Антиоксиданты:

механизм действия и
роль в профилактике и
лечении заболеваний
Е.В. Проскурнина, ФФМ, 2016
С конференции INDC
2016
Вопросы номенклатуры
• Восстановитель: вещество, отдающее электрон в
окислительно-восстановительных реакциях,
• Антиоксидант (Холливелл, Гаттеридж)
(биоантиокислитель): любое вещество, которое
присутствуя в низких, по сравнению с
окисляемым субстратом концентрациях,
ингибирует или полностью прерывает его
окисление.
 По химической природе АО
представляют собой широкий
класс соединений
Поли- Флавоно-
Ферменты Липиды
фенолы иды
Производные
Супероксид- галловой
Рутин Лецитин
дисмутаза кислоты
пирокатехин

кверцетин,
глутатион-
Токоферолы дигидро- кефалин
пероксидаза
кверцетин

Эвгенол,
каталаза ресвератрол
пирокатехин
По растворимости:

Жирорастворимые
Водорастворимые
(липидные)

Мочевая кислота,
витамин С, Витамин Е,
глутатион и коэнзим Q10
другие

… …
По молекулярной массе:

Низкомолекулярные Высокомолекулярные

Ферменты:
Мочевая кислота,
супероксиддисмутаза,
витамин С, глутатион,
каталаза, глутатион-
витамин Е
пероксидаза

Белки: ферритин,
билирубин, церулоплазмин,
эстрогены, мелатонин альбумин,
лактоферрин
По действию:
• Перехватчики свободных радикалов
(скевенджеры)
• Ферменты, катализирующие превращение
активных форм
• Хелаторы металлов переменной валентности
Экзогенные
антиоксиданты
Природные антиоксиданты
Содержат в
большом
количестве
гидроксильные
группы у
бензольного
кольца
(полифенолы) или
непредельные
связи
(каротиноиды)

9
 Ликопин (каротиноиды)
• Замедляет развитие атеросклероза, а
также обеспечивает защиту ДНК, что Содержание
может предотвращать онкогенез. Продукты ликопина,
мг/кг
• Потребление ликопина, а также ликопин-
Томаты 5-50
содержащих продуктов приводит к
достоверному уменьшению маркеров Томатный соус 62-134
окислительного стресса у человека. Томатная паста 54-1500
• Ликопин самый сильный каротиноид- Грейпфрут 34
антиоксидант. Гуава 54
Арбуз 23-72
Лигнаны (полифенолы)

Источник Содержание в 100 г

Льняное семя 300,000 мкг (0.3 г)
Кунжутное семя 29,000 мкг (29 mg)
Капустные 185 - 2321 мкг
Зерновые 7 - 764 мкг
Красное вино 91 мкг
Флавоноиды
(полифенолы)
• Гидроксипроизводные флавона (собственно
флавоноиды), 2,3-дигидрофлавона (флаваноны)
изофлавона (изофлавоноиды), 4-фенилкумарина
(неофлавоноиды)

Флавон изофлавон 4-фенилкумарин

Де Сент-Дьерди, 1936
Зеленый чай
• Флавоноиды кверцетин, кемпферол
• Катехины (галлат эпигаллокатехина)
• Каротиноиды, токоферолы, аскорбиновая
кислота
Таксифолин
• Биофлавоноид сибирской
лиственницы
• Антиоксидант для профилактики
оксидативного стресса и
антиокислитель в пищевой
промышленности
• Характеризуется не только
антиоксидантным, но
химиопротективным и
метаболическим действием
Ресвератрол
• В экспериментах с мышами и
крысами были выявлены
противоопухолевое,
противовоспалительные,
понижающие уровень сахара в
крови, кардиопротекторные и
другие положительные эффекты
ресвератрола. Кроме того, в 2003
была открыта способность
ресвератрола увеличивать
продолжительность жизни
некоторых беспозвоночных, а
после и короткоживущих рыб.
Антоцианы
• Р. Вильштеттер, 1913
• Богаты антоцианами такие
растения, как, например,
черника, клюква, малина,
ежевика, чёрная смородина,
вишня, баклажаны, свёкла,
чёрный рис, виноград Конкорд
и мускатный виноград, красная
капуста, и некоторые виды
перцев, как жгучих, так и т. н.
сладких. В медицине широко
применяются антоцианы
черники (в составе экстракта
черники).
Средиземноморская
диета
Из напитков больше
антиоксидантов в какао
Эндогенные
антиоксиданты
Глутатион – важнейший
антиоксидант
Антиоксидант мелатонин

