Вы находитесь на странице: 1из 200

Билет 1.

1. Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные


и вирулентные бактериофаги. Лизогения. Обнаружение. Практическое
применение.
Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически
проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их
растворение (лизис).
Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. По механизму взаимодействия
различают вирулентные и умеренные фаги.
Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно репродуцируются в
ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия вирулентного фага с
бактерией протекает в виде нескольких стадий и весьма схож с процессом
взаимодействия вирусов человека и животных с клеткой хозяина. Однако для фагов,
имеющих хвостовой отросток с сокращающимся чехлом, он имеет особенности. Эти
фаги адсорбируются на поверхности бактериальной клетки с помощью фибрилл
хвостового отростка. В результате активации фагового фермента АТФазы происходит
сокращение чехла хвостового отростка и внедрение стержня в клетку. В процессе
«прокалывания» клеточной стенки бактерии принимает участие фермент лизоцим,
находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага, содержащаяся в
головке, проходит через полость хвостового стержня и активно впрыскивается в
цитоплазму клетки. Остальные структурные элементы фага (капсид и отросток)
остаются вне клетки.
После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной клетке
накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового лизоцима и
внутриклеточного осмотического давления происходит разрушение клеточной стенки,
выход фагового потомства в окружающую среду и лизис бактерии. Один литический
цикл (от момента адсорбции фагов до их выхода из клетки) продолжается 30—40 мин.
Процесс бактериофагии проходит несколько циклов, пока не будут лизированы все
чувствительные к данному фагу бактерии.
Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризуется определенной
степенью специфичности. По специфичности действия различают поливалентные
фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий,
моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями определенного вида, и
типовые фаги, взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида
бактерий.
Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они вступают в
симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком
случае геномом фага называют профаг. Профаг, ставший частью хромосомы клетки,
при ее размножении реплицируется синхронно с геном бактерии, не вызывая ее
лизиса, и передается по наследству от клетки к клетке неограниченному числу
потомков.
Биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом)
называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг, получила название
лизогенной. Это название отражает способность профага самопроизвольно или под
действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки
и переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий
бактерии.
Лизогенные культуры по своим основным свойствам не отличаются от исходных, но
они невосприимчивы к повторному заражению гомологичным или
близкородственным фагом и, кроме того, приобретают дополнительные свойства,
которые находятся под контролем генов профага. Изменение свойств
микроорганизмов под влиянием профага получило название фаговой конверсии.
Последняя имеет место у многих видов микроорганизмов и касается различных их
свойств: культуральных, биохимических, токсигенных, антигенных, чувствительности к
антибиотикам и др. Кроме того, переходя из интегрированного состояния в
вирулентную форму, умеренный фаг может захватить часть хромосомы клетки и при
лизисе последней переносит эту часть хромосомы в другую клетку. Если микробная
клетка станет лизогенной, она приобретает новые свойства. Таким образом,
умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов.
Практическое применение фагов. Бактериофаги используют в лабораторной
диагностике инфекций при внутривидовой идентификации бактерий, т. е.
определении фаговара (фаготипа). Для этого применяют метод фаготипирования,
основанный на строгой специфичности действия фагов: на чашку с плотной
питательной средой, засеянной «газоном» чистой культурой возбудителя, на¬носят
капли различных диагностических типоспецифических фагов. Фаговар бактерии
определяется тем типом фага, который вызвал ее лизис (образование стерильного
пятна, «бляшки», или «негативной колонии», фага). Методику фаготипирования
используют для выявления источника и путей распространения инфекции
(эпидемиологическое маркирование). Выделение бактерий одного фаговара от
разных больных указывает на общий источник их заражения.
По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в воде)
можно судить о присутствии в них соответствующих патогенных бактерий. Подобные
исследования проводят при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных
болезней.
Фаги применяют также для лечения и профилактики ряда бактериальных инфекций.
Производят брюшнотифозный, сальмонеллезный, дизентерийный, синегнойный,
стафилококковый, стрептококковый фаги и комбинированные препараты
(колипротейный, пиобактериофаги и др). Бактериофаги назначают по показаниям
перорально, парентерально или местно в виде жидких, таблетированных форм,
свечей или аэрозолей.
Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в качестве
векторов для получения рекомбинантных ДНК.

2. Патогенность и вирулентность микробов. Количественное определение


вирулентности.
Патогенность — видовой признак, передающийся по наследству, закрепленный в
геноме микроорганизма, в процессе эволюции паразита, т. е. это генотипический
признак, отражающий потенциальную возможность микроорганизма проникать в
макроорганизм (инфективность) и размножаться в нем (инвазионность), вызывать
комплекс патологических процессов, возникающих при заболевании.
Фенотипическим признаком патогенного микроорганизма является его вирулентность,
т.е. свойство штамма, которое проявляется в определенных условиях (при
изменчивости микроорганизмов, изменении восприимчивости макроорганизма и
т.д.). Вирулентность можно повышать, понижать, измерять, т.е. она является мерой
патогенности. Количественные показатели вирулентности могут быть выражены в DLM
(минимальная летальная доза), DL« (доза, вызывающая гибель 50 %
экспериментальных животных). При этом учитывают вид животных, пол, массу тела,
способ заражения, срок гибели.
К факторам патогенности относят способность микроорганизмов прикрепляться к
клеткам (адгезия), размещаться на их поверхности (колонизация), проникать в клетки
(инвазия) и противостоять факторам защиты организма (агрессия).
Адгезия является пусковым механизмом инфекционного процесса. Под адгезией
понимают способность микроорганизма адсорбироваться на чувствительных клетках с
последующей колонизацией. Структуры, ответственные за связывание
микроорганизма с клеткой называются адгезинами и располагаются они на его
поверхности. Адгезины очень разнообразны по строению и обусловливают высокую
специфичность - способность одних микроорганизмов прикрепляться к клеткам
эпителия дыхательных путей, других - кишечного тракта или мочеполовой системы и
т.д. На процесс адгезии могут влиять физико-химические механизмы, связанные с
гидрофобностью микробных клеток, суммой энергии притяжения и отталкивания. У
грамотрицательных бактерий адгезия происходит за счет пилей I и общего типов. У
грамположительных бактерий адгезины представляют собой белки и тейхоевые
кислоты клеточной стенки. У других микроорганизмов эту функцию выполняют
различные структуры клеточной системы: поверхностные белки, липополисахариды, и
др.
Инвазия. Под инвазивностью понимают способность микробов проникать через
слизистые, кожу, соединительно-тканные барьеры во внутреннюю среду организма и
распространятся по его тканям и органам. Проникновение микроорганизма в клетку
связывается с продукцией ферментов, а также с факторами, подавляющими
клеточную защиту. Так фермент гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту,
входящую в состав межклеточного вещества, и, таким образом, повышает
проницаемость слизистых оболочек и соединительной ткани. Нейраминидаза
расщепляет нейраминовую кислоту, которая входит в состав поверхностных
рецепторов клеток слизистых оболочек, что способствует проникновению возбудителя
в ткани.
Агрессия. Под агрессивностью понимают способность возбудителя противостоять
защитным факторам макроорганизма. К факторам агрессии относятся: протеазы -
ферменты, разрушающие иммуноглобулины; коагулаза - фермент, свертывающий
плазму крови; фибринолизин - растворяющий сгусток фибрина; лецитиназа - фермент,
действующий на фосфолипиды мембран мышечных волокон, эритроцитов и других
клеток. Патогенность может быть связана и с другими ферментами микроорганизмов,
при этом они действуют как местно, так и генерализовано.
Важную роль в развитии инфекционного процесса играют токсины. По биологическим
свойствам бактериальные токсины делятся на экзотоксины и эндотоксины.
Экзотоксины продуцируют как грамположительные, так и грамотрицательные
бактерии. По своей химической структуре это белки. По механизму действия
экзотоксина на клетку различают несколько типов: цитотоксины, мембранотоксины,
функциональные блокаторы, эксфолианты и эритрогемины. Механизм действия
белковых токсинов сводится к повреждению жизненно важных процессов в клетке:
повышение проницаемости мембран, блокады синтеза белка и других биохимических
процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между
клетками. Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и продуцируют
образование в организме антитоксинов.
Экзотоксины обладают высокой токсичностью. Под воздействием формалина и
температуры экзотоксины утрачивают свою токсичность, но сохраняют иммуногенное
свойство. Такие токсины получили название анатоксины и применяются для
профилактики заболевания столбняка, гангрены, ботулизма, дифтерии, а также
используются в виде антигенов для иммунизации животных с целью получения
анатоксических сывороток.
Эндотоксины по своей химической структуре являются липополисахаридами, которые
содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий и выделяются в
окружающую среду при лизисе бактерий. Эндотоксины не обладают специфичностью,
термостабильны, менее токсичны, обладают слабой иммуногенностью. При
поступлении в организм больших доз эндотоксины угнетают фагоцитоз, гранулоцитоз,
моноцитоз, увеличивают проницаемость капилляров, оказывают разрушающее
действие на клетки. Микробные липополисахариды разрушают лейкоциты крови,
вызывают дегрануляцию тучных клеток с выделением вазодилататоров, активируют
фактор Хагемана, что приводит к лейкопении, гипертермии, гипотонии, ацидозу,
дессиминированной внутрисосудистой коагуляции (ДВК).
Эндотоксины стимулируют синтез интерферонов, активируют систему комплемента по
классическому пути, обладают аллергическими свойствами.
При введении небольших доз эндотоксина повышается резистентность организма,
усиливается фагоцитоз, стимулируются В-лимфоциты. Сыворотка животного
иммунизированного эндотоксином обладает слабой антитоксической активностью и
не нейтрализует эндотоксин.
Патогенность бактерий контролируется тремя типами генов: гены - собственной
хромосомы, гены, привнесенные плазмидами, умеренными фагами.
3. Возбудители полиомиелита. Таксономия. Характеристика возбудителя.
Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика.
Таксономия.: семейство Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus.
Структура. По структуре полиовирусы — типичные представители рода Enterovirus.
РНК-содержащие вирусы.
Морфология: мелкие, просто организованные вирусы, сферической формы, состоят из
одноцепочечной РНК и капсида.
Культивирование: Хорошо репродуцируются в первичных и перевариваемых
культурах клеток из тканей человека и сопровождается цитопатическим эффектом. В
культуре клеток под агаровым покрытием энтеровирусы образуют бляшки.
Антигенные свойства: Различают 3 серотипа внутри вида: 1, 2, 3, не вызывающие
перекрестного иммунитета. Все серотипы патогенны для человека.
Патогенез и клиника. Естественная восприимчивость человека к вирусам
полиомиелита высокая. Входными воротами служат слизистые оболочки верхних
дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репродукция вирусов
происходит в лимфатических узлах глоточного кольца и тонкой кишки. Из
лимфатической системы вирусы проникают в кровь, а затем в ЦНС, где избирательно
поражают клетки передних рогов спинного мозга (двигательные нейроны).
Инкубационный период продолжается в среднем 7—14 дней. Различают 3
клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную (без параличей),
абортивную (легкая форма). Заболевание начинается с повышения температуры тела,
общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле.
Иммунитет. После перенесенной болезни остается пожизненный типоспецифический
иммунитет. Иммунитет определяется наличием вируснейтрализующих антител, среди
которых важная роль принадлежит местным секреторным антителам слизистой
оболочки глотки и кишечника (местный иммунитет). Пассивный естественный
иммунитет сохраняется в течение 3—5 недель после рождения ребенка.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - кал, отделяемое
носоглотки, при летальных исходах — кусочки головного и спинного мозга,
лимфатические узлы.
Вирусы полиомиелита выделяют путем заражения исследуемым материалом
первичных и перевиваемых культур клеток. О репродукции вирусов судят по
цитопатическому действию. Идентифицируют выделенный вирус с помощью
типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток. Важное
значение имеет внутривидовая дифференциация вирусов, которая позволяет отличить
патогенные штаммы от вакцинных штаммов, выделяющихся от людей,
иммунизированных живой полиомиелитной вакциной. Различия между штаммами
выявляют с помощью ИФА, реакции нейтрализации цитопатического действия вируса
в культуре клеток со штаммоспецифической иммунной сывороткой, а также в ПЦР.
Серодиагностика основана на использовании парных сывороток больных с
применением эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание
сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM определяют методом
радиальной иммунодиффузии по Манчини.
Лечение. Патогенетическое. Применение гомологичного иммуноглобулина для
предупреждения развития паралитических форм ограничено.
Профилактика. Основной мерой профилактики полиомиелита является иммунизация.
Первая инактивированная вакцина для профилактики – создавала общий
гуморальный иммунитет, не формировала местной резистентности слизистых
оболочек ЖКТ, не обеспечивала надежную защиту.
Пероральная живая культуральная вакцина из трех серотипов штаммов. Используют
для массовой иммунизации детей, она создает стойкий общий и местный иммунитет.
Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям.
Билет 2.
1. Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные
и вирулентные бактериофаги. Лизогения. Обнаружение. Практическое
применение.
Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически
проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их
растворение (лизис).
Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. По механизму взаимодействия
различают вирулентные и умеренные фаги.
Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно репродуцируются в
ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия вирулентного фага с
бактерией протекает в виде нескольких стадий и весьма схож с процессом
взаимодействия вирусов человека и животных с клеткой хозяина. Однако для фагов,
имеющих хвостовой отросток с сокращающимся чехлом, он имеет особенности. Эти
фаги адсорбируются на поверхности бактериальной клетки с помощью фибрилл
хвостового отростка. В результате активации фагового фермента АТФазы происходит
сокращение чехла хвостового отростка и внедрение стержня в клетку. В процессе
«прокалывания» клеточной стенки бактерии принимает участие фермент лизоцим,
находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага, содержащаяся в
головке, проходит через полость хвостового стержня и активно впрыскивается в
цитоплазму клетки. Остальные структурные элементы фага (капсид и отросток)
остаются вне клетки.
После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной клетке
накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового лизоцима и
внутриклеточного осмотического давления происходит разрушение клеточной стенки,
выход фагового потомства в окружающую среду и лизис бактерии. Один литический
цикл (от момента адсорбции фагов до их выхода из клетки) продолжается 30—40 мин.
Процесс бактериофагии проходит несколько циклов, пока не будут лизированы все
чувствительные к данному фагу бактерии.
Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризуется определенной
степенью специфичности. По специфичности действия различают поливалентные
фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий,
моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями определенного вида, и
типовые фаги, взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида
бактерий.
Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они вступают в
симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком
случае геномом фага называют профаг. Профаг, ставший частью хромосомы клетки,
при ее размножении реплицируется синхронно с геном бактерии, не вызывая ее
лизиса, и передается по наследству от клетки к клетке неограниченному числу
потомков.
Биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом)
называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг, получила название
лизогенной. Это название отражает способность профага самопроизвольно или под
действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки
и переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий
бактерии.
Лизогенные культуры по своим основным свойствам не отличаются от исходных, но
они невосприимчивы к повторному заражению гомологичным или
близкородственным фагом и, кроме того, приобретают дополнительные свойства,
которые находятся под контролем генов профага. Изменение свойств
микроорганизмов под влиянием профага получило название фаговой конверсии.
Последняя имеет место у многих видов микроорганизмов и касается различных их
свойств: культуральных, биохимических, токсигенных, антигенных, чувствительности к
антибиотикам и др. Кроме того, переходя из интегрированного состояния в
вирулентную форму, умеренный фаг может захватить часть хромосомы клетки и при
лизисе последней переносит эту часть хромосомы в другую клетку. Если микробная
клетка станет лизогенной, она приобретает новые свойства. Таким образом,
умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов.
Практическое применение фагов. Бактериофаги используют в лабораторной
диагностике инфекций при внутривидовой идентификации бактерий, т. е.
определении фаговара (фаготипа). Для этого применяют метод фаготипирования,
основанный на строгой специфичности действия фагов: на чашку с плотной
питательной средой, засеянной «газоном» чистой культурой возбудителя, на¬носят
капли различных диагностических типоспецифических фагов. Фаговар бактерии
определяется тем типом фага, который вызвал ее лизис (образование стерильного
пятна, «бляшки», или «негативной колонии», фага). Методику фаготипирования
используют для выявления источника и путей распространения инфекции
(эпидемиологическое маркирование). Выделение бактерий одного фаговара от
разных больных указывает на общий источник их заражения.
По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в воде)
можно судить о присутствии в них соответствующих патогенных бактерий. Подобные
исследования проводят при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных
болезней.
Фаги применяют также для лечения и профилактики ряда бактериальных инфекций.
Производят брюшнотифозный, сальмонеллезный, дизентерийный, синегнойный,
стафилококковый, стрептококковый фаги и комбинированные препараты
(колипротейный, пиобактериофаги и др). Бактериофаги назначают по показаниям
перорально, парентерально или местно в виде жидких, таблетированных форм,
свечей или аэрозолей.
Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в качестве
векторов для получения рекомбинантных ДНК.
2. Иммуноглобулины. Структура. Классы и типы иммуноглобулинов. Роль в
формировании иммунитета.
Природа иммуноглобулинов. В ответ на введение антигена иммунная система
вырабатывает антитела — белки, способные специфически соединяться с антигеном,
вызвавшим их образование, и таким образом участвовать в иммунологических
реакциях. Относятся антитела к γ-глобулинам, т. е. наименее подвижной в
электрическом поле фракции белков сыворотки крови. В организме γ-глобулины
вырабатываются особыми клетками — плазмоцитами. γ-глобулины, несущие функции
антител, получили название иммуноглобулинов и обозначаются символом Ig.
Следовательно, антитела — это иммуноглобулины, вырабатываемые в ответ на
введение антигена и способные специфически взаимодействовать с этим же
антигеном.
Функции. Первичная функция состоит во взаимодействии их активных центров с
комплементарными им детерминантами антигенов. Вторичная функция состоит в их
способности:
• связывать антиген с целью его нейтрализации и элиминации из организма, т. е.
принимать участие в формировании защиты от антигена;
• участвовать в распознавании «чужого» антигена;
• обеспечивать кооперацию иммунокомпетентных клеток (макрофагов, Т- и В-
лимфоцитов);
• участвовать в различных формах иммунного ответа (фагоцитоз, киллерная функция,
ГНТ, ГЗТ, иммунологическая толерантность, иммунологическая память).
Структура антител. Белки иммуноглобулинов по химическому составу относятся к
гликопротеидам, так как состоят из протеина и сахаров; построены из 18 аминокислот.
Имеют видовые отличия, связанные главным образом с набором аминокислот. Их
молекулы имеют цилиндрическую форму, они видны в электронном микроскопе. До
80 % иммуноглобулинов имеют константу седиментации 7S; устойчивы к слабым
кислотам, щелочам, нагреванию до 60 °С. Выделить иммуноглобулины из сыворотки
крови можно физическими и химическими методами (электрофорез,
изоэлектрическое осаждение спиртом и кислотами, высаливание, аффинная
хроматография и др.). Эти методы используют в производстве при приготовлении
иммунобиологических препаратов.
Иммуноглобулины по структуре, антигенным и иммунобиологическим свойствам
разделяются на пять классов: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Иммуноглобулины М, G, А имеют
подклассы. Например, IgG имеет четыре подкласса (IgG, IgG2, IgG3, IgG4). Все классы и
подклассы различаются по аминокислотной последовательности.
Молекулы иммуноглобулинов всех пяти классов состоят из полипептидных цепей:
двух одинаковых тяжелых цепей Н и двух одинаковых легких цепей — L, соединенных
между собой дисульфидными мостиками. Соответственно каждому классу
иммуноглобулинов, т.е. М, G, A, E, D, различают пять типов тяжелых цепей: μ (мю), γ
(гамма), α (альфа), ε (эпсилон) и Δ (дельта), различающихся по антигенности. Легкие
цепи всех пяти классов являются общими и бывают двух типов: κ (каппа) и λ (лямбда);
L-цепи иммуноглобулинов различных классов могут вступать в соединение
(рекомбинироваться) как с гомологичными, так и с гетерологичными Н-цепями.
Однако в одной и той же молекуле могут быть только идентичные L-цепи (κ или λ). Как
в Н-, так и в L-цепях имеется вариабельная — V область, в которой последовательность
аминокислот непостоянна, и константная — С область с постоянным набором
аминокислот. В легких и тяжелых цепях различают NH2- и СООН-концевые группы.
При обработке γ -глобулина меркаптоэтанолом разрушаются дисульфидные связи и
молекула иммуноглобулина распадается на отдельные цепи полипептидов. При
воздействии протеолитическим ферментом папаином иммуноглобулин расщепляется
на три фрагмента: два не кристаллизующихся, содержащих детерминантные группы к
антигену и названных Fab-фрагментами I и II и один кристаллизующий Fc-фрагмент.
FabI- и FabII-фрагменты сходны по свойствам и аминокислотному составу и отличаются
от Fc-фрагмента; Fab-и Fc-фрагменты являются компактными образованиями,
соединенными между собой гибкими участками Н-цепи, благодаря чему молекулы
иммуноглобулина имеют гибкую структуру.
Как Н-цепи, так и L-цепи имеют отдельные, линейно связанные компактные участки,
названные доменами; в Н-цепи их по 4, а в L-цепи — по 2.
Активные центры, или детерминанты, которые формируются в V-областях, занимают
примерно 2 % поверхности молекулы иммуноглобулина. В каждой молекуле имеются
две детерминанты, относящиеся к гипервариабельным участкам Н- и L-цепей, т. е.
каждая молекула иммуноглобулина может связать две молекулы антигена. Поэтому
антитела являются двухвалентными.
Типовой структурой молекулы иммуноглобулина является IgG. Остальные классы
иммуноглобулинов отличаются от IgG дополнительными элементами организации их
молекулы.
В ответ на введение любого антигена могут вырабатываться антитела всех пяти
классов. Обычно вначале вырабатывается IgM, затем IgG, остальные — несколько
позже.

Иммуноглобулины по структуре, антигенным и иммунобиологическим свойствам


разделяются на пять классов: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Иммуноглобулин класса G. Изотип G составляет основную массу Ig сыворотки крови.
На его долю приходится 70—80 % всех сывороточных Ig, при этом 50 % содержится в
тканевой жидкости. Среднее содержание IgG в сыворотке крови здорового взрослого
человека 12 г/л. Период полураспада IgG — 21 день.
IgG — мономер, имеет 2 антигенсвязывающих центра (может одновременно связать 2
молекулы антигена, следовательно, его валентность равна 2), молекулярную массу
около 160 кДа и константу седиментации 7S. Различают подтипы Gl, G2, G3 и G4.
Синтезируется зрелыми В-лимфоцитами и плазматическими клетками. Хорошо
определяется в сыворотке крови на пике первичного и при вторичном иммунном
ответе.
Обладает высокой аффинностью. IgGl и IgG3 связывают комплемент, причем G3
активнее, чем Gl. IgG4, подобно IgE, обладает цитофильностью (тропностью, или
сродс¬твом, к тучным клеткам и базофилам) и участ¬вует в развитии аллергической
реакции I типа. В иммунодиагностических реакциях IgG может проявлять себя как
не¬полное антитело.
Легко проходит через плацентарный барь¬ер и обеспечивает гуморальный иммунитет
новорожденного в первые 3—4 месяца жизни. Способен также выделяться в секрет
слизис¬тых, в том числе в молоко путем диффузии.
IgG обеспечивает нейтрализацию, опсонизацию и маркирование антигена,
осуществля¬ет запуск комплемент-опосредованного цито¬лиза и антителозависимой
клеточно-опосредованной цитотоксичности.
Иммуноглобулин класса М. Наиболее круп¬ная молекула из всех Ig. Это пентамер,
кото¬рый имеет 10 антигенсвязывающих центров, т. е. его валентность равна 10.
Молекулярная масса его около 900 кДа, константа седи¬ментации 19S. Различают
подтипы Ml и М2. Тяжелые цепи молекулы IgM в отличие от других изотипов
построены из 5 доменов. Период полураспада IgM — 5 дней.
На его долю приходится около 5—10 % всех сывороточных Ig. Среднее содержание
IgM в сыворотке крови здорового взрослого человека составляет около 1 г/л. Этот
уровень у человека достигается уже к 2—4-летнему возрасту.
IgM филогенетически — наиболее древний иммуноглобулин. Синтезируется
предшест¬венниками и зрелыми В-лимфоцитами. Образуется в начале первичного
иммунного ответа, также первым начинает синтезиро¬ваться в организме
новорожденного — опре¬деляется уже на 20-й неделе внутриутробного развития.
Обладает высокой авидностью, наиболее эффективный активатор комплемента по
клас¬сическому пути. Участвует в формировании сывороточного и секреторного
гуморального иммунитета. Являясь полимерной молекулой, содержащей J-цепь,
может образовывать сек¬реторную форму и выделяться в секрет сли¬зистых, в том
числе в молоко. Большая часть нормальных антител и изоагглютининов относится к
IgM.
Не проходит через плаценту. Обнаружение специфических антител изотипа М в
сыво¬ротке крови новорожденного указывает на бывшую внутриутробную инфекцию
или де¬фект плаценты.
IgM обеспечивает нейтрализацию, опсонизацию и маркирование антигена,
осуществля¬ет запуск комплемент-опосредованного цито¬лиза и антителозависимой
клеточно-опосредованной цитотоксичности.
Иммуноглобулин класса А. Существует в сы¬вороточной и секреторной формах. Около
60 % всех IgA содержится в секретах слизистых.
Сывороточный IgA: На его долю прихо¬дится около 10—15% всех сывороточных Ig. В
сыворотке крови здорового взрослого чело¬века содержится около 2,5 г/л IgA,
максимум достигается к 10-летнему возрасту. Период полураспада IgA — 6 дней.
IgA — мономер, имеет 2 антигенсвязывающих центра (т. е. 2-валентный),
молекуляр¬ную массу около 170 кДа и константу седи¬ментации 7S. Различают
подтипы А1 и А2. Синтезируется зрелыми В-лимфоцитами и плазматическими
клетками. Хорошо опре¬деляется в сыворотке крови на пике первич¬ного и при
вторичном иммунном ответе.
Обладает высокой аффинностью. Может быть неполным антителом. Не связывает
комплемент. Не проходит через плацентар¬ный барьер.
IgA обеспечивает нейтрализацию, опсони-зацию и маркирование антигена,
осуществля¬ет запуск антителозависимой клеточно-опос-редованной
цитотоксичности.
Секреторный IgA: В отличие от сывороточ¬ного, секреторный sIgA существует в
полимерной форме в виде ди- или тримера (4- или 6-валентный) и содержит J- и S-
пeптиды. Молекулярная масса 350 кДа и выше, константа седиментации 13S и выше.
Синтезируется зрелыми В-лимфоцитами и их по¬томками — плазматическими
клетками со-ответствующей специализации только в пре¬делах слизистых и
выделяется в их секреты. Объем продукции может достигать 5 г в сутки. Пул slgA
считается самым многочисленным в организме — его количество превышает
суммарное содержание IgM и IgG. В сыворотке крови не обнаруживается.
Секреторная форма IgA — основной фак¬тор специфического гуморального местного
иммунитета слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы
и респираторного тракта. Благодаря S-цепи он устойчив к действию протеаз. slgA не
активи¬рует комплемент, но эффективно связывается с антигенами и нейтрализует их.
Он препятс¬твует адгезии микробов на эпителиальных клетках и генерализации
инфекции в преде¬лах слизистых.
Иммуноглобулин класса Е. Называют так¬же реагином. Содержание в сыворотке
крови крайне невысоко — примерно 0,00025 г/л. Обнаружение требует применения
специаль¬ных высокочувствительных методов диагнос¬тики. Молекулярная масса —
около 190 кДа, константа седиментации — примерно 8S, мо¬номер. На его долю
приходится около 0,002 % всех циркулирующих Ig. Этот уровень дости¬гается к 10—15
годам жизни.
Синтезируется зрелыми В-лимфоцитами и плазматическими клетками
преиму¬щественно в лимфоидной ткани бронхолегочного дерева и ЖКТ.
Не связывает комплемент. Не проходит че¬рез плацентарный барьер. Обладает
выражен¬ной цитофильностью — тропностью к тучным клеткам и базофилам.
Участвует в развитии гиперчувствительности немедленного типа — реакция I типа.
Иммуноглобулин класса D. Сведений об Ig данного изотипа не так много. Практически
полностью содержится в сыворотке крови в концентрации около 0,03 г/л (около 0,2 %
от общего числа циркулирующих Ig). IgD имеет молекулярную массу 160 кДа и
константу се¬диментации 7S, мономер.
Не связывает комплемент. Не проходит че¬рез плацентарный барьер. Является
рецепто¬ром предшественников В-лимфоцитов.
3. Микозы. Возбудители дерматомикозов (микроспории, трихофитии,
парши). Патогнез, микробиологическая диагностика. Диагностика и
специфические препараты.
Патогенез дерматомикозов.

Условия возникновения и генерализации дерматомикозов разнообразны: нейро-


гуморальные факторы, определяющие тяжесть заболевания, синдром Иценко-
Кушинга, синдром передозировки кортикостероидов, диабет и близкие к нему
состояния и т. д.
Воспалительная реакция, столь обычная при заражении животных зоофильным
трихофитоном, подавляется гидрокортизоном, а заболевание принимает черты
хронической трихофитии. При этом заболевание удлиняется, замедляется спонтанное
самоизлечение. Эпидермис и волосяные фолликулы атрофируются. Гиперкератоз
приобретает перифолликулярный характер. В устьях фолликулов и сальных желез
разрастается мицелий.
Видное место среди факторов патогенеза занимают нарушения функций
вегетативной нервной системы, нарушения трофики тканей и кровообращения.
Большое патогенетическое значение имеют экзогенные факторы.
Метеорологические и климатические условия тропиков, высокая температура,
повышенная влажность и другие экологические условия изучены недостаточно и
требуют особого внимания. Разнообразная бытовая микротравма и другие
повреждения наружных покровов не только определяют место внедрения
патогенного гриба (хромомикоз и другие микозы тропиков), но и возникновение
вторичных дерматомикозов.
Наблюдалось развитие трихофитии по типу «мадурской стопы» как результат
усиления активности возбудителя в месте колотой раны.
Описаны больные фавусом и тяжелыми заболеваниями эндокринных желез. При
атиреозе фавус, резистентный к гризеофульвину, регрессировал при рациональном
лечении тиреоидином. Только после снижения проявлений гипогенитализма у
молодой женщины был ликвидирован резистентный к лечению гризеофульвином
генерализованный фавус.
Сопоставление течения тропических и нетропических дерматомикозов
подчеркивает во многих случаях единство патогенетических факторов.
Диагностика дерматомикозов
Диагностика поверхностных микозов основана на данных микроскопии поражённых
тканей и идентификации культур грибов, выделенных из них. Возбудителей
микроспории достаточно легко выявляют облучением волос УФ-лампой Вуда
(поражённые участки светятся зелёным цветом). Морфологическая идентификация
возбудителей дерматомикозов в образцах тканей затруднена и требует выделения
чистой культуры. Материалом для исследований служат волосы, фрагменты кожи и
ногтей. Образцы микроскопируют в неокрашенных препаратах, обработанных КОН. В
керати-низированных тканях грибы образуют только гифы и артроспоры — их наличие
позволяет отличить грибковую инфекцию кожи от прочих поражений, например,
аллергических. Выделение культур возбудителя дерматомикозов осуществляют,
помещая отдельные волосы или фрагменты кожи на агар Сабуро, агар Сабуро с
антибиотиками или картофельный декстрозный агар.
Билет 3.
1. Методы стерилизации. Аппаратура и условия стерилизации.
Стерилизация предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергающихся
обработке.
Существует три основных метода стерилизации: тепловой, лучевой, химической.
Тепловая стерилизация основана на чувствительности микробов к высокой температуре.
При 60 "С и наличии воды происходит денатурация белка, деградация нуклеиновых
кислот, липидов, вследствие чего вегетативные формы микробов погибают. Споры,
содержащие очень большое количество воды в связанном состоянии и обладающие
плотными оболочками, инактивируются при 160—170 °С.
Для тепловой стерилизации применяют, в основном, сухой жар и пар под давлением.
Стерилизацию сухим жаром осуществляют в воздушных стерилизаторах (прежнее
название — «сухожаровые шкафы или печи Пастера»). Воздушный стерилизатор пред-
ставляет собой металлический плотно закрывающийся шкаф, нагревающийся с помощью
электричества и снабженный термометром. Обеззараживание материала в нем произво-
дят, как правило, при 160 °С в течение 120 мин. Однако возможны и другие режимы: 200
°С - 30 мин, 180 "С - 40 мин.
Стерилизуют сухим жаром лабораторную посуду и другие изделия из стекла, инстру-
менты, силиконовую резину, т. е. объекты, которые не теряют своих качеств при высокой
температуре.
Большая часть стерилизуемых предметов не выдерживает подобной обработки, и
поэтому их обеззараживают в паровых стерилизаторах.
Обработка паром под давлением в паровых стерилизаторах (старое название — «автокла-
вы») является наиболее универсальным методом стерилизации.
Паровой стерилизатор (существует множество его модификаций) — металлический
цилиндр с прочными стенками, герметически закрывающийся, состоящий из
водопаровой и стерилизующей камер. Аппарат снабжен манометром, термометром и
другими контрольно-измерительными приборами. В автоклаве создается повышенное
давление, что приводит к увеличению температуры кипения.
Поскольку кроме высокой температуры на микробы оказывает воздействие и пар, споры
погибают уже при 120 °С. Наиболее распространенный режим работы парового
стерилизатора: 2 атм — 121 °С — 15—20 мин. Время стерилизации уменьшается при
повышении атмосферного давления, а следовательно, и температуры кипения (136 °С — 5
мин). Микробы погибают за несколько секунд, но обработку материала производят в
течение большего времени, так как, во-первых, высокая температура должна быть и
внутри стерилизуемого материала и, во-вторых, существует так называемое поле
безопасности (рассчитанное на небольшую неисправность автоклава).
Стерилизуют в автоклаве бульшую часть предметов: перевязочный материал, белье,
коррозионно-устойчивые металлические инструменты, питательные среды, растворы,
инфекционный материал и т. д.
Одной из разновидностей тепловой стерилизации является дробная стерилизация, ко-
торую применяют для обработки материалов, не выдерживающих температуру выше 100
°С, например, для стерилизации питательных сред с углеводами, желатина. Их нагревают
в водяной бане при 80 °С в течение 30—60 мин.
В настоящее время применяют еще один метод тепловой стерилизации, предназначен-
ный специально для молока — ультравысокотемпературный (УВТ): молоко обрабатывают
в течение нескольких секунд при 130—150 °С.
Химическая стерилизация предполагает использование токсичных газов: оксида этилена,
смеси ОБ (смеси оксида этилена и бромистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и
формальдегида. Эти вещества являются ал-килирующими агентами, их способность в
присутствии воды инактивировать активные группы в ферментах, других белках, ДНК и
РНК приводит к гибели микроорганизмов.
Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от 18 до 80 °С в
специальных камерах. В больницах используют формальдегид, в промышленных
условиях — оксид этилена и смесь ОБ.
Перед химической стерилизацией все изделия, подлежащие обработке, должны быть
высушены.
Этот вид стерилизации небезопасен для персонала, для окружающей среды и для па-
циентов, пользующихся простерилизованными предметами (большинство
стерилизующих агентов остается на предметах).
Однако существуют объекты, которые могут быть повреждены нагреванием, например,
оптические приборы, радио- и электронная аппаратура, предметы из нетермостойких по-
лимеров, питательные среды с белком и т. п., для которых пригодна только химическая
стерилизация. Например, космические корабли и спутники, укомплектованные точной ап-
паратурой, для их деконтаминации обезвреживают газовой смесью (оксид этилена и
бромистого метила).
В последнее время в связи с широким распространением в медицинской практике изде-
лий из термолабильных материалов, снабженных оптическими устройствами, например
эндоскопов, стали применять обезвреживание с помощью химических растворов. После
очистки и дезинфекции прибор помещают на определенное время (от 45 до 60 мин) в сте-
рилизующий раствор, затем прибор должен быть отмыт стерильной водой. Для стери-
лизации и отмывки используют стерильные емкости с крышками. Простерилизованное и
отмытое от стерилизующего раствора изделие высушивают стерильными салфетками и
помещают в стерильную емкость. Все манипуляции проводят в асептических условиях и в
стерильных перчатках. Хранят эти изделия не более 3 суток.
Лучевая стерилизация осуществляется либо с помощью гамма-излучения, либо с помо-
щью ускоренных электронов.
Лучевая стерилизация является альтернативой газовой стерилизации в промышленных
условиях, и применяют ее также в тех случаях, когда стерилизуемые предметы не
выдерживают высокой температуры. Лучевая стерилизация позволяет обрабатывать
сразу большое количество предметов (например, одноразовых шприцев, систем для
переливания крови). Благодаря возможности широкомасштабной стерилизации,
применение этого метода вполне оправданно, несмотря на его экологическую опасность
и неэкономичность.
Еще одним способом стерилизации является фильтрование. Фильтрование с помощью
различных фильтров (керамических, асбестовых, стеклянных), а в особенности
мембранных ультрафильтров из коллоидных растворов нитроцеллюкозы или других
веществ позволяет освободить жидкости (сыворотку крови, лекарства) от бактерий,
грибов, простейших и даже вирусов. Для ускорения процесса фильтрации обычно создают
повышенное давление в емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в
емкости с фильтратом.
В настоящее время все более широкое применение находят современные методы стери-
лизации, созданные на основе новых технологий, с использованием плазмы, озона.

2. Определение иммунитета. Формы и виды иммунитета.


Иммунитет – это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ –
антигенов экзогенного и эндогенного происхождения, направленный на поддержание и
сохранение гомеостаза, структурной и функциональной целостности организма,
биологической (антигенной)индивидуальности каждого организма и вида в целом.
Различают несколько основных видов иммунитета.
Врожденный, иди видовой, иммунитет, он же наследственный, генетический, консти-
туциональный — это выработанная в процессе филогенеза генетически закрепленная,
передающаяся по наследству невосприимчивость данного вида и его индивидов к
какому-либо антигену (или микроорганизму), обусловленная биологическими осо-
бенностями самого организма, свойствами данного антигена, а также особенностями их
взаимодействия.
Примером может служить невосприимчивость человека к некоторым возбудителям, в
том числе к особо опасным для сельскохозяйственных животных (чума крупного рогатого
скота, болезнь Ньюкасла, поражающая птиц, оспа лошадей и др.), нечувствительность
человека к бактериофагам, поражающим клетки бактерий. К генетическому иммунитету
можно также отнести отсутствие взаимных иммунных реакций на тканевые антигены у
однояйцовых близнецов; различают чувствительность к одним и тем же антигенам у
различных линий животных, т. е. животных с различным генотипом.
Видовой иммунитет может быть абсолютным и относительным. Например, нечувс-
твительные к столбнячному токсину лягушки могут реагировать на его введение, если по-
высить температуру их тела. Белые мыши, не чувствительные к какому-либо антигену,
приобретают способность реагировать на него, если воздействовать на них
иммунодепрессантами или удалить у них центральный орган иммунитета — тимус.
Приобретенный иммунитет — это невосприимчивость к антигену чувствительного к нему
организма человека, животных и пр., приобретаемая в процессе онтогенеза в результате
естественной встречи с этим антигеном организма, например, при вакцинации.
Примером естественного приобретенного иммунитета у человека может служить не-
восприимчивость к инфекции, возникающая после перенесенного заболевания, так назы-
ваемый постинфекционный иммунитет (например, после брюшного тифа, дифтерии и
других инфекций), а также «проиммуниция», т. е. приобретение невосприимчивости к
ряду микроорганизмов, обитающих в окружающей среде и в организме человека и
постепенно воздействующих на иммунную систему своими антигенами.
В отличие от приобретенного иммунитета в результате перенесенного инфекционного
заболевания или «скрытной» иммунизации, на практике широко используют
преднамеренную иммунизацию антигенами для создания к ним невосприимчивости
организма. С этой целью применяют вакцинацию, а также введение специфических
иммуноглобулинов, сывороточных препаратов или иммунокомпетентных клеток.
Приобретаемый при этом иммунитет называют поствакцинальным, и служит он для
защиты от возбудителей инфекционных болезней, а также других чужеродных антигенов.
Приобретенный иммунитет может быть активным и пассивным. Активный иммунитет
обусловлен активной реакцией, активным вовлечением в процесс иммунной системы при
встрече с данным антигеном (например, поствакцинальный, постинфекционный им-
мунитет), а пассивный иммунитет формируется за счет введения в организм уже готовых
иммунореагентов, способных обеспечить защиту от антигена. К таким иммунореагентам
относятся антитела, т. е. специфические иммуноглобулины и иммунные сыворотки, а
также иммунные лимфоциты. Иммуноглобулины широко используют для пассивной
иммунизации, а также для специфического лечения при многих инфекциях (дифтерия,
ботулизм, бешенство, корь и др.). Пассивный иммунитет у новорожденных детей
создается иммуноглобулинами при плацентарной внутриутробной передаче антител от
матери ребенку играет существенную роль в защите от многих детских инфекций в
первые месяцы жизни ребенка.
Поскольку в формировании иммунитета принимают участие клетки иммунной системы и
гуморальные факторы, принято активный иммунитет дифференцировать в зависимости от
того, какой из компонентов иммунных реакций играет ведущую роль в формировании
защиты от антигена. В связи с этим различают клеточный, гуморальный, клеточно-
гуморальный и гуморально-клеточный иммунитет.
Примером клеточного иммунитета может служить противоопухолевый, а также транс-
плантационный иммунитет, когда ведущую роль в иммунитете играют цитотоксические Т-
лимфоциты-киллеры; иммунитет при токсинемических инфекциях (столбняк, ботулизм,
дифтерия) обусловлен в основном антителами (антитоксинами); при туберкулезе
ведущую роль играют иммунокомпетентные клетки (лимфоциты, фагоциты) с участием
специфических антител; при некоторых вирусных инфекциях (натуральная оспа, корь и
др.) роль в защите играют специфические антитела, а также клетки иммунной системы.
В инфекционной и неинфекционной патологии и иммунологии для уточнения характера
иммунитета в зависимости от природы и свойств антигена пользуются также такой
терминологией: антитоксический, противовирусный, противогрибковый,
противобактериальный, противопротозойный, трансплантационный, противоопухолевый
и другие виды иммунитета.
Наконец, иммунное состояние, т. е. активный иммунитет, может поддерживаться, со-
храняться либо в отсутствие, либо только в присутствии антигена в организме. В первом
случае антиген играет роль пускового фактора, а иммунитет называют стерильным. Во
втором случае иммунитет трактуют как нестерильный. Примером стерильного иммуни-
тета является поствакцинальный иммунитет при введении убитых вакцин, а нестерильно-
го— иммунитет при туберкулезе, который сохраняется только в присутствии в организме
микобактерий туберкулеза.
Иммунитет (резистентность к антигену) может быть системным, т. е. генерализованным,
и местным, при котором наблюдается более выраженная резистентность отдельных
органов и тканей, например слизистых верхних дыхательных путей (поэтому иногда его
называют мукозальным).

3. Возбудитель лепры. Характеристика возбудителя. Патогенез инфекции,


микробиологическая диагностика. Лечебно-профилактические
препараты.
Хроническое гранулематозное заболевание, поражаются слизистые оболочки,
верхние дыхат. пути, периферическая нервная система, глаза.
Таксономия. семейство Mycobacteriaceae, род Mycobocterium, вид M. leprae.
Морфологические и культуральные свойства: прямая/изогнутая палочка с закруглен-
ными концами. Грамположительные, спор и капсул не образуют, имеют микрокапсулу,
жгутиков не имеют. Кислото- и спиртоустойчивость, что обуславливает окраску по Цилю—
Нельсену. Не культивируется на искусственных питательных средах. Размножается только
в цитоплазме клетки путем деления и образуют шаровидные скопления Характерной
особенностью лепрозных клеток, относящихся к макрофагам, является наличие бледного
ядра и «пенистой» цитоплазмы. Токсинов не образует.
Биохимические свойства. Утилизируют глицерин и глюкозу и имеют специфический
фермент О-дифенолоксидазу. Обладают способностью продуцировать внеклеточные
липиды. Аэробы по выявлению на мембранных структурах микроорганизма ОВ фермен-
тов: пероксидазы, цитохромоксидазы.
Антигенная структура. Выраженная способность усиливать клеточные иммунные
реакции без добавления адъювантов. Ряд антигенов М. leprae являются общими для всех
микобактерий, в том числе с вакцинным штаммом BCG, что используется для
профилактики лепры.Из М. leprae выделен видоспецифический гликолипид с наличием
трисахарида. АТ к гликолипиду обнаруживаются только у больных лепрой, что
используется для активного выявления больных лепрой при обследовании лиц с
помощью ИФА.
Патогенез, клиника: Антропоноз. Резервуар, источник возбудителя - больной чело-
век (при кашле, чихании – выделяет бактерии).
Основной механизм заражения — аэрогенный, путь передачи — воздушно-
капельный. Входные ворота - слизистая оболочка верхних дыхательных путей и
поврежденные кожные покровы. Возбудитель распространяется лимфогематогенным
путем, поражая клетки кожи и периферической нервной системы. Инкубационный
период от 3-5 лет. При высокой резистентности развивается полярная туберкулоидная
форма заболевания (ТТ-тип лепры), а при низкой резистентности развивается полярная
лепроматозная форма заболевания (LL-тип лепры).
Иммунитет: относительный. В зонах с массивным инфицированием лепра может
быть вызвана на фоне существующего естественного или приобретенного иммунитета.
Микробиологическая диагностика: Материал для бактериоскопического
исследования: соскобы с кожи и слизистых оболочек носа, мокрота, пунктаты
лимфатических узлов. Мазки окрашивают по Цилю—Нельсену. Наибольшее значение
бактериоскопия соскобов имеет при LL-форме, при которых М. leprae выявляются во всех
высыпаниях в больших количествах. При ТТ-форме заболевания М. leprae в соскобах
выявляются очень редко, поэтому окончательную роль в диагностике заболевания имеет
гистологическое исследование биоптатов кожи и слизистых оболочек, которое позволяет
определить структуру гранулем.
Серологическая диагностика основана на обнаружении антител к фенольному
гликолипиду в ИФА. При LL-форме заболевания антитела определяются в 95 % случаев, а
при ТТ-форме — в 50 % случаев. В настоящее время получены моноклональные антитела,
которые позволяют определять лепрозные антигены в тканях, разрабатывается ПЦР.
Вспомогательное значение имеет изучение иммунного статуса больного, в том числе
постановка лепроминовой пробы (лепромин А). У больных LL-формой проба отрица-
тельная, а у больных ТТ-формой она положительная.
Лечение: Препараты сульфонового ряда: дапсон, солюсульфон. Рифампицин,
клофазимин и фторхинолоны. Методы генной терапии.
Профилактика: Специфической профилактики нет. Для относительного усиления
иммунитета используется вакцина BCG, составной частью которой является лепромин А.
Предварительно проводится проверка с помощью лепроминовой пробы. Разработка
генно-инженерных вакцин, вакцин с использованием специфических антигенов из М.
leprae.

