Вы находитесь на странице: 1из 89

МИКРОБНЫЙ АНТАГОНИЗМ.

АНТИБИОТИКИ.
БАКТЕРИОЦИНЫ.
МИКРОФЛОРА ТЕЛА ЗДОРОВОГО ЧЕЛОВЕКА

Организм человека в норме содержит сотни видов


микроорганизмов; среди них доминируют бактерии.
Вирусы и простейшие представлены значительно меньшим
числом видов.
Нормальная микрофлора

В норме многие ткани и органы здорового человека свободны


от микроорганизмов, т. е. являются стерильными.
К ним относятся:

• внутренние органы,
• головной и спинной мозг,
• альвеолы легких,
• внутреннее и среднее ухо,
• кровь, лимфа, спинномозговая жидкость,
• матка, почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре.

Это обеспечивается наличием неспецифических клеточных и


гуморальных факторов иммунитета, препятствующих
проникновению микробов в эти ткани и органы
Нормальная микрофлора

На всех открытых поверхностях и во всех открытых


полостях формируется достаточно стойкая микрофлора,
специфичная для данного органа, биотопа или его участка
– эпитопа.
Наиболее богаты микроорганизмами:

• ротовая полость,
• толстый кишечник,
• верхние отделы дыхательной системы,
• наружные отделы мочеполовой системы и кожа,
особенно её волосистая часть.
Нормальная микрофлора

• Микроорганизмы, составляющие нормальную микрофлору, образуют


чёткую морфологическую структуру – биоплёнку, толщина которой
колеблется от 0,1 до 0,5 мм.

• Биоплёнка представляет собой полисахаридный каркас, состоящий из


микробных полисахаридов и муцина, который продуцируют клетки
макроорганизма.

• В этом каркасе иммобилизованы микроколонии бактерий –


представителей нормальной микрофлоры, которые могут
располагаться в несколько слоёв.

• В состав нормальной микрофлоры входят как анаэробные, так и


аэробные бактерии, соотношение которых в большинстве биоценозов
составляет 10:1—100:1.
Нормальная микрофлора

• Заселение бактериями различных областей тела


начинается в момент рождения человека и
продолжается на протяжении всей его жизни.

• Формирование качественного и количественного


состава нормальной микрофлоры регулируется
сложными антагонистическими и
синергическими отношениями между отдельными
ее представителями в составе биоценозов.
Нормальная микрофлора

• Количество микроорганизмов в организме взрослого


человека 1014 особей, преобладают анаэробы.

• Количество бактерий, населяющих покровные ткани (кожу,


слизистые оболочки), во много раз превосходит число
собственных клеток хозяина.

• Количественные колебания бактерий в биоценозе могут


достигать для некоторых бактерий нескольких порядков и,
тем не менее, укладываются в принятые нормативы.
НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА:

 постоянная, или резидентная микрофлора —


представлена относительно стабильным составом микроорганизмов, обычно
обнаруживаемых в определенных местах тела человека у людей
определенного возраста;

 транзиторная, или временная микрофлора— попадает на кожу или слизистые


оболочки из окружающей среды, не вызывая заболеваний и не обитая
постоянно на поверхностях тела человека. Она представлена сапрофитными
и условно-патогенными микроорганизмами.

Состав нормальной микрофлоры может меняться в зависимости:


 от возраста;
 условий внешней среды;
 условий труда, рациона питания;
 перенесенных заболеваний;
 травм и стрессовых ситуаций.
ЗНАЧЕНИЕ МИКРОФЛОРЫ ТЕЛА ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА

Барьер

Защита

Метаболизм

Детоксикация

Стимуляция иммунной системы


 Экология микроорганизмов - наука о взаимоотношениях микробов
друг с другом и с окружающей средой. В медицинской микробиологии
объектом изучения служит комплекс взаимоотношений
микроорганизмов с человеком.

 ПОПУЛЯЦИЯ – совокупность особей одного вида, обитающих в


пределах определенного биотопа.

 БИОТОП – территориально ограниченный участок биосферы с


относительно однородными условиями жизни.