Применяется как снотворное средство

 Мелатонин
Синтезированный в эпифизе мелатонин
поступает в кровь и спинномозговую
жидкость — ликвор, пройдя через
которую, накапливается в гипоталамусе.
Помимо крови и ликворе, мелатонин
обнаружен в моче,
слюне, амниотической жидкости.
Мелатонин транспортируется
сывороточным альбумином, после
освобождения от альбумина
связывается со специфическими
рецепторами на мембране клеток-
мишеней, проникает в ядро и там
осуществляет своё действие.
Мелатонин — редкий пример гормона,
к которому имеются как мембранные,
так и ядерные рецепторы.
Кофермент Q
Супероксиддисмутаза
• Фермент, открыт Мак-Кордом и Фридовичем в
1958 году.
• M(n+1)+−СОД + O2●− → Mn+ − СОД + O2
• Mn+−СОД + O2●− + 2H+ → M(n+1)+−СОД +
H2O2

Cu-Zn-СОД – цитоплазматическая и внеклеточная

Mn-СОД - митохондриальная
Ферменты пероксисомы
• Пероксисомы являются главным источником по
крайней мере трех окислительных ферментов -
оксидазы D-аминокислот, уратоксидазы и
каталазы . Подобно митохондрии, пероксисома
- это один из главных центров утилизации
кислорода в клетке .
 Каталаза – основная
пероксидаза пероксисом
Каталаза (гемсодержащий фермент) использует
образующуюся перекись водорода для окисления
множества низкомолекулярных субстратов —
спиртов, фенолов, муравьиной кислоты,
формальдегида и этанола

H2O2 + RH2 = R + 2H2O

Этот тип окислительных реакций особенно важен в

клетках печени и почек, пероксисомы которых
обезвреживают множество ядовитых веществ,
попадающих в кровоток.
Почти половина поступающего в организм человека
этанола окисляется до ацетальдегида этим
способом. Кроме того, реакция имеет значения для
детоксикации клетки от самой перекиси водорода
 Каталазный каталитический цикл
Феррикаталаза
Протофорфирин IX-Fe3+ H2O2
1
(PP IX)*Fe = O H2O
Compound I

Каталаза млекопитающих содержит сильно связанный NADPH

Kirkman, H. N., and Gaetani, G. F. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81,4343-4347.
 Каталазный каталитический цикл
Феррикаталаза
O2 Protoporphyrin IX-Fe3+ H2O2
2 1
H2O2 (PP IX)*Fe = O H2O
Compound I

DH
D▪ Compound II
Каталаза млекопитающих содержит сильно связанный NADPH
Kirkman, H. N., and Gaetani, G. F. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81,4343-4347.
 Каталазный каталитический цикл
Феррикаталаза
CH3СOН
Protoporphyrin IX-Fe3+ H2O2
3 1
C2H5OH (PP IX)*Fe = O H2O
Compound I

DH
D▪ Compound II
Каталаза млекопитающих содержит сильно связанный NADPH
Kirkman, H. N., and Gaetani, G. F. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81,4343-4347.
 Каталазный каталитический цикл
Феррикаталаза
NADP+
Protoporphyrin IX-Fe3+ H2O2
3 1
NADPH (PP IX)*Fe = O H2O
Compound I

DH
D▪ Compound II
Каталаза млекопитающих содержит сильно связанный NADPH
Kirkman, H. N., and Gaetani, G. F. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81,4343-4347.
Глутатион-пероксидаза
• Пероксид водорода нейтрализуется в реакции с
глутатионом, катализируемой
• глутатионпероксидазой (изоформы 1,2,3, 5):
• 2H2O2 + 2GSH → 2H2O + O2 + GSSG.
• Образующийся окисленный глутатион
восстанавливается под действием фермента
глутатион-редуктазы за счет энергии НАДФ-Н.
Отношение восстановленный/окисленный
глутатион внутри клетки является одним из
важнейших параметров, который характеризует
уровень окислительного стресса.
• Гидропероксиды фосфолипидов
восстанавливаются с участием изоформы 4
• ROOH + 2GSH → ROH + H2O + GSSG Селенсодержащий фермент
Глутатионпероксидаза была открыта в 1957
году Гордоном Миллсом
 Тиоредоксины и
глутаредоксины
• Восстановление дисульфидных связей в белках осуществляется за
счет тиоредоксин- и глутаредоксин-зависимых систем.
• Тиоредоксины (Trx-1 и Trx-2) содержат два легко и обратимо
окисляющихся остатка цистеина; с участием
тиоредоксинредуктазы они претерпевают НАДФН-зависимое
восстановление. Являясь донорами протонов, тиоредоксины
влияют на редокс-состояние,
а также участвуют в редокс-сигнализации, регулируя активность
киназ и факторов
транскрипции
• Trx-(SH2) + Protein-S2 → Trx-S2 + Protein-(SH2),
• Trx-S2 + NADPH + H+ → Trx-(SH2) + NADP+