Билет 4.
1. Антибиотики. Классификация, механизмы действия антибактериальных
препаратов. Осложнения антибиотикотерапии (дисбактериоз,
кандидомикоз и др.).
Как и всякие лекарственные средства, практически каждая группа антимикробных
химиопрепаратов может оказывать побочное действие, причем и на макроорганизм, и
на микробов, и на другие лекарственные средства.
Осложнения со стороны макроорганизма
Наиболее частыми осложнениями анти¬микробной химиотерапии являются:
Токсическое действие препаратов. Как правило, развитие этого осложнения зависит от
свойств самого препарата, его до¬зы, способа введения, состояния больного и
проявляется только при длительном и систе¬матическом применении антимикробных
химиотерапевтических препаратов, когда созда¬ются условия для их накопления в
организме. Особенно часто такие осложнения бывают, когда мишенью действия
препарата являются процессы или структуры, близкие по составу или строению к
аналогичным структурам кле¬ток макроорганизма. Токсическому действию
антимикробных препаратов особенно подвер¬жены дети, беременные, а также
пациенты с нарушением функций печени, почек.
Побочное токсическое влияние может прояв¬ляться как нейротоксическое (например,
гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие, вплоть до
полной потери слуха за счет воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое
(полиены, полипептиды, аминогликозиды, макролиды, гликопептиды,
сульфаниламиды); общетоксическое (противо¬грибковые препараты — полиены,
имидазолы); угнетение кроветворения (тетрациклины, суль¬фаниламиды,
левомицетин/хлорамфеникол, который содержит нитробензен — супрессор функции
костного мозга); тератогенное [ами¬ногликозиды, тетрациклины нарушают развитие
костей, хрящей у плода и детей, формирова¬ние зубной эмали (коричневая окраска
зубов), левомицетин/хлорамфеникол токсичен для но¬ворожденных, у которых
ферменты печени не полностью сформированы («синдром серого ребенка»),
хинолоны — действуют на развива¬ющуюся хрящевую и соединительную ткани].
Предупреждение осложнений состоит в от¬казе от противопоказанных данному
пациенту препаратов, контроле за состоянием функций печени, почек и т. п.
Дисбиоз (дисбактериоз). Антимикробные химиопрепараты, особен¬но широкого
спектра, могут воздействовать не только на возбудителей инфекций, но и на
чувствительные микроорганизмы нормаль¬ной микрофлоры. В результате
формируется дисбиоз, поэтому нарушаются функции ЖКТ, возникает авитаминоз и
может развиться вто¬ричная инфекция (в том числе эндогенная, например кандидоз,
псевдомембранозный ко¬лит). Предупреждение последствий такого рода
осложнений состоит в назначении, по возможности, препаратов узкого спектра
действия, сочетании лечения основного заболевания с противогрибковой терапией
(например, назначением нистатина), витаминотерапей, применением эубиотиков и т.
п.
Отрицательное воздействие на иммунную систему. К этой группе осложнений
отно¬сят прежде всего аллергические реакции. Причинами развития
гиперчувствительности может быть сам препарат, продукты его распа¬да, а также
комплекс препарата с сывороточ¬ными белками. Возникновение такого рода
осложнений зависит от свойств самого пре¬парата, от способа и кратности его
введения, индивидуальной чувствительности пациента к препарату. Аллергические
реакции разви¬ваются примерно в 10 % случаев и проявля¬ются в виде сыпи, зуда,
крапивницы, отека Квинке. Относительно редко встречается та¬кая тяжелая форма
проявления аллергии, как анафилактический шок. Такое осложнение чаще дают бета-
лактамы (пенициллины), рифамицины. Сульфаниламиды могут вызвать
гиперчувствительность замедленного типа. Предупреждение осложнений состоит в
тща¬тельном сборе аллергоанамнеза и назначении препаратов в соответствии с
индивидуальной чувствительностью пациента. Кроме того, антибиотики обладают
некоторым иммунодепрессивным действием и могут способство¬вать развитию
вторичного иммунодефицита и ослаблению напряженности иммунитета.
Эндотоксический шок (терапевтический). Это явление, которое возникает при
лече¬нии инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями. Введение
антибиотиков вызывает гибель и разрушение клеток и вы¬свобождение больших
количеств эндотокси¬на. Это закономерное явление, которое со¬провождается
временным ухудшением кли¬нического состояния больного.
Взаимодействие с другими препаратами. Антибиотики могут способствовать
потен¬цированию действия или инактивации других препаратов (например,
эритромицин стиму¬лирует выработку ферментов печени, которые начинают
ускоренно метаболизировать ле¬карственные средства разного назначения).
Побочное воздействие на микроорганизмы.
Применение антимикробных химиопрепа-ратов оказывает на микробы не только
прямое угнетающее или губительное воздействие, но также может привести к
формированию ати¬пичных форм микробов (например, к обра¬зованию L-форм
бактерий или изменению других свойств микробов, что значительно затрудняет
диагностику инфекционных забо¬леваний) и персистирующих форм микробов.
Широкое использование антимикробных ле¬карственных средств ведет также к
форми¬рованию антибиотикозависимости (редко) и лекарственной устойчивости —
антибиотикорезистентности (достаточно часто).
2. Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной
клетки.
Антиген – это биополимер органической природы, генетически чужеродный для
макроорганизма, который при попадании в последний распознаётся его иммунной
системой и вызывает иммунные реакции, направленные на его устранение.
Антигены обладают рядом характерных свойств: антигенностью, специфичностью и
иммуногенностью.
Антигенность. Под антигенностью понимают потенциаль¬ную способность молекулы
антигена акти-вировать компоненты иммунной системы и специфически
взаимодействовать с фактора¬ми иммунитета (антитела, клон эффекторных
лимфоцитов). Иными словами, антиген дол¬жен выступать специфическим
раздражителем по отношению к иммунокомпетентным клет¬кам. При этом
взаимодействие компоненты иммунной системы происходит не со всей молекулой
одновременно, а только с ее не¬большим участком, который получил название
«антигенная детерминанта», или «эпитоп».
Чужеродность является обязательным усло¬вием для реализации антигенности. По
этому критерию система приобретенного иммунитета дифференцирует потенциально
опасные объ¬екты биологического мира, синтезированные с чужеродной
генетической матрицы. Понятие «чужеродность» относительное, так как имму-
нокомпетентные клетки не способны напря¬мую анализировать чужеродный
генетический код. Они воспринимают лишь опосредованную информацию, которая,
как в зеркале, отражена в молекулярной структуре вещества.
Иммуногенность — потенциальная способ¬ность антигена вызывать по отношению к
себе в макроорганизме специфическую за¬щитную реакцию. Степень иммуногенности
зависит от ряда факторов, которые можно объединить в три группы: 1. Молекулярные
особенности антигена; 2. Клиренс антигена в организме; 3. Реактивность
макроорганизма.
К первой группе факторов отнесены природа, химический состав, молекулярный вес,
струк¬тура и некоторые другие характеристики.
Иммуногенность в значительной степени за¬висит от природы антигена. Важна также
оптическая изомерия аминокислот, составляющих молекулу белка. Большое значение
имеет размер и молекулярная масса антигена. На степень иммуногенности также
оказыва¬ет влияние пространственная структура анти¬гена. Оказалась также
существенной стерическая стабильность молекулы антигена. Еще одним важным
условием иммуно¬генности является растворимость антигена.
Вторая группа факторов связана с динамикой поступления антигена в организм и его
выведе¬ния. Так, хорошо известна зависимость иммуногенности антигена от способа
его введения. На иммунный ответ влияет количество пос¬тупающего антигена: чем его
больше, тем более выражен иммунный ответ.
Третья группа объединяет факторы, опреде¬ляющие зависимость иммуногенности от
со¬стояния макроорганизма. В этой связи на пер¬вый план выступают наследственные
факторы.
Специфичностью называют способность ан¬тигена индуцировать иммунный ответ к
строго определенному эпитопу. Это свойство обуслов¬лено особенностями
формирования иммунно¬го ответа — необходима комплементарность рецепторного
аппарата иммунокомпетентных клеток к конкретной антигенной детерминанте.
Поэтому специфичность антигена во многом определяется свойствами составляющих
его эпитопов. Однако при этом следует учитывать условность границ эпитопов, их
структурное разнообразие и гетерогенность клонов антигенреактивных лимфоцитовой
специфичности. В результате этого организм на антигенное раз¬дражение всегда
отвечает поликлональными им¬мунным ответом.
Антиге¬ны бактериальной клетки. В структуре бактериальной клетки разли¬чают
жгутиковые, соматические, капсульные и некоторые другие антигены. Жгутиковые,
или Н-антигены, локализуют-ся в локомоторном аппарате бактерий — их жгутиках.
Они представляют собой эпитопы сократительного белка флагеллина. При
на¬гревании флагеллин денатурирует, и Н-антиген теряет свою специфичность. Фенол
не действует на этот антиген.
Соматический, или О-антиген, связан с клеточной стенкой бактерий. Его основу
со¬ставляют ЛПС. О-антиген проявляет термос¬табильные свойства — он не
разрушается при длительном кипячении. Однако соматичес¬кий антиген подвержен
действию альдегидов (например, формалина) и спиртов, которые нарушают его
структуру.
Капсулъные, или К-антигены, располагаются на поверхности клеточной стенки.
Встречаются у бактерий, образующих капсулу. Как правило, К-антигены состоят из
кислых полисахаридов (уроновые кислоты). В то же время у бациллы сибирской язвы
этот антиген построен из по-липептидных цепей. По чувствительности к нагреванию
различают три типа К-антигена: А, В, и L. Наибольшая термостабильность ха¬рактерна
для типа А, он не денатурирует даже при длительном кипячении. Тип В выдержи¬вает
непродолжительное нагревание (около 1 часа) до 60 "С. Тип L быстро разрушается при
этой температуре. Поэтому частичное удале¬ние К-антигена возможно путем
длительного кипячения бактериальной культуры.
На поверхности возбудителя брюшного ти¬фа и других энтеробактерий, которые
облада¬ют высокой вирулентностью, можно обнару¬жить особый вариант
капсульного антигена. Он получил название антигена вирулентнос¬ти, или Vi-антигена.
Обнаружение этого ан¬тигена или специфичных к нему антител име¬ет большое
диагностическое значение.
Антигенными свойствами обладают также бактериальные белковые токсины,
ферменты и некоторые другие белки, которые секретируются бактериями в
окружающую среду (на¬пример, туберкулин). При взаимодействии со
специфическими антителами токсины, фер¬менты и другие биологически активные
моле¬кулы бактериального происхождения теряют свою активность. Столбнячный,
дифтерий¬ный и ботулинический токсины относятся к числу сильных полноценных
антигенов, поэ¬тому их используют для получения анатокси¬нов для вакцинации
людей.
В антигенном составе некоторых бактерий выделяется группа антигенов с сильно
выра¬женной иммуногенностью, чья биологическая активность играет ключевую роль
в формиро¬вании патогенности возбудителя. Связывание таких антигенов
специфическими антителами практически полностью инактивирует виру¬лентные
свойства микроорганизма и обеспечи¬вает иммунитет к нему. Описываемые
антиге¬ны получили название протективных. Впервые протективный антиген был
обнаружен в гнойном отделяемом карбункула, вызванного ба¬циллой сибирской
язвы. Это вещество являет¬ся субъединицей белкового токсина, которая ответственна
за активацию других, собственно вирулентных субъединиц — так называемого
отечного и летального факторов.
3. Эшерихиозы. Роль кишечной палочки в норме и патологии.
Характеристика возбудителя. Патогенез инфекции. Микробиологическая
диагностика.
Эшерихиозы - инфекционные болезни, возбудителем которых является Escherichia coli.
Различают энтеральные (кишечные) и паренте¬ральные эшерихиозы. Энтеральные
эшерихиозы — острые инфек¬ционные болезни, характеризующиеся
преимущественным пора¬жением ЖКТ. Они протекают в виде вспышек,
возбудителями являются диареегенные штаммы E.coli. Парентеральные эшерихи¬озы
— болезни, вызываемые условно-патогенными штаммами E.coli — представителями
нормальной микрофлоры толстой киш¬ки. При этих болезнях возможно поражение
любых органов.
Таксономическое положение. Возбудитель — кишеч¬ная палочка — основной
представитель рода Escherichia, семей¬ства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу
Gracilicutes.
Морфологические и тинкториальные свойства. E.coli — это мелкие грамотрицательные
палочки с закругленными концами. В мазках они располагаются беспорядочно, не
образуют спор, перитрихи. Некоторые штаммы имеют микрокапсулу, пили.
Культуральные свойства. Кишечная палочка — факультативный анаэроб, оптим. темп.
для роста - 37С. E.coli не требовательна к питательным средам и хоро¬шо растет на
простых средах, давая диффузное помутнение на жидких и образуя колонии на
плотных сре¬дах. Для диагностики эшерихиозов используют дифференциально-
диагности¬ческие среды с лактозой — Эндо, Левина.
Ферментативная ак¬тивность. E.coli обладает большим набором различных
ферментов. Наиболее отличительным признаком E.coli является ее способность
ферментировать лактозу.
Антигенная структура. Кишечная палочка обладает со¬матическим О-, жгутиковым Н и
поверхностным К -антигена¬ми. О-антиген имеет более 170 вариантов, К-антиген —
более 100, Н-антиген — более 50. Строение О-антигена определяет принадлежность к
серогруппе. Штаммы E.coli, имеющие присущий им набор антигенов (ан¬тигенную
формулу), называются серологическими вариантами (серовары).
По антигенным, токсигенным, свойствам разли¬чают два биологических варианта
E.coli: 1) условно-патоген¬ные кишечные палочки; 2) «безусловно» патогенные,
диареегенные.
Факторы патогенности. Образует эндотоксин, обладающий энтеротропным,
нейротропным и пирогенным действием. Диареегенные эшерихии продуцируют
эк¬зотоксин вызывающий значительное на¬рушение водно-солевого обмена. Кроме
того, у некоторых штам¬мов, как и возбудителей дизентерии, обнаруживается
инвазивный фактор, способствующий проникновению бактерий внутрь клеток.
Патогенность диареегенных эшерихии - в возникновении геморрагии, в нефро-
токсическом действии. К факторам патогенности всех штам¬мов E.coli относятся пили
и белки наружной мембраны, способствующие адгезии, а также микрокапсула,
препятству¬ющая фагоцитозу.
Резистентность. E.coli от¬личается более высокой устойчивостью к действию
различных факторов внешней среды; она чувствительна к дезинфектантам, быстро
погибает при кипячении.
Роль E.coli. Кишечная палочка — представитель нормаль¬ной микрофлоры толстой
кишки. Она является антагонистом патогенных кишечных бак¬терий, гнилостных
бактерий и грибов рода Candida. Кроме того, она участвует в синтезе витаминов
группы В, Е и К, частично расщепляет клетчатку.
Штаммы, обитающие в толстой кишке и являющиеся условно-патогенны¬ми, могут
попасть за пределы ЖКТ и при снижении иммуни¬тета и их накоплении стать
причиной различных неспецифичес¬ких гнойно-воспалительных болезней (циститов,
холециститов) - парентеральных эшерихиозов.
Эпидемиология. Источник энтеральных эшерихиозов - больные люди. Механизм
заражения — фекально-оральный, пути передачи—алиментарный, контактно-
бытовой.
Патогенез. Полость рта. Попадает в тонкую кишку, адсорбируется в клетках эпителия с
помощью пилей и белков наружной мембраны. Бактерии размножаются, погибают,
осво¬бождая эндотоксин, который усиливает перистальтику кишеч¬ника, вызывает
диарею, повышение температуры тела и другие симптомы общей интоксикации.
Выделяет экзотоксин - тяжелая диарея, рвоту и значительное нарушение водно-
солевого обмена.
Клиника. Инкубационный период составляет 4 дн. Бо¬лезнь начинается остро, с
повышения температуры тела, болей в животе, поноса, рвоты. Отмечаются нарушение
сна и аппе¬тита, головная боль. При геморрагической форме в кале обнаружи¬вают
кровь.
Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет не¬прочный и
непродолжительный.
Микробиологическая диагностика. Основной метод — бак¬териологический.
Определяют вид чистой культуры (грамотрицательные палочки,
оксидазоотрицательные, ферментирующие глю¬козу и лактозу до кислоты и газа,
образующие индол, не образую¬щие сероводород) и принадлежность к серогруппе,
что позволяет, отличить условно-патогенные кишечные палочки от диареегенных.
Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологичес¬кое значение,
заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных
иммунных сывороток.

Билет 5.
1. Рост и размножение микробов (время генерации, фазы размножения).
Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-
функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки, а
также размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества
бактериальных клеток в популяции.
Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования.
Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами. Актиномицеты, являясь
ветвящимися бактериями, размножаются путем фрагментации нитевидных клеток.
Грамположительные бактерии делятся путем врастания синтезирующихся перегородок
деления внутрь клетки, а грамотрицательные — путем перетяжки, в результате
образования гантелевид-ных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.
Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по
полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая нить
достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению молекул ДНК
бактериального ядра — нуклеоида.
Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост цепи, и
терминация.
Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в
определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют
питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и
прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют
периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия
культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной
среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование
называется непрерывным, а культура — непрерывной.
При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный,
диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры. Рост периодической
культуры бактерий, выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на
несколько фаз, или периодов:
1. лаг-фаза;
2. фаза логарифмического роста;
3. фаза стационарного роста, или максимальной концентрации
бактерий;
4. фаза гибели бактерий.
Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения бактерий,
отражающей зависимость логарифма числа живых клеток от времени их
культивирования.
Лаг-фаза — период между посевом бактерий и началом размножения.
Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в раз-
мерах и готовятся к делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других
компонентов.
Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом интенсивного
деления бактерий. Продолжительность ее около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста
бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее ра-
нимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов метаболизма
интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др.
Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жизнеспособных
клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень (М-концентрация). Ее
продолжительность выражается в часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их
особенностей и культивирования.
Завершает процесс роста бактерий фаза гибели, характеризующаяся отмиранием бак-
терий в условиях истощения источников питательной среды и накопления в ней
продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее колеблется от 10 ч до
нескольких недель. Интенсивность роста и размножения бактерий зависит от многих фак-
торов, в том числе оптимального состава питательной среды, окислительно-
восстановительного потенциала, рН, температуры и др.
Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие на плотных
питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или
неровными краями (S- и R-формы), различной консистенции и цвета, зависящего от
пигмента бактерий.
Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают её.
Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических
растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в
органических соединениях.
Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины,
ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного,
коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений.
Меланины наряду с каталазой, супероксидцисмутазой и пероксидазами защищают
микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие
пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием.
2. Неспецифический иммунитет. Факторы неспецифической резистентности
организма. Фагоцитарная теория иммунитета (И.И.Мечников)
Мечников внёс огромный вклад в развитие иммунологии. Он обосновал учение о
фагоцитозе и фагоцитах. Доказал, что фагоцитоз - явление универсальное, наблюдается у
всех живот¬ных, включая простейших, и проявляется по отно¬шению ко всем
чужеродным веществам (бактерии, органические частицы и т. д.). Теория фагоцитоза
заложила краеугольный камень клеточной теории иммунитета и процесса иммуногенеза
в целом с учетом клеточных и гуморальных факторов. За разработку теорий фагоцитоза И.
И. Мечникову в 1908 г присуждена Нобелевская премия. Л. Пастер на своем портрете,
подаренном И. И. Мечникову, написал: «На память знаменитому Мечникову — творцу
фагоцитарной теории».
Неспецифические факторы защиты организма
Механические факторы. Кожа и слизистые оболочки ме¬ханически препятствуют
проникновению микроорганизмов и других антигенов в организм. Последние все же
могут попадать в организм при заболеваниях и повреждениях кожи (травмы, ожоги,
воспалительные заболевания, укусы насекомых, живот¬ных и т. д.), а в некоторых случаях
и через нормальную кожу и слизистую оболочку, проникая между клетками или через
клет¬ки эпителия (например, вирусы). Механическую защиту осуще¬ствляет также
реснитчатый эпителий верхних дыхательных пу¬тей, так как движение ресничек
постоянно удаляет слизь вмес¬те с попавшими в дыхательные пути инородными
частицами и микроорганизмами.
Физико-химические факторы. Антимикробными свой¬ствами обладают уксусная,
молочная, муравьиная и другие кис¬лоты, выделяемые потовыми и сальными железами
кожи; соля¬ная кислота желудочного сока, а также протеолитические и другие ферменты,
имеющиеся в жидкостях и тканях организма. Особая роль в антимикробном действии
принадлежит ферменту лизоциму. Этот протеолитический фермент получил название
«мурамидаза», так как разрушает клеточную стенку бактерий и других клеток, вызывая их
гибель и способствуя фагоцитозу. Лизоцим вырабатывают макрофаги и нейтрофилы.
Содержится он в больших количествах во всех секретах, жидко¬стях и тканях организма
(кровь, слюна, слезы, молоко, кишеч¬ная слизь, мозг и т. д.). Снижение уровня фермента
приводит к возникновению инфекционных и других воспалительных заболе¬ваний. В
настоящее время осуществлен химический синтез лизоцима, и он используется как
медицинский препарат для лече¬ния воспалительных заболеваний.
Иммунобиологические факторы. В процессе эволюции сформировался комплекс
гуморальных и клеточных факторов не¬специфической резистентности, направленных на
устранение чу¬жеродных веществ и частиц, попавших в организм.
Гуморальные факторы неспецифической резистентности со¬стоят из разнообразных
белков, содержащихся в крови и жид¬костях организма. К ним относятся белки системы
комплемен¬та, интерферон, трансферрин, β-лизины, белок пропердин, фибронектин и
др.
Белки системы комплемента обычно неактивны, но приоб¬ретают активность в
результате последовательной активации и взаимодействия компонентов комплемента.
Интерферон оказы¬вает иммуномодулирующий, пролиферативный эффект и вызы¬вает в
клетке, инфицированной вирусом, состояние противови¬русной резистентности. β -
Лизины вырабатываются тромбоцита¬ми и обладают бактерицидным действием.
Трансферрин конку¬рирует с микроорганизмами за необходимые для них метаболи¬ты,
без которых возбудители не могут размножаться. Белок про-пердин участвует в
активации комплемента и других реакциях. Сывороточные ингибиторы крови, например
р-ингибиторы (р-липопротеины), инактивируют многие вирусы в результате не-
специфической блокады их поверхности.
Отдельные гуморальные факторы (некоторые компоненты ком¬племента, фибронектин и
др.) вместе с антителами взаимодей¬ствуют с поверхностью микроорганизмов,
способствуя их фаго-цитозу, играя роль опсонинов.
Большое значение в неспецифической резистентности имеют клетки, способные к
фагоцитозу, а также клетки с цитотоксической активностью, называемые естественными
киллерами, или NK-клетками. NK-клетки представляют собой особую популяцию
лимфоцитоподобных клеток (большие гранулосодержащие лим¬фоциты), обладающих
цитотоксическим действием против чуже-родных клеток (раковых, клеток простейших и
клеток, поражен¬ных вирусом). Видимо, NK-клетки осуществляют в организме
противоопухолевый надзор.
В поддержании резистентности организма имеет большое зна¬чение и нормальная
микрофлора организма.
3. Возбудитель туляремии. Таксономия. Характеристика возбудителя.
Микробиологическая диагностика. Специфические лечебно-
профилактические препараты.
Таксономия: отдел Gracilicutes, род Francisella. Возбудитель – Francisella tularensis.
Морфология: мелкие кокковидные полиморфные палочки, неподвижные,
грамотрицательные, не образующие спор, могут образовывать капсулу.
Культуральные свойства: Факультативный аэроб, оптим. температура+37С. На простых
питательных средах не растет. Культивируется на желточных средах, на средах с
добавлением крови и цистеина. Рост медленный. Образуют мелкие колонии, круглые с
ровным краем, выпуклые, блестящие.
Биохимические свойства: слабо ферментируют до кислоты без газа глюкозу, мальтозу,
левулезу, маннозу, образуют сероводород. Туляремийный микроб по вирулентности
разделен на подвиды: голарктическую (не ферментирует глицерин, цитруллин),
неарктическую (ферментирует глицерин, не ферментирует цитруллин; среднеазиатскую
(ферментирует глицерин и цитруллин, мало вирулентен).
Антигенные свойства: Содержит соматический О-и поверхностный Vi- антигены. Имеют
антигенную близость с бруцеллами. В R- форме теряют Vi- антиген, а вместе с ним
вирулентность и иммуногенность.
Факторы патогенности: неарктический подвид – высокая патогенность для человека при
кожном заражении, голарктический и среднеазиатский подвиды – умеренно патогенны.
Вирулентными являются S-формы колоний. Патогенные свойства связаны с оболоченным
антигенным комплексом и токсическими веществами типа эндотоксина. Вирулентность
обусловлена:капсулой, угнетающей фагоцитоз; нейраминидазой, способствующей
адгезии; эндотоксином (интоксикация); аллергенными свойствами клеточной стенки;
Эпидемиология: природно-очаговое заболевание. Источник инфекции – грызуны.
Множественность механизмов передачи. Передача возбудителя через клещей, комаров.
Человек заражается контактным, алиментарным, трансмиссивными путями.
Резистентность: в окружающей среде сохраняется долго, нестоек к высокой температуре,
чувствителен к антибиотикам (тетрациклин, левомицетин).
Патогенез: На месте внедрения возбудителя (кожа, слизистые оболочки глаз,
дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта) развивается первичный
воспалительный очаг, откуда возбудитель распространяется по лимфатическим сосудам и
узлам, поражая их с образованием первичных бубонов; в различных органах
формируются гранулемы. Микроб и его токсины проникают в кровь, что приводит к
бактериемии и генерализации процесса, метастазированию и развитию вторичных
туляремийных бубонов.
Клиника. Инкубационный период 3—7 дней. Болезнь начинается остро, внезапно с
повышения температуры тела. Различают бубонную, язвенно-бубонную, глазо-бубонную,
абдоминальную, легочную и генерализованную (септическую) клинические формы
туляремии.
Иммунитет. После перенесенной инфекции иммунитет сохраняется длительно, иногда
пожизненно; развивается аллергизация организма к антигенам возбудителя.
Микробиологическая диагностика:
Бактериоскопическое исследование: Из исследуемого материала готовят мазки,
окрашивают по Грамму. В чистой культуре - мелкие кокки. В мазках из органов
преобладают палочковидные формы. Спор не образуют, грамотрицательные, иногда
выражена биполярная окраска.
Бактериологическое исследование и биопроба. Применяются для выделения чистой
культуры бактерий туляремии. Наиболее чувствительными животными являются мыши и
морские свинки, которые погибают даже при подкожном введении единичных бактерий.
Выделение бактерий туляремии проводят на свернутой яично-желточной среде,
глюкозоцистиновом кровяном агаре. Вирулентные штаммы образуют S-формы колоний—
мелкие, гладкие, беловатого цвета с голубоватым оттенком.
Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток,
характеру роста, биохимическим и антигенным свойствам. Биохимические свойства этих
бактерий выявляются на специальной плотной среде с ограниченным содержанием
белка. Бактерии туляремии содержат оболочечный антиген, с которым связаны их
вирулентные и иммуногенные свойства, и О-соматический антиген. По антигенным
свойствам близки к бруцеллам.
Серодиагностика. Ставится реакция агглютинации с туляремийным диагностикумом.
Относительно позднее появление агглютининов в крови (на 2-й неделе болезни)
затрудняет применение этой реакции для ранней диагностики, однако их длительное
сохранение делает возможной ретроспективную диагностику. Обязательно прослежива-
ется нарастание титра агглютинации. Наиболее чувствительным методом
серодиагностики туляремии является РПГА.
Для экспресс-диагностики применяется кровяно-капельная реакция: кровь из пальца
наносят на стекло, добавляют каплю дистиллированной воды (для лизиса эритроцитов),
вносят каплю диагностикума и смешивают стеклянной палочкой. При наличии в крови
агглютининов в диагностическом титре (1:100 и выше) в капле немедленно наступает
агглютинация диагностикума; при титрах ниже диагностических агглютинация происходит
через 2—3 мин.
Кожно-аллергическая проба. Выпускаются два вида тулярина: для внутрикожной пробы и
для надкожной. Проба высокочувствительна и дает положительные результаты у
больных, начиная с 3—5-го дня болезни, но также и у переболевших и вакцинированных,
поэтому оценка реакции должна проводиться с осторожностью.
Лечение: антибиотики стрептомицинового и тетрациклинового ряда. В случае затяжного
течения – комбинированная антибиотикотерапия с использованием убитой лечебной
сыворотки.
Профилактика: специфическая профилактика - применяют живую туляремийную вакцину.
Иммунитет длительный, проверяется с помощью пробы с тулярином.
Туляремийный диагностикум – взвесь убитых бактерий туляремии, применяется в случае
постановки реакции агглютинации при серодиагностике.
Тулярин – взвесь туляремийных бактерий (вакцинного штамма), убитых нагреванием,
для постановки кожно-аллергической пробы.
Туляремийная живая сухая накожная вакцина – высушенная живая культура вакцинного
штамма, для профилактики.
Билет 6.
1. Типы и механизмы питания микробов.
Типы питания. Микроорганизмы нуждаются в углеводе, азоте, сере, фосфоре, калии и
других элементах. В зависимости от источников углерода для питания бактерии делятся
на аутотрофы, использующие для построения своих клеток диоксид углерода С02 и другие
неорганические соединения, и гетеротрофы, питающиеся за счет готовых органических
соединений. Аутотрофными бактериями являются нитрифицирующие бактерии,
находящиеся в почве; серобактерии, обитающие в воде с сероводородом; железобак-
терии, живущие в воде с закисным железом, и др.
Гетеротрофы, утилизирующие органические остатки отмерших организмов в
окружающей среде, называются сапрофитами. Гетеротрофы, вызывающие заболевания у
человека или животных, относят к патогенным и условно-патогенным. Среди патогенных
микроорганизмов встречаются облигатные и факультативные паразиты (от греч. parasitos
— нахлебник). Облигатные паразиты способны существовать только внутри клетки,
например риккетсии, вирусы и некоторые простейшие.
В зависимости от окисляемого субстрата, называемого донором электронов или
водорода, микроорганизмы делят на две группы. Микроорганизмы, использующие в
качестве доноров водорода неорганические соединения, называют литотрофными (от
греч. lithos — камень), а микроорганизмы, использующие в качестве доноров водорода
органические соединения, — органотрофами.
Учитывая источник энергии, среди бактерий различают фототрофы, т.е.
фотосинтезирующие (например, сине-зеленые водоросли, использующие энергию света),
и хемотрофы, нуждающиеся в химических источниках энергии.
Механизмы питания. Поступление различных веществ в бактериальную клетку зависит от
величины и растворимости их молекул в липидах или воде, рН среды, концентрации
веществ, различных факторов проницаемости мембран и др. Клеточная стенка пропускает
небольшие молекулы и ионы, задерживая макромолекулы массой более 600 Д.
Основным регулятором поступления веществ в клетку является цитоплазматическая
мембрана. Условно можно выделить четыре механизма проникновения питательных
веществ в бактериальную клетку: это простая диффузия, облегченная диффузия,
активный транспорт, транслокация групп.
Наиболее простой механизм поступления веществ в клетку — простая диффузия, при
которой перемещение веществ происходит вследствие разницы их концентрации по обе
стороны цитоплазматической мембраны. Вещества проходят через липидную часть
цитоплазматической мембраны (органические молекулы, лекарственные препараты) и
реже по заполненным водой каналам в цитоплазматической мембране. Пассивная
диффузия осуществляется без затраты энергии.
Облегченная диффузия происходит также в результате разницы концентрации веществ
по обе стороны цитоплазматической мембраны. Однако этот процесс осуществляется с
помощью молекул-переносчиков, локализующихся в цитоплазматической мембране и
обладающих специфичностью. Каждый переносчик транспортирует через мембрану
соответствующее вещество или передает другому компоненту цитоплазматической
мембраны — собственно переносчику. Белками-переносчиками могут быть пермеазы,
место синтеза которых — цитоплазматическая мембрана. Облегченная диффузия
протекает без затраты энергии, вещества перемещаются от более высокой концентрации
к более низкой.
Активный транспорт происходит с помощью пермеаз и направлен на перенос веществ от
меньшей концентрации в сторону большей, т.е. как бы против течения, поэтому данный
процесс сопровождается затратой метаболической энергии (АТФ), образующейся в
результате окислительно-восстановительных реакций в клетке.
Перенос (транслокация) групп сходен с активным транспортом, отличаясь тем, что
переносимая молекула видоизменяется в процессе переноса, например,
фосфорилируется.
Выход веществ из клетки осуществляется за счет диффузии и при участии транспортных
систем.
2. Микробные токсины (экзо- и эндотоксины). Свойства и химический состав.
Токсические вещества, синтезируемые бактериями, по химической природе относятся к
белкам (экзотоксины) и ЛПС (эндотоксины) – локализуются в стенке Б!! и освобождаются
только после их разрушения.
Белковые токсины. В настоящее время известно >80, отличаются друг от друга по Мг, хим
структуре, «мишеням» и биологической активности. В зависимости от связи с Б!#,
подразделяются на полностью секретируемые (экзотоксины), частично секретируемые и
несекретируемые (освобождаются при разрушении Б!). Но белковые токсины
предназначены не только для поражения ## чка, они могут также участвовать и в
метаболических реакциях самих бактерий. Делятся на: термолабильные и
термостабильные.
Имеют 2 центра: 1 – фиксирует молекулу токсина на соответствующем клеточном
рецепторе, 2 – токсический фрагмент – проникает внутрь # и блокирует жизненно важные
метаболические реакции.
Клеточные рецепторы для разных токсинов неодинаковы:
на холинсодержащих рецепторах фиксируются тетанолизин, О-стрептолизин,
пневмолизин и др.,
на ганглиозидах определенного типа - тетаноспазмин, холероген, энтеротоксины
кишечных бактерий и др.
СПЕЦИФИЧНОСТЬ действия белковых токсинов, определяется избирательной фиксацией
токсина на рецепторах #-«мишеней» определенных тканей (эпителиальной, нервной и
др). По механизмам действия токсинов выделяют:
 «цитотоксины» – блокируют синтез белка.
 группа антиэлонгаторов (дифтерийный гистотоксин, токсин синегнойной палочки и
др), выводят из строя фермент трансферазу II, ответственную за элонгацию
(наращивание) полипептидной цепи на рибосоме.
 токсины с энтеропатогенной активностью (Staph. aureus, Cl. perfringens)
 дермонекротоксины (Pseudomonas aeruginosa, B. Pertussis).
 «мембранотоксины»
 ^ проницаемость мембраны эритроцитов (гемолизины) (Pseudomonas aeruginosa,
Staph. aureus, стрептококки, клостридии)
 ^ проницаемость мембраны лейкоцитов (лейкоцидины) (Staph.
aureus, стрептококки (pyogenes), клостридии (perfringens et botulini)).
 «функциональные блокаторы»
 Термолабильные (ТЛ) и термостабильные (ТС) энтеротоксины (холероген,
термолабильные энтеротоксины Е. coli и др энтеробактерий) – активизируют
аденилатциклазу > ^ проницаемости стенки тонкой кишки и выход жидкости в ее
просвет (диарея).
 Токсикоблокаторы (сибиреязвенный и чумной токсины – инактивируют
аденилатциклазу)
 Нейротоксины (тетаноспазмин, ботулинический токсин) блокируют передачу
нервных импульсов в клетках спинного и головного мозга.
 эксфолиатины и эритрогенины (образуются некоторыми штаммами золотистого
стафилококка и скарлатинозным стрептококком) – влияют на взаимодействие
клеток между собой и с межклеточными веществами.
Высокую ТОКСИЧНОСТЬ белковых токсинов объясняется особенностью строения участков
их молекул, имитирующих структуру субъединиц гормонов, ферментов и
нейромедиаторов МКO ? антиметаболиты.
Токсичность измеряется в тех же единицах, в которых оценивается вирулентность, - DLM и
LD50.
ИММУНОГЕННЫЕ свойства проявляются в способности вызывать иммунный ответ со
стороны МКO (индуцировать синтез специфических Ат–антитоксинов).
АНАТОКСИНЫ. Ряд белковых токсинов под действием формалина утрачивает свою
ядовитость, сохраняя при этом иммуногенные свойства (столбнячный, дифтерийный и нек
др), применяются в качестве вакцин для профилактики.
Многие бактерии образуют не один, а несколько белковых токсинов, которые обладают
разным действие
Токсические вещества, синтезируемые бактериями, по химической природе относятся к
белкам (экзотоксины) и ЛПС (эндотоксины) – локализуются в стенке Б!! и освобождаются
только после их разрушения.
Эндотоксины. К ним относятся липополисахариды (ЛПС), которые содержатся в
клеточной стенке грамотрицательных бактерий. Токсические свойства определяются всей
молекулой ЛПС, а не отдельными ее частями: ПС или липидом А. Хорошо изучены
эндотоксины энтеробактерий (эшерихии, шигеллы и сальмонеллы, бруцеллы,
туляремийные бактерии).
ЛПС (эндотоксины) в отличие от экзотоксинов более устойчивы к повышенной t°С, менее
ядовиты и малоспецифичны. При введении в O подопытных Ж!! вызывают примерно
одинаковую реакцию, независимую от того, из каких гр– Б!! они выделены. При
ВВЕДЕНИИ БОЛЬШИХ ДОЗ наблюдается угнетение фагоцитоза, явления токсикоза,
слабость, одышка, расстройством кишечника (диарея), падением ¦ деятельности и v t°С
тела. При введении НЕБОЛЬШИХ ДОЗ – обратный эффект: стимуляция фагоцитоза, ^ t°С
тела.
У ЛЮДЕЙ поступление эндотоксинов в кровяное русло приводит к лихорадке в результате
их действия на клетки крови (гранулоциты, моноциты), из которых выделяются
эндогенные пирогены. Возникает ранняя лейкопения, которая сменяется
вторичным лейкоцитозом. Усиливается гликолиз ? может возникнуть гипогликемия.
Также развивается гипотония (поступление в кровь ^ количества серотонина и кининов),
нарушается кровоснабжение органов и ацидоз.
ЛПС активирует фракцию С3 комплемента по АЛЬТЕРНАТИВНОМУ ПУТИ ? v его
содержания в сыворотке и накопление биологически активных фракций (С3а, С3b, С5а и
др.). Большие количества поступившего в кровь эндотоксина приводят к ТОКСИКО-
СЕПТИЧЕСКОМУ ШОКУ.
ЛПС – сравнительно слабый иммуноген. Сыворотка крови животных, иммунизированных
чистым эндотоксином, не обладает высокой антитоксической активностью ? не способна
полностью нейтрализовать его ядовитые свойства.
Некоторые бактерии одновременно образуют как белковые токсины, так и эндотоксины,
например кишечная палочка и др.
3. Кампилобактерии и хеликобактерии. Общая характеристика. Факторы
патогенности. Роль в патогенезе желудочно-кишечных заболеваний.
Методы диагностики. Профилактика.
Род Campylobacter (изогнутая бактерия) включает 5 видов, из которых патогенными
для человека являются С.jejuni, С.fetus и С.coli.
Морфология, физиология. Гр– тонкие спиралевидные (1-2 завитка) палочки. Имеют
единичные жгутики, расположенные на одном или обоих концах клетки, с помощью
которых совершают винтообразные движения. Спор, капсул не образуют.
Кампилобактеры – микроаэрофилы (содержание кислорода 3–6%), обладают
окислительным типом метаболизма. Углеводы не ферментируют. Энергию получают при
расщеплении аминокислот. Желатину и мочевину не гидролизуют, обладают оксидазной
и каталазной активностью.
Для выделения этих микроорганизмов из фекалий используют плотные питательные
среды, к которым добавляют антибиотики для подавления сопутствующей микрофлоры.
Патогенез. Обладают адгезивной способностью - прикрепляются к эпителиоцитам
кишечника, а С.pylori – к клеткам желудка (их выделяют при язвенной болезни желудка и
двенадцатиперстной кишки, считая причастными к развитию этого заболевания).
С. jejuni после адгезии колонизируют слизистую оболочку тонкой кишки, размножаются и
образуют энтеротоксины – термостабильный и термолабильный (сходен с
энтеротоксинами холерного вибриона и кишечной палочки, обусловливает диарею). При
разрушении кампилобактеров высвобождается эндотоксин.
В патогенезе энтеритов, вызванных кампилобактерами, могут преобладать диарея
или дизентериеподобные состояния, связанные с продукцией цитотоксина и, возможно, с
инвазией возбудителя в эпителиальные клетки кишечника.
С.fetus у людей пожилого возраста с иммунодефицитными состояниями вызывает
некишечные формы кампилобактериоза: сепсис, менингит, поражения печени, легких,
мочевыводящих путей, суставов.
Экология и распространение. Обнаруживаются в репродуктивных органах, ЖКТ, в
ротовой полости человека и ряда животных.
Энтериты, вызываемые кампилобактериями, возникают у людей всех возрастов, но
чаще – у детей. Заболеваемость характеризуется сезонностью (наиболее высокая летом).
Источник заражения - больные животные и люди, откуда бактерии попадают в пищевые
продукты (чаще накапливаются в мясе, молоке) и воду. К человеку возбудитель попадает
через рот, основной путь передачи – алиментарный, возможен и контактно-бытовой, от
больных и носителей.
В окружающей среде сохраняются не долго. Устойчивы к действию кислоты
желудочного сока и желчи, что обеспечивает кампилобактерам преодоление
желудочного барьера и сохранение в желчном пузыре. Чувствительны к обычным
концентрациям дезинфектантов.
Патогенные и условно-патогенные кампилобактеры различаются по способности
вызывать различные заболевания у людей и животных. Так, С.fetus выделяют из крови
людей с лихорадкой, С.jejuni и С. coli вызывают энтериты.
Лабораторная диагностика основана на выделении возбудителя в испражнениях;
следует помнить, что на характер колоний возбудителя влияет качество среды - на
“свежих” средах колонии более склонны “расползаться”; при посеве фекалий от больных
на селективные среды рост возбудителя отмечают на 3 и 4 квадрантах, но следует
тщательно осматривать всю чашку, т.к. они могут вырасти на 1 квадранте в окружении
колоний контаминирующей микрофлоры.
Для быстрой идентификации можно провести микроскопическое исследование
фекалий - кампилобактеры видны как нежные грамотрицательные спиралевидные или S-
образные бактерии (особенно часто типичные формы наблюдают при окраске
кристаллическим фиолетовым). Также можно применять фазово-контрастную
микроскопию суспензии испражнений в жидкой среде (например, в среде для
культивирования бруцелл или Мюллера-Хинтона).
Для идентификации кампилобактериозов также могут быть
использованы серологические методы, например РА (на 2 недели титр AT составляет 1:8-
1:32) или РСК (видоспецифическая реакция, требующая
соответствующего АГ). Разработаны экспериментальные партии диагностикумов для
выявления AT в реакции РНГА,пригодные для диагностики кампилобактериозов животных
и человека.
Лечение. В большинстве случаев заболевание самоограничивается и проводить
химиотерапию нет необходимости. К моменту установления диагноза большинство
больных находится в стадии выздоровления. Применять антибиотики следует лишь в
тяжёлых случаях и при угрозе развития серьёзных осложнений. Бактерии
группыCampylobacterjejuni чувствительны к аминогликозидам, эритромицину, тетрацикли
нам, левомицетину и фуразолидону; резистентны - к
пенициллину, цефалотину, бисептолу.
 Род Helicobacter
Первые сообщения о находках спиралевидных бактерий на слизистой оболочки
желудка появились в начале XX в., но лишь появление большого цикла работ в 1983-1984,
посвященных многочисленным фактам выявления микроорганизмов на слизистой
оболочке желудка больных острыми гастродуоденитами, доказало их существенное
значение в этиологии заболеваний. Первые штаммы так называемых
“желудочных” кампилобактерий были выделены в Австралии (1982); при этом было
установлено наличие микроорганизмов на слизистой оболочке желудка и у здоровых
лиц, но их процент был незначителен. Дальнейшие исследования, проведённые во
многих странах, подтвердили роль этих бактерий в патогенезе поражений желудка и
двенадцатиперстной кишки, а сам возбудитель был идентифицирован как Campylobacter
pylori Позднее, в исследованиях на добровольцах Маршалл (1986) воспроизвёл гастрит
экспериментальным введением микроорганизмов и получилретрокультуры, идентичные
исходным штаммам. Совершенствование методов культивирования и
идентификации кампилобактерий показало необоснованность предложенного
систематического положения бактерий, и они были выделены в отдельный род
- Helicobacter, включающий Н. pylori (типовой вид) и Н. muslelae. Патогенный для человека
вид - Н. pylori.
Морфология. Представлены короткими, изогнутыми или извитыми (чаще S-
образными) бактериями грамотрицательные; средние размеры - 2,5-
4х0,5 мкм; подвижны (лофотрихи); жгутиков обычно 4-5 (может быть до 7), они часто
покрыты чехликами и имеют колбовидные утолщения на концах.
Содержание Г+Ц составляет 35-37%, среди жирных кислот в клеточной стенке
преобладают гексадекановая, октадеценовая и гексадеценовая.
Культуральные свойства. Лучше всего растут в микроаэрофильных условиях;
оптимальный состав газовой смеси: N2 85-87%, О2 5%, СО2 8-10%; в аэробных и анаэробных
условиях не растут. Температурный оптимум 37°С, но многие штаммы растут в диапазоне
33-41°С. Наиболее оптимальные среды - КА и ША, но Н. pylori может также расти
(несколько медленнее) и на средах без гемина, например содержащих 10% сыворотки.
Некоторые штаммы проявляют гемолитическую активность (а-гемолиз), не
способны гидролизовать гиппурат.
Через 48-72 ч на твёрдых средах образуют мелкие (около 1 мм) прозрачные
блестящие колонии, содержащие характерные бактерии; по мере старения в колониях
начинают преобладать кокковидные формы.
На жидких средах образуют поверхностную голубовато-серую пленку и
незначительное (часто незаметное) помутнение среды.
Биохимические свойства. Оксидаза и каталаза-положительны; проявляют уреазную, 
трансферазную и фосфатазную активности; образуют H2S; не редуцируют нитраты; не
свёртывают молоко; инертны к глюкозе.
АГ. Антигенный состав изучен не полностью, но показано наличие
нескольких сероваров; агглютинируются неадсорбированными сыворотками к
Campylobacter coli. Показано наличие 0-Н-аг а также поверхностных
белковых Аг (определяют типоспецифичность), выявляемых моноклональными АТ.
Патогенез. При исследованиях, проведённых у пациентов с острыми
гастритами и обострениями хронической патологии, выявлено большое число бактерий,
локализующихся в участках воспаления, обычно в антральной части. Проникая через слой
слизи, хеликобактеры прикрепляются к эпителиальным клеткам (чаще в области
межклеточных ходов), проникают в крипты и железы слизистой оболочки. Активность
бактерий приводит к разрушению слизистого слоя и обусловливает контакт желудочного
сока со стенкой органа. АГ микроорганизмов стимулируют миграцию нейтрофилов и
способствуют развитию острого воспаления-. Локализация Н. pylori в области
межклеточных ходов обусловлена хемотаксисом к местам выхода мочевины и гемина,
образующихся из разрушающегося гемоглобина эритроцитов
в микроциркуляторном русле. Под действием бактериальной уреазы мочевина
превращается в аммиак, повреждающий слизистую оболочку желудка и
двенадцатиперстнойкишки.
Клинические проявления не отличаются от обычных симптомов гастродуоденитов и
ни один из симптомов не патогномоничен для хеликобактериоза. Обычно пациенты
обращаются к врачу по поводу упорных болей в
области эпигастрия. Последние купируются при назначении антибактериальных
препаратов, напримерметронидазола и фуразолидона. Приём традиционных препаратов
обычно не оказывает выраженного эффекта, а после их отмены развиваются
рецидивы заболевания.
Инкубационный период - 7 сут. Предположительно, заболевание может
передаваться при контактах с больным (обычно у детей и подростков, ранее не
контактировавших с возбудителем)- На последнее указывают многочисленные факты
находок хеликобактеров у детей и подростков, страдающих гастритами; однако, они не
имели существенного значения при так называемых “рефлюксных” гастритах при
недостаточности привратника. В острой фазе нередко отмечают изменение
значения рН желудочного сока, у 40-50% пациентов - тошноту и/или рвоту; через
несколько месяцев развиваются признаки хронического гастрита, а в дальнейшем могут
появиться симптомы язвенного гастродуоденита.
Лабораторная диагностика основана на выявлении Н. pylori
в биоптатах слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки по типичным
морфологическим особенностям. Небольшие размеры бактерий требуют тщательного
просмотра нескольких полей зрения).
Бактерии хорошо видны в гистологических препаратах, окрашенных гематоксилин-
эозином или импрегнированных серебром. Хорошие результаты даёт окраска препаратов
акридиновым оранжевым.
Для выявления возбудителя можно с успехом применять фазово-контрастную
микроскопию, выявляющую характерную подвижность.
В последние годы широко распространены методы косвенного обнаружения Н.
pylori в биоптатах, чаще всего используют определение уреазной активности.
Для получения чистых культур используют кровяные среды (5-17%
эритроцитов), дополненные антибиотиками, подавляющими
рост контаминирующей микрофлоры (наиболее пригоден цефсулодин).
В настоящее время разработаны тест-системы для иммуноферментного
определения Аг хеликобактеров в биоптатах, а также в сыворотке в РСК.
Разработан метод выявления хеликобактеров при язвенном гастрите и дуодените.
Комплекс включает бактериоскопию биоптатов в мазках, окрашенных по Граму и
фуксином Пфайффера, пробу с мочевиной, пробу на аммиак с реактивом Круппа и посев
биоптатов на питательные среды КА, КА с амфотерицином, эритрит-
КА самфотерицином. Посевы культивируют 5-7 сут. при температуре 37°С
в микроаэрофильных, аэробных и анаэробных условиях. Принадлежность выделенных
культур определяли: по характерной морфологии микроорганизмов и колоний
“винтообразной” подвижности: способности к росту в микроаэрофильных условиях и
отсутствию роста в аэробных и анаэробных условиях и при температуре 25°С и 42°С; по
наличию оксидазной, каталазной и уреазной активности.
Лечение. Хорошие результаты даёт
назначение метронидазола и фуразолидона. Возможно
назначение амоксиклава, цефокситина и эритромицина; в ряде случаев последний можно
заменять тетрациклином.
Билет 7.
1. Структура бактериальной клетки: оболочка, ядерная субстанция,
цитоплазма, капсулы, споры, включения, жгутики. Химический состав
бактерий. Группы бактерий.
По морфологическим признакам выделяют 3 основных группы:
1. Кокковидные:
микрококки, диплококки, тетракокки, стрептококки, стафилококки, сарцины
2. Палочковидные:
короткие, длинные, толстые, тонкие, могут выстраиваться друг за другом, в виде
частокола, под углом (в виде V ), с закругленными концами, с заостренными концами,
коккобациллы (оч. мелкие палочки, их можно спутуть с кокками)
3. Извитые формы:
- в виде запятой (напр., вибрион холеры)
- в виде латинской S (напр., Campillobacter, Helicobacter
Форма тех или иных микроорганизмов может изменяться в зависимости от способа
культивирования, внутри макроорганизма, поэтому часто отмечается полиморфизм.
По размеру различают морги:
а) мелкие мк® - Д < 2 мкм
б) средние – 2 < Д < 4 мкм
в) крупные – Д > 4
Микроорганизмы относятся к царству прокариот: отсутствие ядерной мембраны, слабо
развитая ЭПС, нет митохондрий, хлоропластов, нет КГ, не обладают эндоцитозом.
Ядерное вещество представлено 1 хромосомой. Она двухнитчатая, кольцевидной формы
молекулы ДНК. Ядерный материал сосредоточен в центральной части и имеет
видфиломентозных образований. Цитоплазма имеет вид зернистого образования, куда
входят различные вакуоли, рибосомы, гликоген, крахмал, зерна волютина (питательный
запас).
ЦПМ состоит из 3 слоев, выполняет барьерную функцию, поддерживает осмотическое
давление в клетке, способствует переходу питательных веществ внутрь клетки и выходу
продуктов обмена веществ во внешнюю среду. Клеточная стенка у разных видов
микроорганизмов различна по строению. В состав ее входит редкий гетерополимер-
пептидогликан- у разных микроорганизмов он имеет различную толщину, на чем основан
один из основных методов окраски- по Граму. В соответствии с окрашиванием
микроорганизмы делятся на 2 группы: грам положительные и грам отрицательные. У Гр+
микроорганизмов в составе клеточной стенки- большое количество пептидогликана, он
многослойный, на его долю приходится 80% от химического состава клеточной стенки. У
Гр- пептидогликана всего 10% и он однослойный. Тейхоевые кислоты в стенке Гр+
имеются, у Гр- их нет. За счет этих 2 компонентов микроорганизмы окрашиваытся разно:
Гр+- в синий цвет(удерживают генциан виолет). Гр- окрашиваются фуксином в красный
цвет. Отношение к окраске - это тинкториальные свойства.
Клеточная стенка - это необязательный структурный элемент. Ее не имеют
микоплазмы, L-формы микроорганизмов. L-формы образуются из обычных
микроорганизмов, которые по ряду причин теряют клеточную стенку. Без клеточной
стенки микроб более уязвим к факторам окружающей среды.
ЦПМ имеет специфические выпячивания внутрь цитоплазмы – мезосомы. Они делятся на
центральные и латеральные. Мезосомы способны соединяться с ДНК и участвовать в
делении бактериальной клетки- растаскивают нити ДНК по полюсам.
Многие микроорганизмы имеют капсулу, она состоит из скопления слизистого материала
и выполняет защитную функцию. У патогенных микроорганизмов капсула образуется
только внутри макроорганизма, она является фактором патогенности, препятствует
фагоцитозу, доступу к микробу антител, бактериофагов. Капсула не окрашивается
обычными красителями, только по Гимсу- Бурри. Препарат смешивают с черной тушью,
которая образует темный фон, затем окрашивают фуксином.
Жгутики являются органами передвижения. Они крепятся к внутренней поверхности
ЦПМ, имеют нитевидную форму. 1 жгутик- это монотрихий, жгутики по периметру -
перетрих. Жгутики очень тонки, окрашиваются по Морозову - искусственно
увеличиваются размеры жгутиков. Так же этот метод окраски используется для окраски
особо крупных микроорганизмов - обработка кислотой, жгутики разрыхляются,
увеличиваются в размерах, обрабатывают танином (закрепляют), красят азото- кислым
серебром.
Пили - очень тонкие образования. Пили- адгезии- это рецепторный аппарат, с их
помощью клетка крепится к поверхности клеток макроорганизма. Секс-пили участвуют в
конъюгации. Пили- адгезии выявляют с помощью специфических реакций- реакции
бактериальной гемагглютинации.
Спорообразование наблюдается в условиях, неблагоприятных для вегетативных форм. У
бактерий выделяют 3 вида спор:
1) ЭНДОСПОРЫ (истинные споры) – располагаются внутри#, имеют высокий коэффициент
светопреломления.
2) АРТОСПОРЫ – обр-ся в рез фрагментации вегетирующих Б!!
3) ХЛАМИДИОСПОРЫ (микроцисты) – формируются в рез утолщения стенок
вегетирующей # и накопления запасных пит в-в.
К спорообразованию способна лишь небольшая группа эубактерий, а из патогенных для
чка только – Clostridium и Bacillus. Каждая вегетативная # образует 1 эндоспору. Споры
УСТОЙЧИВЫ к температуре, высыханию, радиации и химическим в-вам (включая 70°
этанол). Могут сохраняться оч длительное время. Предположительно споры могут
храниться в сухой почве до 1000 лет, но фактически уже за 50 лет 90% спор теряют
жизнеспособность.
Морфологически споры м.б. круглыми, овальными, эллиптическими, некоторые
снабжены «рёбрами жесткости».
ПРОЦЕСС СПОРУЛЯЦИИ начинается сразу при возникновении дефицита питательных в-в и
длится около 8ч, при этом никаких внешних источников питания или энергии не
требуется. Стимулируют – глюкоза, Р и NH4, угнетают –пептон, лактоза, NaCl, CaCl2.
Выделяют след ЭТАПЫ:
1) Подготовительная стадия – прекращается деление, начинается накопление липидных
включений.
2) Стадия предспоры – появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок
цитоплазмы  с изменённой плотностью и тинкториальными свойствами.
3) Формирование оболочки
4) Стадия созревания споры – происходит её уплотнение и прекращение любых
перемещений в #–спорангии.
5) Разрушение родительской #.
В оптимальных условиях происходит прорастание споры. Сначала она активно поглощает
воду и набухает, усиливается дыхание, возрастает активность ферментов, происходит
выделение АК – активация метаболизма (в этот период спора УТРАЧИВАЕТ
ТЕРМОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ). Затем спора лопается и из неё выходит вегетативная форма.
   Спорообразующие микроорганизмы - это бациллы и клостридии. Отличия бацилл от
клостридий: споры бацилл не превышают диаметр бактериальной клетки, у клостридий -
превышает, бациллы по типу дыхания- аэробы, а клостридии- строгие(облигатные)
анаэробы. Известны и спорообразующие кокки.
Микроорганизмы по своему химическому составу похожи на другие живые формы. 75-
80% содержания воды. Белки, жиры, углеводы, нуклеиновые кислоты.
Белки входят в состав бактерий в виде простых, сложных, комплексных соединений, в
состав липопротеидов. Белки выполняют роль ферментов. Различают структурные белки
и ферменты.
Жгутики. В их состав входят белки- флаггелин- полимерное белковое соединение. Он
состоит из отдельных компонентов линейной молекулярной формы, скрученных в виде
канатов. Белок, входящий в состав жгутиков, обладает выраженными антигенными
свойствами. На этот антиген жгутиков в макроорганизме вырабатывабтся антитела и
сенсибилизированные лимфоциты.
Пили состоят из белка пилина. Этот белок обладает антигенными свойствами, но у многих
микроорганизмов он гомологичен по аминокислотному составу.
Наружная мембрана Гр+ и Гр- бактерий содержит чистые белки или их комплексные
соединения. Например, золотистый стафилококк имеет чистый белок- белок А. Этот белок
располагается на наружной мембране и может связываться с молекулой IgG. У
стрептококков имеется белок М. Этот белок может связываться с молекулой
иммуноглобулина G, у стрептококков выполняет функцию адгезина с помощью которого
стрептококки связываются с мембраной клеток. Чистый белок входит в состав капсулы
некоторых микроорганизмов.
Полипептидная капсула имеется у возбудителя сибирской язвы.
Клеточная стенка – у Гр+ и Гр- микробов. Белок входит в состав пептидогликана. У Гр+
бактерий пептидогликан расположен в несколько слоев. Пептидогликан в природе
имеется только в составе бактерий и является самым мощным раздражителем иммунной
системы макроорганизма. Для бактерий он обеспечивает механическую устойчивость,
выполняет роль каркаса. Пептидогликан обладает рядом биологических активностей:
- Является довольно сильным антигеном.
- Обладает пирогенными свойствами, т.е. вызывает лихорадочное состояние.
- Вызывает воспалительные реакции в сосудах кишечника.
- Адъювантные свойства - усиление иммунного ответа.
Белки встречаются также в составе ЦПМ. Она имеет 2 белковых слоя- наружный и
внутренний, между которыми- слой липидов. Цитоплазма, рибосомальные белки
отличаются от белков эукариотических клеток константой седиментации- скоростью
осаждения в ультра- центрифуге. У бактерий она составляет 70S и 80S у эукариот.
Действие ряда антибиотиков блокируют синтез белка рибосомами бактерий.
Ядерный материал белка не имеет. У микроорганизмов имеются особые белки, которые
способны связывать атомы железа. Эти белки- сидерофоры или аэробактин. Эти белки
усиливают патогенные свойства микроорганизмов. Вдоль каналов бактериальных клеток,
по которым проходят питательные вещества, содержатся белок, имеющий большое
значение в обмене веществ- порин.
Липиды микроорганизмов.
- Способны к ориентации
- Способны к агрегации
- Играют большую роль в обменных процессах.
- Состоят из жирных кислот, в основном насыщенных- С15-С18. У Гр- микробов- С16- С18.
Часть жирных кислот обладает выраженными патогенными свойствами- миколовая,
фтионовая. По спектру летучих жирных кислот часто проводят идентификацию
микроорганизмов.
Углеводы. У микроорганизмов встречаются редкие углеводы, характерные только для
них- маннитол, эритритол. Углеводы имеются в составе капсулы. Особенно много
полисахаридов в клеточной стенке у Гр+.
Углеводы и липиды у Гр- бактерий образуют сложный комплекс - ЛПС-липополисахарид.
Он состоит из 3 структурных компонентов:
1- Липид А.
2- Сердцевинный полисахарид.
3- О-боковая цепь.
ЛПС обладает свойствами эндотоксина, выраженными антигенными свойствами(О-
антиген). Липид А обеспечивает токсические свойства полисахарида, и если из состава
ЛПС удалить липид А его токсические свойства теряются. Сердцевинный полисахарид
обладает антигенными и иммунномоделирующими свойствами. О- боковая цепь является
специфическим свойством. В зависимости от ее строения проводится серологическое
типирование бактерий. Она состоит из различных углеводов, сахаров(галактоза, глюкоза,
манноза), специфичных только для бактерий сахаров: абеквоза, паратоза, политоза.
ЛПС оказывает следующие воздействия на организм:
1) обладает пирогенным действием ? вызывает лихорадку
2) вызывает гемодинамические расстройства и нарушения ССС, резко уменьшает АД
3) вызывает агглютинацию ФЭ крови ? тромбоз
4) вызывает диарейные состояния
5) является митогеном и стимулирует В-лимфоциты
6) обладает АГ свойствами
7) стимулирует образование цитокинов, а они в свою очередь действуют на др системы
МКO, может даже вызвать шоковое состояние
вызывает ЭНДОТОКСИНОВЫЙ ШОК
ЛПС может вызывать лейкоцитоз, обладает протекторными свойствами – сдерживает
рост и размножение раковых ##, v чувствительность ## МКO к ИО.
Бактерии, имеющие полный состав ЛПС, образуют S-колонии. Эти колонии имеют ровные
края, гладкую поверхность, более выраженные патогенные свойства. Бактерии с
нарушенным синтезом ЛПС (отсутствует О-боковая цепь и часть сердцевинного
полисахарида) образуют R-колонии: неровный край, шероховатая поверхность,
сниженные патогенные свойства. Для выделения ЛПС из микробной клетки используется:
- Трихлоруксусная кислота.
- Водно-фенольная экстракция.
В чистом виде ЛПС выпускается промышленностью, используется как
иммунностимулятор, в основном используется его полисахаридная часть без липида А. В
зависимости от концентрации липополисахарида он вызывает в организме:
- Пирогенные эффекты.
- Гемодинамические расстройства со стороны ССС.
- Коагуляцию клеточных элементов крови, плазмы, в результате чего образубтся тромбы.
- Диарею.
- Митогенные свойства, стимулирует образование В- лимфоцитов.
- Антигенные свойства.
- Адъювантные свойства.
- Соногенные свойства.
Очень большое значение имеет эндотоксиновый шок. ЛПС может задерживать рост
раковых клеток. Способствует снижению чувствительности макрооранизма к
радиоактивному излучению.
2. Серотерапия инфекционных болезней. Антитоксические сыворотки.
Препараты иммуноглобулинов.
Иммунные сыворотки: иммунологические препараты на основе антител.
1.Антитоксические - сыворотки против дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой
гангрены, т.е. сыворотки, содержащие в качестве антител антитоксины, которые
нейтрализуют специфические токсины.
2.Антибактериальные - сыворотки, содержащие агглютинины, преципитины,
комплементсвязывающие антитела к возбудителям брюшного тифа, дизентерии, чумы,
коклюша.
3.Противовирусные сыворотки (коревая, гриппозная, антирабическая) содержат
вируснейтрализующие, комплементсвязывающие противовирусные антитела.
Иммунные сыворотки получают путем гипериммунизации животных (лошади)
специфическим антигеном (анатоксином, бактериальными или вирусными культурами и
их антигенами) с последующим, в период максимального антителообразования,
выделением из крови иммунной сыворотки. Иммунные сыворотки, полученные от
животных, называют гетерогенными, так как они содержат чужеродные для человека
сывороточные белки.
Для получения гомологичных нечужеродных иммунных сывороток используют сыворотки
переболевших людей (коревая, оспенная сыворотки) или специально иммунизированных
людей-доноров (противостолбнячная, противоботулиническая), содержащие антитела к
ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного
заболевания.
Нативные иммунные сыворотки содержат ненужные белки (альбумин), из этих сывороток
выделяют и подвергают очистке специфические белки- иммуноглобулины. Методы
очистки: осаждение спиртом, ацетоном на холоде, обработка ферментами.
Иммунные сыворотки создают пассивный специфический иммунитет сразу после
введения. Применяют с лечебной и профилактической целью. Для лечения
токсинемических инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена), а также для
лечения бактериальных и вирусных инфекций (корь, краснуха, чума, сибирская язва). С
лечебной целью сывороточные препараты в/м. Профилактически: в/м лицам, имевшим
контакт с больным, для создания пассивного иммунитета.

