№1 Медицинская микробиология, ее задачи, методы, разделы. №3 История кафедры микробиологии Сибирского медицинского Университета.

Микробиология – наука, предметом изучения которой являются микроскопические История кафедры

существа, называемые микроорганизмами, их биологические признаки,
систематика, экология, взаимоотношения с другими организмами.
ЗАДАЧИ медицинской микробиологии:
 установление этиологической (причинной) роли микроорганизмов в
норме и патологии.
 разработка методов диагностики, специфической профилактики и
лечения инфекционных заболеваний, индикации (выявления) и индефикации
(определения) возбудителей.
 бактериологический и вирусологический контроль окружающей
среды, продуктов питания, соблюдения режима стерилизации  и надзор за
источниками инфекции в лечебных и детских учреждениях.
 контроль за чувствительностью микроорганизмов к антибиотикам и
другим лечебным препаратам, состоянием микробиоценозов (микрофлорой)
поверхностей и полостей тела человека. (1.изучение микроорганизмов; 2.патогенез
действия микроорганизмов; 3.происхождение микроорганизмов)
Основные МЕТОДЫ микробиологии:
 микроскопический (фазово-контрастная, темнопольная,
люминисцентная, электронная, окраска по Романовскому-Гимзе) — с
использованием приборов для микроскопии. Определяет форму, размеры,
взаиморасположение микроорганизмов, их структуру, способность окрашиваться
определенными красителями.
 микробиологический (бактериологический, микологический,
вирусологический) — выделение чистой культуры и ее идентификация.
 серологический (сыворотка)
 аллергологический
 биологический — заражение лабораторных животных с
воспроизведением инфекционного процесса на чувствительных моделях
(биопроба).
 хемотоксонамический
 молекулярно-биологический ( ПЦР, ЛЦР, саузернблоттинг и
нозенблоттинг, ДНК-ДНК-гибридизация, риботипирование, рестрикционный
анализ).
В 1919 году на базе бактериологического
института была открыта первая в Сибири кафедра микробиологии, которую
возглавил директор института профессор П.В. Бутягин. Приоритетным
направлением в деятельности кафедры явилась подготовка врачей —бактериологов
для нужд здравоохранения. Научные исследования этого периода касались
вопросов общей микробиологии, эпидемиологии, изучения специфического
лечения и профилактики инфекционных заболеваний.
П. В. Бутягин создал первую школу микробиологов в Сибири.
После отъезда П.В. Бутягина в Новосибирск в 1931г., где он стал заведовать
кафедрой микробиологии в Новосибирском медицинском институте, руководство
кафедрой принял профессор И.Е. Ломакин. В этот период сотрудники кафедры
изучали вопросы лабораторной диагностики брюшного тифа, серотерапии
бешенства, фаготерапии и фагопрофилактики инфекционных заболеваний.
В 1937 году заведующим кафедрой был назначенС.П. Карпов, который работал в
этой должности в течение 40 лет. В эти годы на кафедре был создан музей живых
культур, разработаны учебные пособия, организован студенческий научный
кружок
С 1976 по 1986 г. кафедрой микробиологии заведовал академикН.В. Васильев.
В 1986 году — руководство кафедрой перешло к профессору Ю.В. Федорову.
В 1998 году заведующим кафедрой микробиологии избран профессор Е.П.
Красноженов.
В это время развернуты серии научных работ по определению участия тучных
клеток в процессах инфекции и иммунитета, состоянию колонизационной
резистентности слизистых оболочек и кожи при различных патологических
процессах.

№2 Основные этапы развития микробиологии. Работы Л.Пастера и Р.Коха и их

значение для развития микробиологии.
Историю развития микробиологии можно разделить на 4 этапов
морфологический, физиологический, иммунологический и молекулярно-
генетический.
Открытие мира микроорганизмов связано с именем Антония Левенгука (1632-
1723). А. Левенгук создал свой микроскоп, дающий увеличение до 300 раз, что
позволило ему обнаружить, описать и зарисовать основные формы бактерий и
клеток. Этот период назван – морфологическим, так как исследования в области
микробиологии сводились к описанию форм бактерий.
Пастер сделал ряд выдающихся открытий. За короткий период с 1857 по 1885 г. он
Второй период развития микробиологии физиологический связан с именами
ученых Луи Пастера (1822-1895) и Роберта Коха (1843-1910). Л. Пастер -установил,
что молочнокислое и маслянокислое брожение, процесс разложения белковых
продуктов есть результат жизнедеятельности микроорганизмов. -Он доказал, что
микроорганизмы являются возбудителями ряда заболеваний, -разработал методы
профилактики инфекционных заболеваний путем вакцинации, которые успешно
используются до настоящего времени. Л. Пастер разработал не только принципы
вакцинации, но и способ приготовления вакцин.
Роберт Кох. Физиологический период в развитии микробиологии связан также с
именем немецкого ученого Роберта Коха, которому принадлежит разработка
методов получения чистых культур бактерий, окраски бактерий при
микроскопии, микрофотографии
Он разработал и, в дальнейшем, сформулировал триаду Коха:
1) предполагаемый микроорганизм - возбудитель данного заболевания не
может быть выделен при других инфекционных заболеваниях;
2) микроорганизм должен быть выделен в чистой культуре;
3) чистая культура возбудителя должна вызывать у экспериментальных
животных специфическую болезнь.
Благодаря методам, предложенным Р. Кохом, были изучены обмен веществ,
дыхание, ферментативная активность, рост и размножение, культивирование на
искусственных питательных средах, экзотоксины бактерий.

Третий период микробиологии ознаменовался созданием нового направления в

микробиологии - иммунологией. Русский ученый И.И. Мечников (1845-1916) и
немецкий ученый П. Эрлих (1854-1915) считаются основоположниками
иммунологии. И.И. Мечников разработал фагоцитарную теорию иммунитета и
впервые ввел понятие «Клеточный иммунитет». И.И. Мечников рассматривал
фагоцитоз, как основной фактор защиты организма человека от возбудителей
инфекционных заболеваний.

