Занятие №4

Тема: Питание и дыхание бактерий

Питательные среды - это искусственные среды того или иного состава,

предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных
условиях.

Требования к питательным средам

1. Наличие всех необходимых источников питания.
2. Создание необходимого уровня кислотности.
3. Наличие определенного окислительно-восстановительного потенциала рН.
4. Питательные среды должны быть изотоничными для микробных клеток.
5. Питательные среды должны иметь достаточную влажность.
6. Отсутствие ингибиторов роста.
7. Среды должны быть стерильными.
8. Питательные среды должны быть безупречными по прозрачности, консистенции,
цветности.

Среда Эндо

Тип питательной среды дифференцирующая

Состав среды:
Питательная основа: мясопептонный агар
Дифференцирующий фактор – лактоза
• Тип среды: элективные
• Состав среды: мясопептонный агар, лактоза, фуксин, сульфит натрия
• Питательная основа: мясопептонный агар.
• Дифференцирующий фактор: лактоза
• Индикатор: фуксин
Энтеробактерии, сбраживающие лактозу, в процессе брожения выделяют муравьиную
кислоту, которая даёт цветную реакцию с реактивами на альдегиды, в том числе и с
фуксинсернистой кислотой с образованием свободного фуксина, в результате чего их
колонии окрашиваются в малиново-красный цвет с металлическим блеском или без него.

Заключение: (опишите рост E. coli и Salmonella) E. coli ферментирует лактозу и

образуют колонии красного цвета с металлическим блеском, сальмонеллы не
ферментируют лактозу, колонии прозрачного розового цвета.
 Солевой агар
Тип питательной среды- элективная
Состав среды:
Питательная основа: мясопептонный агар
Элективный фактор: 10% хлорид натрия

Вывод: в этой питательной среде растут только стафилококки.

Среда Плоскирева
Тип питательной среды: - элективная-дифференциальная
Состав питательной среды:
Питательная основа – мясопептонный агар
Дифференцирующий фактор: лактоза
Элективный фактор – желчные кислоты
Индикатор – нейтральный красный

Желточно-солевой агар
Тип питательной среды – элективная дифференциальная
Состав среды:
Питательная основа: мясопептонный агар
Дифференцирующий фактор - желток
Элективный фактор - 10% хлорид натрия
Индикатор - нет

Заключение: (опишите рост стафилококка). Существует избирательный рост и

накопление пигментов и дифференциация формирования золотистого стафилококка в
зоне ферментации лецитином.
 Селенитовый бульон
Тип питательной среды - накопительная
Состав среды:
Питательная основа – мясопептонный бульон
Элективный фактор – натрий селенитовая кислота

Заключение (опишите рост шигелл и сальмонелл - среды концентрата микробов и

селективного ингибитора кишечной палочки).

Среда М 9
Тип питательной среды - искусственная
состав: глюкоза, минеральные соли, агар-агар
Способны расти только прототрофы (помутнение среды). Для ауксотрофов требуется
добавление необходимых питательных веществ, например, для кишечной палочки –
глюкозы.

Дыхание микробов
Аэробы: микроорганизмы, нуждающиеся в кислороде для дыхания.
Факультативные анаэробы: микроорганизмы, которые могут жить и размножаться
как в присутствии кислорода, так и без него.
Строгие анаэробы: Микроорганизмы, которые вообще не нуждаются в кислороде.
Кислород является токсичным для этих микроорганизмов.
Микроаэрофилы: Микроорганизмы, нуждающиеся в особой атмосфере с низким
уровнем кислорода, на 5-6% меньше, чем обычно.
Капнофилы: микроорганизмы, существующие в атмосфере углекислого газа.
 Дыхательная цепь

Перенос электронов осуществляется по следующей стандартной схеме: органический

субстрат – НАД – флавопротеины – железосерные белки – хиноны – цитохромы (a, b, c)
– конечный акцептор (молекулярный кислород или иной акцептор электронов)

Аэробы Факультативные анаэробы Облигатные анаэробы

в качестве конечного при отсутствии кислорода конечным акцептором

акцептора электронов используют в качестве электронов служит не
используется конечного акцептора кислород, а другие
молекулярный кислород. электронов нитраты неорганические или
(нитратное дыхание). При органические вещества. В
этом образуются нитриты зависимости от природы
и другие восстановленные конечного акцептора
формы азота, что различают нитратное,
используется на практике сульфатное, карбонатное,
для идентификации фумаратное типы дыхания
бактерий. и др.

Питательные среды для культивирования анаэробов:

Молоко по Тукаеву
Состав:
Питательная основа - молоко
Дыхательный субстрат – глюкоза
Редуцирующий фактор – казеин молока
Клостридии свертывают молоко, формируют сгустки.

Среда Китта – Тароцци

состав:
питательная основа - мясо-пептон
дыхательный субстрат - глюкоза
редуцирующий фактор – кусочки мяса
вывод: клостридии ферментируют мясо и образуют газ с запахом прогорклого масла
 Среда Вильсона - Блер
Состав:
Питательная основа – мясопептонный агар
Дыхательный субстрат – глюкоза
Редуцирующий фактор – тиосульфат натрия

Вывод: среда для культивирования анаэробов.

Черные колонии формируются при восстановлении сульфита натрия в сульфит железа.

среда Вейнберга
состав:
питательная основа – мясопептонный агар
дыхательный субстрат – глюкоза
редуцирующий фактор – глюкоза
вывод: клостридии растут на дне пробирки

Тиогликолевая среда (среда для контроля стерильности)

Состав:
Питательная основа – 0,25% мясопептонный бульон
Дыхательный субстрат – глюкоза
Редуцирующий фактор – тиогликолят натрия
Вывод:
 Селективный сахаро-кровяной агар (среда Цейсслера)
Состав:
Питательная основа: мясопептонный агар с 5% крови
Дыхательный субстрат – глюкоза
Редуцирующий фактор – гемоглобин крови
Вывод:
Колонии растут на дне чашки Петри
 Методы создания анаэробной атмосферы для анаэробов

Метод Схема Принцип метода

Для удаления, растворенного в
питательных средах кислорода Анаэростат заполнен инертным газом;
используют их регенерацию путем
Физический кипячения в течение 15-20 минут на Культура в высоком столбике агара;
водяной бане с последующим быстрым
охлаждением до 50 градусов. После
посева поверхность среды заливают Культура в кипящей среде в пробирке, залитой
парафином или вазелиновым маслом. маслом;
Также возможен посев в столбик плотной
или полужидкой среды на глубину 10-
12см. кислород воздуха диффундирует на
1,5-2см, а в глубине создаются
благоприятные условия.

Применение анаэростатов и анаэробных

боксов.
Для поглощения кислорода из
замкнутого пространства можно Специальная питательная среда с кислородом.
использовать гидросульфит натрия. Для Использование газовых пакетов.
химический связывания кислорода в 1л объема Добавление в среды сорбентов кислорода.
используют 100мл
свежеприготовленного 20% Na2SO4 и
16мл 50% КОН.
Для связывания остатков кислорода
используют вещества-редуценты, к
которым относится тиогликолевая
кислота или тиогликолят натрия,
аскорбиновая кислота, различные сахара,
цистин и цистеин, муравьинокислый
натрий и т.д.

биологический Совместное выращивание анаэробов и Совместное культивирование аэробных и

(метод Фортнера) аэробов (метод Фортнера). На одну анаэробных микроорганизмов
половину чашки засевают исследуемый
материал, а на другую – культуру
аэробного или факультативно-
анаэробного микроба, способного
энергично поглощать кислород.

анаэростат