Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
0730055
GENETICA MENDELIANA
En la década de 1890, la invención de mejores microscopios permiten a los biólogos para
descubrir los hechos básicos de la división celular y la reproducción sexual. El enfoque de la
genética con Grefor Mendel en la investigación dio el salto a la comprensión de lo que
realmente sucede en la transmisión de los caracteres hereditarios de padres a hijos mediante
una serie de hipótesis que publicó en 1866, pero conocida hasta 1900, pasando su vida en el
monasterio ya que finalmente se retiró de la investigación.
A través del cruzamiento selectivo de razas de plantas de guisante común (Pisum sativum) a lo
largo de muchas generaciones, Mendel descubrió que ciertos rasgos aparecen en la
descendencia sin ninguna mezcla de características de los padres; observó siete rasgos que son
fácilmente reconocibles y, aparentemente, sólo se producen en una de dos formas:
1. Flor color púrpura o blanco
2. Posición de la flor es axial o terminal
3. Longitud del tallo largo o corto
4. Forma de la semilla redonda o arrugada
5. Semilla de color amarillo o verde
6. Forma de la vaina inflada o constreñida
7. Vaina color amarillo o verde
Esta observación de que estos rasgos no aparecen en las plantas descendientes con formas
intermedias fue muy importante porque la teoría de liderazgo en la biología en el momento de
que los rasgos heredados mezcla de generación en generación. De esta manera, los científicos
más importantes en el siglo 19 aceptaron esta fusión como " teoría”.
Desde un principio, Mendel tomó en cuenta las razones más convincentes, en aquel tiempo,
para elegir el ejemplar modelo. El cual surgió de plantas guisantes comunes de jardín para el
foco de su investigación, ya que se puede cultivar fácilmente en grandes cantidades y su
reproducción puede ser manipulada, tienen órganos reproductores femeninos y masculinos
(figura-1); como resultado, se puede autopolinizar o cruzarse con otra planta. Siendo capaz de
cruzar de forma selectiva la polinización de raza pura de plantas con características
particulares y observar el resultado de muchas generaciones tomándolo como base de sus
conclusiones sobre la naturaleza de la herencia genética (Dennis O'Neil, 2010).
De tal forma que la Primera Ley de Mendel, la ley de la segregación; es aquella que se lleva a
cabo durante la formación de los gametos cada miembro del par de alelos se separa de la de
otros miembros para formar la constitución genética del gameto (Phillip McClean, 2000), es
decir, la separación de los dos genes de un individuo en un lugar en su descendencia.
primera (F1). Asímismo, los resultados obtenidos para cada uno de los caracteres considerados
por separado, responden a la segunda ley.
ADN NO CODIFICANTE
Gran parte del ADN de muchas especies probablemente no produce la producción de
proteínas. Por tanto, es llamado ADN no codificante. Por ejemplo, el genoma humano es de
aproximadamente 3 x 109 pares de nucleótidos de largo, y algunos genetistas estiman que
sólo el 10 - 25% de ella es en realidad la codificación de ADN. Se ha observado que el ADN
bacteriano tiende a ser mucho más económica y organizada. En experimentos de reasociación
de ADN se estima la proporción de ADN no codificante. En estos experimentos, hebras de ADN
se les permite unirse (volver a asociar) a la velocidad que lo hacen depende de su similitud de
secuencias. El ADN que se unieron poco a poco fue ADN "copia única", la parte del ADN que
codifica para la mayoría de los genes. Una gran parte del genoma es no codificante, el ADN
repetitivo.
Los genetistas distinguir varios tipos de ADN repetitivo. Una distinción importante es entre el
ADN tándem y repeticiones dispersas:
ADN tandem
• microsatélites. Repeticiones cortas - secuencias de nucleótidos (2 5 pares de bases). El
número de repeticiones varía, pero el promedio es de alrededor de 100 repeticiones. Muchos
loci microsatélites se encuentran dispersos a través del genoma, un ser humano promedio, por
ejemplo, contiene alrededor de 30 000 loci de microsatélites.
