МОРФОЛОГИЯ 2016

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ
Харьковский национальный медицинский университет

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ СТУДЕНТОВ
дисциплины «Микробиология, вирусология и иммунология»

студентами 2 курса медицинских факультетов
МОДУЛЬ 1
МОРФОЛОГИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ
МИКРООРГАНИЗМОВ.
ИНФЕКЦИЯ. ИММУНИТЕТ
1
Методическое указание для студентов к практическому занятию 1
Тема: Правила работы в микробиологической лаборатории. Иммерсионный
микроскоп. Шаровидные бактерии. Простые методы окраски
Цель: Освоения практических навыков работы в микробиологической
лаборатории, приготовление мазков, окраска простыми методами
Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет.
Содержательный модуль 1. Введение в микробиологию.
Тема 1: Предмет и задачи медицинской микробиологии. Оригинальные методы
микробиологического исследования. Принципиальные черты современной медицинской
микробиологии. Тенденции ее развития. Тема 2: Этапы развития микробиологии.
Актуальность темы. Современные бактериологические лаборатории требуют
особого режима работы. При организации лабораторий, прежде всего, необходимо
обеспечить безопасность работы сотрудников. Учебная комната тоже есть, в некоторой
мере, бактериологической лабораторией и студенты при выполнении самостоятельной
работы тоже должны выполнять правила техники безопасности.
При изучении микроскопических препаратов используются иммерсионные
микроскопы, которые имеют преимущество перед световыми. Благодаря использованию
иммерсионного масла (кедрового или вазелинового), показатель преломления которого
равняется показателю преломление стекла, разрешающая способность иммерсионного
микроскопа равняется 0,2 мкм.
Знание морфологии бактерий имеет большое значение для микроскопического
метода лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. Изучение морфологии
бактерий осуществляется при микроскопии окрашенных микроскопических препаратов.
К простым методам окраски относятся: методы окраски метиленовым синим и
карболовым фуксином. Окраска метиленовым синим проводится на протяжении 3–5 мин,
а окраска карболовым фуксином 1–2 мин.
Кокки – это шаровидные бактерии, которые в зависимости от расположения
делятся на микрококки, диплококки, стафилококки, стрептококки, тетракокки и сарцины.
Микрококки располагаются в виде отдельных клеток, диплококки – парами (гонококк,
пневмококк, менингококк), так как клетки после деления не расходятся, стрептококки –
в виде цепи, стафилококки – неправильными скоплениями в виде гроздьев винограда.
Пневмококк (возбудитель пневмонии) имеет с противоположных сторон ланцето-
видную форму, а гонококк (возбудитель гонореи) и менингококк (возбудитель
эпидемического менингита) – форму кофейных зерен, обращенных вогнутой поверхностью
друг к другу. Стрептококки (от греч. streptos - цепочка) – клетки округлой или вытянутой
формы, составляющие цепочку вследствие деления клеток в одной плоскости и сохранения
связи между ними в месте деления. Сарцины (от лат. sarcina – связка, тюк) располагаются в
виде пакетов из 8 и более кокков, так как они образуются при делении клетки в трех взаимно
перпендикулярных областях. Стафилококки (от греч. staphyle – виноградная гроздь)
представляют собой кокки, расположенные группами (гроздьями) в результате деления в
разных плоскостях.
Конкретные цели:
1. Ознакомиться с правилами работы в бактериологической лаборатории.
2. Трактовать методики приготовления бактериологических препаратов.
3. Описывать морфологические формы шаровидных бактерий.
4. Трактовать результаты микроскопического исследования микроорганизмов.
5. Анализировать морфологию шаровидных бактерий.
Уметь:
1. Готовить микропрепараты из чистых культур шаровидных бактерий.
2. Красить микропрепараты простыми методами (метиленовым синим и фуксином).
3. Проводить микроскопию микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа.
2
4. Анализировать морфологию шаровидных бактерий.
Теоретические вопросы:
1. Правила работы в бактериологической лаборатории.
2. Строение иммерсионного микроскопа.
3. Характеристики иммерсионного объектива.
4. Правила использования иммерсионного микроскопа при микроскопии окрашенных
препаратов.
5. Красители для простых методов окраски.
6. Техника приготовления препаратов из культур бактерий и окраска их простыми методами.
7. Шаровидные бактерии, их морфология.
8. Примеры кокков патогенных для человека и заболеваний, вызванных ними.
Практические задачи, которые выполняются на занятии:
1. Приготовление микропрепаратов из чистых культур шаровидных бактерий.
2. Окраска микропрепаратов простыми методами.
3. Микроскопия микропрепаратов из чистых культур бактерий, их анализ и зарисовка
в протокол.
4. Микроскопия демонстрационных микропрепаратов: стафилококк (окраска
метиленовым синим), стрептококк (окраска метиленовым синим), пневмококк
(окраска метиленовым синим)
5. Зарисовка демонстрационных микропрепаратов в протокол.
6. Оформление протокола.
Литература:
1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией /
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. – К. : Высшая шк., 1992. – 431 с.
2. Микробиология / А.В. Воробьев, А.С. Быков, Э.П. Пашков, А.М. Рыбакова.– М. :
Медицина, 1998. – 336 с.
3. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЄОТАР-МЕД,
2001. – 768 с.
4. Конспект лекции.
Краткие методические указания к работе на практическом занятии

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.
Самостоятельная работа состоит из изучения правил техники безопасности при
работе в бактериологической лаборатории, изучения правил работы с иммерсионным
микроскопом. Студенты готовят микропрепараты, красят их простыми методами и
проводят микроскопию. Потом студенты зарисовывают микропрепараты и дают
необходимые объяснения. В состав самостоятельной работы входит также микроскопия
демонстрационных препаратов, и их зарисовка.
В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ итогов результатов
самостоятельной работы каждого студента.
Тестовые задания исходного уровня

1. Иммерсионный микроскоп отличается от светового:
А. Использованием дополнительного источника света.
В. Использованием специального конденсора.
С. Использованием иммерсионного масла.
D. Использованием специального окуляра.
E. Использованием диафрагмы.
2. Оптическая часть иммерсионного микроскопа состоит из:
А. Объектив, зеркало. D. Объектив, окуляр, конденсор.
В. Объектив, окуляр. Е. Объектив, окуляр, конденсор, зеркало.
3
С. Объектив, окуляр, зеркало.
3. Полезное увеличение микроскопа определяется:
А. Суммой увеличения объектива и окуляра.
В. Умножением увеличений объектива на окуляр.
С. Увеличением объектива и конденсора.
D. Увеличением объектива, конденсора, окуляра.
Е. –.
Целевые обучающие задания
1. У мужчины 54 лет, страдающего хроническим тонзилитом, в мазке из зева выявлены
шаровидные бактерии, которые образуют гроздевидные скопления. Как называются
бактерии с таким расположением?
А. Стафилококки. С. Микрококки. E. Менингококки.
В. Стрептококи. D. Сарцины.
2. При плановом обследовании персонала одного из детских садов на бактерионосительство
патогенных бактерий, у одной из воспитательниц выделена чистая культура шаровидных
бактерий. При микроскопии в микропрепарате выявлены грамеположительные бактерии в
виде коротких цепочек. Носительство какого вида бактерий можно заподозрить в этом
случае?
А. Менингококки. C. Микрококки. E. Стафилококки.
B. Стрептококки. D. Сарцины.
3. После перенесенной инфекции верхних дыхательных путей ребенок длительное время
жалуется на боли в суставах, которые усиливаются в осенний период. Какой
микроорганизм был наиболее вероятной причиной перенесенного заболевания?
A. S. Аureus. В. S. Рyogenes. С. S. pneumonia. D. N. meningitides. E. N. gonorrhoeae.
4. В хирургическом отделении возникла вспышка госпитальной инфекции, вызванная
S.aureus. Как располагается S.aureus в микропрепаратах?
А. Группами по 4 клетки. С. Парами. Е. Гроздевидно.
В. В виде цепочки. D. В виде пакетов.
5. В больницу обратился больной с жалобами на гнойные выделения из уретры и боль при
мочеиспускании. Какай вид бактерий, вероятнее всего, вызвал данное заболевание?
A. S. аureus. С. S. pneumoniae. Е. N. gonorrhoeae.
В. S. Рyogenes. D. N. meningitides.
6. Известно, что при фиксации мазков используют различные растворы и методы. Каким
образом необходимо проводить фиксацию мазков, приготовленных из крови?
А. Карболовым фуксином. С. Этиловый спирт (96о). Е. Хлороформ.
В. Смесью Никифорова. D. Плаям.
7. У ребенка 5 лет, больного ангиной, в мазке из зева выявили бактерии, которые имели
булавовидные утолщения на концах. Как называются бактерии с такой морфологией?
A. Возбудитель столбняка. D. Возбудитель сибирской язвы.
B. Возбудители дифтерии. E. Возбудитель туберкулеза.
C. Возбудитель ботулизма.
Алгоритм лабораторной работы:
1. Изучение инструкции "Правила работы в бактериологической лаборатории".
2. Изучение правил работы с иммерсионным микроскопом.
3. Знакомство с оборудованием для проведения бактериологической работы, способа
стерилизации бактериологической петли.
4. Приготовление мазков из культуры стафилококка.
5. Фиксация мазков пламенем.
6. Окрашивание мазков метиленовым синим на протяжении 3–5 мин.
7. Окрашивание мазков фуксином на протяжении 1–2 мин.
8. Микроскопия мазков с помощью иммерсионного микроскопа.
9. Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов.
4
10. Зарисовывание препаратов в протокол.
5
Граф логической структуры темы "МОРФОЛОГИЯ ШАРОВИДНЫХ БАКТЕРИЙ"
Шаровидные бактерии
Классификация
Микрококк Стафилококк Стрептококк Диплококк Тетракокк Сарцина
Расположение Одиночные Группами в виде Цепочки разной По четыре Пакеты по

клетки гроздьев винограда длины Парами
клетки 8–16 клеток
Примеры M. luteus S. aureus S. pyogenes N. gonorrhoeae

M. roseus S. epidermidis S. pneumoniae N. meningitides
Способ изучения Микроскопия при помощи иммерсионного микроскопа
6
Тема: Палочковидные бактерии. Окраска по Граму. Ультраструктура бакте-

риальной клетки
Цель: Освоения практических навыков окраски по методу Грама. Изучения
структуры бактериальной клетки

Содержательный модуль 1. Введение в микробиологию.
Тема 1: Предмет и задачи медицинской микробиологии. Оригинальные методы
микробиологического исследования. Принципиальные черты современной медицинской
микробиологии. Тенденции ее развития. Тема 2: Этапы развития микробиологии.
Актуальность темы. По своей структуре бактерии (прокариоты) существенным
образом отличаются от эукариотической клетки. Прокариоты – гаплоидные организмы,
которые содержат один геном, не имеют ядра и большинства органоидов. Состоят из
нуклеоида, цитоплазмы и оболочки. В цитоплазме могут находиться плазмиди –
генетические структуры в виде небольших молекул ДНК, рибосомы и включения.
Включения могут быть в виде волютина, гликогена, гранульози, пигментов, капель серы,
кальция гидрокарбоната и используются при идентификации некоторых бактерий.
Например, возбудитель дифтерии содержит на концах зерна волютина (метафосфаты), что
позволяет их идентифицировать. Изучение морфологии бактерий осуществляется при
микроскопии окрашенных микроскопических препаратов. Основным методом окраски
бактерий есть окраска по Граму. Соответственно особенностям окраски по Граму все
бактерии делятся на грамположительные и грамотрицательные. Этому признаку придают
большое значение в современной таксономии.Деление на группы зависит от строения
клеточной стенки. Основное вещество клеточной стенки – пептидогликан (муреин),
связанный с липопротеидами, фосфолипидами, липополисахаридами. В клеточной стенке
грамположительных бактерий содержание пептидогликана составляет 90%, а в
грамотрицательных – 5–20%. У грамположительных бактерий есть пласт гликопептидов с
тейхоевой кислотой, которая предопределяет стабильность ферментов клетки. При
окраске по Граму, такое строение клеточной стенки грамположительных бактерий
предопределяет стойкое соединение ее с генцианвиолетом и раствором Люголя и
бактерии даже после обработки спиртом остаются сине-фиолетового цвета.
Грамотрицательные бактерии обесцвечиваются спиртом и при дополнительной окраске
фуксином становятся красными.
Знание морфологии палочковидных бактерий имеет большое значение, так как
большинство инфекционных болезней вызываются именно палочковидными бактериями.
Они делятся на собственно бактерии, бациллы и клостридии. Палочковидные бактерии
различаются по размерам, форме концов клетки и взаимному расположению клеток.
Длина палочковидных бактерий 1–10 мкм, толщина – 0,5–2 мкм. Палочки могут быть
правильной (кишечная палочка и др.) и неправильной (коринебактерии и др.) формы, в
том числе ветвящиеся, например актиномицеты. Наиболее мелкие палочковидные
бактерии – риккетсии. Концы палочек могут быть как бы обрезанными (сибиреязвенная
бацилла), закругленными (кишечная палочка), заостренными (фузобактерии) или в виде
утолщения, и тогда палочка похожа на булаву (коринебактерии дифтерии).
К собственно бактериям относятся бактерии, которые не образуют спор (эшерихии,
шигелли, возбудители дифтерии и др.). Бациллы и клостридии большей частью образуют
споры и отличаются местоположением спор, характером концов палочек и их
расположением. Так, клостридии имеют заостренные концы и напоминают веретено, а у
7
бацилл концы палочек обрубленные. К бациллам относятся возбудители сибирской язвы,
к клостридиям – возбудители столбняка, ботулизма и др.
1. Выучить ультраструктуру бактериальной клетки.
2. Проанализировать отличия в строении эукариотов (простейших) и прокариотов.
3. Ознакомиться со строением клеточной стенки грамположительных и грамотри-
цательных бактерий.
4. Уметь дифференцировать грамположительные и грамотрицательные бактерии в
микропрепаратах.
5. Описывать морфологические формы палочковидных бактерий.
6. Анализировать морфологию палочковидных бактерий.
Уметь:
1. Готовить микропрепараты из чистых культур палочковидных бактерий.
2. Готовить микропрепараты из смеси бактерий.
3. Красить микропрепараты по методу Грама.
4. Распознавать грамположительные и грамотрицательные бактерии в смеси бактерий.
6. Анализировать морфологию палочковидных бактерий.
1. Морфология палочковидных бактерий.
2. Деление палочковидных бактерий по форме, размеру, характеру их концов и взаимному
расположению.
3. Деление палочек на бактерии, бациллы и клостридии.
4. Ультраструктура бактериальной клетки.
5. Строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.
6. Окраска по методу Грама (механизм метода, техника).
7. Отношения разных групп бактерий к окраске по Граму. Практическое значение.
8. Примеры грамположительных и грамотрицательных бактерий, патогенных для
человека и заболеваний, вызванных ними.
1. Приготовление микропрепаратов из чистых культур палочковидных бактерий и смеси
бактерий.
2. Окраска микропрепаратов по Граму.
3. Микроскопия микропрепаратов из чистых культур палочковидных бактерий, их анализ
и зарисовка в протокол.
4. Микроскопия демонстрационных микропрепаратов: собственно бактерии, стрепто-
бацилли (окраска по Граму), эритроциты и палочки (окраска по Романовскому-Гимза).
1. Пяткин К.Д. Микробиология с вирусологией и иммунологией / К.Д. Пяткин,
Ю.С. Кривошеин. – К. : Высшая шк., 1992. – 431 с.
2. Микробиология / А.В. Воробьев, А.С. Быков, Э.П. Пашков, А.М. Рыбакова.– М. :
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
8
Самостоятельная работа состоит из приготовления микропрепаратов из чистых
культур палочковидных бактерий и смеси бактерий, окраски их по Граму, проведения
микроскопии. Потом студенты зарисовывают микропрепараты и дают необходимые
объяснения. В состав самостоятельной работы входит также микроскопия
В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итогов результатов
1. В больницу обратился ветеринарный врач по поводу образования на коже карбункула.
При микроскопии гноя из карбункула выявили грамположительные стрептобациллы.
Какие бактерии могли вызвать образование карбункула в этом случае?
2. У ребенка 5 лет, больного ангиной, в мазке из зева выявили бактерии, которые имели
булавовидные утолщения на концах. Как называются бактерии с такой морфологией?
3. Известно, что ДНК в клетках прокариот образует нуклеоид. Какая из перечисленных
структур клеток бактерий также может быть носителем генетической информации, кроме
нуклеоида?
A. Рибосомы. B. Жгутики. C. Капсула. D. Мезосомы. E. Плазмиды.
4. Во время самостоятельной работы студентам предложено выявить внутриклеточные
включения гликогена у аэробных бацилл. Каким раствором необходимо провести
обработку препарата для выявления гликогена?
A. Раствором генцианвиалетом. D. Раствором метиленового синего.
B. Раствором фуксина. E. Раствором спирта.
C. Раствором Люголя.
5. У новорожденного, болеющего колиэнтеритом, при бактериологическом исследовании
фекалия изолировано чистую культуру бактерий, которые в микропрепаратах имели вид
маленьких грамотрицательных беспорядочно расположенных палочек с округлыми
концами. Какие бактерии были изолированы в данном случае?
A. Эшерихии. C. Коринобактерии. E. Стрептобактерии.
B. Стрептобациллы. D. Клостридии.
6. Известно, что в цитоплазме прокариот есть различные включения. Какие включения,
имеющие диагностическое значение, можно выявить у Corynebacterium diphteriae?
A. Гликоген. B. Волютин. C. Гранулеза. D. Пигмент. E. Сера.
1. Изучение инструкции "Правила работы в бактериологической лаборатории".
2. Изучение правил работы с иммерсионным микроскопом.
3. Знакомство с оборудованием для проведения бактериологической работы, способа
стерилизации бактериологической петли.
4. Приготовление мазков из культуры стафилококка.
6. Окрашивание мазков метиленовым синим на протяжении 3–5 мин.
7. Окрашивание мазков фуксином на протяжении 1–2 мин.
9
10. Зарисовывание препаратов в протокол.
10
Граф логической структуры темы: "УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ"
Ультраструктура бактериальной клетки
Поверхностные структуры Клеточная оболочка Цитоплазма
Жгутики Фимбрии F-пили Капсула Клеточная Нуклеоид Рибосомы

стенка ЦПМ
Грамположительные бактерии Грамотрицательные бактерии
Пептидогликан 90% Тейхоевые кислоты
Пептидогликан 20% Липополисахариды
11
12
Граф логической структуры темы: "ПАЛОЧКОВИДНЫЕ БАКТЕРИИ. ОКРАСКА ПО МЕТОДУ ГРАМА"
Палочковидные бактерии
Грамположительные Грамотрицательные
бактерии бактерии
Бациллы Клостридии Бактерии
В. anthracis
E. coli S. typhi B. pertussis
C. tetani C. botulinum C. novyi
13
Методическое указание для студентов к практическому занятию № 3
Тема: Вибрионы. Спирохеты. Жгутики у бактерий. Изучение подвижности
Цель: Изучение морфологии извитых микроорганизмов
Содержательный модуль 2. Морфология и структура прокариотов и паразитических
одноклеточных эукариотов.
Тема 3: Морфология и структура бактерий, спирохет, актиномицетов, грибов и простейших.
Актуальность темы. Знание морфологии вибрионов и спирохет имеет большое
значение для микроскопического метода лабораторной диагностики инфекционных
болезней. Изучение морфологии осуществляется как у окрашенных с помощью
иммерсионного микроскопа, так и в нативных препаратах с помощью микроскопов с
темным полем зрения и фазово-контрастного.
Вибрионы – вогнутая палочка, по Граму – негативна, монотрих.
Спирохеты – микроорганизмы в виде спирали, подвижные.
Слегка изогнутые палочки называют вибрионами (холерный вибрион).
Большинство палочковидных бактерий располагается беспорядочно, так как после
деления клетки расходятся. Если после деления клетки остаются связанными общими
фрагментами клеточной стенки и не расходятся, они располагаются под углом друг к
другу (коринебактерии дифтерии), образуют цепочку (сибиреязвенная бацилла).
Извитые формы – спиралевидные бактерии, например спириллы, имеющие вид штопо-
рообразно извитых клеток. К патогенным спириллам относится возбудитель содоку (болезни
укуса крыс), к извитым – кампилобактеры, имеющие изгибы, как у крыла летящей чайки;
близки к ним и такие бактерии, как спирохеты, имеющие ряд отличительных особенностей.
Спирохеты – тонкие, длинные, извитые (спиралевидной формы) бактерии,
отличающиеся от спирилл подвижностью, обусловленной "сгибательными" изменениями
клеток. Спирохеты состоят из наружной мембраны (клеточной стенки), окружающей
протоплазматический цилиндр с цитоплазматической мембраной и аксиальной нитью
(аксистиль). Аксиальная нить находится под наружной мембраной и как бы закручивается
вокруг протоплазматического цилиндра спирохеты, придавая ей винтообразную форму
(первичные завитки спирохет). Аксиальная нить состоит из фибрилл – аналогов жгутиков
бактерий и представляет собой сократительный белок флагеллин. Они прикреплены
к концам клетки и направлены навстречу друг другу. Другой конец фибрилл свободен.
Число и расположение фибрилл варьируют у разных видов. Фибриллы участвуют в
передвижении спирохет, придавая клеткам вращательное, сгибательное и поступательное
движение. При этом спирохеты образуют петли, завитки, изгибы, которые получили
название вторичных завитков. Они плохо воспринимают красители. Обычно спирохеты
окрашивают по методу Романовского-Гимзы или серебрением. В живом виде их
исследуют с помощью фазово-контрастной или темнопольной микроскопии.
Спирохеты представлены 3 родами, патогенными для человека: Treponema, Borrelia,
Leptospira. Спирохеты рода Treponema имеют по 8–12 равномерных мелких завитков.
Патогенными представителями являются Т. pallidum – возбудитель сифилиса и
Т. pertenue – возбудитель тропической болезни фрамбезии. Имеются и сапрофиты -
обитатели полости рта и ила водоемов. Спирохеты рода Borrelia более длинные, имеют по
3–8 крупных завитков. К ним относится возбудитель возвратного тифа В. recurrentis.
Спирохеты рода Leptospira имеют неглубокие и частые завитки – в виде закрученной
веревки. Концы этих нитевидных спирохет изогнуты наподобие крючков с утолщениями
на концах. Образуя вторичные завитки, они приобретают вид букв S или С. Патогенный
представитель – L. interrogans и др. Патогенные лептоспиры попадают в организм с водой
или пищей, приводя к развитию кровоизлияний и желтухи. Сапрофитные представители
обитают в воде.
Жгутики бактерий определяют их подвижность. Жгутики представляют собой
тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны; длина их больше, чем
длина клетки. Толщина жгутиков 12–20 нм, длина – 3–12 мкм. Число жгутиков у бактерий
различных видов варьирует от одного (монотрих) у холерного вибриона до десятка и сотен
14
жгутиков, отходящих по периметру бактерии (перитрих), у кишечной палочки, протея и др.
Лофотрихи имеют пучок жгутиков на одном из концов клетки, амфитрихи – по
одному жгутику или пучку жгутиков на противоположных концах клетки. Жгутики
прикреплены к цитоплазматической мембране и клеточной стенке специальными
дисками. По химическому составу жгутики состоят из белка – флагеллина (от англ.
flagella – жгутик), обладающего антигенной специфичностью. Субъединицы флагеллина
закручены в виде спирали. Жгутики выявляют с помощью электронной микроскопии
препаратов, напыленных тяжелыми металлами, или в световом микроскопе после
обработки препаратов специальными методами (например, после серебрения).
1. Ознакомиться с представителями вибрионов и спирохет.
2. Отрабатывать методики приготовления препаратов висячей и раздавленной капли для
изучения подвижности бактерий.
3. Описывать морфологические свойства извитых бактерий.
4. Трактовать результаты микроскопического исследования микроорганизмов.
5. Анализировать морфологию вибрионов и спирохет.
Уметь:
1. Готовить микропрепараты из чистых культур извитых бактерий, окрашивать их по
Граму и Бурри.
2. Проводить микроскопию микропрепаратов с помощью иммерсионного и с темным полем
зрения микроскопов.
3. Анализировать морфологию извитых бактерий (вибрионов, спирохет).
1. Назвать представителей патогенных вибрионов.
2. Охарактеризовать морфологию вибрионов.
3. Назвать классификацию патогенных спирохет.
4. Спирохеты. Структура и свойства.
5. Деление бактерий по характеру подвижности.
6. Жгутики, их структура, функции. Деление бактерий по количеству и расположению жгутиков.
7. Методы изучения подвижности вибрионов, спирохет.
8. Специальные микроскопы для изучения подвижности – фазово-контрастный и с
темным полем зрения (принцип строения, возможности использования для
наблюдения за подвижностью).
1. Приготовление мазков из культур вибрионов, окраска по Граму.
2. Просмотр демонстрационных микропрепаратов: вибрион, окраска по Граму,
спирохеты, окраска по Бурри, Романовмкому-Гимзе и серебрение.
3. Демонстрация приготовления висячей и раздавленной капли.
4. Разбор схем микроскопов: фазово-контрастного, с темным полем зрения.
1. Пяткін К.Д. Мікробіологія з вірусологією та імунологією / К.Д. Пяткін, Ю.С. Кри-
вошеїн. – К. : Вища школа, 1992. – 431 с.
2. Микробиология / А.В. Воробьев, А.С. Быков, Э.П. Пашков, А.М. Рыбакова. – М. :
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / под ред. акад. А.А. Во-
робьева. – М. : Медицинское информационное агентство, 2004. – 691 с.
Дополнительная литература:
15
1. Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену Крок-1. Загальна лікарська
підготовка. – К. : Медицина, 2004. – С. 300–333.
2. Методические указания для преподавателей к практическим занятиям по медицинской
микробиологии, вирусологии и иммунологии. – Харьков, 1986. – 125 с.
3. Сборник тестовых заданий для самоподготовки по медицинской микробиологии и
вирусологии. – Харьков, 2005. – 28 с.
Самостоятельная работа состоит из приготовления мазков из культуры вибрионов,
окраска по Граму, микроскопия. Студенты зарисовывают микропрепараты и дают
необходимые объяснения. В состав самостоятельной работы входит также микроскопия
В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ результатов
1. В мазке из испражнений больного выявлены грамотрицательные бактерии в виде
"запятой". Какие свойства следует, прежде всего, изучать с помощью микроскопа для
получения дополнительной информации о выявленных микробах?
A. Наличие жгутиков. С. Наличие спор. E. Наличие включений
В. Наличие капсул. D. Наличие включений волютина. гликогена.
2. При осмотре ротовой полости пациента N, врач-стоматолог обнаружил, что одна из
миндалин увеличена, красного цвета, при прикосновении шпателем – безболезненна.
Подчелюстные лимфоузлы увеличены. При микроскопии в темном поле зрения выявлены
подвижные, спиралевидные, грамотрицательные микроорганизмы. К какой
морфологической группе относятся эти микроорганизмы?
A. Спирохеты. B. Гонококки. С. Стрептококки. D. Стафилококки. E. Менингококки.
3. Известно, что для окраски спирохет используются специальные методы. Какой из
перечисленных методов окраски является для спирохет дифференциально-
диагностическим?
A. Романовского-Гимза. B. Грама. С. D. Бурри-Гинса. E. Ганзена.
Морозова.
4. В инфекционной больнице больному М. поставили диагноз "Холера". При микроскопии
рвотных масс были выявленные грамотрицательные, подвижные, слегка согнутые
палочки. В каком мазке или препарате можно изучить подвижность в данном
случае?
A. В мазке, окрашенном по Граму. D. В препарате "раздавленная капля".
B. В мазке, окрашенном по Циль-Нельсену. E. В мазке, окрашенном по Нейссеру.
C. В препарате "толстая капля".
5. В венерологическое отделение обратился больной с жалобой на безболезненную язву на
половом члене; врач-дерматолог поставил диагноз "Сифилис", возбудителем которого
является бледная спирохета. К какому роду относится возбудитель болезни?
A. Shigella. B. Treponema. C. Salmonella. D. Leptospira. E. Borellia.
6. В инфекционную больницу госпитализировали больного, у которого для исследования
взяли кровь. При проведении лабораторной диагностики бактериолог выполнил
темнопольную микроскопию капли крови больного, в результате чего выявил подвижные
извитые формы микроорганизмов в виде буквы "С" с утолщениями на концах. Назовите
возбудителя болезни.
A. Borellia. B. Leptospira. C. Treponema. D. Ricketsia. E. Bacteria.
1. Приготовление мазков из культуры холерного вибриона.
2. Фиксация мазка пламенем.
4. Микроскопия мазков при помощи иммерсионного микроскопа.
16
5. Демонстрация приготовления висячей и раздавленной капель.
6. Изучение подвижности в демонстрационных препаратах при помощи фазово-
контрастного микроскопа.
8. Зарисовка препаратов в протокол.
17
Тема: Споры. Спорообразование. Методы окраски спор

Цель: Изучение морфологии спорообразующих микроорганизмов

Актуальность темы. Знание морфологии имеет большое значение для

микроскопического метода лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. Изучение
морфологии бактерий осуществляется при микроскопии окрашенных микропрератов. Важно
при этом выявить такие компоненты микробной клетки, как споры. Только незначительное
количество бактерий образуют споры: клостридии столбняка, ботулизма, газовой раневой
инфекции, возбудитель сибирской язвы, чумы. Дифференциальным признаком спор есть их
расположение относительно клетки. Споры выявляют окрашиванием по методу Ганзена,
Грама.
Споры – своеобразная форма покоящихся фирмикутных бактерий, т. е. бактерий

с грамположительным типом строения клеточной стенки. Споры образуются при
неблагоприятных условиях существования бактерий, сопровождающихся высушиванием,
дефицитом питательных веществ и т. д. При этом внутри одной бактерии образуется одна
спора. Поэтому образование спор способствует сохранению вида и не является способом
размножения, как у грибов. Спорообразующие аэробные бактерии, у которых размер
споры не превышает диаметра клетки, называются бациллами, а спорообразующие
анаэробные бактерии, у которых размер споры превышает диаметр клетки и они поэтому
принимают форму веретена, называются клостридиями (от лат. clostridium – веретено).
Процесс спорообразования проходит ряд стадий, в течение которых часть
цитоплазмы и хромосома отделяются, окружаясь цитоплазматической мембраной;
образуется проспора, затем формируется многослойная плохо проницаемая оболочка.
Спорообразование сопровождается интенсивным потреблением проспорой, а затем
формирующейся оболочкой споры дипиколиновой кислоты и ионов кальция. После
формирования всех структур спора приобретает термоустойчивость, которую связывают с
наличием дипиколината кальция. Спорообразование, форма и расположение спор в клетке
(вегетативной) являются видовым свойством бактерий, что позволяет отличать их друг от
друга. Форма спор может быть овальной, шаровидной; расположение в клетке
терминальное – на конце палочки (возбудитель столбняка), субтерминальное – ближе к
концу палочки (возбудители ботулизма, газовой гангрены) и центральное (сибиреязвенная
бацилла).
Специфические элементы споры, включая многослойную оболочку и дипиколинат
кальция, обусловливают ее свойства: она долго может сохраняться в почве, например
возбудители сибирской язвы и столбняка - десятки лет. В благоприятных условиях они
прорастают, проходя три стадии: активацию, инициацию, вырастания. При этом из
одной споры образуется одна бактерия. Активация - готовность к прорастанию. Она
ускоряется при прогревании при температуре 60–80 °С. Инициация прорастания длится
несколько минут. Вырастание характеризуется быстрым ростом, сопровождающимся
разрушением оболочки споры и выходом проростка.
18
1. Обучить методике приготовления бактериологического препарата для выявления спор.
2. Практиковать методики окрашивания спор.
3. Делать выводы о микроскопии бактериологических препаратов при использовании
иммерсионного микроскопа.
4. Описывать дифференциальные признаки расположения спор относительно микробной
клетки.
5. Практиковать результаты микроскопического исследования микропрепаратов.
6. Проанализировать морфологию спорообразующих бактерий в целом.
Уметь:
1. Готовить микропрепараты из спорообразующих бактерий;
2. Окрашевать микропрепараты по Ганзену;
3. Проводить микроскопию микропрепаратов при помощи иммерсионного микроскопа;
4. Анализировать морфологию бактерий, образующих споры.
1. В каких условиях и как происходит процесс спорообразования (стадии)?
2. Сравнительная устойчивость спор и вегетативной формы бактерий.
3. Использовать признаки спорообразования для идентификации бактерий.
4. Форма, расположение спор и их величина относительно диаметра вегетативной клетки,
характерные для отдельных видов.
5. Назвать бактерии, образующие спору, и заболевания, вызванные ними. Объяснить,
почему одни из них называются клостридиями, а другие – бациллами.
6. Основной метод окраски спор (по Ганзену).