Молекулярно-генетический этап развития микробиологии начинается с 40-50 годов

ХХ века. Огромные успехи в области молекулярной биологии, генетики,
биотехнологии, биохимии позволили расшифровать геном бактерий и вирусов,
создать рекомбинантные штаммы микроорганизмов и использовать их для
получения разнообразных биологически активных веществ (антибиотиков,
гормонов, ферментов, витаминов)
№4 Микробиологическая лаборатория и правила работы в ней.
лаборатории подразделяются на 3 категории:
1) базовые (общего типа); 2) режимные; 3) лаборатории особого режима.
Принципы организации и оборудования
микробиологической лаборатории, правила работы в ней
Микробиологическая лаборатория в зависимости от ее профиля выполняет
бактериологические, вирусологические и иммунологические исследования. В
соответствии с назначением, лаборатория должна быть оснащена соответствующей
аппаратурой и помещением. Лаборатория должна располагаться в отдельном
здании или изолированной его части, оборудована водопроводом, канализацией,
отоплением, горячим водоснабжением и иметь отдельный вход.
Микробиологическая лаборатория общего назначения должна иметь следующие
комнаты.
1. Лабораторные
2. Автоклавную
3. Средоварочную
4. Бактериологическую с боксами
5. Моечную
6. Виварий
7. Подсобные помещения (душ, склад, гардероб, туалет)
Лабораторная комната должна быть светлой, просторной, стены окрашены
масляной краской или облицованы керамической плиткой. В лабораторной комнате
необходима холодная и горячая вода, раковина, дезинфицирующий раствор для
мытья и обработки рук, аптечка для оказания первой медицинской помощи. В
комнате должен находится холодильник, термостат, центрифуги, микроскопы,
лабораторная мебель, рабочие столы, емкость для сбора инфицированной посуды и
материала.
Бактериологическая комната с боксами. Для работы в стерильных условиях в
бактериологической комнате должны быть оборудованы боксы с предбоксниками,
с системой приточно-вытяжной вентиляции и бактерицидными лампами. В боксе
должен находится стол с необходимыми принадлежностями для проведения
стерильных посевов (горелка, стерильные пипетки, пробирки, чашки Петри и
пробирки с питательной средой, бактериологическая петля и др.). Поверхность
рабочего стола должна быть водонепроницаема, устойчива к дезинфектантам,
кислотам, щелочам, органическим растворителям и умеренному нагреванию.
Стены, потолок и пол комнаты должны быть моющимися, непроницаемыми для
жидкости, устойчивы к дезинфицирующим растворам. В настоящее время
используют для проведения стерильных работ ламинированные боксы, где
оборудована подача стерильного воздуха под давлением.
Автоклавная используется для стерилизации посуды, питательных сред, одежды, а
также для обеззараживания лабораторных отходов. Автоклавная должна быть
оснащена следующим оборудованием: автоклавы, печи Пастера, стерилизаторы
различной емкости, шкафы для стерильной посуды. К работе на автоклавах
допускаются лица прошедшие специальную подготовку.
Виварий предназначен для проведения исследований на животных. Необходимо
иметь два помещения вивария – одно для содержания чистых животных и второе
для лабораторных животных, с которыми проводятся исследования. Вход в
виварий должен быть ограничен специально отобранным персоналом. Клетки,
кормушки для животных должны быть изготовлены из материала устойчивого к
дезинфицирующим растворам.
Моечная комната предназначена для мойки лабораторной посуды и должна быть
оборудована холодным и горячим водоснабжением, раковиной, а также шкафами
для хранения и складирования пипеток, колб, чашек Петри и другой посуды.
Средоварочная комната располагается рядом с моечной и стерилизационной
комнатами и предназначена для приготовления и разлива питательных сред.
Комната оборудуется газовой или электрической плитой, раковиной с подведенной
холодной и горячей водой. В ней необходимо иметь дистиллятор, холодильник для
хранения питательных сред и биологических компонентов, бокс для приготовления
и разлива питательных сред и растворов в стерильных условиях, шкафы для
хранения сухих питательных сред, лабораторной посуды и химических реактивов.
Правила работы и поведения
в бактериологической лаборатории общего назначения
1. В помещение лаборатории нельзя входить без специальной одежды –
халата, шапочки, сменной обуви.
2. Запрещается в помещении прием и хранение пищи. Курение.
3. Нельзя использовать лабораторную спец. одежду за пределами
лаборатории.
4. Зараженный материал подлежит уничтожению, инструменты и
поверхность рабочего стола, дезинфицируют после окончания работ.
5. После работы с культурой, животными, перед уходом из лаборатории
необходимо вымыть руки.
6. Штаммы микроорганизмов, заразный материал должны хранится в сейфе
или холодильнике закрытыми и опечатанными.
7. Необходимо проводить обеззараживания предметов, одежды, стола,
комнаты, в случае если разбился сосуд с инфицированным материалом или
произошел неосторожный разлив заразного материала.
8. Сотрудники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех
инфекционных заболеваний, с возбудителями которых возможна работа в
лаборатории.
9. В лаборатории должна быть инструкция по технике безопасности,
которую персонал должен знать и строго выполнять. Необходимо обязательно
немедленно сообщить руководителю лаборатории обо всех аварийных ситуациях,
создающих угрозу биологической безопасности и проводить все мероприятия для
предотвращения последствий.
10. Каждая бактериологическая лаборатория должна иметь лицензию на
право работы с возбудителями.
№5 Техника приготовления бактериального мазка и простые методы его окраски.
5Окраска по Граму. Методика:
 окрасить мазок генцианвиолетом ( 2 минуты,через фильтровальную
бумагу);
 бумагу удалить, оставшуюся краску слить;
 окрасить мазок раствором Люголя (1 минута);
 раствор Люголя слить и нанести несколько капель чистого 96%
спирта (30-40 секунд, осторожно покачивать стекло);
 тщательно смыть спирт водой;
 окрасить водным фуксином (2 минуты);
 промыть водой и высушить.
Грам-положительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, Грам-
отрицательные – вкрасный
Окраска кислотоустойчивых бактерий. Кислотоустойчивые микроорганизмы
обладают выраженной к неорганическим кислотам, спиртам, щелочам. Это связано
с наличием в клеточной стенке и мембране сравнительно большого количества
липидов. Бактерии этой группы очень плохо окрашиваются обычными способами,
поэтому используют концентрированные растворы с подогревом. При
последующей кратковременной обработке кислотой клетки, воспринявшие краску,
не обесцвечиваются. Это позволяет отличить кислотоустойчивые бактерии. Их
окрашивают по методу Циля-Нильсена, который разработан с учетом все
указанных особенностей
Окраска по Цилю-Нильсену. Методика:
 нанести несколько капель карболового фуксина на фиксированный
мазок. Покрытый фильтровальной бумагой, и подогреть до появления паров (3-5
минут);
 бумагу снять, мазок охладить и обесцветить 3% серной кислотой или
3% солянокислым спиртом (3-4 секунды);
 тщательно промыть водой;
 окрасить дефферовской синькой (3-5 минут);
 промыть водой и высушить.
Окаска спор. Зрелая спора с трудом поддается окрашиванию из-за низкой
проницаемости стенки. При окраске по Граму спорообразующей культуры краска
воспринимается только вегетативной частью микроба, а спора остается бесцветной.
Проницаемость ее клетки резко увеличивается после обработки горячей соляной
кислотой или при испольщовании концентрированного раствора краски в
подогревом. Восприняв краску, спора при последующей обработке кислотой не
обесцвечивается, в то время как вегетативные клетки немедленно отдают краску.
Метод Ожешко.
 нанести несколько капель 0,5% соляной кислоты на
нефиксированный мазок и нагреть до появления паров (2-3 минуты);
 слить кислоту, промыть водой, высушить;
 зафиксировать в пламени;
 окрасить по методу Циля-Нильсена (при этом споры окрашиваются в
красный цвет, а вегетативные формы – в синий). Часто для окраски спор
используют только метод Циля-Нильсена.
Окраска включения волютина (по Нейссеру).
 Окрасить мазок уксуснокислой синькой Нейссера (2-3 минуты);
 Промыть;
 Окрасить раствором Люголя (30 секунд);
 Слить раствор Люголя и окрасить везувином (1 минута)
 Промыть препарат и высушить
Цитоплазма клетки, имеющая кислую реакцию, принимает желтый цвет. Зерна
волютина – темно-синие, почти черные.
Окраска по Бурри (обнаружение капсул).
Для обнаружения капсул используют негативную окраску, т.к. окрашивается
пространство между бактериями. Таким образом, образуется темное поле с
неокрашенными бактериями.
 Смешать на предметном стелке немного капсульной культуры и
каплю разведенной (1:9) туши;
 Высушить на воздухе и бактериоскопировать.
Модификация по Бурри-Гинсу включает создание фона краской конгорот,