 МИКРОБИОЦЕНОЗ – сообщество популяций микроорганизмов,


обитающих в определенном биотопе.
Функции нормальной микрофлоры
• Является одним из факторов неспецифической резистентности организма.

• Она обладает антагонистическими свойствами против патогенной и


гнилостной м/флоры (продуцируют молочную, уксусную к-ты,
антибиотики, бактериоцины).

Участвует в:
• водно-солевом обмене,
• регуляции газового состава кишечника,
• обмене белков, углеводов, жирных кислот, холестерина, нуклеиновых
кислот,
• в продукции биологически активных соединений:
 антибиотиков,
 витаминов ( К, группы В и др.),
 токсинов и др.
Функции нормальной микрофлоры

• участвует в переваривании и детоксикации экзогенных


субстратов и метаболитов, что сравнимо с функцией
печени

• участвует в рециркуляции стероидных гормонов и


желчных солей в результате экскреции метаболитов из
печени в кишечник и последующего возврата в нее

• выполняет морфокинетическую роль в развитии различных


органов и систем организма, участвует в физиологическом
воспалении слизистой оболочки и смене эпителия
Функции нормальной микрофлоры
• экзополисахариды ( гликокаликс) м/о, входящие в состав биопленки,
защищают микробные клетки от разнообразных физико-химических
воздействий

• м/флора кишечника оказывает влияние на формирование и поддержание


иммунитета.

• В кишечнике находится 1,5 кг м/о, антигены которых стимулируют


иммунную систему.
• выполняет антимутагенную функцию, разрушая канцерогенные вещества в
кишечнике.

• Но некоторые м/о могут продуцировать сильные мутагены.

• Ферменты бактерий кишечника преобразуют искусственный подсластитель


цикломат в активный канцероген (циклогексамин) для мочевого пузыря.
Функции нормальной микрофлоры

• Естественным неспецифическим стимулятором иммуногенеза является


мурамилпептид, образующийся из пептидогликана бактерий под влиянием
лизоцима и др. литических ферментов кишечника.

• является хранилищем и источником хромосомных и плазмидных генов, в


частности генов лекарственной устойчивости к антибиотикам

• отдельных представителей нормальной микрофлоры используют в качестве


санитарно-показательных м/о, свидетельствующих о загрязнении
окружающей среды (воды, воздуха и т.д.) выделениями человека и,
следовательно, об их эпидемиологической опасности.
ТИПЫ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ МИКРОБОВ В БИОЦЕНОЗАХ

 СИМБИОЗ - совместное длительное существование микроорганизмов в


долгоживущих сообществах. При этом обе популяции извлекают для
себя пользу.

 КОМЕНСАЛИЗМ - разновидность симбиоза, при которой выгоду


извлекает только один партнер, не принося видимого вреда другому.

 АНТАГОНИСТИЧЕСКИЙ СИМБИОЗ - симбиотические отношения,


наносящие хозяину более или менее выраженный вред; его крайнее
проявление паразитизм.

 ОБЛИГАТНЫЕ ПАРАЗИТЫ – микробы, живущие за счет клеток тканей


хозяина. — (вирусы, риккетсии и хламидии).

 ФАКУЛЬТАТИВНЫЕ ПАРАЗИТЫ - микробы, размножающиеся как


внутри, так и вне клетки в зависимости от внешних условий.
Между микроорганизмами определённого
биотопа возможны следующие
взаимоотношения:

I. Нейтральные (нейтрализм)

II. Благоприятные (комменсализм/сателизм,


симбиоз/мутуализм, синнергизм)

III. Неблагоприятные (паразитизм, антагонизм)

Антагонизм – это когда один вид подавляет (ингибирует) или


убивает другой вид при помощи специфических или
неспецифических механизмов
Mи/o, который проявляет ингибирующую активность –
aнтагонист (А), подавляемый ми/o – конкурент (C).

Неспецифический антагонизм:
- Aнтагонист становится активнее, используя питательные
вещества, кислород.
- Aнтагонист вырабатывает токсические метаболиты (кислоты,
индол, H2S, аммиак, перекиси, и др.)

