Том 1 Начала
сравнительной
эмбриологии
А. К. ДОНДУА
БИОЛОГИЯ РАЗВИТИЯ
Том I
Н А Ч А Л А СРАВНИТЕЛЬНОЙ
ЭМ БРИОЛОГИИ
Рецензенты: докт. биол. наук Л. В. Белоусос (Моек гос. ун-т им. М. В. Ломоносова), докт. биол.
наук С. Г. Васецкий, докт. биол. наук В. И. Миташов (Ин-т биологии развития
им. Н. К. Кольцова, РАН)
Печатается по постановлению
Редакционно-издательского совета
С.-Петербургского государственного университета
Дондуа А . К .
Д67 Биология развития: Учебник. В 2 т. Т. 1: Начала сравнительной эмбрио
логии. — СПб.: Йзд-во С.-Петерб. ун-та, 2005. — 295 с.
ISBN 5-288-03472-9 (Т. 1),
ISBN 5-288-03474-5
В первом томе учебника рассматриваются вопросы общей и сравнительной эмбриоло
гии. Дается краткий очерк истории становления современной эмбриологии, рассматрива
ются проблемы гаметогенеза, оплодотворения, дробления, гаструляции, зародышевых лист
ков, прямого и личиночного развития, метаморфоза. Излагаются данные по сравнительной
эмбриологии губок, стрекающих, гребневиков, аннелид, моллюсков, круглых червей, чле
нистоногих, иглокожих, оболочников, бесчерепных, низших и высших позвоночных.
Учебник предназначен для студентов биологических факультетов университетов, пре
подавателей биологии средней школы и всех интересующихся проблемами эмбриологии.
Б Б К 28.63
© А. К. Дондуа, 2005
ISBN 5-288-03472-9 (Т. 1), © Издательство С.-Петербургского
ISBN 5-288-03474-5 университета, 2005
ОГЛАВЛЕНИЕ
От автора. . ........... 5
От описательной эмбриологии к биологии развития......... 6
Часть I. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А О С Н О В Н Ы Х Э Т А П О В
И Н Д И В И Д У А Л Ь Н О Г О Р А З В И Т И Я ........................................................... 19
Глава 1. Гаметогенез..........................................................................................................
1.1. Сегрегация линии половых клеток. Первичные половые клетки....... 23
1.2. Гонии . . . . .................................................................... 31
1.3. Мейоз........... ...................................................................... 32
1.4. Оогенез .. ......................................................................................................... 34
1.5. Сперматогез ............................................................................................... 49
Глава 2. Оплодотворение.......................... .............................................................................. 59
Глава 3. Дробление.............................................................................................................. ....... 79
Глава 4. Гаструляция. Зародышевые листки............................. 99
Глава 5. Личиночное развитие. Метаморфоз......................................................................... 104
3
12.2. Амфибии (Amphibia)............... 21]
12.3. Костистые рыбы (Teleostei)...................................... 226
Глава 13. Deuterostomia. Высшие позвоночные (Anamnia) .................. 237
13.1. Рептилии и Птицы (Sauropsida) 238
13.2. Млекопитающие (Mammalia) . 251
Глава 14. Онтогенез и эволюция .. 266
Предметный указатель.................................................................................................................. 278
От автора
5
ОТ ОПИСАТЕЛЬНОЙ ЭМ БРИ ОЛОГИ И
К Б И О Л О ГИ И Р А З В И Т И Я
6
видуального развития, но и выяснить закономерности их соподчинения в условиях
динамической смены частных программ развития, действующих на разных этапах
онтогенеза.
Отличительной особенностью современной эмбриологии является ее интегратив
ный характер. Понимание закономерностей развития организма может быть достиг
нуто только при синтезе морфологических, молекулярно-биологичеких, генетиче
ских и эволюционных подходов. Интегративный характер современной эмбриологии
подчеркивается ее новым наименованием. Эмбриология наших дней это не просто
наука о развитии, это биология развития. Новое название подчеркивает вместе с
тем, что в круг интересов этой новой отрасли биологии входят все явления, связан
ные с развитием формы и функции. Если эмбриология родилась как особая дис
циплина в результате ветвления единого ствола зоологической науки, то биология
развития как наука о движущих силах развития возникла благодаря интеграции
подходов всех отраслей биологии, изучающих живую материю на разных уровнях
ее организации.