Антитоксические гетерогенные сыворотки получаются путем гипериммунизации


различных животных. Они называются гетерогенными т.к. содержат чужеродные для
человека сывороточные белки. Более предпочтительным является применение
гомологичных антитоксических сывороток, для получения которых используется
сыворотка переболевших людей (коревая, паротидная), или специально
иммунизированных доноров(противостолбнячная, противоботулинистическая),
сыворотка из плацентарной а так же абортивной крови, содержащие антитела к ряду
возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного
заболевания.
Для очистки и концентрирования антитоксических сывороток используют методы:
осаждение спиртом или ацетоном на холоде, обработка ферментами, аффинная
хроматография, ультрафильтрация.
Активность иммунных антитоксических сывороток выражают в антитоксических единицах,
т.е. тем наименьшим кол-вом антител, которое вызывает видимую или регистрируемую
соответствующим способом реакцию с определённым кол-вом специфического антигена.
активность антитоксической противостолбнячной сыворотки и соответствующего Ig
выражается в антитоксических единицах.
Антитоксические сыворотки применяются для лечения токсинемических инфекций
(столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена).
После введения антитоксических сывороток возможны осложнения в виде
анафилактического шока и сывороточной болезни, поэтому пред введением препаратов
ставят аллергическую пробу на чувствительность к ним пациента, а вводят их дробно, по
Безредке.
Нативные иммунные сыворотки содержат ненужные белки (альбумин), из этих сывороток
выделяют и подвергают очистке специфические белки- иммуноглобулины.
Иммуноглобулины, иммунные сыворотки подразделяют на:
1.Антитоксические - сыворотки против дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой
гангрены, т.е. сыворотки, содержащие в качестве антител антитоксины, которые
нейтрализуют специфические токсины.
2.Антибактериальные - сыворотки, содержащие агглютинины, преципитины,
комплементсвязывающие антитела к возбудителям брюшного тифа, дизентерии, чумы,
коклюша.
3.Противовирусные сыворотки (коревая, гриппозная, антирабическая) содержат
вируснейтрализующие, комплементсвязывающие противовирусные антитела.
Методы очистки: осаждение спиртом, ацетоном на холоде, обработка ферментами,
аффинная хроматография, ультрафильтрация.
Активность иммуноглобулинов выражают в антитоксических единицах, в титрах
вируснейтрализующей, гемагглютинирующей, агглютинирующей активности, т.е. тем
наименьшим количеством антител, которое вызывает видимую реакцию с определенным
количеством специфического антигена.
Иммуноглобулины создают пассивный специфический иммунитет сразу после введения.
Применяют с лечебной и профилактической целью. Для лечения токсинемических
инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена), а также для лечения
бактериальных и вирусных инфекций (корь, краснуха, чума, сибирская язва). С лечебной
целью сывороточные препараты в/м. Профилактически: в/м лицам, имевшим контакт с
больным, для создания пассивного иммунитета.
При необходимости экстренного создания иммунитета, для лечения развивающейся
инфекции применяют иммуноглобулины, содержащие готовые антитела.
3. Возбудители гепатитов (энтеральных и парентеральных). Таксономия.
Характеристика возбудителей. Лабораторная диагностика. Профилактика.
Возбудители гепатитов А и Е
Острая инфекционная болезнь, с лихорадкой, поражением печени. Антропоноз.
Таксономия, морфология, антигенная структура: Семейство Picornaviridae род
Hepatovirus. Типовой вид —имеет один серотип. Это РНК-содержащий вирус, просто
организованный, имеет один вирусоспецифический антиген.
Культивирование: Вирус выращивают в культурах клеток. Цикл репродукции более
длительный, чем у энтеровирусов, цитопатический эффект не выражен.
Резистентность: Устойчивостью к нагреванию; инактивируется при кипячении в течение 5
мин. Относительно устойчив во внешней среде (воде).
Эпидемиология. Источник-больные. Механизм заражения — фекально-оральный. Вирусы
выделяются с фекалиями в начале клинических проявлений. С появлением желтухи
интенсивность выделения вирусов снижается. Вирусы передаются через воду, пищевые
продукты, руки.
Болеют преимущественно дети в возрасте от 4 до 15 лет.
Патогенез: Обладает гепатотропизмом. После заражения репликация вирусов происходит
в кишечнике, а оттуда через портальную вену они проникают в печень и реплицируются в
цитоплазме гепатоцитов. Повреждение гепатоцитов возникает в результате
иммунопатологических механизмов.
Клиника. Инкубационный период - от 15 до 50 дней. Начало острое, с повышением т-ры и
тошнотой, рвотой). Возможно появление желтухи на 5-й день. Клиническое течение
заболевания легкое, без особых осложнений. Продолжительность заболевания 2 нед.
Хронические формы не развиваются.
Иммунитет. После инфекции - стойкий пожизненный иммунитет, связанный с IgG. В
начале заболевания в крови IgM, которые сохраняются в организме в течение 4 месяцев и
имеют диагностическое значение. Помимо гуморального, развивается и местный
иммунитет в кишечнике.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - сыворотка и
испражнения. Диагностика основана главным образом на определении в крови IgM с
помощью ИФА, РИА и иммунной электронной микроскопии. Этими же методами можно
обнаружить вирусный антиген в фекалиях. Вирусологическое исследование не проводят.
Лечение. Симптоматическое.
Профилактика. Неспецифическая профилактика. Для специфической пассивной
профилактики используют иммуноглобулин. Иммунитет сохраняется около 3 мес. Для
специфической активной профилактики – инактивированная культуральная
концентрированная вакцина. Рекомбинантная генно – инженерная вакцина.
Гепатит Е
Антропоноз, фекально – оральным механизмом передачи.
Таксономия: семейство Caliciviridae. Недавно переведен из семейства в группу гепатит Е-
подобных вирусов.
Структура. Вирион безоболочечный, сферический.. Геном — однонитевая плюс-РНК,
которая кодирует РНК-зависимую РНК-полимеразу, папаинподобную протеазу и
трансмембранный белок, обеспечивающий внедрение вируса в клетку.
Эпидемиология, клиника. Основной путь передачи — водный. Инкубационный период 2
—6 недели. Поражение печени, интоксикацией, желтухой.
Иммунитет. После перенесенного заболевания стойкий.
Микробиологическая диагностика: 1) серологический метод — в сыворотке, плазме кро-
ви с помощью ИФА определяют: антитела к вирусу (анти-HEV IgM, анти-HEV IgG); 2)
молекулярно-генетический метод — применяют ПЦР для определения РНК вируса (HEV
RNA) в кале и в сыворотке крови больных в острой фазе инфекции.
Лечение. Симптоматическое. Беременным рекомендуется введение специфического им-
муноглобулина.
Профилактика. Неспецифическая профилактика - улучшение санитарно-гигиенических
условий и снабжение качественной питьевой водой. Созданы неживые цельновирионные
вакцины, разрабатываются рекомбинантные и живые вакцины.
Возбудители гепатитов В, С, D.
Вирус гепатита В - семейство Hepadnaviridae род Orthohepadnavirus.
Морфология: ДНК-содержаший вирус сферической формы. Состоит из сердцевины,
состоящей из 180 белковых частиц, составляющих сердцевинный НВс-антиген и
липидсодержащей оболочки, содержащей поверхностный HBs-антиген. Внутри
сердцевины находятся ДНК, фермент ДНК-полимераза, обладающая ревертазной ак-
тивностью, и концевой белок НВе-антиген.
Геном представлен двунитевой ДНК кольцевой формы.
Культуральные свойства. Не культивируется на куриных эмбрионах, не обладает
гемолитической и гемагглютинирующей активностью. ВГВ культивируется только в
культуре клеток.
Резистентность. Высокая к факторам окружающей среды и дезинфицирующим
веществам. Вирус устойчив к длительному воздействию кислой среды, УФ-излучению,
действию спирта, фенола.
Антигенная структура. Сложная. В суперкапсиде вируса находится HBs-антиген, который
локализован в гидрофильном слое на поверхности вириона. В формировании HBs-
антигена участвуют 3 полипептида в гликозилированной форме:preSl — большой
полипептид; preS2 — средний полипептид; S — малый полипептид.
Эпидемиология: Развитие инфекционного процесса при попадании в кровь. Заражение
происходит при парентеральных манипуляциях (инъекциях, хирургических
вмешательствах), переливании крови.
Патогенез и клиника заболевания. Инкубационный период 3—6 месяцев. Инфекционный
процесс наступает после проникновения вируса в кровь. ВГВ из крови эндоцитозом
проникает в гепатоцит. После проникновения вируса происходит достраивание плюс-нити
ДНК ДНК-полимеразой до полноценной структуры. Клиническая картина характеризуется
симптомами поражения печени, в большинстве случаев сопровождается развитием
желтухи.
Иммунитет. Гуморальный иммунитет, представленный антителами к HBs-антигену,
защищает гепатоциты от вируса, элиминируя его из крови.
Клеточный иммунитет освобождает организм от инфицированных гепатоцитов благодаря
цитолитической функции Т-киллеров. Переход острой формы в хроническую
обеспечивается нарушением Т-клеточного иммунитета.
Микробиологическая диагностика. Используют серологический метод и ПЦР. Методами
ИФА и РНГА в крови определяют маркеры гепатита В: антигены и антитела. ПЦР
определяют наличие вирусной ДНК в крови и биоптатах печени. Для острого гепатита ха-
рактерно обнаружение HBs антигена, НВе антигена и анти-HBc-IgM антитела.
Лечение. Использование интерферона, интерфероногенов: виферона, амиксина, инги-
битора ДНК-полимеразы, препарата аденинрибонозида.
Профилактика. Исключение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и
переливаниях крови (применением одноразовых шприцев, проверкой на гепатит В по
наличию HBs-антигена в крови доноров крови).
Специфическая профилактика осуществляется вакцинацией рекомбинантной генно-
инженерной вакциной, содержащей HBs-антиген. Вакцинации подлежат все новорож-
денные в первые 24 часа жизни. Длительность поствакцинального иммунитета — не
менее 7 лет.
Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae роду Hepacivirus.
Морфология. Сложноорганизованный РНК-содержащим вирус сферической формы.
Геном представлен одной линейной «+» цепью РНК, обладает большой вариабельностью.
Антигенная структура. Вирус обладает сложной антигенной структурой. Антигенами яв-
ляются:
1. Гликопротеины оболочки
2. Сердцевинный антиген НСс-антиген
3. Неструктурные белки.
Культуральные свойства. ВГС не культивируется на куриных эмбрионах, не обладает
гемолитической и гемагглютинирующей активностью. Резистентность. чувствителен к
эфиру, УФ-лучам, нагреванию до 50С.
Эпидемиология. Заражение ВГС аналогично заражению ВГВ. Наиболее часто ВГС
передается при переливаниях крови, трансплацентарно, половым путем.
Клиника: Часто встречаются безжелтушные формы, течение инфекции в острой форме, в
50 % случаев процесс переходит в хроническое течение с развитием цирроза и
первичного рака печени.
Микробиологическая диагностика: Используются ПЦР и серологическое исследование.
Подтверждением активного инфекционного процесса является обнаружение в крои
вирусной РНК ПЦР. Серологическое исследование направлено на определение антител к
NS3 методом ИФА.
Профилактика и лечение. Для профилактики – тоже, что и при гепатите В. Для лечения
применяют интерферон и рибовирин. Специфическая профилактика – нет.
Вирус гепатита D - дефектный вирус, не имеющий собственной оболочки. Вирион
имеет сферическую форму, который состоит из однонитчатой РНК и сердцевинного HDc-
антигена. Эти белки регулируют синтез генома вируса: один белок стимулирует синтез
генома, другой — тормозит. Различают три генотипа вируса. Все генотипы относятся к
одному серотипу.
Резервуаром BFD в природе являются носители ВГВ. Заражение BFD аналогично ин-
фицированию ВГВ.
Микробиологическая диагностика осуществляется серологическим методом путем
определения антител к BFD методом ИФА.
Профилактика: все те мероприятия, которые используют для профилактики гепатита В.
Для лечения используют препараты интерферона. Вакцина против гепатита В защищает и
от гепатита D.
Билет 8.
1. Структура и химический состав вирусов.
В основу классификации вирусов положены следующие категории:
• тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структура, количество нитей (одна или две),
особенности воспроизводства вирусного генома;
• размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;
• наличие суперкапсида;
• чувствительность к эфиру и дезоксихолату;
• место размножения в клетке;
• антигенные свойства и пр.
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому
различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име-
ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых
кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными.
Среди РНК- содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК)
геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию
информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицательным
(минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов выполняет только
наследственную функцию.
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения,
белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству
Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци-
топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются
особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в
клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем
происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется
вирионом.
Морфологию вирусов изучают с помощью электронной микроскопии, так как их размеры
малы (18-400 нм) и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной мозаики),
пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), нитевидной
(филовирусы), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто
устроенные и сложно устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой
оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических
субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с
другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой
оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка является производной
структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены
гликопротеиновые шипы, или шипики (пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов
находится матриксный М-белок.
Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спиральный, икосаэдрический
(кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрический тип симметрии обусловлен
образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную
нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль-
ный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у
вируса гриппа).
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения,
белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству
Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци-
топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются
особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в
клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем
происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется
вирионом.
Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью электронного микроскопа, так как
их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной мозаики),
пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), в виде
сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно
устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой
оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических
субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с
другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой
оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка является производной
структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены
гликопротеиновые шипы, или шипики (пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов
находится матриксный М-белок.
Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спиральный, икосаэдрический
(кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрический тип симметрии обусловлен
образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную
нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль-
ный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у
вируса гриппа).
Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или
ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус
натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие включения — тельца Гварниери; вирусы
герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.
Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом
ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом
ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус
полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому
различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име-
ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых
кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными.
Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК)
геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию
информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицательным
(минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов выполняет только
наследственную функцию.
Вирусы поражают позвоночных и беспозвоночных животных, а также растения и
бактерии. Являясь основными возбудителями инфекционных заболеваний человека,
вирусы также участвуют в процессах канцерогенеза, могут передаваться различными пу-
тями, в том числе через плаценту (вирус краснухи, цитомега ловирус и др.), поражая плод
человека. Они могут приводить к постинфекционным осложнениям — развитию
миокардитов, панкреатитов, иммунодефицитов и др.
Кроме обычных вирусов, известны и так называемые неканонические вирусы — прионы
— белковые инфекционные частицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие
вид фибрилл размером 10—20x100—200 нм. Прионы, по-видимому, являются
одновременно индукторами и продуктами автономного гена человека или животного и
вызывают у них энцефалопатии в условиях медленной вирусной инфекции (болезни
Крейтц-фельдта—Якоба, куру и др.).
Другими необычными агентами, близкими к вирусам, являются вироиды — небольшие
молекулы кольцевой, суперспи-рализованной РНК, не содержащие белка, вызывающие
заболевания у растений.
2. Реакция преципитации и ее варианты.
Реакция преципитации (РП) - это формирование и осаждение комплекса растворимого
молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом.
Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах;
избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
РП ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др.
Широкое распространение получили разновидности РП в полужидком геле агара или
агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия,
иммуноэлектрофорез и др.
Механизм. Проводится с прозрачными коллоидными растворимыми антигенами,
экстрагированными из патологического материала, объектов внешней среды или чистых
культур бактерий. В реакции используют прозрачные диагностические преципитирующие
сыворотки с высокими титрами антител. За титр преципитирующей сыворотки принимают
то наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммунной
сывороткой вызывает образование видимого преципитата — помутнение.
Реакция кольцепреципитации ставится в узких пробирках (диаметр 0,5 см), в которые
вносят по 0,2—0,3 мл преципити-рующей сыворотки. Затем пастеровской пипеткой
медленно наслаивают 0,1—0,2 мл раствора антигена. Пробирки осторожно переводят
в'вертикальное положение. Учет реакции производят через 1—2 мин. В случае
положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым антигеном
появляется преципитат в виде белого кольца. В контрольных пробирках преципитат не
образуется.

3. Возбудители коклюша и паракоклюша. Таксономия. Характеристика


возбудителей. Патогенез инфекции, микробиологическая диагностика,
диагностические и специфические лечебно-профилактические препараты.
Коклюш — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением верхних
дыхательных путей, приступами спазматического кашля; наблюдается преимущественно у
детей. Возбудитель коклюша Bordetella pertussis
Таксономия. B.pertussis относится к отделу Gracilicutes, роду Bordetella.
Морфологические и тинкториальные свойства. В.pertussis — мелкая овоидная
грамотрицательная палочка с закругленными концами. Спор и жгутиков не имеет,
образует микрокапсулу, пили.
Культуральные и биохимические свойства. Строгий аэроб. Оптимальная температура
культивирования 37С. B.pertussis очень медленно растет только на специальных
питательных средах, например на среде Борде — Жангу (картофельно-глицериновый агар
с добавлением крови), образуя колонии, похожие на капельки ртути. Характерна R-S-
трансформация. Расщепляют глк. и лактозу до кислоты без газа.
Антигенная структура. О-антиген термостабильный продоспецифический. 14
поверхностных термолабильных капсульных К-антигенов. В.pertussis имеет 6 сероваров.
Фактор 7 является общим для всех бордетелл. Для В.parapertussis специфический фактор
14. К – антигены выявляют в реакции агглютинации.
Факторы патогенности. Термостабильный эндотоксин, вызывающий лихорадку; белковый
токсин, обладающий антифагоцитарной активностью и стимулирующий лимфоцитоз;
ферменты агрессии, повышающие сосудистую проницаемость, обладающие
гистаминсенсибилизирующим действием, адгезивными свойствами и вызывающие
гибель эпителиальных клеток. В адгезии бактерий также участвуют гемагглютинин, пили и
белки наружной мембраны.
Резистентность. Очень неустойчив во внешней среде, быстро разрушается под действием
дезинфектантов и других факторов.
Эпидемиология. Коклюш — антропонозная инфекция: источником заболевания являются
больные люди и в очень незначительной степени бактерионосители. Заражение
происходит через дыхательный тракт, путь передачи воздушно-капельный. Коклюш
встречается повсеместно, очень контагиозен. Паракоклюш реже, эпиходический характер.
Протекает легче.
Патогенез. Неинвазивные микробы (не проникают внутрь клетки-мишени). Входными
воротами инфекции являются верхние дыхательные пути. Здесь благодаря адгезивным
факторам бордетеллы адсорбируются на ресничках эпителия, размножаются, выделяют
токсины и ферменты агрессии. Развиваются воспаление, отек слизистой оболочки, при
этом часть эпителиальных клеток погибает. В результате постоянного раздражения ток-
синами рецепторов дыхательных путей появляется кашель. В возникновении приступов
кашля имеет значение и сенсибилизация организма к токсинам B.pertussis.
Клиника. Инкубационный период составляет 2—14 дней. В начале болезни появляются
недомогание, невысокая температура тела, небольшой кашель, насморк. Позже
начинаются приступы спазматического кашля, заканчивающиеся выделением мокроты.
Таких приступов может быть 5—50 в сутки. Болезнь продолжается до 2 мес.
Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет стойкий, сохраняется на протяжении
всей жизни. Видоспецифический (антитела против В.pertussis не защищают от
заболеваний, вызванных В.parapertussis.
Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служит слизь из
верхних дыхательных путей, используют метод «кашлевых пластинок» (во время приступа
кашля ко рту ребенка подставляют чашку Петри с питательной средой). Основной метод
диагностики — бактериологический. Позволяет отдифференцировать возбудителя
коклюша от паракоклюша. Посев на плотные питательные среды с антибиотиками. Для
идентификации возбудителя – реакция агглютинации на стекле с К-сыворотками. Для
ускоренной диагностики применяют прямую РИФ со специфической флуоресцентной
сывороткой и материалом из зева. Серологический метод – обнаружение IgG и IgA против
феламентозного гемаггютинина и против токсина В.pertussis.
Лечение. Антимикробные препараты – эритромицин, ампициллин (кроме пенициллина).
При тяжелых формах коклюша применяют нормальный человеческий иммуноглобулин.
Рекомендуются антигистаминные препараты, холодный свежий воздух. При легких
формах заболевания достаточно пребывания на воздухе.
Профилактика. Адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС). В
ее состав входит убитая культура В. pertussis I фазы, коклюшный токсин, агглютиногены,
капсульный антиген. Нормальный человеческий иммуноглобулин вводят
неиммунизированным детям при контакте с больными для экстренной профилактики.
Разрабатывается неклеточная вакцина с меньшими побочными эффектами, содержащая
анатоксин, гемагглютинин, пертактин и антиген микроворсинок.
Паракоклюш вызывает Bordetella parapertussis. Паракоклюш сходен с коклюшем, но
протекает легче. Паракоклюш распространен повсеместно и составляет примерно 15 % от
числа заболеваний с диагнозом коклюш. Перекрестный иммунитет при этих болезнях не
возникает. Возбудитель паракоклюша можно отличить от B.pertussis по культуральным,
биохимическим и антигенным свойствам. Иммунопрофилактика паракоклюша не
разработана.
Билет 9.
1. Распространение и роль микробов в природе.
Микроорганизмы широко распространены в природе: обитают в воздухе, в воде и в
почве. 
В зависимости от среды обитания все микроорганизмы можно разделить на три группы: 
сапрофита (находятся в основном в почве), 
эпифиты (находятся на поверхности живых растений), 
паразиты (живут в клетках хозяина).
Микрофлора почвы.
Почва является главным источником распространения микроорганизмов, т. к в почве: 
• много питательных веществ (органические, минеральные), 
• достаточное количество влаги, которое защищает от воздействия прямых солнечных
лучей и от резких перепадов температуры. 
Больше всего микробов содержится на глубине от 1 до 30 см. В песчаной почве их
меньше, чем в черноземной.
Микроорганизмы почвы представлены бактериями, микроскопическими грибами и
дрожжами.
Микроорганизмы играют большую роль в процессах образования и обогащения почв,
влияют на их плодородие. Наибольшее количество микробов встречается в почвах, где
содержится много органических остатков (в пахотных, удобряемых перегноем и влажных
почвах).
В почве встречаются и болезнетворные микроорганизмы, которые попадают с трупами
животных, отбросами. Они являются возбудителями ботулизма, столбняка, газовой
гангрены и других заболеваний. С целью предотвращения тяжелых заболеваний,
работники пищевой промышленности не должны допускать загрязнения почвой сырья,
полуфабрикатов и готовой продукции.
Почва является основным резервуаром, из которого микробы попадают в воду и воздух.
Микрофлора воды.
Вода является благоприятной средой для жизнедеятельности микроорганизмов. 
Загрязнённость воды может составлять до миллиона микробов в 1 мл.
Микроорганизмы попадают в водоемы с различными стоками с поверхности почвы, из
воздуха и т. д. Количество микроорганизмов в воде зависит от ее происхождения. В
открытых водоёмах (реках, озёрах, прудах) больше всего микроорганизмов; в
артезианской воде – меньше, т.к. проходя через слои почвы она задерживается.
Вода является очень опасным источником распространения патогенных
микроорганизмов, особенно во время эпидемий холеры, брюшного тифа, дизентерии и
других кишечных инфекций. Они способны сохраняться в воде до нескольких месяцев.
Главным источником бактериального загрязнения водоемов являются сточные воды
населенных пунктов и промышленных предприятий, (стоки содержат химические
вещества – аммиак, сероводород, соли азотной кислоты, хлориды, соли фосфорной
кислоты) загрязненные бытовыми и производственными отходами, а также дождевые
воды, уносящие из воздуха и с поверхности почвы большое количество
микроорганизмов. 
Питьевую воду и очищенные сточные воды можно обеззараживать путем хлорирования
газообразным хлором, хлорной известью или другими хлорсодержащими соединениями,
озонирования, облучения ультрафиолетовыми лучами. Воду отстаивают, фильтруют.
Вода, используемая для технологических целей в хлебопечении и производстве мучных
кондитерских изделий, должна отвечать требованиям ГОСТ 2874—82. Общее количество
клеток бактерий — не более 100 в 1 мл, бактерий группы кишечной палочки — не более 3
в 1 л.
Микрофлора воздуха.
Воздух является неблагоприятной средой для микроорганизмов, так как в нем нет
питательных веществ и влажность его ниже необходимой для их развития.
Микроорганизмы попадают в воздух с пылью. В воздухе они или погибают, или вновь
оседают в виде спор на поверхности земли и различных предметов. 
Содержание микроорганизмов в воздухе зависит от различных факторов:
o чем выше от поверхности земли, тем меньше в воздухе микроорганизмов. Почти нет
микроорганизмов в воздухе над поверхностью океанов, морей, над снежными
равнинами, лесами и горными вершинами. Но больше над сушей.
o количество микроорганизмов в воздухе зависит от близости к населенному пункту. В
воздухе крупных городов микробов больше, чем в небольших населенных пунктах. 
o в теплое время года микроорганизмов в воздухе больше, чем в холодное.
o больше обсеменены микробами нижние слои воздуха (1 м3 воздуха содержит десятки
тысяч микроорганизмов).
Состав микрофлоры воздуха различен. Наиболее распространены в нем споры бактерий и
грибов, а также патогенные микроорганизмы и вирусы. Через воздух передаются
возбудители различных заболеваний — инфекции дыхательных путей, гриппа,
туберкулеза, менингита и др., а также микробы, вызывающие заражение
технологического сырья и готовой продукции (плесневение муки и хлеба).
Чистота воздуха в производственных помещениях достигается с помощью
микробиологических анализов проб воздуха. Очищают вентиляцией, влажной уборкой,
бактерицидными лампами, дезинфицирующими средствами.
2. Клеточный иммунный ответ. Кластеры дифференциации (CD). Цитокины.
Клеточный иммунитет (англ. Cell-mediated immunity) — это такой тип иммунного
ответа, в котором не участвуют ни антитела, ни система комплемента. В процессе
клеточного иммунитета активируются макрофаги, натуральные киллеры,антиген-
специфичные цитотоксические Т-лимфоциты, и в ответ на антиген выделяются
цитокины.[1]
Иммунная система исторически разделена на две части — систему гуморального
иммунитета и систему клеточного иммунитета. В случае гуморального иммунитета,
защитные функции выполняют молекулы, находящиеся в плазме крови, но не
клеточные элементы. В то время как в случае клеточного иммунитета защитная
функция связана именно с клетками иммунной системы. Лимфоциты кластера
дифференцировки CD4 или Т-хелперы осуществляют защиту против различных
патогенов.
Система клеточного иммунитета выполняет защитные функции следующими
способами:
• путем активации антиген-специфических цитотоксичных Т-лимфоцитов, которые
могут вызывать апоптоз соматических клеток, демонстрируя на поверхности эпитопы
чужеродных антигенов, например, клеток, зараженных вирусами, содержащими
бактерии и клеток опухолей, демонстрирующих опухолевые антигены;
• путем активации макрофагов и натуральных киллеров, которые разрушают
внутриклеточные патогены;
• путем стимулирования секреции цитокинов, которые оказывают влияние на другие
клетки иммунной системы, принимающие участие в адаптивном иммунном ответе и
врожденном иммунном ответе.[2]
Клеточный иммунитет направлен преимущественно против микроорганизмов,
которые выживают в фагоцитах и против микроорганизмов, поражающие другие
клетки. Система клеточного иммунитета особенно эффективна против клеток,
инфицированных вирусами, и принимает участие в защите от грибов, простейших,
внутриклеточных бактерий и против клеток опухолей. Также система клеточного
иммунитета играет важную роль в отторжении тканей.
Цитокины — небольшие пептидные информационные молекулы. Цитокины имеют
молекулярную массу, не превышающую 30 кD.
Цитокин выделяется на поверхность клетки А и взаимодействуют с рецептором
находящейся рядом клетки В. Таким образом, от клетки А к клетке В передается
сигнал, который запускает в клетке В дальнейшие реакции.
Их основными продуцентами являются лимфоциты.
Кроме лимфоцитов их секретируют макрофаги, гранулоциты, ретикулярные
фибробласты, эндотелиальные клетки и другие типы клеток.
Они регулируют межклеточные и межсистемные взаимодействия, определяют
выживаемость клеток, стимуляцию или подавление их роста, дифференциацию,
функциональную активность и апоптоз, а также обеспечивают согласованность
действия иммунной, эндокринной и нервной систем в нормальных условиях и в ответ
на патологические воздействия.
Термин предложен англ. S. Cohen в 1974 г.
Цитокины активны в очень малых концентрациях. Их биологический эффект на клетки
реализуется через взаимодействие со специфическим рецептором, локализованным
на клеточной цитоплазматической мембране. Образование и секреция цитокинов
происходит кратковременно и строго регулируется.
Все цитокины, а их в настоящее время известно более 30, по структурным
особенностям и биологическому действию делятся на несколько самостоятельных
групп. Группировка цитокинов по механизму действия позволяет разделить цитокины
на следующие группы:
• провоспалительные, обеспечивающие мобилизацию воспалительного ответа
(интерлейкины 1,2,6,8, ФНОα, интерферон γ);
• противовоспалительные, ограничивающие развитие воспаления (интерлейкины
4,10, TGFβ);
• регуляторы клеточного и гуморального иммунитета — (естественного или
специфического), обладающие собственными эффекторными функциями
(противовирусными, цитотоксическими).
Спектры биологических активностей цитокинов в значительной степени
перекрываются: один и тот же процесс может стимулироваться в клетке более чем
одним цитокином. Во многих случаях в действиях цитокинов наблюдаетсясинергизм.
Цитокины — антигенноспецифические факторы. Поэтому специфическая диагностика
инфекционных, аутоиммунных и аллергических заболеваний с помощью определения
уровня цитокинов невозможна. Но определение их концентрации в крови даёт
информацию о функциональной активности различных типов иммунокомпетентных
клеток; о тяжести воспалительного процесса, его переходе на системный уровень и о
прогнозе заболевания.
Цитокины регулируют активность гормональной оси гипоталамус-гипофиз-
надпочечники: например, интерлейкин-1, воздействуя на гипоталамус, усиливает
синтез кортиколиберина, что, в свою очередь, повышает выработку АКТГ.
3. Герпес-инфекция. Таксономия и характеристика возбудителей.
Лабораторная диагностика. Методы профилактики.
ВПГ вызывает герпетическую инфекцию, или простой герпес, характеризующийся
везикулезными высыпаниями на коже, слизистых оболочках, поражением ЦНС и
внутренних органов, а также пожизненным носительством (персистенцией) и
рецидивами болезни.
Таксономия. Семейство Herpesviridae. Род Simplexvirus.
Структура. Геном ВПГ кодирует около 80 белков, необходимых для репродукции вируса и
взаимодействия последнего с клетками организма и иммунным ответом. ВПГ кодирует 11
гликопротеинов, являющихся прикрепительными белками (gB, gC, gD, gH), белками
слияния (gB), структурными белками, иммунными белками «уклонения» (gC, gE, gl).
Вирус вызывает литические инфекции фибробластов, эпителиальных клеток и латентные
инфекции нейронов.
Культивирование. Для культивирования вируса применяют куриный эмбрион (на
оболочке образуются мелкие плотные бляшки) и культуру клеток, на которой он вызывает
цитопатический эффект в виде появления гигантских многоядерных клеток с
внутриядерными включениями.
Антигенная структура. Вирус содержит ряд антигенов, связанных как с внутренними
белками, так и с гликопротеидами наружной оболочки. Последние являются основными
иммуногенами, индуцирущими выработку антител и клеточный иммунитет. Существует
два серотипа: ВПГ 1 типа и ВПГ 2 типа.
Резистентность. Вирус нестоек, чувствителен к солнечным и УФ-лучам.
Эпидемиология. Источник инфекции — больной.
ВПГ-1 и ВПГ-2 передаются преимущественно контактным путем (с везикулярной
жидкостью, со слюной, половых контактах), через предметы обихода, реже — воздушно-
капельным путем, через плаценту, при рождении ребенка.
Оба типа вирусов могут вызывать оральный и генитальный герпес. ВПГ-1 чаще поражает
слизистые оболочки ротовой полости и глотки, вызывает энцефалиты, а ВПГ-2 — генита-
лии (генитальный герпес).
Патогенез. Различают первичный и рецидивирующий простой герпес. Чаще вирус вы-
зывает бессимптомную или латентную инфекцию.
Первичная инфекция. Везикула —проявление простого герпеса с дегенерацией
эпителиальных клеток. Основу везикулы составляют многоядерные клетки. Пораженные
ядра клеток содержат эозинофильные включения. Верхушка везикулы через некоторое
время вскрывается, и формируется язвочка, которая вскоре покрывается струпом с
образованием корочки с последующим заживлением.
Минуя входные ворота эпителия, вирусы проходят через чувствительные нервные
окончания с дальнейшим передвижением нуклеокапсидов вдоль аксона к телу нейрона в
чувствительных ганглиях. Репродукция вируса в нейроне заканчивается его гибелью.
Некоторые вирусы герпеса, достигая ганглионарных клеток, способны приводить к
развитию латентной инфекции, при которой нейроны не гибнут, но содержат в себе
вирусный геном. Большинство людей (70-90 %) являются пожизненными носителями
вируса, который сохраняется в ганглиях, вызывая в нейронах латентную персистирующую
инфекцию.
Латентная инфекция чувствительных нейронов является характерной особенностью
нейротропных герпесвирусов ВПГ. В латентно инфицированных нейронах около 1 %
клеток в пораженном ганглии несет вирусный геном.
Клиника. Инкубационный период 2—12 дней. Болезнь начинается с возникновения на
пораженных участках зуда, появления отека и пузырьков, заполненных жидкостью. ВПГ
поражает кожу (везикулы, экзема), слизистые оболочки рта, глотки (стоматит) и кишеч-
ника, печень (гепатиты), глаза (кератит) и ЦНС (энцефалит). Рецидивирующий герпес
обусловлен реактивацией вируса, сохранившегося в ганглиях. Он характеризуется
повторными высыпаниями и поражением органов и тканей.
Генитальная инфекция является результатом аутоинокуляции из других пораженных
участков тела; но наиболее часто встречающийся путь заражения — половой. Поражение
проявляется в образовании везикулы, которая довольно быстро изъязвляется.
Вирус простого герпеса проникает во время прохождения новорожденного через
родовые пути матери, вызывая неонаталъный герпес. Неонатальный герпес обнару-
живается на 6-й день после родов. Вирус диссеминирует во внутренние органы с
развитием генерализованного сепсиса.
Иммунитет. Основной иммунитет— клеточный. Развивается ГЗТ. NK-клетки играют
важную роль в ранней противомикробной защите. Организм пораженного реагирует на
гликопротеины вируса, продуцируя цитотоксические Т-лимфоциты, а также Т-хелперы,
активирующие В-лимфоциты с последующей продукцией специфических антител.
Гликопротеины вызывают образование вируснейтрализующих антител. Вирус -
нейтрализующие антитела подавляют межклеточное распространение вирусов.
Микробиологическая диагностика. Используют содержимое герпетических везикул,
слюну, соскобы с роговой оболочки глаз, кровь, спинномозговую жидкость. В окрашенных
мазках наблюдают гигантские многоядерные клетки, клетки с увеличенной цитоплазмой
и внутриядерными включениями .
Для выделения вируса исследуемым материалом заражают клетки HeLa, Нер-2,
человеческие эмбриональные фибробласты.
Рост в культуре клеток проявляется округлением клеток с последующим про-
грессирующим поражением всей культуры клеток. Заражают также куриные эмбрионы, у
которых после внутримозгового заражения развивается энцефалит. Выделенный вирус
идентифицируют в РИФ и ИФА с использованием моноклональных антител.
Серодиагностику проводят с помощью РСК, РИФ, ИФА и реакции нейтрализации по
нарастанию титра антител больного. ИБ также способен выявлять типоспецифические
антитела.
При экспресс-диагностике в мазках-отпечатках из высыпаний, окрашенных по
Романовскому-Гимзе, выявляются гигантские многоядерные клетки с внутриядерными
включениями. Для идентификации вируса используют также амплификацию генов
вирусной ДНК в реакции ПЦР.
Лечение. Для лечения применяют препараты интерферона, индукторы интерферона и
противовирусные химиотерапевтические препараты (ацикловир, видарабин).
Профилактика. Специфическая профилактика рецидивирующего герпеса осуществляется
в период ремиссии многократным введением инактивированной культуральной
герпетической вакцины.
Билет 10.
1. Типы и механизмы питания микробов. Условия для культивирования.
Типы питания. Микроорганизмы нуждаются в углеводе, азоте, сере, фосфоре, калии и
других элементах. В зависимости от источников углерода для питания бактерии делятся
на аутотрофы, использующие для построения своих клеток диоксид углерода С02 и другие
неорганические соединения, и гетеротрофы, питающиеся за счет готовых органических
соединений. Аутотрофными бактериями являются нитрифицирующие бактерии,
находящиеся в почве; серобактерии, обитающие в воде с сероводородом; железобак-
терии, живущие в воде с закисным железом, и др.
Гетеротрофы, утилизирующие органические остатки отмерших организмов в
окружающей среде, называются сапрофитами. Гетеротрофы, вызывающие заболевания у
человека или животных, относят к патогенным и условно-патогенным. Среди патогенных
микроорганизмов встречаются облигатные и факультативные паразиты (от греч. parasitos
— нахлебник). Облигатные паразиты способны существовать только внутри клетки,
например риккетсии, вирусы и некоторые простейшие.
В зависимости от окисляемого субстрата, называемого донором электронов или
водорода, микроорганизмы делят на две группы. Микроорганизмы, использующие в
качестве доноров водорода неорганические соединения, называют литотрофными (от
греч. lithos — камень), а микроорганизмы, использующие в качестве доноров водорода
органические соединения, — органотрофами.
Учитывая источник энергии, среди бактерий различают фототрофы, т.е.
фотосинтезирующие (например, сине-зеленые водоросли, использующие энергию света),
и хемотрофы, нуждающиеся в химических источниках энергии.
Механизмы питания. Поступление различных веществ в бактериальную клетку зависит от
величины и растворимости их молекул в липидах или воде, рН среды, концентрации
веществ, различных факторов проницаемости мембран и др. Клеточная стенка пропускает
небольшие молекулы и ионы, задерживая макромолекулы массой более 600 Д.
Основным регулятором поступления веществ в клетку является цитоплазматическая
мембрана. Условно можно выделить четыре механизма проникновения питательных
веществ в бактериальную клетку: это простая диффузия, облегченная диффузия,
активный транспорт, транслокация групп.
Наиболее простой механизм поступления веществ в клетку — простая диффузия, при
которой перемещение веществ происходит вследствие разницы их концентрации по обе
стороны цитоплазматической мембраны. Вещества проходят через липидную часть
цитоплазматической мембраны (органические молекулы, лекарственные препараты) и
реже по заполненным водой каналам в цитоплазматической мембране. Пассивная
диффузия осуществляется без затраты энергии.
Облегченная диффузия происходит также в результате разницы концентрации веществ
по обе стороны цитоплазматической мембраны. Однако этот процесс осуществляется с
помощью молекул-переносчиков, локализующихся в цитоплазматической мембране и
обладающих специфичностью. Каждый переносчик транспортирует через мембрану
соответствующее вещество или передает другому компоненту цитоплазматической
мембраны — собственно переносчику. Белками-переносчиками могут быть пермеазы,
место синтеза которых — цитоплазматическая мембрана. Облегченная диффузия
протекает без затраты энергии, вещества перемещаются от более высокой концентрации
к более низкой.
Активный транспорт происходит с помощью пермеаз и направлен на перенос веществ от
меньшей концентрации в сторону большей, т.е. как бы против течения, поэтому данный
процесс сопровождается затратой метаболической энергии (АТФ), образующейся в
результате окислительно-восстановительных реакций в клетке.
Перенос (транслокация) групп сходен с активным транспортом, отличаясь тем, что
переносимая молекула видоизменяется в процессе переноса, например
фосфорилируется.
Выход веществ из клетки осуществляется за счет диффузии и при участии транспортных
систем.
2. Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной
клетки.
Антиген – это биополимер органической природы, генетически чужеродный для
макроорганизма, который при попадании в последний распознаётся его иммунной
системой и вызывает иммунные реакции, направленные на его устранение.
Антигены обладают рядом характерных свойств: антигенностью, специфичностью и
иммуногенностью.
Антигенность. Под антигенностью понимают потенциаль¬ную способность молекулы
антигена акти-вировать компоненты иммунной системы и специфически
взаимодействовать с фактора¬ми иммунитета (антитела, клон эффекторных
лимфоцитов). Иными словами, антиген дол¬жен выступать специфическим
раздражителем по отношению к иммунокомпетентным клет¬кам. При этом
взаимодействие компоненты иммунной системы происходит не со всей молекулой
одновременно, а только с ее не¬большим участком, который получил название
«антигенная детерминанта», или «эпитоп».
Чужеродность является обязательным усло¬вием для реализации антигенности. По
этому критерию система приобретенного иммунитета дифференцирует потенциально
опасные объ¬екты биологического мира, синтезированные с чужеродной
генетической матрицы. Понятие «чужеродность» относительное, так как имму-
нокомпетентные клетки не способны напря¬мую анализировать чужеродный
генетический код. Они воспринимают лишь опосредованную информацию, которая,
как в зеркале, отражена в молекулярной структуре вещества.
Иммуногенность — потенциальная способ¬ность антигена вызывать по отношению к
себе в макроорганизме специфическую за¬щитную реакцию. Степень иммуногенности
зависит от ряда факторов, которые можно объединить в три группы: 1. Молекулярные
особенности антигена; 2. Клиренс антигена в организме; 3. Реактивность
макроорганизма.
К первой группе факторов отнесены природа, химический состав, молекулярный вес,
струк¬тура и некоторые другие характеристики.
Иммуногенность в значительной степени за¬висит от природы антигена. Важна также
оптическая изомерия аминокислот, составляющих молекулу белка. Большое значение
имеет размер и молекулярная масса антигена. На степень иммуногенности также
оказыва¬ет влияние пространственная структура анти¬гена. Оказалась также
существенной стерическая стабильность молекулы антигена. Еще одним важным
условием иммуно¬генности является растворимость антигена.
Вторая группа факторов связана с динамикой поступления антигена в организм и его
выведе¬ния. Так, хорошо известна зависимость иммуногенности антигена от способа
его введения. На иммунный ответ влияет количество пос¬тупающего антигена: чем его
больше, тем более выражен иммунный ответ.
Третья группа объединяет факторы, опреде¬ляющие зависимость иммуногенности от
со¬стояния макроорганизма. В этой связи на пер¬вый план выступают наследственные
факторы.
Специфичностью называют способность ан¬тигена индуцировать иммунный ответ к
строго определенному эпитопу. Это свойство обуслов¬лено особенностями
формирования иммунно¬го ответа — необходима комплементарность рецепторного
аппарата иммунокомпетентных клеток к конкретной антигенной детерминанте.
Поэтому специфичность антигена во многом определяется свойствами составляющих
его эпитопов. Однако при этом следует учитывать условность границ эпитопов, их
структурное разнообразие и гетерогенность клонов антигенреактивных лимфоцитовой
специфичности. В результате этого организм на антигенное раз¬дражение всегда
отвечает поликлональными им¬мунным ответом.
Антиге¬ны бактериальной клетки. В структуре бактериальной клетки разли¬чают
жгутиковые, соматические, капсульные и некоторые другие антигены. Жгутиковые,
или Н-антигены, локализуют-ся в локомоторном аппарате бактерий — их жгутиках.
Они представляют собой эпитопы сократительного белка флагеллина. При
на¬гревании флагеллин денатурирует, и Н-антиген теряет свою специфичность. Фенол
не действует на этот антиген.
Соматический, или О-антиген, связан с клеточной стенкой бактерий. Его основу
со¬ставляют ЛПС. О-антиген проявляет термос¬табильные свойства — он не
разрушается при длительном кипячении. Однако соматичес¬кий антиген подвержен
действию альдегидов (например, формалина) и спиртов, которые нарушают его
структуру.
Капсулъные, или К-антигены, располагаются на поверхности клеточной стенки.
Встречаются у бактерий, образующих капсулу. Как правило, К-антигены состоят из
кислых полисахаридов (уроновые кислоты). В то же время у бациллы сибирской язвы
этот антиген построен из по-липептидных цепей. По чувствительности к нагреванию
различают три типа К-антигена: А, В, и L. Наибольшая термостабильность ха¬рактерна
для типа А, он не денатурирует даже при длительном кипячении. Тип В выдержи¬вает
непродолжительное нагревание (около 1 часа) до 60 "С. Тип L быстро разрушается при
этой температуре. Поэтому частичное удале¬ние К-антигена возможно путем
длительного кипячения бактериальной культуры.
На поверхности возбудителя брюшного ти¬фа и других энтеробактерий, которые
облада¬ют высокой вирулентностью, можно обнару¬жить особый вариант
капсульного антигена. Он получил название антигена вирулентнос¬ти, или Vi-антигена.
Обнаружение этого ан¬тигена или специфичных к нему антител име¬ет большое
диагностическое значение.
Антигенными свойствами обладают также бактериальные белковые токсины,
ферменты и некоторые другие белки, которые секретируются бактериями в
окружающую среду (на¬пример, туберкулин). При взаимодействии со
специфическими антителами токсины, фер¬менты и другие биологически активные
моле¬кулы бактериального происхождения теряют свою активность. Столбнячный,
дифтерий¬ный и ботулинический токсины относятся к числу сильных полноценных
антигенов, поэ¬тому их используют для получения анатокси¬нов для вакцинации
людей.
В антигенном составе некоторых бактерий выделяется группа антигенов с сильно
выра¬женной иммуногенностью, чья биологическая активность играет ключевую роль
в формиро¬вании патогенности возбудителя. Связывание таких антигенов
специфическими антителами практически полностью инактивирует виру¬лентные
свойства микроорганизма и обеспечи¬вает иммунитет к нему. Описываемые
антиге¬ны получили название протективных. Впервые протективный антиген был
обнаружен в гнойном отделяемом карбункула, вызванного ба¬циллой сибирской
язвы. Это вещество являет¬ся субъединицей белкового токсина, которая ответственна
за активацию других, собственно вирулентных субъединиц — так называемого
отечного и летального факторов.
3. Сальмонеллы - возбудители пищевых токсикоинфекций. Таксономия.
Характеристика возбудителей, факторы патогенности.
Микробиологическая диагностика.
Острая кишечная зоонозная инфекция, вызываемая сероварами сальмонелл, характери-
зующаяся поражением ЖКТ.
Морфологические свойства: подвижные, грам «-» палочки, капсулы нет. Хорошо растут на
простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных – образуют колонии в R-и S-
формах, на жидких – помутнение. На лактозособержащих средах образуют бесцветные
колонии.
Биохимическая активность: ферментация глк. до кислоты и газа, отсутствие ферментации
лактозы, продукция сероводорода, отсутствие индолообразования.
Антигенная структура: соматический О-антиген, жгутиковый Н-антиген, Некоторые – К-
антиген. Род Salmonella состоит из двух видов — вида S. enterica, в который включены все
сальмонеллы, являющиеся возбудителями человека и теплокровных животных, и вида S.
bongori, который подразделяется на 10 сероваров.
Вид S. enterica разделен на 6 подвидов, которые подразделены на серовары. Некоторые
серовары сальмонелл, в частности S. Typhi, имеют полисахаридный Vi-антиген,
являющийся разновидностью К-антигена.
Эпидемиология. Возбудителями сальмонеллеза является большая группа сальмонелл,
входящая в подвид enterica. Наиболее часто возбудителями сальмонеллезов у человека
являются серовары S. Typhimurium, S. Dublin, S. Choleraesuis. Основные факторы передачи
— мясо, молоко, яйца, вода.
Патогенез и клиника. Заболевание протекает в локальной форме гастроэнтерита, ведущий
синдром - диарейный. Инвазировав слизистую тонкого кишечника через М-клетки и
проникнув в подслизистую, сальмонеллы захватываются макрофагами, переносясь ими в
пейеровы бляшки, где формируют первичный очаг инфекции. При этом выделяются эндо-
токсин и белковый энтеротоксин. Энтеротоксин активирует поступление в просвет
кишечника большого количества жидкости, К,Na. Понос, рвота.
Иммунитет: Ненапряженный, серовароспецифический, опосредован секреторным IgA,
который предотвращает процесс пенетрации сальмонеллами слизистой тонкого кишечни-
ка. В крови могут определяться антитела.
Микробиологическая диагностика. Бактериологическому исследованию подвергают
рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь, мочу, кровь. При
идентификации выделенных культур необходим широкий набор диагностических О- и Н-
сывороток.
Для серологического исследования применяют РНГА, ИФА. Важное диагностическое
значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания.
Лечение. Применяется патогенетическая терапия, направленная на нормализацию водно-
солевого обмена. При генерализованных формах — этиотропная антибиотикотерапия.
Сальмонеллезные групповые, адсорбированные О- и Н-агглютинирующие сыворотки.
Применяются для установления серогрупп и сероваров сальмонелл в реакции
агглютинации.
Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы представляют собой взвеси сальмонелл,
убитых нагреванием (О-диагностикумы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы).
Применяются для серодиагностики брюшного тифа.
Профилактика. Специфическая профилактика сальмонеллеза у с/х животных и птиц.
Неспецифическая профилактика - проведение ветеринарно-санитарных мероприятий.
Билет 11.
1. Действие физических и химических факторов на микроорганизмы.
Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике.
Влияние физических факторов.
Влияние температуры. Различные группы микроорганизмов развиваются при
определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой температуре,
называют психрофилами, при средней (около 37 °С) — мезофилами, при высокой —
термофилами.
К психрофильным микроорганизмам относится большая группа сапрофитов — обитателей
почвы, морей, пресных водоемов и сточных вод (железобактерии, псевдомонады, све-
тящиеся бактерии, бациллы). Некоторые из них могут вызывать порчу продуктов питания
на холоде. Способностью расти при низких температурах обладают и некоторые
патогенные бактерии (возбудитель псевдотуберкулеза размножается при температуре 4
°С). В зависимости от температуры культивирования свойства бактерий меняются.
Интервал температур, при котором возможен рост психрофильных бактерий, колеблется
от -10 до 40 °С, а температурный оптимум — от 15 до 40 °С, приближаясь к
температурному оптимуму мезофильных бактерий.
Мезофилы включают основную группу патогенных и условно-патогенных бактерий. Они
растут в диапазоне температур 10— 47 °С; оптимум роста для большинства из них 37 °С.
При более высоких температурах (от 40 до 90 °С) развиваются термофильные бактерии.
На дне океана в горячих сульфидных водах живут бактерии, развивающиеся при темпе-
ратуре 250—300 °С и давлении 262 атм.
Термофилы обитают в горячих источниках, участвуют в процессах самонагревания навоза,
зерна, сена. Наличие большого количества термофилов в почве свидетельствует о ее
загрязненности навозом и компостом. Поскольку навоз наиболее богат термофилами, их
рассматривают как показатель загрязненности почвы.
Хорошо выдерживают микроорганизмы действие низких температур. Поэтому их можно
долго хранить в замороженном состоянии, в том числе при температуре жидкого газа (—
173 °С).
Высушивание. Обезвоживание вызывает нарушение функций большинства
микроорганизмов. Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы
(возбудители гонореи, менингита, холеры, брюшного тифа, дизентерии и др.). Более
устойчивыми являются микроорганизмы, защищенные слизью мокроты.
Высушивание под вакуумом из замороженного состояния — лиофилизацию —
используют для продления жизнеспособности, консервирования микроорганизмов.
Лиофилизированные культуры микроорганизмов и иммунобиологические препараты
длительно (в течение нескольких лет) сохраняются, не изменяя своих первоначальных
свойств.
Действие излучения. Неионизирующее излучение — ультрафиолетовые и инфракрасные
лучи солнечного света, а также ионизирующее излучение — гамма-излучение
радиоактивных веществ и электроны высоких энергий губительно действуют на
микроорганизмы через короткий промежуток времени. УФ-лучи применяют для
обеззараживания воздуха и различных предметов в больницах, родильных домах,
микробиологических лабораториях. С этой целью используют бактерицидные лампы УФ-
излучения с длиной волны 200—450 нм.
Ионизирующее излучение применяют для стерилизации одноразовой пластиковой
микробиологической посуды, питательных сред, перевязочных материалов,
лекарственных препаратов и др. Однако имеются бактерии, устойчивые к действию иони-
зирующих излучений, например Micrococcus radiodurans была выделена из ядерного
реактора.
Действие химических веществ. Химические вещества могут оказывать различное
действие на микроорганизмы: служить источниками питания; не оказывать какого-либо
влияния; стимулировать или подавлять рост. Химические вещества, уничтожающие
микроорганизмы в окружающей среде, называются дезинфицирующими.
Антимикробные химические вещества могут обладать бактерицидным, вирулицидным,
фунгицидным действием и т.д.
Химические вещества, используемые для дезинфекции, относятся к различным группам,
среди которых наиболее широко представлены вещества, относящиеся к хлор-, йод- и
бромсодержащим соединениям и окислителям.
Антимикробным действием обладают также кислоты и их соли (оксолиновая,
салициловая, борная); щелочи (аммиак и его соли,
Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся
обработке.
Дезинфекция — процедура, предусматривающая обработку загрязненного микробами
предмета с целью их уничтожения до такой степени, чтобы они не смогли вызвать
инфекцию при использовании данного предмета. Как правило, при дезинфекции
погибает большая часть микробов (в том числе все патогенные), однако споры и
некоторые резистентные вирусы могут остаться в жизнеспособном состоянии.
Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания возбудителя
инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических
процедурах. Методы асептики применяют для борьбы с экзогенной инфекцией,
источниками которой являются больные и бактерионосители.
Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в ране,
патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или ликвидацию
воспалительного процесса.
2. Реакция нейтрализации токсина антитоксином.
В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки
нейтрализовать экзотоксин.
Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие
микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой
микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.
Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген—антитело
животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При
отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или
их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и,
следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген—антитело.
Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие
экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и
вводят животным (морским свинкам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат
исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет
нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы
останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.
3. Вирусы иммунодефицита человека. Таксономия. Характеристика
возбудителей. Лабораторная диагностика. Профилактика.
Вирус иммунодефицита человека вызывает ВИЧ-инфекцию, заканчивающуюся развитием
синдрома приобретенного иммунного дефицита.
Возбудитель ВИЧ-инфекции — лимфотропный вирус, относящийся к семейству
Retroviridae роду Lentivirus.
Морфологические свойства: РНК-содержащий вирус. Вирусная частица сферической
формы Оболочка состоит из двойного слоя липидов, пронизанного гликопротеинами.
Липидная оболочка происходит из плазматической мембраны клетки хозяина, в которой
репродуцируется вирус. Гликопротеиновая молекула состоит из 2 субъединиц,
находящихся на поверхности вириона и пронизывающих его липидную оболочку.
Сердцевина вируса конусовидной формы, состоит из капсидных белков, ряда матриксных
белков и белков протеазы. Геном образует две нити РНК, для осуществления процесса
репродукции ВИЧ имеет обратную транскриптазу, или ревертазу.
Геном вируса состоит из 3 основных структурных генов и 7 регуляторных и
функциональных генов. Функциональные гены выполняют регуляторные функции и
обеспечивают осуществление процессов репродукции и участие вируса в инфекционном
процессе.
Вирус поражает в основном Т- и В-лимфоциты, некоторые клетки моноцитарного ряда
(макрофаги, лейкоциты), клетки нервной системы.
Культуральные свойства: на культуре клеток Т-лимфоцитов и моноцитов человека (в
присутствии ИЛ-2).
Антигенная структура: 2 типа вируса — ВИЧ-1 и ВИЧ-2 ВИЧ-1, имеет более 10 генотипов
(субтипов): А, В, С, D, E, F…, отличающихся между собой по аминокислотному составу
белков.
ВИЧ-1 делят на 3 группы: М, N, О. Большинство изолятов относится к группе М, в которой
выделяют 10 подтипов: А, В, С, D, F-l, F-2, G, Н, I, К. Устойчивость: Чувствителен к
физическим и химическим факторам, гибнет в при нагревании. Вирус может длительно
сохраняться в высушенном состоянии, в высохшей крови.
Факторы патогенности, патогенез: Вирус прикрепляется к лимфоциту, проникает в клетку
и репродуцирует в лимфоците. В результате размножения ВИЧ в лимфоците последние
разрушаются или теряют свои функциональные свойства. В результате размножения
вируса в различных клетках происходит накопление его в органах и тканях, и он
обнаруживается в крови, лимфе, слюне, моче, поте, каловых массах.
При ВИЧ-инфекции снижается число Т-4-лимфоцитов, нарушается функция В-лимфоцитов,
подавляется функция естественных киллеров и ответ на антигены снижается и нарушается
продукция комплемента, лимфокинов и других факторов, регулирующих иммунные
функции (ИЛ), в результате чего наступает дисфункция иммунной системы.
Клиника: поражается дыхательная система (пневмония, бронхиты); ЦНС (абсцессы,
менингиты); ЖКТ (диареи), возникают злокачественные новообразования (опухоли
внутренних органов).
ВИЧ-инфекция протекает в несколько стадий: 1) инкубационный период, составляющий в
среднем 2—4 недели; 2) стадия первичных проявлений, характеризующаяся вначале
острой лихорадкой, диареей; завершается стадия бессимптомной фазой и персистенцией
вируса, восстановлением самочувствия, однако в крови определяются ВИЧ-антитела, 3)
стадия вторичных заболеваний, проявляющихся поражением дыхательной, нервной
системы. Завешается ВИЧ-инфекция последней, 4-й терминальной стадией- СПИДом.
Микробиологическая диагностика.
Вирусологические и серологические исследования включают методы определения
антигенов и антител ВИЧ. Для этого используют ИФА, ИБ и ПЦР. Сыворотки больных ВИЧ-1
и ВИЧ-2 содержат антитела ко всем вирусным белкам. Однако для подтверждения
диагноза определяют антитела к белкам gp41, gpl20, gpl60, p24 у ВИЧ-1 и антитела к
белкам gp36, gpl05, gpl40 у ВИЧ-2. ВИЧ-антитела появляются через 2—4 недели после
инфицирования и определяются на всех стадиях ВИЧ.
Метод выявления вируса в крови, лимфоцитах. Однако при любой положительной пробе
для подтверждения результатов ставится реакция ИБ. Применяют также ПЦР, способную
выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периоде, однако ее
чувствительность несколько ниже, чем у ИФА.
Клинический и серологический диагнозы подтверждаются иммунологическими иссле-
дованиями, если они указывают на наличие иммунодефицита у обследуемого пациента.
Диагностическая иммуноферментная тест-система для определения антител к ВИЧ –
включает вирусный АГ, адсорбированный на носителе, АТ против Ig человека.
Используется для серодиагностики СПИДа.
Лечение: применение ингибиторов обратной транскриптазы, действующих в
активированных клетках. Препараты являются производные тимидина — азидотимидин и
фосфазид.
Профилактика. Специфическая - нет.
Билет 12.
1. Распространение и роль микробов в природе.
Микроорганизмы широко распространены в природе: обитают в воздухе, в воде и в
почве. 
В зависимости от среды обитания все микроорганизмы можно разделить на три группы: 
сапрофита (находятся в основном в почве), 
эпифиты (находятся на поверхности живых растений), 
паразиты (живут в клетках хозяина).
Микрофлора почвы.
Почва является главным источником распространения микроорганизмов, т. к в почве: 
• много питательных веществ (органические, минеральные), 
• достаточное количество влаги, которое защищает от воздействия прямых солнечных
лучей и от резких перепадов температуры. 
Больше всего микробов содержится на глубине от 1 до 30 см. В песчаной почве их
меньше, чем в черноземной.
Микроорганизмы почвы представлены бактериями, микроскопическими грибами и
дрожжами.
Микроорганизмы играют большую роль в процессах образования и обогащения почв,
влияют на их плодородие. Наибольшее количество микробов встречается в почвах, где
содержится много органических остатков (в пахотных, удобряемых перегноем и влажных
почвах).
В почве встречаются и болезнетворные микроорганизмы, которые попадают с трупами
животных, отбросами. Они являются возбудителями ботулизма, столбняка, газовой
гангрены и других заболеваний. С целью предотвращения тяжелых заболеваний,
работники пищевой промышленности не должны допускать загрязнения почвой сырья,
полуфабрикатов и готовой продукции.
Почва является основным резервуаром, из которого микробы попадают в воду и воздух.
Микрофлора воды.
Вода является благоприятной средой для жизнедеятельности микроорганизмов. 
Загрязнённость воды может составлять до миллиона микробов в 1 мл.
Микроорганизмы попадают в водоемы с различными стоками с поверхности почвы, из
воздуха и т. д. Количество микроорганизмов в воде зависит от ее происхождения. В
открытых водоёмах (реках, озёрах, прудах) больше всего микроорганизмов; в
артезианской воде – меньше, т.к. проходя через слои почвы она задерживается.
Вода является очень опасным источником распространения патогенных
микроорганизмов, особенно во время эпидемий холеры, брюшного тифа, дизентерии и
других кишечных инфекций. Они способны сохраняться в воде до нескольких месяцев.
Главным источником бактериального загрязнения водоемов являются сточные воды
населенных пунктов и промышленных предприятий, (стоки содержат химические
вещества – аммиак, сероводород, соли азотной кислоты, хлориды, соли фосфорной
кислоты) загрязненные бытовыми и производственными отходами, а также дождевые
воды, уносящие из воздуха и с поверхности почвы большое количество
микроорганизмов. 
Питьевую воду и очищенные сточные воды можно обеззараживать путем хлорирования
газообразным хлором, хлорной известью или другими хлорсодержащими соединениями,
озонирования, облучения ультрафиолетовыми лучами. Воду отстаивают, фильтруют.
Вода, используемая для технологических целей в хлебопечении и производстве мучных
кондитерских изделий, должна отвечать требованиям ГОСТ 2874—82. Общее количество
клеток бактерий — не более 100 в 1 мл, бактерий группы кишечной палочки — не более 3
в 1 л.
Микрофлора воздуха.
Воздух является неблагоприятной средой для микроорганизмов, так как в нем нет
питательных веществ и влажность его ниже необходимой для их развития.
Микроорганизмы попадают в воздух с пылью. В воздухе они или погибают, или вновь
оседают в виде спор на поверхности земли и различных предметов. 
Содержание микроорганизмов в воздухе зависит от различных факторов:
o чем выше от поверхности земли, тем меньше в воздухе микроорганизмов. Почти нет
микроорганизмов в воздухе над поверхностью океанов, морей, над снежными
равнинами, лесами и горными вершинами. Но больше над сушей.
o количество микроорганизмов в воздухе зависит от близости к населенному пункту. В
воздухе крупных городов микробов больше, чем в небольших населенных пунктах. 
o в теплое время года микроорганизмов в воздухе больше, чем в холодное.
o больше обсеменены микробами нижние слои воздуха (1 м3 воздуха содержит десятки
тысяч микроорганизмов).
Состав микрофлоры воздуха различен. Наиболее распространены в нем споры бактерий и
грибов, а также патогенные микроорганизмы и вирусы. Через воздух передаются
возбудители различных заболеваний — инфекции дыхательных путей, гриппа,
туберкулеза, менингита и др., а также микробы, вызывающие заражение
технологического сырья и готовой продукции (плесневение муки и хлеба).
Чистота воздуха в производственных помещениях достигается с помощью
микробиологических анализов проб воздуха. Очищают вентиляцией, влажной уборкой,
бактерицидными лампами, дезинфицирующими средствами.
2. Вакцины, определение, классификация, применение.
Вакцина — медицинский препарат, предназначенный для создания иммунитета к
инфекционным болезням.
Классификации вакцин:
1.Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные
тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие
специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий. Примером таких вакцин
являются БЦЖ и вакцина против натуральной оспы человека, в качестве которой
используется непатогенный для человека вирус оспы коров.
2.Инактивированные (убитые) вакцины – препараты, в качестве действующего начала
включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных
вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных
микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены
(субклеточные, субвирионные вакцины). В препараты иногда добавляют консерванты и
адьюванты.
Молекулярные вакцины – в них антиген находится в молекулярной форме или даже в
виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов,
детерминант.
Корпускулярные вакцины – содержащие в своем составе протективный антиген
3.Анатоксины относятся к числу наиболее эффективных препаратов. Принцип получения
– токсин соответствующей бактерии в молекулярном виде превращают в нетоксичную, но
сохранившую свою антигенную специфичность форму путем воздействия 0.4%
формальдегида при 37t в течение 3-4 недель, далее анатоксин концентрируют, очищают,
добавляют адьюванты.
4.Синтетические вакцины. Молекулы эпитопов сами по себе не обладают высокой
иммуногенностью для повышения их антигенных свойств эти молекулы сшиваются с
полимерным крупномолекулярным безвредным веществом, иногда добавляют
адьюванты.
5.Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных
антигенов.
Требования, предъявляемые к современным вакцинам:
Иммуногенность;
Низкая реактогенность (аллергенность);
Не должны обладать тератогенностью, онкогенностью;
Штаммы, из которых приготовлена вакцина, должны быть генетически стабильны;
Длительный срок хранения;
Технологичность производства;
Простота и доступность в применении.
Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные
тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие
специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий.
Аттенуация (ослабление) возможна путём воздействия на штамм химических (мутагены) и
физических (температура) факторов или посредством длительных пассажей через
невосприимчивый организм. Так же в качестве живых вакцин используются дивергентные
штаммы (непатогенные для человека), имеющие общие протективные антигены с
патогенными для человека микробами. Примером такой вакцины является БЦЖ и
вакцина против натуральной оспы.
Возможно получение живых вакцин генно-инженерным способом. Принцип получения
таких вакцин сводится к созданию непатогенных для человека рекмбинантных штаммов,
несущих протективные антигены патогенных микробов и способных при введении в орг.
человека размножаться и создавать иммунитет. Такие вакцины называют векторными.
Вне зависимости от того, какие штаммы включены в вакцины, бактерии получают путём
выращивания на искусственных питательных средах, культурах клеток или куриных
эмбрионах. В живую вакцину, как правило, добавляют стабилизатор, после чего
подвергают лиофильному высушиванию.
В связи с тем, что живые вакцины способны вызывать вакцинную инфекцию (живые
аттенуированные микробы размножаются в организме, вызывая воспалительный процесс
проходящий без клинических проявлений), они всегда вызывают перестройку
иммунобиологического статуса организма и образование специфических антител. Это так
же может являться недостатком, т. к. живые вакцины чаще вызывают аллергические
реакции.
Вакцины данного типа, как правило, вводятся однократно.
Примеры: сибиреязвенная вакцина, чумная вакцина, бруцеллёзная вакцина, БЦЖ
вакцина, оспенная дермальная вакцина.