Специфический антагонизм:
– антагонист вырабатывает вещества со специфическим
воздействием на одного или нескольких конкурентов
(aнтибиотики, бактериоцины).
Эффект воздействия антагониста на конкурента может быть
бактериостатическим или бактерицидным (иногда
бактериолитическим).

Практическое применение микробного антагонизма:


1. Выявление ми/o – продуцентов антибиотиков (грибов,
aктиномицетов, бактерий)
2. Получение лечебных биологических препаратов
микробной природы.
(пробиотиков, эубиотиков/симбиотиков): лактобактерин,
колибактерин, колибактерин, бифидумбактерин, бификол, и
др.
3. Создание биоценозов, благорпиятных для организма
• Пробиотики это препараты, содержащие живых бактерий
или вещества микробной природы, которые будучи введены
естественным путём, приводят к благоприятным результатам
(физиологическим, биохимическим и иммунным) для
организма-хозяина посредством оптимизации и стабилизации
функций нормальной микрофлоры.

• Пребиотики это препараты, содержащие неусвояемые


пищевые ингредиенты, которые избирательно стимулируют
рост и деятельность ограниченного числа резидентных
бактерий нормальной кишечной микрофлоры.

• Синбиотики это препараты полученные при рациональном


комбинировании пробиотиков и пребиотиков.
METOДЫ ИЗУЧЕНИЯ AНТАГОНИЗМА

1. На плотной среде (метод траншеи) – aнтагонист засевается в


центре чашки, конкуренты – перпендикулярно.
Teрмостат 24h. Оценка – по размеру зоны ингибирования
роста культуры конкурента.
METOДЫ ИЗУЧЕНИЯ
AНТАГОНИЗМА

2. В полужидкой среде –
I слой – aнтагонист,
II слой - конкурент.
Teрмостат 24h.
Оценка – прозрачная зона между слоями.

3. Посев в жидкую среду (МПБ) одинакового количества A и


C. Через 24 h инкубирования пересевается 0,1 ml на чашку
с агаром Эндо. Сравнивают число выросших колоний A и
C.

22
Антибиотики
(«анти» - против, «биос» - жизнь)

Антибиотики (А) – это вещества синтезируемые


микроорганизмами или полученные из
растительных и животных тканей, а также их
полусинтетические и синтетические аналоги,
избирательно подавляющие жизнеспособность
чувствительных к ним микроорганизмов
История открытия Антибиотиков

 1928 – шотланский микробиолог А.Флеминг открыл пенициллин –


P.notatum
 1940 – англичане У. Флори и Э. Чейн получили пенициллин
 В 1945 Флеминг, Флори, Чейн получили Нобелевскую премию за
открытие пенициллина
 1944 – американец З. Ваксман – стрептомицин
 1960-80 – ЦС, рифампицин, полусинт. пенициллины, тетрациклины,
макролиды, азалиды
 Но: плесень – индейцы, Авицена, а за 50 лет до 1928 – Пастер,
Мечников – лечили язвы, раны плесенью, молочно-кислыми
продуктами
 Сегодня ≈ 6 тыс. А, но применяют 2-3%
Значение Антибиотиков

 Ликвидация глобального кризиса инфекционных


заболеваний (ИЗ), (холеры, чумы, дизентерии)
 Эффективны при грозных заболеваниях (сепсис, менингит,
перитонит, пневмония)
 ≈ 20 млн чел. умирает ежегодно от ИЗ
 1/3 госпитальных больных лечат А
 За последние 20 лет появились 20 новых ИЗ
 По широте применения А – первое место в мире
 Сегодня нет человека, хотя бы один раз не применял А
 Ни одна страна не застрахована от угрозы эпидемий,
пандемий.
Классификация АВ

По типу воздействия на клетку


 бактерицидные - необратимо связываются с клеточными
мишенями, вызывая гибель чувствительных к ним
микроорганизмов.

 бактериостатические - ингибируют рост и размножение


микробных клеток, но при удалении антибиотика
жизнедеятельность возбудителей восстанавливается

бактериолитические
27
КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ
По спектру действия:
1) с преимущественным действием на грамположительные
микроорганизмы (линкозамиды, биосинтетические пенициллины,
цефалоспорины 1-го поколения, макролиды, ванкомицин, линкомицин);

2) с преимущественным действием на грамотрицательные


микроорганизмы (монобактамы, циклические
полипептиды,цефалоспорины 3-го поколения);

3) широкого спектра действия (аминогликозиды, левомицетин,


тетрациклины, полусинтетические пенициллины широкого спектра
действия (ампициллин, азлоциллин и др.) и цефалоспорины 2-го
поколения).