Современная биология развития ведет интенсивные исследования молекуляр
ных, биохимических и генетических механизмов различных формообразовательных
процессов, активно изучает особенности субклеточной и клеточной организации за
родышей. Естественно, что не утратили своего значения гистологические и анатоми
ческие исследования. Безусловную актуальность сохраняют исследования эволюции
онтогенеза и прежде всего исследования эволюции механизмов онтогенеза. Это но
вое направление — эволюционная биология развития — в англоязычной литературе
получило сокращенное наименование «Evo-Devo».
Нетрудно заметить, что онтогенез имеет выраженное внутреннее противоречие.
Действительно, он отличается (во всяком случае, на ранних этапах) высокой сте
пенью динамизма, постоянной сменой одних состояний другими. Однако при рас
смотрении развития животных в ряду поколений обнаруживается высокая консер
вативность организации индивидуального развития особи данного вида, благодаря
которой и возможна преемственность поколений. Отсюда следует, что должен суще
ствовать некий механизм, который обеспечивает в ряду поколений передачу способ
ности к развитию идентично организованных во времени и пространстве структур.
Любая теория, претендующая на объяснение индивидуального развития, должна
найти решение этой проблемы. История эмбриологии на протяжении последних трех
столетий в теоретическом плане, по существу, является историей соотношения двух
основных идей, претендовавших на объяснение природы консерватизма и развития
в эмбриогенезе.
Преформизм и эпигенез, В XVII- XVIII вв. сложилось убеждение, что в поло
вых клетках животных уже имеются предобразованные, преформированные, струк
туры. Сущность формирования зародыша состоит, согласно этим взглядам, в уве
личении размеров и в уплотнении изначально имеющихся структур. Преформисты
полагали, что органы будущего индивидуума предобразованы (буквально — пред
начертаны; теория пределинеацин, от лат. ргае — впереди; linea — линия, черта) в
миниаиоре либо в яйце, либо в сперматозоиде. Сторонники первой точки зрения —
овисты обосновывали свои взгляды известными в то время фактами партеногене
за, девственного развития без осеменения (Бонне, 1740); сторонники второй — ани
малькулисты находили подтверждение своим взглядам в структуре спермия. На
блюдения над биологией размножения вольвокса, тлей и других организмов, с одной
7
стороны, и логика преформизма, с другой, явились основанием теории вложений,
согласно которой в половых клетках прародительской формы должны быть струк
турно оформлены все последующие генерации животного. Теория вложений была
прекрасным, хотя и абсурдным, с современной точки зрения, объяснением единства
развития и наследуемости.
Период расцвета преформистских идей закончился в результате накопления фак
тов, которые не укладывались в рамки этой теории. Главными источниками этих
противоречащих преформизму данных были тератология, генетика и эмбриология.
Так, основатель экспериментальной тератологии Сент-Иллер и его последователи
убедились в том, что при определенных воздействиях на развивающийся организм
структура возникающих органов существенно отличается от «предначертанных».
Образующиеся при скрещивании промежуточные формы, несущие и материнские
и отцовские признаки, будь то метисы или гибридные формы табака (Кельрейтер,
1766), также не могли найти объяснения в рамках наивного преформизма.
Наконец, данные эмбриологии, свидетельствующие о разной скорости развития
различных систем органов или об изменениях положения органа в ходе индиви
дуального развития, делали все более привлекательной идею эпигенеза, согласно
которой структуры р .редобразованы, а возникают заново.
Надо заметить, что первая формулировка эпигенетической теории развития при
надлежит великому Аристотелю, жившему в IV веке до нашей эры. Аристотель,
который по праву может считаться первым эмбриологом и которому принадлежит
первое научное описание развития куриного зародыша, полагал, что форму развива
ющегося зародыша создает особая сила - - энтелехия, присущая мужскому семени,
тогда как материалом, подвергающимся действию энтелехии, служит кровь (у чело
века - менструальная кровь). Для всех эпигенетических теорий (термин «эпигенез»
был предложен Вильямом Гарвеем в XVII столетии) вопрос о загадочной «движу'-
щей силе» эмбрионального развития представлял наибольший интерес.