• minisatélites. Repeticiones de secuencias más largas de nucleótidos (aproximadamente 15
pares de bases). El número de repeticiones varía entre los loci minisatélites, y hay muchos loci
dispersos por todo el genoma. La duración media de un locus cualquiera suele ser de unos
cinco-dos mil nucleótidos.
• El ADN satélite. El tamaño de la unidad repetida varía en los distintos casos, algunos son tan
pequeños (5 a 15 pares de bases) como micro y minisatélites, otros son más grandes
(alrededor de 100 pares de bases). Se encuentran a menudo en grandes bloques, de alrededor
de 1000 o más repeticiones de la secuencia de la unidad en las regiones del cromosoma cerca
del centrómero y telómeros.
Repeticiones dispersas.
Secuencias más largas (a menudo alrededor de 100 pares de bases) que se distribuyen por
todo el genoma, por lo general en forma individual limitada por otras secuencias y no en
repeticiones en tándem.
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
FILOGENIA
La GENÓMICA COMPARATIVA es una rama de la genómica que ayuda a interpretar la
evolución de los organismos mediante la comparación de los genomas de diferentes especies.
Los bancos de genes (Genbank) son bases de datos de secuencias de DNA y proteínas;
proporcionan secuencias al público, investigan en bioinformática, desarrollan software para
análisis genómicos, y diseminan literatura científica sobre genómica y biología molecular.
La gran cantidad de información contenida en los genomas modernos precisa herramientas
bioinformáticas para su análisis.
La glucólisis y el ciclo de Krebs son rutas metabólicas que se encuentran en la práctica total de
los seres vivos. Para la realización generalizada de análisis filogenéticos de organismos
animales y vegetales es muy conveniente la utilización de criterios fisiológicos moleculares
comunes a todas las especies que se pretende comparar. Cada una de las reacciones químicas
de las rutas antes mencionadas está catalizada por una enzima, una proteína codificada por un
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
gen. La información secuencial correspondiente podría ser muy útil ya que la universalidad de
las reacciones de estas rutas las hace especialmente apropiadas para llevar a cabo esta clase
de estudios (Alexandra Ruiz, et. al.,2009).
La evolución requiere la variación genética que resulta de cambios dentro de una reserva
genética de una población específica. Un acervo genético es la combinación de todos los
alelos-formas alternativas de un locus genético para todos los rasgos que la población puede
presentar. Los cambios en una reserva genética puede resultar de la mutación variación dentro
de un determinado gen o de los cambios en la frecuencia de los genes-la proporción de un
alelo en una población dada.
dos métodos de construcción de árbol que se utiliza con mayor frecuencia con los datos de
secuencia molecular son la evolución mínima, como vecino de unión, y de máxima
verosimilitud. Estos métodos, y el método bayesiano, son lo suficientemente flexibles para
incluir información diversa sobre la naturaleza biológica del cambio de secuencia molecular,
tales como tasa de variación entre los sitios. Un cuarto método de máxima parsimonia,
también se usa ampliamente.
La teoría neutral, propuesta por Motoo Kimura en la década de 1960. La teoría postula que la
mayoría de las mutaciones acumuladas en cualquier genoma son neutrales: "ni beneficioso ni
perjudicial en las palabras de Darwin. Así, las mutaciones podrían acumularse de forma
continua, proporcionando el mecanismo causal del reloj.
La única molécula más útiles ha sido ARN ribosomal (ARNr), que es homóloga a todos los
organismos vivos y, debido a que parece seguir evolucionando en la estructura secundaria, su
secuencia primaria es más fácil de usar para reconstruir los árboles. El uso común del rRNA
subunidad 18S es más, cerca de 1800 pares de bases y evoluciona lentamente.
SECUENCIACION
El análisis más detallado de la estructura del ADN consiste en averiguar la secuencia de
nucleótidos. A lo largo del tiempo se han desarrollado diferentes métodos para obtener la
secuencia de nucleótidos del ADN, sin embargo, actualmente los métodos más utilizados son
el de secuenciación automática y el método enzimático de terminación de cadena de Sanger
también conocido por el método didesoxi.
producen una serie de moléculas de ADN de nueva síntesis de diferente longitud que terminan
todas en el mismo nucleótido y marcadas todas radiactivamente por el extremo 5' (todas
contienen en el extremo 5' el cebador utilizado) (figura-5).