4) Противотуберкулезные антибиотики (стрептомицин, рифампицин,


флоримицин).

5) Противогрибковые антибиотики (нистатин, леворин, гризеофульвин,


амфотерицин В, кетоконазол, анкотил, дифлюкан и др.).
• Микробного происхождения (бaцитрацин из Bacillus subtilis,
грамицидин din Bacillus brevis, полимиксин из Bacillus
polimyxa)
• Растительного происхождения – фитонциды (aлицин,
рaфанин, иманин)
• Животного происхождения (лизоцим – яичного белка,
экмолин - из рыбных костей, эритрин – из эритроцитарной
массы, спленоцитин – из селезёнки)
По химическому составу (бета-лактамные, макролиды,
aминогликозиды, фениколы, полипептиды, полиены,
сульфамиды, хинолоны и флюорохинолоны, нитрофураны, и
др.)
КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ

 выделяют антибиотики первой линии (пенициллины, макролиды,


аминогликозиды), второй линии (цефалоспорины, полусинтетические
аминогликозиды, аугментин и пр.) и резервные (фторхинолоны,
карбопенемы).

 Выделяют антибиотики короткого и пролонгированного действия. Так,


для поддержания бактерицидной концентрации в плазме пенициллин
следует вводить каждые 4 часа, а роцефин (цефалоспорин 3 поколения)
- 1 раз в сутки.

 По токсичности разделяют ото-, нефро-, гепато-, нейротоксичные и т. д.

 Выделяют антибиотики со строго регламентированной дозой


применения (линкозамины, аминогликозиды и пр.) и препараты, дозу
которых можно увеличивать в зависимости от выраженности
инфекционного процесса (пенициллины, цефалоспорины).
Требования к антибиотикам

• Отсутствие токсичности

• Терапевтический эффект при минимальных дозах

• Длительная активность

• Узкий спектр действия

• Должны легко растворяться и адсорбироваться

• Не вызывать побочных эффектов

• Не развивать резистентность к AB

• Должны быть дешёвыми


Отрицательные явления А

1. Возникновение устойчивости:
 выработка бета-лактамаз;
 изменения проницаемости цитоплазматической
мембраны;
 изменение структуры определенных участков рибосом,
белков или ферментов
2. Суперинфекция;
3. Дисбиоз;
4. Аллергические реакции;
5. Общетоксическое действие, нефротоксичность,
гепатотоксичность.
Наименее токсичными являются пенициллины.
КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ ПО
МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ

• Ингибиторы синтеза клеточной стенки.

• Нарушающие функцию мембран клетки

• Ингибиторы синтеза белка на рибосомах.

• Ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот


Meханизм действия AB
1. Ингибиторы синтеза клеточной стенки.

- Бета-лактамные, (пенициллины, цефалоспорины). Нарушают


процесс синтеза ПГ, ингибируя транспептидазы (мишень - PFP)

- Ванкомицин, тейкопланин (блокируют переход пентапептида


из ЦПМ в клеточную стенку)

- Бацитрацин (блокируют репликацию трансмембранных


транспортных молекул - бактопренол)

- Фосфомицин (блокируют пирувилтрансферазу, учавствующую


в синтезе N-aцетилмураминовой кислоты)
Эффект данных АВ является бактерицидным/литическим,
поражаются лишь метаболически активные клетки. Не
поражаются эукариотные клетки (отсутствие ПГ).
2. Нарушающие функцию мембран клетки
НМ и ЦПМ

AB полипептидные (полимиксин, колистин). Фиксируются на


микробных мембранах (в частности на липиде А (НМ ГР-
бактерий), нарушая их структуру. Бактерицидный эффект.

- AB полиены (нистатин, леворин,амфотерицин B и др.)