Инактивированные (убитые, корпускулярные или молекулярные) вакцины – препараты,


в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим
способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же
извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе
проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины).
Для выделения из бактерий и вирусов антигенных комплексов (гликопротеинов, ЛПС,
белков) применяют трихлоруксусную кислоту, фенол, ферменты, изоэлектрическое
осаждение.
Их получают путем выращивания патогенных бактерий и вирусов на искусственных
питательных средах, инактивируют, выделяют антигенные комплексы, очищают,
конструируют в виде жидкого или лиофильного препарата.
Преимуществом данного типа вакцин является относительная простота получения (не
требуется длительного изучения и выделения штаммов). К недостаткам же относятся
низкая иммуногенность, потребность в трехкратном применении и высокая
реактогенность формализированных вакцин. Так же, по сравнению с живыми вакцинами,
иммунитет, вызываемый ими, непродолжителен.
В настоящее время применяются следующие убитые вакцины: брюшнотифозная,
обогащенная Vi антигеном; холерная вакцина, коклюшная вакцина
Субклеточные и субъединичные вакцины
Действующим началом этого типа препаратов являются протективные антигены бактерий,
полученные путем воздействия ультразвука на бактериальные клетки.
Главным преимуществом данного типа вакцин является их низкая реактогеннность.
Адьюванты применяются для усиления иммуногенности вакцин. В качестве адъювантов
используют минеральные сорбенты (гели гидрата окиси и фосфата аммония), полимеры,
и др. хим. соединения, бактерии и компоненты бактерий, липиды, вещества,
вызывающие воспалительную реакцию. Они действуют на антиген и организм в целом.
Действие на антиген сводится к укрупнению молекул антигена, т. е. превращению
растворимых антигенов в корпускулярные, в результате чего антиген лучше захватывается
иммунокомпетентными клетками. При воздействии на организм в месте инъекции
адьюванты вызывают воспалительный процесс образование фиброзной капсулы, что
способствует более длительному сохранению антигена в «депо» и суммации антигенных
раздражений. Адьюванты так же непосредственно активируют пролиферацию В, Т и А
систем иммунитета.
Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных антигенов
и позволяющие проводить иммунизацию против нескольких инфекций одновременно.
Если в препарат входят однородные антигены, то такую ассоциированную вакцину
называют поливакциной. Если же ассоциированный препарат состоит из разнородных
антигенов, то его целесообразно называть комбинированной вакциной.
Возможна так же комбинированная иммунизация, когда одновременно вводят несколько
вакцин в различные участки тела, например, против оспы(накожно) и чумы(подкожно)
Примером поливакцины можно считать живую полиомиелитную поливакцину,
содержащую аттенуированные штаммы вируса полиомиелита I, II, III типов. Примером
комбинированной вакцины является АКДС, куда входят инактивированная
корпускулярная коклюшная вакцина, дифтерийный и столбнячный анатоксин.
Комбинированные вакцины применяются в сложной противоэпидемической обстановке.
В основе их действия лежит способность иммунной системы отвечать на несколько
антигенов одновременно

Генно-инженерные вакцины – это препараты, полученные с помощью биотехнологии,


которая по сути сводиться к генетической рекомбинации .
Для начала получают ген, который должен быть встроен в геном реципиента. Небольшие
гены могут быть получены методом химического синтеза. Для этого расшифровывается
число и последовательность аминокислот в белковой молекуле вещества, затем по этим
данным узнают очерёдность нуклеотидов в гене, далее следует синтез гена химическим
путем.
Крупные структуры, которые довольно сложно синтезировать получаются путем
выделения(клонирования), прицельного выщепления этих генетических образований с
помощью рестриктаз.
Полученный одним из способов целевой ген с помощью ферментов сшивается с другим
геном, который используется в качестве вектора для встраивания гибридного гена в
клетку. Вектором могут служить плазмиды, бактериофаги, вирусы человека и животных.
Экспрессируемый ген встраивается в бактериальную или животную клетку, которая
начинает синтезировать несвойственное ей ранее вещество, кодируемое
эксперссируемым геном.
В качестве реципиентов экспрессируемого гена чаще всего используется E. coli, B. subtilis,
псевдомонады, дрожжи, вирусы. некоторые штаммы способны переключаться на синтез
чужеродного вещества до 50% своих синтетических возможностей – эти штамм
называются суперпродуцентами.
Иногда к генно-инженерным вакцинам добавляется адъювант.
Примерами таких вакцин служат вакцина против гепатита В (энджерикс), сифилиса,
холеры, бруцеллёза, гриппа, бешенства.
Есть определённые сложности в разработке и применении:
- длительное время к генно-инженерным препаратам относились настороженно.
- на разработку технологии для получения вакцины затрачиваются значительные
средства
- при получении препаратов данным способом возникает вопрос об идентичности
полученного материала природному веществу.
3. Возбудитель бешенства. Таксономия. Характеристика возбудителя.
Микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.
Таксономия: РНК-содержащий вирус, семейство Rhabdoviride, род Lyssavirus.
Морфология и антигенные свойства. Вирион имеет форму пули, состоит из
сердцевины (РНП(рибонуклеопротеин) спирального типа и матриксного белка), окру-
женной липопротеиновой оболочкой с гликопротеиновыми шипами. Гликопротеин G
отвечает за адсорбцию и внедрение вируса в клетку, обладает антигенными
(типоспецифический антиген) и иммуногенными свойствами. Антитела к нему
нейтрализуют вирус и выявляются в РН (рекция нейтрализации). РНП состоит из геномной
однонитевой линейной минус-РНК и белков: N-белка, L-белка и NS-белка. РНП является
группоспецифическим антигеном; выявляется в РСК, РИФ, РП.
Различают два вируса бешенства: дикий вирус, циркулирующий среди животных,
патогенный для человека; фиксированный – не патогенный для человека.
Культивирование. Вирус культивируют путем внутримозгового заражения
лабораторных животных (мышей, крыс) и в культуре клеток: фибробластов человека,
куриного эмбриона. В нейронах головного мозга зараженных животных образуются
цитоплазматические включения, содержащие антигены вируса (тела Бабеша-Негри –
эозинофильные включения).
Резистентность: Вирус бешенства неустойчив: быстро погибает под действием
солнечных и УФ-лучей, а также при нагревании до 60С. Чувствителен к дезинфицирующим
веществам, жирорастворителям, щелочам и протеолитическим ферментам.
Эпидемиология. Источниками инфекции в природных очагах являются волки,
грызуны. Вирус бешенства накапливается в слюнных железах больного животного и
выделяется со слюной. Животное заразно в последние дни инкубационного периода (за 2
—10 дней до клинических проявлений болезни). Механизм передачи возбудителя —
контактный при укусах. Иногда заболевание развивается при употреблении мяса больных
животных или при трансплантации инфицированных тканей (роговицы глаза).
У собаки после инкубационного периода (14дн.) появляются возбуждение, обильное
слюнотечение, рвота, водобоязнь. Она грызет место укуса, бросается на людей,
животных. Через 1—3 дня наступают паралич и смерть животного.
Патогенез и клиника. Вирус, попав со слюной больного животного в поврежденные
наружные покровы, реплицируется и персистирует в месте внедрения. Затем возбудитель
распространяется по аксонам периферических нервов, достигает клеток головного и
спинного мозга, где размножается. Клетки претерпевают дистрофические,
воспалительные и дегенеративные изменения. Размножившийся вирус попадает из мозга
по центробежным нейронам в различные ткани, в том числе в слюнные железы.
Инкубационный период у человека при бешенстве — от 10 дней до 3 месяцев. В начале
заболевания появляются недомогание, страх, беспокойство, бессонница, затем
развиваются рефлекторная возбудимость, спазматические сокращения мышц глотки и
гортани.
Иммунитет: Человек относительно устойчив к бешенству. Постинфекционный
иммунитет не изучен, так как больной обычно погибает. Введение людям, укушенным
бешеным животным, инактивированной антирабической вакцины вызывает выработку
антител, интерферонов и активацию клеточного иммунитета.
Микробиологическая диагностика: Постмортальная диагностика включает об-
наружение телец Бабеша—Негри в мазках-отпечатках или срезах из ткани мозга, а также
выделение вируса из мозга и подчелюстных слюнных желез. Тельца Бабеша—Негри
выявляют методами окраски по Романовскому—Гимзе. Вирусные антигены в клетках
обнаруживают с помощью РИФ.
Выделяют вирус из патологического материала путем биопробы на мышах:
заражают интрацеребрально. Идентификацию вирусов проводят с помощью ИФА, а также
в РН на мышах, используя для нейтрализации вируса антирабический иммуноглобулин.
Прижизненная диагностика основана на исследовании: отпечатков роговицы,
биоптатов кожи с помощью РИФ; выделении вируса из слюны, цереброспинальной и
слезной жидкости путем интрацеребрального инфицирования мышей. Возможно
определение антител у больных с помощью РСК, ИФА.
Лечение. Симптоматическое; эффективное лечение отсутствует.
Профилактика. Выявление, уничтожение животных. Иммунизация антирабической
вакциной собак. Специфическую профилактику проводят антирабической вакциной и
антирабической сывороткой или иммуноглобулином. Инактивированная УФ- или гамма
лучами культуральная вакцина. С лечебно–профилактической целью иммунизируют
людей; формируется активный иммунитет.

Билет 13.
1. Явление антагонизма микробов. Антибиотики.
Антагонизм широко распространен в природных микробных сообществах, состоящих из
бактерий, грибов, актиномицетов, дрожжей, водорослей, простейших и других
микроорганизмов. Широкое понятие антагонизма включает и такие формы
взаимоотношений, как конкуренция, хищничество, паразитизм. Нас в данном случае
интересует антагонизм в узком смысле, т. е. антагонизм, обусловленный образованием
антимикробных веществ и, в частности, антибиотиков. Взаимоотношения, обусловленные
продукцией любых антимикробных веществ, можно назвать активным или прямым
антагонизмом. В отличие от него существует пассивный, или косвенный, антагонизм, при
котором подавление одних микроорганизмов происходит за счет изменения другими
микробами условий окружающей среды в неблагоприятную для развития сторону.
Антагонизм может быть односторонним (микроорганизм подавляет развитие своего
конкурента, не реагируя на воздействие соперника) и двусторонним (происходит
взаимное угнетение микроорганизмов в сообществе). Существует еще понятие
направленного (насильственного), или вынужденного, антагонизма. При этих
взаимоотношениях наблюдается образование антимикробных веществ (вероятно,
различной природы, обладающих разным механизмом действия) только при совместном
выращивании двух различных микроорганизмов, которые в условиях изолированного
культивирования этих веществ не образуют. Антагонизм между микроорганизмами
можно наблюдать и в лабораторных условиях. Активность продуцентов антибиотиков
обычно выражают массой антибиотика, содержащейся в единице объема питательной
среды, в которой выращивали продуцент.
Антибиотики — химиотерапевтические вещества, продуцируемые микроорганизмами,
животными клетками, растениями, а также их производные и синтетические продукты,
которые обладают избирательной способностью угнетать и задерживать рост
микроорганизмов, а также подавлять развитие злокачественных новообразований.
За тот период, который прошел со времени открытия П.Эрлиха, было получено более 10
000 различных антибиотиков, поэтому важной проблемой являлась систематизация этих
препаратов. В настоящее время существуют различные классификации антибиотиков,
однако ни одна из них не является общепринятой.
В основу главной классификации антибиотиков положено их химическое строение.

Наиболее важными классами синтетических антибиотиков являются хинолоны и


фторхинолоны (например, ципрофлоксацин), сульфаниламиды (сульфадиметоксин),
имидазолы (метронидазол), нитрофураны (фурадонин, фурагин).
По спектру действия антибиотики делят на пять групп в зависимости от того, на какие
микроорганизмы они оказывают воздействие. Кроме того, существуют
противоопухолевые антибиотики, продуцентами которых также являются актиномицеты.
Каждая из этих групп включает две подгруппы: антибиотики широкого и узкого спектра
действия.
Антибактериальные антибиотики составляют самую многочисленную группу
препаратов. Преобладают в ней антибиотики широкого спектра действия, оказывающие
влияние на представителей всех трех отделов бактерий. К антибиотикам широкого
спектра действия относятся аминогликозиды, тетрациклины и др. Антибиотики узкого
спектра действия эффективны в отношении небольшого круга бактерий, например полет-
миксины действуют на грациликутные, ванкомицин влияет на грамположительные
бактерии.
В отдельные группы выделяют противотуберкулезные, противолепрозные,
противосифилитические препараты.
Противогрибковые антибиотики включают значительно меньшее число препаратов.
Широким спектром действия обладает, например, амфотерицин В, эффективный при
кандидозах, бластомикозах, аспергиллезах; в то же время нистатин, действующий на
грибы рода Candida, является антибиотиком узкого спектра действия.
Антипротозойные и антивирусные антибиотики насчитывают небольшое число
препаратов.
Противоопухолевые антибиотики представлены препаратами, обладающими
цитотоксическим действием. Большинство из них применяют при многих видах опухолей,
например митоми-цин С.
Действие антибиотиков на микроорганизмы связано с их способностью подавлять те или
иные биохимические реакции, происходящие в микробной клетке.
В зависимости от механизма действия различают пять групп антибиотиков:
1. антибиотики, нарушающие синтез клеточной стенки. К этой группе относятся,
например, β-лактамы. Препараты этой группы характеризуются самой высокой
избирательностью действия: они убивают бактерии и не оказывают влияния на клетки
микроорганизма, так как последние не имеют главного компонента клеточной стенки
бактерий — пептидогликана. В связи с этим β -лактамные антибиотики являются
наименее токсичными для макроорганизма;
2. антибиотики, нарушающие молекулярную организацию и синтез клеточных мембран.
Примерами подобных препаратов являются полимиксины, полиены;
3. антибиотики, нарушающие синтез белка; это наиболее многочисленная группа
препаратов. Представителями этой группы являются аминогликозиды, тетрациклины,
макроли-ды, левомицетин, вызывающие нарушение синтеза белка на разных уровнях;
4. антибиотики — ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот. Например, хинолоны
нарушают синтез ДНК, рифампицин — синтез РНК;
5. антибиотики, подавляющие синтез пуринов и аминокислот. К этой группе относятся,
например, сульфаниламиды.
Источники антибиотиков.
Основными продуцентами природных антибиотиков являются микроорганизмы, которые,
находясь в своей естественной среде (в основном, в почве), синтезируют антибиотики в
качестве средства выживания в борьбе за существование. Животные и растительные
клетки также могут вырабатывать некоторые вещества с селективным антимикробным
действием (например, фитонциды), однако широкого применения в медицине в качестве
продуцентов антибиотиков они не получили.
Таким образом, основными источниками получения природных и полусинтетических
антибиотиков стали:
• Актиномицеты (особенно стрептомицеты) — ветвящиеся бактерии. Они синтезируют
большинство природных антибиотиков (80 %).
• Плесневые грибы — синтезируют природные бета-лактамы (грибы рода Cephalosporium
и Penicillium)H фузидиевую кислоту.
• Типичные бактерии — например, эубактерии, бациллы, псевдомонады — продуцируют
бацитрацин, полимиксины и другие вещества, обладающие антибактериальным
действием.
Способы получения.
Существует три основных способа получения антибиотиков:
• биологический синтез (так получают природные антибиотики — натуральные продукты
ферментации, когда в оптимальных условиях культивируют микробы-продуценты,
которые выделяют антибиотики в процессе своей жизнедеятельности);
• биосинтез с последующими химическими модификациями (так создают
полусинтетические антибиотики). Сначала путем биосинтеза получают природный
антибиотик, а затем его первоначальную молекулу видоизменяют путем химических
модификаций, например присоединяют определенные радикалы, в результате чего
улучшаются противомикробные и фармакологические характеристики препарата;
• химический синтез (так получают синтетические аналоги природных антибиотиков,
например хлорамфеникол/левомицетин). Это вещества, которые имеют такую же
структуру.
2. Гиперчувствительность, ее типы. Механизмы возникновения, клиническая
значимость.
Изучение молекулярных механизмов аллергии привело к созданию Джеллом и Кумбсом
в 1968 г. новой классификации. В соответствии с ней различают четыре основных типа
аллергии: анафилактический (I тип), цитотоксический (II тип), иммунокомплексный (III тип)
и опосредованный клетками (IV тип). Первые три типа относятся к ГНТ, четвертый — к ГЗТ.
Ведущая роль в запуске ГНТ играют антитела (IgE, G и М), а ГЗТ — лимфоидно-
макрофагальная реакция.
Аллергическая реакция I типа связана с биологическими эффектами IgE и G4, названных
реагинами, которые обладают цитофильностью — сродством к тучным клеткам и
базофилам. Эти клетки несут на поверхности высокоаффинный FcR, связывающий IgE и G4
и использующий их как ко-рецепторный фактор специфического взаимодействия с
эпитопом аллергена. Связывание аллергена с рецепторным комплексом вызывает
дегрануляцию базофила и тучной клетки — залповый выброс биологически активных
соединений (гистамин, гепарин и др.), содержащихся в гранулах, в межклеточное
пространство. В результате развиваются бронхоспазм, вазодилатация, отек и прочие
симптомы, характерные для анафилаксии. Вырабатываемые цитокины стимулируют
клеточное звено иммунитета: образование Т2-хелпера и эозинофилогенез.
Цитотоксические антитела (IgG, IgM), направленные против поверхностных структур
(антигенов) соматических клеток макроорганизма, связываются с клеточными мембра-
нами клеток-мишеней и запускают различные механизмы антителозависимой
цитотоксичности (аллергическая реакция II типа). Массивный цитолиз сопровождается
соответствующими клиническими проявлениями. Классическим примером является
гемолитическая болезнь в результате резус-конфликта или переливания иногруппной
крови.
Цитотоксическим действием обладают также комплексы атиген—антитело, образующи-
еся в организме пациента в большом количестве после введения массивной дозы
антигена (аллергическая реакция III типа). В связи с кумулятивным эффектом клини-
ческая симптоматика аллергической реакции III типа имеет отсроченную манифестацию,
иногда на срок более 7 суток. Тем не менее этот тип реакции относят к ГНТ. Реакция
может проявляться как одно из осложнений от применения иммунных гетерологичных
сывороток с лечебно-профилактической целью («сывороточная болезнь»), а также при
вдыхании белковой пыли («легкое фермера»).
Лабораторная диагностика аллергии при аллергических реакциях I типа основана на
выявлении суммарных и специфических реагинов (IgE, IgG4) в сыворотке крови пациента.
При аллергических реакциях II типа в сыворотке крови определяют цитотоксические
антитела (антиэритроцитарные, антилейкоцитарные, антитромбоцитарные и др.). При
аллергических реакциях III типа в сыворотке крови выявляют иммунные комплексы. Для
обнаружения аллергических реакций IV типа применяют кожно-аллергические пробы,
которые широко используют в диагностике некоторых инфекционных и паразитарных
заболеваний и микозов (туберкулез, лепра, бруцеллез, туляремия и др.).

Тип реакции Фактор Механизм патогенеза Клинически


патогенез й пример
а
I. анафилактический IgE, IgG4 Образование рецепторного комплекса Анафилаксия
(ГНТ) IgE (G4)-АсК тучных клеток и базофилов ,
→ Взамодействие эпитопа аллергена с анафилактич
рецепторным комплексом → еский шок,
Активация тучных клеток и базофилов поллинозы
→ Высвобождение медиаторов
воспаления и других биологически
активных веществ
II. цитотоксический IgM Выработка цитотоксических антител → Лекарственн
(ГНТ) IgG Активация антителозависимого ая волчанка,
цитолиза аустоиммун
ная
гемолитичес
кая болезнь,
аутоиммунн
ая
тромбоцито
пения
III. IgM Образование избытка иммунных Сывороточна
иммунокомплексный IgG комплексов → Отложение иммунных я болезнь,
(ГНТ) комплексов на базальных мембранах, системные
эндотелии и в соединительнотканной заболевания
строме → Активация соединитель
антителозависимой клеточно- ной ткани,
опосредованной цитотоксичности → феномен
Запуск иммунного воспаления Артюса,
«лёгкое
фермера»
IV. клеточно- Т- Сенсибилизация Т-лимфоцитов → Кожно-
опосредованный лимфоци Активация макрофага → Запуск аллергическ
(ГЗТ) ты иммунного воспаления ая проба,
контактная
аллергия,
белковая
аллергия
замедленног
о типа

К аллергическим реакциям относят два типа реагирования на чужеродное вещество:


гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) и гиперчувствительность замедленного
типа (ГЗТ). К ГНТ относятся аллергические реакции, проявляющиеся уже через 20—30 мин
после повторной встречи с антигеном, а к ГЗТ — реакции, возникающие не ранее чем
через 24—48 ч. Механизм и клинические проявления ГНТ и ГЗТ различны. ГНТ связана с
выработкой антител, а ГЗТ — с клеточными реакциями.
ГЗТ впервые описана Р. Кохом (1890). Эта форма проявления не связана с антителами,
опосредована клеточными механизмами с участием Т-лимфоцитов. К ГЗТ относятся
следующие формы проявления: туберкулиновая реакция, замедленная аллергия к
белкам, контактная аллергия.
В отличие от реакций I, II и III типов реакции IV типа не связаны с антителами, а
обусловлены клеточными реакциями, прежде всего Т-лимфоцитами. Реакции
замедленного типа могут возникать при сенсибилизации организма:
1. Микроорганизмами и микробными антигенами (бактериальными, грибковыми,
протозойными, вирусными); 2. Гельминтами; 3. Природными и искусственно
синтезированными гаптенами (лекарственные препараты, красители); 4. Некоторыми
белками.
Следовательно, реакция замедленного типа может вызываться практически всеми
антигенами. Но наиболее ярко она проявляется на введение полисахаридов,
низкомолекулярных пептидов, т. е. малоиммуногенных антигенов. При этом реакцию
вызывают малые дозы антигенов и лучше всего при внутрикожном введении.
Механизм аллергической реакции этого типа состоит в сенсибилизации Т-лимфоцитов-
хелперов антигеном. Сенсибилизация лимфоцитов вызывает выделение медиаторов, в
частности интерлейкина-2, которые активируют макрофаги и тем самым вовлекают их в
процесс разрушения антигена, вызвавшего сенсибилизацию лимфоцитов.
Цитотоксичность проявляют также и сами Т-лимфоциты. О роли лимфоцитов в
возникновении аллергий клеточного типа свидетельствуют возможность передачи ал-
лергии от сенсибилизированного животного несенсибилизированному с помощью
введения лимфоцитов, а также подавление реакции при помощи антилимфоцитарной
сыворотки.
Морфологическая картина при аллергиях клеточного типа носит воспалительный
характер, обусловленный реакцией лимфоцитов и макрофагов на образующийся
комплекс антигена с сенсибилизированными лимфоцитами.
Аллергические реакции клеточного типа проявляются в виде туберкулиновой реакции,
замедленной аллергии к белкам, контактной аллергии.
Туберкулиновая реакция возникает через 5—6 ч после внутрикожного введения
сенсибилизированным туберкулезной палочкой животным или человеку туберкулина, т.
е. антигенов туберкулезной палочки. Выражается реакция в виде покраснения, при-
пухлости, уплотнения на месте введения туберкулина. Сопровождается иногда
повышением температуры тела, лимфопенией. Развитие реакции достигает максимума
через 24—48 ч. Туберкулиновая реакция используется с диагностической целью для вы-
явления заболеваний туберкулезом или контактов организма с туберкулезной палочкой.
Замедленная аллергия возникает при сенсибилизации малыми дозами белковых
антигенов с адъювантом, а также конъю-гатами белков с гаптенами. В этих случаях
аллергическая реакция возникает не раньше чем через 5 дней и длится 2—3 нед. Видимо,
здесь играют роль замедленное действие конъюгированных белков на лимфоидную
ткань и сенсибилизация Т-лимфо-цитов.
Контактная аллергия возникает, если антигенами являются низкомолекулярные
органические и неорганические вещества, которые в организме соединяются с белками,
образуя конъюга-ты. Конъюгированные соединения, выполняя роль гаптенов, вызывают
сенсибилизацию. Контактная аллергия может возникать при длительном контакте с
химическими веществами, в том числе фармацевтическими препаратами, красками,
косметическими препаратами (губная помада, краска для ресниц). Проявляется
контактная аллергия в виде всевозможных дерматитов, т. е. поражений поверхностных
слоев кожи.
Значение. Все реакции гиперчувствительности, в том числе и ГЗТ имеют большое
значение. Их механизмы лежат в основе воспаления, которое способствует локализации
инфекционного агента или иного антигена в пределах определённых тканей и
формированию полноценной иммунной реакции защитного характера.
3. Возбудители трипаносомозов. Таксономия. Характеристика возбудителей.
Циклы развития. Микробиологическая диагностика.
Все виды рода Trypanosoma патогенны для млекопитающих. У животных они
вызывают тяжёлые, часто смертельные заболевания — нагану (возбудитель — Т. brucei
подвид brucei), сурру (Т. evansi), случную болезнь лошадей (Т. equiperdum) и др.
Африканские трипаносомозы Острый родезийский трипаносомоз (восточно-
африканская сонная болезнь) вызывает Т. brucei подвид rhodesieme. Возбудителя
впервые открыл Г. Фантём (1910). Хронический гамбийский трипаносомоз (западно-
африканская сонная болезнь) вызывает Т. brucei подвид gambiense, которую открыл Д.
Даттон (1902). Возбудители морфологически и серологически идентичны. Их
идентифицируют по биологическим (заражение восприимчивых животных и насекомых-
переносчиков) и биохимическим (сбраживание углеводов) признакам.
А. Трипаносомы, относящиеся к группе Salivaria:
1. Trypanosoma Brucei Brucei
Распространённость
Trypanosoma Brucei Brucei охватывает африканскую область, где распространены
кровососущие мухи рода Glossina, известные как Мухи це-це. Заболевание, которое они
вызывают, называется Нагана.
2. Trypanosoma Brucei Evansi
Распространённость
Встречается в Северной Африке, Малой и Средней Азии, Индии, Индонезии и
Южной Америке. Заболевание известно под названием Сурра.
Патогенез и клинические признаки
Инвазия у собак проявляется как хроническое заболевание с высокой смертностью,
не лечёные животные погибают через 1-2 месяца. Наблюдается интермитирующая
лихорадка, анемия, крапивница, отёки конечностей и нижней части тела, похудение и
спленомегалия. Эти признаки сопровождаются симптомами, свидетельствующими о
поражении ЦНС.
3. Trypanosoma Congolense Congolense
Распространённость
Типичное место распространения – тропическая Африка.
Морфология и цикл развития
Б. Трипаносомы, относящиеся к группе Stercoraria:
1. Trypanosoma Cruzi Cruzi
Трипаносома размером 8 – 20 μм живёт только в крови. Векторы – мухи из рода
Glossina (це-це).
Морфология и цикл развития
Жгутиковая стадия в крови достигает размеров 16 – 20 μм. Находятся в клетках
ретикуло-эндотелиальной системы, скелетной и сердечной мускулатуры, где они
переходят в безжгутиковую стадию размером 2-4 μм. Они способны размножаться
продольным делением и повторной трансформации в промастиготные стадии, которые
возвращаются в кровяное русло. Векторы – Клопы из семейства Reduviidae, у которых
трипаносомы размножаются в заднем отделе кишечника. Выделение инвазированного
кала происходит через 6 – 15 дней или поздже, в зависимости от вида и температуры
окружающей среды. Однажды заражённый клоп является инвазированным всю свою
жизнь. Инвазия передаётся и к последующим стадиям развития этого насекомого, однако
они не передаются трансовариально. Промастиготные стадии инвазируют хозяев в
местах, где кожа повреждена, могут также активно проникать в кожу и слизистые
оболочки, например, в коньюктиву. Собаки и кошки заражаются при поедании клопов,
облизывании поражённого места или поедании мяса заражённого животного.
Диагностика
С трипаносомозами встречаются у импортированных животных или после
туристического визита в области эпизоотий. В острой стадии Трипаносом находят в
периферической крови или в пунктатах лимфоузлов, причём как в нативных мазках, так и
в фиксированных препаратах, окрашенных по Гимзе. Схематическое изображение
трипаносом в кровяном мазке приведено на рис. 2. Более поздние стадии находятся в
спинномозговой жидкости (за исключением T. Congolense Congolense). Можно
использовать также серологические методы, например ELISA или РНГА. У собак
встречаются и Непатогенные трипаносомы Trypanosoma Rangeli и Trypanosoma Congolense
SimiaE. Для точной диагностики, а также для дифференциальной диагностики животных,
подозреваемых в заболевании трипаносомозами, рекомендуется обратиться в
центральную лабораторию.

Билет 14.
1. Генетика бактерий. Плазмиды, структура и свойства. Использование
плазмид в генной инженерии.
Плазмиды — внехромосомные мобильные генетические структуры бактерий,
представляющие собой замкнутые кольца двунитчатой ДНК. По размерам составляют 0,1
—5 % ДНК хромосомы. Плазмиды способны автономно копироваться (реплицироваться) и
существовать в цитоплазме клетки, поэтому в клетке может быть несколько копий
плазмид. Плазмиды могут включаться (интегрировать) в хромосому и реплицироваться
вместе с ней. Различают трансмиссивные и нетрансмиссивные плазмиды. Трансмиссив-
ные (конъюгативные) плазмиды могут передаваться из одной бактерии в другую.
Среди фенотипических признаков, сообщаемых бактериальной клетке плазмидами,
можно выделить следующие:
1) устойчивость к антибиотикам;
2) образование колицинов;
3) продукция факторов патогенности;
4) способность к синтезу антибиотических веществ;
5) расщепление сложных органических веществ;
6) образование ферментов рестрикции и модификации.
Термин «плазмиды» впервые введен американским ученым Дж. Ледербергом (1952) для
обозначения полового фактора бактерий. Плазмиды несут гены, не обязательные для
клетки-хозяина, придают бактериям дополнительные свойства, которые в определенных
условиях окружающей среды обеспечивают их временные преимущества по сравнению с
бесплазмидными бактериями.
Некоторые плазмиды находятся под строгим контролем. Это означает, что их реплика-
ция сопряжена с репликацией хромосомы так, что в каждой бактериальной клетке
присутствует одна или, по крайней мере, несколько копий плазмид.
Число копий плазмид, находящихся под слабым контролем, может достигать от 10 до
200 на бактериальную клетку.
Для характеристики плазмидных реплико-нов их принято разбивать на группы совмести-
мости. Несовместимость плазмид связана с неспособностью двух плазмид стабильно
сохраняться в одной и той же бактериальной клетке. Несовместимость свойственна тем
плазмидам, которые обладают высоким сходством репликонов, поддержание которых в
клетке регулируется одним и тем же механизмом.
Некоторые плазмиды могут обратимо встраиваться в бактериальную хромосому и
функционировать в виде единого репликона. Такие плазмиды называются
интегративными или эписомами.
У бактерий различных видов обнаружены R-плазмиды, несущие гены, ответственные за
множественную устойчивость к лекарственным препаратам — антибиотикам,
сульфаниламидам и др., F-плазмиды, или половой фактор бактерий, определяющий их
способность к конъюгации и образованию половых пилей, Ent-плазмиды,
детерминирующие продукцию энтеротоксина.
Плазмиды могут определять вирулентность бактерий, например возбудителей чумы,
столбняка, способность почвенных бактерий использовать необычные источники
углерода, контролировать синтез белковых антибиотикоподобных веществ —
бактериоцинов, детерминируемых плазмидами бактериоциногении, и т. д.
Существование множества других плазмид у микроорганизмов позволяет полагать, что
аналогичные структуры широко распространены у самых разнообразных
микроорганизмов.
Плазмиды подвержены рекомбинациям, мутациям, могут быть элиминированы
(удалены) из бактерий, что, однако, не влияет на их основные свойства. Плазмиды
являются удобной моделью для экспериментов по искусственной реконструкции
генетического материала, широко используются в генетической инженерии для
получения рекомбинантных штаммов. Благодаря быстрому самокопированию и
возможности конъюгаци-онной передачи плазмид внутри вида, между видами или даже
родами плазмиды играют важную роль в эволюции бактерий.
Бактериальный геном состоит из генетических элементов, способных к самостоятельной
репликации, т. е. репликонов. Репликонами являются бактериальная хромосома и
плазмиды.
Наследственная информация хранится у бактерий в форме последовательности
нуклеотидов ДНК, которые определяют последовательность аминокислот в белке.
Каждому белку соответствует свой ген, т. е. дискретный участок на ДНК, отличающийся
числом и специфичностью последовательности нуклеотидов.
Бактериальная хромосома представлена одной двухцепочечной молекулой ДНК
кольцевой формы. Размеры бактериальной хромосомы у различных представителей
царства Procaryotae варьируют. Бактериальная хромосома формирует компактный
нуклеоид бактериальной клетки. Бактериальная хромосома имеет гаплоидный набор
генов. Она кодирует жизненно важные для бактериальной клетки функции.
Плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные молекулы ДНК. Они кодируют
не основные для жизнедеятельности бактериальной клетки функции, но придающие
бактерии преимущества при попадании в неблагоприятные условия существования.
Свойства микроорганизмов, как и любых других организмов, определяются их генотипом,
т.е. совокупностью генов данной особи. Термин «геном» в отношении микроорганизмов
— почти синоним понятия «генотип».
Фенотип представляет собой результат взаимодействия между генотипом и окружающей
средой, т. е. проявление генотипа в конкретных условиях обитания. Фенотип
микроорганизмов хотя и зависит от окружающей среды, но контролируется генотипом,
так как характер и степень возможных для данной клетки стенотипических изменений
определяются набором генов, каждый из которых представлен определенным участком
молекулы ДНК.
В основе изменчивости лежит либо изменение реакции генотипа на факторы
окружающей среды, либо изменение самого генотипа в результате мутации генов или их
рекомбинации. В связи с этим фенотипическую изменчивость подразделяют на на-
следственную и ненаследственную.
Ненаследственная (средовая, модификационная) изменчивость обусловлена влиянием
внутри- и внеклеточных факторов на проявление генотипа. При устранении фактора,
вызвавшего модификацию, данные изменения исчезают.
Наследственная (генотипическая) изменчивость, связанная с мутациями, — мутационная
изменчивость. Основу мутации составляют изменения последовательности нуклеотидов в
ДНК, полная или частичная их утрата, т. е. происходит структурная перестройка генов,
проявляющаяся фенотипически в виде измененного признака.
Наследственная изменчивость, связанная с рекомбинациями, называется
рекомбинационной изменчивостью.
Подвижные генетические элементы.
В состав бактериального генома, как в бактериальную хромосому, так и в плазмиды,
входят подвижные генетические элементы. К подвижным генетическим элементам от-
носятся вставочные последовательности и транспозоны.
Вставочные (инсерционные) последовательности IS-элементы — это участки ДНК,
способные как целое перемещаться из одного участка репликона в другой, а также между
репликонами. Они содержат лишь те гены, которые необходимы для их собственного
перемещения — транспозиции: ген, кодирующий фермент транспозазу,
обеспечивающую процесс исключения IS-элемента из ДНК и его интеграцию в новый
локус, и ген, детерминирующий синтез репрессора, который регулирует весь процесс
перемещения.
Отличительной особенностью IS-элементов является наличие на концах вставочной
последовательности инвертированных повторов. Эти инвертированные повторы узнает
фермент транспозаза. Транспозаза осуществляет одноцепочечные разрывы цепей ДНК,
расположенных по обе стороны от подвижного элемента. Оригинальная копия IS-
элемента остается на прежнем месте, а ее реплицированный дупликат перемещается на
новый участок.
Перемещение подвижных генетических элементов принято называть репликативной или
незаконной рекомбинацией. Однако в отличие от бактериальной хромосомы и плазмид
подвижные генетические элементы не являются самостоятельными репликонами, так как
их репликация — составной элемент репликации ДНК репликона, в составе которого они
находятся.
Известно несколько разновидностей IS-элементов, которые различаются по размерам и
по типам и количеству инвертированных повторов.
Транспозоны — это сегменты ДНК, обладающие теми же свойствами, что и IS-элементы,
но имеющие структурные гены, т. е. гены, обеспечивающие синтез молекул, обладающих
специфическим биологическим свойством, например токсичностью, или обеспечивающих
устойчивость к антибиотикам.
Перемещаясь по репликону или между репликонами, подвижные генетические элементы
вызывают:
1. Инактивацию генов тех участков ДНК, куда они, переместившись, встраиваются.
2. Образование повреждений генетического материала.
3. Слияние репликонов, т. е. встраивание плазмиды в хромосому.
4. Распространение генов в популяции бактерий, что может приводить к изменению
биологических свойств популяции, смене возбудителей инфекционных заболеваний, а
также способствует эволюционным процессам среди микробов.
Изменения бактериального генома, а следовательно, и свойств бактерий могут происхо-
дить в результате мутаций и рекомбинаций.
2. Анатоксины. Получение, применение.
Молекулярные вакцины – в них антиген находится в молекулярной форме или даже в
виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов,
детерминант.
В процессе культивирования природных патогенных микробов можно получить
протективный антиген, синтезируемый этими бактериями токсин затем превращается в
анатоксин, сохраняющий специфическую антигенность и иммуногенность. Анатоксины
являются одним из видов молекулярных вакцин. Анатоксины – препараты, полученные из
бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные своих токсических свойств, но
сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Получение: токсигенные бактерии
выращивают на жидких средах, фильтруют с помощью бактериальных фильтров для
удаления микробных тел, к фильтрату добавляют 0,4% формалина и выдерживают в
термостате при 30-40t на 4 недели до полного исчезновения токсических свойств,
проверяют на стерильность, токсигенность и иммуногенность. Эти препараты называются
нативными анатоксинам, в настоящее время почти не используются, т. к. содержат
большое количество балластных веществ, неблагоприятно влияющих на организм.
Анатоксины подвергаю физической и химической очистке, адсорбируют на адъювантах.
Такие препараты называются адсорбированными высокоочищенными
концентрированными анатоксинами.
Титрование анатоксинов в реакции фолликуляции производят по стандартной
фолликулирующей атитоксической сыворотке, в которой известно количество
антитоксических единиц. 1 антигенная единица анатоксина обозначается Lf, это то
количество анатоксина, которое вступает в реакцию фолликуляции с 1 единицей
дифтерийного анатоксина.
Анатоксины применяются для профилактики и реже, для лечения токсинемических
инфекций дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк). Так же анатоксины
применяются для получения антитоксических сывороток путем гипериммунизации
животных.
Примеры препаратов: АКДС, АДС, адсорбированный стафилококковый анатоксин,
ботулинистический анатоксин, анатоксины из экзотоксинов возбудителей газовых
инфекций.
3. Возбудитель натуральной оспы и оспы обезьяны. Таксономия.
Характеристика вируса. Микробиологическая диагностика, специфическая
диагностика.
Таксономия. Вирус натуральной оспы — ДНК-содержащий, семейство Poxviridae, род
Orthopoxvirus.
Морфология и антигенная структура. Вирионы поксвирусов имеют кирпичеобразную или
овоидную форму. Вирус натуральной оспы — один из самых крупных вирусов, обнаружен
в световом микроскопе. Вирионы видны при специальных методах окраски в виде так
называемых элементарных телец Пашена (окраска серебрением по Морозову).
Поверхность вириона состоит из нитевидных, овоидных элементов. Оболочка и наружная
мембрана вириона заключают сердцевину (ДНК и белки) и мембрану сердцевины. Геном
вириона — двунитевая линейная ДНК с ковалентно замкнутыми концами. Вирусы имеют
более 30 структурных белков. Антигены — нуклеопротеиновый, растворимые и
гемагглютинин; имеются общие антигены с вирусом вакцины.
Культивирование. Вирус размножается: в куриных эмбрионах с образованием белых
бляшек на хорион-аллантоисной оболочке; в культуре клеток, в цитоплазме которых
формируются характерные околоядерные включения.
Резистентность. Вирусы устойчивы к высушиванию и низким температурам, нечувс-
твительны к эфиру. Моментально погибают при 100С, а при 60С — через 15 мин.
Эпидемиология. Особо опасная конвенционная (карантинная) инфекция. Источником
инфекции является больной человек, который заразен с последних дней инкубационного
периода и до отпадения корок высыпаний. Инфицирование происходит воздушно-
капельным, воздушно-пылевым, а также контактно-бытовым путями при
соприкосновении с вещами больного, загрязненными слизью, гноем, калом и мочой,
содержащими вирус.
Патогенез. Вирус проникает через слизистые оболочки верхних дыхательных путей, реже
— через кожу и после размножения в регионарных лимфатических узлах попадает в
кровь. Из крови возбудитель заносится в кожу и лимфоидные ткани, в которых
происходит размножение вирусов, формируются очаги поражения в коже, слизистых
оболочках и паренхиматозных органах. Характерно образование папулезных высыпаний.
Клиника. Инкубационный период 7—17 дней. Заболевание проявляется высокой
температурой тела, рвотой, головной и поясничной болями, появлением сыпи.
Первоначально сыпь имеет вид розовых пятен, которые затем переходят сначала в узелки
— папулы, а затем — в пузырьки (везикулы) и пустулы , подсыхающие и превращающиеся
в корки.
Различают несколько форм оспы: тяжелую (пустулезно-геморрагическая);
среднетяжелую; легкую (оспа без сыпи, оспа без повышения температуры тела).
Иммунитет. После перенесенной болезни формируется стойкий пожизненный иммуни-
тет, обусловленный появлением вируснейтрализующих антител, интерферонов и актива-
цией факторов клеточного иммунитета.
Микробиологическая диагностика. Исследуют содержимое элементов сыпи, отделяемое
носоглотки, кровь, пораженные органы и ткани. Вирус выявляют при электронной
микроскопии, в РИФ, РП, по образованию телец Гварниери. Выделяют вирус путем
заражения куриных эмбрионов и культур клеток с последующей идентификацией в
реакции нейтрализации (на куриных эмбрионах), РСК, РТГА. Серологическую диагностику
проводят в РТГА, РСК, РИГА, реакции нейтрализации.
Лечение. Симптоматическое; индукторами интерферона и противовирусными
препаратами.
Профилактика. Прочный иммунитет создает живая оспенная вакцина. Ее готовят из
соскобов сыпи телят или при культивировании вируса вакцины (осповакцины) на куриных
эмбрионах. Вакцину вводят накожно. Разработана оральная таблетированная вакцина,
менее реактогенная.
Билет 15.
1. Рост и размножение микробов (время генерации, фазы размножения).
Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-
функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки, а
также размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества
бактериальных клеток в популяции.
Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования.
Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами. Актиномицеты, являясь
ветвящимися бактериями, размножаются путем фрагментации нитевидных клеток.
Грамположительные бактерии делятся путем врастания синтезирующихся перегородок
деления внутрь клетки, а грамотрицательные — путем перетяжки, в результате
образования гантелевид-ных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.
Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по
полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая нить
достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению молекул ДНК
бактериального ядра — нуклеоида.
Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост цепи, и
терминация.
Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в
определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют
питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и
прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют
периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия
культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной
среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование
называется непрерывным, а культура — непрерывной.
При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный,
диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры. Рост периодической
культуры бактерий, выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на
несколько фаз, или периодов:
1. лаг-фаза;
2. фаза логарифмического роста;
3. фаза стационарного роста, или максимальной концентрации
бактерий;
4. фаза гибели бактерий.
Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения бактерий,
отражающей зависимость логарифма числа живых клеток от времени их
культивирования.