Los fragmentos de ADN de nueva síntesis obtenidos en cada mezcla de reacción se separan por
tamaños mediante electroforesis en geles verticales de acrilamida muy finos (0,5 mm de
espesor) y de gran longitud (cerca de
50 cm) que permiten distinguir
fragmentos de ADN que se
diferencian en un solo nucleótido.
Los productos de cada una de las
cuatro mezclas de reacción se
insertan en cuatro calles o carriles
diferentes del gel. La aparición de
una banda en una posición concreta
de la autorradiografía en una de las
Figura-6. Lectura de electroforesis. Teniendo en cuenta que el ADN de
nueva síntesis crece en la dirección 5' - 3', si comenzamos a leer el gel cuatro calles nos indica que en ese
por los fragmentos de menor tamaño (extremo 5') y avanzamos punto de la secuencia del ADN de
aumentando el tamaño de los fragmentos (hacia 3'), obtendremos la
secuencia del ADN de nueva síntesis en la dirección 5' - 3'. nueva síntesis (complementario al
ADN molde) está la base
correspondiente al nucleótido didesoxi utilizado en la mezcla de reacción correspondiente
(figura-6). Antes de resolver la secuencia del segmento de ADN problema es conveniente
repasar el método de Sanger.
Se pasa a considerar la secuencia de bases nitrogenadas de ambas hélices de ADN, la
complementaria de nueva síntesis (ADN-C) y la hélice molde (ADN-M) y la transcripción para la
obtención de los ARNm de ambas cadenas. Con ayuda del código genético se consigue la
secuencia de aminoácidos de los posibles polipéptidos sintetizados por dichos mensajeros,
dependiendo del ribonucleótido por el que se inicie la traducción.
El primer genoma bacteriano secuenciado fue el de Haemophilus influenzae, el mismo
organismo con el que se descubrieron las enzimas de restricción en los años 1960. Figurado
por los cloroplastos, las mitocondrias de mamíferos, diferentes organismos de laboratorio
como levaduras, un gusano nematodo, la mosca de la fruta (Drosophila melanogaster), la
planta Arabidopsis thaliana, el ratón Mus musculus. También se han secuenciado una gran
variedad de patógenos conocidos como las bacterias causantes del cólera, la tuberculosis, la
sífilis, la gonorrea, la enfermedad de Lyme, el virus de la viruela y el del mal de Epstein-Barr.
Con la conclusión de estos y muchos otros proyectos genomas se espera lograr una mejor
comprensión sobre el mecanismo de acción de los organismos patógenos, para disminuir su
virulencia, o lograr erradicarlos.
MARCADORES MOLECULARES
Los marcadores moleculares han sido definidos como cualquier diferencia notípica controlada
genéticamente. Se puede considerar que cualquier molécula, orgánica o inorgánica, que sea
característica de un organismo o proceso sea un marcador. Los marcadores idóneos son los de
ADN, siendo válido cualquier fragmento que se encuentre muy cerca del gen o de la secuencia
de interés y que lógicamente no afecte al carácter en estudio. Para otros, un marcador se
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
refiere a cualquier molécula de proteína, ARN o ADN de tamaño o peso molecular conocido
que sirve para monitorear o calibrar la separación de las mismas utilizando electroforesis o
cromatografía, y un marcador genético como cualquier gen cuya expresión permite un efecto
fenotípico que puede ser detectado fácilmente. Los marcadores del ADN se basan
fundamentalmente en el análisis de las diferencias en pequeñas secuencias del ADN entre
individuos. Las técnicas empleadas para ello son muy diversas y dan el nombre a los distintos
tipos de marcadores, los cuales pueden ser de carácter dominante o codominante.
Marcadores morfológicos
Se consideran marcadores morfológicos a los caracteres de un individuo que se expresan en un
ambiente específico y que el hombre identifica con un objetivo determinado como estimar la
variación existente en una población.