• Глутаредоксины (Glrx-1 и Glrx-2) также принадлежат

суперсемейству тиол/дисульфид-обменных белков, а
глутаредоксинредуктаза поддерживает соотношение
окисленных/восстановленных глутаредоксинов с участием НАДФН
и глутатиона.
Методы определения
антиоксидантов
Хемилюминесцентный метод:
определение активности
антиоксиданта
• Принцип: есть ХЛ-система генерации свободных
радикалов
• Добавляют антиоксидант
• Наблюдают эффект тушения
хемилюминесценции, зависящий от активности
антиоксиданта

• ! Надо различать понятия «активность»

антиоксиданта и его «содержание»
 Три типа кривых в системе пероксидаза –
пероксид водорода - люминол
200
Latency
TRAPperiod
Intensity of chemiluminescence,103 ips

120
180
160 100
Quercetin
140 1 Ascorbate
2 80 1
120

Сигнал, V
100 3 60 2
80 3
4
40 4
60 5 5
6 6
40 20
20 STRONG MEDIUM STRENGTH
0
0 0 2 4 6 8 10
0 2 4 6 8 10 Время, мин
Time,min
90

80 1

70 2 Class Parameter
Quenching

3
degree

60
Сильный Латентный
TAR

4
Сигнал,V

50 период
40 5
Средней силы Скорость
30 нарастания
6
20 Слабые Степень тушения
10 α-tocopherol WEAK
0
0 2 4 6 8 10
Время, мин
7
 Фрукты Rosaceae характеризуются
активностью средней силы
350 140
Sorbus aucuparia Rubus idaeus
1
300 120
2
250 1 100 3
4

Icl , 103 pps

Icl , 103 pps

2
200 80 5
3
4
150 60
5
100 40

50 20
Rubus idaeus L.
0 0
0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10
Time, min Time, min

300 300
Crataegus Rosa cinnamonea
250 250
1
1
200 2 200 2
3
Icl , 103 pps
Icl , 103 pps

3 4
4
150 5
150 5

100 100

50 50

0 0
0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10
Time,min Time, min
Хемилюминесцентная система: пероксидаза из корней хрена, люминол, пероксид водорода 10
 Определение антиоксидантной
емкости: система АБАП +
люминол

А.В. Алексеев, Е.В. Проскурнина, Ю.А. Владимиров, Вестн. Моск. ун-та. Сер. 2: 37
Химия, 2012, Т.53, № 3, С. 187-193
Определение антиоксидантной емкости: Lum-5773

система АБАП + люминол

Градуировка

Концентрация тролокса, нМ
0 100 200 400 600 800 1000
I

23

ХЛ-система АБАП + люминол + тролокс, эксперимент и

математическое моделирование
Определение антиоксидантной
емкости плазмы крови
3.5
3
2.5
ХЛ, В

2 Фаза Фаза B,
действия действие
1.5 tgα
сильного слабого
Начальная
1 антиокси антиокси
фаза
данта
0.5 Фаза А данта
0
0 5 10 15 20 25
время, мин.
 Электрохимический способ
определения активности
восстановителей

Принципиальная схема
электрохимического прибора для
определения антиоксидантной
активности, Я. И. Яшин

Амперометрическая ячейка: измеряют

силу тока в ячейке при постоянном
большом положительном потенциале
Значение потенциалов, при которых реализуются
наибольшие сигналы
число гидроксильных групп учитывается в
положениях: C-3, C-2', C-3', C-4', C-5'
Соединения Число групп ОН Потенциалы, mВ
Оксикислоты:
3 100
Галловая
2 150
Протокатехиновая
2 150
Кофейная
1 400
Феруловая
1 750
n-кумариновая
Флаван-3-олы:
(+) катехин 3 100, 600
(-) эпикатехин 3 100, 600
(-) эпиталлокатехин 4 900
Флаваноны:
Нарингенин 1 300, 800
Эриодиктиол 2 100, 850
Флавонолы:
Кверцетин 3 300, 900
Мирицетин 4 100, 700
Изо кверцетин 2 250, 800
Рутин 1 300, 900
Токоферолы:
a- токоферол 1 200
g- токоферол 2 300
d- токоферол 3 400
Определение количества
антиоксидантов: ВЭЖХ
Хроматограф Маэстро
(Интерлаб)
• Определение аскорбиновой кислоты в соках в
соответствии с ГОСТ 31643-2012 «Продукция
соковая. Определение аскорбиновой кислоты
методом высокоэффективной жидкостной
хроматографии»
• Определение нарингина и неогесперидина в
апельсиновом соке в соответствии с ГОСТ Р 54742-
2011 «Продукция соковая. Определение нарингина
и неогесперидина в апельсиновом соке методом
ВЭЖХ»
• Чай и чай растворимый. Определение
содержания кофеина
• Определение антиоксиданта Е310 пропилгаллат в
пищевых продуктах
• Определение флавоноидов
• Определение ресвератрола в красных винах
• Определение тадалафила
Антиоксидантная
терапия
Часть 4
 Терапия
антиоксидантами (?)
Данные мета-анализа больших
рандомизированных
клинических исследований
говорят об отсутствии эффекта
антиоксидантной терапии