В основополагающем труде, посвященном развитию
куриного эмбриона, Каспар Фридрих Вольф (1734-1794)
(рис. 1), впоследствии член Петербургской академии, в
1759 году на основании тщательного описания анатоми
ческих изменений зародыша строго доказал, что кишеч
ная и нервная трубки возникают путем сворачивания
или выпячивания клеточных пластов с последуюхцим их
обособлением. Эти прямые наблюдения не оставляли и
тени сомнения в иллюзорности идей преформизма: в ин
дивидуальном развитии организма происходит реальное
формообразование. Что касается механизма этого фор
мообразования, то, подобно Аристотелю, Вольф зашиф
ровывает его в термине vis essentialis — «существенная
сила».
Рис. 1. Каспар Фридрих Аналогичная идея развивалась современником Воль-
Вольф (1734-1794). ф а Иоганном Влюменбахом (1742-1840), который объ
яснял морфогенетические процессы, наблюдаемые при
регенерации гидры, действием «формообразовательного импульса» — Bildungstrieb,
или nisus formativus. Согласно Блюменбаху, эпигенез направляется преформиро-
ванной в половых клетках «силой развития», которая может рассматриваться как
некая инструкция, предопределяющая морфогенез зародыша. Если это так, то ключ
к пониманию явления развития состоит в раскрытии природы этих «инструкций».
Нетрудно заметить, что такого рода идеи, высказанные во второй половине XVIII
столетия, являются своего рода логическим предвосхищением современных пред
ставлений о механизмах индивидуального развития.
История эмбриологии, в известном смысле, это история поисков объяснения
сочетания консервативного начала индивидуального развития, которое проявля
ется в постоянстве типа развития, и эпигенеза — развития разнообразных струк
тур из недифференцированного яйца. В течение ряда столетий, на протяжении
которых идет этот поиск, высказано немало интересных идей и теорий. Согласно
JI. В. Белоусову (1987), все их многообразие подразделяется на несколько групп. Бе
лоусов выделяет пять ведущих идей, или принципов, лежащих в основе объяснения
причин развития, а именно целевой, или финалистический, типологический, исто
рический, каузально-аналитический и, наконец, синергетический.
Финалистический принцип. В соответствии с финалистическим принципом
(Аристотель, 384-322 до н.э.) процесс развития определяется целью финалом, к
которому он направлен: зачаток органа закладывается потому, что данный орган
обязательно должен быть у взрослой особи. Этот принцип объяснений из небиоло
гического естествознания изгнан как ненаучный еще в XVII веке (Фрэнсис Бэкон,
1561-1626). В эмбриологии же он в определенной мере сохраняет свои позиции, под
черкивая предопределенность индивидуального развития.
Типологический принцип. Этот принцип объясняет то или иное направле
ние развития и н д и в и д у у м о в особенностями типа животных, к которому они отно
сятся. Основываясь на этом принципе, можно предсказать некоторые особенности
эмбриогенеза исследуемого объекта. Например, фундаментальной чертой развития
позвоночных является закладка жаберных щелей. Можно смело предсказать, что у
зародыша птицы, эмбрионы которой никогда не описывались, жаберные щели обя
зательно появятся на строго определенной стадии развития.
Разрабатывая проблему организации онтогенеза,
Карл фон Бэр (1792-1876) (рис. 2), прародитель совре
менной эмбриологии, установил, что каждый морфоло
гический тип животных (по Кювье, четыре типа: По
звоночные, Членистые, Мягкотелые и Лучистые) име
ет свой особый план развития. При этом Бэр сформу
лировал закон эмбриональной дивергенции, согласно ко
торому общее для данного типа образуется в эмбриоге
незе раньше, чем специальное. Сначала закладываются
признаки, характерные для всех без исключения пред
ставителей данного типа, затем более частные и лишь
в последнюю очередь специальные. Обнаруженный Бэ
ром принцип развития от общего к частному сохраняет
в полной мере свое значение и в наше время. Им же по
стулирован и закон зародышевого сходства, согласно ко- Рис- КаРл Максимович
й , Бэр (1792 1876).
торому эмбрионы высшей формы данного типа никогда v
не походят на другую форму взрослого животного, но только на ее зародыш.