1. Приготовление микропрепаратов из спорообразующих бактерий.
2. Окраска микропрепаратов по Ганзену.
3. Микроскопия собственных микропрепаратов, их анализ и зарисовка в протокол.
4. Микроскопия демонстрационных препаратов: клостридии (терминальная,
субтерминальная спора), бацилла (центральная спора), окраска по Ганзену и по Граму.
5. Зарисовка демонстрационных препаратов в протокол.
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
робьева. – М. : Медицинское информационное агентство, 2004. – 691 с.
5. Конспект лекций.
19
Самостоятельная работа состоит из приготовления мазков из спорообразующих
культур, окраски их по методу Ганзена, проведения микроскопии. Потом студенты
зарисовывают микропрепараты и дают необходимые объяснения.
В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных
препаратов и их зарисовка.
1. Из мясных консервов выделена культура Сlostridium botulinum. Какой из

перечисленных методов окраски необходимо использовать для выявления спор у этого
возбудителя?
А. Бурри- B. Романовского-Гимзы. C. Ганзена. D. Леффера. Е. Бурри.
Гинса.
2. Известно, что споры в бактериальной клетке могут располагаться центрально,
субтерминально и терминально. Для каких бактерий характерно центральное расположение
спор?
А. Bacillus anthracis. C. Clostridium botulinum. Е. Clostridium tetani.
B. E. coli. D. Clostridium difficile.
3. Для выявления спор у бактерий используются специальные методы окраски. Какой из
перечисленных методов можно использовать для выявления спор у Cl. tetani?
А. Циля-Нельсена. B. Романовского-Гимзы. C. Ганзена. D. Гинса. Е. Бурри.
4. В бактериологической лаборатории исследовалась вяленая рыба домашнего
приготовления, ставшая причиной тяжелого пищевого отравления. В микропрепаратах
выявлены микроорганизмы, напоминающие теннисную ракетку. Развитие какого
заболевания наиболее вероятно вызовут указанные микроорганизмы?
А. В. Ботулизм. С. Брюшной тиф. D. Холеру. Е. Сальмонеллез.
Дизентерию.
5. Подобно другим клостридиям, C. perfringens широко распространен во внешней среде,
особенно в окультуренных почвах. Он сохраняется не только в виде спор, но и активно
вегетирует, особенно при:
A. Низкой t°. C. Повышеной tº (35°). E. tº = – 10°.
B. Повышеной tº (45°). D. tº = – 5°.
6. Споры образуются при неблагоприятных условиях окружающей среды (высушивание,
дефицит питательных веществ и др.). При этом в средине одной бактерии образуется:
A. Много спор. C. Одна спора. E. Три споры.
B. Две споры. D. До пяти спор.
7. При благоприятных условиях споры прорастают; проходя три последовательные
стадии: активацию, начальную стадию, стадию роста. При этом из одной споры
образуется:
A. Несколько бактерий. C. Много бактерий. E. Две пары бактерий.
B. Одна бактерия. D. Две бактерии.

1. Приготовление мазков из культуры спорообразующих бактерий.
20
3. Окрашивание мазков по методу Ганзена согласно освоенного метода.
21
Тема: Капсулы у бактерий и методы их выявления

Цель: Изучение морфологии микроорганизмов, образующих капсулу

Актуальность темы. Знание морфологии имеет большое значение для

микроскопического метода лабораторной диагностики инфекционных заболеваний.
Изучение морфологии бактерий осуществляется при микроскопии окрашенных
микропрератов. Изучение отдельных компонентов микробной клетки и выявление
(капсулы, зерен валютина) играет важную роль в дифференциации патогеных и
непатогенных микроорганизмов. Некоторые бактерии образуют капсулы, как в организме
человека, так и на питательных средах. Для их выявления существуют специальные
методы.
Капсулы у некоторых бактерий – внешний слой оболочки, который переходит в сли-
зистый шар. Эти бактерии выделены в отдельную группу под названием капсульных
бактерий. Выявить капсулу возможно по методу Бурри-Гинса, при окраски метиленовой
синькою.
Некоторые бактерии (пневмококки, клебсиеллы и др.) образуют капсулу –

слизистое образование, прочно связанное с клеточной стенкой, имеющее четко
очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках из
патологического материала. В чистых культурах бактерий капсула образуется реже. Она
выявляется при специальных методах окраски, создающих негативное контрастирование
вещества капсулы. Обычно капсула состоит из полисахаридов (экзополисахаридов),
иногда полипептидов, например у сибиреязвенной бациллы. Капсула гидрофильна, она
препятствует фагоцитозу бактерий. Многие бактерии образуют микрокапсулу - слизистое
образование, выявляемое при электронной микроскопии. От капсулы следует отличать
слизь – мукоидные экзополисахариды, не имеющие четких внешних границ.
Бактериальные экзополисахариды участвуют в адгезии (прилипании к субстратам), их еще
называют гликокаликсом.
Кроме того, что бактериальные экзополисахариды синтезируются бактериями
путем секреции их компонентов, существует и другой механизм их образования – при
действии внеклеточных ферментов на дисахариды. В результате этого образуются
декстраны и леваны. Капсула и слизь предохраняют бактерии от повреждений,
высыхания, так как они гидрофильны и хорошо связывают воду, препятствуют действию
защитных факторов макроорганизма и бактериофагов.
1. Выявление капсул в микропрепаратах из чистых культур, окраска по Бурри-Гинса.
2. Выявление капсул в препаратах-отпечатках из органов, окрашенных метиленовой
синькою.
3. Делать выводы о микроскопии бактериологических препаратов (капсульных) при
использовании иммерсионного микроскопа.
4. Описывать дифференциальные признаки расположения спор относительно микробной
клетки.
22
5. Проанализировать результаты микроскопического исследования микроорганизмов,
образующих капсулу, при окраске их по Бурри-Гинсу и метиленовой синькою.
Уметь:
1. Приготовить препараты для выявления капсул.
2. Окрашивать капсульные бактерии по Бурри-Гинса, метиленовой синькою.
3. Проводить микроскопию микропрепаратов при помощи иммерсионного микроскопа.
4. Анализировать морфологию капсульных бактерий.
1. Капсулы у бактерий.
2. Химический состав капсул.
3. Микробы, образующие капсулы только в организме, а также за его пределами.
4. Значение капсулообразования у микробов.
5. Использование признака капсулообразования с целью диагностики.
6. Методика выявления капсул в препаратах из чистых культур, окрашенных по Бурри-
Гинса.
7. Методика выявления капсул в препаратах-отпечатках из органов.
1. Приготовление микропрепаратов из капсульных бактерий по методу Бурри-Гинса.
2. Просмотр демонстрационных препаратов, окрашенных по методу Бурри-Гинса.
3. Просмотр препарата-отпечатка, окрашенного метиленовой синькою (возбудитель
сибирской язвы).
4. Зарисовка демонстрационных препаратов в протокол.
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
робьева,- М. : Медицинское информационное агентство, 2004. – 691 с.
Самостоятельная работа состоит из приготовления микропрепаратов, окраски их по
методу Бурри-Гинса, проведения их микроскопии. Потом студенты зарисовывают
микропрепараты и дают необходимые объяснения.
23
препаратов и их зарисовка.
1. Смыв со слизистой оболочки ротовой полости больного хроническим стоматитом

направили в баклабораторию. В микропрепарате были обнаружены диплококки,
окруженные капсулой. Какой из перечисленных методов окраски использован для
выявления капсулы при бактериоскопическом исследование мазков?
А. По Бурри-Гинсу. C. По Бурри. Е. По Романовскому-Гимзе.
B. По Леффлеру. D. По Ожежко.
2. Во время микробиологического исследования выявили неподвижные стрептобациллы,
которые способны образовывать капсулу. Как называются такие микроорганизмы?
А. Bacillus subtilis. С. Bacillus antracoides. Е. Bacillus megaterium.
В. Staphylococcus aureus. D. Bacillus anthracis.
3. Территорию старого скотомогильника, который не использовался более 50 лет,
планируется отвести под жилищное строительство. Однако, исследование почвы показало
наличие жизнеспособных спор возбудителя особоопасного заболевания. Какой из
названных микроорганизмов наиболее вероятно мог сохраняться в почве на протяжении
такого продолжительного времени?
A. Yersinsa pestis. C. Brucella abortus. E. Micobacterium bovis.
B. Francisella tularensis. D. Bacillus anthracis.
4. Больной 34 лет обратился по поводу карбункула на лице. Во время осмотра выявлен
неплотный, безболезненный отек подкожной жировой клетчатки, в центре карбункула -
черный струп, по периферии – везикулярные высыпания. Во время микробиологического
исследования выявили неподвижные стрептобациллы, способные образовывать капсулы.
Какие микроорганизмы являются возбудителями этого заболевания?
A. Bacillus anthracis. C. Bacillus anthracoides. E. Bacillus megaterium.
B. Staptylococcus aureus. D. Bacillus subtilis.
5. При постановке биологической пробы в мазках-отпечатках из органов животных
выявили стрептобактерии, окруженные капсулой. Это дает основание установить диагноз:
A. Туляремии. C. Чумы. E. Крупозной пневмонии.
B. Сибирской язвы. D. Бруцеллеза.
6. Во время микроскопии мокроты больного, с предварительным диагнозом "острая
пневмония", выявлено хаотически расположенные микроорганизмы, овоидной формы,
интенсивно окрашенные на полюсах, окруженные капсулой. Какой наиболее вероятный
возбудитель вызвал эту болезнь?
A. E. Coli. C. Streptococcus. E. Yersinia pestis.
B. Cor. Diphteriae. D. Staptylococcus.

1. Приготовление мазков из культуры Kl. pneumoniae.
3. Окрашивание микропрепаратов по Бурри-Гинса.
5. Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов, окрашенных по Бурри-Гинса,
метиленовой синькою.
24
Методические указания для студентов к практическому занятию 6
Тема: Морфология простейших

Цель: Изучение морфологии патогенных простейших в препаратах из патоло-
гического материала

Актуальность темы. Простейшие (Protozoa) – это эукариотические
одноклеточные организмы, имеющие микроскопические размеры. Патогенные для
человека простейшие принадлежат к разным классам: саркодовые (дизентерийная амеба),
жгутиковые (лейшмании, лямблии, трихомонады, трипаносомы), споровики (токсоплазма,
малярийные плазмодии), реснитчатые (балантидии).
Простейшие широко распространены в природе. Это связано со способностью
простейших к быстрому размножению, их маленькими размерами, а также тем, что в
неблагоприятных условиях большинство из них образует цисты, которые способны
переносить изменения температуры, влажности и др. Для простейших характерен
сложный жизненный цикл, иногда со сменой хозяина, как, например, у возбудителя
малярии (комар-человек) или токсоплазмоза (кошка-человек).
Простейшие имеют органы движения (жгутики, реснички, псевдоподии), питания
(вакуоли), и также у них возможно питание путем фагоцитоза. Размножаются они
несколькими путями: простым и множественным делением, половым путем,
образованием цист. Поверхность тела простейших покрыта клеточной мембраной. У
большинства из них есть внешняя эластическая оболочка – пелликула, выполняющая
защитную функцию. Для проникновения в клетку хозяина у простейших имеются
специальные приспособления, например у токсоплазм – сложный комплекс органелл –
коноид с фибриллами, трихомонады и лямблии имеют специальные присоски.
Для выявления простейших используется микроскопия нативных и окрашенных
препаратов из исследуемого материала с применением иммерсионного, фазово-
контрастного или люминесцентного микроскопов. Для изучения ультраструктуры
используется электронная микроскопия.
При микроскопии препаратов следует учитывать, что каждый из представителей
простейших имеет ряд морфологических особенностей, которые зависят не только от вида,
но и от стадии развития паразита. Заболевания, вызываемые простейшими, называются про-
тозойными. К ним относят: малярию, лейшманиоз, токсоплазмоз, амебиаз, лямблиоз и др.
1. Ознакомиться с классификацией патогенных простейших.
2. Разобрать и изучить схемы жизненных циклов патогенных простейших.
3. Научиться трактовать морфологические признаки каждого вида.
4. Сделать выводы о морфологических формах простейших.
5. Научиться трактовать и анализировать результаты микроскопического исследования
патогенных простейших.
Уметь:
1. Проводить микроскопию препаратов патогенных простейших, окрашенных по
Романовскому-Гимзе.
2. Анализировать морфологические признаки патогенных простейших.
25
1. Классификация простейших.
2. Структура клеток простейших (эукариотов).
3. Сравнительная характеристика клеточного строения прокариотов и эукариотов.
4. Методы окраски простейших.
5. Возможность исследования нативных препаратов для диагностики протозойных инфекций.
6. Приоритет отечественных ученых в изучении некоторых протозойных инфекций.
Работы В.А. Леша, Е.И. Марциновского, П.Ф. Боровского.
Практические задания, которые выполняются на занятии:
1. Микроскопия демонстрационных препаратов патогенных простейших, окрашенных
по Романовскому-Гимзе.
2. Зарисовка демонстрационных препаратов и схем жизненных циклов патогенных
простейших в протокол.
1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология : учебник для
медицинских ВУЗов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература,
1998. – 592 с.
2. Тимаков В.Д. Микробиология : учебник / В.Д. Тимаков, В.С. Левашев, Л.Б. Борисов. –
2-е изд., перераб. и доп. – М. : Медицина, 1983. – 512 с.
4. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЕОТАР-МЕД, 2001. –768 с.
5. Циганенко А.Я., Павленко Н.В. Мікробіологія, вірусологія та імунологія : керівництво
до практ. занять для студентів мед. та фармацевтичних ВУЗів / А.Я. Циганенко,
Н.В. Павленко. – Харків : ХДМУ, 1996. – 272 с.
1. Казанцев А.П. Токсоплазмоз / А.П. Казанцев. – М. : Медицина, 1985. – 168 с.
2. Епiдемiологiя / за ред. К.М. Синяк. – К. : Здоров’я, 1993. – 460 с.
3. Иммунология инфекционного процесса / под ред. В.И. Покровского, С.П. Гордиенко,
В.И. Литвинова. – М. : Медицина, 1993. – 305 с.
4. Лобан К.М. Малярия / К.М. Лобан, Е.С. Полозок. – М. : Медицина, 1983. – 224 с.
Краткие методические указания к работе на практическом занятии.
Самостоятельная работа состоит из изучения классификации простейших, разбора
схем жизненных циклов простейших, патогенных для человека. Затем студенты изучают
демонстрационные препараты и зарисовывают их в протокол занятия.
В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ конечных результатов
самостоятельной роботы каждого студента.
1. У беременной в мазках крови при микроскопии были обнаружены токсоплазмы. Какие

из перечисленных ниже морфологических признаков имеет этот возбудитель в мазках,
окрашенных по Романовскому-Гимзе?
A. Округлые клетки с рубиновым ядром, голубой цитоплазмой, красными 5 жгутиками
и аксостилем, и ундулирующей мембраной.
26
B. Удлиненные клетки с 1 жгутиком, 1 ядром и ундулирующей мембраной.
C. Клетки грушевидной формы с 2 ядрами и 4 парами жгутиков.
D. Крупные клетки с 1 ядром, псевдоподиями и поглощенными эритроцитами.
E. Клетки в форме полумесяца с 1 рубиновым ядром и голубой цитоплазмой.
2. У больного с жалобами на частый жидкий стул и схваткообразными болями в животе в
баклаборатории была выделена Entamoeba histolytica. Какая из перечисленных ниже
морфологических форм характерна для этого возбудителя в мазках из свежих
испражнений?
A. Округлые клетки с 1 ядром и кинетопластом.
C. Клетки грушевидной формы с 2 ядрами и 8 жгутиками.
D. Крупные клетки с 1 ядром, псевдоподиями и поглощенными эритроцитами.
E. Клетки в форме полумесяца с 1 ядром.
3. В клинику поступил больной, которому был поставлен предварительный диагноз:
малярия, вызванная P.ovale. Какие из перечисленных ниже морфологических признаков
имеет этот возбудитель в стадии кольца в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе?
A. В увеличенных эритроцитах – кольцевидные трофозоиты и зерна Шюффнера
B. В увеличенных овальных эритроцитах – вакуоли, окаймленные голубой цитоплазмой
с рубиновыми крупными ядрами и крупные зерна Джеймса.
C. В эритроцитах по 2–3 мелких трофозоита и единичные крупные розово-
фиолетовые пятна Мауэра.
D. В лентовидных эритроцитах по 1 кольцевидному трофозоиту.
4. К врачу обратился мужчина 35 лет с мокнущей язвой на правой ноге. Известно, что
пациент 2 нед назад вернулся из Африки. При микроскопическом исследовании мазков из
отделяемого язвы, окрашенных по Романовскому-Гимзе, обнаружили внутриклеточно
расположенные мелкие клетки овальной формы без жгутиков с серовато-голубой
цитоплазмой и красно-фиолетовым ядром. Для какого из перечисленных ниже
простейших характерна такая морфологическая форма?
А. Plasmodium malariae. С. Toxoplasma gondii. E. Giardia lamblia.
В. Leishmania tropica. D. Trichomonas vaginalis.
5. При микроскопическом исследовании свежих испражнений больного с жалобами на
жидкий стул, вздутие живота, потерю аппетита были обнаружены клетки грушевидной
формы с симметрично расположенными 2 ядрами, 2 базальными тельцами, 2
парабазальными тельцами, 2 нитями аксостиля и 4 парами жгутиков. Для
какого из перечисленных ниже простейших характерна такая
морфологическая форма?
А. Plasmodium malariae. С. Toxoplasma gondii. E. Giardia lamblia.
6. К врачу-инфекционисту обратился пациент с жалобами на сонливость, утомляемость,
истощение, лихорадку. Известно, что он недавно был в командировке в Африке. При
микроскопии мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе, обнаружены клетки
удлиненной формы с 1 центральным ядром, 1 жгутиком, отходящим от задней части
клетки, и резко выраженной ундулирующей мембраной. Для какого из перечисленных
ниже простейших характерна такая морфологическая форма?
А. Trypanosoma brucei. С. Toxoplasma gondii. E. Giardia lamblia.
7. У больного с жалобами на жидкий стул, вздутие живота, потерю аппетита в
баклаборатории была выделена Giardia lamblia. Какая из перечисленных ниже
27
морфологических форм характерна для этого возбудителя в мазках из свежих
испражнений?
D. Крупные клетки с 1 ядром, псевдоподиями и проглоченными эритроцитами.
8. У больной с клиникой вагинита в баклаборатории при микроскопии были обнаружены
трихомонады. Какие из перечисленных ниже морфологических признаков имеет этот
возбудитель в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе?
A. Округлые клетки с рубиновым ядром, голубой цитоплазмой, красными 5 жгутиками
и аксостилем, и ундулирующей мембраной.
9. В клинику поступил больной, которому был поставлен предварительный диагноз:
малярия, вызванная P.vivax. Какие из перечисленных ниже морфологических признаков
имеет этот возбудитель в стадии кольца в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе?
A. В увеличенных эритроцитах – крупные центральные вакуоли, окаймленные голубой
цитоплазмой с рубиново красными ядрами, и зерна Шюффнера.
B. В увеличенных овальных эритроцитах – кольцевидные крупноядерные трофозоит
и крупные зерна Джеймса.
C. В эритроцитах по 2–3 мелких трофозоита и единичные крупные розово-
фиолетовые пятна Мауэра.
D. В лентовидных эритроцитах по 1 кольцевидному трофозоиту.
10. У больного с жалобами на сонливость, утомляемость, истощение, лихорадку, который
недавно был в командировке в Африке, в баклаборатории была выделена Trypanosoma
brucei. Какая из перечисленных ниже морфологических форм характерна для этого
возбудителя в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе?
C. Клетки грушевидной формы с 2 ядрами и 8 жгутиками.

1. Ознакомление с классификацией простейших.
2. Изучение морфологии простейших по схемам, таблицам и демонстрационным
препаратам.
3. Разбор схемы жизненного цикла малярийных плазмодиев.
4. Разбор схемы жизненного цикла трипаносом, лейшманий, лямблий, трихомонад,
токсоплазм.
5. Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов простейших.
6. Зарисовка демонстрационных препаратов и схем жизненных циклов простейших.
28
Граф логической структуры темы: "МОРФОЛОГИЯ ПРОСТЕЙШИХ"
Простейшие, имеющие медицинское значение
Sarcomastigophorae Apicomplexa Ciliophora Microspora

Тип
Подтип Sarcodina Подтип Mastigophora Класс Sporozoa Класс Класс

(саркодовые) (жгутиконосцы) (споровики) Kinetofragminophorea Microsporea
Амеба Лейшмании Трипаносомы

(Entamoeba (Leishmania (Trypanosoma brucei, Токсоплазма Балантидии Микроспоридии
histolytica) Toxoplasma gondii Balantidium coli
species) Trypanosoma cruzi)
Амебиаз Лейшманиозы Африканский Токсоплазмоз Балантидиаз Микроспоридиоз

(кожный трипаносамоз,
и висцеральный) болезнь Чагаса
(Шагаса)
Лямблии Трихомонады Плазмодии малярии:

(Giardia lamblia) (Trichomonas Plasmodium vivax Трехдневная малярия
Трехдневная малярия овале
vaginalis) Plasmodium ovale Четырехдневная малярия
Plasmodium malariae Тропическая малярия
Plasmodium falciparum
Трихомониаз (вагинит,
Лямблиоз уретрит, простатит)
(диарея, мальабсорбция)
29
Тема: Морфология риккетсий, хламидий и микоплазм
Цель: Изучить морфологию и методы выявления риккетсий, хламидий и микоплазм
Модуль 1: Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет.
Содержательный модуль 2. Морфология и структура прокариотов и паразитарных
Актуальность темы. На территории стран СНГ наблюдаются следующие
риккетсиозы: сыпной тиф (в том числе болезнь Бриля), крысиный тиф, марсельская
лихорадка, клещевой сыпной тиф Северной Азии, везикулёзный риккетсиоз, Ку-
лихорадка, лихорадка цуцугамуши, волынская лихорадка. Имеются активно действующие
природные очаги везикулёзного риккетсиоза, марсельской лихорадки, лихорадки
цуцугамуши и клещевого сыпного тифа Северной Азии.
Эпидемический сыпной тиф – это остропротекающая системная инфекция с
тяжелой интоксикацией, при быстром эпидемическом распространении дающая до 30%
летальных исходов.
Лабораторная диагностика многих риккетсиозов основывается на выделении
возбудителя из крови больных. В этой связи необходимо знать морфологию риккетсий и
методы их окраски для распознания их под микроскопом.
Риккетсии – группа мелких полиморфных грамотрицательных бактерий,
являющихся паразитами членистоногих, различных животных и человека.
Название этой группе микроорганизмов дал в 1916 г. Роха-Лима, предложивший
назвать возбудителя сыпного тифа Rickettsia prowazekii в честь двух учёных:
американского – Г.Т. Риккетса и чешского – С. Провачека, которые первыми его
обнаружили (Г.Т. Риккетс в 1909 г., С. Провачек в 1913 г.) при изучении сыпного тифа и,
заразившись погибли от него.
Семейство Ricrttsiaceae состоит из трёх триб: Rickettsiaceae, Ehrlichiae, Wolbachieae.
Триба Rickettsiaceae делится на 4 рода: Rickettsia, Rochalimaea, Coxiella, Ehrlichia.
Строение риккетсий аналогично строению прочих бактерий; у риккетсий выделяют
оболочку, протоплазму и зернистые включения. Ядерная структура представлена
зёрнышками ДНК и РНК. Для микроорганизмов, особенно риккетсий сыпного тифа,
характерен полиморфизм. По П.Ф. Здродовскому выделяют следующие типы:
кокковидные, палочковидные, удлинённые нитевидные. Размножаются риккетсии
подобно бактериям путём поперечного деления, но им свойственен внутриклеточный
паразитизм. Таким образом, они занимают промежуточное положение между бактериями
и вирусами. Выявляют риккетсии при помощи специальных методов окраски: по
Здродовскому, Романовскому-Гимзе. Патогенные представители риккетсий – риккетсия
Провачека, R. typhi, R. conorii.
Хламидии – уникальная группа мелких патогенных грамотрицательных
неподвижных бактерий, являющихся возбудителями различных болезней, человека и
животных. У людей они вызывают заболевания глаз, мочеполовой и дыхательной систем.
Ежегодно трахомой болеют от 400до 500 млн. человек, из них свыше 10 млн. становятся
слепыми. Уретритами хламидийной этиологии страдают до 6% мужчин; 10–12% женщин
детородного возраста, у 50% которых при родах происходит инфицирование ребёнка и
развивается офтальмия и пневмония новорожденных.
Хламидии – облигатные внутриклеточные организмы прокариотной системы.
Имеют сферическую форму, РНК и ДНК, рибосомы, клеточные стенки по строению
сходны со стенками грамотрицательных бактерий, но лишены пептидогликанов; хорошо
красятся по Романовскому-Гимзе.
30
Хламидии размножаются бинарным делением только в цитоплазме эукариотных
клеток по уникальному циклу развития.
Жизненный цикл хламидий представлен двумя основными формами, сменяющими
друг друга – ретикулярные тельца (вегетативная форма) и элементарные тельца
(спороподобные формы).
Элементарные тельца (ЭТ) - инфекционная внеклеточная форма. Они
обеспечивают передачу заболевания от человека (животного) к человеку. Ретикулярное
тельце (РТ) – внутриклеточная форма, развивается из ЭТ попавшего в цитоплазму. После
образования РТ хламидийная клетка бинарно делится, образуются тельца включения в
виде вакуолей в цитоплазме. Тельца включения прилегают к ядру клетки и их можно
выявить в иммерсионном микроскопе при окраске, что используется для диагностики
хламидиозов.
Для человека патогенны следующие представители рода Chlamydia: C.trachomatis,
C.psittaci, C.pneumoniae.
Классификация хламидий:
Семейство Chlamydiaceae
род Chlamydia род Chlamydophila
C. trachomatis C. pneumoniae
C. suis C. pecorum
C. muridarum C. psittaci
C. abortus
C. caviae
C. felis
Бактериологическая диагностика хламидиозов состоит из предварительного
микроскопического исследования материала с целью обнаружения хламидий в
инфицированных клетках, окрашенных по Романовскому-Гимзе.
Многие виды микоплазм патогенны для человека, и вызывают поражения
дыхательных путей, суставов, сердца, мочеполовой и нервной систем.
30–60% уретритов негонококковой этиологии вызваны M.hominis. Существует
мнение, что уреаплазменная инфекция может быть причиной как женского так и
мужского бесплодия. Кроме того, M.hominis при внутриутробном заражении плода может
быть причиной врождённых аномалий развития ребёнка в связи с её способностью
воздействовать на хромосомы клетки.
Лабораторная диагностика не играет решающей роли в распознавании
микоплазменной пневмонии. Широко используется выделение чистой культуры
возбудителя с последующей идентификацией на основании морфологических,
культуральных и др. признаков.
Микоплазмы – свободноживущие прокариоты, не имеющие истинной клеточной
стенки и не способны синтезировать её компоненты. Функции клеточной стенки
выполняет трёхслойная цитоплазматическая мембрана. Большинство видов представлены
мелкими клетками, характеризующимися выраженным плеоморфизмом, могут
образовывать кокковидные, ветвящиеся и более крупные многоядерные формы способные
образовывать псевдомицелий. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе.
От человека выделяют представителей рода Mycoplasma, Ureaplasma включающих
патогенные и сапрофитные виды.
Классификация микоплазм:
Семейство Mycoplasmaceae
род Mycoplasma род Ureaplasma
M. buccale Ureaplasma urealyticum
M. fermentans
M. hominis
M. pneumoniae
31
M. genitalium
M. orale
M. salivarum
Для человека патогенны M. pneumoniae, M. hominis, Ureaplasma urealyticum.
1. Обратить внимание студентов на то, что риккетсии и хламидии занимают
промежуточное положение между бактериями и вирусами. С бактериями их
объединяет ультраструктура клетки, а с вирусами внутриклеточный паразитизм.
2. Изучить ультраструктуру и морфологию риккетсий, методы их окраски.
3. Изучить морфологию хламидий и методы их окраски. Описать и зарисовать
жизненный цикл хламидий.
4. Изучить ультраструктуру и морфологию микоплазм. Обратить внимание на отсутствие
у них клеточной стенки. Освоить методы окраски микоплазм.
Уметь:
1. Описывать окрашенные микропрепараты, приготовленные из микоплазм.
2. Микроскопировать, описывать и трактовать окрашенные микропрепараты,
приготовленные из материала, где содержатся риккетсии, цитоплазматические
включения хламидий.
3. Анализировать результаты микроскопического исследования материала, где
содержатся риккетсии, хламидии, микоплазмы.
1. Таксономия риккетсий.
2. Морфология риккетсий, их классификация по форме.
3. Методы окраски риккетсий
4. Представители риккетсий, патогенные для человека.
5. Таксономия хламидий, их классификация, патогенные представители.
6. Биологическая особенность хламидий. Основные стадии жизненного цикла хламидий.
7. Морфология хламидий, ретикулярные тельца, элементарные тельца.
8. Методы обнаружения цитоплазматических включений хламидий. Практическое
использование телец-включений.
9. Таксономия микоплазм. Классификация, патогенные представители.
10. Ультраструктура и морфология микоплазм.
11. Методы окраски микоплазм.
12. Представители микоплазм патогенные для человека.
Практическая работа, которая выполняется на занятии:
1. Микроскопировать демонстрационный препарат, приготовленный из чистой культуры
микоплазм и окрашенный по Романовскому-Гимзе.
2. Микроскопировать окрашенные по Здродовскому и Романовскому-Гимзе мазки из
материала, содержащего риккетсии.
3. Микроскопировать мазок, приготовленный из соскоба уретры и окрашенный по
Романовскому-Гимзе, с целью обнаружения включений в цитоплазме клеток эпителия
уретры.
4. Зарисовать демонстрационные препараты в протокол.
5. Зарисовать в протокол жизненного цикла хламидий.
6. Оформить протокол.
1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. –579 с.
Медицина, 1998. – 336 с.
32
3. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЕОТАФ-МЕД,
2001. – 768 с.
Краткие методические указания для работы на практических занятиях
В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов по данной теме.
Самостоятельная работа состоит из изучения морфологии и ультраструктуры
риккетсий, хламидий и микоплазм по цветным таблицам.
Студенты просматривают окрашенные демонстрационные препараты в
иммерсионном микроскопе, зарисовывают их в протокол, указывая латинское название
микроорганизма и метод окраски.
В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ самостоятельной работы
каждого студента.
1. Из плевральной жидкости больного атипичной пневмонией выделен возбудитель,
который отличается полиморфизмом, окрашивается по Романовскому-Гимзе. Какой из
перечисленных микроорганизмов, вероятнее всего, вызвал атипичную пневмонию.
А. Mycoplasma pneumoniae. C. Mycoplasma orale. E. Rickettsia prowazekii.
B. Mycoplasma artrrhitidis. D. C.trachomatis.
2. В кожно-венерологический диспансер поступил больной с диагнозом "негонококковый
уретрит". Какой из перечисленных микроорганизмов является возбудителем данного
заболевания.
А. Ureaplasma urealyticum. C. Mycoplasma artrrhitidis. E. Mycoplasma fermentans.
B. Mycoplasma pneumoniae. D. Mycoplasma orale.
3. В мазке-соскобе из уретры больного при окраске по Романовскому-Гимзе обнаружены
включения в виде шапочки вблизи ядра. Какой из перечисленных возбудителей может
вызвать подобные образования в клетках призматического эпителия уретры.
A. Chlamydia trachomatis. C. Chlamydia psittac. E. Trihomonas vaginalis.
B. Chlamydia pneumoniae. D. Ureaplasma urealyticum.
4. Через 5 дней после купания в бассейне у купальщика обнаружили заболевание глаз,
выражающееся утолщением конъюнктивы и ярко-красной окраской нижнего свода. В
мазке, приготовленном из отделяемого конъюнктивы глаза, обнаружили включения в
пораженных клетках. Какой возбудитель вызвал у купальщика конъюнктивит с
включениями.
A. Chlamydia trachomatis. C. Стафилококк. Е. Аденовирусы.
B. Chlamydia pneumoniae. D. Гонококк.
5. У работников зоопарка, ухаживающих за попугаями, возникла атипичная пневмония.
Какой возбудитель явился причиной данного заболевания.
A. Chlamydia psittaci. C. Chlamydia trachomatis. E. Mycoplasma hominis.
B. Mycoplasma pneumoniae. D. Ureaplasma urealyticum.
6. У водителя дальних рейсов врач заподозрил сыпной тиф и взял кровь для лабораторной
диагностики сыпного тифа. Как называется возбудитель сыпного тифа.
A. Treponema pallidum. C. Mycoplasma pneumoniae. E. Coxiella burnetti.
B. Borrelia recurrentis. D. Rickettsia prowazekii.
7. Завод бакпрепаратов получил заявку на изготовление вакцин из облигатных
внутриклеточных паразитов. Какой из перечисленных возбудителей относится к таковым?
А. Риккетсии. В. Спирохеты. С. Микоплазмы. D. Вибрионы. Е. Спириллы.

