Seminario 4: Anticuerpos Monoclonales UNIVERSIDAD de VALLADOLID

(basado en los trabajos de los grupos CD3 y C22)

Guión de Conceptos importantes:
• Concepto de Ac Monoclonal: Policlonalidad vs Monoclonalidad.
• Producción de ac. Monoclonales: Método del hibridoma.
• Transformaciones necesarias para el uso terapéutico:
Humanización.
• Aplicaciones de los ac monoclonales.
• Acción terapéutica de los Ac. Monoclonales anti-tumorales:
mecanismos
Preguntas tipo:
• Enumerar al menos 5 diferencias entre los ac policlonales y los
monoclonales.
• Describir muy brevemente los pasos de la producción de AcMo
mediante la técnica del hibridoma.
• Describir brevemente los distintos procesos de transformación de
los AcMo para uso en humanos.
• Enumerar los 3 usos fundamentales de los AcMo.
•Enumerar al menos 4 mecanismos diferentes de acción de la
terapia antitumoral con AcMo.

Ac policlonales
Ac monoclonales
Ac Policlonales vs. Monoclonales (suero)
Epitopos que
Varios* Unico
reconocen
Varía entre No varía.
Especificidad animales y
entre sangrías. Alta especificidad.

Variable entre
Afinidad Fija
sangrías.
Concentración Bajo en cultivo de
2 media 1 mg/ml tejidos.
Rendimiento Volumen Alto (hasta 20
variable (según mg/ml) en líquido
especie) ascítico
Costo relativo Bajo Alto

Anticuerpos policlonales:
Son aquellos que proceden de
distintos clones de linfocitos
B estimulados.
Anticuerpos monoclonales:
Son aquellos que derivan de un
solo clon de linfocitos B y son
específicos para un epitopo
determinado, constituyendo
una población homogénea.
 Obtención de
Anticuerpos Monoclonales

1. Inmunización de animales
contra el antígeno para el
que se desea producir
anticuerpos.

2. Fusión de los linfocitos

esplénicos con células de
mieloma formando
hibridomas Dot-blot

3. Selección de aquellos
hibridomas que sean
productores de las ELISA
inmunoglobulinas
específicas deseadas

In vivo In vitro
4. Clonación

Transformaciones para uso en humanos

Anticuerpos Quiméricos Anticuerpos humanizados

• Por ingeniería genética se crearon
anticuerpos quiméricos, que incorporan una
parte humana y outra animal.
• La parte animal es hipervariable (30%)
permite reconocer el antígeno.
• La parte humana (70%) permite que el sist.
Inmunulogico añada efectividad a su acción.
• Ingeniería genética más sencilla
• Tienen 90% de material humano, lo que
reduce el rechazo del sistema inmunologico.
• En el paratopo- sitio de combinación con el
antígeno- hay regiones CDR responsables de
unión con el antígeno (animales) y otras que
sólo sirven de soporte estructural (FR), estas
se obtienen de un anticuerpo humano.
• Ingeniería genética muy laboriosa: insertar la
secuencia de los CDR animal en el resto de
secuencia humana.
Usos de los Ac MECANISMOS DE ACCIÓN DE LOS mAb EN
LA TERAPIA CONTRA EL CÁNCER

Monoclonales A. Unión de los mAbs a ag específicos de

células tumorales Æ Apoptosis o Bloqueo
de Factores de Crecimiento.
B. Unión a una toxina, radioisotopo, citoquina
o enzima u otros conjugados activos Æ
• Han sustituido a los Liberación específica en célula tumoral.
anticuerpos policlonales en (acciones 1, 2 y 3 de la figura siguiente)
ensayos de afinidad,
sensibilidad, y precisión. C. Diseño de ac biespecíficos que se unan
tanto al ag diana como a una célula
• Investigación (purificación y
detección de antígenos) efectora (acción 5 en la figura siguiente)
• Diagnóstico in vitro (de D. Citotoxicidad mediada y dependiente de
embarazo, microorganismos anticuerpos (ADCC):
patógenos, medición del • Reclutar células citotóxicas, como
nivel de ciertas drogas en Linfocitos NK.
sangre, estudios de
histocompatibilidad, • Lisis de la célula (acción 4 en la figura
detección de antígenos siguiente).
tumorales) e in vivo E. Citotoxicidad mediada por células y
(detección de antígenos dependiente del complemento (CDC):
tumorales).
• Fines terapéuticos • Se produce la unión a las células
(inmunotoxinas compuestas tumorales de anticuerpos fijadores de
por Ac monoclonales proteínas del sistema de complemento
específicos de antígenos (formación del MAC).
tumorales unidos a una • Lisis de la célula.
toxina letal).

Terapia anti-tumoral con Anticuerpos Monoclonales

Anticuerpo combinado
con toxina. Al ser
endocitado el complejo
Ag-Ab, la toxina ejerce
su acción letal sobre
la célula tumoral.
Isótopo
Toxina radioactivo
1 2 Anticuerpo combinado
con Isótopo Radioactivo
Al ser endocitado
el complejo Ag-Ab, el
isótopo desprende
Radioactividad letal
para la célula tumoral.

Antígeno tumoral
CELULA
Linfocito T TUMORAL
citotóxico LISIS
+ TcR
CD3
Toxicidad 3 Pro-
droga

5 enzima
L
I 4 Toxicidad Droga
S
Anticuerpo bi-específico: I FcγR
reconoce el Ag tumoral S
por un lado, y una molécula
de la célula T por el otro. La célula Linfocito NK
Tc puede ahora lisar la diana. Anticuerpo combinado con un
enzima: al añadir una pro-droga,
la enzima ésta transforma en
droga de acción muy localizada
en el entorno tumoral.

Anticuerpo parcialmente humanizado.

Reconoce el Ag tumoral, y su porción Fc
(humana) es reconocida por Linfocitos NK
que ahora pueden lisar la célula tumoral