последующую фиксацию в 5% растворе соляной кислоты, дополнительную окраску
водным фуксином. В результате – общий фон темный, капсулы бесцветны, сами
бактерии – красные.
№6 Устройство светового микроскопа и техника иммерсионной микроскопии. №8 Классификация прокариотов. Основные таксономические единицы. Понятие о
Светлопольная микроскопия виде, варианте, штамме, клоне, квазивиде
Светопольная микроскопия осуществляется с помощью обычного светового Классификация. Классификация осуществляется по иерархической схеме.
микроскопа, основной частью которого является объектив. На оправе объективов Основной единицей является чистая культура выделенной бактерии – «штамм».
обозначается увеличение: 8, 10, 20, 40, 90. При исследовании микробов Штаммы объединяются в виды, виды в роды, а роды в семейства. Основой для
применяется иммерсионная система (объектив). Иммерсионный объектив классификации служит адекватное описание штаммов, в соответствии с которым и
погружают в каплю кедрового масла, нанесенного на препарат. Кедровое масло проводят сравнение и разграничение рассматриваемых единиц.
имеет такой же коэффициент преломления, как и стекло, и этим достигается Следует различать два вида классификаций: филогенетические, или
наименьшее рассеивание световых лучей «естественные», с одной стороны, и искусственные-с другой. Построение
.Ход лучей в иммерсионном объективе. естественной классификации – конечная цель таксономии бактерий, которая
Изображение, получаемое в объективе, увеличивает окуляр, состоящий из двух состоит в том, чтобы объединить родственные формы, связанные общностью
линз. В отечественных микроскопах применяются окуляры с увеличением: 7, 10, происхождения, и на этой основе создать филогенетическое древо бактерий.
15 Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения Несомненно, когда-нибудь это удастся сделать, исходя из химических признаков –
объектива на увеличение окуляра. В микробиологии обычно используются таких, как последовательность аминокислот в функционально сходных
увеличения в 900-1000 раз. Качество микроскопа зависит не от степени ферментных белках или последовательность нуклеотидов в консервативных
увеличения, а от его разрешающей способности. нуклеиновых кислотах, например в рибосомных РНК.
Схема сложного светового микроскопа для наблюдения в светлом поле, Искусственная классификация ставит перед собой более скромные цели, чем
отрегулированного для освещения по Келеру (Стейниер Р. и др., 1979). филогенетическая. Она довольствуется объединением организмов в отдельные
Под этим надо понимать наименьшее расстояние между двумя точками препарата, группы на основе их сходства и используется для идентификации и распознавания
при котором они еще четко различимы под микроскопом. Разрешающая (определения) организмов. Искусственная система, прежде всего, рассчитана на
способность обычных световых микроскопов с иммерсионной системой равна 0,2 использование ее в качестве ключа для определения.
мкм. Вид (лат. species) – таксономическая, систематическая единица, группа особей с
общими морфофизиологическими, биохимическими и поведенческими
№7 Принцип устройства темнопольного, фазово-контрастного, люминесцентного, признаками, способная к взаимному скрещиванию, дающему в ряду поколений
электронного микроскопов и их использование в микробиологии. плодовитое потомство, закономерно распространённая в пределах
Темнопольная микроскопия определённого ареала и сходно изменяющаяся под влиянием факторов внешней
Микроскопия в темном поле зрения основана на следующем принципе Лучи среды. Вид – реально существующая генетически неделимая единица живого мира,
освещают объект не снизу, а сбоку и не попадают в глаза наблюдателя, поле зрения основная структурная единица в системе организмов.
остается темным, а объект на его фоне оказывается светящимся. Это достигается с Штамм (от нем. Stammen, буквально – происходить) – чистая
помощью специального конденсора (параболоид), или обычного конденсора, культура вирусов, бактерий, других микроорганизмов или культура клеток,
прикрытого в центре кружком черной бумаги. изолированная в определённое время и определенном месте. Поскольку
многие микроорганизмы размножаются митозом (делением), без участия полового
Рис. 15. Схема микроскопа для наблюдения в темном поле (Стейниер Р. и др., процесса, по существу, виды у таких микроорганизмов состоят
1979). изклональных линий, генетически и морфологически идентичных исходной клетке.
Препараты для темнопольной микроскопии готовят по типу раздавленной капли. Штамм не является таксономической категорией, наинизшим таксоном у всех
Исследуемый материал (бактериальная культура в физиологическом растворе) организмов является вид, один и тот же штамм не может быть выделен второй раз
наносят на предметное стекло, которое покрывают покровным. Капля материала из того же источника в другое время.
заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, образуя Штамм – популяция одного вида выделенная из какого-либо одного источника.
ровный слой. Темнопольная микроскопия используется для изучения живых Клонирование, в биологии – метод получения нескольких генетически
неокрашенных микроорганизмов. идентичных организмов путем бесполого (в том числе вегетативного)
Темнопольная микроскопия размножения.
Микроскопия в темном поле зрения основана на следующем принципе (рис. 15). Клон – потомство одной клетки.
Лучи освещают объект не снизу, а сбоку и не попадают в глаза наблюдателя, поле
зрения остается темным, а объект на его фоне оказывается светящимся. Это №9. Основные отличия эукариотических и прокариотических клеток.
достигается с помощью специального конденсора (параболоид), или обычного
конденсора, прикрытого в центре кружком черной бумаги. 1) В клетках эукариот хроматин защищен мембраной, в то время как у прокариот
он растворен в цитоплазме.
Препараты для темнопольной микроскопии готовят по типу раздавленной капли. 2) В клетках эукариот рибосомы имеют бОльший размер, чем в клетках прокариот.
Исследуемый материал (бактериальная культура в физиологическом растворе) 3) Эукариоты имеют линейную ДНК. Прокариоты, в большинстве своём,
наносят на предметное стекло, которое покрывают покровным. Капля материала кольцевую (замкнутую).
заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, образуя 4) ДНК эукариот во время делений клетки накручивается на гистоны. У прокариот
ровный слой. Темнопольная микроскопия используется для изучения живых гистоны отсутствуют.
неокрашенных микроорганизмов. 5) Эукариоты делятся митозом, мейозом (кроме, например,
Фазовоконтрастная микроскопия простейших).Прокариоты, в основном, делятся простым делением пополам.
При прохождении пучка света через неокрашенный объект изменяется лишь фаза 6) Клетки эукариот богаты многими органеллами (одних митохондрий может быть
колебания световой волны, что не воспринимается человеческим глазом. Чтобы до 50000), в том время как прокариоты многих органелл не имеют (митохондрии,
изображение стало контрастным необходимо превратить фазовые изменения комплекс Гольджи, эндоплазматическая сеть и пр.)
световой волны в видимые амплитудные. Это достигается с помощью 7) Для эукариотических клеток характерны процессы эндоцитоза, фагоцитоза и
фазовоконтрастного конденсора и фазового объектива пиноцитоза.
8) У эукариотических организмов имеются самые разнообразные клеточные стенки
Фазовоконтрастный конденсор представляет собой обычный объектив с (например, у животных её вообще нет). У большинства прокариот клеточная
револьвером и набором кольцевых диафрагм для каждого объектива. Фазовый мембрана состоит преимущественно из муреина.
объектив снабжен фазовой пластинкой, которую получают нанесением солей 9) По типу питания эукариоты могут быть самые разные. Прокариоты только
редкоземельных элементов на объектив. Изображение кольцевой диафрагмы хемотрофы, фототрофы и паразиты.
совпадает с кольцом фазовой пластинки соответствующего объектива. 10) Эукариотические клетки имеют бОльшие размеры, чем прокариотические.
Фазовоконтрастная микроскопия значительно повышает контрастность объекта и
используется для изучения нативных препаратов.
Люминесцентная микроскопия
Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ под
влиянием падающего на них света испускать лучи с другой (обычно большей)
длиной волны (флюоресцировать). Такие вещества называют флюорохромами
(акридиновый желтый, ФИТЦ, родамин и др.). Объект, обработанный
флюорохромом, при освещении ультрафиолетовыми лучами приобретает яркий
цвет в темном поле зрения.
Основной частью люминесцентного микроскопа является осветитель, имеющий
лампу ультрафиолетового цвета и систему фильтров к нему (рис. 17). Очень важно
использование нефлюоресцентного иммерсионного масла.

