т.
активно участвуют в процессах переноса лекарственной
устойчивости среди микроорганизмов, в рекомбинации, в обмене
генетическим материалом между различными видами. Основу
структуры т. составляют две повторяющиеся последовательности
ДНК, необходимые для транспозиции, между которыми находятся
белок-кодирующие гены.
Триплет – последовательность из трёх нуклеотидов в молекуле
 44

нуклеиновой кислоты, кодирующая одну аминокислоту.

Факторы транскрипции – белки, контролирующие
транскрипцию. Определяющая черта ф.т. – наличие ДНК-
связывающих доменов, которые взаимодействуют с участками ДНК,
расположенными в регуляторных областях регулируемых генов.
Специфически связываясь с участками ДНК, ф.т. повышают
(активаторы) или подавляют (репрессоры) синтез мРНК, регулируя
константу связывания РНК-полимеразы с ДНК.
Экзон – последовательность нуклеотидов, кодирующих
молекулу информационной РНК, определяющая последовательность
аминокис- лот в полипептиде.
Энхансер – участок ДНК, способный связываться с факторами
транскрипции и увеличивать уровень транскрипции гена или группы
генов. Благодаря структуре хроматинового комплекса геометрически
э. расположен рядом с промотором и генами. Э. действует на
промотор опосредованно через белки-активаторы. Э. активируют
полимеразу II и общие факторы транскрипции, что ведет к
транскрибированию генов.

ЛИТЕРАТУРА

Основная
1. Биология. Ярыгин В.Н. «ГЭОТАР-Медиа», 2011.- Т.1 – 736с.;
Т.2- 560с.
2. Биология. Пехов А.П. «ГЭОТАР-Медиа», 2011.- 656c.
3. Молекулярная биология клетки. Учебное пособие под ред. Р.Р.
Исламова, КГМУ, 2015.- 38с.

Дополнительная
1. Молекулярная биология клетки. Б. Альбертс, Д. Брей, Дж.
Льюис, М. Рэфф, К. Робертс, Дж. Уотсон. «Регулярная и хаотическая
динамика. Институт компьютерных исследований», 2013.- Т.1 –
808с., Т.2 – 992с., Т.3 – 1052с.
2. Биология индивидуального развития. Л.И. Корочкин.
Издательство Московского университета, 2002.- 264с.
3. Геном, клонирование, происхождение человека. Л.И.
Корочкин. Изд. «Век-2», 2004.-224с
 45

Оглавление стр.
Компетенции...........................................................................................
3
Теоретический
обзор...............................................................................5
Структура
гена.........................................................................................5
Экспрессия
гена..................................................................................11
Деградация
мРНК.................................................................................20
Практические
навыки...........................................................................23
Типовые тестовые
вопросы................................................................35
Вопросы для
самоконтроля..................................................................37
Справочник
терминов.........................................................................39
46