Лаг-фаза — период между посевом бактерий и началом размножения.


Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в раз-
мерах и готовятся к делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других
компонентов.
Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом интенсивного
деления бактерий. Продолжительность ее около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста
бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее ра-
нимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов метаболизма
интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др.
Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жизнеспособных
клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень (М-концентрация). Ее
продолжительность выражается в часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их
особенностей и культивирования.
Завершает процесс роста бактерий фаза гибели, характеризующаяся отмиранием бак-
терий в условиях истощения источников питательной среды и накопления в ней
продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее колеблется от 10 ч до
нескольких недель. Интенсивность роста и размножения бактерий зависит от многих фак-
торов, в том числе оптимального состава питательной среды, окислительно-
восстановительного потенциала, рН, температуры и др.
Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие на плотных
питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или
неровными краями (S- и R-формы), различной консистенции и цвета, зависящего от
пигмента бактерий.
Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают её.
Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических
растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в
органических соединениях.
Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины,
ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного,
коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений.
Меланины наряду с каталазой, супероксидцисмутазой и пероксидазами защищают
микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие
пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием.
2. Реакции лизиса (бактериолиза, и гемолиза). Механизм, компоненты,
способы постановки. Применение.
Одним из защитных свойств иммунной сыворотки является ее способность растворять
микробы или клеточные элементы, поступающие в организм.
Специфические антитела, обуславливающие растворение (лизис) клеток, называются
лизинами. В зависимости от характера антигена они могу быть бактериолизинами,
цитолизинами, спирохетолизинами, гемолизинами и др.
Лизины проявляют свое действие только в присутствии дополнительного фактора –
комплемента.
Комплемент, как фактор неспецифического гуморального иммунитета, обнаружен почти
во всех жидкостях организма, кроме спинномозговой жидкости и жидкости передней
камеры глаза. Довольно высокое и постоянное содержание комплемента отмечено в
сыворотке крови человека и очень много его в сыворотке крови морской свинки. У
остальных млекопитающих содержание комплемента в сыворотке крови различно.
Комплемент – это сложная система сывороточных протеинов. Он нестоек и разрушается
при 55 градусах в течение 30 минут. При комнатной температуре комплемент
разрушается в течение двух часов. Очень чувствителен к продолжительному
встряхиванию, к действию кислот и ультрафиолетовых лучей. Однако, комплемент
длительно (до шести месяцев) сохраняется в высушенном состоянии при низкой
температуре.
Комплемент способствует лизису микробных клеток и эритроцитов.
Различают реакцию бактериолиза и гемолиза.
Суть реакции бактериолиза состоит в том, что при соединении специфической иммунной
сыворотки с соответствующими ей гомологичными живыми микробными клетками в
присутствии комплемента происходит лизис микробов.
Реакция гемолиза состоит в том, что при воздействии на эритроциты специфической,
иммунной по отношению к ним сывороткой (гемолитической) в присутствии
комплемента, наблюдается растворение эритроцитов, т.е. гемолиз.
Реакция гемолиза в лабораторной практике используется для определения тира
комплемента, а также для учета результатов диагностических реакций связывания
комплемента «Борде – Жангу» и «Вассермана».
Титр комплемента – это наименьшее его количество, которое обуславливает лизис
эритроцитов в течение 30 минут в гемолитической системе в объеме 2,5мл. Реакция
лизиса, как и все серологические реакции происходит в присутствии электролита. 
3. Токсоплазмоз. Характеристика возбудителя, особенности
культивирования, способы заражения и патогенез. Методы диагностики.
Специфическая терапия и профилактика.
Возбудитель — Toxoplasma gondii, относится к простейшим организмам, классу
споровиков. Впервые токсоплазмы были обнаружены Николем и Мансо в 1908 г. у
грызунов гонди в Северной Африке. Токсоплазмы имеют форму дольки апельсина или
арки (toxon — арка), размер 4—7 мкм. Обладают медленной подвижностью скользящего
или вращательного типа, хотя специальных органов движения не имеют. Окрашиваются
по Романовскому — Гимзе, гематоксилин-эозином. В процессе развития токсоплазмы
проходят стадию пролифративных форм, псевдоцист и цист. В остром периоде
заболевания размножаются в цитоплазме клеток, образу большие скопления —
псевдоцисты. При разрушении клетки токсоплазмы освобождаются и с током крови раз
носятся в другие органы и ткани. В хронической стадии обнаруживают скопления
токсоплазм, покрытых плотно эластичной оболочкой, размером 40—50 мкм (истинны
цисты). У кошек токсоплазмы проходят половой цикл развития с образованием ооцист,
которые выделяются в внешнюю среду с фекалиями и созревают до инвазионной стадии.
Культивируются токсоплазмы только в клетках куль туры тканей, куриного эмбриона и в
организме животного.
Устойчивость. Вегетативные формы чувствительны к высушиванию, нагреванию,
действию дезинфицирующих веществ: 1% раствора фенола, 2% раствора хлорамина 1%
раствора хлористоводородной кислоты. Более устойчивы к низким температурам.
Устойчивость цист и ооцис достаточно велика.
Патогенез и клиника. Клинические проявления токсоплазмоза весьма разнообразны.
Различают приобретенный токсоплазмоз, при котором возможны поражение
лимфатических узлов, глаз, сердца, легких, кишечника мозга и мозговых оболочек. Чаще
токсоплазмоз протекает в скрытой форме, выявить которую удается только при
серологических исследованиях. В настоящее врем изучен врожденный токсоплазмоз,
передача токсоплазм при котором происходит от матери плоду через плаценту. При
инфицировании плода в ранние сроки беременности возможны его смерть и
самопроизвольные выкидыши аборты, преждевременные роды. У родившегося ребенок
наблюдаются поражения центральной нервной системы глаз, различные дефекты
развития; анэнцефалия, анофтальмия, отсутствие конечностей, болезнь Дауна.

Микробиологическая диагностика. Для лабораторной диагностики токсоплазмоза


используют различные методы. Материалом для исследования служат кровь, ликвор,
биопсийные кусочки органов, удаленные лимфатические узлы, миндалины, остатки
плодов, околоплодные воды. Для микроскопии готовят мазки или отпечатки, фиксируют
спиртом и окрашивают по Романовскому. При постановке биопробы заражают
чувствительных к токсоплазмам животных.
Белым мышам исследуемый материал вводят внутрибрюшинно по 0,5 мл. У погибших на
3—4-й день мышей токсоплазмы обнаруживают в экссудате из брюшной полости и в
мазках-отпечатках из органов. Применяют реакцию Себина — Фельдмана, принцип
которой состоит в том, что живые внеклеточные токсоплазмы, помещенные в иммунную
сыворотку, теряют способность окрашиваться метиленовым синим и сохраняют свою
форму. Аллергический метод внутрикожных проб с токсоплазмином является методом
поздней диагностики. Постановка реакции аналогична пробе Манту при туберкулезе.
Реакцию считают положительной при образовании на месте введения токсоплазмина
инфильтрата и эритемы размером не менее 10X10 мм. Для диагностики токсоплазмоза
используют также РСК и РИГА с эритроцитами, обработанными антигеном из токсоплазм.
 В диагностике Т. применяют выделение возбудителей путем внутрибрюшинного
заражения белых мышей, на КЭ, установлением диагностического титра Ат в РСК, РПГА,
РИФ, ИФА, реакции с красителем (Себина -Фельдмана), постановкой кожно-
аллергической пробы с токсоплазмином.
Специфическая профилактика при токсоплазмозе не разработана.
С целью лечения применяют хлоридин и сульфадимезин в комплексе с витаминами.
Билет 16.
1. Рост и размножение микробов (время генерации, фазы размножения).
Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-
функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки, а
также размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества
бактериальных клеток в популяции.
Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования.
Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами. Актиномицеты, являясь
ветвящимися бактериями, размножаются путем фрагментации нитевидных клеток.
Грамположительные бактерии делятся путем врастания синтезирующихся перегородок
деления внутрь клетки, а грамотрицательные — путем перетяжки, в результате
образования гантелевид-ных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.
Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по
полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая нить
достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению молекул ДНК
бактериального ядра — нуклеоида.
Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост цепи, и
терминация.
Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в
определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют
питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и
прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют
периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия
культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной
среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование
называется непрерывным, а культура — непрерывной.
При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный,
диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры. Рост периодической
культуры бактерий, выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на
несколько фаз, или периодов:
1. лаг-фаза;
2. фаза логарифмического роста;
3. фаза стационарного роста, или максимальной концентрации
бактерий;
4. фаза гибели бактерий.
Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения бактерий,
отражающей зависимость логарифма числа живых клеток от времени их
культивирования.

Лаг-фаза — период между посевом бактерий и началом размножения.


Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в раз-
мерах и готовятся к делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других
компонентов.
Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом интенсивного
деления бактерий. Продолжительность ее около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста
бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее ра-
нимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов метаболизма
интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др.
Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жизнеспособных
клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень (М-концентрация). Ее
продолжительность выражается в часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их
особенностей и культивирования.
Завершает процесс роста бактерий фаза гибели, характеризующаяся отмиранием бак-
терий в условиях истощения источников питательной среды и накопления в ней
продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее колеблется от 10 ч до
нескольких недель. Интенсивность роста и размножения бактерий зависит от многих фак-
торов, в том числе оптимального состава питательной среды, окислительно-
восстановительного потенциала, рН, температуры и др.
Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие на плотных
питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или
неровными краями (S- и R-формы), различной консистенции и цвета, зависящего от
пигмента бактерий.
Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают её.
Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических
растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в
органических соединениях.
Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины,
ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного,
коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений.
Меланины наряду с каталазой, супероксидцисмутазой и пероксидазами защищают
микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие
пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием.
2. Антителообразование: первичный и вторичный иммунный ответ.
Способность к образованию антител появляется во внутриутробном периоде у 20-
недельного эмбриона; после рождения начинается собственная продукция
иммуноглобулинов, которая увеличивается до наступления зрелого возраста и несколько
снижается к старости. Динамика образования антител имеет различный характер в
зависимости от силы антигенного воздействия (дозы антигена), частоты воздействия
антигена, состояния организма и его иммунной системы. При первичном и повторном
введении антигена динамика антителообразования также различна и протекает в
несколько стадий. Выделяют латентную, логарифмическую, стационарную фазу и фазу
снижения.
В латентной фазе происходят переработка и представление антигена
иммунокомпетентным клеткам, размножение клона клеток, специализированного на
выработку антител к данному антигену, начинается синтез антител. В этот период
антитела в крови не обнаруживаются.
Во время логарифмической фазы синтезированные антитела высвобождаются из
плазмоцитов и поступают в лимфу и кровь.
В стационарной фазе количество антител достигает максимума и стабилизируется, затем
наступает фаза снижения уровня антител. При первичном введении антигена (первичный
иммунный ответ) латентная фаза составляет 3—5 сут, логарифмическая — 7— 15 сут,
стационарная — 15—30 сут и фаза снижения — 1—6 мес и более. Особенностью
первичного иммунного ответа является то, что первоначально синтезируется IgM, а затем
IgG.
В отличие от первичного иммунного ответа при вторичном введении антигена (вторичный
иммунный ответ) латентный период укорочен до нескольких часов или 1—2 сут,
логарифмическая фаза характеризуется быстрым нарастанием и значительно более
высоким уровнем антител, который в последующих фазах длительно удерживается и
медленно, иногда в течение нескольких лет, снижается. При вторичном иммунном ответе
в отличие от первичного синтезируются главным образом IgG.
Такое различие динамики антителообразования при первичном и вторичном иммунном
ответе объясняется тем, что после первичного введения антигена в иммунной системе
формируется клон лимфоцитов, несущих иммунологическую память о данном антигене.
После повторной встречи с этим же антигеном клон лимфоцитов с иммунологической
памятью быстро размножается и интенсивно включает процесс антителогенеза.
Очень быстрое и энергичное антителообразование при повторной встрече с антигеном
используется в практических целях при необходимости получения высоких титров антител
при производстве диагностических и лечебных сывороток от иммунизированных
животных, а также для экстренного создания иммунитета при вакцинации.
3. Возбудители лептоспироза. Таксономия. Характеристика возбудителей.
Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика.
Лептоспиры являются возбудителями зоонозной бактериальной инфекции, харак-
теризующейся волнообразной лихорадкой, интоксикацией, поражением капилляров
печени, почек, ЦНС.
Возбудитель L. interrhogans относится к семейству Leptospiraceae, poд Leptospira.
Морфология. Лептоспиры представляют собой тонкие спирохеты, с изогнутыми концами.
Двигательный аппарат - фибриллы. Легко различимы при микроскопии в темном поле и
фазово-контрасте. Цист не образуют.
Культуральные и биохимические свойства. Аэробы. Источником углерода и энергии слу-
жат липиды. Каталаза-и оксидазаположительны. Культивируются на питательных средах,
содержащих сыворотку или сывороточный альбумин, при температуре 30С. Особенность
роста на жидкой питательной среде — отсутствие помутнения. Делятся поперечным
делением. Растут медленно. Цист не образуют.
Антигенная структура. Содержат общеродовой антиген белковой природы, выявляемый в
PCК, а также вариантоспецифический поверхностный антиген липополисахаридной при-
роды, выявляемый в реакции агглютинации. Таксономическим критерием для лептоспир
служит антигенный состав. Основным таксоном является серовар. Серовары объединены
в серогруппы (насчитывается более 25 серогрупп).
Резистентность. L. interrhogans чувствительна к высыханию, нагреванию, низким зна-
чениям рН, дезинфицирующим веществам. При нагревании до 56С погибает в течение 25
—30 мин. Кипячение убивает микроб мгновенно.
Эпидемиология. Лептоспироз относится к природно-очаговым зоонозам, с преимущес-
твенно фекально-оральным механизмом передачи возбудителя. Основным резервуаром
и источником инфекции служат домовые и полевые грызуны, дополнительными — до-
машние животные. У диких животных инфекция имеет хроническое течение без клини-
ческих проявлений, при этом возбудитель выделяется с мочой, загрязняя водоемы и
почву. Каждый из сероваров циркулирует в популяции определенного вида животного и
является самостоятельным возбудителем заболевания. Восприимчивость людей к
лептоспирозу высокая, но больной человек, хотя и выделяет лептоспиры в окружающую
среду не имеет практического значения в распространении заболевания. Основные пути
передачи: водный, алиментарный, контактный.
Факторы патогенности. Некоторые серовары характеризуются гемолитической и липазной
активностью, продуцируют плазмокоагулазу, фибринолизин, цитотоксины.
Патогенез и клиника заболевания. острая инфекционная болезнь, которая вызывается
различными сероварами. Инкубационный период составляет 7—10 дней. Входные ворота
— слизистые оболочки пищеварительного тракта, поврежденная кожа. Проникнув в
организм, микроб с кровью разносится к органам ретикулоэндотелиальной системы
(печень, почки), где размножается и вторично поступает в кровь, что совпадает с началом
болезни.
Возбудитель поражает капилляры печени, почек, ЦНС, что приводит к развитию гемор-
рагии в этих органах. Болезнь протекает остро, с явлениями волнообразной лихорадки,
интоксикации, с желтухой, развитием почечной недостаточности, асептического
менингита.
Иммунитет: Стойкий, гуморальный, серовароспецифический иммунитет.
Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат кровь, спин-
номозговая жидкость, моча, сыворотка крови в зависимости от стадии заболевания. Для
диагностики используют бактериоскопический (обнаружение лептоспир в темнопольном
микроскопе), бактериологический и серологические методы (РА, РСК), а также применяют
ПЦР. Биопробу на кроликах.
Профилактика и лечение. Специфическая профилактика проводится вакцинацией по
эпидемическим показаниям убитой нагреванием, корпускулярной вакциной, содержащей
4 основных серогруппы возбудителя. Для лечения используют антибиотики (пенициллин,
тетрациклин) в сочетании с лептоспирозным гетерологичным иммуноглобулином.
Билет 17.
1. Антибиотики. Классификация, механизм действия антибактериальных
препаратов. Осложнения антибиотикотерапии (дисбактериоз,
кандидомикоз).
Антибиотики — химиотерапевтические вещества, продуцируемые микроорганизмами,
животными клетками, растениями, а также их производные и синтетические продукты,
которые обладают избирательной способностью угнетать и задерживать рост
микроорганизмов, а также подавлять развитие злокачественных новообразований.
За тот период, который прошел со времени открытия П.Эрлиха, было получено более 10
000 различных антибиотиков, поэтому важной проблемой являлась систематизация этих
препаратов. В настоящее время существуют различные классификации антибиотиков,
однако ни одна из них не является общепринятой.
В основу главной классификации антибиотиков положено их химическое строение.
Наиболее важными классами синтетических антибиотиков являются хинолоны и
фторхинолоны (например, ципрофлоксацин), сульфаниламиды (сульфадиметоксин),
имидазолы (метронидазол), нитрофураны (фурадонин, фурагин).
По спектру действия антибиотики делят на пять групп в зависимости от того, на какие
микроорганизмы они оказывают воздействие. Кроме того, существуют
противоопухолевые антибиотики, продуцентами которых также являются актиномицеты.
Каждая из этих групп включает две подгруппы: антибиотики широкого и узкого спектра
действия.
Антибактериальные антибиотики составляют самую многочисленную группу
препаратов. Преобладают в ней антибиотики широкого спектра действия, оказывающие
влияние на представителей всех трех отделов бактерий. К антибиотикам широкого
спектра действия относятся аминогликозиды, тетрациклины и др. Антибиотики узкого
спектра действия эффективны в отношении небольшого круга бактерий, например полет-
миксины действуют на грациликутные, ванкомицин влияет на грамположительные
бактерии.
В отдельные группы выделяют противотуберкулезные, противолепрозные,
противосифилитические препараты.
Противогрибковые антибиотики включают значительно меньшее число препаратов.
Широким спектром действия обладает, например, амфотерицин В, эффективный при
кандидозах, бластомикозах, аспергиллезах; в то же время нистатин, действующий на
грибы рода Candida, является антибиотиком узкого спектра действия.
Антипротозойные и антивирусные антибиотики насчитывают небольшое число
препаратов.
Противоопухолевые антибиотики представлены препаратами, обладающими
цитотоксическим действием. Большинство из них применяют при многих видах опухолей,
например митоми-цин С.
Действие антибиотиков на микроорганизмы связано с их способностью подавлять те или
иные биохимические реакции, происходящие в микробной клетке.
В зависимости от механизма действия различают пять групп антибиотиков:
1. антибиотики, нарушающие синтез клеточной стенки. К этой группе относятся,
например, β-лактамы. Препараты этой группы характеризуются самой высокой
избирательностью действия: они убивают бактерии и не оказывают влияния на клетки
микроорганизма, так как последние не имеют главного компонента клеточной стенки
бактерий — пептидогликана. В связи с этим β -лактамные антибиотики являются
наименее токсичными для макроорганизма;
2. антибиотики, нарушающие молекулярную организацию и синтез клеточных мембран.
Примерами подобных препаратов являются полимиксины, полиены;
3. антибиотики, нарушающие синтез белка; это наиболее многочисленная группа
препаратов. Представителями этой группы являются аминогликозиды, тетрациклины,
макроли-ды, левомицетин, вызывающие нарушение синтеза белка на разных уровнях;
4. антибиотики — ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот. Например, хинолоны
нарушают синтез ДНК, рифампицин — синтез РНК;
5. антибиотики, подавляющие синтез пуринов и аминокислот. К этой группе относятся,
например, сульфаниламиды.
Источники антибиотиков.
Основными продуцентами природных антибиотиков являются микроорганизмы, которые,
находясь в своей естественной среде (в основном, в почве), синтезируют антибиотики в
качестве средства выживания в борьбе за существование. Животные и растительные
клетки также могут вырабатывать некоторые вещества с селективным антимикробным
действием (например, фитонциды), однако широкого применения в медицине в качестве
продуцентов антибиотиков они не получили.
Таким образом, основными источниками получения природных и полусинтетических
антибиотиков стали:
• Актиномицеты (особенно стрептомицеты) — ветвящиеся бактерии. Они синтезируют
большинство природных антибиотиков (80 %).
• Плесневые грибы — синтезируют природные бета-лактамы (грибы рода Cephalosporium
и Penicillium)H фузидиевую кислоту.
• Типичные бактерии — например, эубактерии, бациллы, псевдомонады — продуцируют
бацитрацин, полимиксины и другие вещества, обладающие антибактериальным
действием.
Способы получения.
Существует три основных способа получения антибиотиков:
• биологический синтез (так получают природные антибиотики — натуральные продукты
ферментации, когда в оптимальных условиях культивируют микробы-продуценты,
которые выделяют антибиотики в процессе своей жизнедеятельности);
• биосинтез с последующими химическими модификациями (так создают
полусинтетические антибиотики). Сначала путем биосинтеза получают природный
антибиотик, а затем его первоначальную молекулу видоизменяют путем химических
модификаций, например присоединяют определенные радикалы, в результате чего
улучшаются противомикробные и фармакологические характеристики препарата;
• химический синтез (так получают синтетические аналоги природных антибиотиков,
например хлорамфеникол/левомицетин). Это вещества, которые имеют такую же
структуру.
Как и всякие лекарственные средства, практически каждая группа антимикробных
химиопрепаратов может оказывать побочное действие, причем и на макроорганизм, и на
микробы, и на другие лекарственные средства.
Осложнения со стороны макроорганизма
Наиболее частыми осложнениями антимикробной химиотерапии являются:
Токсическое действие препаратов. Как правило, развитие этого осложнения зависит от
свойств самого препарата, его дозы, способа введения, состояния больного и проявляется
только при длительном и систематическом применении антимикробных
химиотерапевтических препаратов, когда создаются условия для их накопления в
организме. Особенно часто такие осложнения бывают, когда мишенью действия
препарата являются процессы или структуры, близкие по составу или строению к
аналогичным структурам клеток макроорганизма. Токсическому действию
антимикробных препаратов особенно подвержены дети, беременные, а также пациенты с
нарушением функций печени, почек.
Побочное токсическое влияние может проявляться как нейротоксическое (например,
гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие, вплоть до полной
потери слуха за счет воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое (полиены,
полипептиды, аминогликозиды, макролиды, гликопептиды, сульфаниламиды);
общетоксическое (противогрибковые препараты — полиены, имидазолы); угнетение
кроветворения (тетрациклины, сульфаниламиды, левомицетин/хлорамфеникол, который
содержит нитробензен — супрессор функции костного мозга); тератогенное [ами-
ногликозиды, тетрациклины нарушают развитие костей, хрящей у плода и детей,
формирование зубной эмали (коричневая окраска зубов), левомицетин/хлорамфеникол
токсичен для новорожденных, у которых ферменты печени не полностью сформированы
(«синдром серого ребенка»), хинолоны — действуют на развивающуюся хрящевую и
соединительную ткани].
Предупреждение осложнений состоит в отказе от противопоказанных данному пациенту
препаратов, контроле за состоянием функций печени, почек и т. п.
Дисбиоз (дисбактериоз). Антимикробные химиопрепараты, особенно широкого спектра,
могут воздействовать не только на возбудителей инфекций, но и на чувствительные
микроорганизмы нормальной микрофлоры. В результате формируется дисбиоз, поэтому
нарушаются функции ЖКТ, возникает авитаминоз и может развиться вторичная инфекция
(в том числе эндогенная, например кандидоз, псевдомембранозный колит).
Предупреждение последствий такого рода осложнений состоит в назначении, по
возможности, препаратов узкого спектра действия, сочетании лечения основного
заболевания с противогрибковой терапией (например, назначением нистатина),
витаминотерапей, применением эубиотиков и т. п.
Отрицательное воздействие на иммунную систему. К этой группе осложнений относят
прежде всего аллергические реакции. Причинами развития гиперчувствительности может
быть сам препарат, продукты его распада, а также комплекс препарата с сывороточными
белками. Возникновение такого рода осложнений зависит от свойств самого препарата,
от способа и кратности его введения, индивидуальной чувствительности пациента к
препарату. Аллергические реакции развиваются примерно в 10 % случаев и проявляются в
виде сыпи, зуда, крапивницы, отека Квинке. Относительно редко встречается такая
тяжелая форма проявления аллергии, как анафилактический шок. Такое осложнение чаще
дают бета-лактамы (пенициллины), рифамицины. Сульфаниламиды могут вызвать
гиперчувствительность замедленного типа. Предупреждение осложнений состоит в тща-
тельном сборе аллергоанамнеза и назначении препаратов в соответствии с
индивидуальной чувствительностью пациента. Кроме того, антибиотики обладают
некоторым иммунодепрессивным действием и могут способствовать развитию
вторичного иммунодефицита и ослаблению напряженности иммунитета.
Эндотоксический шок (терапевтический). Это явление, которое возникает при лечении
инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями. Введение антибиотиков
вызывает гибель и разрушение клеток и высвобождение больших количеств эндотоксина.
Это закономерное явление, которое сопровождается временным ухудшением кли-
нического состояния больного.
Взаимодействие с другими препаратами. Антибиотики могут способствовать потен-
цированию действия или инактивации других препаратов (например, эритромицин стиму-
лирует выработку ферментов печени, которые начинают ускоренно метаболизировать ле-
карственные средства разного назначения).
Побочное воздействие на микроорганизмы.
Применение антимикробных химиопрепа-ратов оказывает на микробы не только прямое
угнетающее или губительное воздействие, но также может привести к формированию
атипичных форм микробов (например, к образованию L-форм бактерий или изменению
других свойств микробов, что значительно затрудняет диагностику инфекционных забо-
леваний) и персистирующих форм микробов. Широкое использование антимикробных ле-
карственных средств ведет также к формированию антибиотикозависимости (редко) и
лекарственной устойчивости — антибиотикорезистентности (достаточно часто).
2. Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных
инфекций.
Иммунные реакции используют при диагностических и иммунологических исследо-
ваниях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы, т.
е. методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген—антитело,
определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.
Обнаружение в сыворотке крови больного антител против антигенов возбудителя
позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также
для идентификации антигенов микробов, различных биологически активных веществ,
групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов
клеток и др.
При выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем
изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е.
сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические ан-
титела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов.
В микробиологии и иммунологии широко применяются реакции агглютинации, преци-
питации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых
антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный,
иммунофлюоресцентный методы). Перечисленные реакции различаются по
регистрируемому эффекту и технике постановки, однако, все они основаны на реакции
взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и
антигенов. Реакции иммунитета характеризуются высокой чувствительностью и
специфичностью.
Особенности взаимодействия антитела с антигеном являются основой диагностических
реакций в лабораториях. Реакция in vitro между антигеном и антителом состоит из специ-
фической и неспецифической фазы. В специфическую фазу происходит быстрое специфи-
ческое связывание активного центра антитела с детерминантой антигена. Затем наступает
неспецифическая фаза — более медленная, которая проявляется видимыми
физическими явлениями, например образованием хлопьев (феномен агглютинации) или
преципитата в виде помутнения. Эта фаза требует наличия определенных условий
(электролитов, оптимального рН среды).
Связывание детерминанты антигена (эпитопа) с активным центром Fab-фрагмента анти-
тел обусловлено ван-дер-ваальсовыми силами, водородными связями и гидрофобным
взаимодействием. Прочность и количество связавшегося антигена антителами зависят от
аффинности, авидности антител и их валентности.
3. Возбудитель ботулизма. Таксономия. Характеристика возбудителя.
Патогенез инфекции. Микробиологическая диагностика. Специфические
лечебно-профилактические препараты.
Ботулизм — острое инфекционное заболевание, характеризующееся интоксикацией
организма с преимущественным поражением центральной нервной системы. Болезнь
возникает в результате употребления пищевых продуктов, содержащих токсины
Clostridium botulinum.
Таксономия. Возбудитель ботулизма относится к отделу Firmicutes, роду Clostridium.
Морфологические и тинкториальные свойства. C.botulinum — грамположительные
палочки с закругленными концами, образуют споры и имеют вид веретена. Капсулой не
обладают, перитрихи.
Культуральные свойства. Строгий анаэроб. Оптимальными для его роста являются
температура 30С. На кровяном агаре образует небольшие прозрачные колонии. В
столбике сахарного агара можно обнаружить R-формы формы зерен чечевицы и S-формы
– пушинок.
Биохимическая активность. Выделяют 4 группы: бактерии I группы – выраженные
протеолитические свойства, гидролизуют желатину, ферментируют глк. и мальтозу; II
группы – проявляют сахаролитическую активность, протеолитической – нет. III группа –
проявляют липазную активность, гидролизуют желатину. VI – гидролизуют желатину, не
проявляют сахаролитических свойств.
Все типы образуют желатиназу, лецитиназу, H2S.Бактерии типа А,В,Е,F – ферментируют
глк., фруктозу, мальтозу, сахарозу. Типа С,D – глк, мальтозу.
Антигенные свойства. Имеются группоспецифические жгутиковые – Н и
типоспецифические О-АГ бактерий ,не проявляющие токсических свойств. По структуре
экзотоксинов бактерии разделяют на 8 сероваров: А, В, С1,С2, D, E, F и G.
Факторы патогенности. Выделяет экзотоксин, самый сильный из всех биологических ядов.
Ботулинический экзотоксин обладает нейротоксическим действием. Его особенностью
является высокая устойчивость к нагреванию (сохраняется в течение 10—15 мин при 100
°С), к кислой среде, высоким концентрациям поваренной соли, замораживанию,
пищеварительным ферментам.
Резистентность. Споры обладают очень большой резистентностью к высокой температуре
(выдерживают кипячение в течение 3—5 ч).
Эпидемиология. Широко распространен в природе. Его обнаруживают в организме
животных, рыб, откуда он попадает в почву и воду. В почве C.botulinum долгое время
сохраняется в виде спор и даже может размножаться, что позволяет отнести ботулизм к
сапронозным инфекциям. Из почвы возбудитель попадает в пищевые продукты и при
наличии анаэробных условий размножается там и выделяет экзотоксин. Путь заражения
ботулизмом — пищевой. Чаще всего фактором передачи этой инфекции являются
консервы (как правило, домашнего приготовления) — грибные, овощные, мясные,
рыбные.
Патогенез. Ботулинический токсин попадает с пищей в ЖКТ. Устойчивый к действию
пищеварительных ферментов и хлористоводородной кислоты, токсин всасывается через
стенку кишечника в кровь и обусловливает длительную токсинемию. Токсин связывается
нервными клетками и блокирует передачу импульсов через нервно-мышечные синапсы.
В результате развивается паралич мышц гортани, глотки, дыхательных мышц, что
приводит к нарушению глотания и дыхания; наблюдаются изменения со стороны органа
зрения.
Клиника. Инкубационный период продолжается от 6—24 ч до 2—6 дней и более. Чем
короче инкубационный период, тем тяжелее протекает болезнь. Обычно болезнь
начинается остро, но температура тела остается нормальной. Возможны различные
варианты ботулизма — с преобладанием симптомов поражения ЖКТ, зрения, глотания,
речи или дыхательной функции. В первом случае болезнь начинается с появления сухости
во рту, тошноты, рвоты, поноса, во втором — начальные проявления болезни связаны с
нарушениями со стороны зрения (снижение остроты зрения, двоение). В результате
паралича мышц гортани появляется осиплость, а затем голос пропадает.
Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет не формируется. Однако введение
ботулинических анатоксинов создает прочный искусственный вариантоспецифический
антитоксический иммунитет.
Микробиологическая диагностика. Исследуют промывные воды желудка, рвотные
массы, остатки пищи, кровь. Применяют бактериологический метод, биологический
(реакцию нейтрализации токсина антитоксином), с помощью реакции обратной непрямой
гемагглютинации, и серологический (РПГА) методы, позволяющие выявить в исследуемом
материале ботулинический токсин.
Лечение. Антитоксические противоботулинические гетерологичные сыворотки и
гомологичные иммуноглобулины.
Профилактика. Соблюдение правил приготовления продуктов, домашних консервов. Для
специфической активной профилактики ботулизма разработаны и применяются по
показаниям тетра- и трианатоксины, в состав которых входят ботулинические анатоксины
типов А, В и Е. Для экстренной пассивной профилактики используют
противоботулинические антитоксические сыворотки.
Билет 18.
1. Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные
и вирулентные бактериофаги. Лизогения. Обнаружение. Практическое
применение.
Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически про-
никать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение
(лизис).
Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. По механизму взаимодействия
различают вирулентные и умеренные фаги.
Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно
репродуцируются в ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия
вирулентного фага с бактерией протекает в виде нескольких стадий и весьма схож с
процессом взаимодействия вирусов человека и животных с клеткой хозяина. Однако для
фагов, имеющих хвостовой отросток с сокращающимся чехлом, он имеет особенности.
Эти фаги адсорбируются на поверхности бактериальной клетки с помощью фибрилл
хвостового отростка. В результате активации фагового фермента АТФазы происходит
сокращение чехла хвостового отростка и внедрение стержня в клетку. В процессе
«прокалывания» клеточной стенки бактерии принимает участие фермент лизоцим,
находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага, содержащаяся в
головке, проходит через полость хвостового стержня и активно впрыскивается в
цитоплазму клетки. Остальные структурные элементы фага (капсид и отросток) остаются
вне клетки.
После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной клетке
накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового лизоцима и
внутриклеточного осмотического давления происходит разрушение клеточной стенки,
выход фагового потомства в окружающую среду и лизис бактерии. Один литический цикл
(от момента адсорбции фагов до их выхода из клетки) продолжается 30—40 мин. Процесс
бактериофагии проходит несколько циклов, пока не будут лизированы все
чувствительные к данному фагу бактерии.
Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризу ется определенной
степенью специфичности. По специфичности действия различают поливалентные фаги,
способные взаимодействовать с родственными видами бактерий, моновалентные фаги,
взаимодействующие с бактериями определенного вида, и типовые фаги,
взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий.
Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они вступают
в симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком случае
геномом фага называют профаг. Профаг, ставший частью хромосомы клетки, при ее
размножении реплицируется синхронно с геном бактерии, не вызывая ее лизиса, и
передается по наследству от клетки к клетке неограниченному числу потомков.
Биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом)
называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг, получила название
лизогенной. Это название отражает способность профага самопроизвольно или под
действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки и
переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий бактерии.
Лизогенные культуры по своим основным свойствам не отличаются от исходных, но
они невосприимчивы к повторному заражению гомологичным или близкородственным
фагом и, кроме того, приобретают дополнительные свойства, которые находятся под
контролем генов профага. Изменение свойств микроорганизмов под влиянием профага
получило название фаговой конверсии. Последняя имеет место у многих видов мик-
роорганизмов и касается различных их свойств: культуральных, биохимических,
токсигенных, антигенных, чувствительности к антибиотикам и др. Кроме того, переходя из
интегрированного состояния в вирулентную форму, умеренный фаг может захватить часть
хромосомы клетки и при лизисе последней переносит эту часть хромосомы в другую
клетку. Если микробная клетка станет лизогенной, она приобретает новые свойства.
Таким образом, умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости
микроорганизмов.
Практическое применение фагов. Бактериофаги используют в лабораторной
диагностике инфекций при внутривидовой идентификации бактерий, т. е. определении
фаговара (фаготипа). Для этого применяют метод фаготипирования, основанный на
строгой специфичности действия фагов: на чашку с плотной питательной средой,
засеянной «газоном» чистой культурой возбудителя, наносят капли различных
диагностических типоспецифических фагов. Фаговар бактерии определяется тем типом
фага, который вызвал ее лизис (образование стерильного пятна, «бляшки», или
«негативной колонии», фага). Методику фаготипирования используют для выявления
источника и путей распространения инфекции (эпидемиологическое маркирование).
Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник
их заражения.
По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в воде)
можно судить о присутствии в них соответствующих патогенных бактерий. Подобные
исследования проводят при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных
болезней.
Фаги применяют также для лечения и профилактики ряда бактериальных инфекций.
Производят брюшнотифозный, сальмонеллезный, дизентерийный, синегнойный, ста-
филококковый, стрептококковый фаги и комбинированные препараты (колипротейный,
пиобактериофаги и др). Бактериофаги назначают по показаниям перорально, парен-
терально или местно в виде жидких, таблети-рованных форм, свечей или аэрозолей.
Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в качестве
векторов для получения рекомбинантных ДНК.
2. Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, способы
постановки. Применение.
Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция
Кунса) - метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с
флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация
возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных
рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.
Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях
животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток)
получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление
флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов
(например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными
белками, не нарушая их иммунологической специфичности.
Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой
метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными
сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах
люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой
люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого
цвета.
Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью
антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого
мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей
диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов,
отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок
антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате
образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи
антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном
микроскопе, как и при прямом методе.
Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют
на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела
против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат
помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего
тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не
связавшихся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресцирующую
антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин
при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида
натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с
фиксированными на антигене специфическими анти телами образуются светящиеся
комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной
микроскопии.

3. Возбудители ОРВИ и гриппа. Таксономия. Характеристика возбудителей.