Marcadores moleculares
Corresponden a cualquier gen cuya expresión permite un efecto cuantificable u observable.
Pueden evaluarse desde que los individuos están en sus primeros estadios de desarrollo. Se
habla de marcadores genéticos cuando se transmiten según las leyes básicas de la herencia
mendeliana, por lo que es importante destacar que no todos los marcadores moleculares
pueden considerarse como genéticos. Existen dos tipos de marcadores moleculares: los
marcadores bioquímicos y los marcadores de ADN.
Marcadores Bioquímicos
Incluyen a las proteínas y las isoenzimas o aloenzimas. Las proteínas se ven menos influidas
por el ambiente al ser producto de la traducción. Las isoenzimas fueron descubiertas por
Hunter y Markert en 1957 y son diferentes variantes moleculares de una misma enzima
presentes en una especie, las cuales desempeñan la misma actividad pero pueden tener
diferentes propiedades.
Las isoenzimas se identifican mediante el proceso denominado “electroforesis”, que consiste
en colocar un extracto proteico del material a analizar en los pocillos de un soporte (papel de
celulosa o un gel hecho de agarosa o poliacrilamida) que se somete a un campo eléctrico
durante varias horas para que se separen las proteínas de acuerdo con su tamaño o carga
eléctrica. Una vez concluida la emigración de las proteínas por medio del frente de corrida
denominado Kohlrasusch, siendo que las diferencias en la movilidad electroforética de las
isoenzimas son resultantes de las diferencias en las secuencias del ADN que codifican tales
enzimas.
Las isoenzimas tienen base genética codominante (es decir, que en un individuo diploide es
posible visualizar la expresión de ambos alelos); son selectivamente neutrales y están libres de
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
efectos deletéreos (cuando los alelos tienen efectos negativos que imposibilitan la
reproducción del genotipo que los posee), efectos pleiotrópicos (cuando un gen controla la
expresión de más de un carácter en un individuo) y/o epistáticos (dominancia de un gen sobre
otro).
Desventajas: 1) presentan problemas técnicos; 2) no permiten cubrir todo el genoma, pues
sólo representan una estrecha fracción del contenido genético; 3 ) únicamente detectan la
variación de los genes que codifican para la expresión de una característica del individuo; 4 ) se
dificulta la precisión de los datos obtenidos debido al polimorfismo en el tejido de las
isoenzimas (por ejemplo, el polimorfismo detectado en una hoja no es el mismo que el que se
obtiene usando la semilla del mismo individuo).
Marcadores de ADN
Son capaces de generar una cantidad virtualmente infinita de marcadores. Existen varias
técnicas para identificar marcadores de ADN, las que se pueden agrupar en tres categorías: las
de hibridación tipo Southern, las de reacción de polimerización en cadena (PCR) y las que
combinan PCR o sus productos de ADN con la hibridación tipo Southern.
La hibridación consiste en la formación de una molécula de doble cadena mediante el
apareamiento o unión de bases complementarias de dos moléculas de una sola cadena. La
hibridación tipo Southern explora las variaciones en la longitud o tamaño de los fragmentos de
ADN ocasionadas por la restricción del genoma mediada por una enzima particular
(endonucleasa). Esta técnica comprende las siguientes etapas: primero se extrae el ADN del
material que deseamos estudiar; luego se le adicionan enzimas de restricción (endonucleasas),
las cuales cortan el ADN en fragmentos de diferente longitud; estos fragmentos son separados
en geles de agarosa, para después realizar por capilaridad o al vacío la transferencia de los
fragmentos a una membrana de papel de nitrocelulosa o de nylon (transferencia tipo
Southern). Finalmente, se hibridizan los fragmentos de la membrana con sondas marcadas
(radiactiva o no radiactivamente) para visualizar y detectar las bandas hibridadas.
Dentro de esta técnica se encuentran los marcadores RFLP (polimorfismo de la longitud de los
fragmentos de restricción) y los VNTR (secuencias adyacentes que se repiten en número
variable).