1. Изучить по таблице морфологию и ультраструктуру риккетсий.
2. Изучить технику окраски риккетсий по Здродовскому.
3. Микроскопировать готовые препараты из материала, содержащего риккетсии и
окрашенного по Здродовскому.
33
4. Изучить по таблице и зарисовать цикл развития хламидий.
5. Микроскопировать окрашенный по Романовскому-Гимзе мазок-соскоб из уретры
больного с включениями C.trachomatis.
6. Изучить по таблице структуру микоплазм.
7. Микроскопировать готовый мазок из культуры микоплазм, окрашенный по
Романовскому-Гимзе.
8. Проанализировать демонстрационные препараты.
9. Зарисовать демонстрационные микропрепараты в протокол. Оформить протокол.
34
Графологична структура теми "МОРФОЛОГИЯ РИКЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ И МИКОПЛАЗМ"
ГРУППЫ МИКРООРГАНИЗМОВ
РИККЕТСИИ ХЛАМИДИИ МИКОПЛАЗМЫ
Т Семейство
А Семейство Семейство Mycoplasmataceae
К Rickettsiaceae Chlamydiaceae
С род род
О род род род род род род
Mycoplasma Ureaplasma
Rickettsiae Coxiella Erlichia Rochalimaeа Сhlamydia Chlamydophila
Н
О
вид: види:
М вид вид вид вид вид: вид: M.buccale U.urealyti
И R.prowazeki C.burnetii E.chaffeensis R.quintana C.trachomatis C.pneumoniae M.hominis cum
R.typhi C.suis C.psittaci
Я R.sibirica C.muridarum C.pecorum
M.pneumonia
e
C.caviae
M.orale
M.salivarum
Кокки, палочки, Элементарные тельца сферической
Морфология нитевидные формы - полиморфизм формы, ретикулярные тельца в виде Полиморфизм – кокковидная,
возбудителя вакуолей в цитоплазме нитевидная и многоядерная
формы
Методы
окраски По Здрадовскому, по Романовскому-Гимзе
По Романовскому-Гимзе
Способ
изучения Микроскопия в иммерсионном микроскопе Микроскопия в иммерсионном микроскопе
35
Тема: Морфология вирусов человека и бактериофагов
Цель: Изучение морфологии вирусов человека и бактериофагов
Содержательный модуль 2. Морфология и структура прокариотов, паразитических
одноклеточных эукариотов и вирусов.
Актуальность темы. Вирусы занимают особое положение на Земле. Это
неклеточная форма, жизненные процессы которой происходят на молекулярном уровне.
Вирусы не имеют клеточного строения и используют рибосомы клетки хозяина (человека,
животных, бактерий, грибов, растений) для синтеза собственных белков. Вместе с тем,
вирусы содержат собственную генетическую информацию, которую они могут передавать
своему потомству. Основные свойства вирусов: ультрамикроскопические размеры,
содержат нуклеиновую кислоту только одного типа – или ДНК, или РНК, не способны к
росту и бинарному делению, размножаются путем воспроизведения себя из собственной
геномной нуклеиновой кислоты, у вирусов отсутствуют собственные система мобилизации
энергии и белоксинтезирующая система. Вирусы являются облигатными
внутриклеточными паразитами. Внеклеточная форма существования вируса называется
вирионом. Вирион – это мельчайшие микроорганизмы, содержащие в своем составе одну из
нуклеиновых кислот (ДНК или РНК), которая представляет геном этих микроорганизмов.
Нуклеиновая кислота, окруженная белковой оболочкой, составляет инфекционную единицу
или вирион. Размеры вирионов различных вирусов варьируют в широких пределах – от 15
до 500 нм. Они могут иметь разнообразную форму: палочковидную, нитевидную,
сферическую, кубовидную. В процессе репродукции синтезируется нуклеиновая кислота и
структурные белки. Структурные белки образуют капсид, защищающий нуклеиновую
кислоту от внешних воздействий, а также способствующий прикреплению вирусной
частицы к чувствительной клетке.
При помощи электронного микроскопа установлено, что простые вирионы состоят
из нуклеиновой кислоты, плотно упакованной в белковую оболочку – капсид, имеющий
строго упорядоченную структуру. По морфологической структуре нуклеиновая кислота и
капсид представляют собой нуклеокапсид, а по химическим свойствам – это
нуклеопротеиды. У некоторых вирусов (аденовирусы, пикорнавирусы, паповавирусы)
нуклеокапсид состоит из капсомеров, представляющих собой скопление полипептидов.
Многие сложно организованные вирионы имеют еще и внешнюю оболочку (суперкапсид),
в которой содержатся липиды и углеводы клетки хозяина. Суперкапсид – оболочка,
окружающая нуклеокапсид, имеется у многих вирусов (миксовирусы, герпесвирусы и
др.). В зависимости от порядка расположения капсомеров различают вирусы с тремя
типами симметрии: спиральным, кубическим, смешанным.
Морфологию и структуру вирусов изучают при помощи электронного микроскопа.
Кроме полноценных вирионов встречаются дефектные вирусы и псевдовирионы.
Дефектный вирус – это вирус, который функционально неполноценный на некоторых
этапах репродукции. Псевдовирионы — это вирусы, в капсид, которых заключена
нуклеиновая кислота клетки хозяина, а не вирусная нуклеиновая кислота.
Бактериофаги – это вирусы микробных клеток, которые вызывают их лизис.
Лизис бактериальных клеток впервые обнаружил в 1898 г. русский микробиолог Н.Ф. Га-
малея. Вирусы, поражающие микроорганизмы, назвали фагами. Фаги различаются по
морфологии, типу нуклеиновой кислоты, по химической структуре и характеру
взаимодействия с микробной клеткой. Например, фаги кишечной палочки состоят из
головки, воротничка, хвостового отростка, базальной пластинки с короткими шипами и
36
хвостовыми нитями. Головка фага, диаметр которой колеблется в пределах 60–90 нм,
имеет шестиугольную форму. Внутри головки содержится нуклеиновая кислота,
окруженная белковой оболочкой. Хвостовой отросток фага состоит из полого
цилиндрического стержня, окруженного сократительным чехольчиком. Хвостовой
отросток достигает 250 нм в длину и 30 нм в ширину. Базальная пластинка имеет
шестиугольную форму. От нее отходят шесть шипов и шесть хвостовых нитей (фибрилл).
Хвостовой отросток обеспечивает прикрепление фага к микробной клетке.
Существуют фаги и другого строения: с длинным отростком и несокращающимся
чехольчиком, с коротким отростком и без отростка. Фаги обладают строгой
специфичностью и поражают лишь определенные виды микроорганизмов. Различают
моновалентные фаги, лизирующие микробные клетки определенного вида, и
поливалентные фаги, способные вызвать лизис группы родственных видов
микроорганизмов. На основании специфичности фаги широко используются для
идентификации микроорганизмов.
1. Ознакомиться с классификацией вирусов и бактериофагов.
2. Разобрать и изучить схемы репродукции вирусов и бактериофагов.
3. Научиться трактовать морфологические признаки каждого семейства вирусов.
4. Сделать выводы о морфологических признаках вирусов.
5. Научиться трактовать и анализировать результаты микроскопического исследования
ЦПД вирусов.
Уметь:
1. Проводить микроскопию препаратов с цитопатическим действием вирусов с помощью
2. Анализировать морфологические признаки вирусов.
1. Биологические особенности вирусов.
2. Морфология и ультраструктура вирусов (с указанием специфических терминов).
3. Электронный микроскоп. Принцип работы.
4. Методы непрямого выявления наличия вирусов в организме.
5. Методы выявления вирусов в исследуемом материале с использованием
иммерсионной люминесцентной микроскопии.
6. Понятие о люминесцентном микроскопе.
1. Микроскопия демонстрационных препаратов цитопатического действия вирусов.
2. Зарисовка демонстрационных препаратов и схем репродукции вирусов в протокол.
мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. – 592 с.
3. Пяткін К.Д. Мікробіологія з вірусологією та імунологією / К.Д. Пяткин, Ю.С. Кри-
вошеин. – К.: Вища школа, 1992. – 431 с.
4. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЕОТАР-МЕД, 2001. –768 с.
5. Циганенко А.Я. Мікробіологія, вірусологія та імунологія : керівництво до практ. занять
для студентів мед. та фармац. ВУЗів / А.Я. Цыганенко, Н.В. Павленко. – Харків :
ХДМУ, 1996. – 272 с.
37
6. Балаклієць Н.І. Загальна мікробіологія : навч. посіб. для студентів мед. і фарм.
ВУЗів / Н.І. Балаклієць, А.Я. Циганенко, В.В. Мінухін / за ред. А.Я. Циганенка. – Х. :
Основа, 2002. – 248 с.
1. Букринская А.Г Молекулярные основы патогенности вирусов / А.Г. Букринская,
В.М. Жданов. – М. : Медицина, 1991. – 255 с.
2. Посібник з медичної вірусології / під ред. В.М.Гиріна. – К. : Здоров'я, 1995. – 368 с.
3. Вирусология : в 3 т. / под ред. Б. Филдса и др. – М. : Мир, 1989. – 494 с.
Краткие методические указания к работе на практическом занятии.
Самостоятельная работа состоит из изучения классификации вирусов, разбора схем
репликации вирусов и бактериофагов. Затем студенты изучают демонстрационные
препараты и зарисовывают их в протокол занятия.
1. К РНК-содержащим вирусам относятся:
А. Парамиксовирусы. С. Герпесвирусы. Е. Поксвирусы.
В. Парвовирусы. D. Аденовирусы.
2. Какую форму имеет вирус бешенства?
А. Сферическую. С. Нитевидную. Е. Ланцетовидную.
В. Палочковидную. D. Пулевидную.
3. Какие из перечисленных вирусов имеют нуклеокапсид со спиральным типом симметрии?
А. Энтеровирусы, вирусы гепатита А. D. Вирусы гепатита А, клещевого
В. Вирусы бешенства, гриппа, паротита. энцефалита.
С. Аденовирусы, реовирусы. Е. Энтеровирусы, герпесвирусы.
4. Какой тип симметрии присущ бактериофагам?
А. Икосаэдрический. С. Трапециевидный. Е. Нитевидный.
В. Бинарный. D. Ромбовидный.
5. К оболочечным вирусам относят:
А. Ретровирусы. С. Аденовирусы. Е. Парвовирусы.
В. Реовирусы. D. Пикорнавирусы.
6. Структурная единица нуклеокапсида это:
А. Пепломер. В. Капсомер. С. Изомер. D. М-белок. Е. Липид.
7. Чем обусловлен спиральный тип симметрии капсида вирусов?
А. Винтообразной структурой нуклеокапсида. D. Образованием пепломеров.
В. Образованием изометрически полого тела. Е. Синтезом белковой оболочки.
С. Изменением структуры капсида.
8. Как называются вирусы, в капсид которых заключена нуклеиновая кислота клетки-хозяина?
А. Псевдовирионы. С. Дефектные вирусы. Е. Аденовирусы.
В. Бактериофаги. D. Поксвирусы.

1. Ознакомление с классификацией вирусов и бактериофагов.
2. Изучение молекулярно-генетической организации и репродукции вирусов и
бактериофагов по схемам, таблицам и атласу.
3. Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов с ЦПД вирусов.
4. Зарисовка демонстрационных препаратов и схем репродукции вирусов.
38
39
Граф логической структуры темы: "МОРФОЛОГИЯ ВИРУСОВ ЧЕЛОВЕКА И БАКТЕРИОФАГОВ"
Вирусы с оболочкой Классификация вирусов Вирусы без оболочки
ДНК-вирусы РНК-вирусы ДНК-вирусы РНК - вирусы
Герпесвирусы Тогавирусы Рабдовирусы Аденовирусы Реовирусы
Герпес-лабиалис, Краснуха, Бешенство, ОРЗ, ОКИ Клещевые лихорадки

цитомегалия, карельская везикулярный
ветряная оспа лихорадка стоматит
Папилломавирусы
Пикорнавирусы
Гепаднавирусы Парамиксовирусы Ортомиксовирусы
Папилломы
опухоли Полиомиэлит
Гепатит В Корь, парагрипп Грипп
Парвовирусы Калицивирусы
Поксвирусы
Дельтавирус Ретровирусы
Эритема, Гастроэнтерит
Натуральная полиартрит
оспа Гепатит Д ВИЧ, СПИД
Геморрагическая
Желтая лихорадка с
лихорадка
Флавивирусы Аренавирусы почечным
Буньявирусы синдромом
Геморрагические ОРЗ,
лихорадки
Лихорадка Ласса
Филовирусы Коронавирусы атипичная пневмония
(Марбург, Эбола)
40
вирулентные Бактериофаг умеренные
Продуктивный тип взаимодействия с Индукция фага Интегративный тип взаимодействия

бактериальной клеткой при помощи УФ с бактерсальной клеткой
Фаг адсорбируется на клеточной стенке при помощи

фибрилл хвостового отростка ДНК фага (профаг) встраивается
в хромосомы бактерий
Чехол хвостового отростка укорачивается

Реплицируется одновременно
с геномом бактерии
Стержень при помощи ферментов (лизоцима)

просверливает оболочку клетки Фаговая конверссия
Фаг передает нуклеиновую кислоту с головки к Лизогения

бактериальной клетки (фаги не образуются в результате "отключения"
фаговых генов репрессором)
Нуклеиновая кислота угнетает биосинтез

компонентов клетки Лизис бактермальной клетки
Синтез нуклеиновой кислоты Сборка новых фагов Выход бактериофагов

и белков фагов
41
Тема: Питание бактерий. Простые питательные среды. Посев на МПА и МПБ.

Методы стерилизации
Цель: Изучение принципов культивирования бактерий, особенностей
транспортирования инфицированного материала, методов стерилизации и
дезинфекции.

Содержательный модуль 3. Физиология микроорганизмов.
Тема 4: Метаболизм бактерий. Тема 5: Рост и размножение микробов.
Актуальность темы:
Всем микроорганизмам присущий непрерывный обмен с окружающей средой –
метаболизм. Метаболизм состоит из двух противоположных, но взаимозависимых
процессов: ассимиляции (анаболизм, конструктивный метаболизм); и диссимиляции
(катаболизм, энергетический метаболизм).
За типом питания все микроорганизмы разделяют на автотрофы и гетеротрофы.
Автотрофы – многочисленная группа свободно существующих микроорганизмов
(бактерий, грибов, водорослей), основным (факультативные автотрофы) или единым
(облигатные автотрофы) источником углерода или азота для которых есть неорганические
вещества.
Гетеротрофы – организмы, которые приобретают углерод и азот из органических
веществ.
За характером использования источника энергии различают три группы бактерий:
1. Фототрофы, как источник энергии используют солнечный свет.
2. Литотрофы – неорганический углерод.
3. Органотрофы – органический углерод (углеводы, жирные кислоты).
Важнейшие объекты для медицинской микробиологии – хемоорганотрофы, их
разделяют на сапрофиты и паразитов.
Сапрофиты в процессе своей жизнедеятельности используют органические
вещества, которые есть в окружающей среде.
Паразиты питаются за счет органических соединений животных и человека.
Прототрофы – синтезируют все соединения из глюкозы и солей аммония.
Ауксотрофы дополнительно нуждаются в специальных веществах – факторов роста.
Поглащение бактериями, грибами, водорослями питательных веществ,
осуществляется галофильно (питательные вещества должны быть в растворимом виде)
благодаря:
1) пассивной диффузии;
2) облегченной диффузией;
3) активным транспортом (при участии специальных ферментов – пермеаз);
4) транслокацией химических групп.
В лабораторных условиях бактерии выращивают на питательных средах.
Питательные среды должны имитировать естественные условия, в которых находятся
микроорганизмы, и содержать:
1) источник энергии;
2) источник углерода;
3) источник азота;
4) соли (сульфаты, фосфаты, хлориды и прочие);
5) факторы роста (триптофан для S.typhi, глютатион для гонококков);
42
6) иметь рН 7,2–7,6;
7) быть стерильными.
Питательные среды разделяют на четыре основных группы:
1. Универсальные (МПА, МПБ) – содержат питательные вещества, в присутствии
которых растут много видов патогенных бактерий.
2. Специальные – применяют для выращивания бактерий, которые не размножаются
на универсальных средах (кровяной агар, сывороточный бульон, сывороточный агар и др.)
3. Выборочные (элективные) – характеризуются тем, что на них хорошо
развиваются только определенные виды бактерий и плохо или совсем не растут другие
виды (щелочная пептонная вода – для холерного вибриона). Питательные среды, которые
содержат определенные концентрации антибиотиков, элективные для стойких к этим
антибиотикам штаммов и вместе с тем селективные для антибиотико-чувствительных
культур.
4. Дифференциально-диагностические среды (Гисса, Эндо, Плоскирева).
МПБ – мясо-пептонный бульон.

МПА – мясо-пептонный агар.
Пептон – белок частично переварен пепсином или трипсином.
Агар-агар – комплексные полисахариды, которые выделено из водорослей.
Разрежаются при температуре 80–100 °С, уплотняются при температуре 35–42 °С.
Стерилизация – процесс, который сопровождается разрушением всех видов

микроорганизмов, включая споры и вирусы.
Дезинфекция – процесс разрушения патогенных микроорганизмов, которые могут
вызвать инфекцию.
Стерилизация может осуществляться двумя методами:
Физический (солнечное излучение, сухой жар, пар, фильтрование, влияние
радиационного излучения, ультразвука).
Химический (кислоты, щелочи, галогены, редуцирующие агенты, формальдегид,
фенол, мыла, краски и др.)
1. Студенты должны знать химический состав бактерий, и как он влияет на нужды
бактерий в питательных веществах.
2. Студенты должны знать классификацию бактерий за типом питания и классификацию
питательных сред.
3. Студенты должны привести состав МПБ и МПА, и знать технику посева бактерий на
эти питательные среды.
4. Студенты должны продемонстрировать фундаментальные знания методов
стерилизации и дезинфекции, и оценить их роль в предупреждении инфекционных
болезней и гнойно-септических осложнений.
Уметь:
1. Приготовить мазки из чистых культур E. coli, S. epidermidis, B. anthracoides и красить
их по Граму.
2. Микроскопировать мазки, окрашенные по Граму, пользуясь иммерсионным микроскопом.
3. Сеять чистые культуры E. coli, S. epidermidis, B. anthracoides на питательные среды
МПБ и МПА.
1. Метаболизм микроорганизмов: анаболизм, катаболизм.
43
2. Химическое строение бактериальной клетки: органические и неорганические составляющие.
3. Нужды бактерий в питательных веществах: водовод, кислород, углерод, азот,
органические факторы роста.
4. Классификация бактерий на основании источников для конструктивного и
энергетического метаболизма.
5. Классификация питательных сред.
6. Состав универсальных питательных сред.
7. Методы стерилизации и дезинфекции.
Практические задачи, которые выполняют на занятии:

1. Микроскопировать демонстрационные препараты E. coli, S. epidermidis, B. anthracoides.
2. Приготовить мазки из чистых культур E. coli, S. epidermidis, B. anthracoides.
3. Покрасить и промикроскопировать приготовленные мазки.
4. Сравнить приготовленные препараты с демонстрационными, описать их и идентифицировать.
5. Пересеять чистые культуры E.coli, S.epidermidis, B.anthracoides на МПБ или МПА.
6. Зарисовать все препараты.
7. Оформить протокол практического занятия.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. – 579 с.
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
4. Пяткін К.Д. Мікробіологія / К.Д. Пяткін, Ю.С. Кривошеїн. – К. : Вища школа, 1992. – 431 с.
5. Конспект лекцій

В начале практического занятия преподаватель проверяет уровень подготовки
студентов, используя тесты входного контроля.
Самостоятельная работа студентов состоит из приготовления мазков из чистых
культур Е. coli, S. epidermidis, B. anthracoides и окраска их по Граму. Студенты
микроскопируют демонстрационные и собственноручно приготовленные препараты,
зарисовывают их в протокол.
Лабораторная работа завершается посевом чистых культур Е. coli, S. epidermidis,
B. anthracoides на МПБ и МПА.
Каждый студент оформляет протокол работы.
В конце практического занятия преподаватель проводит исходный контроль и
анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.
1. Микроорганизмы, способные синтезировать все соединения из глюкозы как

единственного источника углерода и из солей аммония как единственного источника азота,
являются:
А. Автотрофами. C. Литотрофами. E. Хемотрофами.
B. Прототрофами. D. Фототрофами.
44
2. Агар-агар является комплексным полисахаридом из морских водорослей, который
используется для придания питательной среде плотности. В какой концентрации агар-агар
добавляется к питательной среде, чтобы она стала полужидкой:
A. 0,1–0,5%. B. 0,5–1,0%. C. 1,0–2,0%. D. 2,0–3,0%. E. 3,0– 4,0%.
3. Одним из важных требований к питательным средам является создание оптимальных
значений рН. При каких оптимальных рН наблюдается наибольший рост подавляющего
большинства бактерий.
А. 6,2–6,6. B. 6,7–7,1. C. 7,2–7,6. D. 7,7–8,1. E. 8,1–8,5.
4. В лаборатории с целью ускорения процесса стерилизации провели стерилизацию
сахаросодержащих сред текучим паром в один день: утром, днём и вечером по 30 мин как
правильно надо провести стерилизацию питательных сред?
A. Стерилизовать 1 ч. D. Стерилизовать трижды с интервалом 24 ч.
B. Стерилизовать 15 мин. E. Стерилизовать дважды на пару.
C. Стерилизовать 45 мин.
5. Для культивирования кишечной палочки в бактериологической лаборатории
приготовили простые питательные среды МПБ и МПА. Какой режим стерилизации
необходимо использовать для этих сред?
A. Сухожаровой метод при температуре 160 °С. D. Паром под давлением в автоклаве.
B. Фильтрацию. E. УФ-облучение.
C. Кипячение.
6. После окончания работы в лаборатории студент должен убрать свое рабочее место,
продезинфицировать стол, инструменты. Какие химические вещества он должен для этого
использовать?
A. Хлоруксусную кислоту. C. Формалин. E. Эфир.
B. Хлорамин. D. Хлороформ.
Алгоритм практического занятия
1. Микроскопия демонстрационных препаратов E.coli, S.epidermidis, B.anthra-coides:
a) E. coli - грамотрицательная мелкая палочка (2–4 µм×0,4–0,7 µм);
b) S. epidermidis – овоидные или шарообразные грамположительные бактерии (0,8–
0,9 µм);
c) B. anthracoides – грамположительная большая палочка (1×3–4 µм), может быть
расположенная в виде коротких цепей.
2. Приготавливание мазков из чистых культур:
a) Е. coli;
b) S. epidermidis;
c) B. anthracoides.
3. Окраска мазков по Граму.
4. Микроскопия мазков в иммерсионном микроскопе.
5. Сравнение приготовленных препаратов с демонстрационными, их описание и идентификация.
6. Высев чистых культур Е. coli, S. epidermidis, B. anthracoides на МПБ или МПА.
7. Зарисовка препаратов к альбому.
45
Граф логической структуры темы:
"ПИТАНИЕ БАКТЕРИЙ. ПРОСТЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. ПОСЕВ НА МПА И МПБ. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ"
МЕТАБОЛИЗМ
АНАБОЛИЗМ КАТАБОЛИЗМ
(конструктивный метаболизм) (энергетический метаболизм)
СОСТАВ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ

органическая часть неорганическая часть
– белки, нуклеиновые кислоты – водород, азот, углерод,
– углеводы, липиды; – полисахариды – кислород, натрий, калий и др.
автотрофы гетеротрофы Потребность в питательных веществах фототрофы хемотрофы

– для анаболизма – для катаболизма
литотрофы
органотрофы
СТЕРИЛИЗАЦИЯ (дезинфекция) ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ
– аэробные – анаэробные ЖИДКИЕ – Гисса
– МПБ – Эндо
физические химические факторы
– спирты – Плоскирева
факторы
– сухой жар – фенолы
– галогены УНИВЕРСАЛЬНЫЕ СПЕЦИАЛЬНЫЕ ЭЛЕКТИВНЫЕ ПЛОТНЫЕ
– пар
– МПБ – кровяной агар – щелочная – МПА
– радиация – альдегиды – МПА
– фильтрация – поверхностно- – сывороточный агар пептонная вода
активные вещества – щелочной МПА
46
Тема: Выделение чистых культур аэробов. Элективные питательные среды

Цель: Изучение принципов и методов выделения чистых культур аэробов,
определение типов роста на МПА и МПБ и свойства элективных
и селективных питательных сред

Актуальность темы. Не всегда возможно поставить диагноз или

идентифицировать микроорганизм – возбудитель инфекционной болезни, используя
изучение только морфологических свойств. Весьма важно выделить возбудитель
инфекционной болезни в чистой культуре и идентифицировать его.
В клинической бактериологической лаборатории необходимо:
1. Выделить бактерии в чистой культуре.
2. Изучит их свойства.
3. Получить достаточно бактерий для приготовления антигенов и для других исследований.
4. Идентифицировать выделенные микроорганизмы, изучая их биохимические,
антигенные свойства и определяя чувствительность их к бактериофагам
(фаготипирование) и бактериоцинам.
5. Определить чувствительность выделенных культур бактерий к антибиотикам.
6. Оценить количество возбудителей инфекции в инфицированном материале.
7. Сохранить выделенный штамм бактерий.
Чистой культурой называют сосредоточение микробов одного вида на питательной
среде.
Существует несколько методов выделения чистой культуры аэробов:
1. Физический (использование высокой температуры ~ 80 °С – для выделения
спорообразующих бактерий).
2. Химический (использование щелочей или кислот – для кислоторезистентных бактерий).
3. Биологический (использование экспериментальных животные – для выделения
бактерий – возбудителей зоонозных инфекций).
4. Механический (используется для выделения практически всех видов бактерий):
а) согласно Дригальского или
б) Коха.
5. Использование выборочных (элективных или селективных) питательных сред, на
которые хорошо развиваются только определенные виды бактерий и плохо или совсем
не растут другие виды.
Так, например, щелочная пептонная вода и щелочной МПБ являются элективными
средами для холерного вибриона. Питательные среды, содержащие определенные
концентрации пенициллина или других антибиотиков, элективны для устойчивых к ним
штаммов и вместе с тем селективны к антибиотикочувствительным культурам.
Как правило, особенно если бактерии не имеют свойств, позволяющих применить
один из способов первичной обработки исследуемого материала, применяют
механический метод разъединения особей смеси микроорганизмов, делая посев на
плотную питательную среду для получения изолированных колоний каждого вида.
Согласно методу Дригальского используют 3 чашки Петри с плотной питательной средой,
на которые засевают шпателем или пастеровской петлей смесь постепенно, не стерилизуя,
используя всю поверхность чашки, для того чтобы получить изолированные колонии.
47
Соответственно методу Коха смесь на первых этапах разводят в расплавленной и
охлажденной плотной среде до нужной концентрации, а потом заливают чашки Петри,
чтобы также получить изолированные колонии. Колонии тщательно изучают, отбирают
нужные и пересевают на МПА для получения достаточного материала.
1. Знать принципы и методы выделения чистой культуры аэробов.
2. Знать состав и свойства элективных и селективных питательных сред.
3. Уметь идентифицировать и описать типы роста чистых культур аэробов S. epidermidis,
E. coli и B. anthracoides:
а) на МПБ;
б) на МПА.
4. Уметь посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА для получения изолированных
колоний, используя метод Дригальского.
Уметь:
1. Приготовить мазки из посевов чистых культур S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides
на МПБ и МПА и окрасит их по Граму.
2. Описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках из чистых
культур.
3. Приготовить мазок из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и
B. аnthracoides и окрасить по Граму.
4. Описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides в мазках из их смеси.
5. Посеять смесь бактерий на плотную питательную среду (МПА), используя метод
Дригальского для получения изолированных колоний каждого вида.
1. Бактериологический метод в лабораторной диагностике инфекционных болезней.
2. Понятие: штамм, колония, чистая культура, элективная (селективная) питательная среда.
3. Принципы и методы выделения чистой культуры аэробов.
4. Состав и свойства элективных, селективных питательных сред.
5. Техника посева бактерий на редкие и плотные питательные среды.
6. Характер роста бактерий на редких и плотных питательных средах.
Практические задачи, которые выполняют на занятии:

1. Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и
B. аnthracoides в демонстрационных препаратах чистых культур и смеси.
2. Приготовить мазки из посевов S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА.
3. Окрасит мазки по Граму.
B. аnthracoides в мазках чистых культур.
5. Приготовить мазок из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и
B. anthracoides.
6. Окрасить мазок из смеси бактерий по Граму.
B. аnthracoides в мазках из их смеси.
8. Посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского.
9. Оформить протокол в альбоме, зарисовывая демонстрационные микрослайды и
препараты, которые были приготовлены студентами.
48
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. – 579 с.
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. 768 с.
4. Пяткін К.Д. Мікробіологія / К.Д. Пяткін, Ю.С. Кривошеїн. – К. : "Вища школа", 1992. –
431 с.