Лабораторная диагностика.
Таксономия и классификация: РНК-содержащие вирусы. I семейство — Paramyxoviridae
включает вирусы парагриппа человека (5 серотипов) и респираторно-синтициальный
вирус (PC);
II семейство — Picomaviridae включает 7 серотипов энтеровирусов Коксаки и ECHO,
поражающих дыхательные пути, и 120 серотипов риновирусов;
III семейство — Reoviridae включает 3 серотипа, вызывающих заболевания
респираторного и желудочно-кишечного трактов;
IV семейство — Coronaviridae включает 3 серотипа, также поражающих дыхательный и
желудочно-кишечный тракты.
ДНК-содержащие вирусы. V семейство — Adenoviridae. Представители этого семейства
поражают глаза, кишечник, мочевой пузырь, 3 типа аденовирусов вызывают ОРВИ.
Структура:. Средние размеры, сферическую, палочковидную или нитевидную формы.
Большая часть возбудителей ОРВИ содержит однонитчатую РНК, кроме реовирусов,
обладающих двунитчатой РНК, и ДНК-содержащих аденовирусов. Некоторые из них
окружены суперкапсидом.
Антигенная структура: сложная. У вирусов каждого рода есть общие антигены; вирусы
имеют и типоспецифические антигены, по которым можно проводить идентификацию
возбудителей с определением серотипа. В состав каждой группы вирусов ОРВИ входит
различное количество серотипов и серовариантов. Большинство вирусов ОРВИ обладает
гемагглютинируюшей способностью. РТГА основана на блокировании активности
гемагглютининов вируса специфическими антителами.
Культивирование: Оптимальная модель для культивирования— культуры клеток. Для
каждой группы вирусов подобраны наиболее чувствительные клетки (для аденовирусов
—эмбриональные клетки почек; для коронавирусов — эмбриональные клетки и клетки
трахеи). В зараженных клетках вирусы вызывают ЦПЭ( цитопатический эффект). Культуры
клеток используют также при идентификации возбудителей с цитолитической
активностью (например, аденовирусов). Для этого применяют так называемую реакцию
биологической нейтрализации вирусов в культуре клеток (РБН или РН вирусов). В ее
основе — нейтрализация цитолитического действия вирусов типоспецифическми
антителами.
Иммунитет: вируснейтрализующие специфические IgA (обеспечивают местный
иммунитет) и клеточный иммунитет. Местная выработка а-интерферона, появление
которого в носовом отделяемом приводит к значительному снижению количества
вирусов. Важной особенностью ОРВИ является формирование вторичного
иммунодефицита. Постинфекционный иммунитет - нестойкий, непродолжительный,
типоспецифический. Большое число серотипов и разнообразие вирусов – высокая частота
повторных заболеваний.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования носоглоточная слизь,
мазки-отпечатки и смывы из зева и носа.
Экспресс-диагностика. Обнаруживают вирусные антигены в инфицированных клетках.
Применяют РИФ (прямой и непрямой методы) с использованием меченных
флюорохромами специфических антител, а также ИФА. Для труднокультивируемых
вирусов используют генетический метод (ПЦР).
Вирусологический метод. Индикацию вирусов в зараженных лабораторных моделях
проводят по ЦПЭ, а также РГА и гемадсорбции (для вирусов с гемагглютинирующей
активностью), по образованию включений (внутриядерные включения при
аденовирусной инфекции, цитоплазматические включения в околоядерной зоне при
реовирусной инфекции и т. п.), а также по образованию «бляшек», и «цветной пробе».
Идентифицируют вирусы по антигенной структуре в РСК, РПГА, ИФА, РТГА, РБН вирусов.
Серологический метод. Противовирусные антитела исследуют в парных сыворотках
больного, полученных с интервалом в 10 дней. Диагноз ставят при увеличении титра
антител как минимум в 4 раза. При этом определяется уровень IgG в таких реакциях, как
РБН вирусов, РСК, РПГА, РТГА.
Лечение: эффективного этиотропного - нет; неспецифическое – а-интерферон, оксолин
(глазные капли), при вторичной бактериальной инфекции – антибиотики. Основное
лечение – симптоматическое/патогенетическое. Антигистаминные препараты.
Профилактика: неспецифическая – противоэпидемич. мероприятия. Специфической –
нет. Для профилактики аденовирусов – пероральные живые тривалентные вакцины.
ВИРУС ГРИППА
Таксономия: семейство – Orthomyxoviridae, род Influenzavirus. Различают 3 серотипа
вируса гриппа: А, В и С.
Структура вируса гриппа А. Возбудитель гриппа имеет однонитчатую РНК, состоящую из 8
фрагментов. Подобная сегментарность позволяет двум вирусам при взаимодействии
легко обмениваться генетической информацией и тем самым способствует высокой
изменчивости вируса. Капсомеры уложены вокруг нити РНК по спиральному типу. Вирус
гриппа имеет также суперкапсид с отростками. Вирус полиморфен: встречаются
сферические, палочковидные, нитевидные формы.
Антигенная структура. Внутренние и поверхностные антигены. Внутренние антигены
состоят из РНК и белков капсида, представлены нуклеопротеином (NP-белком) и М-
белками. NP-и М-белки — это типоспецифические антигены. NP-белок способен
связывать комплемент, поэтому тип вируса гриппа обычно определяют в РСК.
Поверхностные антигены — это гемагглютинин и нейраминидаза. Их структуру, которая
определяет подтип вируса гриппа, исследуют в РТГА, благодаря торможению
специфическими антителами гемагглютинации вирусов. Внутренний антиген –
стимулирует Т-киллеры и макрофаги, не вызывает антителообразования. У вируса
имеются 3 разновидности Н- и 2 разновидности N – антигенов.
Иммунитет: Во время заболевания в противовирусном ответе участвуют факторы неспе-
цифической защиты: выделительная функция организма, сывороточные ингибиторы, аль-
фа-интерферон, специфические IgA в секретах респираторного тракта, которые обеспечи-
вают местный иммунитет.
Клеточный иммунитет - NK-клетки и специфические цитотоксические Т-лимфоциты,
действующие на клетки, инфицированные вирусом. Постинфекционный иммунитет
достаточно длителен и прочен, но высокоспецифичен (типо-, подтипо-,
вариантоспецифичен).
Микробиологическая диагностика. Диагноз «грипп» базируется на (1) выделении и иден-
тификации вируса, (2) определении вирусных АГ в клетках больного, (3) поиске
вирусоспецифических антител в сыворотке больного. При отборе материала для
исследования важно получить пораженные вирусом клетки, так как именно в них
происходит репликация вирусов. Материал для исследования — носоглоточное
отделяемое. Для определения антител исследуют парные сыворотки крови больного.
Экспресс-диагностика. Обнаруживают вирусные антигены в исследуемом материале с
помощью РИФ (прямой и непрямой варианты) и ИФА. Можно обнаружить в материале
геном вирусов при помощи ПЦР.
Вирусологический метод. Оптимальная лабораторная модель для культивирования
штаммов—куриный эмбрион. Индикацию вирусов проводят в зависимости от
лабораторной модели (по гибели, по клиническим и патоморфологическим изменениям,
ЦПД, образованию «бляшек», «цветной пробе», РГА и гемадсорбции). Идентифицируют
вирусы по антигенной структуре. Применяют РСК, РТГА, ИФА, РБН (реакцию
биологической нейтрализации) вирусов и др. Обычно тип вирусов гриппа определяют в
РСК, подтип — в РТГА.
Серологический метод. Диагноз ставят при четырехкратном увеличении титра антител в
парных сыворотках от больного, полученных с интервалом в 10 дней. Применяют РТГА,
РСК, ИФА, РБН вирусов.
Лечение: симптоматическое/патогенетическое. А-интерферон – угнетает размножение
вирусов.
1. Препараты - индукторы эндогенного интерферона.
Этиотропное лечение - ремантидин – препятствует репродукции вирусов, блокируя М-
белки. Арбидол – действует на вирусы А и В.
2. Препараты - ингибиторы нейраминидазы. Блокируют выход вирусных частиц из
инфицированных клеток.
При тяжелых формах – противогриппозный донорский иммуноглобулин и нормальный
человеческий иммуноглобулин для в\в введения.
Профилактика: Неспецифическая профилактика – противоэпидемические мероприятия,
препараты а-интерферона и оксолина.
Специфическая – вакцины. Живые аллантоисные интраназальная и подкожная,
тривалентные инактивированные цельно-вирионные гриппозные интраназальная и
парентеральная-подкожная (Грипповак), химические Агриппал, полимер-субъединичная
«Гриппол». Живые вакцины создают наиболее полноценный, в том числе местный,
иммунитет.
Билет 19.
1. Выделение чистых культур анаэробов.
Для культивирования анаэробов необходимо понизить окислительно-восстановительный
потенциал среды, создать условия анаэробиоза, т. е. пониженного содержания кислорода
в среде и окружающем ее пространстве. Это достигается применением физических,
химических и биологических методов.
Физические методы. Основаны на выращивании микроорганизмов в безвоздушной
среде, что достигается:
1) посевом в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества;
2) посевом микроорганизмов в глубину плотных питательных сред;
3) механическим удалением воздуха из сосудов, в которых выращиваются анаэробные
микроорганизмы;
4) заменой воздуха в сосудах каким-либо индифферентным газом.
В качестве редуцирующих веществ обычно используют кусочки (около 0,5 г) животных или
растительных тканей (печень, мозг, почки, селезенка, кровь, картофель, вата). Эти ткани
связывают растворенный в среде кислород и адсорбируют бактерии. Чтобы уменьшить
содержание кислорода в питательной среде, ее перед посевом кипятят 10—15 мин, а
затем быстро охлаждают и заливают сверху небольшим количеством стерильного вазе-
линового масла. Высота слоя масла в пробирке около 1 см.
В качестве легко окисляемых веществ используют глюкозу, лактозу и муравьинокислый
натрий.
Лучшей жидкой питательной средой с редуцирующими веществами является среда Китта
— Тароцци, которая используется с успехом для накопления анаэробов при первичном
посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выделенной чистой
культуры анаэробов.
Посев микроорганизмов в глубину плотных сред производят по способу Виньяль —
Вейона, который состоит в механической защите посевов анаэробов от кислорода
воздуха. Берут стеклянную трубку длиной 30 см и диаметром 3—6 мм. Один конец трубки
вытягивают в капилляр в виде пастеровской пипетки, а у другого конца делают перетяжку.
В оставшийся широкий конец трубки вставляют ватную пробку. В пробирки с
расплавленным и охлажденным до 50°С питательным агаром засевают исследуемый
материал. Затем насасывают засеянный агар в стерильные трубки Виньяль — Вейона.
Капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки и трубки помещают в
термостат. Так создаются благоприятные условия для роста самых строгих анаэробов. Для
выделения отдельной колонии трубку надрезают напильником, соблюдая правила
асептики, на уровне колонии, ломают, а колонию захватывают стерильной петлей и
переносят в пробирку с питательной средой для дальнейшего выращивания и изучения в
чистом виде.
Удаление воздуха производят путем его механического откачивания из специальных
приборов — анаэроста-тов, в которые помещают чашки с посевом анаэробов.
Переносный анаэростат представляет собой толстостенный металлический цилиндр с
хорошо притертой крышкой (с резиновой прокладкой), снабженный отводящим краном и
вакуумметром. После размещения засеянных чашек или пробирок воздух из анаэростата
удаляют с помощью вакуумного насоса.
Замену воздуха индифферентным газом (азотом, водородом, аргоном, углекислым газом)
можно производить в тех же анаэростатах путем вытеснения его газом из баллона.
Химические методы. Основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически
закрытом сосуде (анаэро-стате, эксикаторе) такими веществами, как пирогаллол или
гидросульфит натрия Na2S204.
Биологические методы. Основаны на совместном выращивании анаэробов со строгими
аэробами. Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают
стерильным скальпелем полоску агара шириной около 1 см. Получается два агаровых
полудиска в одной чашке. На одну сторону агаровой пластинки засевают аэроб, например
часто используют S. aureus или Serratia marcescens. На другую сторону засевают анаэроб.
Края чашки заклеивают пластилином или заливают расплавленным парафином и
помещают в термостат. При наличии подходящих условий в чашке начнут размножаться
аэробы. После того, как весь кислород в пространстве чашки будет ими использован,
начнется рост анаэробов (через 3—4 сут). В целях сокращения воздушного пространства в
чашке питательную среду наливают возможно более толстым слоем.
Комбинированные методы. Основаны на сочетании физических, химических и
биологических методов создания анаэробиоза.
2. Реакция связывания комплемента.
Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг
другу антигены и антитела образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент
антител присоединяется комплемент (С), т. е. происходит связывание комплемента комп-
лексом антиген—антитело. Если же комплекс антиген—антитело не образуется, то комп-
лемент остается свободным.
Специфическое взаимодействие АГ и AT сопровождается адсорбцией (связыванием)
комплемента. Поскольку процесс связывания комплемента не проявляется визуально, Ж.
Борде и О.Жангу предложили использовать в качестве индикатора гемолитическую
систему (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка), которая показывает,
фиксирован ли комплемент комплексом АГ-АТ. Если АГ и AT соответствуют друг другу, т. е.
образовался иммунный комплекс, то комплемент связывается этим комплексом и
гемолиза не происходит. Если AT не соответствует АГ, то комплекс не образуется и
комплемент, оставаясь свободным, соединяется со второй системой и вызывает гемолиз.
Компоненты. Реакция связывания комплемента (РСК) относится к сложным
серологическим реакциям. Для ее проведения необходимы 5 ингредиентов, а именно:
АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка
(вторая система).
Антигеном для РСК могут быть культуры различных убитых микроорганизмов, их лизаты,
компоненты бактерий, патологически измененных и нормальных органов, тканевых
липидов, вирусы и вирусосодержащие материалы.
В качестве комплемента используют свежую или сухую сыворотку морской свинки.
Механизм. РСК проводят в две фазы: 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей три
компонента антиген + антитело + комплемент; 2-я фаза (индикаторная) — выявление в
смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы,
состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к
ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген—антитело происходит
связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных
антителами эритроцитов не произойдет; реакция положительная. Если антиген и антитело
не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела),
комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит —
ан-тиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз; реакция отрицательная.
Применение. РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в
частности сифилиса (реакция Вассермана).
3. Возбудители хламидиозов. Таксономия, характеристика возбудителей.
Микробиологический диагноз. Лечение и профилактика.
Острая кишечная зоонозная инфекция, вызываемая сероварами сальмонелл, характери-
зующаяся поражением ЖКТ.
Морфологические свойства: подвижные, грам «-» палочки, капсулы нет. Хорошо растут на
простых питательных и желчесодержащих средах. На плотных – образуют колонии в R-и S-
формах, на жидких – помутнение. На лактозособержащих средах образуют бесцветные
колонии.
Биохимическая активность: ферментация глк. до кислоты и газа, отсутствие ферментации
лактозы, продукция сероводорода, отсутствие индолообразования.
Антигенная структура: соматический О-антиген, жгутиковый Н-антиген, Некоторые – К-
антиген. Род Salmonella состоит из двух видов — вида S. enterica, в который включены все
сальмонеллы, являющиеся возбудителями человека и теплокровных животных, и вида S.
bongori, который подразделяется на 10 сероваров.
Вид S. enterica разделен на 6 подвидов, которые подразделены на серовары. Некоторые
серовары сальмонелл, в частности S. Typhi, имеют полисахаридный Vi-антиген,
являющийся разновидностью К-антигена.
Эпидемиология. Возбудителями сальмонеллеза является большая группа сальмонелл,
входящая в подвид enterica. Наиболее часто возбудителями сальмонеллезов у человека
являются серовары S. Typhimurium, S. Dublin, S. Choleraesuis. Основные факторы передачи
— мясо, молоко, яйца, вода.
Патогенез и клиника. Заболевание протекает в локальной форме гастроэнтерита, ведущий
синдром - диарейный. Инвазировав слизистую тонкого кишечника через М-клетки и
проникнув в подслизистую, сальмонеллы захватываются макрофагами, переносясь ими в
пейеровы бляшки, где формируют первичный очаг инфекции. При этом выделяются эндо-
токсин и белковый энтеротоксин. Энтеротоксин активирует поступление в просвет
кишечника большого количества жидкости, К,Na. Понос, рвота.
Иммунитет: Ненапряженный, серовароспецифический, опосредован секреторным IgA,
который предотвращает процесс пенетрации сальмонеллами слизистой тонкого кишечни-
ка. В крови могут определяться антитела.
Микробиологическая диагностика. Бактериологическому исследованию подвергают
рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь, мочу, кровь. При
идентификации выделенных культур необходим широкий набор диагностических О- и Н-
сывороток.
Для серологического исследования применяют РНГА, ИФА. Важное диагностическое
значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания.
Лечение. Применяется патогенетическая терапия, направленная на нормализацию водно-
солевого обмена. При генерализованных формах — этиотропная антибиотикотерапия.
Сальмонеллезные групповые, адсорбированные О- и Н-агглютинирующие сыворотки.
Применяются для установления серогрупп и сероваров сальмонелл в реакции
агглютинации.
Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы представляют собой взвеси сальмонелл,
убитых нагреванием (О-диагностикумы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы).
Применяются для серодиагностики брюшного тифа.
Профилактика. Специфическая профилактика сальмонеллеза у с/х животных и птиц.
Неспецифическая профилактика - проведение ветеринарно-санитарных мероприятий.
Билет 20.
1. Методы стерилизации. Аппаратура и условия стерилизации.
Стерилизация предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергающихся
обработке.
Существует три основных метода стерилизации: тепловой, лучевой, химической.
Тепловая стерилизация основана на чувствительности микробов к высокой температуре.
При 60 "С и наличии воды происходит денатурация белка, деградация нуклеиновых
кислот, липидов, вследствие чего вегетативные формы микробов погибают. Споры,
содержащие очень большое количество воды в связанном состоянии и обладающие
плотными оболочками, инактивируются при 160—170 °С.
Для тепловой стерилизации применяют, в основном, сухой жар и пар под давлением.
Стерилизацию сухим жаром осуществляют в воздушных стерилизаторах (прежнее
название — «сухожаровые шкафы или печи Пастера»). Воздушный стерилизатор пред-
ставляет собой металлический плотно закрывающийся шкаф, нагревающийся с помощью
электричества и снабженный термометром. Обеззараживание материала в нем произво-
дят, как правило, при 160 °С в течение 120 мин. Однако возможны и другие режимы: 200
°С - 30 мин, 180 "С - 40 мин.
Стерилизуют сухим жаром лабораторную посуду и другие изделия из стекла, инстру-
менты, силиконовую резину, т. е. объекты, которые не теряют своих качеств при высокой
температуре.
Большая часть стерилизуемых предметов не выдерживает подобной обработки, и
поэтому их обеззараживают в паровых стерилизаторах.
Обработка паром под давлением в паровых стерилизаторах (старое название — «автокла-
вы») является наиболее универсальным методом стерилизации.
Паровой стерилизатор (существует множество его модификаций) — металлический
цилиндр с прочными стенками, герметически закрывающийся, состоящий из
водопаровой и стерилизующей камер. Аппарат снабжен манометром, термометром и
другими контрольно-измерительными приборами. В автоклаве создается повышенное
давление, что приводит к увеличению температуры кипения.
Поскольку кроме высокой температуры на микробы оказывает воздействие и пар, споры
погибают уже при 120 °С. Наиболее распространенный режим работы парового
стерилизатора: 2 атм — 121 °С — 15—20 мин. Время стерилизации уменьшается при
повышении атмосферного давления, а следовательно, и температуры кипения (136 °С — 5
мин). Микробы погибают за несколько секунд, но обработку материала производят в
течение большего времени, так как, во-первых, высокая температура должна быть и
внутри стерилизуемого материала и, во-вторых, существует так называемое поле
безопасности (рассчитанное на небольшую неисправность автоклава).
Стерилизуют в автоклаве бульшую часть предметов: перевязочный материал, белье,
коррозионно-устойчивые металлические инструменты, питательные среды, растворы,
инфекционный материал и т. д.
Одной из разновидностей тепловой стерилизации является дробная стерилизация, ко-
торую применяют для обработки материалов, не выдерживающих температуру выше 100
°С, например, для стерилизации питательных сред с углеводами, желатина. Их нагревают
в водяной бане при 80 °С в течение 30—60 мин.
В настоящее время применяют еще один метод тепловой стерилизации, предназначен-
ный специально для молока — ультравысокотемпературный (УВТ): молоко обрабатывают
в течение нескольких секунд при 130—150 °С.
Химическая стерилизация предполагает использование токсичных газов: оксида этилена,
смеси ОБ (смеси оксида этилена и бромистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и
формальдегида. Эти вещества являются ал-килирующими агентами, их способность в
присутствии воды инактивировать активные группы в ферментах, других белках, ДНК и
РНК приводит к гибели микроорганизмов.
Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от 18 до 80 °С в
специальных камерах. В больницах используют формальдегид, в промышленных
условиях — оксид этилена и смесь ОБ.
Перед химической стерилизацией все изделия, подлежащие обработке, должны быть
высушены.
Этот вид стерилизации небезопасен для персонала, для окружающей среды и для па-
циентов, пользующихся простерилизованными предметами (большинство
стерилизующих агентов остается на предметах).
Однако существуют объекты, которые могут быть повреждены нагреванием, например,
оптические приборы, радио- и электронная аппаратура, предметы из нетермостойких по-
лимеров, питательные среды с белком и т. п., для которых пригодна только химическая
стерилизация. Например, космические корабли и спутники, укомплектованные точной ап-
паратурой, для их деконтаминации обезвреживают газовой смесью (оксид этилена и
бромистого метила).
В последнее время в связи с широким распространением в медицинской практике изде-
лий из термолабильных материалов, снабженных оптическими устройствами, например
эндоскопов, стали применять обезвреживание с помощью химических растворов. После
очистки и дезинфекции прибор помещают на определенное время (от 45 до 60 мин) в сте-
рилизующий раствор, затем прибор должен быть отмыт стерильной водой. Для стери-
лизации и отмывки используют стерильные емкости с крышками. Простерилизованное и
отмытое от стерилизующего раствора изделие высушивают стерильными салфетками и
помещают в стерильную емкость. Все манипуляции проводят в асептических условиях и в
стерильных перчатках. Хранят эти изделия не более 3 суток.
Лучевая стерилизация осуществляется либо с помощью гамма-излучения, либо с помо-
щью ускоренных электронов.
Лучевая стерилизация является альтернативой газовой стерилизации в промышленных
условиях, и применяют ее также в тех случаях, когда стерилизуемые предметы не
выдерживают высокой температуры. Лучевая стерилизация позволяет обрабатывать
сразу большое количество предметов (например, одноразовых шприцев, систем для
переливания крови). Благодаря возможности широкомасштабной стерилизации,
применение этого метода вполне оправданно, несмотря на его экологическую опасность
и неэкономичность.
Еще одним способом стерилизации является фильтрование. Фильтрование с помощью
различных фильтров (керамических, асбестовых, стеклянных), а в особенности
мембранных ультрафильтров из коллоидных растворов нитроцеллюкозы или других
веществ позволяет освободить жидкости (сыворотку крови, лекарства) от бактерий,
грибов, простейших и даже вирусов. Для ускорения процесса фильтрации обычно создают
повышенное давление в емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в
емкости с фильтратом.
В настоящее время все более широкое применение находят современные методы стери-
лизации, созданные на основе новых технологий, с использованием плазмы, озона.
2. Формы проявления инфекции. Понятие о рецидиве, реинфекции,
суперинфекции.
В зависимости от свойств возбудителя, условий заражения, иммунологических
особенностей макроорганизма формируются различные формы инфекционного
процесса, который может протекать в виде носительства, латентной инфекции и
инфекционной болезни.
При носительстве возбудитель размножается, циркулирует в организме, происходит
формирование иммунитета и очищение организма от возбудителя, но отсутствуют
субъективные и клинически выявляемые симптомы болезни (нарушение самочувствия,
лихорадка, интоксикация, признаки органной патологии). Такое течение инфекционного
процесса характерно для ряда вирусных и бактериальных инфекций (вирусного гепатита
А, полиомиелита, менингококковой инфекции и некоторых других). О подобном течении
инфекционного процесса можно судить по наличию специфических антител у лиц, не
имевших клинических проявлений данной инфекционной болезни и не
иммунизированных против нее.
В соответствии с носительством конкретных типов возбудителей применяют термины
«бактерионосительство» («бациллоносительство»), «вирусоносительство»,
«гельминтоносительство». Термин «паразитоносительство» обозначает носительство
патогенных паразитов вообще или носительство простейших.
Различают следующие виды носительства: реконвалесцентное, иммунное, «здоровое»,
инкубационное, транзиторное.
При латентной инфекции инфекционный процесс также длительно не проявляет себя
клинически, но возбудитель сохраняется в организме, иммунитет не формируется и на
определенном этапе при достаточно длительном сроке наблюдения возможно появление
клинических признаков болезни. Такое течение инфекционного процесса наблюдается
при туберкулезе, сифилисе, герпетической инфекции, цитомегаловирусной инфекции и
др.
Перенесенная в той или иной форме инфекции не всегда гарантирует от повторного
заражения, особенно при генетической предрасположенности, обусловленной
дефектами в системе специфических и неспецифических защитных механизмов, или
кратковременности иммунитета. Повторное заражение и развитие инфекции, вызванной
тем же возбудителем, обычно в форме клинически выраженной инфекционной болезни
(например, при менингококковой инфекции, скарлатине, дизентерии, роже, называются
реинфекцией. Одновременное возникновение двух инфекционных процессов называется
микст-инфекцией. Возникновение инфекционного процесса, вызванного активацией
нормальной флоры, населяющей кожу и слизистые оболочки, обозначается как
аутоинфекция. Последняя развивается, как правило, в результате резкого ослабления
защитных механизмов, в частности приобретенного иммунодефицита. Например в
результате тяжелых оперативных вмешательств, соматических заболеваний, применения
стероидных гормонов, антибиотиков широкого спектра действия с развитие
дисбактериоза, лучевых поражений и др. Возможно также на фоне инфекции, вызванной
одним возбудителем; заражение и развитие инфекционного процесса, вызванного
другим видом возбудителя; в этих случаях говорят о суперинфекции.
Для изучения патогенеза инфекции, разработки методов ее диагностики, лечения и
профилактики широко используют экспериментальную инфекцию, т. е. воспроизведение
инфекции на лабораторных животных. Несмотря на большое значение
экспериментальной инфекции, полученные результаты применительно к человеку
нуждаются в подтверждении в клинических условиях.
РЕЦИДИВ (от лат. recidivus — возвращающийся)—возврат болезни, т. е. повторение ее в
типичной форме непосредственно после выздоровления или в периоде выздоровления.
Как правило впрочем Р. выбывает точным повторением бывшего; он обычно протекает
короче и легче, чем первое заболевание, но в отдельных случаях при Р. наблюдаются
тяжелые осложнения, иногда со смертельными исходами. Частота Р., количество
возвратов б-ни и промежутки между ними бывают различными при отдельных
заболеваниях и при одном и том же заболевании. При возвратном тифе например
повторение приступа (рецидив) является характерным для данного заболевания, но в
зависимости от эпидемии количество возвратов бывает различным.
Реинфекция повторное заражение перенесшего заболевание организма тем же самым
или др. вариантом определенного вида возбудителя. Встречается в тех случаях, когда
заболевание не привело к развитию достаточно напр.яженного иммунитета или
иммунитет быстро утратил свою активность. Для предупреждения развития Р., так же как
и рецидива, проводят комбинированное лечение б-ного антибиотиками и вакцинами;
выявляют и лечат (санируют) б-ных (носителей) аналогичной патологией из окружения б-
ного; изолируют б-ного.
Суперинфекция - (superinfection) - повторное заражение новым инфекционным
заболеванием в условиях незавершившегося инфекционного заболевания, вызванное
другим микроорганизмом, обычно устойчивым к лекарственному веществу, которое
применялось для лечения первичной инфекции. Возбудителем новой инфекции может
быть один из тех микроорганизмов, которые в норме являются безвредными
обитателями человеческого организма, но становятся патогенными при удалении других
микроорганизмов в результате приема лекарственных веществ; или же он может являться
устойчивой разновидностью возбудителя первичной инфекции.
3. Возбудитель желтой лихорадки, патогенез инфекции.
Микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.
Желтая лихорадка (ЖЛ) — природно-очаговая арбовирусная инфекция,
распространяемая в тропических странах Африки и Америки комарами родов Aedes и
Haemagogus (Америка), протекающая в виде остролихорадочного заболевания с
развитием геморрагического синдрома, шока и печеночно-почечной недостаточности. В
связи с возможностью возникновения массовых эпидемий желтая лихорадка относится к
группе болезней, предусмотренных Международными медико-санитарными правилами,
и подлежит обязательной регистрации в ВОЗ.
Заболевание впервые описано в 1647-1648 гг. во время эпидемической вспышки болезни
в Карибском регионе, куда, как это было установлено в 30-х годах XX века, возбудитель
был завезен из Африки. В последующие столетия в странах Америки, Африки и даже
Европы болезнь нередко принимала характер тяжелых эпидемий с высокой
летальностью. Наиболее крупные эпидемии наблюдались в конце ХГХ-начале XX века при
строительстве Панамского канала, когда от этой болезни («Yellow Jeck») погибло около 10
000 человек, в 1950-е годы в Америке (более 1,5 тыс. больных), в 1960-1962 гг. в Эфиопии
(более 200 000 больных и более 30 000 погибших).
Передача возбудителя комарами была установлена кубинским врачом С. Finlay в 1881 г.
Через 20 лет, в 1901 г, на Кубе американские исследователи под руководством майора W.
Reed выделили вирус и в экспериментах на волонтерах доказали его передачу комарами
рода Aedes. В 1933 г. A. Stokes в Гане и D. Sooper с соавт. в Южной Америке установили
природную очаговость болезни. Разработка и осуществление мероприятий по борьбе с
комарами в значительной мере способствовали ограничению распространения болезни.
Решающую роль в борьбе с желтой лихорадкой сыграла разработка в 1937 г.
Нобелевским лауреатом Max Theiler аттенуированной вакцины 17D на основе
африканского штамма Asibi.
В ходе реализации программы ВОЗ по контролю за желтой лихорадкой и проведения
вакцинации населения эндемических регионов в рамках Расширенной Программы
Иммунизации (EPI) отмечалось заметное снижение заболеваемости этой инфекцией.
Однако в 1986-1991 гг. в Нигерии и ряде других африканских стран эпидемиологическая
ситуация вновь ухудшилась, число зарегистрированных случаев болезни превысило 20
000 чел , из них более 4600 закончились летально.
Возбудитель — Flavivirus febricis {Yellow Fever virus, YFV) относится к роду Flavivirus
семейству Flaviviridae. Сферические вирусные частицы диаметром 40-50 нм содержат
липидную оболочку с оболочечными протеинами (М) и включениями гликопротеинов (Е)
и нуклеокапсид, заключающий односпиральную +РНК, которая кодирует синтез
мебранных (М), нуклеокапсидных (С) и 7 неструктурных протеинов (NS). Последние
играют важную роль в репликации вируса в клетке-мишени и индукции синтеза
протективных антител. Различают 2 патогенных для человека генотипа (топотипа) вируса в
Восточной и Западной Африке и 2 генотипа в Южной Америке, из последних для человека
в настоящее время патогенным является лишь один. Вирусы не устойчивы во внешней
среде, быстро разрушаются при нагревании до 60 °С и под воздействием различных
дезинфектантов, но длительно выживают при замораживании в глицерине (до 3 мес) и
при лиофилизации К вирусу чувствительны приматы, ленивцы, опоссумы, муравьеды,
белые мыши и морские свинки. Вирусы культивируются на хорион-аллантоисных клетках
куриного эмбриона, клетках очек обезьян и свиньи, вызывают цитопатический эффект в
клеточных линиях Vero, LL CMK2, НК-21, PS и персистируют в клетках комаров (С6/36, АР61
и др.).

После первичной репликации вируса в лимфоидных элементах в месте его инокуляции


развивается виремия, сопровождающаяся повышением в крови уровня TNF-a, EL-6 и
других медиаторов, с которыми связывается возникновение лихорадки и других
общетоксических симптомов болезни. Спустя 1 нед наблюдается повторное увеличение
содержания в крови TNF-alfa, сопровождающееся второй лихорадочной волной. YFV
обладает полиорганной тропностью, но наиболее выраженные поражения развиваются в
печени, почках, легких, селезенке, костном мозге, миокарде, надпочечниках, головном
мозге.
В печени развивается коагуляционный некроз гепатоцитов преимущественно в центре- и
мезолобулярных отделах печеночных долек с образованием характерных эозинофильных
телец Councilman при слабо выраженной мононуклеарной воспалительной
инфильтрации. В клетках Kupfier (звездчатых эндотелиоцитах) и в пораженных
гепатоцитах обнаруживается YFV- антиген.
В почках развивается острый некроз тубулярного эпителия. Характерно развитие жировой
дистрофии и некроза миокарда с поражением проводящей системы сердца,
обусловливающих возникновение аритмий и уменьшение сердечного выброса крови. В
головном мозге возникает отек, геморрагии и иногда энцефалит. В пораженных тканях
выявляется YFV-антиген.
Причинами геморрагического синдрома служат прямое вирусное поражение эндотелия
микрососудов, снижение синтеза факторов свертывания вследствие некротического
гепатита в сочетании с тромбоцитопенией вследствие ДВС-синдрома и нарушения
тромбоцитогенеза. Сочетание прямого вирусного воздействия на ткани и системного
воспалительного ответа (Systemic Inflammatory Response Syndrome — SIRS -like синдром)
обусловливает развитие шока с неблагоприятным исходом болезни.
Вырабатывающиеся в течение 1-й недели нейтрализующие антитела обеспечивают
элиминацию YFV из крови с формированием у реконвалесцентов стойкого
(пожизненного) иммунитета. Предполагается, что инфекция гетерологичными
флавивирусами, например, Dengue virus, может оказывать протективный эффект в
отношении ЖЛ в странах Азии.

Лабораторные исследования крови в начальной стадии желтой лихорадки обычно


выявляют лейкопению со сдвигом нейтрофильной формулы влево до промиелоцитов,
тромбоцитопению, а в разгар болезни — лейкоцитоз и еще более выраженную
тромбоцитопению, повышение показателей гематокрита, повышение активности АсАТ и
АлАТ, увеличение содержания билирубина с большим количеством его свободной
фракции, гиперкалиемию, ацидоз, азотемию. В моче обычно обнаруживают большое
содержание альбумина, эритроциты и цилиндры. Прогноз. Летальность в период
эпидемий может достигать 20-30% и более.
Желтую лихорадку следует предполагать в случаях возникновения остролихорадочного
заболевания с геморрагическими и полисистемными поражениями у неиммунных
(невакцинированных) пациентов из регионов с высоким риском заражения.
Дифференциальный диагноз необходимо проводить с другими тропическими вирусными
геморрагическими лихорадками, злокачественной тропической малярией, вирусными
гепатитами, лептоспирозом, тяжелыми формами брюшного и сыпного тифов, сепсисом,
токсическими поражениями гепатонефротоксическими веществами.
Верификация диагноза желтой лихорадки осуществляется вирусологическими и
серологическими методами в лабораториях с IV уровнем биологической безопасности.
Выделение YFV из крови больного в начальный период болезни или из тканей погибших
пациентов достигается с использованием лабораторных животных (внутримозговое
заражение мышей-сосунков), эмбриональных клеточных культур позвоночных (обезьян,
свиней и др.) или комаров (С6/36. АР-61 и др.). Вирус может быть обнаружен
иммуногистохимическими методами. Разработана диагностика ЖЛ с помощью PCR.
Серологическая диагностика желтой лихорадки проводится в ранний период путем
обнаружения анти-YFV-lgM в ИФА, в поздние сроки при определении в парных
сыворотках крови нарастающего титра антител в РСК, НРИФ, РТПГА. Больных желтой
лихорадкой госпитализируют в стационары, защищенные от проникновения комаров, с
соблюдением строгих мер по профилактике гемоконтактного заражения. Этиотропная
терапия не разработана. Терапевтические мероприятия включают комлекс
противошоковых и дезинтоксикационных средств, коррекцию нарушений гемостаза. В
случаях прогрессирующей печеночно-почечной недостаточности с выраженной
азотемией проводят гемодиализ и другие методы эфферентной терапии. Специфическая
профилактика желтой лихорадки в очагах инфекции осуществляется живой
аттенуированной вакциной 17D и реже вакциной Dakao. Вакцина 17D вводится
однократно подкожно по 0,5 мл. Иммунитет развивается через 7-10 дней и сохраняется в
течение 10 лет. По показаниям проводят ревакцинацию через 6 лет. Проведение
прививок против ЖЛ осуществляется в лицензированных вакцинальных центрах и
регистрируется в международных сертификатах. В связи с возможностью развития редких
поствакцинальных осложнений (энцефалит и др.) вакцинация, как правило, не проводится
детям моложе 9 мес (при высоком риске заражения — моложе 4 мес) и беременным, а
также пациентам с выраженной иммуносупрессией. Непривитые лица из эндемических
районов подвергаются карантину в течение 9 дней.
Билет 21.
1. Культивирование патогенных микробов. Искусственные питательные
среды. Классификация.
Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля.
Кроме нее, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для
посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких
материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые
предварительно изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые
вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же запаивают для
сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец за-
крывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой
и стерилизуют.
При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив
ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая
другими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной материал, после чего
закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с
посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и
зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара.
Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в
пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надг писывают, указывая дату
посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры).
Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого,
приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на
поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают
его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды.
После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.

Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные


соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения
бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.
Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения.
Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов, которые
катализируют метаболические процессы микробной клетки (витамины группы В,
никотиновая кислота и др.).
Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или
отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических
солей, углеводов и азотистых веществ.
В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды,
которые получают на основе достижений современной биотехнологии. Для их
приготовления используют экономически рентабельное непищевое сырье: утратившие
срок годности кровезаменители (гидролизин—кислотный гидролизат крови животных,
аминопептид — ферментативный гидролизат крови; продукты биотехнологии (кормовые
дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин). Сухие питательные среды
могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют
относительно стандартный состав.
По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными.
Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5—2% агара, полужидкие —
0,3— 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт переработки особого вида морских
водорослей, он плавится при температуре 80—86 °С, затвердевает при температуре около
40 °С и в застывшем состоянии придает среде плотность. В некоторых случаях для
получения плотных питательных сред используют желатин (10—15%). Ряд естественных
питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами по себе
являются плотными.
По целевому назначению среды подразделяют на основные, элективные и дифференци-
ально-диагностические.
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это
триптические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из
которых готовят жидкую среду — питательный бульон и плотную — питательный агар.
Такие среды служат основой для приготовления сложных питательных сред — сахарных,
кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.
Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и
накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из
материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании
элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают
данные микроорганизмы от большинства других. Например, избирательный рост
стафилококков наблюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного
вибриона — в щелочной среде и т. д.
Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения
отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан
на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической
активности вследствие неодинакового набора ферментов.
Особую группу составляют синтетические и полусинтетические питательные среды. В
состав синтетических сред входят химически чистые вещества: аминокислоты,
минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические среды дополнительно
включают пептон, дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Эти среды чаще
всего применяют в научно-исследовательской работе и в микробиологической
промышленности при получении антибиотиков, вакцин и других препаратов.
В последние годы в целях экономии питательных сред и ускоренной идентификации
некоторых микроорганизмов (энтеробактерии, стафилококки, стрептококки и др.)
применяются так называемые микротест-системы (МТС). Они представляют собой
полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся стерильные
дифференциально-диагностические среды. Стерилизацию МТС проводят УФ-облучением.
Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в
практических лабораториях.
Требования, предъявляемые к питательным средам.
Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать все
необходимые для размножения микроорганизмов вещества в легкоусвояемой форме;
иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничной и по возможности
прозрачной. Каждую питательную среду стерилизуют определенным способом в
зависимости от ее состава.
2. Взаимоотношения между микроорганизмами в ассоциациях: виды
симбиоза и антагонизма.
В конкретных экологических условиях между разными группами микробов
устанавливаются определенные взаимоотношения, характер которых зависит от
физиологических особенностей и потребностей совместно развивающихся микробов.
Кроме того, микроорганизмы вступают в различного рода взаимоотношения не только
между собой, но и с простейшими, высшими растениями и другими группами
организмов, составляющих почвенное население.
        В основном эти взаимоотношения можно условно подразделить на две большие
группы: благоприятные — синергизм и неблагоприятные — антагонизм . Однако
взаимоотношения между микробными сообществами далеко не всегда укладываются в
рамки этих подразделений, так как они чрезвычайно сложны, разносторонни и
вариабельны. Изменения во взаимоотношениях происходят вследствие изменений
окружающих условий существования или в результате перехода микробов из одной
стадии развития в другую. Можно отметить следующие формы взаимоотношений между
микроорганизмами: сосуществование, метабиоз, симбиоз, конкуренция, хищничество,
паразитизм, антагонизм.
        Сосуществованием, или нейтрализмом, называется такая форма взаимоотношений,
когда организмы, развиваясь совместно, не приносят друг другу ни вреда, ни пользы.
Метабиоз — использование продуктов жизнедеятельности одних микробов другими.
        Это явление наблюдается, например, при ступенчатом разложении растительных и
животных остатков в почве. Симбиоз характеризуется взаимовыгодным влиянием
микроорганизмов друг на друга в единой ассоциации (совокупности). Так, классическим
примером симбиоза между водорослями и грибами являются лишайники. Тесный
симбиоз между этими двумя группами микроорганизмов зашел так далеко, что в
процессе эволюции данная микробная ассоциация выделилась в особый
морфофизиологический класс, отличный как от грибов, так и от водорослей. При этом
гриб, составляющий основу лишайника, расщепляет питательный субстрат и поставляет
необходимые для усвоения вещества водорослям, а водоросли снабжают гриб
продуктами фотосинтеза. Конкуренция наблюдается тогда, когда совместно
развивающиеся организмы нуждаются в одних и тех же питательных веществах и
условиях развития. Хищничество заключается в поглощении клеток одних
микроорганизмов другими для использования их в качестве питания.
Паразитизм характеризуется тем, что один вид микроорганизма (паразит) поселяется в
клетке другого (хозяина) и питается за счет хозяина. Абсолютные (облигатные) Паразиты
не могут развиваться в отсутствие хозяина. Известны паразитические формы бактерий и
плесневых грибов, развивающиеся в клетках или в гифах хозяев. Примером паразитизма в
известной мере может также служить явление бактерио- и актинофаги. Антагонизм —
подавление развития одних форм микробов другими с помощью вырабатываемых ими
антимикробных веществ. Этими веществами могут быть: химические соединения
неспецифического действия (кислоты, спирты, перекиси и др.), которые подавляют рост
микробов при высоких концентрациях; антибиотики, обладающие специфичностью
действия и проявляющие антимикробные свойства при низких концентрациях.

Микроорганизмы распространяются повсюду, они населяют почву, воду, воздух. Средой


обитания являются растения, холоднокровные и теплокровные животные, а также
организм человека.

Большинство микроорганизмов в естественных условиях находится в определенных


взаимоотношениях друг с другом, а также с организмом своих хозяев - растений,
животных, человека. Эти отношения сложились в процессе эволюции. Ассоциативные
взаимоотношения или сожительство разных видов микроорганизмов, а также с другими
формами жизни получили название симбиоза. Типы, или формы, симбиотических
отношений чрезвычайно разнообразны. Крайними из них являются мутуализм и
антагонизм.
К симбиотическому типу взаимоотношений относят протокооперацию, в основе, которой
лежит принцип совместного использования субстрата; комменсализм — мирное
сожительство разных видов микроорганизмов; мутуализм — совместное сожительство
микроорганизмов, не способных существовать раздельно.

Основными типами взаимоотношений являются симбиоз, метабиоз, паразитизм,


антагонизм.

Симбиоз — это взаимоотношения, устанавливающиеся при совместном обитании в одной


и той же среде двух или более видов микробов, при которых они не мешают друг другу в
развитии, или когда такое совместное обитание является даже необходимым для них.
Примером могут служить отношения при одновременном нахождении на пищевых
продуктах анаэробных и аэробных микробов. Поглощая кислород, аэробы создают
благоприятные условия для развития анаэробов. В этой связи понятно, почему иногда
продукты, хранящиеся в обычных условиях, подвергаются анаэробной порче и становятся
даже ядовитыми (ботулизм).

Взаимополезные отношения устанавливаются между дрожжами и молочно-кислыми


бактериями в опаре и тесте при производстве хлеба, в молоке при производстве кефира,
кумыса. Молочная кислота необходима для дрожжей, а дрожжи обеспечивают молочно-
кислых бактерий ростовыми веществами. Симбиотические взаимоотношения
устанавливаются между клубеньковыми бактериями и бобовыми растениями. Используя
готовые органические вещества растений, клубеньковые бактерии взамен снабжают их
азотистыми веществами, синтезируемыми из азота воздуха.

Метабиоз — форма сожительства, близкая к симбиозу. При метабиотических


взаимоотношениях один вид микроорганизмов в процессе жизнедеятельности создает
благоприятные условия для другого. Так, многие сапрофиты в процессе питания способны
превращать белки в пептоны, полипептиды и аминокислоты. Другие же микробы,
неспособные использовать белки, хорошо усваивают эти вещества. Первые создают
продукты питания для вторых, продукты жизнедеятельности вторых могут служить пищей
для третьих и т. д.

Отношения метабиоза способствуют быстрой порче квашеных и соленых овощей, кисло-


молочных продуктов, если они хранятся открытыми. Молочнокислые бактерии
продуцируют молочную кислоту, ее потребляют плесневые грибы и подготавливают,
таким образом, субстрат для гнилостных бактерий.

Дрожжи, продуцируя, спирт при развитии в средах, содержащих сахар, например во


фруктовых соках, подготавливают условия для уксуснокислых бактерий, вслед за
которыми этот субстрат могут использовать плесневые грибы, превращая уксусную
кислоту в углекислый газ и воду. Метабиозом объясняется быстрая минерализация всех
органических веществ, попадающих в почву. Принцип метабиоза лежит в основе всего
круговорота веществ в природе.

Паразитизм — форма взаимоотношений, когда один из организмов развивается за счет


другого. Примером паразитизма могут служить взаимоотношения между бактериофагами
и бактериями. Бактериофаги, питаясь веществами живых бактерий, разрушают их.

Антагонизм — это такие взаимоотношения, при которых совместно обитающие виды


микроорганизмов оказывают угнетающее действие друг на друга.
Механизм подавления сожительствующих микробов бывает различным: быстрое
потребление питательных веществ или кислорода из субстрата одним из видов;
выделение в субстрат кислот и других продуктов обмена, затрудняющих развитие прочих
микроорганизмов или делающих его совершенно невозможным.
На использовании антагонизма между молочнокислыми и гнилостными микробами
основаны квашение овощей, сквашивание молока. И. И. Мечников предложил
использовать молочно-кислые бактерии для борьбы с гнилостными бактериями,
обитающими в кишечнике человека и постоянно отравляющими его продуктами своей
жизнедеятельности.

Конкурентоспособность в антагонистических взаимоотношениях у некоторых


микроорганизмов находится в тесной зависимости от их способности продуцировать и
выделять в среду обитания особые вещества, сильно угнетающие другие виды —
антибиотики («анти» — против, «биос» — жизнь). Этих веществ известно довольно много.
Те из них, которые оказались практически безвредными для человека, но очень
бактерицидными (убивающими бактерий), широко применяются в медицине, в
животноводстве, как лечебные и стимулирующие средства. Некоторые из них обладают
не бактерицидным, а бактериостатическим действием (останавливают развитие
бактерий). Характерным свойством антибиотиков является их избирательность,
заключающаяся в том, что каждый из них действует только на определенную группу
микроорганизмов. Имеются и такие, спектр действий, которых достаточно широк.
3. Споровики. Возбудители малярии. Морфология возбудителей. Цикл
развития малярийного плазмодия в организме человека и комара.
Клинические формы заболевания. Микробиологическая диагностика.
Химиотерапия. Меры борьбы с малярией.
Таксономия: тип Apicomplexa, класс Sporozoa, отряд Eucoccidiida, подотряд Haemosporina и
виды: Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum.
Характеристика возбудителя. Жизненный цикл плазмодиев происходит со сменой хозяев:
в комаре рода Anopheles (окончательном хозяине) осуществляется половое размножение
(образование спорозоидов), а в организме человека (промежуточном хозяине)
происходит бесполое размножение — шизогония, при которой образуются мелкие клетки
— мерозоиты.
После укуса спорозоиты из слюнных желез комара попадают в кровь и далее в
гепатоциты, где совершается первый этап размножения — тканевая шизогония. При этом
в гепатоцитах спорозоит переходит в стадию тканевого шизонта (делящаяся клетка).
Тканевой шизонт делится с образованием тканевых мерозоитов, поступающих в кровь.
Мерозоиты проникают в эритроциты, в которых совершается несколько циклов
шизогонии. Из мерозоита в эритроците развиваются трофозоиты — растущие формы
паразита: кольцевидный трофозоит юный, полувзрослый, взрослый трофозоит. Взрослый
трофозоит превращается в многоядерный шизонт. В эритроцитах мерозоиты дают также
начало образованию половых незрелых форм — мужских и женских гамет (гамонтов),
которые способны инфицировать комаров при кровососании больного малярией.
P. vivax — возбудитель трехдневной малярии. В эритроците, при окраске мазка из крови
по Романовскому—Гимзе, трофозоит имеет форму кольца — крупная вакуоль в центре с
голубой цитоплазмой с рубиново-красным ядром.
P. malariae — возбудитель четырехдневной малярии. В эритроците выявляется один
трофозоит в стадии кольца.
P.falciparum — возбудитель тропической малярии, наличие юных форм паразита в виде
мелких колец в эритроците.
P. ovate — возбудитель трехдневной малярии, паразит в стадии кольца в эритроците
имеет более крупное ядро, чем P. vivax.
Эпидемиология: источник - человек. Механизм заражения – трансмиссивный, через укус
комара.
Патогенез и клиника: Инкубационный период от недели до года. Клинические
проявления обусловлены эритроцитарной шизогонией. Малярии свойственно присту-
пообразное течение: озноб с сильной головной болью сменяется подъемом температуры
до 40С, после чего происходит быстрое снижение температуры с обильным
потоотделением и выраженной слабостью. Малярийный приступ вызван выбросом
пирогенных веществ из разрушенных эритроцитов. Приступы приводят к поражению
печени, селезенки и почек.
Иммунитет: нестойкий видоспецифический, стадиоспецифический, нестерильный
иммунитет.
Микробиологическая диагностика основана на микроскопическом исследовании
препаратов крови, окрашенных по Романовскому—Гимзе и обнаружении различных
форм возбудителя (красное ядро, голубая цитоплазма). Для обнаружения ДНК паразита в
крови используют ДНК-гибридизацию и ПЦР В серологическом методе применяют РИФ,
РПГА, ИФА.
Лечение: Противомалярийные препараты (хинин, мефлохин, хлорохин). Различают пре-
параты шизонтоцидного, гамонтотропного и спорозоитотропного действия.
Профилактика: лечение больных малярией и паразитоносителей, уничтожение
переносчиков возбудителя — комаров. Разрабатываются вакцины на основе антигенов,
полученных генно-инженерным методом (антиспорозоитная антимерозоитная,
антигамонтная).
Билет 22.
1. Выделение чистых культур аэробов.
Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или одной
разновидности, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий подразделяют
по одному признаку на биологические варианты — биовары. Биовары, различающиеся по
биохимическим свойствам, называют хемоварами, по антигенным свойствам —
сероварами, по чувствительности к фагу — фаговарами. Культуры микроорганизмов
одного и того же вида, или биовара, выделенные из различных источников или в разное
время из одного и того же источника, называют штаммами, которые обычно
обозначаются номерами или какими-либо символами. Чистые культуры бактерий в
диагностических бактериологических лабораториях получают из изолированных колоний,
пересевая их петлей в пробирки с твердыми или, реже, жидкими питательными средами.
Колония представляет собой видимое изолированное скопление особей одного вида
микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки
на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине ее). Колонии бактерий
разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии, цвету и другим признакам.
Чистую культуру бактерий получают для проведения диагностических исследований —
идентификации, которая достигается путем определения морфологических,
культуральных, биохимических и других признаков микроорганизма.
Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом
исследовании мазков, окрашенных разными методами, и нативных препаратов.
Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и
типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по
морфологии колоний и особенностям роста культуры.
Биохимические признаки бактерий определяются набором конститутивных и
индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В
бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего
сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определяют на
дифференциально-диагностических средах.
При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты,
окрашивающие колонии и культуральную среду в разнообразные цвета. Например,
красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый пигмент — Staphylococcus
aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент — Pseu-domonas aeruginosa.
Для установления биовара (хемовара, серовара, фаготипа) проводят дополнительные
исследования по выялвениб соответствующего маркера – определению фермента,
антигена, чувствительности к Фанам.
Методы выделения чистых культур бактерий.
Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля.
Кроме нее, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для
посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких
материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые
предварительно изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые
вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же запаивают для
сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец за-
крывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой
и стерилизуют.
При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив
ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая
другими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной материал, после чего
закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с
посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и
зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара.
Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в
пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надг писывают, указывая дату
посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры).
Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого,
приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на
поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают
его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды.
После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.
2. Гиперчувствительность, ее типы. Механизмы возникновения, клиническая
значимость.
Изучение молекулярных механизмов аллергии привело к созданию Джеллом и Кумбсом
в 1968 г. новой классификации. В соответствии с ней различают четыре основных типа
аллергии: анафилактический (I тип), цитотоксический (II тип), иммунокомплексный (III тип)
и опосредованный клетками (IV тип). Первые три типа относятся к ГНТ, четвертый — к ГЗТ.
Ведущая роль в запуске ГНТ играют антитела (IgE, G и М), а ГЗТ — лимфоидно-
макрофагальная реакция.
Аллергическая реакция I типа связана с биологическими эффектами IgE и G4, названных
реагинами, которые обладают цитофильностью — сродством к тучным клеткам и
базофилам. Эти клетки несут на поверхности высокоаффинный FcR, связывающий IgE и G4
и использующий их как ко-рецепторный фактор специфического взаимодействия с
эпитопом аллергена. Связывание аллергена с рецепторным комплексом вызывает
дегрануляцию базофила и тучной клетки — залповый выброс биологически активных
соединений (гистамин, гепарин и др.), содержащихся в гранулах, в межклеточное
пространство. В результате развиваются бронхоспазм, вазодилатация, отек и прочие
симптомы, характерные для анафилаксии. Вырабатываемые цитокины стимулируют
клеточное звено иммунитета: образование Т2-хелпера и эозинофилогенез.
Цитотоксические антитела (IgG, IgM), направленные против поверхностных структур
(антигенов) соматических клеток макроорганизма, связываются с клеточными мембра-
нами клеток-мишеней и запускают различные механизмы антителозависимой
цитотоксичности (аллергическая реакция II типа). Массивный цитолиз сопровождается
соответствующими клиническими проявлениями. Классическим примером является
гемолитическая болезнь в результате резус-конфликта или переливания иногруппной
крови.
Цитотоксическим действием обладают также комплексы атиген—антитело, образующи-
еся в организме пациента в большом количестве после введения массивной дозы
антигена (аллергическая реакция III типа). В связи с кумулятивным эффектом клини-
ческая симптоматика аллергической реакции III типа имеет отсроченную манифестацию,
иногда на срок более 7 суток. Тем не менее этот тип реакции относят к ГНТ. Реакция
может проявляться как одно из осложнений от применения иммунных гетерологичных
сывороток с лечебно-профилактической целью («сывороточная болезнь»), а также при
вдыхании белковой пыли («легкое фермера»).
Лабораторная диагностика аллергии при аллергических реакциях I типа основана на
выявлении суммарных и специфических реагинов (IgE, IgG4) в сыворотке крови пациента.
При аллергических реакциях II типа в сыворотке крови определяют цитотоксические
антитела (антиэритроцитарные, антилейкоцитарные, антитромбоцитарные и др.). При
аллергических реакциях III типа в сыворотке крови выявляют иммунные комплексы. Для
обнаружения аллергических реакций IV типа применяют кожно-аллергические пробы,
которые широко используют в диагностике некоторых инфекционных и паразитарных
заболеваний и микозов (туберкулез, лепра, бруцеллез, туляремия и др.).
Тип реакции Фактор Механизм патогенеза Клиническ
патоген ий пример
еза
I. IgE, IgG4 Образование рецепторного Анафилакс
анафилактическ комплекса IgE (G4)-АсК тучных ия,
ий (ГНТ) клеток и базофилов → анафилакт
Взамодействие эпитопа аллергена с ический
рецепторным комплексом → шок,
Активация тучных клеток и поллинозы
базофилов → Высвобождение
медиаторов воспаления и других
биологически активных веществ
II. IgM Выработка цитотоксических антител Лекарствен
цитотоксически IgG → Активация антителозависимого ная
й (ГНТ) цитолиза волчанка,
аустоимму
нная
гемолитиче
ская
болезнь,
аутоиммун
ная
тромбоцит
опения
III. IgM Образование избытка иммунных Сывороточ
иммунокомплек IgG комплексов → Отложение ная
сный (ГНТ) иммунных комплексов на болезнь,
базальных мембранах, эндотелии и системные
в соединительнотканной строме → заболевани
Активация антителозависимой я
клеточно-опосредованной соединител
цитотоксичности → Запуск ьной ткани,
иммунного воспаления феномен
Артюса,
«лёгкое
фермера»
IV. клеточно- Т- Сенсибилизация Т-лимфоцитов → Кожно-
опосредованны лимфоц Активация макрофага → Запуск аллергичес
й (ГЗТ) иты иммунного воспаления кая проба,
контактная
аллергия,
белковая
аллергия
замедленн
ого типа

К аллергическим реакциям относят два типа реагирования на чужеродное вещество:


гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) и гиперчувствительность замедленного
типа (ГЗТ). К ГНТ относятся аллергические реакции, проявляющиеся уже через 20—30 мин
после повторной встречи с антигеном, а к ГЗТ — реакции, возникающие не ранее чем
через 24—48 ч. Механизм и клинические проявления ГНТ и ГЗТ различны. ГНТ связана с
выработкой антител, а ГЗТ — с клеточными реакциями.
ГЗТ впервые описана Р. Кохом (1890). Эта форма проявления не связана с антителами,
опосредована клеточными механизмами с участием Т-лимфоцитов. К ГЗТ относятся
следующие формы проявления: туберкулиновая реакция, замедленная аллергия к
белкам, контактная аллергия.
В отличие от реакций I, II и III типов реакции IV типа не связаны с антителами, а
обусловлены клеточными реакциями, прежде всего Т-лимфоцитами. Реакции
замедленного типа могут возникать при сенсибилизации организма:
1. Микроорганизмами и микробными антигенами (бактериальными, грибковыми,
протозойными, вирусными); 2. Гельминтами; 3. Природными и искусственно
синтезированными гаптенами (лекарственные препараты, красители); 4. Некоторыми
белками.
Следовательно, реакция замедленного типа может вызываться практически всеми
антигенами. Но наиболее ярко она проявляется на введение полисахаридов,
низкомолекулярных пептидов, т. е. малоиммуногенных антигенов. При этом реакцию
вызывают малые дозы антигенов и лучше всего при внутрикожном введении.
Механизм аллергической реакции этого типа состоит в сенсибилизации Т-лимфоцитов-
хелперов антигеном. Сенсибилизация лимфоцитов вызывает выделение медиаторов, в
частности интерлейкина-2, которые активируют макрофаги и тем самым вовлекают их в
процесс разрушения антигена, вызвавшего сенсибилизацию лимфоцитов.
Цитотоксичность проявляют также и сами Т-лимфоциты. О роли лимфоцитов в
возникновении аллергий клеточного типа свидетельствуют возможность передачи ал-
лергии от сенсибилизированного животного несенсибилизированному с помощью
введения лимфоцитов, а также подавление реакции при помощи антилимфоцитарной
сыворотки.
Морфологическая картина при аллергиях клеточного типа носит воспалительный
характер, обусловленный реакцией лимфоцитов и макрофагов на образующийся
комплекс антигена с сенсибилизированными лимфоцитами.
Аллергические реакции клеточного типа проявляются в виде туберкулиновой реакции,
замедленной аллергии к белкам, контактной аллергии.
Туберкулиновая реакция возникает через 5—6 ч после внутрикожного введения
сенсибилизированным туберкулезной палочкой животным или человеку туберкулина, т.
е. антигенов туберкулезной палочки. Выражается реакция в виде покраснения, при-
пухлости, уплотнения на месте введения туберкулина. Сопровождается иногда
повышением температуры тела, лимфопенией. Развитие реакции достигает максимума
через 24—48 ч. Туберкулиновая реакция используется с диагностической целью для вы-
явления заболеваний туберкулезом или контактов организма с туберкулезной палочкой.
Замедленная аллергия возникает при сенсибилизации малыми дозами белковых
антигенов с адъювантом, а также конъю-гатами белков с гаптенами. В этих случаях
аллергическая реакция возникает не раньше чем через 5 дней и длится 2—3 нед. Видимо,
здесь играют роль замедленное действие конъюгированных белков на лимфоидную
ткань и сенсибилизация Т-лимфо-цитов.
Контактная аллергия возникает, если антигенами являются низкомолекулярные
органические и неорганические вещества, которые в организме соединяются с белками,
образуя конъюга-ты. Конъюгированные соединения, выполняя роль гаптенов, вызывают
сенсибилизацию. Контактная аллергия может возникать при длительном контакте с
химическими веществами, в том числе фармацевтическими препаратами, красками,
косметическими препаратами (губная помада, краска для ресниц). Проявляется
контактная аллергия в виде всевозможных дерматитов, т. е. поражений поверхностных
слоев кожи.
Значение. Все реакции гиперчувствительности, в том числе и ГЗТ имеют большое
значение. Их механизмы лежат в основе воспаления, которое способствует локализации
инфекционного агента или иного антигена в пределах определённых тканей и
формированию полноценной иммунной реакции защитного характера.

Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) — гиперчувствительность,


обусловленная антителами (IgE, IgG, IgM) против аллергенов. Развивается через несколько
минут или часов после воздействия аллергена: расширяются сосуды, повышается их
проницаемость, развиваются зуд, бронхоспазм, сыпь, отеки. Поздняя фаза ГНТ дополня-
ется действием продуктов эозинофилов и нейтрофилов.
К ГНТ относятся I, II и III типы аллергических реакций (по Джеллу и Кумбсу): I тип —
анафилактический, обусловленный главным образом действием IgE; II тип —
цитотоксический, обусловленный действием IgG, IgM; III тип — иммунокомплексный,
развивающийся при образовании иммунного комплекса IgG, IgM с антигенами. В
отдельный тип выделяют антирецепторные реакции.
Основные типы реакций гиперчувствительности
I тип — анафилактический. При первичном контакте с антигеном образуются IgE, которые
прикрепляются Fc-фрагментом к тучным клеткам и базофилам. Повторно введенный
антиген перекрестно связывается с IgE на клетках, вызывая их дегрануляцию, выброс
гистамина и других медиаторов аллергии.
Первичное поступление аллергена вызывает продукцию плазмацитами IgE, IgG4.
Синтезированные IgE прикрепляются Fc-фрагментом к Fc-pe цепторам (FceRl) базофилов в
крови и тучных клеток в слизистых оболочках, соединительной ткани. При повторном
поступлении аллергена на тучных клетках и базофилах образуюто комплексы IgE с
аллергеном (перекрестная сшивка FceRl антигеном), вызывающие дегрануляцию клеток.
Клинические проявления гиперчувствительности I типа.
Клинические проявления гиперчувствительности I типа могут протекать на фоне атопии.
Атопия — наследственная предрасположенность к развитию ГНТ, обусловленная повы-
шенной выработкой IgE-антител к аллергену, повышенным количеством Fc-рецепторов
для этих антител на тучных клетках, особенностями распределения тучных клеток и повы-
шенной проницаемостью тканевых барьеров.
Анафилактический шок — протекает остро с развитием коллапса, отеков, спазма гладкой
мускулатуры; часто заканчивается смертью. Крапивница — увеличивается проницаемость
сосудов, кожа краснеет, появляются пузыри, зуд. Бронхиальная астма — развиваются
воспаление, бронхо-спазм, усиливается секреция слизи в бронхах.
II тип — цитотоксический. Антиген, расположенный на клетке «узнается» антителами
классов IgG, IgM. При взаимодействии типа «клетка-антиген-антитело» происходит
активация комплемента и разрушение клетки по трем направлениям:
комплементзависимый цитолиз; фагоцитоз; антителозависимая клеточная
цитотоксичность. Время реакции — минуты или часы.
Ко II типу гиперчувствительности близки антирецепторные реакции (так называемый IV
тип гиперчувствительности), основой которых являются антирецепторные антитела, на-
пример антитела против рецепторов к гормонам.
Клинические проявления II типа. По II типу гиперчувствительности развиваются
некоторые аутоиммунные болезни, обусловленные появлением аутоантител к антигенам
собственных тканей: злокачественная миастения, аутоиммунная гемолитическая анемия,
вульгарная пузырчатка, синдром Гудпасчера, аутоиммунный гипертиреоидизм,
инсулинозави-симый диабет II типа.
Аутоиммунную гемолитическую анемию вызывают антитела против Rh-антигена
эритроцитов; эритроциты разрушаются в результате активации комплемента и
фагоцитоза. Лекарственно-индуцируемые гемолитическая анемия, гранулоцитопения и
тромбоцитопения сопровождаются появлением антител против лекарства — гаптена и
цитолизом клеток, содержащих этот антиген.
III тип — иммунокомплексный. Антитела классов IgG, IgM образуют с растворимыми
антигенами иммунные комплексы, которые активируют комплемент. При избытке
антигенов или недостатке комплемента иммунные комплексы откладываются на стенке
сосудов, базальных мембранах, т. е. структурах, имеющих Fc-рецепторы.
Первичными компонентами III типа гипрчувствительности являются растворимые
иммунные комплексы антиген-антитело и комплемент (анафилатоксины С4а, СЗа, С5а).
При избытке антигенов или недостатке комплемента иммунные комплексы
откладываются на стенке сосудов, базальных мембранах, т.е. структурах, имеющих Fc-
рецепторы. Повреждения обусловлены тромбоцитами, нейтрофилами, иммунными
комплексами, комплементом. Привлекаются провоспалительные цитокины, включая TNF-
a и хемокины. На поздних стадиях в процесс вовлекаются макрофаги.
Реакция может быть общей (например, сывороточная болезнь) или вовлекать отдельные
органы, ткани, включая кожу (например, системная эритематозная волчанка, реакция
Артюса), почки (например, волчаночный нефрит), легкие (например, аспергиллез) или
другие органы. Эта реакция может быть обусловлена многими микроорганизмами. Она
развивается через 3-10 часов после экспозиции антигена, как в реакции Артюса. Антиген
может быть экзогенный (хронические бактериальные, вирусные, грибковые или прото-
зойные инфекции) или эндогенный, как при системной эри-тематозной волчанке.
Клинические проявления III типа. Сывороточная болезнь происходит при введении
высоких доз антигена, например лошадиной противостолбнячной сыворотки. Через 6-7
дней в крови появляются антитела против лошадиного белка, которые, взаимодействуя с
данным антигеном, образуют иммунные комплексы, откладывающиеся в стенках
кровеносных сосудов и тканях. Развиваются системные васкулиты, артриты (отложение
комплексов в суставах), нефрит (отложение комплексов в почках).
Реакция Артюса развивается при повторном внутрикожном введении антигена, который
локально образует иммунные комплексы с ранее накопившимися антителами. Прояв-
ляется отеком, геморрагическим воспалением и некрозом.
3. Возбудитель столбняка. Таксономия. Характеристика возбудителей.
Патогенез инфекции, микробиологическая диагностика. Специфические
лечебно-профилактические препараты.
Столбняк — тяжелая раневая инфекция, вызываемая Clostridium tetani, характеризуется
поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог.
Таксономия. С. tetani относится к отделу Firmicutes, роду Clostridium.
Морфологические свойства. Возбудитель - подвижная (перитрих) грамположительная
палочка, образует споры, чаще круглые, реже овальные, споры расположены
терминально. В культуре старше 24 ч бактерии становятся грамотрицательными. Капсул
не образуют.
Культуральные свойства. Облигатный анаэроб. На жидких питательных средах бактерии
растут придонно, продуцируя сильный экзотоксин. На плотных питательных средах
образуют прозрачные или слегка сероватые колонии с шероховатой поверхностью. Не
расщепляют углеводов, обладают слабым протеолитическим действием.
Антигенная структура и токсинообразование. По жгутиковому Н-антигену делится на 10
сероваров; О-антиген является общим для всех представителей вида. Возбудитель
продуцирует два патогенных растворимых антигена — тетанолизин и тетаноспазмин,
составляющих две фракции столбнячного экзотоксина.
Факторы патогенности. Основным фактором патогенности является экзотоксин.
Тетанолизин и тетаноспазмин оказывают соответственно гемолитическое (вызывает лизис
эритроцитов) и спастическое (вызывает непроизвольное сокращение мышц) действие.
Резистентность. Являясь нормальным обитателем кишечника животных, человека,
клостридии попадают в окружающую среду, в почву с фекалиями, ще в виде спор могут
сохраняться годами. Споры столбнячной палочки отличаются термоустойчивостью: при
кипячении погибают лишь через 50—60 мин..
Эпидемиология и патогенез. Заражение происходит при проникновении возбудителя в
организм через дефекты кожи и слизистых оболочек при ранениях (боевых,
производственных, бытовых), ожогах, обморожениях, через операционные раны, после
инъекций. При инфицировании пуповины возможно развитие столбняка у
новорожденных («пупочный столбняк»).
Патогенез. Главным патогенетическим фактором является столбнячный токсин. Палочки
столбняка остаются в раневой ткани, т.е. на месте внедрения, и не распространяются по
организму. От места размножения возбудителя токсин распространяется по кровеносным
и лимфатическим сосудам, по нервным стволам, достигает спинного и продолговатого
мозга и поражает нервные окончания синапсов, секретирующих медиаторы
(ацетилхолин), в результате чего нарушается проведение импульсов по нервным
волокнам.
Клиника. Инкубационный период составляет в среднем 6— 14 дней. У больных
наблюдаются спазм жевательных мышц, затрудненное глотание, напряжение мышц
затылка, спины (туловище принимает дугообразное положение — опистотонус), груди и
живота. Характерны постоянные мышечные боли, повышенная чувствительность к
различным раздражителям, частые генерализованные судороги. Болезнь протекает при
повышенной температуре тела и ясном сознании.
Иммунитет. После перенесенной болезни иммунитет не вырабатывается. От матери,
вакцинированной против столбняка, новорожденным передается непродолжительный
пассивный антитоксический иммунитет.
Микробиологическая диагностика. Для бактериологического исследования берут
материал из раны и очагов воспаления, а также кровь. В культурах выявляют столбнячный
токсин, проводя опыт на мышах, у которых развивается характерная клиническая картина.
Обнаружение столбнячного токсина при наличии грамположительных палочек с круг-
лыми терминальными спорами позволяет сделать заключение, что в исследуемом
материале присутствует С. tetani.
Лечение. Адсорбированный столбнячный анатоксин. Получен путем обезвреживания
формалином столбнячного токсина с последующей его очисткой, концентрацией и
адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Входит в состав ассоциированной коклюшно-
дифтерийно-столбнячной вакцины и других препаратов. Применяется для активной
иммунизации против столбняка.
Противостолбнячная сыворотка. Получена из крови лошадей, гинериммунизированных
столбнячным анатоксином. Применяется для профилактики и лечения столбняка.
Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Получен из гамма-глобулиновой
фракции крови людей-доноров, ревакцинированных очищенным столбнячным
анатоксином. Применяется для пассивной экстренной профилактики столбняка в
сочетании со столбнячным анатоксином при повреждениях кожных покровов, а также для
лечения начавшегося заболевания.
Профилактика: При обширных травмах необходимо обратиться к врачу. Проводится
хирургическая обработка раны. Надежным способом защиты от столбняка является
специфическая профилактика, которая состоит в проведении плановой и экстренной
иммунизации. Экстренная пассивная иммунизация осуществляется у привитых детей и
взрослых в случаях травм, ожогов и обморожений путем введения 0,5 мл сорбированного
столбнячного анатоксина; непривитым вводят 1 мл столбнячного анатоксина и
человеческий иммуноглобулин. Для создания искусственного активного иммунитета
применяют адсорбированный столбнячный анатоксин в составе вакцин АКДС и АДС или
секстанатоксина. Вакцинацию начинают с 3—5-месячного возраста и затем периодически
проводят ревакцинации.
Билет 23.
1. Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные
и вирулентные бактериофаги. Лизогения. Обнаружение. Практическое
применение.
Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически про-
никать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение
(лизис).
Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. По механизму взаимодействия
различают вирулентные и умеренные фаги.
Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно
репродуцируются в ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия
вирулентного фага с бактерией протекает в виде нескольких стадий и весьма схож с
процессом взаимодействия вирусов человека и животных с клеткой хозяина. Однако для
фагов, имеющих хвостовой отросток с сокращающимся чехлом, он имеет особенности.
Эти фаги адсорбируются на поверхности бактериальной клетки с помощью фибрилл
хвостового отростка. В результате активации фагового фермента АТФазы происходит
сокращение чехла хвостового отростка и внедрение стержня в клетку. В процессе
«прокалывания» клеточной стенки бактерии принимает участие фермент лизоцим,
находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага, содержащаяся в
головке, проходит через полость хвостового стержня и активно впрыскивается в
цитоплазму клетки. Остальные структурные элементы фага (капсид и отросток) остаются
вне клетки.
После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной клетке
накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового лизоцима и
внутриклеточного осмотического давления происходит разрушение клеточной стенки,
выход фагового потомства в окружающую среду и лизис бактерии. Один литический цикл
(от момента адсорбции фагов до их выхода из клетки) продолжается 30—40 мин. Процесс
бактериофагии проходит несколько циклов, пока не будут лизированы все
чувствительные к данному фагу бактерии.
Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризу ется определенной
степенью специфичности. По специфичности действия различают поливалентные фаги,
способные взаимодействовать с родственными видами бактерий, моновалентные фаги,
взаимодействующие с бактериями определенного вида, и типовые фаги,
взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий.
Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они вступают
в симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком случае
геномом фага называют профаг. Профаг, ставший частью хромосомы клетки, при ее
размножении реплицируется синхронно с геном бактерии, не вызывая ее лизиса, и
передается по наследству от клетки к клетке неограниченному числу потомков.
Биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом)
называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг, получила название
лизогенной. Это название отражает способность профага самопроизвольно или под
действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки и
переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий бактерии.
Лизогенные культуры по своим основным свойствам не отличаются от исходных, но
они невосприимчивы к повторному заражению гомологичным или близкородственным
фагом и, кроме того, приобретают дополнительные свойства, которые находятся под
контролем генов профага. Изменение свойств микроорганизмов под влиянием профага
получило название фаговой конверсии. Последняя имеет место у многих видов мик-
роорганизмов и касается различных их свойств: культуральных, биохимических,
токсигенных, антигенных, чувствительности к антибиотикам и др. Кроме того, переходя из
интегрированного состояния в вирулентную форму, умеренный фаг может захватить часть
хромосомы клетки и при лизисе последней переносит эту часть хромосомы в другую
клетку. Если микробная клетка станет лизогенной, она приобретает новые свойства.
Таким образом, умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости
микроорганизмов.
Практическое применение фагов. Бактериофаги используют в лабораторной
диагностике инфекций при внутривидовой идентификации бактерий, т. е. определении
фаговара (фаготипа). Для этого применяют метод фаготипирования, основанный на
строгой специфичности действия фагов: на чашку с плотной питательной средой,
засеянной «газоном» чистой культурой возбудителя, наносят капли различных
диагностических типоспецифических фагов. Фаговар бактерии определяется тем типом
фага, который вызвал ее лизис (образование стерильного пятна, «бляшки», или
«негативной колонии», фага). Методику фаготипирования используют для выявления
источника и путей распространения инфекции (эпидемиологическое маркирование).
Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник
их заражения.
По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в воде)
можно судить о присутствии в них соответствующих патогенных бактерий. Подобные
исследования проводят при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных
болезней.
Фаги применяют также для лечения и профилактики ряда бактериальных инфекций.
Производят брюшнотифозный, сальмонеллезный, дизентерийный, синегнойный, ста-
филококковый, стрептококковый фаги и комбинированные препараты (колипротейный,
пиобактериофаги и др). Бактериофаги назначают по показаниям перорально, парен-
терально или местно в виде жидких, таблети-рованных форм, свечей или аэрозолей.
Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в качестве
векторов для получения рекомбинантных ДНК.
2. Роль микроорганизмов в инфекционном процессе (восприимчивость,
механизм передачи возбудителя и входные ворота инфекции). Роль
факторов внешней среды в развитии инфекционной болезни.
В развитии инфекции и формах ее проявления играют роль три основных
взаимодействующих фактора: патогенные микроорганизмы, восприимчивый
макроорганизм и внешняя среда, где происходит их взаимодействие. Чтобы вызвать
заболевание, микроорганизмы должны обладать патогенностью и вирулентностью, т. е.
признаками, которые характеризуют их как возбудителей заболевания.
Патогенность, или способность вызывать заболевание, является видовым, генетически
обусловленным признаком микроорганизмов, возникшим в процессе эволюции.
Патогенность контролируется многими генами, каждый из которых отвечает за синтез
определенных ферментов и структур, обеспечивающих микроорганизму возможность
существования в макроорганизме. Существует также группа условно-патогенных
микроорганизмов, которые могут вызывать заболевания лишь при ослаблении
сопротивляемости организма, когда защитные факторы недостаточны для борьбы с ними.
Условно-патогенные микроорганизмы живут на коже, слизистых оболочках и в полостях
организма человека и при плохом питании, утомлении, тяжелой работе, неправильном
использовании лекарственных препаратов, нарушениях температурного режима могут
вызвать заболевания. Патогенностью обладают и некоторые сапрофиты, не ведущие
паразитического образа жизни, но выделяющие во внешнюю среду ядовитые продукты —
токсины или другие продукты жизнедеятельности, способные вызвать заболевание у
человека. Например, возбудитель ботулизма живет во внешней среде как сапрофит, но,
попадая в пищевые продукты, особенно консервы, он начинает размножаться и выделяет
настолько ядовитый токсин, что даже самые ничтожные дозы его вызывают тяжелейшее
отравление, часто со смертельным исходом. Возбудитель газовой гангрены обитает в
кишечнике человека, но при загрязнении раневых поверхностей, особенно размозженных
мышц, может вызвать смертельное заболевание.
Признак патогенности характеризует взаимоотношения только определенного
микроорганизма и хозяина, так как каждый вид патогенного микроба приспособился
существовать только в одном или крайне ограниченном числе видов хозяина. Например,
вирус кори и холерный вибрион патогенны для человека и непатогенны для животных.
Возбудитель чумы крупного рогатого скота непатогенен для человека, а бруцеллы могут
поражать как человека, так и животных. Понятие патогенности более широкое, чем
понятие паразитарности. Все патогенные микроорганизмы — паразиты, но признаками
патогенности могут обладать при определенных условиях и условно-патогенные
микроорганизмы, и даже сапрофиты.
Вирулентность — мера патогенности микроорганизма для конкретного вида хозяина.
Вирулентность — индивидуальный, варьирующий признак внутри данного вида
микроорганизма, когда отдельные штаммы могут обладать различным по силе
болезнетворным действием. Патогенность и вирулентность микроорганизмов связаны с
выделением ими различных продуктов жизнедеятельности (метаболиты), ферментов,
ядовитых веществ — токсинов, способных нарушать проницаемость клеток и тканей
хозяина и разрушать его клеточные структуры. Вирулентность микроорганизмов связана
также с наличием на их поверхностях различных структур, например капсулы и
микрокапсулы, и определенных белков и липидов, наличие которых облегчает микробу
проникновение в организм или препятствует проявлению фагоцитоза.
Вирулентность микроорганизма определяют на чувствительных животных: белых мышах,
морских свинках, кроликах — путем введения им патогенных культур микробов,
определяя минимальную смертельную дозу его. 
Минимальная смертельная, или минимальная летальная, доза — dosis letalis minima (Dim)
— то количество микробов, которое способно вызвать гибель 95—100% зараженных
животных. Вирулентные микробы, обладающие высокой степенью патогенносте, могут
вызвать гибель чувствительного животного при введении ему всего нескольких клеток.
Маловирулентные микроорганизмы вызывают гибель животных только при введении им
сотен миллионов клеток. Чаще летальную дозу (LD50) определяют по тому количеству
микробных клеток, которое способно вызвать гибель 50% животных, чувствительных к
данному виду микроорганизмов. LD50 позволяет сопоставлять вирулентность различных
возбудителей путем определения гибели 50% животных, зараженных в опыте одинаковой
минимальной дозой.
Вирулентность патогенных микробов может значительно колебаться. Только что
выделенные из организма возбудители более вирулентны, чем сохраняющиеся на
искусственных питательных средах в условиях лаборатории. Изменить вирулентность
микроорганизмов можно действием повышенных температур, антисептиков, пассажами
через организм невосприимчивого или маловосприимчивого животного, путем
трансформации, выращивая их на питательных средах, содержащих нуклеопротеиды
(ДНК) родственных микробов. Ослабление вирулентности у некоторых штаммов может
быть настолько стойким, что становится возможным использование таких ослабленных,
аттенуированных, штаммов в качестве вакцин.
Колебания вирулентности микроба могут отражаться на тяжести инфекционного процесса
у человека, длительности инкубационного периода, продолжительности болезни.
Характерными признаками патогенных микроорганизмов являются также их
специфичность и органотропность.
Специфичность — способность каждого вида патогенных микробов в случае
проникновения в организм и размножения в нем вызывать определенную, имеющую
характерную клиническую картину, инфекционную болезнь. Это обусловлено наличием у
патогенных микроорганизмов определенных, характерных только для данного вида
продуктов жизнедеятельности, ферментов, токсинов, поражающих избирательно разные
органы и ткани организма. Антигенные свойства микроорганизма, его химическая
структура определяют специфическую перестройку защитных свойств макроорганизма
только в отношении этого возбудителя.
Органотропность характерна для большинства микроорганизмов — возбудителей
инфекционных заболеваний. Предпочтительное поражение определенных органов и
тканей характерно для кишечных микробов: холерные вибрионы, возбудители
дизентерии и брюшного тифа поражают слизистую оболочку кишечника, малярийный
плазмодий — клетки печени и эритроциты, вирус гриппа — слизистые оболочки
дыхательных путей, вирус оспы — эпителий кожи и слизистых, вирус полиомиелита —
нервные клетки спинного и продолговатого мозга, вирусы гепатита — клетки печени,
вирусы энцефалитов — нервные клетки головного мозга. Преимущественное поражение
того или иного органа находит отражение в клинической картине инфекционного
заболевания.

При этом внешняя среда и ее природные факторы влияют на человека прежде всего
через социальные условия его жизни: уровень экономического развития общества и его
культуры, санитарно-гигиенические условия труда и быта, национальные и религиозные
обычаи, особенности питания и др. Инфекционные болезни — это прежде всего
социальная проблема, рост их частоты свидетельствует об экономическом
неблагополучии в обществе. Факторы внешней среды способствуют активации
механизмов передачи возбудителей инфекционных болезней и играют решающую роль в
эпидемическом процессе.

Внешняя среда является обязательным участником в инфекционном процессе, его


третьей движущей силой. Факторы внешней среды (физические, химические,
биологические и социальные) могут существенно влиять на развитие, течение и исход
инфекционного процесса.
Важным физическим фактором является температура. Классические опыты Уолкера и
Боринга на модели экспериментальной вирусной инфекции показали, что повышение
температуры тела организма приводит к активации факторов естественной
резистентности, в частности усилению продукции интерферрона.
При высокой температуре усиливаются механизмы противовирусной защиты. Поэтому
при лечении больных вирусными инфекциями не оправдано снижение высокой
температуры, если нет для этого жизненно важных показаний. С другой стороны,
снижение в холодное время года температуры тела человека (простудный фактор)
приводит к ослаблению естественной резистентности. В связи с действием разных
температур существует сезонность ряда инфекционных заболеваний. Повышение
заболеваемости воздушнокапельными инфекциями (острой респираторной вирусной
инфекции - ОРВИ, грипп) имеет место в холодное время года (зимой) под действием
простудного фактора, кишечными инфекциями - в летне-осенний период, когда в
условиях высокой температуры возбудители кишечных инфекций (дизентерия, холера,
гепатит А, брюшной тиф) интенсивно размножаются во внешней среде, а также
распространяются с пищевыми продуктами и водой.
Особенности питания, наличие витаминов в пище могут существенно влиять на
естественную резистентность. В весенний период в связи с авитаминозом обостряются
хронические инфекционные заболевания (туберкулез, ревматизм). Витамин В 12 и другие
производные бензимидазола (дибазол), являясь стимуляторами синтеза белка в
организме, повышают его естественную резистентность. Поэтому эти препараты
используют для профилактики инфекционных болезней.
Социальный фактор является мощным фактором внешней среды, влияющим на
устойчивость организма к инфекции. Антибиотикотерапия, вакцинопрофилактика
позволяют достаточно эффективно управлять инфекционным процессом.
Техногенное загрязнение внешней среды способствует развитию инфекционных
заболеваний. Высокое содержание в воздухе, воде тяжелых металлов,
сероводородсодержащих соединений, радиоактивных элементов приводит к
формированию иммунодефицитов в организме, а с другой стороны, в ряде случаев
стимулируют экспрессию факторов вирулентности патогена. Так, природный газ
Оренбургского, Астраханского природных месторождений резко усиливал персистентный
потенциал стафилококков, делая население этих газоносных провинций
бактерионосителями.

3. Возбудители лейшманиозов. Таксономия. Характеристика возбудителей.


Циклы развития. Патогенез инфекции. Микробиологическая диагностика.
Специфическая профилактика.
Таксономия: тип Sarcomastigophorae, подтип Mastigophora — жгутиковые, класс
Zoomastigophora, отряд Kinetoplastida, род Leishmania.
Характеристика возбудителей: внутриклеточные паразиты, развивающиеся в макрофагах
или клетках ретикулоэндотелиальной системы. Размножаются простым делением,
проходят два цикла бесполого развития: жгутиковый и безжгутиковый. В жгутиковом
цикле паразиты развиваются на питательных средах или в кишечнике москита,
зараженного при сосании крови больных людей или животных. Заглоченные москитом
амастиготы превращаются в кишечнике в промастиготы, делятся и на 6е-сутки накапли-
ваются в глотке москита. Возбудитель имеет удлиненную веретенообразную форму.
Протоплазма содержит ядро, цитоплазму, зерна волютина и кинетопласт. Жгутик, отхо-
дящий от заостренного конца, способствует перемещению лейшманий.
Безжгутиковый цикл проходит в ретикулоэндотелиальных клетках печени, селезенки,
лимфатических узлов, в макрофагах инфицированного организма. Паразиты имеют
округлую форму, без жгутиков; при окраске по Романовскому—Гимзе цитоплазма
приобретает серовато-голубой цвет, а ядро и кинетопласт — красновато-фиолетовый.
Культивирование: питательная среда NNN, содержащую агар с дефибринированной
кровью кролика. Лейшмании также растут на хорион-аллантоисной оболочке куриного
эмбриона и в культурах клеток.
Эпидемиология: в странах теплого климата. Механизм передачи возбудителей —
трансмиссивный, через укус переносчиков — москитов. Основные источники
возбудителей: при кожном антропонозном лейшманиозе — люди; при кожном
зоонозном лейшманиозе — грызуны; при висцеральных лейшманиозах — люди; при
кожно-слизистом лейшманиозе — грызуны, дикие и домашние животные.
Патогенез и клиника. Различают два возбудителя кожного лейшманиоза: L. tropica —
возбудитель антропонозного лейшманиоза и L. major — возбудитель зоонозного кожного
лейшманиоза.
Антропонозный кожный лейшманиоз характеризуется длительным инкубационным
периодом — несколько месяцев. На месте укуса москитом появляется бугорок, который
увеличивается и через 3 месяца изъязвляется. Язвы чаще располагаются на лице и
верхних конечностях, рубцуются к концу года. Зоонозный кожный лейшманиоз (рано изъ-
язвляющийся лейшманиоз, пендинская язва, сельская форма) протекает более остро.
Инкубационный период составляет 2—4 недели. Мокнущие язвы чаще локализуются на
нижних конечностях. Кожно-слизистый лейшманиоз вызывают лейшмании комплекса L.
braziliensis; развивается гранулематозное и язвенное поражение кожи носа, слизистых
оболочек рта и гортани. Антрапонозный висцеральный лейшманиоз вызывается
лейшманиями комплекса L. donovani; у больных поражаются печень, селезенка,
лимфоузлы, костный мозг и пищеварительный тракт.
Иммунитет: стойкий пожизненный
Микробиологическая диагностика. В мазках (из бугорков, содержимого язв, пунктатов из
органов), окрашенных по Романовскому— Гимзе, обнаруживают внутриклеточно распо-
ложенные мелкие, овальной формы лейшмании (амастиготы). Для выделения чистой
культуры возбудителя делают посев на среду NNN: инкубация 3 недели. Серологические
методы недостаточно специфичны. Возможно применение РИФ, ИФА.
Кожно-аллергический тест на ГЗТ к лейшманину применяют при эпидемиологических
исследованиях лейшманиоза.
Лечение: При висцеральном лейшманиозе применяют препараты сурьмы и диамидины
(пентамидин). При кожном лейшманиозе — акрихин, амфотерицин.
Профилактика: уничтожают больных животных, проводят борьбу с грызунами и моски-
тами. Иммунопрофилактику кожного лейшманиоза осуществляют прививкой живой
культуры L. major.

Билет 24.
1. Особенности морфологии и биологии вирусов. Принципы классификации.
Структура и химический состав вирусов.
В основу классификации вирусов положены следующие категории:
• тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структура, количество нитей (одна или две),
особенности воспроизводства вирусного генома;
• размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;
• наличие суперкапсида;
• чувствительность к эфиру и дезоксихолату;
• место размножения в клетке;
• антигенные свойства и пр.
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому
различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име-
ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых
кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными.
Среди РНК- содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК)
геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию
информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицательным
(минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов выполняет только
наследственную функцию.
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения,
белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству
Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци-
топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются
особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в
клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем
происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется
вирионом.
Морфологию вирусов изучают с помощью электронной микроскопии, так как их размеры
малы (18-400 нм) и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной мозаики),
пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), нитевидной
(филовирусы), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто
устроенные и сложно устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой
оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических
субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с
другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой
оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка является производной
структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены
гликопротеиновые шипы, или шипики (пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов
находится матриксный М-белок.
Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спиральный, икосаэдрический
(кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрический тип симметрии обусловлен
образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную
нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль-
ный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у
вируса гриппа).
Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения,
белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству
Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в ци-
топлазме или ядре клетки. Они — автономные генетические структуры. Отличаются
особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в
клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем
происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется
вирионом.
Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью электронного микроскопа, так как
их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.
Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной мозаики),
пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), в виде
сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно
устроенные вирусы.
Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой
оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических
субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с
другом, образуя нуклеокапсид.
Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-попротеиновой
оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка является производной
структурой от мембран вирус-инфицированной клетки. На оболочке вируса расположены
гликопротеиновые шипы, или шипики (пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов
находится матриксный М-белок.
Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спиральный, икосаэдрический
(кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрический тип симметрии обусловлен
образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную
нуклеиновую кислоту (например, у вирусов гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спираль-
ный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у
вируса гриппа).
Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или
ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус
натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие включения — тельца Гварниери; вирусы
герпеса и аденовирусы — внутриядерные включения.
Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом
ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом
ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус
полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около 350 нм).
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому
различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име-
ют один набор генов. Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых
кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными.
Среди РНК-содержащих вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК)
геномом. Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию
информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с отрицательным
(минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов выполняет только
наследственную функцию.
Вирусы поражают позвоночных и беспозвоночных животных, а также растения и
бактерии. Являясь основными возбудителями инфекционных заболеваний человека,
вирусы также участвуют в процессах канцерогенеза, могут передаваться различными пу-
тями, в том числе через плаценту (вирус краснухи, цитомега ловирус и др.), поражая плод
человека. Они могут приводить к постинфекционным осложнениям — развитию
миокардитов, панкреатитов, иммунодефицитов и др.
Кроме обычных вирусов, известны и так называемые неканонические вирусы — прионы
— белковые инфекционные частицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие
вид фибрилл размером 10—20x100—200 нм. Прионы, по-видимому, являются
одновременно индукторами и продуктами автономного гена человека или животного и
вызывают у них энцефалопатии в условиях медленной вирусной инфекции (болезни
Крейтц-фельдта—Якоба, куру и др.).
Другими необычными агентами, близкими к вирусам, являются вироиды — небольшие
молекулы кольцевой, суперспи-рализованной РНК, не содержащие белка, вызывающие
заболевания у растений.

2. Реакция связывания комплемента.


Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг
другу антигены и антитела образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент
антител присоединяется комплемент (С), т. е. происходит связывание комплемента комп-
лексом антиген—антитело. Если же комплекс антиген—антитело не образуется, то комп-
лемент остается свободным.
Специфическое взаимодействие АГ и AT сопровождается адсорбцией (связыванием)
комплемента. Поскольку процесс связывания комплемента не проявляется визуально, Ж.
Борде и О.Жангу предложили использовать в качестве индикатора гемолитическую
систему (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка), которая показывает,
фиксирован ли комплемент комплексом АГ-АТ. Если АГ и AT соответствуют друг другу, т. е.
образовался иммунный комплекс, то комплемент связывается этим комплексом и
гемолиза не происходит. Если AT не соответствует АГ, то комплекс не образуется и
комплемент, оставаясь свободным, соединяется со второй системой и вызывает гемолиз.
Компоненты. Реакция связывания комплемента (РСК) относится к сложным
серологическим реакциям. Для ее проведения необходимы 5 ингредиентов, а именно:
АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка
(вторая система).
Антигеном для РСК могут быть культуры различных убитых микроорганизмов, их лизаты,
компоненты бактерий, патологически измененных и нормальных органов, тканевых
липидов, вирусы и вирусосодержащие материалы.
В качестве комплемента используют свежую или сухую сыворотку морской свинки.
Механизм. РСК проводят в две фазы: 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей три
компонента антиген + антитело + комплемент; 2-я фаза (индикаторная) — выявление в
смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы,
состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к
ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген—антитело происходит
связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных
антителами эритроцитов не произойдет; реакция положительная. Если антиген и антитело
не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела),
комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит —
ан-тиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз; реакция отрицательная.
Применение. РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в
частности сифилиса (реакция Вассермана).
3. Возбудитель эпидемического сыпного тифа. Таксономия. Характеристика
возбудителя. Болезнь Бриля-Цинссера. Патогенез инфекции,
микробиологическая диагностика. Специфические лечебно-
профилактические препараты.
Эпидемический сыпной тиф — острый антропоноз с трансмиссивным механизмом
распространения платяными вшами. Клинически характеризуется лихорадкой, тяжелым
течением в связи с поражением кровеносных капилляров с нарушением кровоснабжения
жизненно важных органов (мозг, сердце, почки), появлением сыпи.
Таксономия и общая характеристика: Возбудитель — R. prowazekii, род Rickettsia
семейство Rickettsiaceae; паразитирует только в цитоплазме чувствительных клеток.
Хорошо культивируется в организме платяных вшей, желточных мешках, обладает
гемолитическими свойствами, способен формировать негативные колонии («бляшки») в
культуре клеток; при окраске по Здродовскому окрашивается в красный цвет. Устойчив к
действию факторов внешней среды; длительно сохраняется в высохших фекалиях
инфицированных вшей.
Эпидемиология и механизм заражения. Заражение реализуется либо втиранием фекалий
инфицированных вшей через расчесы кожи, либо путем вдыхания пылевидного аэрозоля
из высохших инфицированных риккетсиями фекалий.
Клиника, диагноз, лечение. Инкубационный период 10 дней. Начало заболевания острое,
клинические проявления обусловлены генерализованным поражением системы
эндотелиальных клеток кровеносных сосудов, что приводит к нарушению каскада
тромбо-антитромбообразования. Морфологическую основу болезни составляет
генерализованный васкулит с формированием сыпи на кожных покровах. Болезнь
протекает с высокой температурой, симптомами поражения сердечно-сосудистой и
нервной систем. Иммунитет — непродолжительный, клеточно-гуморальный.
Диагностика: осуществляется по клинико-эпидемиологическим данным, подкрепляется
лабораторным исследованием на специфические антитела (РСК, РНГА, ИФА и др.).
Лечение: Быстрое этиотропное лечение однократным приемом доксициклина, при его
отсутствии — препаратами тетрациклинового ряда.
Профилактика. Изоляция завшивленных больных, дезинфекция препаратами,
содержащими перметрин. Для специфической профилактики разработана живая вакцина
из штамма Е, которая применяется в комбинации с растворимым антигеном риккетсии
Провачека (живая комбинированная сыпнотифозная вакцина из штамма), а также
инактивированная вакцина из растворимого антигена.
Болезнь Бриля – рецидив после ранее перенесенного эпидемического сыпного тифа.
Возбудитель— R. prowazekii.
Клинически протекает как эпидемический тиф легкой и средней тяжести.
Патоморфология инфекционного процесса та же, что и при эпидемической форме.
Различие заключается в эпидемиологии (нет переносчика, отсутствует сезонность
проявления, источник и реализация способа заражения) и патогенезе начальной стадии
болезни. Она возникает вследствие активации латентно «дремлющих» риккетсий.
Микробиологическая диагностика. Затруднена неопределенностью симптоматики на
первой неделе заболевания (до появления сыпи) и ее сходством с симптомами при ин-
фекциях, чаще брюшнотифозной. Диагноз устанавливается на основании клинико-
эпидемиологических данных с учетом анамнеза больного и подкрепляется
серологическим исследованием со специфическим антигеном. При отсутствии
переносчика в очаге лечение может осуществляться без изоляции больного, в
зависимости от его состояния. Прогноз благоприятен даже в отсутствии лечения ан-
тибиотиками.
Профилактика. Меры профилактики те же, что и при эпидемической форме.
Специфическая профилактика невозможна.

Билет 25.
1. Простые и сложные методы окраски микробов. Принципы окраски по
Граму, Циль-Нильсену, Нейссеру, Романовскому-Гимза, их применение.
Бактериоскопический метод исследования предусматривает изучение микроорганизмов
в живом или фиксированном и окрашенном состоянии. Для изучения микроорганизмов в
живом состоянии используют метод раздавленной капли и метод висячей капли.
Наиболее часто применяют микроскопию бактерий в фиксированном и окрашенном
состоянии. Для приготовления фиксированного и окрашенного препарата на
обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора
хлорида натрия, в которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют его
таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром около 1-1,5 см.
Если исследуют жидкий материал, то его непосредственно петлей наносят на предметное
стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе. Для фиксации используют
физические и химические методы. Для фиксации мазка физическим методом предметное
стекло медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Мазки крови, мазки-отпечатки
органов и тканей фиксируют химическим методом путем погружения их на 5-20 минут в
метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова и другие фиксирующие жидкости. Для
окрашивания микробов используют простые и сложные методы. При простом методе
фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным
раствором фуксина (1-2 минуты) или метиленовым синим (3-5 минут), промывают водой,
высушивают и микроскопируют. Сложные методы окрашивания включают использование
нескольких красителей. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и
дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окраска по Граму:
1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовый раствор генцианового
фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 2-3 минуты ее снимают, а
краситель сливают.
2. Наносят раствор Люголя на 1-2 минуты.
3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения
отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Промывают препарат водой.
5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают
водой, высушивают и микроскопируют. Грамположительные бактерии окрашиваются в
фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный цвет. При окраске по методу Грама в
модификации Синева на первом этапе используют фильтровальные бумажки,
пропитанные генциановым или кристаллическим фиолетовым. Для этого полоски бумаги
пропитывают 1% раствором красителя и высушивают. На фиксированный мазок
помещают пропитанную красителем бумажку, заливают небольшим количеством воды и
выдерживают в течение 2 минут. После этого бумажку удаляют пинцетом, сливают краску
и, не промывая препарат водой, наносят раствор Люголя. Последующее окрашивание
проводят общепринятым методом. Распределение микроорганизмов в зависимости от
окраски по Граму:
1. Грамположительные бактерии: - кокки (за исключением гонококков и менингококков); -
бациллы и клостридии (спорообразующие палочки); - микобактерии, коринебактерии и
листерии.
2. Грамотрицательные бактерии: - некоторые кокки (гонококки и менингококки); - все
остальные палочковидные бактерии; - все извитые формы (вибрионы, спириллы,
спирохеты).

Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена:


1. На фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску
фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течение 3-5 минут.
2. Снимают бумагу, промывают мазок водой.
3. На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор солянокислого спирта на
1-2 минуты для обесцвечивания.
4. Промывают водой.
5.   Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 минут.
6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют.
Выявление капсулы по методу Гинса:
1. На предметное стекло наносят каплю туши, а рядом – каплю исследуемого материала.
Обе капли тщательно перемешивают и с помощью шлифованного стекла готовят мазок.
2. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.
3. Мазок окрашивают фуксином в разведении 1:3 или сафранином. При этом бактерии
окрашиваются в красный цвет, капсулы остаются неокрашенными и выделяются на
темном фоне препарата.
Окраска жгутиков по Леффлеру:
1. Взвесь бактерий переносят в каплю воды, не перемешивают и высушивают.
2. Обрабатывают препарат 15-20 минут протравой (1 мл насыщенного спиртового
раствора фуксина + смесь из 10 мл 25% водного раствора танина с 5 мл насыщенного
водного раствора сернокислого железа).
3. Тщательно промывают водой и высушивают на воздухе.
4. Докрашивают фуксином Циля в течение 3-4 минут при легком подогревании.
5. Промывают водой, высушивают, микроскопируют.

Окраска спор по методу Ожешки:


1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и
подогревают на пламени горелки в течение 2-3 минут.
2. Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем
горелки.
3. Окрашивают препарат по Цилю-Нильсену. Споры бактерий при этом приобретают
красный цвет, а вегетативные формы – синий.

Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными


анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый
фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин.
Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и
метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля,
разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА
ЦИЛЯ: основной фуксин – 1 г; спирт этиловый 96 % – 10 мл; фенол кристаллический – 5 г;
глицерин – несколько капель; вода дистиллированная – 100 мл.
Метиленовый синий Леффлера готовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора
метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1%
NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды.
После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между
листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и
микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа.
Способность микробов воспринимать красители называетсятинкториальными
свойствами.
При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру (3–5 мин) гранулы волютина у
дифтерийных коринебактерий приобретают темно–синий, а палочка – голубой цвет.
При сложных методах окраски мазков применяют два–три различных по цвету
красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в
деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю–Нельсену,
Нейссеру, Бурри–Гинсу, Романовскому–Гимзе и некоторые другие.
При окраске по НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий
окрашиваются в сине–черный, а бактерия – в желтый цвет. Мазок окрашивают: 1) 1 мин
уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий – 0,1 г, спирт – 2 мл, ледяная
уксусная кислота – 5 мл, дистиллированная вода – 100 мл); 2) сливают краситель и мазок
промывают водой; 3) на 20– 30 с наносят раствор Люголя; 4) 1 –3 мин окрашивают
везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и
40 мл дистиллированной воды).
Количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА, содержащегося в # стенке, определяет
характер окраски бактерий и других прокариот по ГРАМУ. Те из них, которые содержат в
клеточной стенке большое его количество (около 90 % пептидогликана), окрашиваются по
Граму в сине–фиолетовый цвет и их называют грамположительными, все другие,
содержащие в оболочке 5–20 % пептидогликана, – в розовый цвет и их называют
грамотрицательными. Толщина слоя пептидогликана в клеточной стенке
грамположительных бактерий в несколько раз больше, чем у грамотрицательных.
Техника окраски по Граму: 1. Фиксированный мазок 1–2 мин окрашивают раствором
генцианвиолета (генцианвиолет – 1 г, этанол 96 % – 10 мл, фенол кристаллический – 2 г,
вода дистиллированная – 100 мл; по методу Синева его покрывают пропитанной тем же
красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2–3 каплями воды). 2.
Слив генцианвиолет (сняв полоску бумаги Синева), мазок 1 мин обрабатывают раствором
Люголя и, не промывая водой, сливают его. 3. Обесцвечивают спиртом в течение 0,5 мин,
промывают водой. 4. Окрашивают 1–2 мин фуксином Пфейффера. 5. Мазок ополаскивают
водой и высушивают.
Для выявления грамположительных КИСЛОТО– И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий
туберкулеза и лепры, которые из–за большого количества в клеточных оболочках
жировосковых веществ, миколовой кислоты и других оксикислот непроницаемы для
разведенных растворов красителей, используют окраску по методу ЦИЛЯ – НИЛЬСЕНА.
Окрашивание их по этому способу достигается при помощи концентрированного
фенолового фуксина Циля с подогреванием над пламенем горелки до закипания и
отхождения паров. Окрашенные с применением термокислотной обработки
микобактерии не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и этилового
спирта. Техника окраски. 1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной
бумаги, на которую наносят фуксин Циля, и несколько раз подогревают над пламенем
горелки до появления паров, подливая краситель, далее бумагу снимают и промывают
водой. 2. Препарат обрабатывают (обесцвечивают) 5 % раствором серной кислоты и
промывают водой. 3. На мазок наливают водно–спиртовой раствор метиленового синего,
спустя 3–5 мин промывают водой и высушивают. Кислотоустойчивые бактерии
окрашиваются в интенсивно красный цвет, остальные виды микробов,
обесцвечивающиеся в процессе обработки препарата кислотой, – в светло–синий.

2. Оценка иммунного статуса макроорганизма: основные показатели и


методы определения.
Несмотря на вариабельность иммунологических показателей в норме, иммунный статус
можно определить путем постановки комплекса лабораторных тестов, включающих
оценку состояния факторов неспецифической резистентности, гуморального (В-система) и
клеточного (Т-система) иммунитета.
Оценка иммунного статуса проводится в клинике при трансплантации органов и тканей,
аутоиммунных заболеваниях, аллергиях, для выявления иммунологической
недостаточности при различных инфекционных и соматических заболеваниях, для
контроля эффективности лечения болезней, связанных с нарушениями иммунной
системы. В зависимости от возможностей лаборатории оценка иммунного статуса чаше
всего базируется на определении комплекса следующих показателей:
1) общего клинического обследования;
2) состояния факторов естественной резистентности;
3) гуморального иммунитета;
4) клеточного иммунитета;
5) дополнительных тестов.
При общем клиническом обследовании учитывают жалобы пациента, анамнез,
клинические симптомы, результаты общего анализа крови (включая абсолютное число
лимфоцитов), данные биохимического исследования.
Гуморальный иммунитет определяют по уровню иммуноглобулинов классов G, M, A, D, Е
в сыворотке крови, количеству специфических антител, катаболизму иммуноглобулинов,
гиперчувствительности немедленного типа, показателю В-лимфоцитов в периферической
крови, бласттрансформации В-лимфоцитов под действием В-клеточных митогенов и
другим тестам.
Состояние клеточного иммунитета оценивают по количеству Т-лимфоцитов, а также
субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической крови, бласттрансформации Т-лимфоци-
тов под действием Т-клеточных митогенов, определению гормонов тимуса, уровню
секретируемых цитокинов, а также постановкой кожных проб с аллергенами, контактной
сенсибилизацией динитрохлорбензолом. Для постановки кожных аллергических проб ис-
пользуются антигены, к которым в норме должна быть сенсибилизация, например проба
Манту с туберкулином. Способность организма к индукции первичного иммунного ответа
может дать контактная сенсибилизация динитрохлорбензолом.
В качестве дополнительных тестов для оценки иммунного статуса можно использовать
такие тесты, как определение бактерицидное™ сыворотки крови, титрование СЗ-, С4-
компонентов комплемента, определение содержания С-реактивного белка в сыворотке
крови, определение ревматоидных факторов и других аутоантител.
Таким образом, оценка иммунного статуса проводится на основании постановки
большого числа лабораторных тестов, позволяющих оценить состояние как гуморального
и клеточного звеньев иммунной системы, так и факторов неспецифической
резистентности. Все тесты разделены на две группы: тесты 1-го и 2-го уровня. Тесты 1-го
уровня могут быть выполнены в любой клинической иммунологической лаборатории
первичного звена здравоохранения, они используются для первичного выявления лиц с
явно выраженной иммунопатологией. Для более точной диагностики используются тесты
2-го уровня.

3. Возбудитель сифилиса. Таксономия. Характеристика возбудителя.


Патогенез инфекции, микробиологическая диагностика. Лечение.
Treponema palladium ; T. entericum
Морфология: типичные трепонемы. имеющие 8-12 завитков, двигательный аппарат – 3
периплазматических жгутика у каждого полюса клетки. Окраску по Граму не
воспринимают, по Романовскому-Гимзе – слабо розового цвета, выявляется
импрегнацией серебром.
Культуральные свойства: вирулентный штамм на пит. средах не растёт, накопление
культуры происходит путём заражения кролика в яичко. Вирулентные штаммы
культивируют на средах с мозговой и почечной тканью.
Биохимические свойства: микроаэрофил
Антигенная структура: солжная, обладает специфическим белковым и липоидным
антигенами, последний по своему составу идентичен кардиолипину, , экстрагированному
из бычьего сердца ( дифосфадилглицерин )
Факторы патогенности: в процессе прикрепления участвуют адгезины, липопротеины
учавствуют в развитии иммунопатологических процессов.
Резистентность: чувствителен к высыханию, солнечным лучам, на предметах сохраняется
до высыхания. При неблагоприятных условиях переходит в L-формы и образует цисты.
Патогенез: Вызывают сифилис. Из места входных ворот трепонемы попадают в
регионарные лимфатические узлы, где размножаются. Далее Т. проникает в кровяное
русло, где прикрепляется к эндотелиоцитам, вызывая эндартерииты, приводящие к
васкулитам и тканевому нектрозу. С кровью Т. разносится по всему организму, обсеменяя
органы: печень, почки, костную, сердечно-сосудистую, нервную системы.
Иммунитет: защитный иммунитет не вырабатывается. В ответ на антигены возбудителя
развивается ГЗТ и аутоиммунные процессы. Гуморальный иммунитет вырабатывается на
липоидный антиген Т. и представляет собой титр IgA и IgM.
Микроскопическое исследование. Проводят при первичном сифилисе во время
появления твердого шанкра. Материал для исследования: отделяемое шанкра, содержи-
мое регионарных лимфатических узлов, из которых готовят препарат «раздавленная»
капля и исследуют в темном поле. При положительном результате видны тонкие извитые
нити длиной 6—14 мкм, имеющие 10—12 равномерных мелких завитков правильной,
формы. Для бледной трепонемы характерны маятникообразные и поступательно-
сгибательные движения. При развитии поражений на слизистой оболочке рта при
вторичном сифилисе, а также при локализации твердого шанкра в полости рта приходится
дифференцировать бледную трепонему от сапрофитных трепонем, являющихся
представителями нормальной микрофлоры. В этом случае решающее диагностическое
значение имеет обнаружение типичных трепонем в пунктате регионарных лимфатических
узлов.
Серодиагностика. Реакцию Вассермана ставят одновременно с 2 антигенами: 1)
специфическим, содержащим антиген возбудителя— разрушенные ультразвуком
трепонемы; 2) неспецифическим — кардиолипиновым. Исследуемую сыворотку разводят
в соотношении 1:5 и ставят РСК по общепринятой методике. При положительной реакции
наблюдается задержка гемолиза, при отрицательной—происходит гемолиз эритроцитов;
интенсивность реакции оценивается соответственно от ( + + + + ) До ( —). Первый период
сифилиса является серонегативным и характеризуется отрицательной реакцией
Вассермана. У 50 % больных реакция становится положительной не ранее чем через 2—3
нед после появления твердого шанкра. Во втором и третьем периодах сифилиса частота
положительных реакций достигает 75— 90 %. После проведенного курса лечения реакция
Вассермана становится отрицательной. Параллельно реакции Вассермана ставится
реакция микропреципитации с неспецифическим кардиолипиновым антигеном и
исследуемой инактивированной сывороткой крови или плазмой. В лунку на пластине из
плексигласа (или на обычное стекло) наносят 3 капли сыворотки и добавляют 1 каплю
кардиолипинового антигена. Смесь тщательно перемешивают и учитывают результаты.
Положительная реакция е сывороткой крови больного сифилисом характеризуется
образованием и выпадением хлопьев разной величины; при отрицательном результате
наблюдается равномерная легкая опалесценция.
РИФ — реакция непрямой иммунофлюоресценции — является специфической при
диагностике сифилиса. В качестве антигена используют взвесь тканевых трепонем.
Используется реакция РИФ_200. Сыворотку больного инактивируют так же, как для
реакции Вассермана, и разводят в соотношении 1:200. На предметные стекла наносят
капли антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне. Затем на препарат наносят
сыворотку больного, через 30 мин промывают и высушивают. Следующим этапом
является обработка препарата флюоресцирующей сывороткой против глобулинов
человека. Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая степень
свечения трепонем.
РИТ—реакция иммобилизации трепонем — также является специфической. Живую
культуру трепонем получают при культивировании в яичке кролика. Яичко измельчают в
специальной среде, в которой трепонемы сохраняют подвижность. Ставят реакцию
следующим образом: взвесь тканевых (подвижных) трепонем соединяют в пробирке с
исследуемой сывороткой и добавляют свежий комплемент. В одну контрольную
пробирку вместо исследуемой сыворотки добавляют сыворотку здорового человека, в
другую — вместо свежего комплемента добавляют инактивированный — неактивный.
После выдерживания при 35 °С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок
готовят препарат «раздавленная» капля и в темном поле определяют количество
подвижных и неподвижных трепонем.
Лечение: Пенициллины, тетрациклины, висмутсодержащие препараты.

Билет 26.

1. Работы Р. Коха и их значение в практической микробиологии и


инфекционной патологии.
Физиологический период в развитии микробиологии связан также с именем немецкого
ученого Роберта Коха, которому принадлежит разработка методов получения чистых
культур бактерий, окраски бактерий при микроскопии, микрофотографии. Известна также
сформулированная Р. Кохом триада Коха, которой до сих пор пользуются при
установлении возбудителя болезни.
Постула́ты Ко́ ха, постула́ты Ко́ ха-Пасте́ра — утверждения, которые можно сделать
относительно микроорганизма, доказывающие, что он является возбудителем некоторой
болезни:
 Микроорганизм постоянно встречается в организме больных людей (или
животных) и отсутствует у здоровых;
 Микроорганизм должен быть изолирован от больного человека (или животного) и
его штамм должен быть выращен в чистой культуре;
 При заражении чистой культурой микроорганизма здоровый человек (или
животное) заболевает;
 Микроорганизм должен быть повторно изолирован от экспериментально
заражённого человека (или животного).
Первые три постулата известны также под названием триады Коха.
Следует заметить, что Кох полностью изъял вторую часть первого постулата, обнаружив
бессимптомных носителей холеры (Koch, 1893) и, позже, тифа.
Второй постулат не всегда удается реализовать для доказательства патогенной природы
микроорганизма, так как все вирусы и некоторые бактерии (например, возбудители
проказы) не могут быть получены в чистой культуре на искусственной питательной среде.
Третий постулат не всегда имеет место, как это обнаружил сам Кох для туберкулёза и для
холеры (Koch, 1884). Нередко у части индивидов подверженного инфекционному
заболеванию вида существует врожденная или приобретенная невосприимчивость,
связанная с иммунным статусом или особенностями генотипа. Например, люди с
делецией части гена CCR5 (гомозиготы по аллелю CCR5 Δ32) не заражаются ВИЧ-
инфекцией, натуральной оспой и чумой.
Тем не менее, постулаты Коха по сей день не потеряли своей значимости и остаются
основополагающими постулатами микробиологии и инфектологии, соответствие которым
является необходимым условием обоснования гипотезы инфекционной этиологии какого-
либо заболевания.

2. Реакции агглютинации. Компоненты, механизм способы постановки,


применение.
Реакция агглютинации — простая по постановке реакция, при которой происходит
связывание антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других
клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также
макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при
добавлении изотонического раствора натрия хлорида.
Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировоч-
ная, непрямая и др. Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осад-
ка (клетки, «склеенные» антителами, име ющими два или более антигенсвязывающих
центра — рис. 13.1). РА используют для:
1) определения антител в сыворотке крови больных, например, при бруцеллезе (реакции
Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля) и других
инфекционных болезнях;
2) определения возбудителя, выделенного от больного;
3) определения групп крови с использованием моноклональных антител против алло-
антигенов эритроцитов.
Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к
разведениям сыворотки крови больного добавляют диагностикум (взвесь убитых
микробов,) и через несколько часов инкубации при 37 ˚С отмечают наибольшее
разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е.
образовался осадок.
Характер и скорость агглютинации зависят от вида антигена и антител. Примером
являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и H-антигенов) со специ-
фическими антителами. Реакция агглютинации с О-диагностикумом (бактерии, убитые
нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернис-
той агглютинации. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые фор-
малином, сохранившие термолабильный жгутиковый Н-антиген) — крупнохлопчатая и
протекает быстрее.
Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентиро-
вочную реакцию агглютинации, применяя диагностические антитела
(агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование возбудителя.
Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К капле диагностической
агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру
возбудителя, выделенного от больного. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят
каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микробами
хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увели-
чивающимися разведениями агглютинирующей сыворотки, к которым добавляют по 2—3
капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени
просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмеча-
ется в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. Одновременно учитыва-
ют контроли: сыворотка, разведенная изотоническим раствором натрия хлорида, должна
быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка.
Разные родственные бактерии могут агглютинироваться одной и той же диагностической
агглютинирующей сывороткой, что затрудняет их идентификацию. Поэтому пользуются
адсорбированными агглютинирующими сыворотками, из которых удалены перекрестно
реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыво-
ротках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии.

3. Боррелии и боррелиозы (возвратные тифы, Лайм-боррелиоз). Таксономия.


Характеристика возбудителей. Патогенез инфекции, микробиологическая
диагностика.
Спирохеты рода Borrelia вызывают антропонозные (возвратный тиф), зоонозные (болезни
Лайма) инфекционные болезни с трансмиссивным механизмом передачи возбудителей
(клещи, вши).
Морфологические свойства: тонкие спирохеты с крупными завитками. Двигательный
аппарат представлен фибриллами. Они хорошо воспринимают анилиновые красители, по
Романовскому—Гимзе окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Боррелии обладают
генетическим аппаратом, который состоит из небольших размеров линейной хромосомы
и набора циркулярных и линейных плазмид.
Культуральные свойства: культивируются на сложных питательных средах, содержащих
сыворотку, тканевые экстракты, а также в куриных эмбрионах.
Чувствительны к высыханию и нагреванию. Устойчивы к низким t-рам.
Болезнь Лайма - возбудитель В. burgdorferi. Хроническая инфекция с поражением кожи,
сердечной и нервной систем, суставов.
Морфология и культуральные свойства: типичные боррелии.
Антигенная структура: Сложная. Белковые антигены фибриллярного аппарата и
цитоплазматического цилиндра, антитела к которым появляются на ранних этапах
инфекции. Протективную активность имеют антигены, представленные
липидмодифицированными интегральными белками наружной мембраны А, В, С, D, E, F.
Факторы патогенности. Липидмодифицированные белки наружной мембраны обеспе-
чивают способность боррелий прикрепляться и проникать в клетки хозяина. В результате
взаимодействия боррелий с макрофагами происходит выделение ИЛ-1, который индуци-
рует воспалительный процесс.
Патогенез: На месте укуса клеща образуется красная папула. Возбудитель
распространяется из места укуса через окружающую кожу с последующей диссеминацией
с током крови к различным органам, особенно сердцу, ЦНС, суставам. Клиника
подразделяется на 3 стадии:
1.Мигрирующая эритема, которая сопровождается развитием гриппоподобного
симптомокомплекса.
2.Развитие доброкачественных поражений сердца и ЦНС
3.Развитие артритов крупных суставов
Иммунитет. Гуморальный, видоспецифический к антигенам клеточной стенки.
Микробиологическая диагностика. Используются бактериоскопический, серологический
методы и ПЦР в зависимости от стадии заболевания. Материалом для исследования
служат биоптаты кожи, синовиальная жидкость
суставов, ликвор, сыворотка крови. На 1-й стадии заболевания проводится бактери-
ологическое исследование биоптатов кожи из эритемы.
Начиная со 2-й стадии заболевания осуществляется серологическое исследование
определением IgM или нарастания титра IgG ИФА или РИФ.
ПЦР используется для определения наличия боррелий в ликворе, суставной жидкости.
Лечение: антибиотики тетрациклинового ряда.
Профилактика. Неспецифическая.
Возвратные тифы — группа острых инфекционных заболеваний, вызываемых
боррелиями, характеризующихся острым началом, приступообразной лихорадкой, общей
интоксикацией. Различают эпидемический и эндемический возвратные тифы.
Возбудителем эпидемического возвратного тифа является В. recurrentis.
Эпидемический возвратный тиф - антропоноз. Специфические переносчики - платяная,
головная вши. Человек заражается возвратным тифом при втирании гемолимфы раздав-
ленных вшей в кожу при расчесывания места укуса.
Эндемический возвратный тиф— зооноз. Возбудители - В. duttoni и В. persica. Резервуар -
грызуны, клещи. Человек заражается через укусы клещей.
Патогенез: Попав во внутреннюю среду организма, боррелии внедряются в клетки
лимфоидно-макрофагальной системы, где размножаются и поступают в кровь, вызывая
лихорадку, головную боль, озноб. Взаимодействуя с АТ, боррелии образуют агрегаты,
которые нагружаются тромбоцитами, вызывая закупорку капилляров, следствием чего
является нарушение кровообращения в органах.
Иммунитет: к эпидемическому возвратному тифу гуморальный, непродолжительный.
Микробиологическая диагностика. Бактериоскопический метод — обнаружение
возбудителя в крови, окрашенной по Романовскому—Гимзе. Биопробу ставят для
дифференциации В. recurrentis от возбудителей эндемического возвратного тифа. В
качестве вспомогательного используют серологический метод с постановкой РСК.
Лечение: антибиотики тетрациклинового ряда, левомицетин, ампициллин.
Профилактика. Неспецифическая.

