CIENCIAS DE LA VIDA - INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

QUIMICA AMBIENTAL

Vaca. A.

CROMATOGRAFIA

La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más

compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria
y la otra una fase móvil. La característica que distingue a la cromatografía de
la mayoría de los métodos físicos y químicos de separación, es que se ponen
en contacto dos fases mutuamente inmiscibles. Una fase es estacionaria y la
otra móvil. (1)

El reparto entre las fases aprovecha las diferencias entre las propiedades
físicas y/o químicas de los componentes de la muestra. La columna de
separación es el corazón del cromatógrafo. Proporciona versatilidad en los
tipos de análisis que pueden realizarse. Esta característica, debida a la amplia
gama de selección de materiales para las fases móvil y estacionaria, permite
separar moléculas que difieren muy poco en sus propiedades físicas y
químicas. (1)

Sus orígenes se remontan a los primeros años del siglo XX (1901-1903). Fue el
botánico ruso Mijail Semenovich Tsvet, nacido en Asti (Italia), quien hizo
estudios muy completos sobre los pigmentos vegetales e inventó, para
separarlos, la técnica conocida con el nombre de cromatografía. (2)

La cromatografía, en sus diversas aplicaciones, ha demostrado ser una de las

técnicas más eficaces y explotadas por los investigadores y técnicos cuando se
enfrentan a problemas en el ámbito analítico.

Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según como este

dispuesta la fase estacionaria:
Figura 1: Clasificación de la Cromatografía según su fase estacionaria.

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

En la cromatografía en capa fina,

CCF o TLC, se puede utilizar como
soporte cualquier sustancia que
pueda dividirse en partículas finas
y distribuirse uniformemente en
forma de láminas. Esto incluye
sustancias inorgánicas y orgánicas
(3). La utilización de soportes
hidrófobos facilita la separación de
compuestos no polares. En la CCF,
la fase estacionaria es una lámina
de 0,25-0,50 mm de espesor,
extendida de forma uniforme sobre

Figura 2: Esquema de los resultados de una

cromatografía en capa fina y cálculo del Rf.
la superficie de una placa de vidrio o plástico. Aunque muchas casas
comerciales suministran placas ya preparadas, éstas pueden hacerse en el
laboratorio con aparatos especiales que permiten extender sobre la placa de
vidrio o plástico la “papilla” formada por la suspensión del material en un
disolvente adecuado (generalmente agua). La placa ha de dejarse secar antes
de ser utilizada.

CROMATOGRAFIA EN PAPEL

La cromatografía en papel es la técnica de separación e identificación de

sustancias químicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras
de papel de filtro.

Se toma una pieza de papel de filtro y cerca de uno de sus extremos se

deposita una gota de la solución que contiene la mezcla de las sustancias que
se quieren separar. Se deja secar la gota y quedara la mancha de las
sustancias mezcladas. El extremo del papel mas próximo a la mancha se
introduce en un disolvente apropiado, pero sin que la mancha llegue a
introducirse en él.

Existen muchos tipos de cromatografía sobre papel, una primera división de las
variadas clases podría ser:

1- Cromatografía
ascendente: el
disolvente se
encuentra en el
fondo del
recipiente que
sostiene al papel y
va subiendo a
través de el por
capilaridad.

2- Cromatografía
descendente: el
disolvente esta en
un recipiente del
que cuelga el
Figura 3: Tipos de cromatografía de papel.
papel, fluye por él
hacia abajo por
una combinación de capilaridad y gravedad.
CROMATOGRAFIA DE FILTRACION EN GEL

Figura 4: Esquema de Cromatografía

de filtración en gel.

La cromatografía de filtración en
gel permite separar moléculas en
función de su tamaño molecular.
La capacidad separadora reside
fundamentalmente en el gel cuya
matriz consta de un gran número
de esferas porosas microscópicas.
Cada gel se caracteriza por un
rango de fraccionamiento que
depende del tamaño de sus poros.

Con la cromatografía de filtración

en gel se separan moléculas en
virtud de sus diferencias de tamaño. La capacidad separadora reside en el gel
cuya matriz consta de un gran número de esferas porosas microscópicas.
Estas esferas están constituidas por largas cadenas de polímeros unidas entre
si por enlaces químicos para formar una red tridimensional.