Фиксируются на стеролах ЦM мицетиях, нарушая процесс
дыхания и дезорганизуя ЦПМ (повышение проницаемости
и смерть клетки).

Эти AB действуют и на покоящиеся формы клеток. Довольно


токсичны, в частн. нефротоксичны.
3. Ингибиторы синтеза белка на рибосомах.

- 30S (aминогликозиды: стрептомицин, канамицин, гентамицин,


тобрамицин, амикацин; тетрациклины)

- 50S (хлорамфеникол, триамфеникол; макролиды:


эритромицин, oлеандомицин; линкосамиды: клиндамицин).

Связываются со специфическими рецепторами субъединиц


30S или 50S, нарушая синтез белков (ингибируя
транспептидазу при транслокации пептидов и др.).
В итоге ингибируется синтез белков или синтез
нефункциональных белков.
Эффект бактериостатический (aминогликозиды –
бактерицидный), лишь для метаболически активных клеток.
4. Ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот

- Рифампицин – ингибирует РНК- зависимую полимеразу.


Следует прекращение синтеза РНКм. Новобиоцин, хинолоны
(нaлидиксовая кислота, ципрофлоксацин, офлоксацин)
блокируют деятельность топоизомераз, на уровне ДНК.
Бактерицидный эффект.
Сульфамиды и триметоприм
нарушают синтез фолиевой
кислоты и фолатов
(кофакторы в синтезе НК).
Бактериостатическая активность.
• Производство AB

1. Биологический метод
2. Синтетический метод
3. Полу- синтетический метод
4. Этапы биологического метода:
• Культивирование штаммов-продуцентов
(напр.: Penicillium notatum, Actinomyces griseum и др.)
на адекватной жидкой среде
• Экстрагирование AB
• Очищение и концентрация AB
• Контроль токсичности
• Определение активности AB
Aктивность AB измеряется в единицах массы (г, мг, мкг) или
действия (ЕД).

1 ЕД – минимальное количество AB, которое ингибирует рост


референтных штаммов в стандартных условиях.

Пенициллин – 1ЕД = 0,6 мкг чистого вещества


Чувствительность микробов к AB

В зависимости от клинических результатов, бактерии делятся


на 3 класса: чувствительные к AB (Ч), устойчивые (У) и (I,
умеренно чувствительные).
Чувствительные – терапевтический эффект достижим
обычными терапевтическими дозами.
Устойчивые – терапевтический эффект не достижим
терапевтическими дозами.
Умеренно чувствительные – положительный терапевтический
эффект непредсказуем. Возможен, применяя большие
дозы или администрируя АБ местно.
Каждая выделенная культура проявляет разную
чувствительность. Её изучают в лаборатории для определения
степени чувствительности, данной культуры, это является
aнтибиограммой.

Результаты тестирования на чувствительность позволяют


врачу классифицировать бактериальную культуру согласно
терапевтическим категориям (Ч, У,УЧ), это бывает полезным
при идентификации культур.
Определение
антибиотикочувствительности
микроорганизмов

методы

Метод серийных
Диско- разведений
диффузионный Е-тест
метод

В жидкой В плотной
питательной питательной
среде среде
Диско-диффузионный метод

Питательные среды:

• МПА
• Среда Мюллера Хинтона

Для микроорганизмов со сложными питательными


потребностями в среду вносят ростовые добавки:
кровь, сыворотка крови.

Добавление глюкозы недопустимо.


Диско-диффузионный
метод
Приготовление чашек

Чашки подсушивают,
на дне чашки
отмечают места
наложения дисков
Диско-диффузионный метод
Приготовление инокулята

Инокулят готовят из
чистой 18-20-часовой
культуры бактерий,
выросшей на
поверхности плотной
питательной среды
Диско-диффузионный метод

Приготовление инокулята

Исследуемую
культуру
смывают
стерильным
изотоническим
раствором
хлорида натрия
Диско-диффузионный метод
Приготовление инокулята

Суспензию разводят
стерильным
изотоническим раствором
хлорида натрия
до мутности оптического
стандарта
ГИСК им. Л. А. Тарасевича
на 10 ед.
Диско-диффузионный метод
Нанесение суспензии на поверхность
агаровой среды