Люминесцентная микроскопия в практической микробиологии используется для

индикации и идентификации возбудителей инфекционных заболеваний с помощью
реакции иммунофлюоресценции.
Электронная микроскопия
Возможности оптических микроскопов ограничены слишком большойдлиной
волны видимого света (6000 А). Объекты, размеры которых меньше этой величины,
находятся за пределами разрешающей способности светового микроскопа. В
электронном микроскопе вместо световых волн используются электронные лучи,
обладающие чрезвычайно малой длиной волны и высокой разрешающей
способностью (рис. 18).
В качестве источника электронных лучей применяют электронную пушку, основой
которой служит вольфрамовая нить, нагретая электрическим током. Между
вольфрамовой нитью и анодом на пути электронов находится электрическое поле
высокого напряжения. Электронный поток вызывает свечение
фосфоресцирующего экрана. Проходя через объект, части которого имеют
различную толщину, электроны будут соответственно задерживаться, что
проявится на экране участками затемнения. Объект приобретает контрастность.
Препараты для электронной микроскопии готовят на тончайших коллоидных
пленках, исследую объекты после их высушивания («нативные препараты»),
напыления при помощи тяжелых металлов, ультратонких срезов метода реплик и
др.
С помощью электронной микроскопии можно обнаружить самые мелкие
структуры, получит увеличение до 200 000 и увидеть объекты размером 0,002 мкм.
№10 Морфология и анатомия бактерий. Постоянные и непостоянные компоненты
бактериальной клетки.
По форме клеток бактерии разделяются: на шаровидные - кокки, палочковидные
или цилиндрические - собственно бактерии и извитые - вибрионы спириллы и
спирохеты. Между этими группами имеются переходные формы, например, кокко-
бактерии.
Кроме этих основных групп в природе встречаются и другие формы бактерий:
нитевидные, микобактерии (палочковидная ветвящаяся форма).
Я дро у прокариот, которое часто называют нуклеоидом, имеет фибриальную
структуру и не отграниченно от цитоплазмы ядерной мембраной. В клетках
прокариот отсутствуют митохондрии, хлоропласты, пластинчатый комплекс
Гольджи. Окислительно-восстановительные ферменты локализованы в
производных образованиях цитоплазматической мембраны — мезосомах.
У прокариот отсутствует митоз. Они размножаются путем бинарного деления и
существуют в гаплоидном состоянии, вследствии чего диплоидность эукариот,
имеющая огромное значение в их эволюции, не играет никакой роли в эволюции
прокариот. У прокариот отсутствует также клеточный центр. Для них нетипичны
внутриклеточные перемещения цитоплазмы и амебовидное движение.
По форме клеток собственно бактерии подразделяются на шаровидные,
палочковидные и извитые.
Шаровидные бактерии — кокки имеют правильную сферическую или
эллипсовидную форму. Одни из них располагаются беспорядочно (микроккоки),
другие парами (диплококкки), третьи — цепочками из трех и более кокков
(стрептококки) или восьми (сарцины) кокков. Это связано с особенностями их
деления. В том случае,  если они делятся в разных плоскостях, то образуются
скопления, напоминающие виноградную гроздь (стафилококки). Деление в двух
взаимоперпендикулярных плоскостях приводит к образованию тетракокков, в трех
— сарцины. При делении в одной плоскости дочерние клетки могут не отходить
друг от друга, образуя диплококки и цепочки кокков — стрептококки. Патогенные
бактерии чаще всего представлены стафилококками, стрептококками, реже
микрококками.
Палочковидные бактерии, имеющие цилиндрическую форму, различаются по
размерам, форме клеток и их концов, а также по расположению. Большинство из
них имеет длину, превышающую поперечник. Другие представляют собой крупные
палочки с утолщениями на концах либо с обрубленными или заостренными
концами. Они могут беспорядочно располагаться в виде одиночных клеток, парами
— диплобактерии, в виде цепочек — стрептобактерии. Патогенные виды относятся
ко всем перечисленным формам палочковидных бактерий.
Извитые формы бактерий представлены изогнутыми палочками, изгибы которых
имеют один (холерный вибрион) или несколько оборотов (кампилобактерии)
спирали. Извитые формы — вибрионы и спириллы, а также спирохеты. Вибрионы
имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы — извитую форму с несколькими
спиральными завитками.
Ультраструктура бактериальной клетки отражает уникальность ее организации. С
помощью электронно-микроскопического исследования ультратонких срезов
бактерий, цитохим-их и других методов исследования можно установить структуру
определенных органелл, определить их хим-ий состав и функциональную роль,
которую они играют в процессе жизнедеят-ти клетки.
Структура бактериальной клетки. Структурные элементы бактериальной клетки
можно условно разделить на: а) постоянные структурные элементы - имеются у
каждого вида бактерий, в течение всей жизни бактерии; это клеточная стенка,
цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид; б) непостоянные
структурные элементы, которые способны образовывать не все виды бактерий, а те
бактерии, которые образуют их, могут терять их и вновь приобретать в
зависимости от условий существования. Это капсула, включения, пили, споры,
жгутики.
Структурные элементы бактериальной клетки:
 ПОСТОЯННЫЕ НЕПОСТОЯННЫЕ
клет.стенка капсула
цитоплазматич. мембрана жгутики
цитоплазма  споры
рибосомы включения
мезосомы  пили (ворсинки)
нуклеоид плазмиды
№11 Цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, рибосомы, мезосомы, генофор,
их строение, функции и значение для бактериальной клетки.
1. Цитоплазматическая мембрана
2. Цитоплазма бактериальной клетки ограничена от клеточной стенки тонкой
полупроницаемой структурой толщиной 5-10 нм, называемой цитоплазматической
мембраной (ЦПМ). ЦПМ состоит из двойного слоя фосфолипидов, пронизанных
белковыми молекулами (рис. 6).
3. С ЦПМ связаны многие ферменты и белки, участвующие в транслокации
питательных веществ, а также ферменты и переносчики электронов конечных
стадий биологического окисления (дегидрогеназы, цитохромная система, АТФ-
аза). На ЦМП локализуются ферменты, катализирующие синтез пептидогликана,
белков клеточной стенки, собственных структур. Мембрана является также местом
превращения энергии при фотосинтезе, окислительном фосфорилировании.
4. Периплазматическое пространство
5. Периплазматическое пространство (периплазма) представляет собой зону
между клеточной стенкой и ЦПМ. Толщина периплазмы составляет около 10 нм,
объем зависит от условий среды и, прежде всего, от осмотических свойств
раствора. Периплазма может включать до 20% всей находящейся в клетке воды, в
ней локализуются некоторые ферменты (фосфатазы, пермеазы, нуклеазы и др.) и
транспортные белки – переносчики соответствующих субстратов.
Цитоплазма
Содержимое клетки, окруженное ЦПМ, составляет цитоплазму бактерий. Та часть
цитоплазмы, которая имеет гомогенную коллоидную консистенцию и содержит
растворимые РНК, ферменты, субстраты и продукты обмена веществ, обозначается
как цитозоль. Другая часть цитоплазмы представлена различными структурными
элементами: мезосомами, рибосомами, включениями, нуклеоидом, плазмидами.
Рибосомы -
Рибосомы - субмикроскопические рибонуклеопротеидные гранулы диаметром 15-
20 нм. В рибосомах находится примерно 80-85% всей бактериальной РНК.
Рибосомы прокариот имеют константу седиментации 70 S. Они построены из двух
частиц: 30 S (малая субъединица) и 50 S (большая субъединица) (рис. 8). Рибосомы
служат местом синтеза белка.
Рис. 8. Рибосома (а) и ее субчастицы-большая (б) и малая (в) (Блинов Н.П., 1989).
Некоторые бактерии способны накапливать фосфорную кислоту в виде гранул
полифосфата (зерна волютина, метахроматические зерна, зерна Бабеша-Эрнста).
Они играют роль фосфатных депо и регулярно выявляются у коринебактерий,
микобактерий и спирилл в виде плотных, хорошо контурированных образований в
форме шара или эллипса, располагающихся, в основном, у полюсов клетки.
Обычно на полюсах бывает по одной грануле.
Наличие зерен волютина у бактерий определяют методом Нейссера
Мезосомы
Мезосомы представляют собой мембранные структуры, образуемые при
закручивании ЦПМ. Морфологически мезосомы выглядят как ламеллярные стопки
или спирально упакованные ламеллы, везикулярные или тубулярные структуры, а
также смешанные мембранные системы, образованные трубочками, пузырьками и
ламеллами (рис. 7). По расположению в клетке различают: мезосомы,
образующиеся в зоне клеточного деления и формирования клеточной перегородки
(септальныемезосомы) и мезосомы, сформированные в результате инвагинации
периферических участков ЦПМ (латеральные мезосомы).
Предполагается, что мезосомыполифункциональны, содержат различные
ферментные системы и играют определенную роль в энергетическом метаболизме.
Считают, что они являются сайтом для формирования клеточной стенки бактерий и
прикрепления нуклеоида в процессе репликации ДНК. Септальныемезосомы
участвуют в построении поперечной перегородки при делении бактерий.
бактериальная хромосома, или генофор)
Нуклеоид
Нуклеоид – ядерный аппарат бактерий. Представлен молекулой ДНК,
соответствующей одной хромосоме. Она циркулярно замкнута, располагается в
ядерной вакуоле, не имеет ограничивающей от цитоплазмы мембраны и
митотического аппарата.
С ДНК связано небольшое количество РНК и РНК-полимеразы. ДНК свернуто
вокруг центрального стержня, состоящего из РНК и представляет собой
высокоупорядоченную компактную структуру. Хромосомы большинства
прокариот имеют молекулярную массу в пределах 1-3х10 9, константу
седиментации 1300-2000 S. Молекула ДНК включает 1,6х10 7 нуклеотидных пар.
Различия в генетическом аппарате прокариотных и эукариотных клеток
обуславливает его название: у первых – нуклеоид (образование подобное ядру), в
отличие от ядра у вторых.
В нуклеоиде бактерий содержится основная наследственная информация, которая
реализуется в синтезе специфических белковых молекул. С ДНК бактериальной
клетки связаны системы репликации, репарации, транскрипции и трансляции.
Нуклеоид в прокариотной клетке может быть выявлен в окрашенных препаратах с
помощью светового или фазово-контрастного микроскопа. Для окрашивания
ядерного вещества используется краситель Фельгена, который специфически
окрашивает ДНК.
Метод окраски ДНК по Фельгену
1. Мазок из культуры бактерий фиксируют 2-3 мин метиловым спиртом и
помещают в холодную 1% HCl на 1 мин.
2. Подвергают гидролизу при 600С в 1% HCl 5-10 мин и споласкивают
дистиллированной водой.
3. Помещают мазок в реактив Шиффа на 40-60 мин, промывают в
водопроводной воде 2 мин.
В результате взаимодействия свободных альдегидных групп с бесцветной
фуксинсернистой кислотой появляется фиолетовая окраска, свойственная
основному фуксину.
У многих бактерий в цитоплазме обнаружены внехромосомные генетические
элементы – плазмиды. Они представляют собой замкнутые в кольца
двухцепочечные ДНК, состоящие из 1500-40 000 пар нуклеотидов и содержащие до
100 генов.
Плазмиды могут существовать в клетке и в интегрированном состоянии с
бактериальной хромосомой, сохраняя при этом способность переходить к
автономии.
12Строение пептидогликана у грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Его биологические свойства и значение для бактериальной клетки.
Клеточная стенка
Клеточная стенка представляет собой внешнюю структуру бактерий толщиной 30-
35 нм, главным компонентом которой является пептидогликан (муреин).
Пептидогликан является структурным полимером, состоящим из чередующихся
субъединиц -ацетилглюкозамина и -ацетилмурамовой кислоты, соединенных
гликозидными связями (рис. 2).
Параллельно расположенные полисахаридные (гликановые) цепи скреплены между
собой поперечными пептидными мостиками (рис. 3).
Полисахаридный каркас легко разрушается лизоцимом – антибиотиком животного
происхождения. Пептидные связи являются мишенью для пенициллина, который
ингибирует их синтез и препятствует формированию клеточной стенки.
Количественное содержание пептидогликана влияет на способность бактерий
окрашиваться по Граму. Бактерии, имеющие значительную толщину муреинового
слоя (90-95%), стойко окрашиваются генцианвиолетом в сине-фиолетовый цвет и
носят название грамположительных бактерий. Грамотрицательные бактерии с
тонким слоем пептидогликана (5-10%) в клеточной стенке после действия спирта
утрачивают генцианвиолет и дополнительно окрашиваются фуксином в розовый
цвет. Клеточные стенки у грамположительных и грамотрицательных прокариот
резко различаются как по химическому составу (таблица 1), так и по
ультраструктуре (рис. 4).
Кроме пептидогликана в клеточной стенке грамположительных бактерий
содержатся тейхоевые кислоты (ТК), в меньшем количестве липиды,
полисахариды, белки.
Химический состав клеточных стенок
грамположительных и грамотрицательных прокариот
Тейхоевые кислоты (полифосфатные соединения) делят на 2 класса: 1)стеночные,
связанные с пептидогликаном клеточной стенки; 2)мембранные (липотейхоевые),
соединенные с гликолипидом цитоплазматической мембраны. ТК могут
связываться с клеточными мембранами животных клеток и осуществлять процесс
