Открыть Электронные книги
Категории
Открыть Аудиокниги
Категории
Открыть Журналы
Категории
Открыть Документы
Категории
Первым этапом этой методики является посев или пересев бактериальной культуры на
различные типы питательной среды. Материалом для посева могут быть пересеваемые
культуры бактерий, различные выделения животных и человека, ткани трупа, вода, почва,
продукты питания. Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии
петлей жидкость должна образовать в кольце петли тонкую прозрачную пленку -
“зеркало”. Пипетками пользуются в том случае, когда материал засевают в большом или
точно отмеряемом объеме. Способ взятия плотного материала определяется его кон-
систенцией. При посевах чаще всего пользуются бактериальной петлей. Все манипуляции,
связанные с посевом и выделением микробных культур, производят над пламенем
горелки. Бактериальную петлю прокаливают над пламенем непосредственно перед
взятием материала, затем петлю остужают. Для этого при пересеве микробной культуры с
пробирки горячую петлю погружают в конденсационную жидкость, а при пересеве с
чашек Петри прикасаются к поверхности питательной среды, свободной от микробного
роста. Достаточно остуженная петля не вызывает шипения конденсационной жидкости и
не растапливает агар при соприкосновении со средой. После окончания посева петлю
прожигают повторно для уничтожения находящейся на ней микробной культуры или
инфицированного микроорганизмами материала. Пипетки и шпатели, используемые для
посевов и опускают в дезинфицирующий раствор. После посева на чашках Петри со
стороны дна, на пробирках в верхней трети надписывают название засеянного материала,
ставят номер анализа и дату посева.
Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). Три
пробирки, содержащие по 15 мл мясопептонного агара, ставят в водяную баню для
расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43— 45°С. В
пробирку вносят одну бактериальную петлю исследуемого материала. Для лучшего
перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав
между ладонями. После этого прокаленной и остуженной петлей содержимое 1-й
пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения
микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами,
соответствующими номерам пробирок. После застывания среды с исследуемым
материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной
средой уменьшается по мере разведения материала.
Рост микробов на плотной питательной среде. Для изучения свойств колоний микробы
культивируют на плотных питательных средах в чашках Петри. При посеве материала
стараются получить изолированный рост колоний. Чашки с посевом просматривают
сначала невооруженным глазом или через лупу. Колонии характеризуют по величине,
форме, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, структуре и консистенции. Величина
колонии определяется ее диаметром. В зависимости от диаметра различают колонии
точечные (диаметр меньше 1 мм), мелкие (диаметр 1—2 мм), средние (диаметр 2—4 мм) и
крупные (диаметр 4—6 мм и более). Форма колонии бывает правильная — круглая,
неправильная — амебовидная, ризоидная — корневидная, напоминающая
переплетающиеся корни деревьев. Характер контура края определяют при
рассмотрении колонии под лупой. Различают ровные края в виде четко выраженной ли-
нии и неровные. Последние делят на:
1. фестончатый край, состоящий из крупных, слегка округлых или уплощенных зубцов
правильной формы;
2. волнистый край, который несколько отличается от фестончатого тем, что крупные
зубцы его выражены нечетко;
3. эрозированный, или зазубренный, край, состоящий из острых зубцов различной
величины и формы;
4. бахромчатый край, имеющий нежные ворсинки.
В некоторых случаях четко выраженная линия, отграничивающая колонию от
поверхности среды, отсутствует. Такой край колонии называется расплывчатым. Рельеф
колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и
контуром формы в вертикальном разрезе. Определяется рельеф колонии невооруженным
глазом или с лупой при рассматривании сверху и сбоку.
Культивирование микроорганизмов
на плотных питательных средах
Название Цвет пигмента
возбудителя
В. pyoceaneus зеленый, синий
B. serracia красный
B. sarcina желтый
разведени количество
е колоний Концентрация микроорганизмов в
исследуемом материале
10-1
10-2 рост есть Общее количество бактерий в 1
10-3 рост есть куб. см или 1 г продукта (X) в
единицах вычисляют по
10-4 рост есть
формуле:
10-5 нет роста
X = n x 10m ,
где n - количество колоний,
подсчитанных на чашке Петри;
m - число десятикратных
разведений.
За окончательный результат
анализа принимают среднее
арифметическое, полученное по
всем чашкам
Динамика размножения микроорганизмов на жидких питательных средах
а) каталаза б) цитохромоксидаза