Средиземноморская «диета», данные

отдельных небольших клинических
исследований
свидетельствуют о положительном
эффекте приема антиоксидантов
 Исследование SELECT
• Selenium and Vitamin E Cancer Prevention Trial
In SELECT, this measure means
that there were 17 percent more
prostate cancer cases diagnosed in
the group of men assigned to take
400 International Units (IU) of
vitamin E (and no selenium) daily
compared to the men taking two
placebos (no vitamin E and no
selenium) after an average of
seven years -- 5.5 of the years on
supplements followed by 1.5 years
not taking supplements.

https://www.cancer.gov/types/prostate/resear
ch/select-trial-results-qa
Лайнус Полинг был приверженцем
терапии витамином С
Ион Скулачева SkQ1 (1974)
Механизм действия митохондриально-
адресованных антиоксидантов
Скулачин – эликсир
молодости (?)
«На сегодня уже 19 разных
признаков старения удалось
затормозить или даже
повернуть вспять при
помощи SkQ1, среди них –
инфекционные заболевания,
остеопороз, дистрофия
сетчатки, катаракта, увеит,
инфаркт миокарда, аритмия
сердца, нарушение полового
поведения самцов,
нарушение полового цикла
самок, ослабление памяти,
облысение, поседение,
снижение температуры тела,
уменьшение тимуса и
старческая депрессия».
Болезни, вызванные
недостаточностью антиоксидантов

Кешаньская болезнь (недостаточность

селена)
• Цинга (?) – недостаточность витамина С и
синтеза коллагена

Недостаточность витамина Е вследствие

нарушения всасывания жиров
Антиоксидантные препараты
• Мексидол® оказывает антигипоксическое,
мембранопротекторное, ноотропное,
противосудорожное, анксиолитическое действие,
повышает устойчивость организма к стрессу.

• Кудесан (коэнзим Q) (кардиопротекторный препарат)

• Глатион (глутатион) (В составе комплексной терапии

заболеваний печени, таких как: острый и хронический
гепатит различной этиологии, алкогольный цирроз,
печеночный стеатоз, фиброз печени)

• Унитиол (хелатор тяжелых металлов) (при

отравлениях)
Позитивное действие
антиоксидантов
При лечении инфертильности
применяют Процептин
(Proceptin™ MX)
• Витамин С (аскорбиновая кислота) 25 мг
• Витамин Е (альфа токоферола ацетат) 67,5 мг
• Сульфат цинка 20 мг
• Ретинола ацетат 30 мкг
• Холекальциферол 5 мкг
• Фолиевая кислота 300 мкг
• Пиридоксин гидрохлорид 1 мг
• Селенат натрия 60 мкг
• L-карнитин 220 мг
• Коэнзим Q10 7,5 мг
• L-глутатион 40 мг
• L-аргинин гидрохлорид 125 мг
• L-метионин 2,5 мг
• Бетаин гидрохлорид 2,5 мг
Множество БАДов
Состояния, требующие приема
антиоксидантов: острый оксидативный
стресс у здоровых людей
• Физическая нагрузка у
спортсменов (люди и
животные)

• Космическое
облучение при Сейфулла, Р.Д.
космических полетах
Карнозин - антиоксидант
• Повышает выносливость при
анаэробных нагрузках
• Сокращает время отдыха
• Увеличивает общую рабочую мощность
тренировок
• Вышеперечисленные качества
объясняют широкое распространение
карнозина в бодибилдинге и
спортивном питании.
•
Немедицинские
применения
антиокислителей
Пищевая промышленность
(консерванты)
• Аскорбиновая кислота (E300) и токоферолы
(E306), а также синтетические антиоксиданты,
такие как пропилгаллат (E310), третичный
бутилгидрохинон (TBHQ), бутилгидроксианизол
(E320) и бутилгидрокситолуол (E321)
• Добавляют в масло, молоко и др.
• Также добавляют в косметические изделия
(крема)
• Защита топлива от окисления
Быть или не быть?