La técnica de PCR, o reacción en cadena de la polimerasa, es una tecnología utilizada para
multiplicar (sintetizar) in vitro fragmentos específicos de ADN con la finalidad de detectar una
secuencia o gen de interés en el genoma del individuo en estudio. Se basa en la amplificación
de fragmentos de ADN a partir de secuencias de nucleótidos denominadas “cebador” (primer),
que son capaces de reconocer una secuencia blanco para la cual es complementaria.
Dentro de esta metodología se encuentran los marcadores llamados RAPD (ADN polimórfico
amplificado al azar), PCR iniciada con microsatélites (MP-PCR), AFLP (polimorfismo de longitud
de fragmentos amplificados) y DAF (amplificación de huellas del ADN), entre otros.
Finalmente, dentro de las metodologías que combinan la PCR o sus productos de ADN más la
hibridación tipo Southern, están los RAHM y RAMPO (amplificación aleatoria del polimorfismo
de microsatélites).
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
Inicialización:
Se lleva la reacción hasta una temperatura de 94-96ºC ó 98ºC si se está usando una polimerasa
termoestable extrema), que se mantiene durante 1-9 minutos. Esto sólo es necesario para
ADN polimerasas que requieran activación por calor.
Desnaturalización:
Se desnaturaliza el ADN (se separan las dos hebras de las cuales está constituido). Este paso
puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento (94-95ºC) de la muestra la
forma más habitual. La temperatura a la cual se decide realizar la desnaturalización depende,
por ejemplo, de la proporción de G+C que tenga la hebra, como también del largo de la misma.
Otros métodos, raramente empleados en la técnica de la PCR, serían la adición de sales o
agentes químicos capaces de realizar la desnaturalización.
Alineamiento/Unión del cebador:
A continuación se producirá la hibridación del cebador, es decir, el cebador se unirá a su
secuencia complementaria en el ADN molde. Para ello es necesario bajar la temperatura a 50-
65ºC durante 20-40 segundos (según el caso), permitiendo así el alineamiento. Los puentes de
hidrógeno estables entre las cadenas de ADN (unión ADN-ADN) sólo se forman cuando la
secuencia del cebador es muy similar a la secuencia del ADN molde. La polimerasa une el
híbrido de la cadena molde y el cebador, y empieza a sintetizar ADN. Los cebadores actuarán
como límites de la región de la molécula que va a ser amplificada.
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
Extensión/Elongación de la cadena:
Actúa la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y
partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN. La
polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria a la hebra molde añadiendo los
dNTP’s complementarios en dirección 5′→ 3′, uniendo el grupo 5′- fosfato de los dNTPs con el
grupo 3′- hidroxilo del final de la hebra de ADN creciente (la cual se extiende). La temperatura
para este paso depende de la ADN polimerasa que usemos. Para la Taq polimerasa, la
temperatura de máxima actividad está en 75-80°C (comúnmente 72°C). El tiempo de extensión
depende tanto de la ADN polimerasa usada como de la longitud del fragmento de ADN que se
va a amplificar. Hay una regla básica: en su temperatura óptima, la polimerasa de ADN
polimerizará mil bases en un minuto.
Elongación Final:
Etapa única que se lleva a cabo a una temperatura de 70-74°C durante 5-15 minutos tras el
último ciclo de PCR. Con ella se asegura que cualquier ADN de cadena simple restante sea
totalmente ampliado.
Conservación:
Este paso se lleva a cabo a 4-15°C durante un tiempo indefinido para conservar la reacción a
corto plazo.
La PCR normalmente se realiza con un volumen de reacción
de 0.2-0.5 ml, en pequeños tubos de 15-100 μl que se
colocan en el termociclador.