адгезии, необходимый для бактериальной колонизации, являющейся первой
стадией большинства инфекций. Особый интерес представляет изучение явления
индукции тейхоевыми кислотами воспалительных процессов, цитотоксичности и
иммуносупрессии.
На поверхности клеточной стенки грамположительных бактерий могут
присутствовать белковые молекулы, не образующие структур определенной формы
(белок А стафилококков, М-протеин стрептококков). Они обладают высокой
биологической активностью, вызывают агглютинацию эритроцитов, являются
иммунодепрессантами, угнетают фагоцитоз, комплемент, препятствуют
трансформации лимфоцитов, способствуют адгезии бактерий на клетках эпителия
слизистых оболочек.
Грамотрицательные прокариоты имеют наружную мембрану, в состав которой
входят липиды (22%), белки, полисахариды, липопротеиды.
Липополисахариды (ЛПС) – гетерополимеры с комплексной структурой,
обладающие разнообразной биологической активностью. Липоидный комплекс
обуславливает токсичность (воспалительные реакции, лихорадка, эндотоксиновый
шок), полисахаридный компонент ответственен за О-антигенспецифичность. ЛПС
индуцирует синтез Jg М-антител, в иммунологии используется в качестве
адъюванта и поликлонального активатора В-клеток.
№12. Строение пептидогликана у грамположительных и грамотрицательных
бактерий. Его биологические свойства и значение для бактериальной клетки.
Пептидогликан является структурным полимером, состоящим из чередующихся
субъединиц -ацетилглюкозамина и -ацетилмурамовой кислоты, соединенных
гликозидными связями
Параллельно расположенные полисахаридные (гликановые) цепи скреплены между
собой поперечными пептидными мостиками =
Полисахаридный каркас легко разрушается лизоцимом – антибиотиком животного
происхождения. Пептидные связи являются мишенью для пенициллина, который
ингибирует их синтез и препятствует формированию клеточной стенки.
Количественное содержание пептидогликана влияет на способность бактерий
окрашиваться по Граму. Бактерии, имеющие значительную толщину муреинового
слоя (90-95%), стойко окрашиваются генцианвиолетом в сине-фиолетовый цвет и
носят название грамположительных бактерий. Грамотрицательные бактерии с
тонким слоем пептидогликана (5-10%) в клеточной стенке после действия спирта
утрачивают генцианвиолет и дополнительно окрашиваются фуксином в розовый
цвет. Клеточные стенки у грамположительных и грамотрицательных прокариот
резко различаются как по химическому составу (таблица 1), так и по
ультраструктуре
№13, Строение клеточной стенки грамположительных бактерий. Тейхоевые
кислоты, минорные и мажорные белки, их строение, функции
 тейхоевые или липотейхоевые кислоты (от греч. teichos – стенка) –
цепи из 8-50 остатков глицерола и рибитола, соединенных фосфатными мостиками
(рибитолтейхоевые и глицеринтейхоевые) → адгезины, антигены, репеленты
фагоцитоза, токсины;
 поверхностные белки (А, М, Т, R и др.) – антифагины, репеленты
фагоцитоза, протеин А у стафилококка – аналог рецептора для антител.
Тейхоевые кислоты (полифосфатные соединения) делят на 2 класса: 1)стеночные,
связанные с пептидогликаном клеточной стенки; 2)мембранные (липотейхоевые),
соединенные с гликолипидом цитоплазматической мембраны. ТК могут
связываться с клеточными мембранами животных клеток и осуществлять процесс
адгезии, необходимый для бактериальной колонизации, являющейся первой
стадией большинства инфекций. Особый интерес представляет изучение явления
индукции тейхоевыми кислотами воспалительных процессов, цитотоксичности и
иммуносупрессии.
На поверхности клеточной стенки грамположительных бактерий могут
присутствовать белковые молекулы, не образующие структур определенной формы
(белок А стафилококков, М-протеин стрептококков). Они обладают высокой
биологической активностью, вызывают агглютинацию эритроцитов, являются
иммунодепрессантами, угнетают фагоцитоз, комплемент, препятствуют
трансформации лимфоцитов, способствуют адгезии бактерий на клетках эпителия
слизистых оболочек.
№14 Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Липиполисахарид
(ЛПС), его строение и функции.
 наружная мембрана;
 липополисахарид (ЛПС):
● липид А – эндотоксин;
● ядро (базис) – полисахарид, включающий глюкозу, галактозу, N-
ацетилглюкозамин и кетодезоксиоктонат (КДО);
● О-специфическая цепь олигосахаридных последовательностей (галактоза,
манноза, рамноза, N-ацетилглюкозамин, абеквоза, колитоза, тивелоза и др.). О-
антиген.
Клеточная стенка
У грамотрицательныхэубактерий строение клеточной стенки намного сложнее, чем
у грамположительных. В ее состав входит гораздо большее число макромолекул
разного химического типа. Пептидогликан образует только внутренний слой
клеточной стенки, неплотно прилегая к ЦПМ. Для разных видов
грамотрицательных эубактерий содержание этого гетерополимера колеблется в
широких пределах. У большинства видов он образует одно- или двухслойную
структуру, характеризующуюся весьма редкими поперечными связями между
гетерополимерными цепями.
Некоторые скользящие бактерии (миксобактерии, флексибактерии) способны в
процессе перемещения по твердому субстрату периодически менять форму клеток,
например путем изгибания, что говорит об эластичности их клеточной стенки, и в
первую очередь ее пептидогликанового слоя. Электронно-микроскопическое
изучение, однако, обнаружило у них клеточную стенку, типичную для
грамотрицательных эубактерий. Наиболее вероятное объяснение гибкости
клеточной стенки этих бактерий — чрезвычайно низкая сшитость ее
пептидогликанового компонента.[3]
Грамотрицательные прокариоты имеют наружную мембрану, в состав которой
входят липиды (22%), белки, полисахариды, липопротеиды.
Липополисахариды (ЛПС) – гетерополимеры с комплексной структурой,
обладающие разнообразной биологической активностью. Липоидный комплекс
обуславливает токсичность (воспалительные реакции, лихорадка, эндотоксиновый
шок), полисахаридный компонент ответственен за О-антигенспецифичность. ЛПС
индуцирует синтез Jg М-антител, в иммунологии используется в качестве
адъюванта и поликлонального активатора В-клеток.
Клеточная стенка у бактерий выполняет, в основном, формообразующую и
защитную функции, обеспечивает ригидность, формирует капсулу, определяет
способность клеток к адсорбции фагов.
№15 Фильтрующиеся, инволютивные формы бактерий, протопласты, сферопласты,
L-формы.
протопласты, сферопласты, L-формы-это формы бактерий без КС
. L-формы могут возникать в естеств-ых условиях в орг-зме чел-кав результате
длительного лечения некот-ым антибиотиками, чаще всего пенициллином.
Различают нестабильные и стабильные L-формы бактерий. Первые способны к
реверсии в исходный вид при устранении причины, вызвавшей их образование.
Они восстан-ют способность синтезировать пептидогликан КС. Вторые, как
правило, не способны к реверсии. L-формы разных бактерий играют существенную
роль в патогенезе многих инфекционных заболеваний.
Основныесв-ва L-форм бактерий:
 постоянное превращение из грампол-ых в грамотриц-е.
 изменение антигенных св-в
 снижение вирулентности
 спос-ть к длительной персистенции
 спос-ть при неполной утрате синетза КС к возврату в исходную
форму.
№16 Тинкториальные свойства бактерий. Сложные методы окраски. Принцип
окраски бактерий по методу Грама.
Методика окраски по Граму
1. На мазок кладут фильтровальную бумагу и наливают карболовый
раствор генциановогофиолетового на 1-2 мин.
2. Снимают бумагу, сливают краситель и, не промывая мазок водой,
наливают раствор Люголя на 1 мин.
3. Сливают раствор Люголя и обесцвечивают препарат в 96 0 спирте в
течение 30 сек.
4. Промывают водой.
5. Красят 1-2 мин водным раствором фуксина.
6. Промывают водой и высушивают.
Принцип окр. По Грамму
 Грамположительные бактерии удерживают
генциановыйфиолетовый в комплексе с йодом – фиолетовая окраска бактерий;
 Грамотрицательные бактерии после воздействия спирта
утрачивают краситель, обесцвечиваются и при обработке фуксином окрашиваются
в красный цвет.
Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и
дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в
иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные
красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты,
кислоту и др.
Тинкториальныесвойствабактерий (лат. tinctura, от tingo - окрашиваю)
способность к окрсаке: восприимчивость к окраске, кислото-спирто-
щелочеустойчивость, равномерность окраски, метахроматичность, отношение к
окраске по методу Грама.
№17 Особенности химического состава клеточной стенки кислотоустойчивых №20 Капсула и микрокапсула бактерий
бактерий. Принцип окраски по методу Циля-Нильсена.
Капсула – слизистый слой клеточной стенки бактерий, состоящий из
Кислотоустойчивые бактерии. Клеточная стенка некоторых бактерий содержит полисахаридов (пневмококк) или полипептидов (бацилла сибирской язвы).
большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к
Микрокапсулу (толщиной менее 0,2 мкм) способны формировать большинство
последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или
этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Подобные бактерии бактерий, четко выраженную макрокапсулу (толщиной более 0,2 мкм) формируют
называют кислотоустойчивыми, их трудно окрашивать по Граму (хотя
пневмококк, клебсиеллы, возбудитель сибирской язвы и некоторые другие. У
кислотоустойчивые бактерии рассматривают как грамположительные). Для их
окраски применяют метод Циля-Нильсена. патогенных бактерий капсула образуется в макроорганизме, на искусственных
питательных средах она обычно утрачивается (за исключением клебсиелл).
Для микобактерий и нокардий характерна усложненная структура клеточной
стенки. Основу у них, также как и у грамположительных бактерий, составляет В организме человека и животных капсула защищает патогенные бактерии от
муреиновый каркас, однако последний связан с полисахаридами и липидами.
бактериофага, фагоцитоза и гуморальных факторов иммунитета, определяет
Липиды представлены миколовыми кислотами, которые придают клеточной
поверхности гидрофобность. Гидрофобность, с одной стороны делает клетку антигенную специфичность микроорганизмов.
устойчивой к действию различных химических веществ (такие бактерии
Капсулы, имея консистенцию геля, плохо удерживают краситель, и для их
называются кислотоустойчивыми), с другой стороны тормозит обмен клетки с
окружающей средой и замедляет ее рост. Поэтому в питательные среды для выявления чаще всего применяют методы негативного контрастирования.
культивирования микобактерий туберкулеза добавляют поверхностно-активные
Метод выявления капсулы по Бурри-Гинса
вещества. Кислотоустойчивость микобактерий является важным диагностическим
признаком, для ее определения пользуются окраской по методу Циля-Нильсена. Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы контрастно
Методика окраски кислотоустойчивых бактерий
выделяются на темном фоне препарата.
по методу Циля-Нильсена
1. На фиксированный мазок помещают фильтровальную бумагу и наливают
карболовый фуксин Циля и осторожно нагревают на горелке до появления паров.
№21 Жгутики бактерий
Операцию повторяют 2-3 раза.
2. Когда препарат остынет, снимают фильтровальную бумагу, сливают Жгутики выполняют роль органа движения, позволяющего бактериям
краситель и промывают препарат водой.
передвигаться со скоростью 20-60 мкм/сек. Бактерии могут иметь один
3. Препарат погружают 2-3 раза в стакан с 5% серной кислотой на 1-2 сек.
4. Тщательно промывают препарат водой и докрашивают щелочным (монотрихи) или несколько жгутиков, располагающихся по всей поверхности тела
метиленовым синим 3-5 мин.
(перитрихи), либо собранные в пучки (лофотрихи).
5. Промывают водой и подсушивают.
Кислотоустойчивые бактерии не обесцвечиваются серной кислотой и сохраняют Перитрихиальное расположение жгутиков характерно для энтеробактерий,
красный цвет, некислотоустойчивые теряют краситель и докрашиваются
возбудителей анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма; монотрихом является
метиленовым синим в голубой цвет.
холерный вибрион, лофотрихом - псевдомонас. У некоторых видов спирилл
№18 Включения бактерий, их состав и биологическая роль.
различают амфитрихиальное расположение жгутиков. Толщина жгутиков в
В цитоплазме имеются различные включения в виде гранул гликогена,
полисахаридов, бета-оксимасляной кислоты и полифосфатов (волютин). Они среднем составляет 10-30 нм, а длина достигает 10-20 мкм.
являются запасными веществами для питания и энергетических потребностей Основу жгутика составляет длинная спиральная нить (фибрилла), которая у
бактерий. Волютин обладает сродством к основным красителям и легко выявляется поверхности клеточной стенки переходит в утолщенную изогнутую структуру-
с помощью специальных методов окраски (например, по Нейссеру) в виде
метахроматических гранул. Характерное расположение гранул волютина крюк и прикрепляется к базальной грануле, вмонтированной в клеточную стенку и
выявляется у дифтерийной палочки в виде интенсивно прокрашивающихся ЦПМ (рис. 10).
полюсов клетки. (по Нейссеру окраш-ся в темно-синий цвет)