Исторический принцип. Важное место (и по затратам труда, и по достигну
тым результатам) в объяснении движущих сил онтогенеза занимает исторический
9
принцип, который был сформулирован прежде всего
в трудах Чарльза Дарвина (1809-1882), Фрица Мюл
лера (1821-1897) и Эрнста Геккеля (1834 1919). Сущ
ность этого принципа состоит в том, что ход онтоге
неза, последовательность его стадий определяется ис
торией происхождения вида, особенностями его эволю
ции. С этой точки зрения эмбриональная дивергенция,
отмеченная Бэром, отражает’ дивергенцию соответству
ющих видов в ходе эволюции, а общность зародышей
разных видов обусловлена общностью происхождения
этих видов. Зародыши рассматриваются как «потуск
невший портрет» прародителя, так что па основании
данных о строении зародыша можно судить о пред-
„ „ Л ,
ги с. 3. Александр Онуфриевич
ках данного
^
животного. Примером такого родах ^
«ре-
х
Ковалевский (1840-1901). ставрации» могут служить исследования эмбриологии
асциднй, выполненные А. О. Ковалевским (1866, 1871)
(рис. 3), которые показали существование хорды у личинки асцидий, что позволило
установить истинное положение асцидий в системе.
Одним из редких примеров довольно полной рекапитуляции филогенеза может
служить исследованное Ф. Мюллером развитие пальмового вора Birgus latro, веду
щего наземный образ жизни ракообразного, близкого к ракам-отшельникам. Эм
бриональное и личиночное развитие этого животного происходит в морской среде.
После выхода из яйцевых оболочек свободноплавающей личинки зоэа и прохожде
ния нескольких линек формируются молодые рачки с мягким изогнутым брюшком,
которое они подобно ракам-отшельникам прячут в раковину моллюска. Следующий
этап развития связан с выходом на сушу и соответствует филогенетической стадии
наземных раков-отшельников. На де
финитивной стадии подгибание брюш
ка исчезает, и индивидуум приобрета
ет свойства и черты пальмового вора.
Таким образом, как полагают, онтоге
нез этих животных очень полно повто
ряет (рекапитулирует) филогенез дан
ного вида, причем рекапитулируют не
только морфологические особенности
предковых форм, но и их инстинкты,
характер питания и др.
В 1866 г. Эрнст Геккель (рис. 4)
сформулировал бгюгенетический за
кон, согласно которому онтогенез есть
краткое повторение филогенеза.. По
мнению Э. Геккеля, филогенез — это
«механическая причина» онтогенеза.
Отдавая должное плодотворности ис
торического метода изучения эмбрио
генеза, нельзя не заметить, что по
Рис. 4. Эрнст Геккель (1834-1919). следнее утверждение абсолютизирует
10
роль исторического фактора и, по существу, отвергает причинный (каузальный)
анализ реальных механизмов онтогенеза. Для современного исследователя очевид
на ограниченност ь «закона» Геккеля. Ясно, что онтогенез в принципе не может быть
кратким повторением филогенеза, так как сущность филогенеза состоит в форми
ровании все новых и новых генотипов, правомочность существования которых опре
деляется естественным отбором, тогда как онтогенез— это всего лишь реализация
потенций существующего генотипа.
К утверждению о том, что онтогенез — это краткое повторение филогенеза, мож
но относиться лишь как к метафоре. Этот тезис идеализирует ситуацию, даже ес
ли онтогенез рассматривать с сугубо морфологической точки зрения. Действитель
но, обычно речь идет о рекапитуляции не всего онтогенеза, а лишь каких-либо от
дельных признаков. Начиная с Э. Геккеля, различают налингенетические (от греч.
itaXiv - снова, опять; yeveaic; — творение, происхождение) и ценогенетические (от
греч. xaivoc — новый) признаки (структуры). К первым относятся структуры, обра
зование которых рекапитулирует органы предковых форм (например, хорда, жабер
ные щели у позвоночных), ко вторым — новоприобретенные структуры и признаки,
дающие зародышу возможность приспособиться к условиям среды, в которой про
исходит развитие данного вида,— амнион, желточный мешок, аллантоис и др.
Сфера применения биогенетического закона для восстановления филогенетиче
ских отношений ограничивается также различного рода гетерохрониями — измене
ниями в ходе эволюции времени закладки органов. При этом различают задержку,
или ретардацию (от лат. retardatio — замедление) и ускорение, или акселерацию (от
лат. acccleratio — ускорение) закладки и развития органов. Аналогичное действие
оказывают и гетеротопии, т. е. изменения области тела., в которой происходит за
кладка. органа у данного вида сравнительно с предковой формой. Парадокс состоит
в том, что эти «затемняющие» биогенетический закон явления и составляют зна
чительную часть эволюционных преобразований, лежащих в основе филогении жи
вотных.