Para verificar que la PCR ha generado el fragmento de ADN
previsto, se emplean técnicas de electroforesis, que separan
los fragmentos de ADN generados de acuerdo a su carga,
esto es, longitud, y, en menor medida y dependiendo de la
matriz empleada, a su tamaño: típicamente se emplean la
electroforesis en gel de Sagarosa, para fragmentos grandes;
en acrilamida, para los más pequeños; y, de forma más
rápida y aplicable a la PCR asociada a marcaje fluorescente,
la electroforesis capilar.[3] El/los tamaño/s de los productos
de la PCR vienen determinados por un marcador de peso
molecular de ADN, el cual contiene fragmentos de ADN de
tamaño conocido, y que se corre en el gel junto con los
Figura-7. Reacción en cadena de la productos de PCR.
polimerasa.
TIPOS DE PCR
PCR anidada.- Técnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificación es
utilizado como molde para realizar una segunda amplificación con cebadores que se ubican
dentro de la primera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es muy específica.
PCR in situ.- La PCR in situ consiste en una reacción de PCR en secciones histológicas o células,
donde los productos generados pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Es realizada
sobre preparaciones fijas en un portaobjetos. En la técnica de PCR in situ se realiza una
primera amplificación de ADN blanco y luego detección mediante hibridación in situ
convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera pueden detectarse cantidades
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
ENZIMAS DE RESTRICCION
Las enzimas de restricción son endonucleasas que reconocen una secuencia de ADN entre 4-8
bp. El sitio de reconocimiento se llama sitio de restricción, y la enzima rompe un enlace
fosfodiester en la hebra de arriba (sens) y otro enlace fosfodiester en la hebra complementaria
(antisens).
Existen 3 tipos de enzimas de restricción:
1. Tipo I y Tipo III:
a. Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación (metilan).
b. Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento, las Tipo I cortan
lejos de la secuencia de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo. Las Tipo III
cortan de 5-8 bases antes o despúes de la secuencia que reconocen.
c. Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar
de reconocimiento hasta el sitio del corte.
2. Tipo II:
a. Sólo tienen actividad de restricción.
b. Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que
reconocen.
c. Sólo requieren Mg++ como cofactor.
d. No necesitan ATP.
Dentro de las aplicaciones de las enzimas de restricción, se pueden crear mapas de restricción
de un plásmido o bacteriófago, fragmentar DNA genómico para separación de electroforesis y
“Southern Blot”, generar fragmentos para ser usados como sondas marcadas en “Southern”y
“Northern” blotting y, generar fragmentos para ser subclonados en los vectores apropiados,
creación de DNA recombinante.
Las endonucleasas se nombran a partir de las bacterias de las que son extraídas, su nombre
está dado según el género y la especie de la bacteria de donde se aisló por primera vez esta
enzima. La primera letra representa el género de la bacteria, las próximas dos indican la
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
especie, una cuarta letra indica la cepa, y un número al final indica la cantidad de enzimas que
se han aislado de esa cepa (Omayra, et. al.).
MICROARREGLOS
Son soportes sólidos en los cuales se encuentran inmovilizados, en un área pequeña, de
cientos a miles de genes de manera ordenada. Los soportes sólidos pueden ser laminillas de
vidrio para microscopio, laminillas de silicon o membranas de nylon. En los microarreglos, el
DNA puede ser impreso, depositado o sintetizado directamente sobre la superficie sólida. Esta
colección de ácidos nucléicos (blancos) impresos con un orden específico, representan una
parte o todos los genes de un organismo. Cada secuencia presente en cada una de las
alícuotas depositadas en la superficie sólida corresponde a un gen diferente.
Cabe mencionar que los microarreglos de DNA son una versión paralela y masiva a las técnicas
de Northern y Southern blot; las sondas son inmovilizadas en una superficie sólida. Además, la
muestra no se marca con isótopos radioactivos, en su lugar se usan colorantes fluorescentes
que pueden detectarse por un escáner.
Los microarreglos pueden ser divididos en dos tipos principales, los cuales difieren en su
construcción y en el número de condiciones que se pueden monitorear en cada caso:
a) Microarreglos de spots de cDNA u oligonucleótidos, los cuales también se conocen
como microarreglos de dos colorantes y permiten comparar dos condiciones en la
misma laminilla.
b) Microarreglos de oligonucleótidos de alta densidad, los cuales sólo permiten
monitorear una condición por arreglo.