В начале практического занятия преподаватель должен проверить уровень
подготовки студентов к практическому занятию.
Самостоятельная работа студентов состоит из приготовления мазков из посевов
чистых культур S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА и окраски их по
Граму. Студенты также готовят мазки из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis,
E. coli и B. anthracoides.
В дальнейшем студенты микроскопируют демонстрационные препараты чистых
культур указанных видов микроорганизмов и их смеси, а также препаратов, которые были
приготовлены самыми студентами. Описывают морфологические и тинкториальные
свойства каждого вида, сравнивают препараты, которые они приготовили, с
демонстрационными и на этом основании идентифицируют виды микробов.
Практическая работа студентов заканчивается выполнением посевов смеси 3-х
видов микроорганизмов на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского.
Каждый студент должен зарисовать все микропрепараты в альбом и оформить
протокол практического занятия.
В конце практического занятия преподаватель проводит исходный тестовый
контроль и анализирует итоговые результаты самостоятельной работы каждого студента.
1. Микроорганизмы, не способные синтезировать какие-либо соединения из глюкозы и

солей аммония, как единственных источников соответственно углерода и азота, называются:
A. Автотрофами. C. Ауксотрофами. E. Фототрофами.
B. Прототрофами. D. Литотрофами.
2. Транспорт питательных веществ в клетку, который осуществляется с участием пермеаз
и требует затраты энергии, относится к:
C. Активному транспорту. D. Транслокации химических группировок.
A. Пассивной диффузии. E. Ни к одному из них.
D. Облегченной диффузии.
3. После экспозиции с мутагеном штамм оказался лишенным межклеточной перегородки.
Такое явление наиболее вероятно обусловлено с токсическим действием на одну из
следующих органелл:
A. Фагосому. B. Лизосому. C. Рибосому. D. Мезосому. E. Соматосому.
4. В какой фазе роста бактерий отмечается максимальная скорость размножения клеток и
увеличения бактериальной популяции?
A. Исходная стационарная фаза. D. Фаза отрицательного ускорения.
B. Лаг-фаза. E. Стационарная фаза максимума.
C. Лог-фаза.
49
5. В бактериологическую лабораторию был доставлен материал от больного
менингококковой инфекцией. Для выделения чистой культуры менингококка был
использован сывороточный агар, к которому с целью подавления роста сопутствующей
микрофлоры был добавлен антибиотик ристамицин. К какому типу питательных сред
относится сывороточный агар с ристамицином?
A. Простая. D. Дифференциально-диагностическая.
B. Элективная. E. Транспортная.
С. Основная.
6. Во время профилактического осмотра школьников врач-стоматолог обнаружил у
ученика С на слизистой оболочке ротовой полости белые кремоподобные бляшки,
которые легко снимались, оставляя кровянистые эрозии. Врач заподозрил кандидоз и
назначил больному микологические исследования. Какую из перечисленных питательных
сред надо использовать для выявления возбудителя кандидоза?
A. Среда Сабуро. C. Среда Эндо. E. Среда Гисса.
B. Среда Ру. D. Среда Китт-Тароцци.
7. Из испражнений больного острым гастроэнтеритом выделена чистая культура
подвижных, мелких, слегка изогнутых грамотрицательных палочек, которые в течение 6 ч
дают рост на щелочной 1% пептонной воде в виде нежной голубоватой плёнки. Каким
микро-организмам присущи такие свойства?
A. Спирохетам. B. Вибрионам. C. Клостридиям. D. Бациллам. E. Спириллам.

B. аnthracoides в демонстрационных препаратах чистых культур и смеси, окрашенных
по Граму – 4 мин.
2. Приготовить мазки из посевов S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА – 4 мин.
3. Окрасить мазки по Граму – 5 мин.
4. Промикроскопировать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides
в мазках из чистых культур, которые приготовили студенты – 4 мин.
5. Приготовить мазок из смеси бактерий S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides – 3 мин.
6. Окрасить мазок из смеси бактерий по Граму – 5 мин.
B. аnthracoides в мазке из их смеси – 3 мин.
 в смеси студент должен найти мелкие грамотрицательные палочки (E. coli),
грамположительные кокки, расположенные в виде скоплений (S. еpidermidis) и
грамположительные длинные палочки, расположенные в виде цепочек (B.
аnthracoides).
8. Посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского, для
получения изолированных колоний каждого вида – 3 мин.
9. Оформить протокол, в котором зарисовывают демонстрационные препараты бактерий
и препараты, приготовленные студентом – 4 мин.
50
Граф логической структуры темы:
"ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ. ЭЛЕКТИВНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ"
Методы выделения
Физические Химические Биологические Механические Избирательные

среды
высокая - кислоты экспериментальн

І температура - щелочи ые животные метод метод элективные селективные
(80 ºС) Дригальского Коха
спорообра- кислото- зоонозне некоторые

ІІ зующие бактерии резистентные бактерии большинство виды
бактерии видов
- Salmonella
- Yersinia - Staphylococcus - Vibrio
Clostridium tetani Mycobacterium - B. anthracis - Enterobacteria
ІІІ C. botulinum tuberculosis - Mycobacteria
- Francisella
C. perfringens
I факторы II группы бактерий III виды
51
Тема: Изучение колоний. Пигменты бактерий

Цель: Освоение практических навыков работы при выделении чистых культур
бактерий: ІІ-й день исследования

Актуальность темы. На плотных питательных средах бактерии образовывают

разные по форме и величине колонии - видимые скопления микроорганизмов одного вида,
которые формируются в результате размножения одной клетки. Колонии бывают
плоскими, выпуклыми, куполовидными, вдавленными, их поверхность – гладкой (S-
форма), шероховатой (R-форма), исчерченной, края – равными, зазубренными,
волокнистыми, бахромчатыми. Форма колоний также разнообразная: круглая,
розеткоподобная, звездчатая. По величине колонии делятся на большие (4–5 мм), средние
(2–4 мм), мелкие (1–2 мм). Колонии различаются за консистенцией, плотностью, цветом.
Они могут быть прозрачными и непрозрачными, окрашенными и бесцветными,
влажными, сухими, слизистыми.
Цвет колоний определяется образованием пигментов, которые делятся на
растворимые в воде и спирте (синегнойная бактерия, бактерии сине-зеленого молока) и
нерастворимые (азотобактер, черные и бурые пигменты плесени). Цвет колоний помогает
дифференцировать бактерии. Колонии актиномицетов (A. вovis), микрококков окрашены
в розовый цвет, стафилококка - в золотистый (S. aureus), лимонно-желтый (S. citreus) и
белый цвета (S. albus), синегнойная палочка (P. aeroginosa) – в сине-зеленый,
микобактерии туберкулеза (M. tuberculosis) - в желтый. Некоторые пигменты образуются
только при свете (каротиноиды в M. tuberculosis), а некоторые обнаруживают
антибиотические свойства (P. aeroginosa). Пигменты защищают бактерии от действия
видимых и УФ-лучей.
1. Выучить методы выделения чистых культур бактерий.
2. Описывать колонии, особенности их формирования у разных видов бактерий.
3. Выучить особенности пигментообразования у бактерий.
4. Описывать наиболее весомые пигменты, которые используются для дифференциации
бактерий.
5. Освоить метод пересева колоний для получения чистых культур бактерий.
6. Трактовать результаты роста смеси бактерий на плотных питательных средах.
Уметь:
1. Проводить макроскопическое изучение колоний.
2. Проводить пересев колоний бактерий для выделения чистых культур.
3. Проводить проверку выделенных культур бактерий на чистоту.
4. Готовить микропрепараты из колоний бактерий.
5. Окрашивать микропрепараты по Граму.
7. Анализировать полученные данные относительно разнообразия колоний.
1. Схема выделения чистых культур.
52
2. Особенности формирования колоний у разных видов бактерий.
3. Пигментообразование у бактерий и его значение в дифференциации бактерий.
2. Продолжение выделения чистых культур бактерий: макроскопическое изучение колоний.
3. Приготовление микропрепаратов из полученных колоний.
5. Микроскопия микропрепаратов, их анализ и зарисовывание в протокол.
6. Пересев выделенных колоний на МПА для получения чистых культур.
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
3. Пяткін К.Д. Мікробіологія / К.Д. Пяткін, Ю.С. Кривошеїн. – К. : "Вища школа", 1992. – 431с.
1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вірусологія : учебник для
мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. – 592 с.

Самостоятельная работа состоит из макроскопического изучения колоний на МПА. Потом
студенты готовят микропрепараты из разнообразных колоний (кишечной палочки,
стафилококка и антракоида), окрашивают их по Граму и проводят микроскопию. После
анализа микропрепаратов, их зарисовывают в протокол.
На втором этапе студенты проводят пересев выделенных колоний на МПА для
получения чистых культур.
В конце занятие проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ
результатов самостоятельной работы каждого студента.
1. Как известно, некоторые пигменты у бактерий образуются только при

свете. Какие из пересчитанных бактерий имеют такое свойство?
А. P. aeroginosa. В. S. aureus. С. S. albus. D. S. citreus. Е. M. tuberculosis.
2. У пациента Р. с пищевым отравлением, из испражнений высеяли бактерии, образующие зо-
лотистые колонии на МПА. Какой вид бактерий наиболее вероятно дает колонии такого типа?
А. Стафилококки. С. Кишечная палочка. Е. Шигеллы.
В. Стрептококки. D. Сальмонеллы.
3. При плановом обследовании персонала одного из детских садов на
бактерионосительство патогенных бактерий, у одной из воспитательниц выделена чистая
культура бактерий, которая на кровяном агаре образовывала золотистые колонии с зоной
гемолиза? Носительство какого вида бактерий можно заподозрить в этом случае?
А. P. aeroginosa. В. S. aureus. С. S. albus. D. S. citreus. Е. M. tuberculosis.
53
Е. соli. Какие колонии образовывают эти бактерии на МПА?
А. Бесцветные колонии. С. Желтые колонии. Е. Не дают роста.
В. Красные колонии. D. Белые колонии.
5. Какой пигмент растворим в воде?
A. Зеленый пигмент P.aeruginose. D. Серый пигмент B.anthracoides.
B. Белый пигмент S.epidermidis. E. Черный пигмент плісені.
C. Желтый пигмент S.aureus.
6. Какой метод используют для получения изолированной колонии?
A. Метод разобщающего штриха. D. Посев пипеткой в МПБ.
B. Посев в полужидкий агар. E. Посев бактериологической петлей в МПБ.
C. Посев на скошенный агар.
7. Пигменты имеют для бактерий физиологическое значение, а именно:
A. Принимают участие в дыхании бактерий.
B. Имеют антибиотическую активность.
C. Защищают бактерии от естественной ультрафиолетовой радиации.
D. Есть акцепторами водорода.
E. Все выше указано.
8. S-форма колонии бактерий характеризуется поверхностью:
A. Гладкой. C. Радиальной. E. Все выше указанное.
B. Шероховатой. D. Волнистой.
9. Как называется культура бактерий, в которой бактерии происходят из одной клетки?
A. Смешанная. C. Чистая. E. Ничего из указанного.
B. Бульонная. D. Агаровая.
10. Что определяется как видимое скопление бактерий на поверхности агара, которые
происходят из одной клетки?
A. Пленка. C. Бульонная культура. E. Все указанное.
B. Смешанная культура. D. Колония.
11. Пигментообразующими бактериями есть, кроме:
A. S.aureus. C. P.aeruginosa. E. B.anthracoides.
B. E.coli. D. S.epidermidis.
12. Как характеризуется типичная колония E.coli?
A. Круглая, средняя, гладкая, бесцветная, прозрачная.
B. Круглая, маленькая, гладкая, белая, непрозрачная.
C. Большая, шероховатая, серая, непрозрачная.
D. Круглая, большая, шероховатая, бесцветная, прозрачная.
E. Маленькая, гладкая, желтая, непрозрачная.
13. Как характеризуется типичная колония B.anthracoides?
A. Круглая, средняя, гладкая, бесцветная, прозрачная.
B. Круглая, маленькая, гладкая, белая, непрозрачная.
C. Большая, шероховатая, серая, полупрозрачная.
D. Круглая, большая, шероховатая, бесцветная, прозрачная.
E. Маленькая, гладкая, желтая, непрозрачная.

1. Изучение посевов смеси бактерий (кишечной палочки, стафилококка и антракоида) на
МПА в чашках Петри:
а) макроскопическое изучение колоний;
б) приготовление мазков из разных колоний, окраска по Граму, микроскопия и анализ.
2. Зарисовать изготовленные микропрепараты в протокол.
54
3. Пересеять изолированные колонии на МПА.
55
Граф логической структуры темы: "ИЗУЧЕНИЕ КОЛОНИЙ. ПИГМЕНТЫ БАКТЕРИЙ"
Колонии
По размерам По форме По цвету По характеру По характеру

поверхности края
Крупные Середние Круглая Звездчатая Бесцвет- Сине- Глад- Шера- Ровные Зазуб-
ные зеленые кая ховатая ренные
Мелкие Розеткоподобная E. coli P. aeroginosa Бахромчатые
Желтые Золотистые
M. tuberculosis S. aureus
56
Тема: Ферменты бактерий. Идентификация выделенной чистой культуры
Цель: Выучить методы идентификации выделенных чистых культур бакте-рий
Актуальность темы. Ферменты - биологические катализаторы высокомолекуляр-
ной структуры, которые вырабатываются живой клеткой. Они имеют белковую природу и
играют важную роль в обмене веществ микроорганизмов. Ферменты обеспечивают
усвоение бактериями питательных веществ и синтез сложных органических соединений.
Основные 6 группы ферментов:
а) гидролазы – расщепляют белки, углеводы, липиды путем присоединения воды;
б) оксидоредуктазы – катализируют окислительно-восстановительные реакции;
в) трансферазы – осуществляют перенос отдельных атомов от молекулы к молекуле;
г) лиазы – отщепляют химические группы негидролизным путем;
д) изомеразы – принимают участие в обмене углеводов;
е) лигазы – оказывают содействие биосинтетическим реакциям клетки.
Различают конститутивные и адаптивные ферменты, а также ферменты агрессии.
Ферменты бактерий имеют высокую активность и широко применяются в
промышленности, сельском хозяйстве, медицине. В медицинской промышленности
благодаря применению ферментов получают алкалоиды, стероиды, полисахариды. В
сельском хозяйстве на основе ферментов дрожжей получают белково-витаминные
концентраты на продуктах отхода нефти. Для каждого вида бактерий характерны
специфические ферменты, поэтому в микробиологии ферментативная активность
бактерий используется для идентификации бактерий. Изучение биохимических свойств
бактерий проводится на дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина,
Плоскирева, Ресселя, Гисса и др.).
Дифференциально-диагностические среды делятся на три группы:
1) среды для выявления протеолитических свойства бактерий (МПБ, мясо-пептонный
желатин);
2) среды для изучения ферментации углеводов (Эндо, Плоскирева, Гисса, Ресселя);
3) среды для определения гемолитических свойств (кровяной агар).
Изучение протеолитических свойств проводиться с помощью индикаторов,
позволяющих обнаруживать образование сероводорода, индола и т.д. при расщеплении
белка. Для этого используют индикаторы ацетата свинца (на сероводород) и щавелевой
кислоты (на индол). Индикаторы при их использовании изменяют цвет: при выделении
сероводорода – чернеют, при выделении индола – краснеют. Для определения
ферментации углеводов используются среды Гисса, в состав которых входят глюкоза,
лактоза, маннит, мальтоза, сахароза и индикатор Андреде (карболовый фуксин,
обесцвеченный содой). При ферментации того или другого углевода среда краснеет.
1. Изучить методы идентификации выделенных чистых культур бактерий.
2. Описывать наиболее употребляемые дифференциально-диагностические питательные
среды и их приготовление.
3. Объяснять изменения в дифференциально-диагностических средах при росте бактерий.
4. Трактовать результаты идентификации выделенных чистых культур бактерий и делать
вывод.
Уметь:
1. Проводить посев бактерий на дифференциально-диагностические питательные среды.
2. Проводить проверку выделенных культур бактерий на чистоту.
3. Готовить микропрепараты из выделенных культур бактерий.
4. Окрашивать микропрепараты по Граму.
57
6. Анализировать ферментативные свойства выделенных чистых культур.
4. Ферменты бактерий, их классификация.
5. Использование микробов и их ферментов в биотехнологии.
6. Методы изучения ферментативной активности бактерий и использование их для
идентификации бактерий.
7. Современные методы ускоренной идентификации бактерий с помощью
автоматизированных индикаторов ферментативной активности.
8. Дифференциально-диагностические питательные среды. Общий принцип их
пользования (примеры).
8. Продолжение выделения чистых культур бактерий: проверка чистоты культуры.
9. Приготовление микропрепаратов из выделенной чистой культуры.
10. Окрашивание микропрепаратов по Граму.
11. Микроскопия микропрепаратов из чистых культур бактерий, их анализ и
зарисовывание в протокол.
12. Пересев выделенной чистой культуры на среды Гисса, и МПБ для выявления индола
и сероводорода.
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
4. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вірусологія : учебник для
мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. 592 с.
5. Тимаков В.Д. Микробиология / учебник / В.Д. Тимаков, В.С. Левашев, Л.Б. Борисов. –
1. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби / М.В. Тітов. – К. , 1995. – 321 с.
2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалов. – М. : Медицина, 1990. – 559 с.
3. БМЭ. – Т. 1, 2, 7.
Самостоятельная работа состоит из изучение дифференциально-диагностических
питательных сред, используемые для идентификации выделенных бактерий. Потом
студенты изучают собственные посевы, сделанные на предыдущем занятии: проводится
проверка чистоты культуры. Для этого студенты готовят микропрепараты из выделенной
чистой культуры, окрашивают их по Граму и проводят микроскопию. После анализа
микропрепаратов, их зарисовывают в протокол.
На втором этапе студенты проводят пересев выделенной чистой культуры на среды
Гисса и МПБ для выявления индола и сероводорода.
итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.
1. Резистентность к пенициллинам и цефалоспоринам, в частности стафилококков,
обусловлена их способностью вырабатывать бета-лактамазы. Укажите, к какому типу из
пересчитанных групп принадлежат эти ферменты?
А. Конструктивные. С. Трансферазы. Е. Эффекторные.
В. Индуктивные. D. Каталитические.
58
2. У ребенка 6 месяцев, страдающего на кишечную инфекцию, из испражнений высеяли
бактерии, образующие красные колонии на среде Эндо. Какой вид бактерий дает колонии
такого типа на среде Эндо?
А. Стафилококки. С. Кишечная палочка. Е. Шигеллы.
В. Стрептококки. D. Сальмонеллы.
3. При плановом обследовании персонала одного из детских садов на
бактерионосительство патогенных бактерий, у одной из воспитательниц выделена чистая
культура бактерий, которая на кровяном агаре образовывала золотистые колонии с зоной
гемолиза. Носительство какого вида бактерий можно заподозрить в этом случае?
А. Менингококки. В. Гонококки. С. Микрококки. D. Сарцины. Е.
Стафилококки.
сальмонеллами. Какие колонии образовывают эти бактерии на среде Эндо?
А. Бесцветные колонии. С. Желтые колонии. Е. Не дают роста.
В. Красные колонии. D. Белые колонии.
5. На практическом занятии студенты оценивали протеолитические свойства сальмонелл и
выявили потемнение индикатора с ацетатом свинца. Какое вещество способствовало
потемнению индикатора?
А. СО2. В. Индол. С. Аммиак. D. Н2 S. Е. Метан.
6. В лаборатории была приготовлена среда Эндо и разлита в чашки Петри. Когда через 2 дня
ее должны были использовать для выделения кишечных бактерий, оказалось, что среда имеет
красный цвет. Какая наиболее вероятная ошибка была сделана при приготовлении среды?
A. Неверно выбран способ стерилизации.
B. Избыточное количество индикатора.
C. Не соблюдено соотношения глюкозы и лактозы.
D. При разливе среды в нее попали бактерии из воздуха.
E. Не было проверено рН среды.
7. Известно, что в состав клеток бактерий входят разнообразные ферменты. Какие с
перечисленных ферментов есть ферментами агрессии?
А. Коллагеназы. В. Пермеазы. С. Дегидрогеназы. D. Карбогидразы. Е. Лигазы.
8. Известно, что питательные среды разделяют на универсальные, специальные,
элективные и дифференциально-диагностические. Какие из перечисленных питательных
сред относятся к дифференциально-диагностическим?
А. МПА. В. Щелочная пептонная вода. С. Гисса. D. МПБ. Е. Сывороточный агар.
9. Известно, что для выделения чистой культуры бактерий кишечно-тифозной семейства
используется дифференциально-диагностическая среда Эндо. Какой углевод входит в
состав этой среды?
А. Глюкоза. В. Лактоза. С. Мальтоза. D. Маннит. Е. Сахароза.
10. При бактериологическом обследовании больного ангиной на кровяном агаре
изолирована культура патогенного стафилококка. Какой фермент патогенности
стафилококка выявляется на такой среде?
A. В. Гемолизин. С. Плазмокоагулаза. D. Фибринолизин. Е.
Лецитиназа. Каталаза.

1. Изучение роста выделенной чистой культуры на скошенном МПА:
а) описание роста бактерий,
б) проверка чистоты культуры – приготовление мазков, окраска по Гра-му,
микроскопия и анализ.
2. Зарисовать приготовленный микропрепарат в протокол.
3. Пересеять выделенную чистую культуру на среду Гисса.
4. Пересеять выделенную чистую культуру на МПА и установить индикаторы на индол и
сероводород.
5. С целью подготовки к следующему занятию, посеять грунт на среду Китт-Тароцци
и молоко под вазелиновым маслом.
59
60
Граф логической структуры темы: "ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СРЕДЫ"
Дифференциально-диагностические среды
Среды для выявления Среды для определения Среды для определения

протеолитических свойств ферментации углеводов гемолитических свойств
МПБ МПЖ Эндо Ресселя Гисса Кровяной агар
Граф логической структуры темы: "ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ"
Ферменты бактерий
Оксидоредуктазы Трансферазы Гидролазы Лиазы Изомеразы Лигазы
Перенос Перенос разных Реакции Образование двойных Образование Образование

электронов химических гидролиза связей и катализ изомерных С-С, С-S, С-О, С-N
групп обратных реакций форм связей при
гидролизе АТФ
61
Методические указания для студентов к практическому занятию №13
Тема: Дыхание бактерий. Выделение чистых культур анаэробов

Цель: Изучение методов культивирования анаэробных бактерий

Актуальность темы: Рост, размножение, подвижность микроорганизмов

осуществляется за счет энергии, которая приобретается бактериями в процессе дыхания.
Дыхание (или биологическое окисление) микроорганизмов – это совокупность
биохимических процессов, которые сопровождаются выделением энергии, последняя
необходима для синтеза различных органических компонентов микробной клетки.
Большинство микроорганизмов используют молекулярный кислород воздуха потому, что
имеют систему цитохромов, что позволяет им использовать кислород как конечный
акцептор водорода. Но Л. Пастером было доказано, что некоторые бактерии не могут
развиваться в присутствии кислорода воздуха. Поэтому все микроорганизмы по типу
дыхания подразделяют на облигатные аэробы – микроорганизмы, использующие для
получения энергии свободный кислород, необходимый в качестве акцептора электронов
(атомов водорода), при этом выделяется значительное количество энергии (микобактерии
туберкулеза), микроаэрофилы – требуют присутствия минимального количества
кислорода (лептоспиры, кампилобактерии), факультативные анаэробы – для получения
энергии используют аэробный и анаэробный пути утилизации субстрата (кишечная
палочка, сальмонелла брюшного тифа), облигатные анаэробы – могут образовывать АТФ
при окислении углеродов, белков и липидов путем субстратного фосфорилирования
(клостридии столбняка, ботулизма), капнические бактерии – требуют присутствия CO2.
Дыхание анаэробов происходит путем ферментации субстрата с образованием
малого количества энергии. Наличие свободного кислорода для облигатных анаэробов
является губительным. Это связано с тем, что в присутствии кислорода конечным
продуктом окисления органических соединений является перекись водорода. Поскольку
анаэробы не владеют способностью к продукции фермента каталазы, которая расщепляет
перекись водорода, то она накапливается и проявляет токсическое действие на бактерии.
Для культивирования анаэробов необходимо создать сниженное парциальное
давление кислорода в среде или в воздухе, с которым она сталкивается, что достигается
следующими способами:
1. Физические: анаэростат, аппарат Кипа, кипячение сред.
2. Механические (добавление к средам редуцирующих веществ): среда Китт-Тароцци,
способ Виньяль-Вейона, среда Вильсон-Блера, агар Цейсслера, молоко по Тукаеву,
засев уколом в высокий столбик сахарного агара.
3. Химические: поглощение кислорода в замкнутом пространстве химическим
поглощением (раствором пирогаллола) в эксикаторе, аппарат Аристовского, свеча
Омельянского.
4. Биологический: засев Фортнера – аэробный - анаэробный симбиоз бактерий.
Выделение чистых культур анаэробов:
I день – накопление материала. Исследуемый материал засевают на среду Китт-
Тароцци, прокипяченную на протяжении 20 минут перед засевом. После засева материала
среду нагревают 15 минут при 80 градусах для уничтожения вегетативной флоры; споры
анаэробов при этом не погибают. Пробирки с засевами ставят в термостат.
62
II день – среда мутнеет, иногда в ней появляются пузырьки газа. Делают мазки,
окрашивают их по Граму и выявляют крупные споровые и неспоровые
грамположительные бациллы.
Выделение чистой культуры анаэробов можно проводит методом Вейнберга или
методом Цейсслера.
1. Ознакомиться с классификацией микроорганизмов по типу дыхания.
2. Разобрать и выучить схему дыхания бактерий при участии ферментов,
обеспечивающих биологическое окисление.
3. Научиться трактовать принципы и методы культивирования облигатных анаэробных
бактерий.
4. Сделать выводы о наличии бактериального роста микроорганизмов на средах,
предназначенных для культивирования облигатных анаэробов.
5. Научиться трактовать и анализировать результаты бактериологического и
микроскопического исследования микроорганизмов.
Уметь:
1. Осуществить посев на питательные среды: Китт-Тароцци, молоко под вазелиновым
маслом.
2. Приготовить фиксированные препараты из чистых культур анаэробов.
3. Окрасить микропрепараты из чистых культур анаэробов по Граму.
4. Провести микроскопию препаратов из чистых культур анаэробов с помощью
5. Анализировать бактериологические и морфологические признаки анаэробов.
1. Типы дыхания микроорганизмов.
2. Ферменты, которые принимают участие в биологическом окислении.
3. Классификация микроорганизмов по типу дыхания.
4. Методы создания анаэробных условий.
5. Разбор схемы выделения чистых культур анаэробов.
6. Методы выделения чистых культур анаэробов (метод Цейсслера и метод Вейнберга).

1. Микроскопия демонстрационных препаратов из чистых культур анаэробов.
2. Приготовление фиксированных препаратов из бактериальной культуры анаэробов.
4. Микроскопия микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа, анализ и
зарисовка препаратов в протокол.
5. Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы выделения чистых культур
анаэробов в протокол.
6. Осуществление засева на питательные среды: Китт-Тароцци, молоко под вазелиновым
маслом.
7.Оформление протокола.
мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. –
592 с.
63
3. Пяткин К.Д. Микробиология с вирусологией и иммунологией / К.Д. Пяткин, Ю.С. Кри-
вошеин. – К. : Вища школа, 1992. – 43 1с.
4. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЕОТАР-МЕД, 2001. –
768 с.
1. Никифоров В.В. Ботулизм / В.В. Никифоров. – М. : Медицина, 1985. – 200 с.
3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М. : Медицина, 1990. – 559 с.
4. БМЭ. – Т. 1, 2, 7.

Самостоятельная работа состоит из изучения классификации микроорганизмов по
типу дыхания, разбора схемы дыхания бактерий при участии ферментов, обеспечивающих
биологическое окисление. Изучение методов культивирования облигатных анаэробных
бактерий. Студенты осуществляют засев на питательные среды: Китт-Тароцци и молоко
под вазелиновым маслом. Потом готовят микропрепараты, окрашивают их по Граму,
проводят микроскопию, зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения.
препаратов и их зарисовка в протокол занятия.
В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов
1. В хирургическом отделении имеет место случай анаэробной инфекции после плановой
хирургической операции. Какой материал необходимо направить для
бактериологического исследования?
А. Мочу. С. Перевязочный и шовный D. Раневое отделяемое.
В. Кровь. хирургический материал. Е. Кусочки ткани.
2. В бактериологическую лабораторию поступил материал от больного с подозрением на
анаэробную инфекцию. Какую из перечисленных питательную среду следует
использовать для выделения возбудителя заболевания?
А. Эндо. С. Китт-Тароцци. Е. 1% пептонную воду.
В. 10% желчный бульон. D. Мясопептонный агар.
3. В бактериологической лаборатории провели исследование вяленой рыбы домашнего
приготовления, ставшей причиной тяжелого пищевого отравления. При микроскопии
выделенной на среде Китт-Тароцци культуры выявлены микроорганизмы, напоминающие
теннисную ракетку. Развитие какого заболевания наиболее вероятно?
А. Брюшного тифа. С. Холеры. Е. Сальмонеллеза.
В. Дизентерии. D. Ботулизма.
4. Через два дня после ДТП в больницу доставили пострадавшего с травмой
бедра и диагнозом «газовая раневая инфекция». На каких из перечисленных
питательных сред культивируются клостридии анаэробной инфекции?
A. Печеночный бульон. D. Среда Китт-Тароцци.
B. Щелочная пептонная вода. E. Среда с сывороткой.
C. Казеиново-угольный агар.
64
5. В лабораторию поступили консервированные грибы, ставшие причиной
ботулизма у гражданина К. Какой метод необходимо использовать для
выделения чистой культуры возбудителя?
A. Левенштейна-Йенсена. C. Леффлера. E. Ожешки.
B. Вейнберга. D. Тинсдаля-Садыковой.
6. В лабораторию направлено раневое отделяемое больного с подозрением на раневую
анаэробную инфекцию. Какой метод необходимо использовать для выделения чистой
культуры возбудителя?
А. Цейсслера. C. Тинсдаля-Садыковой. Е. Леффлера.
B. Тукаева. D. Мак-Коя.
7. В инфекционной больнице находится на лечении больной с диагнозом «ботулизм».
Какие морфологические и тинкториальные свойства характерны для C. botulinum?
А. Грамположительные палочки с терминально расположенными спорами.
В. Грамположительные палочки с субтерминально расположенными спорами.
С. Грамотрицательные палочки с центральным расположением спор.
D. Грамположительные неспорообразующие палочки.
Е. Грамположительные палочки с центрально расположенными спорами.
8. Для ускоренного исследования гноя из послеоперационной раны при подозрении на
газовую анаэробную инфекцию необходимо использовать следующие среды:
А. Молоко под маслом В. Среда Эндо. D. Среда Виньяль-Вейона.
и среда Вильсона-Блера. С. Среда Ру. Е. Сахарный агар.
9. Какой из перечисленных факторов влияет на рост бактерий:
А. Давление О2 и СО2.
B. Содержание неорганических ионов в окружающей бреде.
C. Наличие факторов роста.
D. Содержание органических соединений в окружающей бреде.
Е. Все выше перечисленное.
10. В чем заключается метод Фортнера, который используется для культивирования
анаэробов?
А. Посев культуры в капилляр.
B. Посев культуры в высокий столик сахарного агара.
C. Посев культуры в молоко под вазелиновым маслом.
D. Посев культуры на чашки Петри с сохранением в анаэростате.
Е. Одномоментный посев культур аэробных и анаэробных бактерий на сектора чашки
Петри.