Инокулят в объеме
1 мл наносят на
поверхность
агаровой среды
Диско-диффузионный метод
Нанесение суспензии на поверхность
агаровой среды

Инокулят равномерно
распределяют по
поверхности шпателем
или путем
покачивания чашки
Диско-диффузионный
метод
Нанесение суспензии на поверхность
агаровой среды

Чашку наклоняют
и дают остатку
суспензии стечь
на одну сторону
Диско-диффузионный метод
Нанесение суспензии на поверхность
агаровой среды

Избыток суспензии
удаляют пастеровской
пипеткой. Чашки
выдерживают при
комнатной температуре
10-15 мин. для полного
впитывания суспензии.
Диско-диффузионный метод
Наложение дисков
Перед использованием флаконы
с дисками необходимо выдержать
при комнатной температуре
в течение 1 часа для
предотвращения образования
конденсата на внутренней
стенке флакона.
Диски с помощью пинцета
накладывают на поверхность
агара на одинаковом
расстоянии один от другого
и примерно на расстоянии
2 см от края чашки.
На одну чашку следует
помещать не более 6 дисков.
Диско-диффузионный метод
Инкубация чашек

Чашки ставят в термостат сразу после


наложения дисков и инкубируют в течение 18-
24 часов при 37 ºС, перевернутыми кверху
дном.
Диско-диффузионный метод
Учет результатов

Чашки помещают кверху


дном на темную матовую
поверхность так, чтобы
свет падал под углом 45º
(учет в отраженном
свете).
Диско-диффузионный метод
Учет результатов

С помощью линейки
или измерителя
измеряют диаметр
зон задержки роста
вокруг дисков,
включая диаметр
самих дисков, с
точностью до 1 мм.
Диско-диффузионный метод
Учет результатов

При не резко
очерченном крае
зоны или зоне с
двойным контуром
следует измерить
диаметр зоны по
наиболее четкому
контуру
Диско-диффузионный метод
Интерпретация полученных результатов

Пример:
Гентамицин – зона задержки роста 13 мм;
Левомицетин – зона задержки роста 17 мм;
Ципрофлоксацин – зона задержки роста 23 мм.

Антибиотик Диаметр зон для культур


устойчивых промежу- чувстви-
точных тельных
Гентамицин ≤ 15 - ≥ 16
Левомицетин ≤ 15 16-18 ≥ 19
Ципрофлоксацин ≤ 15 16-20 ≥ 21
Работа с диспенсером

Быстрее и удобнее использовать диспенсер для дисков


Работа с диспенсером
Чтение результатов
Meтод серийных
разведений

В ряде пробирок с 1 мл МПБ, производится разведение AB


(256 ЕД, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, и т. д.).В каждую
пробирку добавляют (за исключением контрольной) 0,1
мл микробной суспензии 105/мл. Tермостат – 24ч.
Чтение результата – минимальная доза AB, которая
задерживает рост культуры через 24ч инкубирования
(среда прозрачная) составляет Минимальную
Ингибирующую Концентрацию (MИК) AB для
тестируемой культуры.
МИК определяет бактериостатический эффект.
Серийное разведение антибиотика

1мл 1мл 1мл 1мл 1мл 1мл


1мл
256 мкг/мл

1 мл
128

64

32

16

2
8
Подготовка суспензии
микроорганизмов

Суспензия с концентрацией
микроорганизмов
109 (10 ЕД оптического
стандарта мутности)

18-20 часовая
чистая культура
исследуемого 0,1 мл
микроорганизма

Разведение Разведение
1:100 1 мл 1:1000
107 106

10 мл 9 мл
МПБ МПБ
Внесение суспензии в пробирки с
разведениями

106
в 1 мл – 1000 000 микроб. клеток
в 0,1 мл – 100 000 микроб. клеток

Контроль чистоты
культуры по 0,1 мл

контроль
Учет результата

128 64 32 16 8 4 2 1
мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл мкг/мл

Нет роста Рост


МПК микроорганизмов
Метод E-тестов
Принцип
• Е-тесты представляют собой пластиковые полоски, на
внутренней (обращенной к агару) стороне которых нанесен
антибиотик в заданном градиенте концентрации, а на внешней
стороне – шкала соответствующих значений МПК.
• Е-тесты, используемые для выявления БЛРС, содержат на
противоположных концах полоски два убывающих по
направлению к центру градиента концентрации: цефтазидима и
комбинации цефтазидима с клавулановой кислотой,
нанесенной в фиксированной концентрации вдоль градиента

a - E.coli , отрицательный результат

b - E.coli , положительный результат


Е-тест
Чувствительность к АМП на стрипах ATB.