Experimento de microarreglos:
a) Diseño del microarreglo. Selección del tipo y cantidad de material biológico que se va
a inmovilizar sobre la superficie, que variará en función del tipo de experimento que se
desee llevar a cabo. Determinar la número de sondas que se desean inmovilizar sobre
la superficie del chip, que se verá limitada por el método de fabricación que se desee
emplear.
b) Fabricación del arreglo. Determina la densidad de integración que se puede lograr en
un microarreglo.
c) Extracción y marcado del RNA de cada una de las muestras. Los procesos a seguir son
la extracción y purificación del material a analizar, amplificación en el caso de material
genético y marcaje de la muestra.
d) Hibridización, en el arreglo, de los cDNAs marcados. Reacción de afinidad en la que se
hibridan las hebras de DNA de las muestras marcadas para permitir su posterior
identificación, con sus complementarias inmovilizadas en la superficie del
microarreglo. El lavado se realiza para eliminar las interacciones inespecíficas que se
dan entre la muestra y el material inmovilizado o la superficie del arreglo.
e) Lectura del arreglo.
f) Cuantificación de la imagen. Localización de los puntos en la imagen y la obtención de
sus intensidades de fluorescencia. Análisis de imágenes de 16 bits, puntos en los que
la reacción de hibridación ha sido positiva y los puntos en los que no ha habido tal
hibridación.
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
TRANSFORMACION GENETICA
Es la alteración genética de una célula que resulta de la introducción y expresión de material
genético externo (DNA). Dentro de los mecanismos empleados se encuentra la competencia
natural, en la que Algunas bacterias (cerca del 1% de todas las especies) son capaces de
incorporar de manera natural, ADN bajo condiciones de laboratorio; y muchas más pueden ser
capaces de hacerlo en sus ambientes naturales. Estas especies traen un conjunto de
maquinaria genética específica para llevar el ADN a través de la membrana o membranas.
Mientras que la competencia artificial no está codificada en los genes celulares. Sino que es
inducida por procedimientos en el laboratorio, en donde las células son convertidas en
permeables de forma pasiva, a través de condiciones que normalmente no ocurren en la
naturaleza.
SILENCIAMIENTO DE GENES
La interferencia por ARN, ARN de interferencia o ARNi, es un proceso de silenciamiento génico
mediado por moléculas de ARN. Es característico de células eucariotas y tiene gran
importancia en procesos de desarrollo y diferenciación celular, cáncer y defensa frente a virus.
Actualmente numerosas técnicas de biología molecular empleadas en investigación básica y
terapia se basan en este proceso. Por tanto que el silenciamiento génico es un término general
que describe la epigenética procesos de regulación génica. El silenciamiento génico término se
utiliza generalmente para describir la "desconexión" de un gen por un mecanismo distinto de
la modificación
genética.
Existen varios tipos
de silenciamiento
génico:
silenciamiento
génico
transcripcional,
post-
transcripcional del
gen silenciador,
silenciamiento
génico meiótica
(figura-8).
Tanto que los ARN de interferencia al ser son pequeñas molñeculas (de 20 a 25 nucléotidos)
que se generan por fragmentación de precursores más largos. Se clasificar en tres grandes
grupos: siRNA, ARN interferente pequeño, Son moléculas de ARN bicatenario perfectamente
complementarias de aproximadamente 20 o 21 nucleótidos con 2 nucleótidos desemparejados
en cada extremo 3'. miRNA, microARN, se generan a partir de precursores específicos
codificados en el genoma, que al transcribirse se pliegan en horquillas (hairpins)
intramoleculares que contienen segmentos de complementariedad imperfecta. piRNA, ARN
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
TERAPIA GENICA
Terapia génica es el tratamiento de una enfermedad mediante la introducción de un nuevo
gen en una célula. El nuevo gen se puede utilizar para sustituir una función que está perdiendo
debido a un gen defectuoso. Los investigadores pueden utilizar uno de varios métodos para la
corrección de genes defectuosos:
Un gen normal se puede insertar en un lugar no específico en el genoma para
reemplazar un gen no funcional.