1. Разбор схемы дыхания бактерий с участием ферментов, обеспечивающих
биологическое окисление.
2. Ознакомление с классификацией микроорганизмов по типу дыхания.
3. Изучение методов культивирования облигатных анаэробных бактерий.
4. Приготовление фиксированных препаратов из бактериальной культуры анаэробов.
5. Окрашивание микропрепаратов по Граму.
6. Микроскопия микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа, их анализ и
зарисовка в протокол занятия.
7. Микроскопия и анализ демонстрационных препаратов из чистых культур анаэробов.
8. Зарисовка демонстрационных препаратов и схемы выделения чистых культур
анаэробов в протокол.
9. Осуществление посева на питательные среды: Китт-Тароцци, молоко под вазелиновым
маслом, в высокий столбик сахарного и кровяного агара.
65
66
Граф логической структуры темы: "ДЫХАНИЕ БАКТЕРИЙ. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АНАЭРОБОВ"
Дыхание бактерий Ферменты
Деление микробов по типу дыхания
Облигатные аэробы Микроаэрофилы Облигатные анаэробы Факультативные анаэробы Капнические
Микобактерии Лептоспиры Клостридии столбняка, Кишечная палочка, Кампилобактер

туберкулеза, ботулизма сальмонеллы
менингококки
Виделение чистой культуры анаэробов
Биологический
Способы Механический Физический Химический
среда Китт-Тароцци, способ Виньяль-Вейону, Поглощение кислорода засев Фортнера

анаэростат,
среда Вильсон-Блера, агар Цейсслера, молоко аппарат Кипа, пирогалолом в экси-
по Тукаеву, засев уколом в высокий столбик кипячение сред каторе, аппарате
сахарного агара Аристовского, свече Констутивные,
Омельянского индуцибельные
Оксидоредуктазы, гидро-
лазы, лиазы, изомеразы,
І этап ІІ этап ІІІ этап лигазы, трансферазы
Засев материала на Выденение чистой культуры анаэробов Исследование чистой Экзоферменты,

среду Китт-Тароцци по Цейсслеру или по Вейнбергу культуры анаэробов эндоферменты
67
Тема: Культивирование вирусов, риккетсий, хламидий
Цель: Освоение методов культивирования вирусов, риккетсий, хламидий
Актуальность темы. В связи с отсутствием у вирусов метаболических систем, их
репродукция может происходить только в живых клетках в виде продуктивного,
интегративного и абортивного типа. Репродукция вирусов в процессе взаимодействия их с
клеткой проходит в несколько этапов. Основные этапы взаимодействия вирусов с
клетками при продуктивной инфекции: адсорбция, проникновение в клетку, "раздевание",
биосинтез компонентов вируса, образование вирусных частичек, выход вирусов из клетки.
При интегративном типе взаимодействия вирусный геном (ДНК-провирус)
функционирует как составная часть клеточного генома и клетка получает новые свойства,
продолжая выполнять свои функции. Возникает персистенция вирусов. Абортивный тип
взаимодействия возникает при проникновение вирусов в нечувствительные клетки, где
невозможна репродукция вирусов.
Существуют такие методы культивирования вирусов: в клеточных культурах, в
куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных.
1. Методы культивирования вирусов в клетках наиболее распространенны.
Виды клеточных культур:
а) первичные – готовят из нормальных тканей эмбриональных или взрослых
организмов путем трипсинизации, выдерживают 2–4 пассажа.
б) перевиваемые или пассажные – готовят из тканей злокачественных опухолей,
выдерживают тысячи генераций (HELa);
в) полуперевиваемые – выдерживают до 70 пассажей (диплоидные клетки легких
человека).
Для получения однослойной тканевой культуры используются питательные среды:
199, Игла, Хенкса.
Выявление репродукции вирусов в культуре ткани:
а) по цитопатическому действию вирусов:
 полная или частичная деструкция монослоя;
 изменение формы клеток;
 возникновение многоядерных клеток и симпластов;
б) образование внутриклеточных включений - место усиленного размножения
вирусов и реакция клетки на внедрение вируса;
в) с помощью реакции гемадсорбции;
г) по цветной пробе;
д) выявление вирусного гемаглютинина или вирусного антигена в РГА и РСК;
е) выявление вирусных бляшек.
2. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах используется ограниченно, так
как только некоторые вирусы репродуцируются в тканях куриного эмбриона (вирус
натуральной оспы, гриппа, герпеса простого, эпидемического паротита).
Место введения вирусосодержащего материала: а) в полость амниона и
алантоисную; б) в желтковый мешок; в) в мозг, тело эмбриона; г) на хорионалантоисную
оболочку.
Определение репродукции вирусов проводится по специфическим изменениям в
эмбрионе и с помощью РГА (вирус гриппа).
Специфические изменения в эмбрионе:
68
а) бляшки на хорионалантоисной оболочке (вирусы натуральной оспы и осповакцины);
б) диффузное помутнение оболочек;
в) появление кровоизлияний;
г) участки некроза.
3. Культивирование вирусов в организме животных (вирусы Коксаки, бешенства)
имеет положительные стороны - доступность, четкость симптомов, моделирование
инфекционного процесса, накопление вируса в большом количестве (для получения
вакцин). Недостатки – не все вирусы можно культивировать, лабораторные животные –
открытая система, которая содержит собственную микрофлору, в том числе и латентные
вирусы.
Культивирование риккетсий и хламидий проводится теми же методами, что и
вирусов. Так, риккетсии можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриону, в
легких белых мышей и кишечника вшей. Хламидии также можно культивировать в
желточном мешке куриного эмбриона и при внутримозговом заражении белых мышей.
1. Выучить методы культивирования вирусов в клеточных культурах, в куриных
эмбрионах, в организме лабораторных животных.
2. Выучить методы выявления репродукции вирусов в клеточных культурах, в куриных
эмбрионах, в организме лабораторных животных.
3. Выучить методы культивирования риккетсий.
4. Выучить методы культивирования хламидий.
1. Особенности размножения вирусов.
2. Современные методы культивирования вирусов.
3. Культивирование вирусов в курином эмбрионе.
4. Культивирование вирусов в клеточных культурах.
5. Характер ЦПД вирусов на клеточные культуры.
7. Методы культивирования риккетсий.
8. Методы культивирования хламидий.
1. Микроскопия клеточных культур в норме и с цитопатическим действием вирусов, их
анализ и зарисовывание в протокол.
2. Ознакомление со строением куриного эмбриона (схема).
3. Заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость.
4. Разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.
5. Анализ изменений алантоисной оболочки зараженных эмбрионов, и запись выводов в
протокол.
1. Микробиология / А.В. Воробьёв, А.С. Быков, Е.П. Пашков, А.М. Рыбаков. – М. :
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
3. Пяткін К.Д. Мікробіологія / К.Д. Пяткін, Ю.С. Кривошеїн. – К. : "Вища школа",
1992. – 431 с.
69
2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М. : Медицина, 1990. –
559 с.
3. БМЭ. – Т. 1, 2, 7.
Самостоятельная работа состоит из микроскопии клеточных культур в норме и с
цитопатическим действием вирусов, их анализа и зарисовывание в протокол. После
ознакомления со строением куриного эмбриона по схеме, студенты проводят заражение
куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость. Потом проводится
разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.
Дальше студенты анализируют изменения алантоисной оболочки зараженных
эмбрионов, и записывают выводы в протокол.
Тестовые задания исходного уровня
1. При каком типе взаимодействия вируса с клеткой образуется ДНК-провирус:
А. Продуктивном. С. Абортивном. Е. –.
В. Интегративном. D. Ассоциированном.
2. Бляшки при культивировании вирусов в клеточных культурах – это:
А. Накопление вирусных частичек. D. Место образования вирусных частичек в клетке.
В. Здоровые клетки. Е. –.
С. Разрушенные вирусом клетки.
3. К полуперевиваемым клеточным культурам относятся:
А. НеLа. D. Клетки эмбриональных тканей человека.
В. НЕР-1. Е. Диплоидные клетки легких человека.
С. НЕР-2.
4. Метод культивирования вирусов в клеточных культурах был разработан:
А. Дж. Эндерсом. В. Л. Пастером. С. Ф. Бернетом. D. Г. Эрлихом. Е. Р. Кохом.
5. Внутриклеточные включения определяются при инфекциях:
A. Бешенство. C. Натуральная оспа. E. Никаких.
B. Грипп. D. Все вышеперечисленное.
6. Перед заражением вируссодержащим материалом производят просвечивание
эмбрионов для определения их жизнеспособности. Какие характеристики подтверждают
жизнеспособность куриного эмбриона?
A. Движение эмбриона под действием света. D. Правильные ответы А и В.
B. Хорошо определяемые кровеносные сосуды. E. Все выше перечисленное.
C. Наличие воздушного пространства.
7. Какие процедуры не проводятся при подготовке куриного эмбриона к заражению
вирусосодержащим материалом:
A. Дезинфекция скорлупы спиртом и раствором йода.
B. Просвечивание под лампой.
C. Маркировка воздушного мешка.
D. Проделывание отверстия в скорлупе.
E. Отбор аллантоисной жидкости.
8. Какие из перечисленных культур сохраняют диплоидный набор хромосом, типичный
для соматических клеток используемой ткани, в течение 50 пассажей:
A. Диплоидные культуры клеток. D. Перевиваемые культуры клеток.
B. Первичные культуры клеток. E. Все выше перечисленное.
C. Полуперевиваемые культуры клеток.
9. Какие из перечисленных культур клеток, получаемые из злокачественных и
нормальных линий клеток, обладают способностью длительно размножаться in vitro в
определенных условиях:
70
A. Диплоидные культуры клеток. D. Перевиваемые культуры клеток.
B. Первичные культуры клеток. E. Все выше перечисленное.
C. Полуперевиваемые культуры клеток.
10. Какие методы используются для изучения изменений в клетке, индуцированных вирусом:
A. Световая микроскопия. D. Бляшкообразование.
B. Люминесцентная микроскопия. E. Все выше перечисленное.
C. Реакция гемагглютинации.
11. Какие тест-системы не используются для культивирования риккетсий:
A. Среда Хенкса. C. Вши. E. Желточный мешок куриного эмбриона.
B. Культура клеток HeLa. D. Белые мыши.
1. Для выделения вируса гриппа в материале, который поступил в лабораторию,
использовали куриные эмбрионы. Какой из перечисленных показателей есть основным
для выявления накопления вируса через 48–2 ч?
А. РА. D. Наличие крови в алантоисной оболочке.
В. Гибель куриного эмбриона. Е. Образование бляшек на алантоисной
С. РГА с алантоисною жидкостью. оболочке.
2. В детскую инфекционную больницу доставили ребенка в тяжелом состоянии с
подозрением на вирусную инфекцию. Как выделить вирус, вызвавший заболевание, из
материала, взятого у ребенка?
А. Сделать посев на среду Хенкса. D. Заразить вшей.
В. Сделать посев на среду 199. Е. Заразить клеточную культуру.
С. Сделать посев на среду Китт-Тароцци.
3. На практическом занятии студенты провели заражение куриных эмбрионов вирусом
осповакцины. Какой из перечисленных показателей есть основным для выявления
накопления вируса через 48–72 ч?
А. РА.
В. Образование бляшек на алантоисной оболочке.
С. РГА с алантоисной жидкостью.
D. Наличие крови в алантоисной оболочке.
Е. Гибель куриного эмбриона.
4. У пациента С. с уретритом заподозрили хламидиоз. Для подтверждения диагноза в
лабораторию направили выделение из уретры для выявления хламидий. Какой метод
выделения хламидий надо использовать для подтверждения диагноза?
А. Заразить куриные эмбрионы в амниотическую полость.
В. Заразить куриные эмбрионы в алантоисную полость.
С. Провести внутримозговое заражение белых мышей.
D. Заразить вшей.
Е. Сделать посев на среду 199.
5. В вирусологическую лабораторию были доставлены куриные эмбрионы с разным
сроком эмбриогенеза. Какого срока эмбриогенеза необходимо придерживаться при
заражении куриных эмбрионов вирусами?
А. 3–5 дней. В. 8–13 дней. С. 15–18 дней. D. 18–21 дней. Е. Во все
сроки.
1. Микроскопия тканевых культур в норме.
2. Микроскопия тканевых культур в норме с цитопатическим действием вирусов.
3. Анализ цитопатического действия вирусов и зарисовывание препаратов в протокол.
4. Ознакомление со строением куриного эмбриона по схеме.
5. Заражение куриных эмбрионов вирусом осповакцины в алантоисную полость.
71
6. Разрез куриных эмбрионов, которые раньше были заражены вирусом осповакцины.
7. Анализ изменения алантоисной оболочки зараженных эмбрионов и запись выводов
в протокол.
Оформление протокола
72
Граф логической структуры темы "КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ, РИККЕТСИЙ"
Культивирование
вирусов
В тканевых культурах В куриных эмбрионах В организме

лабораторных животных
Первичные Перевива- Полупере-

Индикация вирусов
емые виваемые Индикация вирусов
Бляшки
Индикация вирусов Крово- Участки Помутнения
излияния некроза оболочки
Бляшки ЦПД
Реакция
Гемад- Вклю- РГА нейтрализации
сорбция чения
Деструкция
клеток
Симпласты Смена формы
клетки
73
74
Тема: Учение об инфекции. Заражение экспериментальных животных

Цель: Изучение методов исследования инфицированных лабораторных животных
Содержательный модуль 6. Инфекция.
Тема 9: Инфекционный процесс, его виды и условия возникновения.
Актуальность темы: Под понятием «инфекция» (заражение) и «инфекционный
процесс» понимают совокупность биологических процессов, происходящие в
макроорганизме при внедрении в него патогенного микроорганизма.
Инфекционные болезни отличаются от других болезней тем, что они вызываются
живыми возбудителями. По характеру взаимоотношений микробы бывают сапрофитами
и паразитами. Последние живут за счет других организмов. Какое-либо совместное
проживание микроба с макроорганизмом называется симбиозом, который имеет
следующие формы: комменсализм – проживание, не причиняющее друг другу вреда;
мутуализм – симбиоз, при котором оба организма имеют для себя взаимную пользу;
паразитизм – когда один организм живет за счет другого.
Болезнетворные микробы имеют название патогенных и есть следствием эволюции
паразитизма. Паразитизм – это видовой признак микробов.
Вирулентность – это степень патогенности микробов. Для характеристики
вирулентности используют количественные показатели гибели экспериментальных
животных при поражении их микробной культурой.
– Dlm (Dosis letalis minima) – гибель больше 80% животных, взятых в опыт;
– Dcl (Dosis certa letalis) – гибель 100% животных;
– LD 50 – доза, которая вызывает гибель 50% животных, что позволяет получить
более достоверные результаты.
Вирулентность патогенных микробов связана с токсинообразованием,
инвазивностью и другими факторами.
Токсины подразделяются на экзо- и эндотоксины. Особую роль в патологии
человека играют микроорганизмы, продуцирующие экзотоксины (дифтерийный,
столбнячный, ботулинический), которые характеризуются выраженной токсичностью,
поражением отдельных органов и тканей.
Экзотоксины – это белковой природы токсины, способные вызывать образование
антител-антитоксинов. Токсигенность микробов определяется также как и вирулентность.
Единицами измерения токсигенности есть Dlm та LD50.
Эндотоксины крепко связаны с телом бактериальной клетки, менее токсичны,
поражают организм только в больших дозах.
Кроме бактерий, токсины обнаружены у риккетсий. Они тесно связаны с телом
самих риккетсий и сравнительно быстро разрушаются при гибели риккетсий. Под
действием токсинов происходит глубокое угнетение окислительного цикла
трикарбоновых кислот (цикл Кребса).
В организм человека патогенные микробы попадают различными путями. При
попадании микробов в кровь возникает бактериемия, при попадании вирусов – вирусемия.
Когда микробы заселяют органы и ткани – септицемия, а когда септический процесс
сопровождается образованием гнойных очагов в разных органах и тканях –
септикопиемия. Наличие токсинов в крови – токсинемия.
Развитие инфекционного процесса складывается из 4 периодов:
1) инкубационный – с момента проникновения микроба до появления первых
признаков заболевания;
75
2) продромальный – когда развиваются общие признаки для многих болезней и
отсутствуют характерные для данной болезни симптомы;
3) разгар болезни – наиболее типичные признаки для этой болезни;
4) период выздоровления (реконвалесценции) – угасание болезни.
По своему проявлению инфекции подразделяются:
– острые (грипп);
– хронические (малярия);
– явные;
– скрытые, латентные (туберкулез);
– смешанные (несколько возбудителей);
– вторичные (когда после перенесенного гриппа возникает воспаление легких).
Одну из форм взаимоотношений между возбудителем и организмом человека или
животного без проявления явной болезни представляет носительство патогенных
микроорганизмов. Носительство длительностью до 3 мес принято считать острым, а дольше
этого срока – хроническим.
– Реинфекция – повторное заражение тем или иным видом микроба, который
вызвал заболевание, завершившееся выздоровлением (грипп, гонорея).
– Суперинфекция – повторное заражение организма, у которого не закончилось
основное заболевание.
– Рецидив – возврат симптомов того же заболевания без повторного заражения
(болезнь Брыля при сыпном тифе).
В борьбе с инфекционными болезнями сначала проводят исследования на
лабораторных животных. Заражение лабораторных животных используется для создания
«модели» инфекции. Например, при внутрибрюшинном заражении возникает перитонит,
при внутривенном – сепсис, при внутрикожном – некроз ткани. Далее животным проводят
лечение с подбором и назначением антибиотиков различного спектра действия. Эти
методы называются биологическими или экспериментальными. Широко используются
достижения науки и техники для борьбы с инфекционными болезнями, создавая
наилучшие условия работы и жизни людей.
1. Трактовать понятие "инфекционный процесс".
2. Анализировать формы инфекционного процесса, их характеристики и условия
возникновения.
3. Оценивать факторы патогенности бактерий.
4. Характеризовать понятия "патогенность", "вирулентность".
5. Анализировать механизмы развития инфекционного процесса (патогенез).
Уметь:
1. Проводить заражение лабораторных животных.
2. Проводить вскрытие лабораторных животных.
3. Готовить микропрепараты – мазки-отпечатки из органов лабораторных животных.
4. Окрашивать микропрепараты метиленовым синим.
5. Проводить забор крови из сердца мышей.
6. Проводить посев забранной крови на потательные среды (МПА та МПБ).
7. Анализировать полученные результаты.
1. Определение понятия "инфекция", "инфекционный процесс", "инфекционная болезнь".
2. Роль микроорганизмов в инфекционном процессе. Патогенность микробов, определение.
76
3. Вирулентность, определение, единицы измерения. Факторы патогенности бактерий.
4. Фазы и динамика развития инфекционной болезни.
5. Формы инфекций и механизмы передачи инфекции.
6. Понятие о патогенезе инфекционной болезни.
7. Биологический метод исследования. Его применение при изучении этиологии,
патогенеза, иммуногенеза, диагностики, терапии и профилактики инфекционных
заболеваний.
Практические задания, выполняемые на практическом занятии:

1. Заражение лабораторных животных (мышей) чистой культурою антракоида.
2. Вскрытие лабораторных животных.
3. Приготавление микропрепаратов - мазков-отпечатков из органов лабораторных животных.
4. Окрашивать микропрепараты метиленовым синим.
5. Забор крови из сердца мышей.
6. Посев забранной крови на питательные среды (МПА та МПБ).
1. Микробиология / А.В. Воробьев, А.С. Быков, Е.П. Пашков, А.М. Рыбаков. – М. :
Медицина, 1998. – 336 с.
2001. – 768 с.
4. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология : учебник
для мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.О. Бабичев. – СПб. : Специальная литература,
1998. – 592 с.
5. Тимаков В.Д. Микробиология : учебник / В.Д. Тимаков, В.С. Левашев, Л.Б. Борисов.–
6. Конспект лекцій.
2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М. : Медицина, 1990. – 559 с.
3. БМЭ. – Т. 1, 2, 7.

Самостоятельная работа состоит из заражения лабораторных животных (мышей) чистой
культурой антракоида в брюшину. Потом студенты проводят вскрытие животных,
погибших от инфекции, и готовят микропрепараты – мазки-отпечатки из органов
животных (печенки, селезенки, лимфатических узлов и т.д.), которые окрашивают по
Романовскому-Гимза и микроскопируют. После анализа микропрепаратов их
зарисовывают в протокол.
Кроме этого, студенты проводят забор крови из сердца мышей и проводят посев
забранной крови на питательные среды (МПА и МПБ).
итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.
77
1. К факторам патогенности микроорганизмов относят колонизацию. Какой из
перечисленных микроорганизмов имеет такую способность?
А. E. сoli. В. C. diphtheriae. С. S. typhy. D. N. gonorrhoeae. Е. V.
tuberculosis.
2. Известно, что патогенным микроорганизмам присуща инвазивность, обусловленная
факторами распространения. Какой фермент обуславливает проникновение
микроорганизмов в глубь ткани?
А. Гемолизины. С. Гиалуронидазы. Е. Лигазы.
В. Пермеазы. D. Карбогидразы.
3. В хирургическом отделении возникла вспышка госпитальной инфекции, вызванная S.
aureus. Какая питательная среда используется для выявления гемолитической активности
S. aureus?
А. МПА. В. МПБ. С. Среда Эндо. D. Среда Ру. Е. Кровяной агар.
4. Известно, что в состав клеток бактерий входят различные ферменты. Какие из
перечисленных ферментов есть ферментами агрессии?
А. Коллагеназы. С. Дегидрогеназы. Е. Лигазы.
В. Пермеазы. D. Карбогидразы.
5. При бактериологическом обследовании больного ангиной на кровяном агаре
изолировано культуру патогенного стафилококка. Какой фермент патогенности
стафилококка определяется на такой среде?
A. Лецитиназа. С. Плазмокоагулаза. Е. Каталаза.
В. Гемолизин. D. Фибринолизин.
6. У больного С. выявлена острая гонорея. Из анамнеза известно, что пациент раньше
болел гонореей и полностью вылечился. К какой группе инфекций можно отнести это
новое заболевание?
А. Секундарная инфекция. С. Рецидив. Е. Аутоинфекция.
В. Суперинфекция. D. Реинфекция.
7. У ребенка, болеющего корью, диагностирована стафилококковая пневмония. К какой
группе инфекций можно отнести это заболевание?
8. Пациент В., находящийся на учете в кожно-венерологическом диспансере, где проходит
курс лечения по поводу сифилиса, повторно инфицированный T. рallidum. К какой группе
инфекций можно отнести это новое заболевание?
9. У больного случился приступ малярии. Из анамнеза известно, что малярию у него
диагностировали 3 года назад. К какой группе инфекций можно отнести обострение этой
болезни?

1. Изучение роста выделенной чистой культуры на скошенном МПА:
а) описание роста бактерий,
б) проверка чистоты культуры – приготавление мазков, окраска по Граму, микроскопия
и анализ.
2. Зарисовать приготовленный микропрепарат в протокол.
3. Пересеять выделенную чистую культуру на среду Гисса.
78
4. Пересеять выделенную чистую культуру на МПА и установить индика-торы на индол
сероводород.
5. С целью подготовки следующего занятия, посеять грунт на среду Китт-Тароцци и
молоко под вазелиновым маслом.
79
ГРАФ логической структуры темы "ИНФЕКЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС, ЕГО ВИДЫ И УСЛОВИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ"
ИНФЕКЦИЯ
По источнику инфекции По клиническим проявлениям
Антропонозная Зоонозная Острая Хроническая Явная Латентная
Носительство Инапарантная Персистирование
По локализации По количеству возбудителей Формы проявления инфекции
Очаговая Генерали- Моно- Смешанная Вторичная Реинфекция Рецидив Супер-

зованая инфекция (секундарна) инфекция
По характеру заражения По распространению в организме
Эндогенная Экзогенная Бактериемия Септицемия Септикопиемия Виремия Токсемия

(аутоинфекция)
80
Методическая рекомендация для студентов к практическому занятию 16
Тема: Реакции иммунитета:
реакция агглютинации, реакция преципитации
Цель: Владеть техникой постановки реакции агглютинации и реакции
преципитации для диагностики инфекционных заболеваний
Содержательный модуль 9. Реакции иммунитета. Иммунопатология.
Тема 14: Реакция иммунного ответа. Принципы использования антител как лечебно-
профилактических и диагностических препаратов.
Актуальность темы. Под иммунитетом подразумевают невосприимчивость
организма к инфекционным и неинфекционным агентам (патогенных микроорганизмов,
чужеродных белков и др. веществ). Эти агенты получили названия антигенов. Иммунитет
бывает врожденным и приобретенным. Врожденный – когда формируются тканевые и
гуморальные защитные приспособления, обуславливающие невосприимчивость к
инфекционным заболеваниям, передающимся по наследству.
Приобретенный – осуществляется иммунной системой организма в виде выработки
антител или накопления сенсибилизированных лимфоцитов. Он подразделяется на естест-
венный и искусственный. По механизму действия разделяется на активный и пассивный.
Во всех иммунологических реакциях основным компонентом является антиген.
Основной функцией иммунной системы, которая состоит из лимфоидной ткани,
является распознавание чужеродных агентов (антигенов) и обезвреживание их.
Антигены могут попадать в организм через дыхательные пути, пищеварительный
тракт, через кожные и слизистые покровы. Каждый антиген стимулирует образование
особых белковых веществ – антител.
Антигены подразделяются на полноценные и неполноценные (гаптены).
Полноценные антигены вызывают полный иммунный ответ. Неполноценные антигены
самостоятельно не вызывают иммунного ответа, но иногда приобретают эту способность
при конъюгации с высокомолекулярными белковыми носителями. Кроме того, бывают
антигены: полугаптены, проантигены, гетероантигены и изоантигены.
Антитела представляют собой иммуноглобулины сыворотки крови человека или
животного. Образуются антитела после перенесенной инфекции, и в результате
иммунизации ослабленными или убитыми бактериями, риккетсиями, вирусами,
токсинами и другими агентами. Антитела – белки иммуноглобулинов по химическому
составу относятся к гликопротеидам. По структуре и иммунобиологическим свойствам
иммуноглобулины подразделяются на 5 классов: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Нормальные антитела обнаруживают у людей и животных не иммунизированных. Спе-
цифические антитела образуются в результате перенесенной инфекции или же иммунизации.
Реакции взаимодействия антитела с антигеном называются серологическими.
Серологические реакции отличаются высокой специфичностью и применяются при
диагностике многих инфекционных заболеваний. Различают реакции агглютинации и
преципитации.
1. Реакция агглютинации (РА) основана на взаимодействии антигена
(агглютиногена) и антитела (агглютинина), при котором происходит склеивание и
выпадение в осадок микробных тел в присутствии электролита. Существуют различные
модификации постановки реакции агглютинации.
Наибольшее значение имеют:
– Макроскопическая (развернутая) агглютинация в пробирках. К сыворотке больного
добавляют взвесь микробов (диагностикум) и через 1 час в термостате при температуре 37 °
отмечают разведение (титр) сыворотки, при котором произошла реакция. Положительной
считают реакцию агглютинации тогда, когда на дне пробирки образуется осадок с
81
выраженным просветлением надосадочной жидкости. Этот осадок называется
агглютинатом.
По характеру агглютината различают мелкозернистую (О) и крупнозернистую (Н)
агглютинацию. Для выявления мелкозернистого агглютината пользуются
агглютиноскопом. Учет результатов начинают с контрольных пробирок. Последнее
разведение сыворотки, в которой наблюдается агглютинация, считают ее титром.
Цель реакции: обнаружение антител в сыворотке больного.
– Микроскопическая (ускоренная) ориентировочная агглютинация на стекле.
К капле диагностической иммунной сыворотки вносят каплю бактериальной культуры и
равномерно перемешивают. Реакция протекает при комнатной температуре через 5–
10 мин. Затем производят учет. При положительной реакции в капле с сывороткой
отмечают скопление бактерий в виде зернышек или хлопьев. Цель реакции: определение
вида возбудителя по известной диагностической сыворотке.
– Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА). Сущность этой реакции
заключается в том, что эритроциты барана способны адсорбировать на своей поверхности
антигены. Под воздействием специфических антител, эритроциты склеиваются и выпадают
в осадок, образуя на дне гемагглютинат. Реакция отличается высокой чувствительностью и
специфичностью. РНГА позволяет обнаружить минимальное количество антител и неполно-
ценные антигены полисахаридной природы. Эту реакцию применяют при диагностики
многих инфекционных заболеваний (брюшного и сыпного тифа, паратифов, туберкулеза и
др.).
2. Реакция преципитации (РП) – осаждение комплекса антиген-антитело.
Основным отличием РП от РА является то, что при РА применяется корпускулярный
антиген, а при РП – антиген представляет собой коллоидное вещество белковой или
полисахаридной природы. В этой реакции антиген называется преципитиноген, а антитела
– преципитины. Реакцию ставят в пробирках наслоением раствора антигена на иммунную
сыворотку. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе
этих растворов образуется кольцо преципитата. Если в качестве антигена используют
прокипяченные и профильтрованные экстракты органов и тканей, реакция называется
реакцией термопреципитации (реакция Асколи, которую ставят при диагностике
сибирской язвы, чумы, туляремии и др.).
Широкое распространение получили реакции преципитации в агаре: метод
простой диффузии, метод двойной диффузии.
Разновидностью преципитации является реакция флокуляции – для определение
активности анатоксина или антитоксической сыворотки. Кроме того, можно использовать
эту реакцию для определения токсигенности штаммов Corynebacterium diphtheriae.
1. Объяснить роль антигенов, как индукторов иммунного ответа.
2. Описать структуру антигенов, в том числе антигенов микроорганизмов.
3. Описать структуру антител (разных классов иммуноглобулинов).
4. Проанализировать механизм взаимодействия антител с антигенами.
5. Описать механизм реакции агглютинации.
6. Описать механизм реакции преципитации.
Уметь:
1. Пояснить роль антигенов, как индукторов иммунного ответа.
2. Описать структуру антител (разных классов иммуноглобулинов).
3. Проанализировать механизм взаимодействия антител с антигенами.
4. Трактовать результаты реакции агглютинации.
5. Трактовать результаты реакции преципитации.
82
1. Определение понятия "антигены", "антитела".
2. Роль антигенов как индукторов иммунного ответа.
3. Структура антител (разных классов иммуноглобулинов).
4. Механизм взаимодействия антител с антигенами.
5. Реакции иммунитета, их роль в иммунном ответе и диагностике инфекционных болезней.
6. Механизм реакции агглютинации.
7. Механизм реакции преципитации.