Базальные гранулы имеют диаметр около 40 нм и состоят из нескольких колец

№19 Споры бактерий, их строение
(одна пара у грамположительных бактерий, четыре - у грамотрицательных
Некоторые бактерии в конце периода активного роста способны образовывать
прокариот). Удаление пептидогликанового слоя клеточной стенки ведет к потере
споры. Этому предшествует обеднение среды питательными веществами,
способности бактерий к движению, хотя жгутики при этом остаются
изменение ее рН, накопление ядовитых продуктов метаболизма. Как правило, одна
неповрежденными.
бактериальная клетка образует одну спору – локализация спор различна
Жгутики почти полностью состоят из белка флагеллина с некоторым содержанием
(центральная, терминальная, субтерминальная)
углеводов и РНК.
Если размеры спор не превышают поперечного размера палочковидной бактерии,
Под микроскопом жгутики можно увидеть лишь после специальных методов
то последняя называется бациллой (возбудитель сибирской язвы). Когда диаметр
протравливания и импрегнации солями серебра и ртути с последующей окраской
споры больше – бактерии имеют форму веретена и носят название клостридий
метиленовой синью (метод Леффлера). При этом необходимо учитывать, что
(возбудители анаэробной инфекции). Клостридии столбняка имеют круглую спору
жгутики очень чувствительны к различным механическим воздействиям. О
и напоминают барабанные палочки. Клостридии ботулизма отличаются большими
наличии жгутиков можно косвенно судить по направленному характеру движения
овальными спорами, что придает им вид теннисной ракетки.
в «висячей» и «раздавленной» капле в темнопольном и фазово-контрастном
По химическому составу различие спор от вегетативных клеток состоит лишь в
микроскопах, либо при светлопольной микроскопии при опущенном конденсоре и
количественном содержании химических соединений. Споры содержат меньше
частично прикрытой диафрагме микроскопа.
воды и больше липидов.
Окраска жгутиков методом Леффлера
При микроскопии готового препарата жгутики видны как тонкие нитевидные
Формирование спор связано с уплотнением и обособлением определенного участка
структуры.
цитоплазмы вегетативной клетки с последующим образованием внутри бактерии
круглого или овального тельца, покрытого плотной многослойной оболочкой,
№22 Пили
которая пропитана большим количеством липидов, кальция, дипиколиновой
Поверхность энтеробактерий и нескольких других микроорганизмов покрыта
кислоты (рис. 12).
большим числом (от 10 до нескольких тысяч) ворсинок – нитевидных образований
белковой природы. Как и жгутики, они построены из одного вида белка – пилина,
Попадая в организм человека и животных, споры прорастают в вегетативные
субъединицы которого организованны в виде полой внутри нити и берут начало от
клетки. Процесс прорастания спор включает три стадии: активации, начальной
ЦПМ. Они короче и тоньше жгутиков, их ширина 10-12 нм и длина до 12 мкм.
стадии и стадии роста. К активирующим агентам, нарушающим состояние покоя,
Ворсинки полифункциональны: обеспечивают трансмиссивную передачу генов
относят повышенную температуру, кислую реакцию среды, механические
(конъюгация), являются рецепторами для фагов, органом прикрепления бактерий к
повреждения и др. Спора начинает поглощать воду, освобождается от дипиколата
питательному субстрату (адгезия), участвуют в транспорте метаболитов.
кальция, с помощью гидролитических ферментов разрушает многие собственные
У стрептококков имеется наружный слой протеиновых волосков (фимбрий),
структурные компоненты. После разрушения наружных слоев наступает период
которые получили название белок М (М-протеин). Этот белок играет важную роль
формирования вегетативной клетки с активацией биосинтеза, заканчивающейся
в процессах взаимоотношений бактерий с макроорганизмом.
делением клетки.
Метод окраски спор по Ожешко
Споры прочно удерживают карболовый фуксин и окрашиваются в красный цвет,
цитоплазма бактерий обесцвечивается 5% серной кислотой и после докрашивания
метиленовым синим приобретает синий цвет.
№23 Актиномицеты №24 Спирохеты
Представляют своеобразную группу бактерий, имеющих вид небольших или спирально извитые, обладающие активной подвижностью бактерии. Размеры
длинных несептированных ветвящихся нитей. Скопление гифов называют спирохет колеблются в толщину от 0,1-0,3 мкм, в длину от 7-500 мкм. Движения
мицелием. Сходство с грибами чисто внешнее, так как актиномицеты имеют разнообразные – от винтообразных до сгибательных. Электронно-
прокариотический тип клетки с наличием клеточной стенки не содержащей хитина микроскопическое исследование позволило различить у спирохет
и целлюлозы. Актиномицеты грамположительны, многие формы протоплазматический цилиндр (тело клетки), аксиальную (опорную) нить и
кислотоустойчивы, некоторые актиномицеты вокруг нитей имеют капсулу. трехслойную наружную оболочку. Аксиальная нить находится в
периплазматическом пространстве между наружной оболочкой и
Субстратный мицелий образуется в результате врастания мицелия в питательную протоплазматическим цилиндром и состоит из отдельных фибрилл (эндофлагелл),
среду и воздушный, растущий на поверхности среды (рис. 19). В пораженных число которых у разных видов различно: у трепонем и лептоспир – 3-4; у борелий –
тканях (тканевая форма) актиномицеты могут образовывать друзы-гранулы, из до 30. Каждая из фибрилл (эндожгутиков) закрепляется в области
плотно переплетенных нитей в виде лучей, отходящих от центра и прикрепительных дисков на концах протоплазматического цилиндра и тянется к
заканчивающихся колбовидными утолщениями. противоположному его концу, обвивая его и заканчиваясь свободно. Химический
Актиномицеты размножаются бесполым путем, образую конидии или спороносцы состав фибрилл аналогичен составу жгутиков (рис. 20).
со спорангиями на концах воздушного мицелия. Спороносцы могут быть прямыми, В протоплазматическом цилиндре содержатся: нуклеоид, рибосомы, мезосомы,
волнистыми, спиральными. Споры – овальными, круглыми, цилиндрическими, с включения. Наружная оболочка (клеточная стенка) содержит тонкий слой
гладкой поверхностью или шипами, иногда подвижные за счет жгутиков пептидогликана, эластична и не обладает ригидностью. Эндоспор, капсул и
(зооспоры). Споры служат для размножения актиномицетов, они не термостойки, экзожгутиков эти бактерии не образуют, грамотрицательны, в мазке располагаются
но выдерживают высушивание. Кроме того, возможно почкование и фрагментация беспорядочно.
мицелия на палочковидные или кокковидные формы. Спирохеты относятся к порядку Spirochaetales, семейство Spirochaetaceae, которое
включает три рода:
Актиномицеты широко распространены в природе, обитают в воде, почве богатой
перегноем. Они участвуют в круговороте веществ в природе. Отдельные виды 1. Borrelia - имеет 3-10 неравномерных отлогих завитков, концы заострены,
актиномицетов используются как продуценты антибиотиков, витаминов, липидов, длиной 10-30 мкм. Движение толчкообразное, по Романовскому-Гимзе
протеаз, аминокислот, стероидов. окрашиваются в сине-фиолетовый цвет (представитель Borreliarecurrentis –
вызывает эпидемический возвратный тиф; Borreliaburgdorferi - вызывает
Актиномицеты относятся к порядку Аctinomycetalеs, включающего семейства: лаймоборрелиоз).
Actinomycetaceae, Nocardiaceae, Streptomycetaceae, Mycobacteriaceae. 2. Treponema - имеет 8-14 туго закрученных, одинаковых по амплитуде
завитков, длина 5-15 мкм. Движение плавное, медленное с вращением вокруг
Патогенные для человека виды встречаются среди представителей семейства продольной оси, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в бледно розовый цвет
Actinomycetaceae и Nocardiaceae. Первые имеют вид длинных или коротких (представитель Treponemapallidum – возбудитель сифилиса).
разветвленных палочек, не образующих воздушного мицелия. Они являются 3. Leptospira - имеет до двух десятков мелких частых завитков,
возбудителями актиномикоза человека и образуют друзы в пораженных тканях. заканчивающихся крючком с пуговчатым утолщением, длиной 5-15 мкм. Движение
очень активное, поступательное перемещение вперед, сгибание и вращение вокруг
Представители семейства Nocardiaceae напоминают микобактерии, имеют оси. По Романовскому-Гимзе окрашиваются слабо в розовато-сиреневый цвет
нитевидную форму клеток и образуют на питательных средах воздушный и (представитель Leptospirainterrogans – возбудитель лептоспироза).
субстратный мицелий. Гифы фрагментируются на кокковидные и палочковидные Методы исследования. В живом состоянии спирохеты изучают в фазово-
клетки. Патогенные нокардии вызывают нокардиоз. контрастном микроскопе и темнопольном микроскопе, наблюдая за активным
характерным движением спирохет, особенностями их формы.
Методы исследования. окрашивают по Граму и Цилю-Нильсену. Друзу извлекают Готовят препараты по Бурри (на темном фоне препарата становятся видимыми
из патологического материала петлей, помещают в каплю воды на предметное светлые извитые нити спирохет), окрашивают по Романовскому-Гимзе, по методу
стекло, слегка придавливают покровным, затем вводят под стекло каплю Морозова.
щелочного раствора метиленового синего и микроскопируют, можно использовать
фазовый контраст.
№25 Риккетсии №26 Хламидии
 Class «Alphaproteobacteria»  Class «Chlamydiae»
 Order Rickettsiales  Order Chlamydiales
 Family Rickettsiaceae  Familia Chlamydiaceae
Genus Rickettsia Genus: Chlamydia
Genus Orientia Chlamydophila
 Family Ehrlichiaceae Хламидии - неподвижные, облигатно паразитические, кокковидные бактерии.
Genus Ehrlichia Размножаются только внутри связанных с мембраной вакуолей в цитоплазме
Genus Anaplasma клеток человека, млекопитающих, птиц. Членистоногие не служат хозяевами или
переносчиками. Размножение происходит в ходе уникального цикла развития.