Un gen anormal puede ser cambiado por un gen normal a través de la recombinación
homóloga.
El gen anormal puede ser reparado a través de mutación inversa de selectiva, que
vuelve el gen a su función normal.
La regulación (el grado en que un gen es activado o desactivado) de un gen en
particular podría ser alterado.
La terapia genética se puede clasificar en los dos siguientes tipos:
Isela Elizabeth Rangel Ventura. Biología. 0730055
REFERENCIAS
1. Alexandra Ruiz, Sara García, Carolina Puerta, Marta Campos, Cristina Núñez, Cristina Pastor,
Lorena Padilla, Julia Ruiz, Mª Carmen Rivas,Mª Carmen Cabello, Noelia Fernández, Elena López,
Pilar Gutiérrez, Alex Chacón, Rosa Romero, Marta Quirós y Ángel García-Gutiérrez. 2009.
RECURSOS GENÓMICOS EN FILOGENIA MOLECULAR. IES MARÍA ZAMBRANO. TORRE DEL MAR,
MÁLAGA.
2. Álvaro Azofeifa-Delgado. 2006. USO DE MARCADORES MOLECULARES EN PLANTAS;
APLICACIONES EN FRUTALES DEL TRÓPICO. 17(2): 221-242.
3. Dennis O'Neil. 2010. http://anthro.palomar.edu/mendel/mendel_1.htm
4. http://bacteria.fciencia.unam.mx/bioinformatica/micro.htm
5. http://ejb.ucv.cl/gmunoz/genweb/genetica/frame/textos/4_2enzim_restric.htm
6. http://genemol.org/biomolespa/Enzimas/enzimas-de-restricc.html
7. http://ghr.nlm.nih.gov/handbook/therapy/genetherapy
8. http://neofronteras.com/?p=835
9. http://www.accessexcellence.org/RC/AB/BA/Gene_Therapy_Overview.html
10. http://www.ars.usda.gov/is/espanol/pr/2008/081105.es.htm
11. http://www.blackwellpublishing.com/ridley/tutorials/Molecular_and_Mendelian_Genetics15.a
sp&rurl=translate.google.com.mx&usg=ALkJrhjWloPyN8nYllN-gK3rPOPzHaIaww
12. http://www.csiro.au/science/Gene-silencing.html
13. http://www.cuantaciencia.com/investigacion/arn-interferencia-corrige-defectos-epigeneticos
14. http://www.icampus.ucl.ac.be/courses/SBIM2520/document/genemol/biomolespa/Enzimas/e
nzimas-de-restricc.html
15. http://www.ira.cinvestav.mx/Investigaci%C3%B3n/DepartamentodeIngenier%C3%ADaGen%C3
%A9tica/ProfesoresInvestigadores/DraJofreyGarfiasAlbaEstela/CultivodeTejidosyTransformaci
%C3%B3nGen%C3%A9tica/tabid/298/language/es-MX/Default.aspx
16. http://www.medmol.es/glosario/82/
17. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/About/primer/phylo.html
18. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/genome/probe/doc/ApplSilencing.shtml
19. http://www.noble.org/forageimprovement/wang/research.html
20. http://www.nwcreation.net/genehijacking.html
21. http://www.ornl.gov/sci/techresources/Human_Genome/medicine/genetherapy.shtml
22. http://www.sfn.org/index.aspx?pagename=brainBriefings_geneSilencing
23. http://www.sci-ed-ga.org/modules/dna/bactrans.html
24. http://www.3tres3.com/buscador/imprimir.php?sec=ultima&id=7208
25. http://www.tulane.edu/~wiser/protozoology/notes/tree.html
26. http://www.peripatus.gen.nz/Biology/MolPhy.html
27. http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0007667
28. http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_34.asp?cuaderno=34
29. http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_18.asp?cuaderno=18
30. http://www.uprm.edu/biology/cursos/biologiageneral/EnzimasDNA.htm
31. Phillip McClean. 2000.
http://www.ndsu.edu/pubweb/~mcclean/plsc431/mendel/mendel6.htm