1. Постановка реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке больного.
2. Постановка реакции микроагглютинации на стекле с диагностическими сыворотками
для идентификации чистой культуры бактерий.
3. Оценка результатов реакции агглютинации.
4. Постановка реакции преципитации для выявления антигена бактерий.
5. Оценка результатов реакции преципитации.
6. Оценка результатов реакции непрямой гемагглютинации.
Ю.С. Кривошеин. – К. : Высшая школа, 1992. – 431 с.
2. Микробиология / А.В. Воробьев, А.С. Быков, Е.П. Пашков, А.М. Рыбаков. – М.:
Медицина, 1998. – 336 с.
3. Медицинская микробиология / под ред. В.П. Покровского. – М. : ГЕОТАР-МЕД, 2001. – 768 с.
мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.О. Бабичев. – СПб. : "Специальная литература", 1998. –
592 с.
1. Титов М.В. Инфекционные болезни / М.В. Титов. – К. , 1995. – 321 с.
3. БМЭ. – Т. 1, 2, 7.
Краткие методические указания для работы на практическом занятии
Самостоятельная работа состоит из:
а) постановки реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке больного
и оценки результатов реакции;
б) постановки реакции микроагглютинации на стекле и оценки результатов реакции;
в) постановки реакции преципитации и оценки результатов реакции;
г) оценки результатов реакции непрямой гемагглютинации.
После анализа результатов реакций, записывают в протокол.
В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ
1. На кожно-обрабатывающий завод доставили кожу животных из района, где
регистрируется сибирская язва. Какая из приведенных реакций используется для
83
выявления термостабильного антигена возбудителя сибирской язвы в кожном и меховом
сырье?
А. РА. В. РСК. С. РП. D. РП. Е. РГА.
2. При исследовании иммунологического состояния определяется наличие в сыворотке
всех классов иммуноглобулинов. Каких из перечисленных иммуноглобулинов встречается
больше в сыворотке здорового человека?
А. IgA. В. IgD. С. IgG. D. IgE. Е. IgM.
3. На базаре гражданин А. продавал колбасу под названием «свинная домашняя». В
госсанинспекции возникло подозрение на фальсификацию колбасы. С помощью какой
серологической реакции иммунитета можно идентифицировать пищевой продукт?
А. РСК. В. РНГА. С. Преципитации. D. РА. Е. Иммунофлюорисценции.
4. С целью серологической диагностики коклюша поставлена реакция с коклюшным и
паракоклюшным диагностикумами. На дне пробирок, в которые был внесен диагностикум
из Bordetella parapertusis, образовался зернистый осадок. Какие антитела выявила эта
реакция?
А. Антитоксины. С. Агглютинины. Е. Бактериолизины.
В. Опсонины. D. Преципитины.
5. Чтобы определить токсигенность выделенных от пациентов возбудителей дифтерии,
культуры высевали на чашку Петри с питательной средой с двух сторон от
расположенной в центре полоски фильтровальной бумаги, смоченной
противодифтерийной антитоксической сывороткой. После инкубации посевов в агаре
между отдельными культурами и полоской фильтровальной бумаги обнаружены участки
помутнения среды. Какую серологическую реакцию было проведено?
А. Преципитации в геле. С. Агглютинации. Е. Опсонизации.
В. Кумбса. D. Кольцепреципитации.
6. Из организма больного выделен возбудитель заболевания. Его следует идентифицировать
по антигенной структуре. Какую серологическую реакцию необходимо использовать?
А. Преципитации. С. Нейтрализации. Е. Опсонизации.
В. Связывания комплемента. D. Агглютинации.
7. Серологическая диагностика инфекционных заболеваний основывается на
специфическом взаимодействии антител с антигенами. Как называется серологическая
реакция, которая состоит в склеивании микроорганизмов под действием на них
специфических антител при наличии электролита?
А. Гемадсорбции. С. РСК. Е. Нейтрализации.
В. Преципитации. D. Агглютинации.
реакция, при которой высокодисперсные антигены адсорбированы на эритроцитах?
А. Нейтрализации. С. РСК. Е. Непрямой (пассивной)
В. Преципитации. D. Гемадсорбции. гемагглютинации.
реакция осаждения с раствора антигена под влиянием на него иммунной сыворотки и
электролита?
А. Нейтрализации. С. РСК. Е. Преципитации.
В. Агглютинации. D. Гемадсорбции.
1. Постановка реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке больного.
2. Оценки результатов реакции агглютинации.
3. Постановка реакции микроагглютинации.
4. Оценка результатов реакции микроагглютинации на стекле.
5. Постановки реакции преципитации.
84
6. Оценка результатов реакции преципитации.
7. Оценка результатов реакции непрямой гемагглютинации.
8. Запись схем реакций и выводов в протокол.
10. Тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.
85
Граф логической структуры темы: "РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА:
реакция агглютинации, реакция преципитации"
Реакции иммунитета
Для выявления Для выявления

антител в сыворотке Для идентификации термостабильных Для выявления
больного бактерий антигенов бактерий экзотоксинов и антигенов
Реакция агглютинации Реакция агглютинации Реакция Реакция преципитации

в пробирках на стекле термопреципитации в агаровом геле
Агглютиногены Чистая культура бактерій+ Экстракт из исследуемого Преципитирующая сы-

(диагностикум) + сыворотка +диагностические материала + преципи- воротка в лунках агара +
больного агглютинирующие тирующая сыворотка + культура бактерий
сыворотки
Инкубация 30 мин Комнатная t Комнатная t Инкубация

при t = 37 °С при t = 37 °С
86
Тема: Реакции иммунитета:

реакция связывания комплемента, реакция лизиса
Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания комплемента
и реакции лизиса

Актуальность темы.
Несмотря на значительное количество общепринятых методов диагностики,
большинство из них по точности, надежности и чувствительности не в полной мере
отвечают современным требованиям. Это связано с биологическими особенностями ряда
возбудителей, что ограничивает применение бактериологических и вирусологических
методов, и заставляет исследователей вести разработку новых более эффективных
диагностических методов.
В связи с этим в последние годы разработан ряд иммунологических тестов,
которые отличаются высокой чувствительностью и специфичностью, а также быстротой
получения результата. К таким исследованиям относятся ЦПР, иммуноферментный
анализ, реакция иммуноблотинга, иммунохроматографический анализ и др.
Успех серологической диагностики зависит от специфичности реакции и
соблюдения временных условий взятия крови, необходимых для синтеза организмом
антител.
Взаимодействие антигена с антителом вызывает ряд строго специфических
явлений в виде феноменов, доступных для наблюдения в пробирках и нашедших
практическое применение в лабораторной диагностике в виде иммунологических реакций.
Широкое применение в лабораторной диагностике инфекционных болезней имеют, на
ряду с другими, классические реакции: реакция связывания комплемента, реакции лизиса.
Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических
исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические
исследования (от лат. serum – сыворотка + logos – учение) – методы изучения антител и
антигенов с помощью реакций антиген-антитело в сыворотке крови и других жидкостях, а
также тканях организма.
К основным серологическим реакциям относятся реакции агглютинации,
преципитации, лизиса, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с
использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический,
иммуноферментный, иммунофлюоресцентный). Перечисленные реакции отличаются по
регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции
взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и
антигенов.
Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате
присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном.
Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в две фазы:
1-я фаза – инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической
сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом;
2-я фаза – индикаторная – определение наличия в смеси свободного комплемента
добавлением гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и
87
гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. В 1-й фазе
реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им
комплемента, во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов
отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело
не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2-й фазе реакции он
присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической
сыворотки, вызывая гемолиз.
РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности
сифилиса (реакция Вассермана).
Реакцией лизиса называется растворение антигена, соединенного с антителами,
в присутствии комплемента. Лизины (антитела, участвующие в реакции) проявляют
действие только в присутствии комплемента.
Специфические антитела взаимодействуют с различными клетками, в том числе
бактериями и простейшими, что приводит к активации системы комплемента по
классическому пути и последующему лизису клеток. Среди них известны реакции
вибриолиза и реакции гемолиза.
Большинство микроорганизмов, за исключением холерного вибриона и трепонем,
устойчивы к литическому действию антител. Поэтому реакция лизиса не нашла широкого
применения в лабораторной практике.
Реакцию лизиса используют в качестве индикаторной системы в реакции
связывания комплемента.
Для постановки реакции лизиса и РСК используют комплемент, который
содержится в сыворотке крови морских свинок.
1. Объяснить ценность реакции связывания комплемента (РСК) в диагностике
инфекционных болезней.
2. Объяснить ингредиенты, необходимые для постановки РСК.
3. Объяснить механизм РСК.
4. Объяснить учет РСК.
5. Отметить особенности реакции Вассермана при сифилисе и РСК в модификации Физе
при риккетсиозах).
6. Объяснить реакцию бактериолиза (феномен Исаева-Пфайфера).
Уметь:
1. Поставить РСК.
2. Пояснить механизм РСК.
3. Провести учет реакции.
4. Пояснить феномен Исаева-Пфейфера.
1. Сущность РСК. Необходимость использования индикаторной системы.
2. Характеристика и подготовка ингредиентов РСК.
3. Механизм РСК.
4. Практическое использование РСК, реакции бактериолиза.

1. Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комплемента,
рабочая доза).
2. Постановка РСК.
88
3. Учет РСК.
4. Изучение реакции бактериолиза Исаева-Пфейфера (по таблице).
Ю.С. Кривошеин. – К. : Высшая школа, 1992. – 431 с.
Медицина, 1998. – 336 с.
3. Медицинская микробиология / под ред. В.П. Покровского. – М. : ГЕОТАР-МЕД, 2001. – 768 с.
4. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / учебник для
мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.О. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. – 592 с.
5. Тимаков В.Д. Микробиология / учебник / В.Д. Тимаков, В.С. Левашев, Л.Б. Борисов. – 2-е
изд., перераб. и доп. – М. : Медицина, 1983. – 512 с.
1. Титов М.В. Инфекционные болезни / М.В. Титов. – К. , 1995. – 321 с.
3. БМЭ. – Т. 1, 2, 7.

Самостоятельная работа заключается в:
а) постановке реакции связывания комплемента, оценке результатов реакции;
б) разборе реакции бактериолиза Исаева-пфайфера (по таблице).

1. Гемолитическая сыворотка против эритроцитов барана необходима для работы в
лаборатории, где проводится серологическая диагностика инфекционных болезней. Для
чего ее используют?
А. Для определения видовой принадлежности эритроцитов в судебно-медицинской
экспертизе.
В. Для реакции непрямой гемагглютинации.
С. Для диагностики гемолитической болезни новорожденных при резус-конфликте.
D. Для реакции торможения гемагглютинации.
Е. Как компонент гемолитической системы в реакции связывания комплемента.
2. Для серологической диагностики сифилиса с использованием реакции Вассермана врач-
лаборант подготовил следующие реактивы: кардиолипиновый антиген; спиртовой
экстракт липидов с сердечной мышцы быка с холестерином; антиген из трепонем,
разрушенных ультразвуком; гемолитическую систему; изотонический раствор натрия
хлорида; исследуемые сыворотки. Какой еще компонент необходим для постановки этой
реакции?
А. Эритроциты барана. D. Живые трепонемы.
В. Антиглобулиновая сыворотка. Е. Диагностическая преципитирующая
С. Комплемент. сыворотка.
3. В женскую консультацию пришла женщина на 8 неделе беременности. При
обследовании у нее взяли кровь для проверки на наличие специфических антител к
89
трепонемам. Какие из перечисленных ниже серологических реакций могут быть
использованы для выявления антител к трепонемам?
А. Кожная проба Манту. С. Реакция Видаля. Е. Реакция Вассермана.
В. Реакция Райта. D. Кожная проба Бюрне.
4. В дермато-венерологическом диспансере в целях диагностики сифилиса применяется
реакция Вассермана. К какому из приведенных типов реакций она принадлежит?
А. РА. В. РП. С. РСК. D. РН. Е. РГА.
5. При добавлении гемолитической (индикаторной) системы к пробиркам с бактериальной
системой в последних произошел гемолиз. О какой реакции идет речь в данном случае?
А. РГА. В. РА. С. РСК. D. РН. Е. РП.
6. При постановке РСК в пробирке с исследуемой сывороткой больного в системе
образовался комплекс антиген-антитело-комплемент, не определяемый визуально. Каким
образом можно выявить этот комплекс антиген-антитело-комплемент?
А. Используя индикаторную тест-систему. D. Добавив гемолитическую сыворотку.
В. Заразив кролика. Е. Добавив физраствор.
С. Добавив 3%-ю взвесь эритроцитов.
7. При постановке РСК с сывороткой больного с подозрением на хроническую гонорею,
она оказалась положительной на 4 креста во всех разведениях сыворотки (от 1:5 до 1:160).
Как можно определить визуально феномен положительной РСК на 4 креста?
А. Наличие осадка и бесцветной С. Образование "зонтика".
надосадочной жидкости. D. Образование "пуговки".
В. Образование пленки. Е. Образование хлопьев.
8. Известно, что на каждый возбудитель болезни в организме человека образуются
антитела: агглютинины, преципитины, опсонины, лизины, комплементсвязывающие и
другие. В какой серологической реакции можно выявить комплементсвязывающие?
А. РА на стекле. В. РП в агаре. С. РСК. D. РГА. Е. РНГА.
9. После проникновения в организм бактерии фагоцитируются макрофагами. Какую роль
играют макрофаги в кооперации иммунокомпетентных клеток на первом этапе
формирования иммунного ответа?
A. Активируют NK-клетки.
B. Активируют Т-киллеры.
C. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-хелперам.
D. Продуцируют иммуноглобулины.
E. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-киллерам.
10. У больной, 37 лет, на протяжении года периодически возникали инфекционные
заболевания бактериального генеза. Их течение было длительным, ремиссии –
кратковременными. При обследовании обнаружена гипогаммаглобулинемия. Нарушение
функций каких клеток может быть прямой ее причиной?
A. Нейтрофилов. C. Фагоцитов. E. Т-лимфоцитов.
B. В-лимфоцитов. D. Макрофагов.
11. Наиболее важным центральным органом иммунной системы человека есть тимус,
к которому относиться часть стволовых клеток крови для их дальнейшего дозревания.
Какие клетки иммунной системы человека дифференцируются в этом органе?
A. Т-лимфоциты. C. Макрофаги. E. Микрофаги.
B. Плазматические. D. В-лимфоциты.
1. Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комплемента,
рабочая доза).
2. Постановка РСК.
3. Оценка результатов РСК.
90
4. Изучение бактериолиза на примере реакции Исаева-Пфейфера (по таблице).
91
Методическая рекомендация для студентов к практическому занятию 18
Тема: Учение об иммунитете. Серологические реакции с меткой
Цель: Изучить механизм постановки серологических реакций с метками и
ПЦР для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний
Актуальность темы. Иммунохимические методы анализа, основанные на
специфическом связывании определяемого соединения соответствующими антителами,
широко вошли в аналитическую практику и используются в различных областях
медицины, сельского хозяйства, микробиологической и пищевой промышленности, для
целей охраны окружающей среды. Индикация образующегося комплекса антиген-
антитело может быть осуществлена, если в один из исходных компонентов реакционной
системы ввести метку, которая легко детектируется соответствующим
высокочувствительным физико-химическим методом. Весьма удобными для этой цели
оказались изотопные, ферментные, флуоресцентные, парамагнитные и др. метки,
использование которых дало возможность увеличить чувствительность классических
иммунохимических методов анализа в миллионы раз, а время анализа уменьшить до
нескольких минут.
Исторически первым среди них был радиоиммунологический анализ (РИА),
предложенный в конце 50-х годов прошлого века. Благодаря возможности определять
метку, которой являлся изотоп 125I, в очень малых концентрациях, удалось достигнуть
высокой чувствительности анализа (на уровне пкг/мл).
Радиоиммунный метод, является наиболее информативным, основан на
исследовании характера взаимодействия антитела с антигеном с образованием иммунного
комплекса, в один из компонентов которого (антиген или антитело) введена
радиоактивная метка. Наибольшее распространение получил метод конкуренции за
специфические антитела меченного радиоактивным изотопом антигена и такого же
антигена, но свободного от радиоактивной метки, количество которого необходимо
определить в исследуемой биологической среде. С этой целью в исследуемую жидкость, в
которой предполагается наличие антигена, добавляют известное количество такого же
меченного антигена и стандартное количество антисыворотки с соответствующими
антителами.
Если в исследуемой жидкости отсутствует искомый специфический антиген, то
около 70–80% меченного антигена связывается с антителами, обусловливая высокую
радиоактивность образующегося преципитата. Если же в биологической среде
присутствует искомый антиген, он конкурирует с меченным антигеном и связывает часть
антител. В результате радиоактивность преципитата падает по сравнению с контролем. На
этом принципе основано количественное определение антигенов или антител. Так как
меченый антиген добавляется в определённой дозе, то можно определить, какая его часть
связалась с антителами, а какая осталась не связанной в результате конкуренции с
выявляемым не меченым антигеном. При определённых концентрациях количество
меченого антигена, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству
определяемого антигена. После взаимодействия антигенов с антителами образовавшийся
комплексы антиген – антитело отделяют от свободного меченого антигена. Способы
отделения: 1. Электрофорез; 2. Гель – фильтрации; 3. Фракционного осаждения
иммунного комплекса этанолом и др. Отделив меченый антиген от комплекса антиген–
антитело определяют количество меченого антигена, связавшегося в комплексе по
количеству импульсов (сцинтилляционным счетчиком). Уменьшение количества
импульсов в единицу времени в сравнении с соответствующими контролями
92
свидетельствует о присутствии гомологичного меченого антигена, связанного с
антисывороткой, в результате чего антиген не вступил в реакцию и не определяется в
комплексе антиген–антитело.
В середине 60-х годов для идентификации и локализации антигенов в
гистохимических препаратах и выявления полос преципитации в иммунодиффузных и
иммуноэлектрофоретических методах в качестве высокочувствительной метки было
предложено использовать молекулы ферментов. Являясь по своей природе мощными
химическими катализаторами, ферменты способны эффективно осуществлять наработку
легко детектируемого продукта, что делает возможным определение ферментной метки в
весьма малых концентрациях.
На протяжении последних трех десятилетий иммуноферментные методы анализа
интенсивно развивались как в теоретическом, так и практическом плане и к настоящему
времени они сформировались в самостоятельное научное направление, имеющее важное
прикладное значение. Наибольшее распространение получили гетерогенные методы
иммуноферментного анализа, основанные на использовании полистироловых планшетов
для иммобилизации антител или антигенов, специфическом связывании определяемого
вещества на стенках лунок планшета и последующем выявлении образовавшихся
иммунокомплексов с помощью меченных ферментами компонентов.
Иммуноферментный метод основан на учете реакции антиген-антитело, причем в
качестве метки, позволяющей обнаружить иммунный комплекс, используют ферменты,
например пероксидазу, щелочную фосфатазу. Одним из распространенных вариантов
таста ИФА является твердофазный метод "Сэндвич–метод": вначале на стенках
полистироловых пробирок сорбируют антитела против определенного антигена. В эту
же пробирку вносят исследуемый биологический образец. Если там содержатся искомые
антигены, они взаимодействуют с антителами и вместе с ними фиксируются на стенках
пробирки. После этого в пробирку вводят антитела к данному антигену, меченные
ферментом, которые также присоединяются к образовавшемуся иммунному комплексу и
остаются на стенках пробирки. Для обнаружения и количественной оценки этих
комплексов в пробирку добавляют перекись водорода (Н 2О2) и хромогены. Фермент
(пероксидаза) разлагает Н2О2 с выделением кислорода. Последний окисляет хромоген,
который приобретает желтый цвет. Интенсивность окрашивания и, соответственно,
количество искомого антигена оценивают фотометрически.
Этапы проведения ИФА:
1. Инокуляция биоматериала и реактивов в лунки полистироловых планшетов
микротест системы (на которых сорбированы Ат против определенного Аг и фермент).
2. Термостатирование и встряхивание на шейкере для равномерного
перемешивания реакционной смеси в лунках планшета.
3. Промывка лунок планшета на вошере (автоматический промыватель планшетов) –
для отмывки не связавшихся субстанций (Ат, конъюгата и др.).
4. Добавление окрашенного субстрата (хромогена).
5. Регистрация результата на ридере (спектрофотометре, фотоколориметре для
определения оптической плотности исследуемого раствора в лунках планшета).
В последние годы для количественного радиоиммунного и иммуноферментного
определения различных антигенов и антител в биологических средах все чаще используют
так называемые моноклональные антитела. Последние получают не путем иммунизации
животных, а искусственно, путем синтеза так называемых моноклонов, т. е. культуры
клеток, происходящих из одного сенсибилизированного лимфоцита. Моноклональные
антитела отличаются от обычных антител, полученных с помощью классической
иммунизации животных, очень высокой специфичностью и реагируют только на
определенный антиген.
93
Самым распространенным тестом обнаружения аутоантител в исследуемой
сыворотке является реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – люминисценция в
ультрафиолетовом свете микроскопа биологического объекта, содержащего излучаемый
антиген после его предварительной обработки специфическими антителами, меченными
флюорохромом.
Суть метода заключается в том, что локализация антигена в препарате
обнаруживается по специфической флюоресценции в месте реакции антиген–антитело.
Метод основан на использовании явления люминисценции для выявления реакции
антиген–антитело, происходящей на поверхности клеток или на срезах ткани. При этом
антитела, связанны с красителем, например флюоресцеинизотиоцианатом. Большое
преимущество метода заключается в его простоте, высокой чувствительности, а так же в
быстроте получения результатов. Метод был предложен в 1942 г. Кунсом. Специфический
белок метят флюорохромами – это такие красители, которые способны поглощать свет и
излучать его через короткий промежуток времени (10-6–10-9с). Интенсивность
флюоресценции пропорциональна интенсивности возбуждающего излучения, и при
малых концентрациях вещества возможно количественно определить флюоресцирующее
вещество на микроскопическом или цитологическом препарате.
Механизм реакции: происходит конъюгация белка с флюорохромом, которая
является по своей сути химической реакцией, в результате чего образуется новое
соединение, в котором краситель присоединяется к белку ковалентной связью. В реакции
участвуют в основном ε – аминогруппы лизина и концевые аминогруппы белковой
молекулы.
Метод применяется в трёх основных модификациях:
1. При прямом методе (Кунс и Каплан) на препарат, содержащий искомый антиген,
наносят специфическую люминисцентную сыворотку (антитело). После реакции препарат
промывают и изучают в люминисцентном микроскопе. Таким образом, реакция протекает
одноэтапно.
2. При непрямом варианте РИФ (Уэллер и Кунс). Раствор немеченных антител
наносят на срез (ткань различных органов животных, содержащих известные антигены),
а затем выявляют их при помощи меченных флюорохромом антииммуноглобулиновых
антител.
3. Непрямой метод с комплементом (Гольдвассер, Шепард). Этот вариант метода
разработан для определения комплемент – связывающих антител. После обработки среза
антителами на него наносят в качестве источника комплемента свежую сыворотку.
Комплемент связывается в участках, где фиксированы антитела. В результате эффекта
усиления при активации комплемента по классическому пути одна молекула антител
может вызывать связывание многих С3 – молекул на срезе; их выявляют, обрабатывая
срез флюоресцентно меченными антителами анти-С3. Препараты изучают в
люминисцентном микроскопе (ЛЮМАМ).
В современной медицинской практике с каждым годом возрастает роль
лабораторной диагностики как основного инструмента постановки диагноза и
мониторинга терапии. Одним из бурно развивающихся и востребованных методов
лабораторной диагностики является иммунохроматографический анализ (ИХА) – метод
одноэтапного быстрого качественного определения наличия антител к возбудителям
заболеваний in-vitro в биологических материалах (моча, цельная кровь, сыворотка или
плазма крови, слюна, кал и т.д.). Данный вид анализа осуществляется при помощи
индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-кассет, которые обеспечивают
быстроту проведения тестирования. ИХА – метод сухой иммунохимии, стрип-тест,
экспресс-тест или экспресс-анализ. Эти названия связаны с быстротой проведения этого
метода анализа.
94
Принцип действия ИХА с помощью полосок состоит в том, что при погружении
теста в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу
тонкослойной хроматографии. Подвижной фазой в данном случае является
физиологическая жидкость. Вместе с жидкостью движутся и антитела с красителем. Если
в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, инфекционный или
онкологический маркер), то происходит его связывание, как с первым, так и со вторым
типом антител, что является уже иммунологическим методом анализа. При этом
происходит накопление антител с красителем вокруг антител, жестко иммобилизованных
в тест-зоне ИХА-полоски, что проявляется в виде яркой темной полосы. Несвязавшиеся
антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют со
вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая темная полоса.
Взаимодействие (и темная полоса) в контрольной зоне должны проявляться всегда (если
анализ проведен правильно), независимо от присутствия исследуемого антигена в
физиологической жидкости. Результаты определяются визуально или компьютерной
обработкой отсканированного изображения. В ИХА- тестах используется три типа
антител:
1. Растворимые моноклональные антитела к исследуемому антигену или антителу,
конъюгированные ("сшитые") с коллоидным золотом – красителем, который можно легко
идентифицировать даже в самых малых концентрациях. Эти антитела нанесены вблизи
участка погружения тест-полоски в физиологическую жидкость (мочу, кровь).
2. Поликлональные антитела к исследуемому антигену или антителу, жестко
иммобилизованные в тест-зоне полоски.
3. Вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко иммобилизованные в
контрольной зоне тест-полоски.
Принцип действия ИХА с помощью тест-кассет, состоит в том, что
исследуемый образец абсорбируется поглощающим участком планшета. При наличии в
анализируемом образце антител к возбудителю заболевания последние вступают в
реакцию с протеином А, конъюгированным с частицами коллоидного золота, образуя
окрашенный комплекс. Этот комплекс движется по мембране и связывается с
рекомбинантным антигеном, иммобилизованным на мембране в тестовой зоне планшета,
образуя полоску розово-фиолетового цвета на уровне маркировки Т (Test). Остальные
компоненты образуют полоску розово-фиолетового цвета в тестовой зоне на уровне
маркировки С (Control). Результаты реакции оцениваются визуально в течение 10 мин. В
том случае, когда концентрация антител к возбудителю заболевания в анализируемом
образце сыворотки крови равна пороговому уровню или превышает его, в тестовой зоне
выявляются две полоски розово-фиолетового цвета на уровне маркировок Т и С.
Основными преимуществами использования иммунохроматографического анализа
являются:
 Простота и удобство – позволяет получить результат (анализ и первичное
представление о причине заболевания) без оборудования и специальных навыков
 Надежность – достоверность тестов достигает 92–99,8%, при этом каждый тест
имеет встроенный внутренний контроль
 Экономичность – минимальные затраты на приобретение теста и экономия
времени на проведение обследования. В рознице стоимость одного ИФА-исследования в
5–10 раз дороже ИХА и получение результата минимум на следующий день
 Анонимность – что особенно важно при выявлении заболеваний, передаваемых
половым путем, других инфекционных заболеваний, а также выявлении фактов
употребления наркотических веществ
 Независимость – не требует предварительной медицинской консультации и
рецепта врача.
Высокочувствительным методом, основанном на сочетании электрофореза и ИФА
(или РИА), является иммуноблоттинг (Вестерн-блонттинг), с помощью которого
95
проводится идентификация исследуемых антител после электрофоретического разделения
их и последующего тестирования с помощью меченных антивидовых антител.
1. Иммуноблот с РИА. Антигены возбудителя (исследуемые антигены) сначала
разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Полученные фракции
переносят (блоттинг – от англ. blot – пятно) электрофоретически на нитроцеллюлозную
мембрану, которая помещается в специальную камеру. Затем эти блоты обрабатывают
специальными Ат к специфическому Аг, отмывают и добавляют радиоактивно меченный
конъюгат для определения связавшихся с Аг Ат. Блоты помещают в кассету с
рентгеновской пленкой и на проявленной пленке при положительной реакции видны
полосы локализации Аг, связавшего меченные Ат.
2. Иммуноблот с ИФА. Фирмы выпускают коммерческие полоски с «блотами»
антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем после инкубации,
отмывают от несвязавшихся Ат больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов
человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген +
антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного
субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.
При наличии в исследуемой сыворотке крови специфических антител к
индивидуальным белкам возбудителя образуется видимый преципитат. Положительные
реакции выглядят в виде ИФА – пятен, каждое из которых соответствует дискретной паре
антиген–антитело. Единственное пятно позволяет усомниться в истиности результата.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это амплификация специфических
последовательностей нуклеиновых кислот, с помощью которой в течение нескольких
часов можно размножить нужную последовательность в миллионы раз. ПЦР позволяет
осуществить такую амплификацию в пробирке при помощи фермента термостабильной
ДНК-полимеразы из 4 дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, являющихся структурными
элементами любой ДНК, и коротких олигонуклеотидных 20–30-членных затравок
(праймеров), комплементарных 3´-концевым последовательностям антипараллельных
цепей ДНК гена.
ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода
заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации – изолированное
умножение гена или его фрагмента) специфической последовательности ДНК с помощью
термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок – так называемых
праймеров. Каждый цикл состоит из трех стадий с различным температурным режимом.
В каждом цикле удваивается число копий синтезируемого участка. Вновь
синтезированные фрагменты ДНК служат в качестве матрицы для синтеза новых нитей в
следующем цикле амплификации, что позволяет за 25–35 циклов наработать достаточное
число копий выбранного участка ДНК для ее определения, как правило, с помощью
электрофореза в агарозном геле. Метод высокоспецифичен и очень чувствителен. Он
позволяет обнаружить несколько копий ДНК в исследуемом материале. Данный метод
основан на выявлении в исследуемом образце специфического фрагмента ДНК
возбудителя и на принципе естественной репликации ДНК, включающем расплетение
двойной спирали ДНК, расхождение нитей ДНК и комплементарное достраивание обеих
нитей.
Достоинство:
1. Высокая чувствительность, позволяющая выявить даже единичные клетки
возбудителя, независимо от их природы за 1–2 ч.
2. Высокая специфичность – выявляется характерный только для данного
возбудителя фрагмент ДНК.
3. Быстрота получения результата – весь процесс занимает 3–4 ч.
96
4. Использование при определении возбудителя непосредственно клинического
материала, без специального выделения чистой культуры возбудителя и его
подращивания.
5. Диагностика не только свежих, но и хронических форм инфекций. Метод
эффективен при диагностике трудно культивируемых и персистирующих форм
патогенных микроорганизмов.
6. Возможность выделения ДНК не только живых, но и убитых микроорганизмов.
Стадии метода ПЦР:
І. Выделение ДНК возбудителя из биологического материала.
ІІ. Амплификация ДНК (многократное копирование специфического фрагмента
ДНК) – проводится в термоциклерах "Терцик – Украина" – специальный прибор с
определенным температурным режимом для проведения циклов ПЦР, каждый из которых
состоит из 3-х этапов:
1. Денатурация – нагревание реакционной смеси до 93–95 °С, в результате чего
двухцепочечные молекулы ДНК расплетаются с образованием двух одноцепочечных
молекул.
2. Отжиг (присоединение) – при наличии искомой ДНК-мишени праймеры
отжигаются (присоединяются) к ДНК-мишени при температуре 60 °С. Отжиг происходит
в соответствии с правилом комплементарности Чаргаффа (напротив аденина всегда
находится тимин, а напротив гуанина – цитозин). Когда отжиг праймеров произошел, Таq-
полимераза начинает достраивание второй цепи ДНК.
3. Синтез (элонгация) – доводят температуру в реакционной смеси до оптимума
работы фермента (72 °С). Синтез второй цепи продолжается с максимальной
эффективностью. В дальнейшем этап денатурации, отжига и элонгации многократно
повторяются до 30 и более раз. На каждом температурном цикле количество
синтезированных копий фрагмента ДНК удваивается. Таким образом, данный метод
основан на способности ДНК-полимеразы достраивать одноцепочечную ДНК с
образованием двухцепочечной молекулы.
Праймеры – короткие искусственно синтезируемые молекулы ДНК, идентичные
соответствующим участкам ДНК-мишени.
Taq-полимераза – фермент, обеспечивающий достраивание второй цепи ДНК.
ІІІ. Детекция продуктов амплификации. Продукты ПЦР (ампликоны)
идентифицируют при помощи гелевого электрофореза и результат реакции учитывают по
свечению искомой ДНК возбудителя в УФ свете с помощью прибора -
трансиллюминатора.
1. Объяснить преимущества применения серологических реакций с метками как
экспресс–методов диагностики инфекционных заболеваний.
2. Объяснить суть реакций и механизм проведения серологических реакций с метками.
3. Проанализировать механизм проведения иммуноферметного анализа и сравнить с
иммунохроматографическим анализом.
4. Сравнить преимущества и недостатки ИФА и ИХА.
5. Описать механизм проведения полимеразной цепной реакции.
6. Изучить этапы проведения ПЦР.
7. Перечислить достоинства ПЦР.
Уметь:
1. Пояснить необходимость проведения серологических реакций с метками.
2. Описать этапы проведения реакций с метками.
3. Проанализировать механизм проведения РИА, ИФА и ИХА.
4. Трактовать результаты серологических реакций с метками.
97
5. Трактовать результаты ПЦР.
1. Определение понятия "серологические реакции с метками".
2. Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение.
3. Иммуноферментный анализ, иммуноблотинг. Механизм, компоненты, применение.
4. Механизм проведения радиоиммунного анализа.
5. Иммунохроматографический анализ. Принцип проведения.
6. Механизм полимеразной цепной реакции. Этапы проведения. Учет.
Практические задания, которые выполняются на занятии
1. Разбор схемы постановки ИФА.
2. Разбор схемы постановки ИХА.
3. Оценка результатов реакций.
4. Разбор схемы постановки иммуноблоттинга.
5. Разбор схемы постановки РИА и РИФ.
6. Оценка результатов реакций.
7. Разбор схемы постановки ПЦР.
1. Ройт А. Иммунология : пер. с анг. / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл.– М. : Мир, 2000. –
592 с., с ил.
2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : учебник /под ред.
А.А. Воробъева. – М. : МИА, 2004. – 691 с. : ил.
3. Медицинская микробиология / под ред. В.П. Покровского. – М. : ГЕОТАР-МЕД, 2001. –
768 с.
4. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология / учебник
для мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – СПб. : Специальная литература,
1998. – 592 с.
5. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии : учебное пособие
для студентов медицинских ВУЗов / под ред. А.А. Воробъева, А.С. Быкова. – М. :
МИА, 2003. – 236с. : ил.
6. Сучасні методи лабораторної діагностики інфекційних захворювань : навч. посібник / за
ред. акад. А.Я. Циганенка. – Харків : Вид-во "Основа", 2003. – 88 с.
1. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов. –
М. : Медицинское информационное агенство, 2001. – 736 с.
2. Вершигора А.Е. Общая иммунология / А.Е. Вершигора. – К.: Вища шк., 1990. – 635 с.
3. Воробьёв С.М. Создание иммуноферментной системы для определения
гликопротеинов с использованием моноклональных антител / С.М. Воробьёв,
Т.А. Северина. // Биотехнология. – 1991. – № 4. – С. 82–85.
4. Егоров А.М. Теория и практика иммуноферментного анализа / А.М. Егоров,
А.П. Осипов. – М. : Высшая шк., 1991. – 288 с.
5. Змушко Е.И. Клиническая иммунология : руководство для врачей / Е.И. Змушко,
Е.С. Белозеров, Ю.А. Митин. – СПб. : Питер, 2001. – 576 с.
6. Иммунологические методы исследований / Швейцария. Базельский ин-т иммунологии;
под ред. И. Лефковитса, П. Перниса ; пер. с англ. – М. : Мир, 1988. – 527 с.
Самостоятельная работа состоит из:
98
а) Разбора схемы постановки ИФА и оценки результатов реакции;
б) Разбора схемы постановки ИХА и оценки результатов реакции;
в) Разбора схемы постановки иммуноблоттинга и оценки результатов реакции;
г) Разбора схемы постановки ПЦР.
1. Для выявления антител к возбудителю сифилиса врач-лаборант использовал тест-кас-
сеты набора для проведения иммуно-хроматографического анализа. Учитывая результат
через 10 мин, врач обнаружил одну полоску розово-фиолетового цвета на уровне
маркировки С (контроль). О чем говорит полученный результат?
А. Об отрицательном результате анализа.
В. О положительном результате анализа.
С. О ложноположительном результате.
D. О ложноотрицательном результате.
Е. Необходимо провести дополнительный тест или повторить ИХА.
2. При постановке реакции прямой флюоресценции используют:
А. Помеченные флюорохромом антитела к исследуемому антигену.
В. Непомеченные антитела к исследуемому антигену.
С. Помеченные флюорохромом антигены.
D. Непомеченные флюорохромом антигены.
Е. Гемолитическую систему.
3. При постановке реакции непрямой флюоресценции используют:
А. Помеченные флюорохромом антииммуноглобулины.
В. Помеченные флюорохромом антитела к исследуемому антигену.
С. Непомеченные антитела к исследуемому антигену.
D. Помеченные флюорохромом антигены.
Е. Непомеченные флюорохромом антигены.
4. В качестве маркера при ИФА можно использовать:
А. Щелочную фосфатазу. С. Супероксиддисмутазу. Е. Комплемент.
В. Каталазу. D. Лизоцим.
5. Специфическую диагностику каких заболеваний обеспечивает ПЦР?
А. Венерических заболеваний.
В. Заболеваний, вызываемых ДНК-содержащими вирусами.
С. Бактериальных инфекций.
D. ВИЧ-инфекции.
Е. Всех перечисленных заболеваний.
6. При прямой иммунофлюоресцентной идентификации специфического инфекционного
агента флюорохром связан с:
А. Микроорганизмами (исследуемым антигеном).
В. Эритроцитами барана.
С. Специфическими антителами к человеческому Ig.
D. Специфическими антителами к комплементу.
Е. Специфическими антителами к микроорганизму.
7. Детекцию ДНК проводят с помощью:
А. Электрофореза в геле, свечение в УФ трансиллюминатора.
В. Амплификации специфического фрагмента ДНК.
С. Денатурации ДНК.
D. Элонгации ДНК.
99
Е. Отжига праймеров.
8. Амплификация ДНК возбудителя проходит этапы:
А. Денатурации, присоединения праймеров, синтез новых копий ДНК.
В. Элонгации, присоединения праймеров, синтез новых копий ДНК.
С. Денатурации, присоединения праймеров, детекции ДНК возбудителя.
D. Денатурации, присоединения праймеров, отжига и детекции.
Е. Присоединения праймеров, электрофореза, детекции.
1. Разбор схемы постановки ИФА и оценка результатов реакции;
2. Разбор схемы постановки ИХА и оценка результатов реакции;
3. Разбор схемы постановки иммуноблотинга и оценка результатов реакции;
4. Разбор схемы постановки РИФ и РИА и оценка результатов реакции;
5. Разбора схемы постановки ПЦР.
100
Граф логической структуры темы "СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С МЕТКАМИ. ПЦР"
РИА РИФ ИХА ИФА ИММУНОБЛОТ
Электрофорез Биообразец Биоматериал (сыворотка и В лунках планшета Электрофоретическ

