Занятие №1

Тема: Режим работы в бактериологической лаборатории. Бактериологическая лаборатория.

Микроскопические методы исследования.

Цель: Выучить и научиться выполнять правила противоэпидемического режима и техники

безопасности в бактериологической лаборатории. Научиться готовить фиксированный
препарат, окрашивать его простым методом и изучать при помощи иммерсионного
микроскопа.
Основные вопросы, разбираемые на занятии:
1. Предмет и задачи медицинской микробиологии.
2. Оснащение и режим бактериологической лаборатории.
3. Типы микроскопов и методы микроскопии.

Предмет и задачи медицинской микробиологии.

Объект изучения медицинских микробиологических лабораторий — патогенные

биологические агенты (ПБА) — патогенные для человека микроорганизмы (вирусы,
бактерии, грибы, простейшие), генно-инженерно-модифицированные микроорганизмы,
яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также материал (включая
кровь, биологические жидкости и экскременты организма человека), подозрительный на
содержание ПБА. В зависимости от выполняемых исследований, микробиологические
лаборатории подразделяют на диагностические, производственные и научно-
исследовательские. В соответствии с типами микроорганизмов, изучаемых в них,
выделяют бактериологические, вирусологические, микологические и протозоологические
лаборатории. С возбудителями инфекционных заболеваний работают только в
специализированных лабораториях, обеспечивающих безопасность её персонала и
невозможность «утечки» патогенных микроорганизмов за пределы лаборатории.

Группы возбудителей инфекционных заболеваний. 

Регламентация условий работы с возбудителями инфекционных заболеваний произведена

в соответствии со степенью опасности микроорганизмов для человека. По этому признаку
выделено четыре группы возбудителей. 
Группа I: возбудители особо опасных инфекций: чума, лихорадки Ласса, Эбола и др. 
Группа II: возбудители высококонтагиозных бактериальных грибковых и вирусных
инфекций: сибирская язва, сап, холера, лихорадка Скалистых гор, сыпной тиф,
бластомикоз, туляремия, бруцеллез, бешенство и др. В эту группу также включён
ботулотоксин (но не сам возбудитель ботулизма). 
Группа III: возбудители бактериальных грибковых, вирусных и протозойных инфекций,
выделенных в отдельные нозологические формы (возбудители коклюша, столбняка,
ботулизма, туберкулёза, кандидоза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита и др.).
В эту группу также включены аттенуированные штаммы бактерий групп I, II и III. 
Группа IV: возбудители бактериальных, вирусных, грибковых септицемии, менингитов,
пневмоний, энтеритов, токсикоинфекции и острых отравлений (возбудители анаэробных
газовых инфекций, синегнойной инфекции, аспергиллёза, амебиаза, аденовирусы,
герпесвирусы и др.).
 Организация микробиологической лаборатории 

Базовые лаборатории, работающие с патогенными биологическими агентами (ПБА) групп

III и IV, должны располагаться в отдельном здании или в изолированной части здания.
Они должны иметь два выхода: один для сотрудников, другой — для доставки материала
для исследований (допускается передача материала через передаточное окно).
Грязная зона микробиологических лабораторий включает помещения для приёма и
регистрации материала, боксы и комнаты для проведения микробиологических
исследований, помещения для проведения серологических исследований, комната для
проведения люминесцентной микроскопии, термостатная, автоклавная для
обеззараживания материала. Окна и двери всех помещений должны герметично
закрываться.
Приточно-вытяжная вентиляция «грязной» зоны должна быть оборудована
фильтрами тонкой очистки выбрасываемого воздуха. Помещения для проведения работ с
живыми ПБА должны быть оборудованы бактерицидными лампами.
Обязательна маркировка автоклавов, столов, стеллажей для чистого и
инфицированного материала. Покрытие лабораторной мебели, поверхности пола, стен и
потолка должны быть гладкими и устойчивыми к действию моющих и дезинфицирующих
средств.
Чистая зона микробиологических лабораторий включает гардероб для верхней
одежды, комнаты отдыха, комнату для работы с документацией, комнату для надевания
рабочей одежды, подсобные помещения, душевую, туалет, помещения для
предварительных работ (препараторская, моечная, комната приготовления и разлива
питательных сред и др.), стерилизационную, помещения с холодильниками для хранения
питательных сред и диагностических препаратов.
В «чистой» зоне возможна работа с неживыми ПБА (серологические и
биохимические исследования).

Типы микроскопов.
• Разрешающая способность объектива (Z) - характеристики фотографического
объектива, отображающие его свойства по передаче четкого изображения.
Формула Аббе
δ
Z=
u
n∙ sin ⁡( )
2
• где «δ » длина волны источника излучения, используемого для освещения
препарата; n -показатель преломления среды между объектом и фронтальной
линзой объектива; u– отвесный угол, образуемый крайними лучами,
попадающими в объектив.

