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Las proteínas son las macromoléculas más abundantes en las células. Son la forma en
la que la información genética se expresa. A pesar de que las proteínas son diferentes
en las diferentes especies, todas están constituidas por los mismos 20 aminoácidos sólo
que en diferente orden. Las proteínas varían entre ellas porque tienen una secuencia de
aminoácidos diferente.
Las proteínas se pueden clasificar por su forma. Las proteínas globulares son cadenas
polipeptídicas dobladas en forma compacta. Éstas son solubles en agua y se difunden
fácil. Las proteínas fibrosas son insolubles, largas con cadenas polipeptídicas que se
extienden y no se doblan. Hay una clase de proteínas filamentosas que participan en los
eventos contráctiles.
Muchas proteínas contienen solamente aminoácidos y no contienen otros grupos
químicos. Estas son las proteínas simples. Sin embargo, hay otros tipos de proteínas
que contienen otro componente químico además de los aminoácidos. A estas proteínas
se les conoce como conjugadas. La parte que no es aminoácido se llama el grupo
prostético.
Fundamento de la reacción
Consiste en tratar una proteína o péptido con Cu++ en medio alcalino, produciéndose una
coloración violácea por formación de un complejo de coordinación entre el Cu++ y los
pares electrónicos libres de los nitrógenos de los grupos amino de la unión peptídica.
Son necesarias por lo menos dos uniones peptídicas para que tenga lugar la reacción.
La reacción del Biuret no es una reacción específica para proteínas. Eso hace que un
resultado positivo con este reactivo deba ser cuidadosamente evaluado para descartar
los resultados falsos positivos.
REACCIÓN DE BRADFORD
Fundamento de la reacción
El método involucra la unión de un colorante, el Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBB)
a las proteínas. La solución del colorante libre es de color rojizo (máxima absorción a
465 nm) y cambia al azul (máxima absorción a 595 nm). La unión es un proceso rápido
(aproximadamente 2 minutos) y el complejo colorante-proteína se mantiene estable
hasta una hora después de producido.
Dado que aún los materiales biológicos más sencillos poseen una composición química
compleja, siempre se debe de tener en cuenta la posibilidad de interferencias (positivas
o negativas). También se debe tener en cuenta que no siempre son las mismas
sustancias las que interfieren en los distintos métodos. En el caso de extractos vegetales
es común encontrar sustancias como los fenoles que por lo general producen
interferencias en muchos de los métodos de caracterización de proteínas. La reacción de
Bradford es de elección en estos casos pues los mencionados compuestos no producen
interferencia.
ELECTROFORESIS
Fundamento
Si se aplica un campo eléctrico a una solución que contiene una molécula con carga neta
(+ o -), ésta migrará a una velocidad que depende del valor de su carga, su tamaño y su
forma. Esta técnica, denominada electroforesis, se utiliza para separar mezclas de
moléculas cargadas (proteínas, ácidos nucleicos), ya sea sobre un soporte (papel,
cellogel) o dentro de un gel (agarosa, almidón o poliacrilamida).
En la fórmula puede verse que a mayor carga eléctrica, mayor será la movilidad de la
molécula.
Métodos Derivados
Colorimétricos
Biuret Bastante específico para Tiene poca sensibilidad
proteínas
Muestra pocas
interferencias
Lowry Es barato
Tiene bastante No todas las proteínas reaccionan igual
sensibilidad Muestra muchas interferencias como
detergentes no iónicos, sulfato amónico etc.
Bradford Muy sensible Muestra interferencias con detergentes
BCA(ácido Es el método más sensible
bicinconínico) Es el que muestra menos
interferencias
Métodos Derivados
Fluorimétricos
ftalaldehido Muy sensible La interferencia de aminas contaminantes en
la muestra
No todas las muestras reaccionan igual