Исследования, опирающиеся на исторический принцип анализа движущих сил
онтогенеза, сыграли важную роль в развитии современной эмбриологии. Они дали
целый ряд крупных для своего времени теоретических обобщений, таких как теория
зародышевых листков, теория происхождения многоклеточности у животных, тео
рия филэмбриогепезов (подробнее см. гл. 14) и др., ко
торые в известной мере сохранили свою актуальность
до наших дней, хотя и нуждаются в критическом пе
реосмыслении с учетом современных данных биологии
развития.
Неоценимая роль идей эволюционизма состояла и в
том, что они дали мощный стимул дальнейшему разви
тию описательной эмбриологии. Именно во второй по
ловине XIX столетия описательная эмбриология откры
ла поразительное разнообразие форм эмбрионального
развития и создала материальную основу эмбриологии
как науки. В развитии сравнительной и эволюционной
эмбриологии выдающуюся роль сыграли многие рос
сийские исследователи, такие как А. О. Ковалевский, Рис 5 Шья Ильич Мечников
И. И. Мечников (рис. 5), К. Н. Давыдов, А. Н. Северцов, (1845-1901).
11
П. П. Иванов (рис. 6) и др. Описательная, или сравни
тельная эмбриология в полной мере сохраняет свое зна
чение и в наши дни. Современная описательная эмбрио
логия располагает мощным и разнообразным арсена
лом микроскопической техники, включая методы уль-
траструктурного анализа.
Важным направлением описательной эмбриологии,
отчасти роднящим ее с экспериментальной эмбриоло
гией, были исследования, ставившие своей целью про
следить движения клеток и клеточных пластов эмбри
она. Используя методы витального окрашивания или
иные способы мечения зачатков, исследователи полу
чили возможность следить за судьбой этих зачатков, за
Рис. 6. Петр Павлович
перемещениями клеток по зародышу, существенно обо
Иванов (1878-1942) — гатив таким образом арсенал методов описания разви
основатель Петербургской тия. В. Фогт и его школа, впервые использовавшие ме
школы сравнительной и тод маркирования клеток в 1930-х годах, создали карты
эволюционной эмбриологии.
презумптивных (от лат. praesumptio — предположение)
зачатков зародышей амфибий, проследив, какие органы возникают из тех или иных
областей бластулы. Метод маркирования с использованием радиоактивных меток
или флуоресцентных красителей широко используется и в современной эмбриоло
гии. Вершин своего развития этот метод достиг при использовании генетическо
го маркирования, которое предполагает трансплантацию зачатков, клетки которых
легко обнаруживаются благодаря своей генетической природе и особому антигенно
му составу.
При всей важности и плодотворности исторического принципа нельзя не заме
тить, что при таком подходе поиск движущих сил эмбриогенеза в лучшем случае
выносится за пределы развивающегося индивидуума, в филогенез. Внутренние при
чины и реальные механизмы контроля над клеточной репродукцией, дифференци
ацией и морфогенезом остаются вне внимания исследователей. Уязвимость этого
подхода состоит и в том, что исследователи, сосредотачиваясь на анализе морфо
логии, пытаются найти ключ к пониманию развития структур без учета истории
становления и преобразования молекулярных и генетических механизмов этого раз
вития. И если этот разрыв между структурой и механизмом ее развития объективно
существовал во второй половине XIX столетия, когда биология клетки и генетика
находились в зачаточном состоянии, то в наше время очевидно, что эволюцию инди
видуального развития можно понять только при условии ясного представления об
эволюции его молекулярно-генетических механизмов. Современная эволюционная
эмбриология переживает естественный кризис, который, несомненно, будет преодо
леваться по мере становления эволюционной биологии развития.
Каузально-аналитический принцип. Открывшаяся, как полагали во второй
половине XIX столетия, возможность воссоздания эволюционного древа Metazoa
на основе биогенетического закона, явилась мощным стимулом для сравнительно
эмбриологических исследований. Благодаря этому был накоплен огромный факти
ческий материал, в том числе и характеризующий особенности раннего эмбриоге
неза. Эти данные заложили основу для понимания роли ядра и цитоплазмы в про
цессах индивидуального развития и в жизни клетки вообще. Именно изучение про
12
цессов гаметогенеза, оплодотворения и дробления у разных животных во многом
способствовало формированию представлений о хромосомах и ядре как носителях
наследственных свойств.