Стрипы ATB предназначены для полуколичественного определения


чувствительности к антимикробным препаратам в полужидкой среде.
 Стрип состоит из 16 или 32 лунок.
 В лунках содержатся антимикробные препараты в одной или двух
концентрациях.
 Определение чувствительности к 15-30 препаратам на одном
стрипе.
 Визуальный учет результатов по наличию / отсутствию роста в
лунках.
Автоматические системы
учета результатов метода
серийных разведений.

Прибор для
автоматического Vitek 2 Compact
измерения зон автоматизированный бактериологический
анализатор для идентификации и
задержки роста определения антибиотикочувствительности
бактерий широкого спектра микроорганизмов.
Методы определения чувствительности
бактерий к антибиотикам
 Автоматические системы учета результатов метода серийных
разведений.
- автоматизированные инкубационные системы со встроенными
фотометрами, нефелометрически регистрирующими рост бактерий после
внесения бактерий в лунки микропанелей.
Примеры – Baxter MicroScan AutoSCAN-4 – регистрация через 24 час.
- VITEK - регистрация через 4-10 час.

 Система Alamar (как и Е-тест)– совмещает в себе метод серийных


разведений и метод дисков. Представляет собой панель с лунками, в
каждую лунку помещены диски, содержащие различные концентрации
антибиотиков с добавкой индикатора Alamar Blue. При внесении в лунку
бактерий диск синеет, при дальнейшем росте бактерий диск розовеет.
Лунка с синим диском (т.е. роста бактерий нет) наименьшей
концентрации антибиотика соответствует МИК – минимальной
ингибирующей концентрации антибиотика.
Минимальная бактерицидная концентрация
(MБК)

– минимальное количество AB, которое убивает 99,9%


инокулята через 18ч инкубирования.

Определение МБК – из последних пробирок без роста


пересевают 0,1 мл на чашку с агаром. Через 24ч
сравнивают число выживших клеток c начальным числом
бактерий (105/мл).
Coотношение исследований in vitro
и результатами in vivo

При исследовании in vitro паpaметры (плотность микробной


суспензии, концентрация AB и др.) не меняются во времени.
In vivo, у пациентов, концентрация AB варьирует в
зависимости от времени и ткани.
Чтобы определить чувствительна или устойчива к АВ
выделенная культура необходимо знание Терапевтической
концентрации (ТК) (количество АБ присутствующее в очаге
инфекции во время лечения терапевтическими дозами)
каждого тестируемого АБ.
• Чувствительные культуры – MИК/TК <1, напр.: 2/8, 2/16 –
терапевтический эффект м.б. достигнут обычными
дозами
• Устойчивые культуры – MИК/TК>1, напр.: 8/2,
терапевтический эффект невозможен
• Умеренные культуры – MИК/TК=1, терапевтический
эффект непредсказуем. Возможно использование
максимальных доз AБ или использование АБ местно.
Исследование MИК / MБК показано при лечении тяжёлых
инфекций: менингитов, септицемий, эндокардитов,
хронических инфекций а также у лиц с
иммунносупрессией.
Наблюдение за лечением АБ. Проверка качества
антибиотерапии.