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

La separación por cromatografía de

intercambio iónico depende de la adsorción
reversible de una molécula de soluto cargada
a un grupo de intercambiadores iónicos
inmovilizados de carga opuesta

Figura 5: Principio de la Cromatografía de

intercambio iónico

La mayoría de los experimentos de intercambio se realizan en cinco etapas:

 1. Equilibrio de la matriz (pH, fuerza iónica)

2. Adsorción de la muestra

3. Comienzo de la remoción

4. Fin de la remoción

5. Regeneración de la matriz

En este tipo de cromatografía se utiliza generalmente un detector de

conductividad. En este caso es muy importante considerar la conductividad del
eluyente, comparativamente con la de los anualitos a determinar.

CROMATOGRAFIA DE GASES

En cromatografía de gases, la
muestra se inyecta en la fase
móvil, la cual es un gas inerte
(generalmente He). En esta fase,
los distintos componentes de la
muestra pasan a través de la
fase estacionaria que se
encuentra fijada en una columna.
Actualmente, las más empleadas
son las columnas capilares. La
columna se encuentra dentro de
un horno con programación de
temperatura. La velocidad de
migración de cada componente (y
en consecuencia su tiempo de
retención en la columna) será
función de su distribución entre la fase móvil y la fase estacionaria.

Figura 4: Esquema de un cromatógrafo de gases

Cada soluto presente en la muestra tiene una diferente afinidad hacia la fase
estacionaria, lo que permite su separación: los componentes fuertemente
retenidos por esta fase se moverán lentamente en la fase móvil, mientras que
los débilmente retenidos lo harán rápidamente. Un factor clave en este
equilibrio es la presión de vapor de los compuestos (en general, a mayor
presión de vapor, menor tiempo de retención en la columna). Como
consecuencia de esta diferencia de movilidad, los diversos componentes de la
muestra se separan en bandas que pueden analizarse tanto cualitativa como
cuantitativamente mediante el empleo de los detectores seleccionados. (6)
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN EN COLUMNA

La fase estacionaria está constituida

por un sólido que se empaqueta en
una columna, normalmente de vidrio.
Los componentes a separar se añaden
en forma soluble por la parte superior
de la columna, quedando retenidos en
la misma. Posteriormente los
componentes se desplazan
arrastrados por una fase móvil líquida.
Dependiendo de la absorción selectiva
de cada uno de ellos por la fase
estacionaria se desplazan a distinta
velocidad, efectuándose la separación.
Para que haya una separación efectiva
de los componentes, su velocidad a
través de la columna debe ser
suficientemente diferente y la longitud
de la columna, adecuada.

Figura 6: Cromatografía de absorción en columna

BIBLIOGRAFÍA:

1. CROMATOGRAFÍA: PRINCIPIOS GENERALES. Disponible en:

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cromagraf.pdf

2. J.M.Casas, J.García, J.M:Guadayol, J.Olivé. Análisis instrumental 2:

Cromatografía y electroforesis. Edición UPC, Barcelona, 250p. (1994).

3. Cromatografía. Otros tipos de cromatografía. Disponible en:

http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_altres.html.
Consultado 6/05/2011

4. Túnez Isaac. Cromatografía en capa fina de lípido. (2005 )Departamento de

Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Medicina. Disponible en:
http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/12%20CROMATOGRAF%C3%8DA%20DE%20CAPA%20FINA%20DE
%20L%C3%8DPIDOS.pdf Consultado: 08/05/11

5. SN. 2003. Cromatografía liquida. Disponible en: http://ocw.usal.es/ciencias-

experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieria-
quimica/contenidos/course_files/Diapositivas_tema_12.pdf Consultado :
08/05/11
6. Gutiérrez, M. LA CROMATOGRAFÍA DE GASES Y LA ESPECTROMETRÍA DE MASAS:
IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS CAUSANTES DE MAL OLOR.2002. Disponible
en :
http://upcommons.upc.edu/revistes/bitstream/2099/2733/1/5CROMGASES.pdf