Основные технические характеристики микроскопа.

• Числовая апертура объектива – характеристика способности оптической системы
собирать свет на изображении.
• Увеличительная способность микроскопа – Коэффициент увеличения микроскопа
определяется произведением увеличения окуляра к увеличению объектива.
D=KV
Иммерсионный микроскоп.
 Иммерсионный микроскоп отличается от обычного светового микроскопа – тем, что
увеличивается разрешающая способность метода световой микроскопии. Объектив
помещается в среду - определенные масла.
Иммерсионное масло необходимо для придания высокого коэффициента преломления,
который препятствует рассеиванию света от объекта исследования.

Конденсатор Аббе необходим для концентрирования лучей, исходящих от источника света,

на некоторую поверхность с целью яркого освещения.

Окраска водным фуксином

Увеличение х 100

Темнопольный микроскоп применяется для прижизненного исследования микробов в нативных

неокрашенных препаратах. Принцип работы основан на явлении дифракции света
при боковом освещении частиц (эффект Тиндаля).
Темнопольный микроскоп отличается от обычного светового микроскопа, тем что пользуются
обычными объективами, но со специальными темнопольными конденсорами. Однако невозможно
увидеть внутреннюю структуру микроорганизмов

Препарат «раздавленная капля»

Увеличение х 90
Фазово-контрастный микроскоп.
 Принцип работы заключается в том, что свет, не отклоненный объектом, проходит
через нанесенное на одну из линз объектива фазовое кольцо, смещающее его фазу
на четверть длины волны и ослабляющее его интенсивность (для того, чтобы
уравнять ее с интенсивностью дифрагированного объектом света), а
дифрагированный (отклоненный) свет проходит мимо фазового кольца.
  Отличается от обычного светового микроскопа, тем что можно наблюдать за
живыми не фиксированными объектами. Фазово-контрастное устройство может
быть установлено на любом световом микроскопе. Выглядят как темный объект на
светлом поле или наоборот.

Наблюдение за живыми не фиксированными объектами в

препарате раздавленная капля. Увеличение х 90

Люминесцентный микроскоп.
• Принцип работы этого микроскопа основан на явлении люминесценции. Для
получения изображения объектов их обрабатывают флюорохромами (акридиновый
оранжевый, ФИТЦ, бромид этидия и др.), которые при возбуждающем облучении
коротковолновой частью спектра светятся цветами с большей длиной волны
(зеленым, оранжевым и др.).
• Отличается тем, что позволяет получить контрастное цветное изображение,
обнаружить малое количество микробов, изучить их структуру и химический со-
став, использовать метод иммунофлюоресценции.

Возбудитель туберкулеза. Окраска аурамином.

Увеличение х 90.

Таксономия микроорганизмов
Вид - таксономическая группа микроорганизмов, близких между собой, имеющих общее
происхождение и характеризующихся определенными морфологическими,
биохимическими, физиологическими и генетическими признаками и приспособленных к
определенной среде обитания.
Чистая культура - популяция микроорганизмов одного вида и полученная в виде
потомства одной клетки на питательной среде.
Штамм - Культура бактерий одного вида, выделенная из разных источников или из
одного источника в разное время (из организма или окружающей среды).
Клон - генетически однородная популяция клеток, полученная путем бесполого
размножения одной клетки.
Биовар - это вариант одного вида микроорганизмов, отличающийся какими-либо важными
биологическими и физиологическими свойствами
 Основные таксономические группы микроорганизмов, имеющих медицинское значение.

Определение пример

Царство Eukaryote- Микроорганизмы имеющие эндонуклеарные мембраны)

Одноклеточные - Моноклетка одноклеточных животных трипаносомы

Грибы- гетеротрофные микроскопические неспособные к вид Candida

фотосинтезу растения)

Царство прокариота– не обладающие выполненным ядром и внутриклеточными

мембранными структурами

Бактерии - обширная группа паразитических и свободно

живущих прокариот, обладающих жесткой клеточной стенкой
(обширная группа паразитических и свободно живущих Streptococcus
прокариот, обладающих жесткой клеточной стенкой)

Микоплазма - бактерии не имеющие клеточной стенки Mycoplasma hominins

Риккетсия - бактерия, являющаяся внутриклеточным паразитом Rickettsia typhi

Хламидии - бактерии, обязывающие внутриклеточного паразита, Chlamydia trachomatis

имеют сложный цикл внутриклеточного размножения

Спирохеты – извитые микроорганизмы Treponema, Borrelia,

Leptospira

Царство Vira- не клеточная форма жизни