Билет 27.
1. Антибиотики. Методы определения чувствительности бактерий к
антибиотикам.
Антибиотики — химиотерапевтические вещества, продуцируемые микроорганизмами,
животными клетками, растениями, а также их производные и синтетические продукты,
которые обладают избирательной способностью угнетать и задерживать рост
микроорганизмов, а также подавлять развитие злокачественных новообразований.
За тот период, который прошел со времени открытия П.Эрлиха, было получено более 10
000 различных антибиотиков, поэтому важной проблемой являлась систематизация этих
препаратов. В настоящее время существуют различные классификации антибиотиков,
однако ни одна из них не является общепринятой.
В основу главной классификации антибиотиков положено их химическое строение.

Наиболее важными классами синтетических антибиотиков являются хинолоны и


фторхинолоны (например, ципрофлоксацин), сульфаниламиды (сульфадиметоксин),
имидазолы (метронидазол), нитрофураны (фурадонин, фурагин).
По спектру действия антибиотики делят на пять групп в зависимости от того, на какие
микроорганизмы они оказывают воздействие. Кроме того, существуют
противоопухолевые антибиотики, продуцентами которых также являются актиномицеты.
Каждая из этих групп включает две подгруппы: антибиотики широкого и узкого спектра
действия.
Антибактериальные антибиотики составляют самую многочисленную группу
препаратов. Преобладают в ней антибиотики широкого спектра действия, оказывающие
влияние на представителей всех трех отделов бактерий. К антибиотикам широкого
спектра действия относятся аминогликозиды, тетрациклины и др. Антибиотики узкого
спектра действия эффективны в отношении небольшого круга бактерий, например полет-
миксины действуют на грациликутные, ванкомицин влияет на грамположительные
бактерии.
В отдельные группы выделяют противотуберкулезные, противолепрозные,
противосифилитические препараты.
Противогрибковые антибиотики включают значительно меньшее число препаратов.
Широким спектром действия обладает, например, амфотерицин В, эффективный при
кандидозах, бластомикозах, аспергиллезах; в то же время нистатин, действующий на
грибы рода Candida, является антибиотиком узкого спектра действия.
Антипротозойные и антивирусные антибиотики насчитывают небольшое число
препаратов.
Противоопухолевые антибиотики представлены препаратами, обладающими
цитотоксическим действием. Большинство из них применяют при многих видах опухолей,
например митоми-цин С.
Действие антибиотиков на микроорганизмы связано с их способностью подавлять те или
иные биохимические реакции, происходящие в микробной клетке.
В зависимости от механизма действия различают пять групп антибиотиков:
1. антибиотики, нарушающие синтез клеточной стенки. К этой группе относятся,
например, β-лактамы. Препараты этой группы характеризуются самой высокой
избирательностью действия: они убивают бактерии и не оказывают влияния на клетки
микроорганизма, так как последние не имеют главного компонента клеточной стенки
бактерий — пептидогликана. В связи с этим β -лактамные антибиотики являются
наименее токсичными для макроорганизма;
2. антибиотики, нарушающие молекулярную организацию и синтез клеточных мембран.
Примерами подобных препаратов являются полимиксины, полиены;
3. антибиотики, нарушающие синтез белка; это наиболее многочисленная группа
препаратов. Представителями этой группы являются аминогликозиды, тетрациклины,
макроли-ды, левомицетин, вызывающие нарушение синтеза белка на разных уровнях;
4. антибиотики — ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот. Например, хинолоны
нарушают синтез ДНК, рифампицин — синтез РНК;
5. антибиотики, подавляющие синтез пуринов и аминокислот. К этой группе относятся,
например, сульфаниламиды.
Источники антибиотиков.
Основными продуцентами природных антибиотиков являются микроорганизмы, которые,
находясь в своей естественной среде (в основном, в почве), синтезируют антибиотики в
качестве средства выживания в борьбе за существование. Животные и растительные
клетки также могут вырабатывать некоторые вещества с селективным антимикробным
действием (например, фитонциды), однако широкого применения в медицине в качестве
продуцентов антибиотиков они не получили.
Таким образом, основными источниками получения природных и полусинтетических
антибиотиков стали:
• Актиномицеты (особенно стрептомицеты) — ветвящиеся бактерии. Они синтезируют
большинство природных антибиотиков (80 %).
• Плесневые грибы — синтезируют природные бета-лактамы (грибы рода Cephalosporium
и Penicillium)H фузидиевую кислоту.
• Типичные бактерии — например, эубактерии, бациллы, псевдомонады — продуцируют
бацитрацин, полимиксины и другие вещества, обладающие антибактериальным
действием.
Способы получения.
Существует три основных способа получения антибиотиков:
• биологический синтез (так получают природные антибиотики — натуральные продукты
ферментации, когда в оптимальных условиях культивируют микробы-продуценты,
которые выделяют антибиотики в процессе своей жизнедеятельности);
• биосинтез с последующими химическими модификациями (так создают
полусинтетические антибиотики). Сначала путем биосинтеза получают природный
антибиотик, а затем его первоначальную молекулу видоизменяют путем химических
модификаций, например присоединяют определенные радикалы, в результате чего
улучшаются противомикробные и фармакологические характеристики препарата;
• химический синтез (так получают синтетические аналоги природных антибиотиков,
например хлорамфеникол/левомицетин). Это вещества, которые имеют такую же
структуру,

Как и всякие лекарственные средства, практически каждая группа антимикробных


химиопрепаратов может оказывать побочное действие, причем и на макроорганизм, и на
микробы, и на другие лекарственные средства.
Осложнения со стороны макроорганизма
Наиболее частыми осложнениями антимикробной химиотерапии являются:
Токсическое действие препаратов. Как правило, развитие этого осложнения зависит от
свойств самого препарата, его дозы, способа введения, состояния больного и проявляется
только при длительном и систематическом применении антимикробных
химиотерапевтических препаратов, когда создаются условия для их накопления в
организме. Особенно часто такие осложнения бывают, когда мишенью действия
препарата являются процессы или структуры, близкие по составу или строению к
аналогичным структурам клеток макроорганизма. Токсическому действию
антимикробных препаратов особенно подвержены дети, беременные, а также пациенты с
нарушением функций печени, почек.
Побочное токсическое влияние может проявляться как нейротоксическое (например,
гликопептиды и аминогликозиды оказывают ототоксическое действие, вплоть до полной
потери слуха за счет воздействия на слуховой нерв); нефротоксическое (полиены,
полипептиды, аминогликозиды, макролиды, гликопептиды, сульфаниламиды);
общетоксическое (противогрибковые препараты — полиены, имидазолы); угнетение
кроветворения (тетрациклины, сульфаниламиды, левомицетин/хлорамфеникол, который
содержит нитробензен — супрессор функции костного мозга); тератогенное [ами-
ногликозиды, тетрациклины нарушают развитие костей, хрящей у плода и детей,
формирование зубной эмали (коричневая окраска зубов), левомицетин/хлорамфеникол
токсичен для новорожденных, у которых ферменты печени не полностью сформированы
(«синдром серого ребенка»), хинолоны — действуют на развивающуюся хрящевую и
соединительную ткани].
Предупреждение осложнений состоит в отказе от противопоказанных данному пациенту
препаратов, контроле за состоянием функций печени, почек и т. п.
Дисбиоз (дисбактериоз). Антимикробные химиопрепараты, особенно широкого спектра,
могут воздействовать не только на возбудителей инфекций, но и на чувствительные
микроорганизмы нормальной микрофлоры. В результате формируется дисбиоз, поэтому
нарушаются функции ЖКТ, возникает авитаминоз и может развиться вторичная инфекция
(в том числе эндогенная, например кандидоз, псевдомембранозный колит).
Предупреждение последствий такого рода осложнений состоит в назначении, по
возможности, препаратов узкого спектра действия, сочетании лечения основного
заболевания с противогрибковой терапией (например, назначением нистатина),
витаминотерапей, применением эубиотиков и т. п.
Отрицательное воздействие на иммунную систему. К этой группе осложнений относят
прежде всего аллергические реакции. Причинами развития гиперчувствительности может
быть сам препарат, продукты его распада, а также комплекс препарата с сывороточными
белками. Возникновение такого рода осложнений зависит от свойств самого препарата,
от способа и кратности его введения, индивидуальной чувствительности пациента к
препарату. Аллергические реакции развиваются примерно в 10 % случаев и проявляются в
виде сыпи, зуда, крапивницы, отека Квинке. Относительно редко встречается такая
тяжелая форма проявления аллергии, как анафилактический шок. Такое осложнение чаще
дают бета-лактамы (пенициллины), рифамицины. Сульфаниламиды могут вызвать
гиперчувствительность замедленного типа. Предупреждение осложнений состоит в тща-
тельном сборе аллергоанамнеза и назначении препаратов в соответствии с
индивидуальной чувствительностью пациента. Кроме того, антибиотики обладают
некоторым иммунодепрессивным действием и могут способствовать развитию
вторичного иммунодефицита и ослаблению напряженности иммунитета.
Эндотоксический шок (терапевтический). Это явление, которое возникает при лечении
инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями. Введение антибиотиков
вызывает гибель и разрушение клеток и высвобождение больших количеств эндотоксина.
Это закономерное явление, которое сопровождается временным ухудшением кли-
нического состояния больного.
Взаимодействие с другими препаратами. Антибиотики могут способствовать потен-
цированию действия или инактивации других препаратов (например, эритромицин стиму-
лирует выработку ферментов печени, которые начинают ускоренно метаболизировать ле-
карственные средства разного назначения).
Побочное воздействие на микроорганизмы.
Применение антимикробных химиопрепа-ратов оказывает на микробы не только прямое
угнетающее или губительное воздействие, но также может привести к формированию
атипичных форм микробов (например, к образованию L-форм бактерий или изменению
других свойств микробов, что значительно затрудняет диагностику инфекционных забо-
леваний) и персистирующих форм микробов. Широкое использование антимикробных ле-
карственных средств ведет также к формированию антибиотикозависимости (редко) и
лекарственной устойчивости — антибиотикорезистентности (достаточно часто).

2. Имунокомпетентные клетки: Т- и В-лимфоциты. Макрофаги. Их


кооперация в иммунном ответе.
Иммунокомпетентные клетки - клетки, способные специфически распознавать антиген и
отвечать на него иммунной реакцией. Такими клетками являются Т- и В-лимфоциты
(тимусзависимые и костномозговые лимфоциты), которые под влиянием чужеродных
агентов дифференцируются в сенсибилизированный лимфоцит и плазматическую клетку.
Т-лимфоциты – это сложная по составу группа клеток, которая происходит от
полипотентной стволовой клетки костного мозга, а созревает и дифференцируется в
тимусе из предшественников. Т-лимфоциты разделяются на две субпопуляции:
иммунорегуляторы и эффекторы. Задачу регуляции иммунного ответа выполняют Т-
хелперы. Эффекторную функцияю осуществляют Т-киллеры и естественные киллеры. В
орагнизме Т-лимфоциты обеспечивают клеточные формы иммунного ответа, определяют
силу и продолжительность иммунной реакции.
B-лимфоциты – преимущественно эффекторные иммунокомпетентные клетки. Зрелые В-
лимфоциты и их потомки – плазматические клетки являются антителопродуцентами. Их
основными продуктами являются иммуноглобулины. В-лимфоциты участвуют в
формировании гуморального иммунитета, В-клеточной иммунологической памяти и
гиперчувствительности немедленного типа.
Макрофаги - клетки соединительной ткани, способные к активному захвату и
перевариванию бактерий, остатков клеток и других чужеродных для организма частиц.
Основная функция макрофагов сводится к борьбе с теми бактериями, вирусами и
простейшими, которые могут существовать внутри клетки-хозяина, при помощи мощных
бактерицидных механизмов. Роль макрофагов в иммунитете исключительно важна - они
обеспечивают фагоцитоз, переработку и представление антигена T-клеткам.
Кооперация иммунокомпетентных клеток. Иммунная реакция организма может иметь
различный характер, но всегда начинается с захвата антигена макрофагами крови и
тканей или же со связывания со стромой лимфоидных органов. Нередко антиген
адсорбируется также на клетках паренхиматозных органов. В макрофагах он может
полностью разрушаться, но чаше подвергается лишь частичной деградации. В частности,
большинство антигенов в лизосомах фагоцитов в печение часа подвергается
ограниченной денатурации и протеолизу. Оставшиеся от них пептиды (как правило, два-
три остатка аминокислот) комплексируются с экспрессированными на внешней мембране
макрофагов молекулами МНС.
Макрофаги и все другие вспомогательные клетки, несущие на внешней мембране
антигены, называются антигенпрезентирующими, именно благодаря им Т- и В-
лимфоциты, выполняя функцию презентации, позволяют быстро распознавать антиген.
Иммунный ответ в виде антителообразования происходит при распознавании В-клетками
антигена, который индуцирует их пролиферацию и дифференциацию в плазмоцит.
Прямое воздействие на В-клетку без участия Т-клеток могут оказать только
тимуснезависимые антигены. В этом случае В-клетки кооперируются с Т-хелперами и
макрофагами. Кооперация на тимусза-висимый антиген начинается с его презентации на
макрофаге Т-хелперу. В механизме этого распознавания ключевую роль имеют молекулы
МНС, так как рецепторы Т-хелперов распознают номинальный антиген как комплекс в
целом или же как модифицированные номинальным антигеном молекулы МНС,
приобретшие чужеродность. Распознав антиген, Т-хелперы секретируют γ-интерферон,
который активирует макрофаги и способствует уничтожению захваченных ими
микроорганизмов. Хелперный эффект на В-клетки проявляется пролиферацией и
дифференциацией их в плазмоциты. В распознавании антигена при клеточном характере
иммунного ответа, кроме Т-хелперов, участвуют также Т-киллеры, которые обнаруживают
антиген на тех антигенпрезентирующих клетках, где он комплексируется с молекулами
МНС. Более того, Т-киллеры, обусловливающие цитолиз, способны распознавать не
только трансформированный, но и нативный антиген. Приобретая способность вызывать
цитолиз, Т-киллеры связываются с комплексом антиген + молекулы МНС класса 1 на
клетках-мишенях; привлекают к месту соприкосновения с ними цитоплазма-тические
гранулы; повреждают мембраны мишеней после экзоцитоза их содержимого.
В результате продуцируемые Т-киллерами лимфотоксины вызывают гибель всех
трансформированных клеток организма, причем особенно чувствительны к нему клетки,
зараженные вирусом. При этом наряду с лимфотоксином активированные Т-киллеры
синтезируют интерферон, который препятствует проникновению вирусов в окружающие
клетки и индуцирует в клетках образование рецепторов лимфотоксина, тем самым
повышая их чувствительность к литическому действию Т-киллеров.
Кооперируясь в распознавании и элиминации антигенов, Т-хелперы и Т-киллеры не
только активируют друг друга и своих предшественников, но и макрофагов. Те же, в свою
очередь, стимулируют активность различных субпопуляций лимфоцитов.
Регуляция клеточного иммунного ответа, как и гуморального, осуществляется Т-
супрессорами, которые воздействуют на пролиферацию цитотоксических и
антигенпрезентирующих клеток.
Цитокины. Все процессы кооперативных взаимодействий им-мунокомпетентных клеток,
независимо от характера иммунного ответа, обусловливаются особыми веществами с
медиаторными свойствами, которые секретируются Т-хелперами, Т-киллерами,
мононуклеарными фагоцитами и некоторыми другими клетками, участвующими в
реализации клеточного иммунитета. Все их многообразие принято называть цитокинами.
По структуре цитокины являются протеинами, а по эффекту действия — медиаторами.
Вырабатываются они при иммунных реакциях и обладают потенциирующим и
аддитивным действием; быстро синтезируясь, цитокины расходуются в короткие сроки.
При угасании иммунной реакции синтез цитокинов прекращается.

3. Возбудитель амебной дизентерии. Патогенез инфекции,


микробиологическая диагностика. Методы дифференциации от
непатогенных видов.
Амебиаз (син.: амебная дизентерия) - протозойная инфекционная болезнь,
характеризующаяся язвенным поражением толстого кишечника, склонностью к
рецидивирующему течению и внекишечных осложнениями (абсцессы легких, печени,
головного мозга). Возбудитель заболевания - Entamoeba histolytica - относится к классу
саркодовых. В организме человека патогенная амеба может существовать в 4-х формах: 1.
Большая вегетативная или тканевая форма (forma magna) имеет размер 30-60 мкм,
быстро передвигается псевдоподий и способна фагоцитировать эритроциты. Она имеет
круглое ядро, в свежих нативных препаратах видимое только при фазово-контрастной
микроскопии. Способность фагоцитировать является характерным признаком, что
позволяет отличить ее от других видов амеб кишечника. 2. Малая вегетативная или
просветные формы (forma minuta) имеет размер 15-25 мкм, которая фагоцитируют
бактерии и грибы и не пожирает эритроциты. 3. Вегетативная предцистна форма (forma
praecystica) имеет Ромир 10-20 мкм. Включение (микроорганизмы, эритроциты) в
цитоплазме отсутствуют. 4. Цистный форма (forma cystica) имеет правильную шаровидную
форму, размером 8-15 мкм, не содержит бактерий и других пищевых включений.
Основным источником инфекции являются больные острой и хронической форме
амебиаза, реконвалесценты и носители. Выделение цист может продолжаться годами.
Один человек может ежесуточно выделять около 500 млн цист. Механизм заражения -
фекально-оральный, цисты попадают в организм здорового человека с питьевой
некипяченой водой, пищевыми продуктами, через грязные руки и предметы обихода.
Для лабораторной диагностики амебиаза используют микроскопические, культуральные,
биологические и серологические исследования. Материалом для микробиологического
анализа служат испражнения, аспирантов и биоптаты, полученные при
колонофиброскопия и ректороманоскопии, мокрота, гной из пораженных органов, кровь
для серологических реакций. При пересылке стула в лаборатории, в качестве консерванта
используют поливиниловый спирт.
Микроскопическое исследование
Решающим в диагностике амебиаза являются данные паразитологических исследований.
Большие тканевые формы с эритроцитами является патогномоничным признаком
гистолитических амебы. Очень важным является также нахождение характерных
четырехъядерных цист. Микроскопируют 5-6 препаратов "надавленные капли" с
свижовидиленого кала (не позднее 10 минут после опорожнения), а также мазки,
окрашенные раствором Люголя, смесью Сафарлиева или железным гематоксилином по
Гейденгайном. В нативных препаратах тканевая форма дизентерийной амебы имеет вид
крупных клеток, активно двигаются. Эндоплазма и эктоплазма резко отличаются.
Эндоплазма темнее, зернистая, в ней расположены вакуоли с фагоцитированными
эритроцитами или без них и мало заметное ядро, которое лучше выявляется фазово-
контрастным микроскопом. Эктоплазма более светлая и прозрачная, неравномерной
толщины. Малая просветные формы меньших размеров имеет такой же вид, но без
фагоиитованих эритроцитов. Иногда в цитоплазме можно обнаружить небольшое
количество бактерий и грибов. Это основная форма существования гистолитических
амебы, которую проявляют при хроническом амебиазе или у реконвалесцентов. При
остром течении болезни и у носителей ее не находят. Цисты в нативных препаратах
имеют вид блестящих светопреломляющая шариков, размером 8-15 мкм, их внутреннее
содержание мало заметен. При использовании консерванта Сафарлиева цитоплазма
дизентерийной амебы окрашивается в голубой цвет, ядро - в интенсивно-синий, пищевые
и гликогена вакуоли остаются бесцветными. Этот метод позволяет отличить Е. histolytica
от Entamoeba colif в которой кариолема расположена эксцентрично, а глыбки хроматина
разные по величине. В мазках, окрашенных по Гейденгайном, большие тканевые формы
гистолитических амебы отчетливо видимые на фоне многих эритроцитов, единичных
лейкоцитов и бактерий. Цитоплазма амебы имеет четкое разделение на свету
гомогенную бесцветную эктоплазмы и темную мелкозернистую ендоплазму темно-серого
цвета, в которой видны окрашенные в черный цвет эритроциты. Они имеют различную
величину и форму в зависимости от степени их переваривания. В эндоплазма амебы
видно ядро размером 3-5 мкм с тонкой оболочкой, под которой находятся мелкие зерна
периферийного хроматина. Центр ядра занимает пятиконечная кариосома, также
окрашена в черный цвет. В мазках могут встречаться дегенеративно измененные амебы, в
которых видна интенсивная вакуолизацию цитоплазмы и пикноз ядра. Цисты
дизентерийной амебы имеют правильную круглую форму, реже - овальную, с гладкой
двухконтурной оболочкой. В цитоплазме цист зрелого возраста видно 4 ядра, в незрелых -
1-2 ядра. Под оболочкой ядер находятся серповидные зерна хроматина, в центре -
кариосома. В незрелых цист можно обнаружить вакуоли, содержащие гликоген. При
окраске раствором Люголя большие тканевые и образовательные формы имеют
типичную морфологическую структуру, но теряют подвижность. Цисты имеют форму
колец с пятиконечной кариосома в центре. Незрелые цисты имеют каплю гликогена
окрашивается в красный цвет. Методика микроскопического исследования слизи, гноя,
биоптатов, мокрота такая же, как и при микроскопии испражнений, но положительные
результаты получить трудно.
Культуральные и биологические исследования
Если проявить гистолитических амебы при микроскопии нативных и окрашенных
препаратов не удается, делают посевы исследуемого материала на среду Робинзона или
Павловой, в состав которых входит печеночный экстракт, выделяют и идентифицируют
чистые культуры. Но такой паразитологический метод практические лаборатории
используют очень редко. В некоторых случаях можно применять постановку
биологической пробы. Исследуемым материалом заражают котят, хомячков и других
лабораторных животных. Так, при введении стула больных, содержащие дизентерийной
амебы, в прямую кишку котят, у них развивается геморрагический колит. В фекалиях
зараженных животных возбудителя легко обнаружить при микроскопии нативных
препаратов. Серологические исследования при амебиазе также проводят редко, в
основном для диагностики его внекишечных форм. При этом используют реакции
непрямой гемагглютинации с антигеном из разрушенных ультразвуком дизентерийных
амеб, латекс-агглютинации, связывания комплемента, непрямой иммунофлуоресценции,
встречного имуноелекрофорезу и метод ИФА. Серологические реакции выпадают
положительными в 60-70% больных кишечный амебиаз и в 90-95% - при амебный абсцесс
печени, легких или головного мозга.
Билет 28.
1. И.И. Мечников и его учение о невосприимчивости к инфекционным
болезням.

После работ Л. Пастера появилось множество исследований, в которых пытались


объяснить причины и механизмы формирования иммунитета после вакцинации.
Выдающуюся роль в этом сыграли работы И. И. Мечникова и П. Эрлиха.
Исследования И. И. Мечникова (1845—1916) показали, что большую роль в
формировании иммунитета играют особые клетки — макро- и микрофаги. Эти клетки
поглощают и переваривают чужеродные частицы, в том числе бактерии. Исследования И.
И. Мечникова по фагоцитозу убедительно доказали, что, помимо гуморального,
существует клеточный иммунитет. И. И. Мечников, ближайший помощник и
последователь Л. Пастера, заслуженно считается одним из основоположников
иммунологии. Его работы положили начало изучению иммунокомпетентных клеток как
морфологической основы иммунной системы, ее единства и биологической сущности.

Мечников внёс огромный вклад в развитие иммунологии. Он обосновал учение о


фагоцитозе и фагоцитах. Доказал, что фагоцитоз - явление универсальное, наблюдается у
всех животных, включая простейших, и проявляется по отношению ко всем чужеродным
веществам (бактерии, органические частицы и т. д.). Теория фагоцитоза заложила
краеугольный камень клеточной теории иммунитета и процесса иммуногенеза в целом с
учетом клеточных и гуморальных факторов. За разработку теорий фагоцитоза И. И.
Мечникову в 1908 г присуждена Нобелевская премия. Л. Пастер на своем портрете,
подаренном И. И. Мечникову, написал: «На память знаменитому Мечникову — творцу
фагоцитарной теории».
2. Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной
клетки.
Антиген – это биополимер органической природы, генетически чужеродный для
макроорганизма, который при попадании в последний распознаётся его иммунной
системой и вызывает иммунные реакции, направленные на его устранение.
Антигены обладают рядом характерных свойств: антигенностью, специфичностью и
иммуногенностью.
Антигенность. Под антигенностью понимают потенциальную способность молекулы
антигена активировать компоненты иммунной системы и специфически
взаимодействовать с факторами иммунитета (антитела, клон эффекторных лимфоцитов).
Иными словами, антиген должен выступать специфическим раздражителем по
отношению к иммунокомпетентным клеткам. При этом взаимодействие компоненты
иммунной системы происходит не со всей молекулой одновременно, а только с ее не-
большим участком, который получил название «антигенная детерминанта», или
«эпитоп».
Чужеродность является обязательным условием для реализации антигенности. По этому
критерию система приобретенного иммунитета дифференцирует потенциально опасные
объекты биологического мира, синтезированные с чужеродной генетической матрицы.
Понятие «чужеродность» относительное, так как имму-нокомпетентные клетки не
способны напрямую анализировать чужеродный генетический код. Они воспринимают
лишь опосредованную информацию, которая, как в зеркале, отражена в молекулярной
структуре вещества.
Иммуногенность — потенциальная способность антигена вызывать по отношению к себе
в макроорганизме специфическую защитную реакцию. Степень иммуногенности зависит
от ряда факторов, которые можно объединить в три группы: 1. Молекулярные
особенности антигена; 2. Клиренс антигена в организме; 3. Реактивность макроорганизма.
К первой группе факторов отнесены природа, химический состав, молекулярный вес,
структура и некоторые другие характеристики.
Иммуногенность в значительной степени зависит от природы антигена. Важна также
оптическая изомерия аминокислот, составляющих молекулу белка. Большое значение
имеет размер и молекулярная масса антигена. На степень иммуногенности также
оказывает влияние пространственная структура антигена. Оказалась также существенной
стерическая стабильность молекулы антигена. Еще одним важным условием иммуно-
генности является растворимость антигена.
Вторая группа факторов связана с динамикой поступления антигена в организм и его
выведения. Так, хорошо известна зависимость иммуногенности антигена от способа его
введения. На иммунный ответ влияет количество поступающего антигена: чем его
больше, тем более выражен иммунный ответ.
Третья группа объединяет факторы, определяющие зависимость иммуногенности от со-
стояния макроорганизма. В этой связи на первый план выступают наследственные
факторы.
Специфичностью называют способность антигена индуцировать иммунный ответ к строго
определенному эпитопу. Это свойство обусловлено особенностями формирования
иммунного ответа — необходима комплементарность рецепторного аппарата
иммунокомпетентных клеток к конкретной антигенной детерминанте. Поэтому
специфичность антигена во многом определяется свойствами составляющих его эпитопов.
Однако при этом следует учитывать условность границ эпитопов, их структурное
разнообразие и гетерогенность клонов антигенреактивных лимфоцитовой
специфичности. В результате этого организм на антигенное раздражение всегда отвечает
поликлональными иммунным ответом.
Антигены бактериальной клетки. В структуре бактериальной клетки различают
жгутиковые, соматические, капсульные и некоторые другие антигены. Жгутиковые, или Н-
антигены, локализуются в локомоторном аппарате бактерий — их жгутиках. Они
представляют собой эпитопы сократительного белка флагеллина. При нагревании
флагеллин денатурирует, и Н-антиген теряет свою специфичность. Фенол не действует на
этот антиген.
Соматический, или О-антиген, связан с клеточной стенкой бактерий. Его основу со-
ставляют ЛПС. О-антиген проявляет термостабильные свойства — он не разрушается при
длительном кипячении. Однако соматический антиген подвержен действию альдегидов
(например, формалина) и спиртов, которые нарушают его структуру.
Капсулъные, или К-антигены, располагаются на поверхности клеточной стенки.
Встречаются у бактерий, образующих капсулу. Как правило, К-антигены состоят из кислых
полисахаридов (уроновые кислоты). В то же время у бациллы сибирской язвы этот
антиген построен из полипептидных цепей. По чувствительности к нагреванию различают
три типа К-антигена: А, В, и L. Наибольшая термостабильность характерна для типа А, он
не денатурирует даже при длительном кипячении. Тип В выдерживает
непродолжительное нагревание (около 1 часа) до 60 "С. Тип L быстро разрушается при
этой температуре. Поэтому частичное удаление К-антигена возможно путем длительного
кипячения бактериальной культуры.
На поверхности возбудителя брюшного тифа и других энтеробактерий, которые обладают
высокой вирулентностью, можно обнаружить особый вариант капсульного антигена. Он
получил название антигена вирулентности, или Vi-антигена. Обнаружение этого антигена
или специфичных к нему антител имеет большое диагностическое значение.
Антигенными свойствами обладают также бактериальные белковые токсины, ферменты и
некоторые другие белки, которые секретируются бактериями в окружающую среду (на-
пример, туберкулин). При взаимодействии со специфическими антителами токсины, фер-
менты и другие биологически активные молекулы бактериального происхождения теряют
свою активность. Столбнячный, дифтерийный и ботулинический токсины относятся к
числу сильных полноценных антигенов, поэтому их используют для получения анатокси-
нов для вакцинации людей.
В антигенном составе некоторых бактерий выделяется группа антигенов с сильно выра-
женной иммуногенностью, чья биологическая активность играет ключевую роль в
формировании патогенности возбудителя. Связывание таких антигенов специфическими
антителами практически полностью инактивирует вирулентные свойства микроорганизма
и обеспечивает иммунитет к нему. Описываемые антигены получили название
протективных. Впервые протективный антиген был обнаружен в гнойном отделяемом
карбункула, вызванного бациллой сибирской язвы. Это вещество является субъединицей
белкового токсина, которая ответственна за активацию других, собственно вирулентных
субъединиц — так называемого отечного и летального факторов.

3. Возбудитель дифтерии. Таксономия. Характеристика возбудителя.


Токсинообразование. Патогенез инфекции, микробиологическая
диагностика. Специфические лечебно-профилактические препараты.
Дифтерия — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся фибринозным
воспалением в зеве, гортани, реже в других органах и явлениями интоксикации.
Возбудителем ее является Corynebacterium diphtheriae.
Таксономия. Corynebacterium относится к отделу Firmicutes, роду Corynebacterium.
Морфологические и тинкториальные свойства. Возбудитель дифтерии характеризуется
полиморфизмом: тонкие, слегка изогнутые палочки (наиб. распространенные)
встречаются кокковидные и ветвящиеся формы. Бактерии нередко располагаются под
углом друг к другу. Они не образуют спор, не имеют жгутиков, у многих штаммов
выявляют микрокапсулу. Характерная особенность - наличие на концах палочки зерен
волютина (обусловливает булавовидную форму). Возбудитель дифтерии по Граму
окрашивается положительно.
Культуральные свойства. Факультативный анаэроб, оптим. температура. Микроб растет на
специальных питательных средах, например на среде Клауберга (кровяно-теллуритовый
агар), на которой дифтерийная палочка даёт колонии 3 типов: а) крупные, серые, с
неровными краями, радиальной исчерченностью, напоминающие маргаритки; б) мелкие,
черные, выпуклые, с ровными краями; в) похожие на первые и вторые.
В зависимости от культуральных и ферментативных свойств различают 3 биологических
варианта C.diphtheriae: gravis, mitis и промежуточный intermedius.
Ферментативная активность. Высокая. Ферментируют глк и мальтозу в образованием
кислоты, не разлагают сахарозу, лактозу и маннит. Не продуцируют уреазу и не образуют
индол. Продуцирует фермент цистиназу, рпсщепляющую цистеин до H2S. Образует
каталазу, сукцинатдегидрогеназу.
Антигенные свойства. О-антигены – термостабильные полисахаридные, расположены в
глубине клеточной стенки. К-антигены – поверхностные, термолабильные,
сероватоспецифические. С помошью сывороток к К-антигену С.diph. разделяют на
серовары(58).
Факторы патогенности. Экзотоксин, нарушающий синтез белка и поражающий в связи с
этим клетки миокарда, надпочечников, почек, нервных ганглиев. Способность
вырабатывать экзотоксин обусловлена наличием в клетке профага, несущего tох-ген,
ответственный за образование токсина. Ферменты агрессии — гиалуронидазу,
нейраминидазу. К факторам патогенности относится также микрокапсула.
Резистентность. Устойчив к высушиванию, действию низких температур, поэтому в
течение нескольких дней может сохраняться на предметах, в воде.
Эпидемиология. Источник дифтерии — больные люди Заражение происходит чаще через
дыхательные пути. Основной путь передачи воздушно-капельный, возможен и
контактный путь — через белье, посуду.
Патогенез. Входные ворота инфекции — слизистые оболочки зева, носа, дыхательных
путей, глаз, половых органов, раневая поверхность. На месте входных ворот наблюдается
фибринозное воспаление, образуется характерная пленка, которая с трудом отделяется от
подлежащих тканей. Бактерии выделяют экзотоксин, попадающий в кровь, — развивается
токсинемия. Токсин поражает миокард, почки, надпочечники, нервную систему.
Клиника. Существуют различные по локализации формы дифтерии: дифтерия зева,
которая наблюдается в 85—90 % случаев, дифтерия носа, гортани, глаз, наружных
половых органов, кожи, ран. Инкубационный период составляет от 2 до 10 дней.
Заболевание начинается с повышения температуры тела, боли при глотании, появления
пленки на миндалинах, увеличения лимфатических узлов. Отека гортани, развивается
дифтерийный круп, который может привести к асфиксии и смерти. Другими тяжелыми
осложнениями, которые также могут явиться причиной смерти, являются токсический
миокардит, паралич дыхательных мышц.
Иммунитет. После заболевания - стойкий, напряженный антитоксичный иммунитет.
Особое значение – образование АТ к фрагменту В. Они нейтрализуют дифтерийный
гистотоксин, предупреждая прикрепление последнего к клетке. Антибактериальный
иммунитет – ненажняженный, сероватоспецифичен
Микробиологическая диагностика. С помощью тампона у больного берут пленку и слизь
из зева и носа. Для постановки предварительного диагноза возможно применение
бактериоскопического метода. Основной метод диагностики — бактериологический:
посев на среду Клаубера II (кровяно-теллуритовый агар), на плотную сывороточную среду
для выявления продукции цистиназы, на среды Гисса, на среду для определения
токсигенности возбудителя. Внутривидовая идентификация заключается в определении
био- и серовара. Для ускоренного обнаружения дифтерийного токсина применяют:
РНГА(реакция непрямой геммаглютинации) с антительным эритроцитарным
диагностикумом , реакцию нейтрализации антител (о наличии токсина судят по эффекту
предотвращения гемаггютинации); РИА (радиоиммунный) и ИФА(имунноферментный
анализ).
Лечение. Основной метод терапии — немедленное введение специфической
антитоксической противодифтерийной лошадиной жидкой сыворотки. Иммуноглобулин
человека противодифтерийный для в/в введения.
Ассоциированные вакцины: АКДС (абсорбированная коклюшно – столбнячная вакцина),
АДС(абсорбированный дифтерийно - столбнячный анатоксин).

Билет 30
1. Морфология простейших. Принципы классификации. Патогенные для
человека простейшие.
Простейшие представлены 7 типами, из которых четыре типа (Sarcomastigophora,
Apicomplexa, Ciliopkora, Microspora) включают возбудителей заболеваний у человека.
Тип Sarcomastigophora. Подтип Mastigophora (жгутиконосцы) включает следующих
патогенных представителей: трипаносому — возбудителя африканского трипаносомоза
(сонная болезнь); лейшмании — возбудителей кожной и висцеральной форм
лейшманиозов; трихомонады, передающиеся половым путем и паразитирующие в
толстой кишке человека; лямблию — возбудителя лямблиоза. Эти простейшие
характеризуются наличием жгутиков: один — у лейшмании, четыре свободных жгутика и
короткая ундулирующая мембрана — у трихомонад.
К подтипу Sarcodina (саркодовые) относится дизентерийная амеба — возбудитель
амебной дизентерии человека. Морфологически сходна с ней непатогенная кишечная
амеба. Эти простейшие передвигаются путем образования псевдоподий. Питательные
вещества захватываются и погружаются в цитоплазму клеток. Половой путь размножения
у амеб отсутствует. При неблагоприятных условиях они образуют цисту.
Тип Apicomplexa. В классе Sporozoa (споровики) патогенными представителями являются
возбудители токсоплазмоза, кокцидиоза, саркоцистоза и малярии. Жизненный цикл
возбудителей малярии характеризуется чередованием полового размножения (в
организме комаров Anopheles) и бесполого (в клетках тканей и эритроцитах человека они
размножаются путем множественного деления). Токсоплазмы имеют форму полулуний.
Токсоплазмозом человек заражается от животных. Токсоплазмы могут передаваться
через плаценту и поражать центральную нервную систему и глаза плода.
Тип Ciliophora. Патогенный представитель — возбудитель балантидиаза — поражает
толстый кишечник человека. Балантидии имеют многочисленные реснички и поэтому
подвижны.
Тип Microspora включает микроспоридии — маленькие (0,5—10 мкм) облигатные
внутриклеточные паразиты, широко распространенные среди животных и вызывающие у
ослабленных людей диарею и гнойно-воспалительные заболевания.

2. Видовой и индивидуальный иммунитет.


Врожденный, иди видовой, иммунитет, он же наследственный, генетический, консти-
туциональный — это выработанная в процессе филогенеза генетически закрепленная,
передающаяся по наследству невосприимчивость данного вида и его индивидов к
какому-либо антигену (или микроорганизму), обусловленная биологическими осо-
бенностями самого организма, свойствами данного антигена, а также особенностями их
взаимодействия.
Примером может служить невосприимчивость человека к некоторым возбудителям, в
том числе к особо опасным для сельскохозяйственных животных (чума крупного рогатого
скота, болезнь Ньюкасла, поражающая птиц, оспа лошадей и др.), нечувствительность
человека к бактериофагам, поражающим клетки бактерий. К генетическому иммунитету
можно также отнести отсутствие взаимных иммунных реакций на тканевые антигены у
однояйцовых близнецов; различают чувствительность к одним и тем же антигенам у
различных линий животных, т. е. животных с различным генотипом.
Объяснить видовой иммунитет можно с разных позиций, прежде всего отсутствием у
того или иного вида рецепторного аппарата, обеспечивающего первый этап
взаимодействия данного антигена с клетками или молекулами-мишенями, опре-
деляющими запуск патологического процесса или активацию иммунной системы. Не
исключены также возможность быстрой деструкции антигена, например, ферментами
организма или же отсутствие условий для приживления и размножения микроба
(бактерий, вирусов) в организме. В конечном итоге это обусловлено генетическими
особенностями вида, в частности отсутствием генов иммунного ответа к данному
антигену.
Видовой иммунитет может быть абсолютным и относительным. Например, нечувс-
твительные к столбнячному токсину лягушки могут реагировать на его введение, если по-
высить температуру их тела. Белые мыши, не чувствительные к какому-либо антигену,
приобретают способность реагировать на него, если воздействовать на них
иммунодепрессантами или удалить у них центральный орган иммунитета — тимус.

Индивидуальный иммунитет формируется на протяжении жизни каждого человека и не


передается последующим поколениям. Формирование индивидуального иммунитета
происходит, как правило, во время различных инфекционных заболеваний (или
отравлений), однако не все болезни оставляют после себя стабильный иммунитет. Так
например, после перенесенной гонорей иммунитет очень непродолжителен и слаб,
поэтому это заболевание может возникнуть вновь спустя некоторое время после
очередного контакта с микробом. Другие заболевания, как, например, ветряная оспа,
оставляют стабильный иммунитет, который предотвращает повторное заболевание на
протяжении всей жизни. Длительность иммунитета определяется главным образом
иммуногенностью микроба (способность вызывать иммунный ответ).
Иммунитет, приобретенный после перенесенного инфекционного заболевания,
называется натуральным активным, а после вакцинации – искусственным активным.
Эти два типа иммунитета наиболее продолжительны. Во время беременности мать
передает плоду часть своих антител, которые защищают ребенка в первые месяцы жизни.
Такой иммунитет называется натуральным пассивным. Искусственный пассивный
иммунитет развивается при введении человеку сыворотки содержащей антитела против
определенного микроба или его яда. Такой иммунитет длится несколько недель, а затем
бесследно исчезает.

3. Стрептококки, таксономия, факторы патогенности, микробиологическая


диагностика стрептококковых инфекций.
Таксономия. Стрептококки относятся к отделу Firmicutes, роду Streptococcus. Род состоит
из более чем 20 видов, среди которых есть представители нормальной микрофлоры
человеческого тела и возбудители тяжелых инфекционных эпидемических болезней
человека.
Морфологические и культуральные свойства. Стрептококки — это мелкие шаровидные
клетки, располагающиеся цепочками, грамположительные, спор не образуют,
неподвижные. Большинство штаммов образует капсулу, состоящую из гиалуроновой
кислоты. Клеточная стенка содержит белки (М-, Т- и R-антигены), углеводы
(группоспецифические) и пептидогликаны. Легко переходят в L-формы. Возбудители
растут на средах, обогащенных углеводами, кровью, сывороткой, асцитической
жидкостью. На плотных средах обычно образуют мелкие серые колонии. Капсульные
штаммы стрептококков группы А образуют слизистые колонии. На жидких средах
стрептококки обычно дают придонный рост. Стрептококки — факультативные анаэробы.
По характеру роста на кровяном агаре они делятся на культуральные варианты: а-
гемолитические (зеленящие), в-гемолитические (полный гемолиз) и негемолитические.
Резистентность. Чувствительны к физическим и химическим факторам окружающей
среды, могут длительно сохранять жизнеспособность при низких температурах.
Устойчивость к антибиотикам приобретается медленно.
Патогенность. На основе полисахаридного антигена делятся на серогруппы (А, В, С...О).
Стрептококки группы А вырабатывают более 20 веществ, обладающих антигенностью и
агрессивностью. На поверхности клетки имеется белковый антиген М, который тесно
связан с вирулентностью (препятствует фагоцитозу). Этот белок определяет типовую
принадлежность стрептококков. Кофакторам патогенности относят стрептокиназу
(фибринолизин), ДНКазу, гиалуронидазу, эритрогенин. Наиболее патогенны для человека
гемолитические стрептококки группы А, называемые S. pyogenes. Этот вид вызывает у
человека многие болезни: скарлатину, рожу, ангину, острый эндокардит, послеродовой
сепсис, хронический тонзиллит, ревматизм.
Иммунитет: постинфекционный нестойкий, ненапряженный.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, моча, кровь,
мокрота.
Бактериоскопический метод: окраска по Граму мазков из патологического материала. При
положительном результате обнаруживают цепочки грам «+» кокков.
Бактериологический метод: Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку
Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие
вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок,
окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3
подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и
сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие
мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в
виде хлопьев, оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре
стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитиче-ские 3) β-
гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза.
Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация
выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки
делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции
преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции
агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к
антибиотикам методом дисков.
Серодиагностика: устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с
помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к О-стрептолизину определяют для
подтверждения диагноза ревматизма.
Лечение: Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-
лактамазе).При выделении стрептококка А – пенициллин. Химиотерапия антибиотиками,
к которым выявлена чувствительность микроба – левомицетин, рифампицин.
Профилактика: специфической – нет. Неспецифическая - выявление, лечение больных;
проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стрептококковый
бактериофаг(жидкий) – фильтрат фаголизата стрептококка. Применятся наружно,
внутрикожно, в/м., О-стрептолизин сухой (лиофильно высушенный фильтрат бульонной
культуры стрептококка – активного продуцента О-стрептолизина. Применяется для
постановки серологических реакций – определения анти-О-стрептолизина в сыворотке
крови больных).

Билет 31.
1. Ферментативная активность микробов, ее значение и методы изучения.
В основе всех метаболических реакций в бактериальной клетке лежит деятельность
ферментов, которые принадлежат к 6 классам: оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы,
лигазы, лиазы, изомеразы. Ферменты, образуемые бактериальной клеткой, могут
локализоваться как внутри клетки — эндоферменты, так и выделяться в окружающую
среду — экзоферменты. Экзоферменты играют большую роль в обеспечении
бактериальной клетки доступными для проникновения внутрь источниками углерода и
энергии. Большинство гидролаз является экзоферментами, которые, выделяясь в
окружающую среду, расщепляют крупные молекулы пептидов, полисахаридов, липидов
до мономеров и димеров, способных проникнуть внутрь клетки. Ряд экзоферментов,
например гиалуронидаза, коллагеназа и другие, являются ферментами агрессии.
Некоторые ферменты локализованы в периплазматическом пространстве бактериальной
клетки. Они участвуют в процессах переноса веществ в бактериальную клетку.
Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для
семейства, рода и — в некоторых случаях — для видов. Поэтому определением спектра
ферментативной активности пользуются при установлении таксономического положения
бактерий. Наличие экзоферментов можно определить при помощи дифференциально-
диагностических сред, поэтому для идентификации бактерий разработаны специальные
тест-системы, состоящие из набора дифференциально-диагностических сред.
Идентификация бактерий по ферментативной активности.
Наиболее часто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз, используя
специальные методы и среды.
Для определения протеолитической активности микроорганизмы засевают в столбик
желатина уколом. Через 3—5 дней посевы просматривают и отмечают характер
разжижения желатина. При разложении белка некоторыми бактериями могут выделяться
специфические продукты — индол, сероводород, аммиак. Для их определения служат
специальные индикаторные бумажки, которые помещают между горлышком и ватной
пробкой в пробирку с МПБ или (и) пептонной водой, засеянными изучаемыми
микроорганизмами. Индол (продукт разложения триптофана) окрашивает в розовый цвет
полоску бумаги, пропитанной насыщенным раствором щавелевой кислоты. Бумага,
пропитанная раствором ацетата свинца, в присутствии сероводорода чернеет. Для
определения аммиака используют красную лакмусовую бумажку.
Для многих микроорганизмов таксономическим признаком служит способность разлагать
определенные углеводы с образованием кислот и газообразных продук тов. Для
выявления этого используют среды Гисса, содержащие различные углеводы (глюкозу,
сахарозу, мальтозу, лактозу и др.). Для обнаружения кислот в среду добавлен реактив
Андреде, который изменяет свой цвет от бледно-желтого до красного в интервале рН 7,2
—6,5, поэтому набор сред Гисса с ростом микроорганизмов называют «пестрым рядом».
Для обнаружения газообразования в жидкие среды опускают поплавки или используют
полужидкие среды с 0,5% агара.
Для того чтобы определить интенсивное кислотообразование , характерное для брожения
смешанного типа, в среду с 1% глюкозы и 0,5% пептона (среда Кларка) добавляют
индикатор метиловый красный, который имеет желтый цвет при рН 4,5 и выше, и красный
—при более низких значениях рН.
Гидролиз мочевины определяют по выделению аммиака (лакмусовая бумажка) и
подщелачиванию среды.
При идентификации многих микроорганизмов используют реакцию Фогеса — Проскауэра
на ацетоин — промежуточное соединение при образовании бутандиола из
пировиноградной кислоты. Положительная реакция свидетельствует о наличии
бутандиолового брожения.
Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться
сразу же после смешивания микробных клеток с 1 % раствором перекиси водорода.
Для определения цитохромоксидазы применяют реактивы: 1) 1% спиртовый раствор сс-
нафтола-1; 2) 1% водный раствор N-диметил-р-фенилендиамина дигидро-хлорида. О
наличии цитохромоксидазы судят по синему окрашиванию, появляющемуся через 2—5
мин.
Для определения нитритов используют реактив Грисса: Появление красного окрашивания
свидетельствует о наличии нитритов.

2. Микробы паразиты и сапрофиты. Патогенные и условно-патогенные


микроорганизмы. Факторы патогенности.
Сапрофиты — микроорганизмы, использующие в качестве источников питания субстраты
из неживых объектов, в противоположность микробам-паразитам, способным жить за
счет продуктов обмена в тканях живых организмов. Сапрофиты широко распространены в
природе, встречаются в почве, воде, воздухе, в организме человека и животных.
Как правило, сапрофиты являются непатогенными микроорганизмами, однако
встречаются микробы, ведущие сапрофитический образ жизни, но обладающие тем не
менее патогенностью для человека (возбудитель ботулизма). Сапрофиты в большом
количестве встречаются в организме человека, особенно в полостях, сообщающихся с
внешней средой. При нарушении механизмов естественного иммунитета (см.) некоторые
сапрофиты (кишечная палочка, протей) могут вызвать различные заболевания (сепсис,
менингит и др.).
УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ вызывают в определенных условиях
заболевания у людей с пониженной сопротивляемостью организма. Встречаются среди
бактерий, грибков, простейших и вирусов. Чаще всего входят в состав естественной
микрофлоры организма человека (см. Микробная флора человека) и животных, реже
обитают в окружающей среде. Могут обладать рядом факторов патогенности,
способностью к колонизации (заселению) организма, выраженной гетерогенностью и
изменчивостью популяции, определяющей быстрое приобретение устойчивости к
неблагоприятным факторам, в т. ч. к антимикробным препаратам. Понятие условной
патогенности не является достаточно четким. В конкретных случаях патологии трудно
определить границы между группой У. -п. м. и другими микроорганизмами. 

Заражение может происходить экзогенным путем (контактным, воздушно-капельным,


алиментарным), в результате аутоинфекции, а также при использовании
инструментальных методов лечения и обследования больных, когда микробы попадают
непосредственно во внутреннюю среду организма, минуя естественные барьеры. Инф.
процесс развивается на фоне снижения естественного или приобретенного иммунитета,
чему способствуют тяжелые соматические заболевания, большая кровопотеря,
переохлаждение и другие факторы. У. -п. м. способны вызывать инф. процесс в любых
тканях организма. Особенности клин. картины вызываемых ими заболеваний
определяются локализацией У. -п. м. в организме. 

3. Гонококки. Микробиологическая диагностика гонореи.


Нейсcерии – грамотрицательные аэробные кокки, относящиеся к роду Neisseria,
включающему 8 видов: Neisseria meningitides, Niesseria gonorrhoeae, N. flava, N. subflava,
N. perflava, N. sicca.
Морфология: неподвижные неспорогенные грамотрицательные диплококки, образующие
капсулу, полиморфны – встречаются в виде мелких или крупных форм а так же в виде
полочек, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим,
бриллиантовым зелёным и т. д.), под действием пенициллина образуют L-формы, могут
менять свойства и превратиться в грамположительную форму.
Культуральные свойства: аэробы, хемоорганотрофы; для роста требуют
свежеприготовленные влажные среды с добавлением нативных белков крови, сыворотки
или асцитической жидкости . Не вызывают гемолиза на средах, содержащих кровь; на
средах с добавлением молока, желатина и картофеля не растут. На плотных питательных
средах через 24ч, при содержании протеина II образуют слегка мутные бесцветные
колонии, не содержащие его образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы,
на жидких питательных средах растут диффузно и образуют плёнку, через несколько
часов оседающую на дно.
Биохимическая активность: крайне низкая – разлагают только глюкозу, продуцируют
каталазу и цитохромоксидазу, протеолитическая активность отсутствует, H2S, аммиака,
индола не образует.
Антигенная структура: Содержит А и К антигены, ЛПС обладают сильной
иммуногенностью, основную антигенную нагрузку несут пили и белки мембраны.
Наружная мембрана содержит протеины I, II, III классов, проявляющих сильные
иммуногеннные свойства
Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, белки мембраны
Капсула обладает антифагоцитарным действием. Пили обеспечивают адгезию к
эпителию. Клеточная стенка содержит эндотоксин. Поверхностный белок I класса –
обеспечивает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек. Класса II –
(протеины мутности, ОРА-протеины) обуславливают прикрепление к эпителию,
препятствуют фагоцитозу. N. синтезируют IgA протеазу, расщепляющую Ig.
Резистентность: очень неустойчивы в окружающей среде, чувствительны к действию
антисептиков, высокочувствительны к пенициллинам, тетрациклину, стрептомицину.
Способны к утилизации пенициллинов при приобретении бета-лактамаз.
Патогенез: Входные ворота – цилиндрический эпителий мочеполовых путей. Гонококки
прикрепляются к эпителию посредством поверхностных белков, вызывают гибель и
слущивание клеток, захватываются клетками, где размножаются, попадают на БМ, после
чего попадают на соед. ткань и вызывают воспаление или попадают в кровь с возможным
дессиминированием.
Иммунитет – почти отсутствует.
Микробиологическая диагностика:
Бактериоскопическое исследование: Материалом для исследования служит гнойное
отделяемое из уретры, влагалища, прямой кишки, глотки, сыворотки крови. Готовят
мазки, окраска по Граму, При «+» результате – обнаруживают гонококки – грам+
диплококки бобовидной формы., находятся внутри лейкоцитов. Положительный диагноз
ставится при острой форме гонореи до применения антибиотиков.
Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными
питательными средами — КДС, сывороточным агаром. Среда КДС содержит питательный
агар с добавлением в определенной концентрации казеина, дрожжевого экстракта и
сыворотки крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24—72 ч. Гонококки образуют
круглые прозрачные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных
колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также
могут расти на этих средах. Подозрительные колонии пересевают в пробирки на
соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по
сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (полужидкий агар с сывороткой и
углеводом). Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием кислоты..
Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде — Жангу. В качестве антигена
используют взвесь убитых гонококков. Реакция Борде—Жангу имеет вспомогательное
значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной
гонорее.
Лечение: антибиотикотерапия (пенициллин, тетрациклин, канамицин), иммунотерапия -
Гонококковая вакцина - взвесь гонококков, убитых нагреванием, используется для
вакцинотерапии хронической гонореи.

Билет 34.
1. Особенности морфологии и биологии вирусов. Принципы классификации.
Структура и химический состав вирусов.
В основу классификации вирусов положены следующие категории:
• тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структура, количество нитей (одна или две),
особенности воспроизводства вирусного генома;
• размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;
• наличие суперкапсида;
• чувствительность к эфиру и дезоксихолату;
• место размножения в клетке;
• антигенные свойства и пр.
Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому
различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. име-