Риккетсии – мелкие (0,35-1.0 мкм) грамотрицательные, полиморфные бактерии, Основными стадиями жизненного цикла хламидий являются:
являющиеся облигатными внутриклеточными паразитами. 1). Элементарные тельца – мелкие (0,2-0,5 мкм) электронноплотные шаровидные
Риккетсии разнообразны по форме и выделяют следующие типы: структуры, лишенные метаболитной активности, имеющие компактный нуклеоид
1. кокковидные однозернистые (до 0,5 мкм); и ригидную клеточную стенку, которые фильтруются через бактериальные
2. палочковидные двухзернистые (1-1,5 мкм); фильтры. Они являются инфекционным началом хламидий и обеспечивают их
3. бациллярные трех-четырехзернистые (3-4 мкм); выживание во внеклеточной среде и заражение новых клеток.
4. нитевидные многозернистые (10-40 мкм). 2). Ретикулярные тельца – более крупные (0,8-1,5 мкм), сферические образования,
Зерна (нуклеопротеиды) обнаруживаются при окраске по Романовскому-Гимзе. Все имеющие сетчатую структуру с тонкой клеточной стенкой и фибриллярным
формы взаимообратимы. Структурно имеют все компоненты бактериальной нуклеоидом. Они вырастают из элементарных телец внутри клеток, лишены
клетки: клеточную стенку, липоидную капсулу, цитоплазму, нуклеоид, рибосомы, инфекционности и, подвергаясь делению, обеспечивают репродукцию хламидий.
пили. Риккетсии содержат как ДНК, так и РНК, обладают высоким содержанием Отсюда другое, исторически первое название ретикулярных телец – «инициальное
фосфолипидов, содержание углеводов невелико. тело». Ретикулярные тельца являются вегетативной формой хламидий.
В большинстве случаев (кроме вида Rochalimaeaguintana) на искусственных 3). Промежуточные тельца – промежуточная стадия между элементарными и
питательных средах риккетсии не растут. Жизненный цикл риккетсий зависит от ретикулярными тельцами.
жизнедеятельности клетки-хозяина и складывается из двух стадий: вегетативной и Жизненный цикл хламидий начинается с того, что элементарные тельца
покоящейся (элементарные тельца). Риккетсии, находящиеся в вегетативной стадии фагоцитируются клеткой-хозяином, а затем в течение нескольких часов
(рис. 23) активно размножаются путем бинарного деления и обладают активной реорганизуются, увеличиваются в размерах и превращаются в ретикулярные
подвижностью, по-видимому, обусловленной жгутиковыми структурами. формы, которые размножаются путем поперечного деления. Жизненный цикл
Риккетсии покоящейся стадии (элементарные тельца) имеют сферическую форму и заканчивается, когда возникающие промежуточные формы уплотняются,
они не активны. уменьшаются в размерах и превращаются в элементарные тельца. Размножаясь
Риккетсии способны к биосинтезу белка, но не могут самостоятельно получать внутри цитоплазматических вакуолей, хламидии образуют микроколонии
макроэргические соединения, поэтому их можно назвать «энергетическими (включения), окруженные мембраной. В составе микроколоний обнаруживаются
паразитами» клеток-эукариотов. В связи с этим, для культивирования риккетсий все три стадии развития хламидий. После разрыва стенки вакуоли (везикулы) и
обычно заражают куриные эмбрионы в желточный мешок (метод Кокса), культуры мембраны клетки-хозяина, вновь образовавшиеся хламидии высвобождаются, и
клеток, в которых некоторые виды риккетсий образуют, как и вирусы, тельца элементарные тельца, инфицируя другие клетки, повторяют цикл развития. В
включений. Реже заражают чувствительных лабораторных животных: морских оптимальных условиях роста в эукариотических клетках жизненный цикл
свинок, белых мышей. хламидий составляет 17-40 часов (рис. 24).
Порядок Rickettsiales включает виды патогенные для теплокровных животных и Хламидии хорошо размножаются в желточном мешке куриного эмбриона при
человека, переносчиками служат вши, блохи, клещи. Заболевания называются температуре от 330 – 440С, а также в культурах клеток различных позвоночных.
риккетсиозами. Большинство болезнетворных для человека видов риккетсий Зависимость хламидий от клеток-эукариотов объясняется их неспособностью
входит в состав семейства Rickettsiaceae, роды Rickettsia, Rochalimaea, Coxiella, аккумулировать и использовать энергию, так как они не могут синтезировать АТФ.
вызывая эпидемический сыпной тиф (Rickettsiaprowazekii), Ку-лихорадку В этом отношении хламидии похожи на риккетсий, в связи с чем, эти
(Coxiellaburnetti), волынскую лихорадку (Rochalimaeaguintana), лихорадку микроорганизмы также называют «энергетическими паразитами».
цуцугамуши (Rickettsiatsutsugamushi) и другие. Паразитирующие виды Своеобразие хламидий проявляется и в строении их клеточной стенки. Она лишена
ассоциированы с ретикулоэндотелиальными клетками и клетками эндотелия пептидогликана и представляет собой двухслойную мембрану, ригидность которой
сосудов или эритроцитами. определяют пептиды, перекрестно сшитые дисульфидными мостиками. В
Методы исследования. Риккетсии хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе в остальном хламидии напоминают грамотрицательные бактерии, так как содержат
сиреневый цвет, по Морозову (методом серебрения) в черный цвет. Для гликолипиды, сходные с липополисахаридами
дифференциации риккетсий применяется метод окраски, предложенный П.Ф. Порядок Chlamydiales включает одно семейство Chlamydiaceae с единственным
Здродовским: родом Chlamydia. Для человека патогенны виды C. trachomatis, C. psittaci, C.
pneumoniae. Хламидии вызывают у людей заболевания глаз, дыхательной и
Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет и легко обнаруживаются на мочеполовой систем и объединяются под общим названием «хламидиозы».
фоне голубой цитоплазмы и синего ядра клеток. Методы исследования. Для микроскопического обнаружения телец включений
(микроколоний) хламидий в инфицированных клетках (тканях) применяют
различные методы окрашивания: Романовского-Гимзы, Маккиавелло и другие. При
окрашивании по Романовскому-Гимзе они приобретают голубой или фиолетовый
цвет. Кроме того, хламидии хорошо видны и в неокрашенном состоянии при
микроскопии влажных препаратов под стеклом с помощью фазовоконтрастной
оптической системы. В последнее время наиболее часто используется прямая
реакция иммунофлюоресценции, окраска акридин –оранжевым.
№27 Микоплазмы
№28 Грибы
Class Mollicutes
 Order Mycoplasmatales
 Family Mycoplasmataceae Классы (7):
Genus Mycoplasma · Basidiomycetes (шляпочные грибы).
Genus Ureaplasma
· Zygomycetes (род Mucor – мукоромикоз человека и животных)
Пять видов являются патогенными для человека: M.pneumoniae, M.hominis,
M.genitalium, M.incognitus и U.urealyticum. · Ascomycetes (сумчатые грибки, роды Aspergillus, Penicillium, дрожжевые
Микоплазмы – самые мелкие прокариоты (125-150 нм) способные самостоятельно грибки)
размножаться. Полагают, что микоплазмы являются наиболее близкими потомками
· Deuteromycetes – несовершенные грибки, не размножаются половым путем
исходных прокариотических клеток. Геном микоплазм минимален для клетки, он в
пять раз меньше генома кишечной палочки и составляет 0,45 МД. Главная (Candida)
особенность микоплазм – отсутствие клеточной стенки. Они окружены
капсулоподобным слоем, под которым находится лишь тонкая трехслойная Грибы – большая и успешно развивающаяся группа организмов, включающая
мембрана толщиной 7,5- 10 нм, содержащая в значительном количестве
около 80 000 идентифицированных видов. Размеры их колеблются от
холестерин. Вследствие этого, микоплазмы выделяют в особый отдел Tenericutes,
класс Mollicutes («нежная кожа»), порядок Mycoplasmatales. одноклеточных дрожжей до больших поганок, дождевиков и рожков. Грибы
Из-за отсутствия клеточной стенки микоплазмы (рис. 21) осмотически
занимают самые различные местообитания – как в воде, так и на суше. Кроме того,
чувствительны и имеют разнообразную форму:
они имеют важное значение и в связи с той ролью, которую играют в биосфере, и в
а) мелкие сферические или овоидные клетки размером 0,2 мкм (элементарные
тельца) которые фильтруются через бактериальные фильтры; связи с тем, что используются человеком в медицине и в хозяйстве
б) более крупные шаровидные, размером до 1,5 мкм;
в) нитевидные, ветвящиеся клетки размером до 150 мкм. 1) Общая характеристика:
группа низших гетеротрофных растений, лишенных хлорофилла
Микоплазмы не образуют спор, жгутиков, некоторые виды обладают скользящей
численность видов – около 65 тыс. среда обитания – влажные места, богатые
подвижностью. органическими веществами
Размножаются путем бинарного деления шаровидных и нитевидных клеток, 2) Классификации
а) по уровню организации
почкования и высвобождения множества элементарных телец, образующихся в
 - низшие (лишены мицелия или имеют неразделенный мицелий; представляют
нитях. собой одноядерный комочек цитоплазмы, паразитирующий внутри клетки хозяина;
Для микоплазм характерна уникальная для прокариот потребность в стеролах пр.: возбудитель рака картофеля) 
 - высшие (имеют хорошо развитый разделенный мицелий, погруженный в
(холестерине). Холестерин стабилизирует мембрану микоплазм. В
субстрат – почву, растение и др. и надземную часть – плодовое тело – орган
инфицированных тканях микоплазмы являются паразитами мембран размножения, образующий споры; пр.: шляпочные грибы)
эукариотических клеток и способны персистировать на них долгое время. б) по строению
Что касается энергии, то микоплазмы получают ее обычным для факультативных  - одноклеточные (дрожжевые и др.)
 - многоклеточные (шляпочные, плесневые и др.)
анаэробов способом, ферментируя углеводы или аминокислоты. Вследствие малого Медицинская микробиология изучает грибы, имеющие микроскопические размеры
генома микоплазмы обладают ограниченными биосинтетическими способностями, (и др. грибы), вызывающие заболевания человека, животных, лекарственных
и их приходится культивировать на питательных средах обогащенных липидами, растений, а также грибы, которые образуют антибиотики.