(искомый Аг) + др.) помещается в сорбированы Аг ое разделение Аг в
Добавление Ат, специфическая S-зону тест-кассеты для (или диагности- полиакриламидном
меченных сыворотка исследуемого образца ческие Ат) геле
радиоактивным меченная
изотопом флюорохромом Перенос пептидов Аг
+ сыворотка на нитроцелюлозную
Ингридиенты: больного мембрану
Способы Люминисцентна 1. Моноклональные Ат
отделения я микроскопия с коллоидным золотом
Аг+Ат от + сыворотка + радиоактивно
в S-зоне;
свободного Бактерии в против Ig меченного конъю-
2. Фиксированные Ат
меченного Аг: мазке светятся человека, гата (или сыворотка
(или рекомбинантные
1. Гель – по периферии меченная против Ig человека,
Аг) в зоне Т (тест);
фильтрация. клетки в виде ферментом меченная ферментом
3. Фиксированные
2. Фракционное каймы зеленого иммунные компоненты (пероксидазой)
осаждение цвета в зоне С (контроль) + субстрат - Перенос на
иммунного
хромоген рентгеновскую
«+» – результат: две розово (красно) –
Определение фиолетовые полосы (в зонах Т и С). Регистрация Радиоавтография: «+»
радиоактивности результата на – результат –
иммунного фотометре появление полос
комплекса по «-» – результат: одна розово – фиолетовая (определение (пятен) в месте
количеству полоса (в зоне С). оптической локализации
импульсов комплекса Аг + Ат
101
Граф логической структуры темы "СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С МЕТКАМИ. ПЦР"
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Стадии метода ПЦР Этапы циклов амплификации Температурный режим

в термоциклере
Выделение ДНК возбудителя І. Денатурация – расплетение

из биоматериала двухцепочечных молекул ДНК с
образованием двух t = 93–95 °C
одноцепочечных молекул.
Амплификация ДНК ІІ. Отжиг (присоединение

возбудителя в термоциклере праймеров к специфическим
"Терцик ДНК – Украина" участкам ДНК) - происходит в
t = 54–62 °C
соответствии с правилом
комплементарности
Детекция ампликонов в
агарозном геле методом ІІІ. Синтез (элонгация) – Таq-поли-
электрофореза и учет результата мераза начинает достраивание
t = 72 °C
в УФ свете трансиллюминатора второй цепи ДНК в результате
образуется 2 копии ДНК из 1.
102
Тема: Иммунные сыворотки. Реакция нейтрализации. Титрование
антитоксических сывороток
Цель: Изучение иммунобиологических препаратов, которые используют с лечебной,
профилактической и диагностической целью. Освоение методики
постановки реакции флокуляции для титрования антитоксических
сывороток
Тема 15: Принципы использования микробных антигенов как профилактических и диаг-
ностических препаратов. Тема 16: Иммунопатология.
Актуальность темы. Иммунные сыворотки – это иммунобиологические
препараты, содержащие готовые антитела, которые имеют способность нейтрализовать
действие патогенных микроорганизмов и продукты их жизнедеятельности. Иммунные
сыворотки используют с лечебной, профилактической (для получения пассивного
иммунитета) и диагностической целью.
Иммунные сыворотки, содержащие специфические антитела, получают путем
многократной иммунизации (гипериммунизации) лошадей. В начале, животным подкожно
вводят небольшие дозы антигена, которые постепенно увеличивают. Иммунизацию
прекращают после того, как животные перестает реагировать увеличением титра антител
на повторное введение антигена.
После прекращения иммунизации (через 10–12 дней) проводят кровопускание. Из
крови получают сыворотку. Для удаления балластных белков (которые имеют токсичное
и аллергическое действие) разработанные методы очищения сывороток с помощью
сульфата аммония, электрофореза, ферментативного гидролиза и др.
Иммунные сыворотки, полученные из крови животных, называют гетерологичными,
а из крови людей - гомологичными. По направленности действия сыворотки разделяют на
антитоксические (противодифтерийная, противостолбнячная, противоботулинованя и др.),
антибактериальные и противовирусные (иммуноглобулины).
Антитоксические сыворотки выпускают с определенным содержанием
антитоксинов, силу которых измеряют в международных единицах (МО) или в
антитоксических единицах (АЕ). Для определения силы действия антитоксических
сывороток используют феномен флокуляции.
Титрование антитоксических сывороток проводят двумя методами: по Рамону и по
Эрлиху.
Иммуноглобулины получают из донорской, плацентарной или абортивной крови
человека, а также из сывороток гипериммунизированных животных. Иммуноглобулины
человека менее реактогенны, а потому максимально безвредны; после введения
циркулируют дольше гетерологичных (4–5 нед). Существует два вида иммуноглобулинов
– нормальный (или противокоревой) и иммуноглобулины направленного действия
(противогриппозный, антирабический и др.).
При введении сывороток могут возникать аллергические реакции, такие как
гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ). ГНТ обусловлена взаимодействием
аллергена с IgЕ, которой сорбирован на мембранах тучных клеток и базофилов, что
приводит к высвобождению гистамина, серотонина, эозинофильных и базофильных
хемотаксических факторов и протеаз. Медиаторы взаимодействуют с рецепторами
мышечных, секреторных и других клеток, что ведет к сокращению гладкой мускулатуры,
проницаемости сосудов и отеку.
Для предупреждения анафилактических реакций сыворотки вводят дробно по
методу Безредко.
Сывороточная болезнь развивается через 8–12 сут после введения сыворотки
и обусловленная образованием иммунных комплексов, которые фиксируются в тканях.
103
В норме комплексы АГ-АТ элиминируются фагоцитами. Когда комплексы удержатся
в тканях, то они вызывают реакции воспаления. Макрофаги и нейтрофилы выделяют
протеолитические ферменты и другие медиаторы воспаления, которые и повреждают
ткани.
Диагностические сыворотки используют в серологических реакциях для
определения неизвестного антигена.
В настоящее время широко используют моноклональные антитела, т.е. те антитела,
которые синтезируются одним клоном антителообразующих клеток, т.е. клеток, которые
возникли с одного и того же зрелого В-лимфоцита. Они узнают только один антиген и
взаимодействуют только с ним. Возникновение в организме моноклональних антител было
выявлено при развитии лимфоидных опухолей (плазмоцидом). В этом случае в организме
больного происходит размножение одного клона лимфоцитов. Искусственное получение
клеток-продуцентов моноклональних антител стало возможным после разработки методики
получения клеточных гибридов – гибридом. Гибридома – это гибрид нормальной
антителообразующей и опухолевой клеток. Такой гибрид унаследовал от нормальной клетки
способность к синтезу антител, а от опухолевой - бессмертие и способность к
неограниченному росту.
В 1975 г. Г. Келер и К. Мильштейн осуществили слияние лимфоцитов селезенки
мыши, иммунизированной бараньими эритроцитами, с культивированными клетками
миеломи и определили, что некоторые гибридомы секретируют антитела к бараньим
эритроцитам. Для получения гибридом были использованные такие штаммы миеломних
клеток, которые не содержат фермент гипоксантинфосфорибозилтрансферази и поэтому
гибнут в селективной среде – ГАТ (содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин);
лимфоциты в такой среда не гибнут. Возникающие при слиянии клеток гибридомы
наследуют от В-лимфоцитов способность к синтезу специфических иммуноглобулинов и
способность размножаться в селективной среде ГАТ, а от миеломной клетки – способность к
бесконечному размножению.
Процесс получения гибридом включает следующие стадии:
1) получение линии миеломных клеток. Чаще с этой целью применяют мышиные или
крысиные клеточные линии;
2) получение иммунных В-лимфоцитов (антителообразующих клеток) из селезенки
иммунизированных соответствующим антигеном животных;
3) выделение гибридом и отбор из них интересующего клона;
4) накопление клеток полученного клона для его практического использования.
Преимуществом гибридом является то, что с их помощью возможно получение
неограниченного количества антител, которые сохраняют свою специфичность и
чувствительность.
Моноклональные антитела широко используют для определения белков крови и
других биологических жидкостей, гормонов, ростовых факторов, клеточных рецепторов,
медиаторов воспаления и иммунитета, бактериальных и вирусных антигенов, различных
ядов и др. Моноклональные антитела, благодаря своей высокой специфичности,
стандартности и технологичности получения вытесняют и заменяют иммунные
сыворотки.
1. Ознакомление с этапами получения антитоксических сывороток в производственных
условиях.
2. Ознакомление с принципами и стадиями получения гаммаглобулинов.
3. Ознакомление с принципами постановки реакции нейтрализации и титрованием
антитоксических сывороток.
4. Ознакомление с механизмом аллергических реакций и сывороточной болезни, которые
возникают на введение сывороток.
Уметь:
104
1. Проводить реакцию нейтрализации.
2. Проводить расчет титра сыворотки в поставленном опыте.
1. Классификация иммунных сывороток.
2. Лечебные и профилактические сыворотки и их применение.
3. Диагностические сыворотки и их применение в серологических реакциях.
4. Получение иммунных сывороток от животных и людей.
5. Получение гаммаглобулинов.
6. Антитоксины. Механизм их действия.
7. Титрование антитоксических сывороток.
8. Классификация реакций гиперчуствительности.
9. Осложнения, которые могут возникать при введении иммунных сывороток. Механизм
их возникновения.
10. Получение моноклональних антител.
1. Постановка реакции флокуляции для титрования антитоксической сыворотки
(дифтерийной) по схеме.
2. Учет реакции.
3. Оформление протокола (запись схемы постановки реакции и вычисление титра сыворотки).
Медицина, 1998. – 336 с.
2. Попов М.М. Основы иммунологии : учебник / М.М. Попов, А.Я. Цыганенко,
В.В. Минухин. – Харьков : Вид-во "Основа", 2005. – 276 с.
3. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией /
К.Д. Пяткін, Ю.С. Кривошеїн. – К. : Высшая шк., 1992. – 431 с.
4. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЭОТАР-МЕД,
2001. – 768 с.
Самостоятельная работа состоит из проведения реакции нейтрализации для
определения титра антитоксической сыворотки по Рамону. Для этого в пробирках (in
vitro) используют токсин и сыворотку, которая содержит антитела к этому токсину. При
их смешивании образуется легкое помутнение, потом появляется мелкая взвесь, которая в
конце оседает на дно пробирки. Осадок называется флокулянт, поэтому реакция
называется реакция флокуляции. Помутнение, прежде всего, появляется в того
пробирке, где количество токсина эквивалентно количеству антител. Эта особенность
была использована в производстве антитоксических сывороток для определения
количества антитоксических (международных) единиц в 1 мл изготовленной сыворотки.
За 1 МЕ принимают то наименьшее количество сыворотки, которая может
нейтрализовать 100 смертельных доз токсина (100 Dlm).
Методика постановки реакции:
1) в стерильные сухие пробирки наливают по 2 мл токсина;
2) в первую пробирку вносят 0,1 мл сыворотки, в другую – 0,2 мл, в третью – 0,3 мл и так
далее;
3) пробирки ставят в термостат на 1 ч при температуре 37 °С.
4) проводят оценивание реакции по помутнению. В той пробирке, где помутнения
появится раньше за все и находится 1 МЕ.
В конце лабораторной работы студенты проводят анализ результатов реакции
и вносят их в протокол.
105
1. Больному дифтерией ребенку возрастом 10 лет была введенная большая доза
противодифтерийной сыворотки. На 10 сутки после введения сыворотки у него
повысилась температура до 38,5 °С, появилась сыпь на коже, зуд, отечность и боль в
суставах. Укажите причину возникновения данных симптомов.
А. Анафилактическая реакция. D. Действие эндотоксина возбудителя.
В. Аллергический дерматит. Е. Крапивница.
С. Сывороточная болезнь.
2. При практическом использовании лечебных антитоксических сывороток больному
всегда вводят точно определенные дозы. В каких единицах определяется активность
антитоксической противодифтерийной сыворотки?
А. Международных. С. Летальных. Е. Инфекционных.
В. Флокуляционных. D. Бактериостатических.
3. Мальчик 1,5 лет, не получавший плановые прививки контактировал с больным корью.
С целью экстренной специфической профилактики мальчику был введен донорский гамма-
глобулин. Какой вид иммунитета было создан при этом?
А. Пассивный. С. Естественный. Е. Местный.
В. Антитоксический. D. Поствакцинальный.
4. Женщина, 54 лет обратилась к врачу с жалобами на непереносимость куриных яиц, которая
появилась недавно. Антигистаминные препараты, назначенные врачом, несколько улучшили
состояние больной. Какие антитела оказывают содействие в развитии данной реакции?
A. IgA. B. IgM. C. IgD. D. IgG. Е. IgЕ.
5. У женщины, 37 лет, на протяжении года периодически возникали инфекционные
заболевания бактериального генеза. Болезнь была продолжительна, ремиссии
кратковременны. При обследовании выявлено гипогаммаглобулинемия. Нарушение
функции каких клеток может быть прямой ее причиной?
A. Нейтрофилов. C. В-Лимфоцитов. Е. Базофилов.
B. Эозинофилов. D. Макрофагов.
6. Больная, 27 лет закапала в глаза капли, в состав которых входил пенициллин. Через несколько
минут появились зуд и жжение кожи, отек губ, кашель со свистом, снизилось артериальное дав-
ление. Какие иммуноглобулины принимают участие в развитии данной аллергической реакции?
A. IgA, IgM. B. IgM, IgG. C. IgD, IgM. D. IgG, IgD. Е. IgЕ, IgG.
7. После введения 100 000 МЕ противодифтерийной сыворотки на 10-й день у больного
возникла сывороточная болезнь. Иммуноглобулины каких классов обуславливают
основные механизмы развития сывороточной болезни?
A. IgA, IgЕ. B. IgM, IgЕ. C. IgD, IgA. D. IgG, IgЕ. Е. IgM, IgG.
8. Для постановки туберкулиновой пробы ребенку внутрикожно введен туберкулин. Через
24 ч на месте введения были отмечены гиперемия и уплотнение тканей. Какой механизм
лежит в основе развития данных изменений?
A. Цитотоксичность реагинового типа. D. Образование гранулем.
B. Клеточная цитотоксичность. Е. Антительная цитотоксичность.
C. Иммунокомплексная цитотоксичность.
9. При проведении лабораторной диагностики у больного с подозрением на сальмонеллез
врачом-лаборантом была проведена реакция аглютинации с выделенной чистой культурой
микробов. С помощью какого компонента реакции был подтвержден диагноз?
A. Диагностикум эритроцитарный. D. Агглютинирующая поливалентная сыворотка.
B. Убитые культуры сальмонелл. Е. Антитоксин диагностический.
C. Бактериофаг сальмонеллезный.
10. Больному дифтерией была введенная антитоксическая сыворотка дробным методом.
Как по автору называется этот метод?
A. Шика. B. Манту. C. Безредко. D. Пирке.
106
1. Определение понятия "иммунные сыворотки".
2. Классификация иммунных сывороток.
3. Ознакомление с примерами применения сывороток для профилактики, лечение и диаг-
ностики.
4. Методы получения иммунных сывороток, гаммаглобулинов и моноклональних антител.
5. Определение титра антитоксической сыворотки в реакции нейтрализации.
107
Методические указания для студентов к практическому занятию № 20
Тема: Вакцины. Учение о фагоцитозе

Цель: Изучение иммунобиологических препаратов, для специфической
профилактики. Изучение роли клеточных факторов защиты организма
от инфекционных агентов

профилактических и диагностических препаратов. Тема 15: Принципы
использования микробных антигенов как профилактических и диагностических
препаратов. Тема 16: Иммунопатология.
Актуальность темы:
1. В общем аспекте противоэпидемических мероприятий большое значение
придается профилактике инфекционных заболеваний. Вакцины – это
иммунобиологические препараты, которые предназначены для создания активного
специфического иммунитета. Кроме того вакцины могут быть использованы для лечения
инфекционных болезней. Действующим началом вакцин является специфический
антиген. В качестве антигена используют:
 живые микроорганизмы (бактерии, вирусы);
 инактивированныеі микроорганизмы;
 выделенные из микроорганизмов специфические, так называемые проективные,
антигены;
 токсины, которые выделяют микробы;
 химически синтезированные антигены, аналогичные естественным;
 антигены, полученные с помощью генной инженерии.
Вакцины должны быть: 1) безопасными – не вызвать заболевания,
поствакцинальные реакции и осложнения; 2) иммуногенными – вызвать развитие
надежного и продолжительного иммунитета; 3) стандартными – содержать равное
количество иммуногенного вещества в единице объема. Вакцины вводят в организм
внутримышечно, накожно, подкожно, внутрикожно, перорально, через слизистую носа и
зева. Активный иммунитет создается через 10–12 сут после введении вакцины.
Различают следующие вакцины: из живых ослабленных микроорганизмов, из
инактивированных (убитых) микроорганизмов, химические, анатоксины,
субкомпонентные, генно-инженерные, синтетические, антиидиотипические и ДНК-
вакцины.
Живые вакцины. Первую живую вакцину использовал Э. Дженнер в 1796 г. Он
показал, что прививка людям возбудителя коровьей оспы предохраняет их от заражения
натуральной оспой.
Живые вакцины готовят из ослабленных (атенуированных) штаммов
микроорганизмов. Атенуированными называют штаммы, которые под влиянием тех или
иных факторов потеряли вирулентность, но сохранили иммуногенность. Вакцинные
штаммы получают путем селекции, в условиях повышенной температуры, действием
бактериофагов, антибиотиков, пассажами через животных и неблагоприятные
питательные среды. К живым вакцинам относят оспенную, полиомиелитную (вакцину
Себина), гриппозную, БЦЖ, туляремическую, бруцеллезную.
Живые вакцины создают более продолжительный иммунитет, который может
сохраняться на протяжении многих лет.
108
К живым вакцинам относят. так называемые, векторные рекомбинантные
вакцины. Их получают, встраивая в геном (ДНК) вакцинного штамма вируса или бактерии
ген инородного антигена. Уже полученные рекомбинантные штаммы вируса оспенной
вакцины с встроенным антигеном HBs вируса гепатита В, антигенов вируса бешенства и
клещевого энцефалита.
Инактивированные корпускулярные вакцины. Содержат взвесь убитых
(нагреванием, обработкой спиртом, или формалином и др.) микробных клеток, убитых с
сохранением иммуногенных свойств и наименьшим повреждением антигенной структуры.
Это может быть достигнуто щадящим нагреванием (56–58 °С), действием формалина,
спирта, ацетона и др. К убитым вакцинам относят вакцину против полиомиелита (вакцина
Солка), гриппа, бешенства, брюшного тифа, холеры, чумы, коклюша и др.
Аутовакцины вакцины, изготовлении из убитых микробов, которые были
выделены от больного, для лечения которого предназначен этот препарат.
Анатоксины – это очищенные токсины патогенных микробов, которые
обезврежены формалином и теплом. Такие токсины потеряли свои токсические свойства,
но сохранили иммуногенные. Анатоксины предназначены для создания активного
антитоксического иммунитета и для гипериммунизации животных - продуцентов
антитоксических сывороток (дифтерия, столбняк, холера).
Химические: получают методом химического синтеза или содержат иммуногенные
фракции (проективные антигены) микроорганизмов. Извлеченные из микробов антигены
имеют довольно высокую стабильность и их легче стандартизировать, чем корпускулярные. В
настоящее время используют химические вакцины против холеры, брюшного тифа, коклюша.
Синтетические: готовят из синтетических антигенов. Основными компонентами
таких вакцин является антиген или его детерминанта в молекулярном виде, полимерный
высокомолекулярный носитель для придания макромолекуряности антигена и адьювант,
неспецифично повышающий активность антигена.
ДНК-вакцини: представляют собой плазмидную (бактериальную) ДНК, в которую
встроен ген, кодирующий наиболее важный для иммуногенности вирусный белок.
Полученные и испытываются ДНК-вакцины против ротавирусной инфекции, гепатита С,
ВИЧ.
Антиидиотипические: основаны на использовании идиотипических детерминант.
В настоящее время разрабатывается вакцина против ВИЧ – инфекции.
Вакцинация проводится с учетом эпидемиологической обстановки и медицинских
противопоказаний. К противопоказаниям относят острые заболевания, недавно
перенесенные инфекционные заболевания, хронические инфекции (туберкулез, малярия),
пороки сердца, тяжелые поражения внутренних органов, вторая половина беременности,
при кормлении грудью.
2. Фагоцитоз – это древнейшая форма неспецифичной защиты, которая
представляет собой процесс активного поглощения и переваривания клетками организма
микробов или других посторонних тел, которые попали к нему. Фагоцитами называют
клетки организма, которые способные к фагоцитозу. Среди фагоцитов различают
профессиональные и факультативные фагоциты.
К профессиональным фагоцитам принадлежат нейтрофилы, моноциты крови и
макрофаги тканей. Полиморфноядерные нейтрофилы (микрофаги) обеспечивают
основную защиту организма от патогенных бактерий. Макрофаги (моноциты крови,
тканевые макрофаги) являются основными клетками в борьбе с бактериями, вирусами.
Макрофаги в иммунных реакциях выступают в качестве клеток, которые презентируют
антиген, являются продуцентами цитокинов, которые играют важную роль в развитии и
регуляции иммунных реакций.
109
Распознание профессиональными фагоцитами инородных агентов происходит по
помощи рецептора (неиммуноглобулиновой природы) с лектинотропными свойствами
через антитела, С3 – комплемент, или через АТ и С3, которые могут быть фиксированы на
инородном веществе или на фагоците.
К факультативным фагоцитам принадлежат фибробласты соединительной ткани,
ендотелиоциты синусов селезенки и печени, ретикулярные клетки костного мозга,
селезенки, лимфатических узлов, эозинофилы крови. Эти клетки имеют слабую
фагоцитарную активность и на своей поверхности не несут рецепторов к АТ и С 3 –
комплемента.
В процессе фагоцитоза различают три стадии:
1 стадия – адгезии частей или молекул на фагоците;
2 стадия – поглощение, когда твердые и растворимые частички поглощаются
клеткой образуя фагосому, которая в свою очередь сливается с лизосомами клетки,
образовывая фаголизосому.
3 стадия – стадия переваривания.
Для разрушения поглощенных микробов и вирусов фагоцитирующие клетки
используют кислородозависимые и кислородо-независимые механизмы. В случае
действия кислородозависимого механизма уничтожения поглощенных объектов
происходит в результате влияния на них надпероксидных анионов (ОБ2-), пероксиду
водорода (Н2О2), гидроксильных радикалов. При кислородонезависимом механизме
уничтожение микробных клеток происходит за счет протеиназного эффекта. В этом случае
разрушение бактерий происходит путем расщепления мукопептидов их стенки катионными
белками и лизоцимом.
Фагоцитированные микробы под влиянием бактерицидных систем в большинстве
случаев гибнут внутри фагоцита. Процесс, который сопровождается гибелью бактерий,
называется завершенным фагоцитозом. В некоторых случаях поглощенные
микроорганизмы в результате сниженной бактерицидной активности фагоцитов или
высокой стойкости микробов к действию бактерицидных факторов могут выживать и
активно размножаться внутри фагоцитов, обуславливая хроническое воспаление или
хронический ход инфекции. Это явление получило название незавершенного фагоцитоза.
Наблюдается оно при туберкулезе, бруцеллезе, туляремии, гонореи и других инфекциях.
1. Изучение классификации вакцин.
2. Принципы получения разных вакцин.
3. Использование вакцин для профилактики и лечение инфекционных болезней.
4. Изучение роли клеточных иммунных факторов организма от инфекционных агентов.
5. Правильно интерпретировать результаты фагоцитоза при проведении лабораторной
диагностики инфекционных заболеваний.
Уметь:
1. Правильно определять стадии фагоцитоза.
2. Уметь интерпретировать результаты фагоцитоза при проведении лабораторной диаг-
ностики инфекционных заболеваний.
1. Понятие об активном искусственном приобретенном иммунитете.
2. Вакцинопрофилактика инфекционных болезней.
3. Виды вакцин. Требования к вакцинам и пути их введения.
4. Вакцинотерапия инфекционных заболеваний.
110
5. Понятие о фагоцитозе.
6. Виды фагоцитарных клеток.
7. Стадии фагоцитоза. Завершенный и незавершенный фагоцитоз
8. Связь клеточного и гуморального иммунитета.
9. Использование фагоцитоза для лабораторной диагностики.

1. Изучают стадии фагоцитоза в микропрепаратах под иммерсионным микроскопом.
2. Интерпретируют результаты завершенного и незавершенного фагоцитоза.
3. Зарисовывают стадии фагоцитоза в альбом.
Медицина, 1998. – 336 с.
2. Попов М.М. Основы иммунологии : учебник / М.М. Попов, А.Я. Цыганенко,
В.В. Минухин. – Харьков : Вид-во "Основа", 2005. – 276 с.
4. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. ГЭОТАР-МЕД,
2001. – 768 с.

Самостоятельная работа состоит из изучения коллекции вакцин и наблюдений
стадий фагоцитоза в микропрепаратах, интерпретации результатов завершенного и
незавершенного фагоцитоза. В состав самостоятельной работы входит зарисовка
демонстрационных препаратов.
Целевые обучающие заданияя
1. В связи со случаем дифтерии возникла необходимость провести профилактические

прививки в студенческой группе. Какой препарат нужно использовать для создания
искусственного активного иммунитета?
A. Дифтерийный анатоксин. D. Вакцину АКДС.
B. Антидифтерийную сыворотку. E. Вакцину из убитых бактерий.
C. Специфические иммуноглобулины.
2. С приближением эпидемии гриппа районный эпидемиолог составляет заявление на
профилактические препараты. Который из них способствует формированию активного
специфического иммунитета и является наименее реактогенним?
A. Субединичная вакцина. C. Убитая вакцина. E. Лейкоцитарный
интерферон.
B. Живая вакцина. D. Донорский γ-глобулин.
3. Для создания активного иммунитета у человека используются многочисленные
вакцинные препараты. Какой препарат представлен живыми атенуированными
бактериями?
A. Вакцина АКДС. D. Вакцина против гепатита В.
B. Вакцина БЦЖ. E. Вакцина против гепатита А.
111
C. Вакцина Солка.
4. После проникновения в организм бактерии фагоцитируются макрофагами. Какую роль
играют макрофаги в кооперации иммунокомпетентных клеток на первом этапе
формирования иммунного ответа?
A. Активируют NK-клетки.
B. Активируют Т-киллери.
C. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-хелперам.
D. Продуцируют иммуноглобулины.
E. Обеспечивают процессинг и презентацию антигена Т-киллерам.
5. Какой из перечисленных иммунных препаратов предназначенный для создания
антитоксического иммунитета?
A. Противодифтерийная антитоксическая сыворотка. D. Противокоревой γ-глобулин.
B. Противогриппозный γ-глобулин. E. Сыворотка лептоспирозная.
C. Анатоксин дифтерийный.
6. Из материала, взятого у больного с подозрением на гонорею, был приготовлен мазок из
уретры и окрашен по Граму. Внутри лейкоцитов были найденные грамотрицательные
диплококки. Как правильно называется это явление?
A. Поглощение бактерий. D. Разрушение бактерий.
B. Завершенный фагоцитоз. E. Незавершенный фагоцитоз.
C. Переваривание бактерий.
7. Для профилактики какого заболевания используют живую вакцину БЦЖ:
A. Дифтерии. B. Лептоспироза. C. Гриппа. D. Столбняка. E. Туберкулеза.
8. Какие основные требования предъявляют к вакцинам?
A. Безопасность. C. Стандартность. E. Все
перечисленное.
B. Иммуногенность. D. Отсутствие посторонней микрофлоры.
9. В процессе приготовления вакцины возбудитель инфекции был обработан формалином.
Как называется этот тип вакцины?
A. Инактивированная. C. Субъединичная. E. Синтетическая.
B. Аттенуированная. D. Чимическая.
10. Женщина со сроком беременности 32 нед была в контакте с больной корью. В
анамнезе данные о заболевании на корь отсутствуют. Что необходимо предпринять?
A. Провести вакцинацию живой коревой вакциной.
B. Ввести иммуноглобулин нормальный человеческий.
C. Ввести интерферон лейкоцитарный.
D. Провести вакцинацию убитой коревой вакциной.
E. Ничего не следует делать.