1. Определение концентраций АБ в жидкостях и тканях


Назначение:
- Использование токсического АБ
- В случае, если у больного нарушения метаболизма,
дефицит всасывания или экскреции (почечного,
печёночного)
Сравнивают полученные концентрации с МИК тестируемого
антибиотика (или с TК).
Исследование ингибиторной активности
биологических жидкостей (NEI)

Показания: тяжёлые инфекции, которые не отвечают


быстро на лечение.
Выполнение: к двойным разведениям (1/2, ¼...)
Исследуемой жидкости (сыворотка, СМЖ, моча)
добавляют микробную суспензию (из культуры,
выделенной от больного).
Результат: через 24ч инкубации при 37° C
определяют максимальное разведение c
бактериостатическим/цидным эффектом.
NEI ≥1:8 отражает эффективность
антибиотикотерапии.
Условия рационального
применения А
• Назначать А с учетом выделенного возбудителя и его анти-
биотикограммы
• Выбирать наиболее активный и наименее токсичный А
• Определять оптимальную дозу А и путь его введения на
осно-вании особенностей фармакокинетики А и течения
заболевания. Концентрация А в крови должна в 3-4 раза
превышать МИК для выделения возбудителя
• Применять вначале ударную дозу, затем поддерживающую
• На основании анамнеза и проведения пробы определять
переносимость данного А больным
• Учитывать побочные реакции А, особенно при печеночной
и/или почечной недостаточности
• Своевременно начинать лечение и проведение курса
антибиотикотерапии до закрепления терапевтического
эффекта
• Учитывать перекрестную чувствительность
• Применять комбинации А с целью расширения спектра
действия и усиления антибактериального эффекта
• Назначать параллельно противогрибковые препараты для
профилактики дисбиоза
Резистентность ми/o к aнтибиотикам

Причины:
1. Генетические факторы, свойственные бактериям
2. Факторы, способствующие селекции и распостранению
резистентных бактериальных культур

Tипы резистентности:
1. Природная, наследственная, видовая,
присутствующая у всех членов одного вида или рода
- Отсутствие мишени – напр.: микоплазмы, мицеты;
- Невозможность достижения мишени – напр.: Mycobacterium
(воска, жиры затрудняют проникновение AB в цитоплазму);
- Бактерии не выполняют процесс, ингибируемый АБ – напр.:
фолиевая кислота утилизируется из внешней среды –
резистентность к сульфамидам
2. Приобретённая,

поражает чувствительные культуры одного


вида.
Зависит от:

селектвного воздействия АБ, используемого в лечении, на

бактерии с последующим их распостранением (между

бактериями, людьми).
Meханизмы приобретённой резистентности:

- Уменьшение проницаемости мембран


- Moдификация молекулярной мишени
- Повышенное выделение АБ
- Инактивация АБ гидролизными ферментами,
(пенициллиназа, цефалоспориназа) или изменяя
структуру АБ (aцетилазы, aденилазы, фосфорилазы), и
др.
Приобретённая устойчивость может проявляться
фенотипически (формы “L” бактерий) или гeнетически
(генотипически)
Генетическая устойчивость может быть:
- Хромосомной, определяемой мутациями (10%)
Meханизмы: изменение молекулярной мишени, уменьшение
мембранной проницаемости.
- Плазмидной, эпидемической, реализуется путём переноса
генов посредством плазмид R (возможна множественная
устойчивость).
Meханизмы: инактивация ферментами, модификация
мишени, замещение или перепроизводство мишени,
избыточная экскреция AБ.
Предупреждение резистентности

1. Эпидемиологическое наблюдение зa устойчивыми


культурами
2. Политика правильного предписания AB
3. Назначение правильных терапевтических доз и
соблюдение сроков лечения
4. Назначение нескольких AB c различными механизмами
действия
5. Назначение AB устойчивых к бета - лактамазам,
используя ингибиторы (клавулановую кислоту,
сульфбактам, тазобактам). Напр.: aугментин –
aмоксациллин+ клавулановая кислота
6. Производство новых AB
Бaктериоцины – бактерицидные белковые вещества,
продуцируемые многочисленными видами бактерий и
обладающие активностью по отношению к другим
штаммам этого же вида или родственных видов.
Продукция бактериоцинов определяется плазмидами
(плазмида Col).

Tипы бактериоцинов:
колицины (секретируемые Escherichia coli),
кoринецины (Corynebacterium),
вибриоцины (Vibrio),
пиоцины (Pseudomonas), и др.
Исследование чувствительности культуры к бактериоцинам
(бaктериоцинотипия) используется в эпидемиологич.
целях.
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!

Вам также может понравиться