белками, предшественниками нуклеиновых кислот. Растут медленно, колонии с

Методы исследования. Для микроскопического исследования готовят как нативные
плотным врастающим в среду центром, напоминающие «яичницу-глазунью»
(неокрашенные), так и окрашенные препараты.
(темный центр и более светлая ажурная периферия). Размеры колоний мелкие, не
Исследование неокрашенных препаратов
превышающие 600 мкм .
Чтобы яснее различить элементы грибка, производят просветление препарата, для
В патологии человека наибольшую роль играют несколько представителей рода
этого патологический материал (корочки, кусочки ногтя, волос, соскобы со
Mycoplasma: M. pneumoniae, M. hominis, M. anthritidis и единственный вид рода
слизистых, содержимое гранулематозных очагов) помещают на часовое стекло или
Ureaplasma – U. urealyticum (названный так из-за уреазной активности).
чашку Петри, куда наливают 10-15% раствор едкого натрия или калия и ставят в
Патогенные микоплазмы вызывают заболевания (микоплазмозы) дыхательных,
термостат при 370С на 20-30 мин. Затем материал извлекают и помещают в каплю
мочеполовых путей и суставов с разнообразными клиническими проявлениями.
50% раствора глицерина на предметное стекло и закрывают покровным стеклом,
При лечении этих заболеваний следует помнить, что микоплазмы не
микроскопируют в фазово-контрастном или световом микроскопе. Можно
чувствительны к бета-лактамным антибиотикам и другим лекарственным
использовать другой метод: на патологический материал наносят каплю глицерина
препаратам, угнетающим синтез клеточной стенки (из-за ее отсутствия у
с добавлением 10% едкого калия и исследуют через 4-5 мин, закрыв покровным
возбудителя).
стеклом.
Методы исследования. В световом микроскопе обнаруживаются лишь самые
Гной из абсцессов, содержимое язв, мокроту разбавляют физиологическим
крупные формы микоплазм. В живом состоянии их изучают в темнопольном и
раствором или водно-спиртовым (1:1) или 50% водным раствором глицерина,
фазово-контрастном микроскопе, ультраструктурные компоненты выявляют при
готовят препарат «раздавленная капля» и рассматривают при увеличении х200,
помощи электронной микроскопии.
х400 используя фазовый контраст.
Исследование окрашенных препаратов
Из гноя, крови, ликвора, осадка бронхиальных смывов и мочи готовят тонкие
мазки, которые фиксируют в смеси Никифорова, Карнуа, спирт-формоле,
высушивают и окрашивают:
Окраска лактофуксином, содержащим кислого фуксина – 0,1 г, молочной кислоты
– 100 мл. Окрашивают в течение 3-5 мин. Фон препарата розовый, мицелий
опалесцирует голубым цветом. Хорошо окрашиваются грибы при мукормикозе и
аспергилезе.
№29 Дрожжи и дрожеподобные
30.Морфология и методы исследования нитчатых грибов.
Дрожжевые клетки имеют округлую, пиальную или вытянутую форму размером 8-
10 мкм, двухконтур-ную оболочку. В цитоплазме отмечаются включения в виде У грибов существует 2 типа роста: гифальный рост (гифомицеты) и дрожжевой рост
гранул гликогена, волютина, липидов. Размножение происходит почкованием и (бластомицеты). Обычно вегетативное тело гифомицетов состоит из нитей
аскоспорами. Дрожеподобные сходны с истинными дрожжами, отличием служат
толщиной около 5 мкм, сильно разветвленных и называемых гифами. Гифы либо
отсутствие аскоспор и способность к образо-1шшю псевдомицелия. При
образовании псевдомицелия клетки вытягиваются в длину и соприкасаются узким не имеют поперечных перегородок (у низших грибов), либо разделены
основанием. Они вызы-пают кандидозы, которые развиваются у больных людей
перегородками (септами) на клетки (у высших грибов). Стенка клеток может быть
при резком снижении резистентности организма и длительном применении ан-
различной толщины, часто хорошо видна двухконтурность, среди включений в
тибиотиков
Методы изучения дрожжей цитоплазме наиболее характерны зерна волютина, гликогена, пигмента меланина.

Зрелые старые клетки грибов богаты липидами. Ядро содержит ядрышко и

Современный период изучения биологического разнообразия характеризуется
хроматиновую сеть, клетки могут быть многоядерными. Совокупность гифов
интенсивным развитием филогенетической систематики, которая направлена на
реконструкцию конкретных путей исторического развития организмов. В образует мицелий (грибницу). Мицелий может быть субстратный, образующийся в
микробиологии филогенетическая систематика получила мощный импульс
результате врастания гифов в питательную среду и воздушный, растущий на
развития лишь в самом конце XX в. в связи со сравнительным изучением
консервативных нуклеотидных последовательностей в рРНК. У дрожжей такая поверхности среды. Мицелий представляет ветвящиеся трубки, ветвление

систематика строится главным образом на изучении двух участков рДНК длиной
около 600 нуклеотидных пар: D1/D2 домена на 5'-конце гена, кодирующего 26S
рРНК и внутреннего транскрибируемого спейсерного региона (ITS), включающего
ген 5.8S рРНК. Считается, что вследствие консервативности этих участков
осуществляется боковыми выростами гиф. Мицеальные нити иногда
располагаются параллельными рядами, тесно прилегая друг к другу, напоминая
«фитиль», отсюда и название «коремии» (у дерматофитов).

различия между ними прямо пропорциональны филогенетическому расстоянию,

степени эволюционного родства. Секвенирование неклеотидных
последовательностей рДНК оказалось мощным инструментом для построения
филогенетической классификации дрожжей, определения их места в общей
системе грибов.
К настоящему времени расшифрованы и помещены в компьютерные банки данных,
доступные по сети Интернет, нуклеотидные последовательности рРНК у
представителей всех известных видов дрожжей. Это позволяет строить
филогенетические деревья, отражающие эволюцию их рибосомальных генов.
Оказалось, что группирование дрожжей на основе сходства нуклеотидных
последовательностей рРНК во многих случаях не совпадает с группированием по
фенотипическим признакам. Многие традиционные признаки, используемые в
классификации дрожжей, такие как характеристики вегетативного размножения,
форма аскоспор, способность к сбраживанию и ассимиляции сахаров, стали
считаться ненадежными, не пригодными для определения филогенетического
родства. Секвенирование рРНК (рДНК) сейчас считается необходимым при
описании новых видов дрожжей.
Особенно сильное влияние на изучение дрожжей, также как и большинства других
групп микроорганизмов, оказало бурное развитие в конце XX в. молекулярной
биологии. В современной систематике дрожжей широко используются методы
геносистематики, основанные на непосредственном сравнении геномов и
секвенировании нуклеотидных последовательностей. Применение единых
молекулярно-биологических методов позволило еще больше сблизить подходы к
таксономии дрожжевых и мицелиальных грибов, установить связи между
дрожжевыми анаморфами и мицелиальными телеоморфами, разработать новые
критерии для создания единой филогенетической системы всего царства Mycota. В
то же время, новые знания породили и новые научные проблемы, в частности,
проблему соотношения новейших молекулярных методов с традиционными,
основанными на морфологических и физиологических подходах к изучению
дрожжей. Практически полностью расшифрован геном Saccharomyces cerevisiae,
что открывает огромные перспективы геномики дрожжей, новые горизонты их
биотехнологического использования. Таким образом, наука о дрожжах, проделав
более чем полуторавековой путь, продолжает интенсивно развиваться и в XXI в.
Для микроскопического исследования готовят как нативные (неокрашенные), так и
окрашенные препараты. Для изучения грибков в тканях проводится
патогистологическое исследование.
клеточный дрожжи мицелий спора
31.Основные принципы классификация и морфология простейших. Методы их
исследования и медицинское значение.
Простейшие- одноклеточные эукариоты, близкие по строению к клеткам сложно
организованных животных.
Форма может быть грушевидной (трихомонады, лямблии), яйцевидной
(балантидий), веретенообразной (трипаносомы, лейшма-нии), могут принимать
самую причудливую конфигурацию (амебы)

Большинство простейших подвижно и передвижение осуществляется с помощью

псевдоподий (амебы, малярийный плазмодий), жгутиков (лямблии, лейшмании),
ресничек (балантидий).
Псевдоподии – временные выпячивания цитоплазмы, выпуская которые
простейшие все время меняют форму тела.
Простейших относят к царству Protozoa (protos - первый , zoa - животные).
Медицинское значение имеют:
1. Тип Sarcomastigophora, подтип Sarcodina (саркодовые). Тело их
лишено пелликулы, передвигаются с помощью псевдоподий. К этому классу
относятся различные виды амеб, в том числе дизентерийная амеба (Entamоeba
histolytica).
2. Тип Sarcomastigophora, подтип Mastigophora (жгутиконосцы).
Имеют тонкую пелликулу и снабжены жгутиками для передвижения. Из
паразитических простейших в этот подтип входят трипаносомы (Trypanosoma
gambiense), лямблии (Giardia lamblia), лейшмании (Leishmania donovani, Leishmania
tropica) вызывающие соответственно африканскую сонную болезнь, лямблиоз,
лейшманиоз.
3. Тип Ciliophora (реснитчатые, инфузории). Тело покрыто
пелликулой со множеством коротких ресничек, при помощи которых инфузории
передвигаются. Паразитическим представителем этого класса является балантидий
(Balantidium coli), вызывающий балантидиаз.
4, Тип Apicomplexa, класс Sporozoa (споровики). Класс состоит исключительно
из паразитических простейших. Передвигаются они при помощи псевдоподий или
жгутиков. Последние образуются при половом размножении у микрогамет отрядов
гемоспоридий и кокцидий. В состав класса входят 4 вида малярийных плазмодиев
(Plasmodium vivax, malariae, ovale, fallсiparum), вызывающих малярию (рис. 29),
токсоплазма (Toxoplasma gondii), вызывающая токсоплазмоз.
Методы исследования. Для изучения простейших готовят временные и постоянные
(окрашенные) препараты. Временный препараты готовят методом «раздавленной
капли» или «висячей капли» с добавлением теплого физиологического раствора
или витальных прижизненных красителей. Из крови готовят препараты «толстая
капля». Для этого палец, обработанный эфиром, поворачивают проколом вниз и к
выступающим каплям подносят предметное стекло, на которое берут 2-3 капли
крови, и затем иглой или углом другого предметного стекла кровь распределяют,
чтобы получить овал около 1 см, для ускорения высыхания препарата, его можно
поместить в термостат при 35-370С.
Из внутренних органов готовят мазки-отпечатки. Препараты фиксируют
метиловым спиртом или смесью спирт – эфир (1:1) и окрашивают по
Романовскому-Гимзе, железным гематоксилином по Гейденгайну или 1%
метиленовым синим. При окраске по Романовскому-Гимзе цитоплазма паразита
окрашивается в голубой цвет, ядро и жгутики – в красновато-фиолетовый. При
использовании железного гематоксилина по Гейденгайну цитоплазма красится в
серовато-голубой, а ядерные структуры простейших в черный цвет.
Для обнаружения цист применяют крепкий раствор Люголя, окрашивающий
структуры цист в темно-коричневый цвет.
Окраска железным гематоксилином по методу Гейденгайна
1. Мазки после фиксации помещают в 2,5% раствор железоаммиачных
квасцов на 1 час.
2. После трехкратного ополаскивания в воде окрашивают красителем (0,5 г
гематоксилина, 10 мл 960 спирта и после растворения добавляют 90 мл
дистиллированной воды) в течение 5-10 мин.
3. Промывают водой и высушивают.
Окраска незаменима в тех случаях, когда нужно выявить тончайшие детали
строения ядра и цитоплазмы простейших.