1. Современные представления о механизме иммунного ответа.
2. Определение понятия “вакцины”.
3. Классификация вакцин.
4. Принцип и общая процедура изготовления вакцин разных типов.
5. Преимущества и недостатки вакцин живых и инактивированных вакцин.
6. Требования к вакцинам.
7. Изучение механизма действия вакцин.
8. Противопоказание к применению вакцин.
9. Определение понятия “фагоцитоз”.
10. Свойства и функции фагоцитов.
11. Ознакомление со стадиями фагоцитоза в микрослайдах.
112
Методические указания для студентов к практическому занятию № 21
Тема: Антибиотики
Цель: Овладение практическими навыками по определению чувствительности
бактериальной культуры к антибиотикам и составление
антибиотикограммы

Содержательный модуль 5. Микробиологические основы антимикробной химиотерапии
и антисептики.
Тема 8: Химиотерапевтические препараты. Антибиотики.
Актуальность темы. Антибиотики (от греч. аnti bios - против жизни) –

химиотерапевтические препараты природного или синтетического происхождения,
способные выборочно подавлять в организме больного рост и размножение возбудителей
инфекционных заболеваний или задерживать развитие злокачественных новообразований.
В основе выборочного действия антибиотиков лежат возникшие в процессе эволюции
структурные и биохимические отличия двух основных групп клеточных организмов:
прокариотов и эукариотов. Действие антибиотиков на микробы связано с их
способностью угнетать биохимические реакции, происходящие в микробной клетке. В
зависимости от молекулярного механизма действия антибиотики делят на: ингибиторы
синтеза клеточной стенки (β-лактамные), ингибиторы синтеза белка (аминогликозиды,
тетрациклины, макролиды), ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот (фторхинолоны –
нарушают синтез ДНК, рифампицин – РНК), ингибиторы синтеза цитоплазматической
мембраны – ЦПМ (полимиксины, полиены), ингибиторы биосинтеза пуринов и
аминокислот (сульфаниламиды).
В настоящее время антибиотики широко применяются в практической медицине,
что имеет большое значение для лечения многих инфекций. Но, как и все лечебные
препараты, антибиотики имеют побочные эффекты, что оказывает нежелательное
влияние на макроорганизм, на микроорганизм и на другие лекарственные препараты.
Наиболее частыми осложнениями антимикробной терапии со стороны
макроорганизма являются:
1) токсическое действие препаратов – может проявляться как нейротоксическое
(гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие за счет
воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое (полиены, макролиды,
сульфаниламиды и др.); общетоксическое (противогрибковые препараты – полиены,
имидазолы); угнетение кроветворения (тетрациклины, левомицетин / хлорамфеникол,
который содержит нитробензен – супрессор функции костного мозга); тератогенное
(аминогликозиды, тетрациклины нарушают развитие костей, хрящей у плода и детей,
формирование зубной эмали (коричневая окраска зубов), левомицетин токсичен для
новорожденных, у которых ферменты печени не полностью сформированы ("синдром
серого ребенка": появляется серый цвет кожи, увеличивается печень, отеки, рвота);
хинолоны (фторхинолоны: ципрофлоксацин, офлоксацин, гатифлоксацин и др.) –
действуют на развивающуюся хрящевую и соединительную ткани).
2) дисбиоз – нарушение функций ЖКТ, авитаминоз, нарушение нормофлоры
человека, присоединение вторичной инфекции (кандидоз, псевдомембранозный колит и
др.).
3) иммунодепрессия – развитие вторичного иммунодефицита.
4) аллергические реакции – анафилактический шок (пенициллины), реакция
гиперчувствительности замедленного типа (сульфаниламиды) и др.
113
Для того, чтобы предупредить развитие антибиотикорезистентности и, по
возможности, избежать нежелательных побочных эффектов необходимо придерживаться
следующих правил назначения антибиотиков: применять антибиотики только по
показаниям (с учетом чувствительности микроорганизма к антибиотикам, которую
определяют методом серийных разведений, диско – диффузионным методом, методом
микротестсистем (ТПК), методом колодцев), избегать их применения с профилактической
целью, после 10–15 сут проводить замену препарата, использовать антибиотики узкого
спектра действия, придерживаться принципа ротации (проводить замену антибиотика
после некоторого времени (1–2 года) в больнице и в регионе), ограничить употребление
антибиотиков в ветеринарии (как фактор роста) и в пищевой промышленности.
Современные стандартизированные методы определения чувствительности
микроорганизмов к антибактериальным препаратам подразделяют на методы серийных
разведений и диффузионные. Методы серийных разведений основаны на прямом
определении основного количественного показателя, который характеризует
микробиологическую активность препарата – величины его минимальной подавляющей
концентрации. Диффузионные методы основаны на диффузии антибактериального
препарата из носителя в плотную питательную среду и подавлении роста исследуемой
культуры в той зоне, где концентрация препарата превосходит МПК; существует две
основные модификации диффузионного метода: диско-диффузионный и Е-тест. В диско-
диффузионном методе в качестве носителя антибактериального препарата используют
бумажный диск, а в Е-тесте – полоску полимера на которую нанесен градиент
концентраций антибактериального препарата от min до max.
При определении чувствительности микроорганизма к антибактериальным
препаратам диско-диффузионным методом необходимо соблюдение следующих правил:
толщина плотной питательной среды в чашках Петри должна быть 4,0±0,5 мм, чашки с
расплавленной средой устанавливают строго горизонтально, оставляют до застывания при
комнатной температуре, инокулюм микроорганизмов наносят на поверхность среды,
равномерно распределяют по поверхности покачиванием и удаляют остаток инокулюма
пипеткой, после чего приоткрытые чашки подсушивают при комнатной температуре в
течение 10–15 мин (это обусловлено тем, что при t=37 °С имеет место опережающий рост
микроорганизмов по сравнению с диффузией антибиотика из диска в агар), после
подсушивания на поверхность чашек накладывают диски с антибактериальными
препаратами стерильным пинцетом, расстояние от диска до стенок чашки и между
дисками должно быть 15–20 мм, на одну чашку диаметром 100 мм не следует помещать
более 6 дисков, непосредственно после аппликации дисков чашки Петри ставят в
термостат кверху дном и инкубируют при 37 °С 18–24 ч, после окончания инкубации
проводят учет результатов, измеряя зоны задержки роста с точностью до 1 мм, используя
таблицы значений зон задержки роста культуры, микроорганизм характеризуется как
чувствительный, умеренно чувствительный (промежуточный) или резистентный.
1. Ознакомиться с основами учения об антибиотиках
2. Научиться трактовать методики получения и титрования антибиотиков.
3. Ознакомиться и изучить классификацию антибиотиков по происхождению, по
механизму действия, по химическому составу.
4. Научиться анализировать и оценивать антибиотикограмму.
Уметь:
1. Посеять бактериальную культуру на чашки Петри методом газона.
2. Подсушить чашки с посевами.
114
3. Поставить диски с антибиотиками на чашку с посевом.
4. Определить чувствительность культуры к антибиотикам методом серийных разведений.
5. Определить чувствительность культуры к антибиотикам на демонстрационных чашках
методом бумажных дисков с антибиотиками.
1. Микробный антагонизм. Антибиотики. Их получение и титрование.
2. Антимикробный спектр химиотерапевтического действия антибиотиков.
3. Единицы действия антибиотиков.
4. Классификация антибиотиков по происхождению.
5. Классификация антибиотиков по химическому составу.
6. Классификация антибиотиков по молекулярному механизму действия.
7.Определение чувствительности культур к антибиотикам методом серийных разведений,
диско-диффузным методом.
8. Механизм действия антибиотиков на микробную клетку.
9. Влияние антибиотиков на организм.
10. Лекарственная устойчивость микроорганизмов.
11. Методы преодоления лекарственной устойчивости патогенных микробов.
12. Принципы рациональной антибиотикотерапии.
13. Синергизм и антагонизм антибиотиков.
14. Правила применения антибиотиков.
Практические задания, которые выполняются на занятии

1. Определить чувствительность культуры стафилококка к линкомицину методом
серийных разведений.
2. Засеять культуру стафилококка на чашки Петри методом газона, подсушить и
наложить диски с антибиотиками.
3. Определить бактериостатическое и бактерицидное действие антибиотиков на
демонстрационной чашке Петри с помощью линейки путем измерения зоны
ингибиции роста в миллиметрах вокруг дисков.
4. Оценить антибиотическое действие линкозамида по таблицам.
5. Разобрать схему классификации антибиотиков.
6. Сделать выводы по поводу антибиотикограммы.
7. Оформить протокол.
1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология / учебник для
мед. ВУЗов / А.И. Коротяев, С.О. Бабичев. – СПб. : Специальная литература, 1998. –
592 с.
2. Тимаков В.Д. Микробиология / учебник / В.Д. Тимаков, В.С. Левашев, Л.Б. Борисов. –
2-е изд., перераб. и доп. – М. : Медицина, 1983. –512 с.
4. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЕОТАР-МЕД, 2001. – 768 с.
1. Березняков И.Г. Резистентность микробов к антибиотикам / И.Г. Березняков //
Клиническая антибиотикотерапия. – 1999. – № 1(1). – С. 27–31.
115
2. Гурин Н.Г. Рациональное применение антибиотиков – основа профилактики их
побочных эффектов / Н.Г. Гурин, Г.Г. Бурак, А.Г. Захаренко // Антибиотики и
химиотерапия. – 1996. – Т. 41. – № 3. – С. 40–43.
3. Караулов А.В. Влияние антибактериальных препаратов на иммунную систему
организма / А.В. Караулов // Практический врач. – 1996. – № 5–6. – С. 7–10.
4. Корнева Э.Г. Применение полистироловых пластин при определении
чувствительности бактерий к антибиотикам / Э.Г. Корнева // Лабораторное дело. –
1987. – № 9. – С. 709–710.
5. Машковский М.Д. Лекарственные средства : в 2-х т. / М.Д. Машковский. – 13-е изд.,
новое. – Харьков : Торсинг. – 1997. – Т. 1–2. – 1152 с.
6. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков. МЗ СССР. – М. ,
1983. – 15 с.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов определения
чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Студенты засевают на чашки Петри с
агаром бактериальную культуру методом газона, подсушивают чашки, накладывают диски
с антибиотиками и ставят чашки в термостат. Затем студенты определяют чувствительность
культуры стафилококка к линкомицину методом серийных разведений. Также студенты
измеряют в миллиметрах зону задержки роста бактериальной культуры вокруг дисков с
антибиотиками на демонстрационной чашке Петри, анализируют, оценивают и делают
вывод о чувствительности микроорганизма к каждому антибиотику по таблицам.
Оформляют протокол.
1. Ребенку 9 лет, болеющему ангиной, назначили комбинированный сульфаниламидный

препарат бактерицидного действия. Какой препарат был назначен?
А. Сульфален. В. Уросульфан. С. Бисептол. D. Е. Этазол.
Энтеросептол.
2. К антимикробным химиотерапевтическим препаратам, ингибирующим синтез
нуклеиновых кислот относятся:
А. Фторхинолоны. В. Гликопептиды. С. Макролиды. D. Е. Полиены.
Линкозамиды.
3. В больницу поступил ребенок, на слизистой оболочке щек, неба и языка которого был
видимый точечный налет белого и желтого цвета, вызванный Candida albicans. Какой из
перечисленных препаратов используется для лечения кандидоза?
А. Пенициллин. В. Тетрациклин. С. Гентамицин. D. Цефепим. Е. Нистатин.
4. У больного туберкулезом после длительного лечения появился шум в ушах, снижение слуха,
сыпь на коже, отек слизистых оболочек и нарушение координации движений. После отмены
препарата состояние больного значительно улучшилось. Какой препарат применял больной?
А. Стрептомицина сульфат. С. Изониазид. Е. Рифампицин.
В. Этамбутол. D. Бепаск.
5. Из гнойной раны больного выделен возбудитель – патогенный стафилококк и
определена его чувствительность к антибиотикам: пенициллин – зона задержки роста
116
бактериальной культуры – 8 мм; оксациллин – 9 мм; ампициллин – 10мм; цефотаксим –
22 мм; линкомицин – 11 мм. Какой антибиотик следует выбрать для лечения больного?
А. Оксациллин. В. Ампициллин. С. D. Линкомицин. Е. Пенициллин.
Цефотаксим.
6. К неонатологу поступил новорожденный с серым цветом кожи, отеками,
гепатомегалией ("синдром серого ребенка"). Какой антибактериальный препарат может
оказывать такое токсическое действие?
А. Левомицетин. С. Бензилпенициллин. Е. Оксациллин.
В. Феноксиметилпенициллин. D. Карбенициллин.
7. Перечислите возможные побочные эффекты антимикробных препаратов на макроорганизм:
А. Дисбиозы, иммуномупрессия, токсические реакции.
В. Появление атипичных форм бактерий, дисбактериозы.
С. Формирование антибиотикорезистентности, аллергия.
D. Токсические реакции, угнетение появление L-форм.
Е. Нефротоксический эффект, антибиотикорезистентность.
8. К стоматологу обратилась мать с жалобами на деструкцию зубов у ребенка 2 лет. При
обследовании молочные зубы деформированы, поражены кариесом, у шейки коричневая
кайма. Из анамнеза известно, что мать во время беременности принимала антибиотики без
контроля врача. Укажите, антибиотики какой группы, обладающие наиболее выраженным
тератогенным эффектом, принимала мать?
A. Пенициллины. C. Тетрациклины. E. Цефалоспорины.
B. Макролиды. D. Аминогликозиды.
9. Назовите основные принципы рациональной антибиотикотерапии:
А. Микробиологический, клинический, фармацевтический.
B. Фармацевтический, эпидемиологический, химический.
С. Микробиологический, эпидемиологический, физический.
D. Клинический, биологический, фармакологический.
E. Эпидемиологический, физико-химический, клинический.
10. Назовите антимикробные препараты, ингибиторы функции клеточных мембран
(ЦПМ):
А. Полимиксины. С. Макролиды. Е. Бета-лактамы.
В. Хинолоны. D. Гликопептиды.

1. Ознакомление с основами учения об антибиотиках, микробный антагонизм, спектр
антибактериального действия антибиотиков, определение чувствительности
бактериальной культуры к антибиотикам по кафедральным таблицам, стенду
"Антибиотики" и демонстрационному оборудованию.
2. Разбор схемы классификации антибиотиков.
3. Определение чувствительности культуры стафилококка к линкомицину методом
серийных разведений с помощью демонстрационного штатива с пробирками. Оценка
антибиотического действия линкозамида по таблицам.
4. Посев культуры стафилококка на чашки Петри методом газона и наложение дисков с
антибиотиками.
5. Определение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков на
демонстрационной чашке Петри с помощью линейки путем измерения зоны
ингибиции роста бактериальной культуры в миллиметрах вокруг дисков.
6. Анализ антибиотикограммы.
Оформление протокола.
117
Граф логической структуры по теме "АНТИБИОТИКИ"
АНТИБИОТИКИ По Синтетические
происхождени
ю хинолоны,
По химической структуре Природные
По спектру действия фторхинолоны
линкозамиды
-лактамные макролиды
широкого узкого офлоксацин,
ципрофлоксацин,
пенициллины эритромицин, клиндамицин, По характеру гатифлоксацин
кларитромицин линкомицин антибактериального
действия нитрофураны
ампициллин,
тетрациклины полипептиды
амоксиклав
бактериостатические фурадонин,
полимиксин фурагин
цефалоспорины тетрациклин бактерицидные
доксициклин сульфаниламиды
полиены По механизму действия:
цефазолин, аминогликозиды ингибиторы бисептол
цефепим
нистатин,
амфотерицин В Функции ЦПМ (полимиксины)
карбапенемы стрептомицин,
гентамицин, Синтеза белка (аминогликозиды)
амикацин По направленности
имипенем, действия Синтеза клеточной стенки (β-лактамы)
меропенем
Синтеза нуклеиновых кислот (фторхинолоны)
противопротозойные противоопухолевые антибактериальные противомикозные
118
АНТИСЕПТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА
галогены антибиотики
Препараты хлора Препараты йода Производные Производные Производные

8-оксихинолина 4-хинолона нитрофурана
Хлорамины, хлорная Раствор Люголя, Нитроксолин, Оксолиновая Фурацилин,

известь, гипохлориты йодинол, йодоформ хинозол кислота фуразолидон
альдегиды фенолы и крезолы детергенты окислители щелочи
Формальдегид, Фенол, крезол, Декамин, этоний, Озон, перекись водорода, Аммиак,

гексаметилентетрамин гексил, лизол хлоргексидин перманганат калия бура
красители эфиры и фитонциды спирты кислоты и их соли соли тяжелых металлов
Бриллиантовый зеленый, Пропиловый, Азотная, Протаргол,

метиленовый синий, Эфир винной кислоты изопропиловый борная, соляная, нитрат серебра,
этакридина лактат этиловый серная сурьма HgCl
119
АНТИБИОТИКИ
Осложнения со стороны макроорганизма Побочное действие Изменения микроорганизма
Появление
Токсические Аллергические дисбиозы иммуносупрессия атипичных форм
реакции реакции (L-форм)
Угнетение
кандидозы антителообразования Формирование
Гепатотоксические Пенициллины,
антибиотико
цефалоспорины
Левомицетин резистентности
дисбактериозы
Макролиды:
эритромицин Угнетение тетрациклины
Принципы рациональной антибиотикотерапии
фагоцитоза
Нефротоксические
Микробиологический Фармакологический
Клинический
аминогликозиды метод серийных
антибиотикограмма Соответствующая
разведений Состояние больного, доза, длительность
Поражение органов
пол, возраст, иммунный интервалов введения,
кроветворения метод дисков статус, сопутствующие длительность
Фармацевтический заболевания лечения
Левомицетин, метод (ТПК)
сульфаниламиды микротестсистем Правила хранения Эпидемический
препарата,
Тератогенные термин действия Принцип ротации – смены препарата через
определенный период времени в регионе
Тетрациклины
120
Состояние больного, пол,
возраст, иммуный статус,
сопутствующие заболевания
121
Тема: Генетика микроорганизмов
Цель: Ознакомление с генетическими методами исследований и их
практическим использованием в микробиологии и биотехнологии
Содержательный модуль 4. Генетика микроорганизмов. Эволюция и классификация
микроорганизмов.
Тема 6: Генетика микроорганизмов. Тема 7: Эволюция, систематика, классификация
и номенклатура микроорганизмов.
Актуальность темы. Учение о наследственности и изменчивости организмов было
основано Ч. Дарвином в 1859 г.
Генетика микроорганизмов составляет основу молекулярной биологии. Наиболее
важные проблемы молекулярной генетики изучаются на микроорганизмах.
Ядерные структуры бактерий имеют характерное морфологические признаки,
отличающее их от ядер эукариотических клеток; их образуют так называемые
хроматиновые тельца или нуклеотиды, лишенные оболочки и включающие в себя почти
всю ДНК бактерий. Ядерные структуры можно наблюдать в фазово-контрастный
микроскоп, где они выглядят как менее плотные участки цитоплазмы.
Изменчивость микроорганизмов подразделяют на:
1) ненаследственную (модификационную);
2) наследственную, вызываемую мутациями и генетическими рекомби-нациями генов.
Модификация – это изменчивость, которая вызвана действием факторов внешней
среды и не оказывающая влияния на развитие. Например, дефицит кальция в среде
вызывает повышенное спорообразование и слизистый рост у бактерий сибирской язвы.
Уменьшение количества кислорода снижает степень пигментации и увеличивает число
гладких колоний у микобактерий туберкулеза.
Изменения, появляющиеся в результате модификации, могут быть стабильными и
лабильными. В ряде случаев признаки, индуцированные факторами внешней среды, могут
сохраняться в течение нескольких поколений.
Под влиянием неблагоприятных условий существования отдельные виды бактерий
претерпевают глубокие изменения с формированием своеобразных мелких колоний (L-ко-
лоний) с темным плотным центром и более рыхлой периферией. L-формы бактерий
возникают в результате нарушения синтеза клеточной стенки, например при воздействии
на культуру пенициллина, иммунной сыворотки, фага, химических веществ и др.
неблагоприятных факторов. L-формы колоний могут быть стабильными. В ряде случаев
они реверсируют в исходные; такие переходы наблюдаются у микобактерий туберкулеза,
стафилококков, холерных вибрионов и др.
Наследственная изменчивость. В клетках бактерий содержится два типа
нуклеиновых кислот – ДНК и РНК, у вирусов только один тип – или ДНК, или РНК.
Основную генетическую функцию у бактерий выполняет ДНК. У бактерий также есть
цитоплазматические наследственные детерминанты в виде небольших молекул ДНК
(внехромосомные молекулы ДНК), которые называют плазмидами. Плазмиды несут от 40
до 50 генов и выполняют регуляторные и кодирующие функции. Первые направлены на
компенсацию метаболических дефектов, вторые наделяют бактерии определенными
свойствами (токсигенностью – tox-плазмида, резистентностью к антибакте-риальным
препаратам – R-плазмида и др.).
Наследственная изменчивость у бактерий осуществляется в результате изменения
генетических структур.
Единицей наследственности является ген, который представляет собой участок
ДНК, в котором зашифрована последовательность аминокислот в полипептидной цепи.
122
Гены бывают структурные, регуляторные и гены-операторы. Структурный ген
обуславливает синтез определенного белка. Регуляторные гены определяют синтез
белковой молекулы, которая регулирует деятельность структурных генов. Гены-
операторы служат посредниками между регуляторными и структурными генами. Участок
хромосомы, который объединяет ген-оператор и структурные гены называется опероном.
Мигрирующие генетические элементы – отдельные участки ДНК, способные
определять свой собственный перенос от одной хромосомы к другой, либо между
хромосомой и плазмидой. Простейшим видом мигрирующих элементов являются
инсерционные последовательности (IS-элементы). Содержат только гены, необходимые
для их собственного перемещения. Транспозоны – (Tn-элементы) содержат фрагмент
ДНК, несущий специфические гены и два IS-элемента.
Наследственная изменчивость у бактерий проявляется в виде мутаций и рекомбинаций.
Мутации – изменения в первичной структуре ДНК, проявляющиеся наследственно
закрепленной утратой или изменением какого-либо признака или группы признаков
(стойкие наследственные изменения свойств микроорганизма, не связанные с
рекомбинационным процессом). В их основе лежат ошибки копирования наследственной
информации, возникающие при репликации. Мутации подразделяют на спонтанные
(возникают случайно под влиянием внешних факторов) и индуцированные (появляются
вследствие обработки микробной популяции мутагенными агентами, такими как
радиация, температура, химические факторы и др.). Частота спонтанных мутаций у
бактерий находится в пределах 1×10-12 – 1×10-5.
Генетические рекомбинации к этой группе изменчивости относятся
рекомбинации генов, которые возникают вследствие трансформации, трансдукции и
конъюгации. Генетические рекомбинации бактерий и вирусов обуславливают
возникновение рекомбинантов, у которых имеются признаки обоих родителей: основной
набор генов реципиента и определенная часть генов донора.
Трансформация – это передача генетического материала от донора реципиенту
при помощи изолированной ДНК. Успех трансформации зависит от двух составляющих –
компетентности реципиента и качественных свойств трансформирующей ДНК.
"Компетентность" – особое состояние реципиента, при котором он способен
воспринимать донорскую ДНК – зависит от присутствия в мембране специальных белков,
имеющих сродство с ДНК.
К качественным характеристикам трансформирующей ДНК относят:
гомологичность, наличие двойной спирали ДНК, значительная молекулярная масса (более
107Д).
Трансдукция – это передача генетического материала от донора до реципиента с
помощью умеренных фагов. Так, например, с помощью фага можно воспроизвести
трандукцию жгутиков, ферментативные свойства, устойчивость к антибиотикам,
токсигенность и др. Механизм трансдукции: в процессе репродукции некоторых
умеренных фагов небольшие фрагменты ДНК бактерий-доноров встраиваются в геном
фага, который переносит их в бактерии-реципиенты. Различают 3 типа трансдукции:
генерализованную (общую), специфическую и абортивную. При общей трансдукции
происходит перенос любого маркера или нескольких маркеров. При специфической
трансдукции передается тесно сцепленная группа генов, контролирующая утилизацию
галактозы, и не передаются гены, детерминирующие утилизацию других углеводов,
способность синтезировать аминокислоты, чувствительность к антибиотикам и др. Для
абортивной трандукции характерной особенностью является то, что внесенный фагом
фрагмент нуклеотида не включается в нуклеотид реципиента; он локализуется в
цитоплазме и при делении передется только одной дочерней клетке, вторая клетка
содержит генетический аппарат реципиента.
123
Конъюгация – это передача генетического материала от одной клетки другой
путем непосредственного контакта (напоминает редуцированный половой процесс). При
коньюгации происходит односторонний процесс переноса генетического материала от
донора реципиенту. Необходимым условием для коньюгации должно быть наличие у
донора специфического фактора плодовитости (фактора фертильности), обозначаемого F.
У грамотрицательных бактерий обнаружены половые (F-пили) волоски, контролируемые
F-фактором. Через F-пили при коньюгации происходит перенос генетического материала.
При коньюгации происходит перенос не всего нуклеотида, а лишь определенных его
частей.
1. Определить, чем представленный генетический аппарат бактерий.
2. Определить понятие "изменчивость".
3. Определить факторы изменчивости.
4. Выучить виды изменчивости.
5. Определить значение опытов трансформации, трансдукции и конъюгации.
Уметь:
1. Правильно определять виды побежалости.
2. Отличать понятие "донор", "реципиент".
3. Отличать понятие "вирулентный и воздержанный фаги".
1. Чем представлен генетический аппарат микробной клетки.
2. Формы изменчивости бактерий.
3. Понятия рекомбинация, трансформация, трансдукция и конъюгация.
4. Материальные основы наследственности у бактерий. Хромосомные и
позахромосомные факторы. Плазмиды, классификация.
5. Мутации, спонтанные и индуцированные. Генез мутаций.
6. Значение генетики бактерий в теории и практике, в биологии и медицине.
Практические задачи, которые выполняются на занятии
1. Студенты ставят опыты трансформации, трансдукции и конъюгации.
2. Запись в альбом результатов проведенных опытов трансформации, трансдукции и конъюгации.
Медицина, 1998. – 336 с.
3. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. – М. : ГЭОТАР-МЕД,
2001. – 768 с.
В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Само-
стоятельная работа состоит из постановки опытов трансформации, трансдукции и
конъюгации. В состав самостоятельной работы входит зарисовка демонстрационных
препаратов.
В конце занятие проводится тестовый контроль и анализ результатов
124
1. На занятии студенты проводили опыт, в процессе которого смешивали ДНК S. aureus,
обладающий резистентностью к стрептомицину с культурой S. aureus, который не
обладает этом фактором. В результате была получена культура бактерий,
резистентностная к стрептомицину. Как называется это явление?
A. Трансформация. C. Конъюгация. E. Модификация.
B. Трансдукция. D. Мутация.
2. Какие компоненты необходимо получить студентам для проведения опыта трансдукции?
A. ДНК донора и культуру клеток реципиента.
B. Культуру клеток реципиента и культуру клеток донора.
C. Культуру клеток реципиента, культуру клеток донора и вирулентный фаг.
D. Культуру клеток реципиента, культуру клеток донора и умеренный фагфаг.
E. ДНК донора, культуру клеток реципиента и умеренный фаг.
3. В опыте трансдукции внесенный бактериофагом фрагмент ДНК не встроился в генофор
реципиента и остался в цитоплазме. При делении клетки он передался только одной из
дочерних клеток. Как называется этот тип трансдукции?
A. Специфическая. C. Незавершенная. E. –.
B. Неспецифическая. D. Абортивная.
4. Процесс переноса наследственного материала от донора реципиенту при помощи фага
называется:
A. Трансдукция. C. Реверсия. E. Преобразование.
B. Коньюгация. D. Трансформация.
5. Наиболее примитивный способ передачи генетической информации:
A. Деление клетки. C. Трансдукция. E. Коньюгация.
B. Трансформация. D. Преобразование.
6. Возбудитель дифтерии может приобрести токсигенные свойства путем:
A. Лизогенной конверсии. C. Транслокации. E. Все выше
перечисленное.
B. Трансформации. D. Коньюгации.
7. Бактерии являются довольно простыми генетическими единицами со всеми указанными
свойствами, КРОМЕ:
A. Они гаплоидны.
B. Их генетический материал организован в единую хромасому.
C. Содержат только один тип нуклеиновой кислоты.
D. Они используют тот же генетический код, что и эукариоты.
E. Их генотипы и фенотипы одинаковы.
8. Передача генетического материала от донора реципиенту при помощи изолированной
ДНК определяется как:
A. Сопряжение. C. Трансформация. E. Конверсия.
B. Трансдукция. D. Коньюгация.
9. Процесс передачи генетической информации, напоминающий редуцированный половой
процесс, определяется как:
A. Трансформация. C. Трансдукция. E. Коньюгация.
B. Деление. D. Лизогония.
10. Плазмиды ответственны за:
A. Деление бактерии. D. Устойчивость к антибиотикам.
B. Дыхание бактерии. E. Все выше перечисленное.
C. Метаболизм.
Алгоритм лабораторной работы

1. Особенности генетического аппарата бактерий и вирусов.
125
2. Побежалости микроорганизмов.
3. Понятие о доноре и реципиенте.
4. Определение понятия трансформации, трансдукции и конъюгации.
5. Постановка опытов трансформации, трансдукции и конъюгации.
126

МОРФОЛОГИЯ 2016

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

МОРФОЛОГИЯ 2016

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ

Харьковский национальный медицинский университет

дисциплины «Микробиология, вирусология и иммунология»

Краткие методические указания к работе на практическом занятии

Тестовые задания исходного уровня

Расположение Одиночные Группами в виде Цепочки разной По четыре Пакеты по

Примеры M. luteus S. aureus S. pyogenes N. gonorrhoeae

Способ изучения Микроскопия при помощи иммерсионного микроскопа

Тема: Палочковидные бактерии. Окраска по Граму. Ультраструктура бакте-

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет.

Ультраструктура бактериальной клетки

Поверхностные структуры Клеточная оболочка Цитоплазма

Жгутики Фимбрии F-пили Капсула Клеточная Нуклеоид Рибосомы

Грамположительные бактерии Грамотрицательные бактерии

Пептидогликан 90% Тейхоевые кислоты

Пептидогликан 20% Липополисахариды

Бациллы Клостридии Бактерии

C. tetani C. botulinum C. novyi

Тема: Споры. Спорообразование. Методы окраски спор

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет.

Актуальность темы. Знание морфологии имеет большое значение для

Споры – своеобразная форма покоящихся фирмикутных бактерий, т. е. бактерий

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

Целевые обучающие задания

1. Из мясных консервов выделена культура Сlostridium botulinum. Какой из

Алгоритм лабораторной работы:

Тема: Капсулы у бактерий и методы их выявления

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет.

Актуальность темы. Знание морфологии имеет большое значение для

Некоторые бактерии (пневмококки, клебсиеллы и др.) образуют капсулу –

1. Смыв со слизистой оболочки ротовой полости больного хроническим стоматитом

Алгоритм лабораторной работы:

Тема: Морфология простейших

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет.

Целевые обучающие задания

1. У беременной в мазках крови при микроскопии были обнаружены токсоплазмы. Какие

Алгоритм лабораторной работы:

Простейшие, имеющие медицинское значение

Sarcomastigophorae Apicomplexa Ciliophora Microspora

Подтип Sarcodina Подтип Mastigophora Класс Sporozoa Класс Класс

Амеба Лейшмании Трипаносомы

Амебиаз Лейшманиозы Африканский Токсоплазмоз Балантидиаз Микроспоридиоз

Лямблии Трихомонады Плазмодии малярии:

Алгоритм лабораторной работы:

РИККЕТСИИ ХЛАМИДИИ МИКОПЛАЗМЫ

Алгоритм лабораторной работы:

Вирусы с оболочкой Классификация вирусов Вирусы без оболочки

ДНК-вирусы РНК-вирусы ДНК-вирусы РНК - вирусы

Герпесвирусы Тогавирусы Рабдовирусы Аденовирусы Реовирусы

Герпес-лабиалис, Краснуха, Бешенство, ОРЗ, ОКИ Клещевые лихорадки

Продуктивный тип взаимодействия с Индукция фага Интегративный тип взаимодействия

Фаг адсорбируется на клеточной стенке при помощи

Чехол хвостового отростка укорачивается

Стержень при помощи ферментов (лизоцима)

Фаг передает нуклеиновую кислоту с головки к Лизогения

Нуклеиновая кислота угнетает биосинтез

Синтез нуклеиновой кислоты Сборка новых фагов Выход бактериофагов

Тема: Питание бактерий. Простые питательные среды. Посев на МПА и МПБ.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет.

МПБ – мясо-пептонный бульон.

Стерилизация – процесс, который сопровождается разрушением всех видов

Практические задачи, которые выполняют на занятии:

Краткие методические указания к работе на практическом занятии

Целевые обучающие задания