Первое описание кариокинеза было сделано немец
ким зоологом Антоном Шнейдером в 1873 году при ис
следовании дробления у некоторых плоских червей. В
1874 году Отто Бючли описал веретено деления дробя
щихся яиц круглых червей и моллюсков. В 1882 году
вышел в свет классический труд Вальтера Флемминга
(1843-1905), в котором дается близкое нашим современ
ным представлениям описание клеточных делений. Ис
следование бельгийского биолога Эдуарда ван-Бен . дена
(1845-1910) дробления у лошадиной аскариды позволи
ло ему сделать заключение о постоянстве числа и фор
мы хромосом. В 1875 году Оскар Гертвиг (1849-1922)
(рис. 7) установил, что сущность оплодотворения состо
ит в слиянии клеточных ядер сперматозоида и ооцита.
Рис. 7. Оскар Гертвиг
Именно в эти годы была открыта, редукция числа хро (1849-1922).
мосом при гаметогенезе и восстановление диплоидности
при оплодотворении. Все более убедительным становилось представление о ядре как
носителе наследственных свойств (Гертвиг, 1884). К концу столетия стало очевид
ным, что «удивительная формативная энергия зародыша не поступает в него извне,
но является врожденным свойством яйца, унаследованным от родителей» (Эдмунд
Вильсон, 1856-1939).
Поскольку начинающий свое развитие организм представлен одной клеткой,
естественны попытки эмбриологов конца XIX столетия выяснить, какую роль в про
цессах индивидуального развития играют основные элементы клетки — цитоплазма
и ядро. Среди исследователей, пытавшихся при построении теории развития опе
реться на процессы, происходящие в самом зародыше, заметное место занимает
Вильгельм Гис (1831-1904). Гис был активным противником представлений Геккеля
о значении истории вида для эмбриогенеза. Он считал, что эволюционная теория
не только ничего не дает для понимания проблемы развития зародыша, но просто
запутывает ее. Гис сформулировал принцип органообразующих областей зародыша,
каждая из которых связана с развитием определенных органов индивидуума. Он
отвергал преформистские идеи прелокализации структур или специфического стро
ительного материала, но тем не менее полагал, что цитоплазма, яйца имеет некую
пространственную организацию. Представление Гиса о зиготе как о специализи
рованной клетке с особым распределением материальных субстанций, важных для
детерминации судьбы зачатков зародыша, легли в основу последующих исследова
ний, которые действительно выявили в яйце особые цитоплазматические факторы
формообразования (подробнее см. гл. 3).
Важную роль в становлении эмбриологии как науки сыграла, теория зародыш,е-
вой плазмы Августа. Вейсмана (1834-1914) (рис. 8 ). Эта теория была., по существу,
первой научной попыткой объединить явления индивидуального развития и наслед
ственности. Согласно этой теории (1883), хромосомы содержат особую плазму, или
идиоплазму (от греч. i6io c— особый), которая представляет собой совокупность на
следственных факторов. Эти факторы, или ядерные детерминанты дискретны. Они
13
контролируют выработку разных веществ, определя
ющих свойства цитоплазмы. При дроблении яйца и
расхождении хромосом ядерные детерминанты рас
пределяются неравномерно между дочерними клетка
ми. Поскольку их воспроизведение, по Вейсману, не
является обязательным, клетки дробящегося зароды
ша получают разные детерминанты, вследствие чего
происходит их дифференциация (рис. 9). Идея о кле
точной дифференциации как следствии неравномер
ного распределения ядерных детерминант диктовала
необходимость раннего обособления линии половых
клеток («зародышевый путь»), которые для поддер
жания преемственности поколений должны сохранять
полный набор детерминант данного вида животного.
fu c . 8. Август ьеисман
(1834-1914).
Из теории Вейсмана вытекали два важных следствия.
Фотография любезно предо Одно из них состояло в признании принципиальной
ставлена проф. К. Зандером. невозможности наследования признаков, приобретен
ных соматическими клетками, другое — в утвержде
нии, что зародыш животного уже на ранних стадиях своего развития представляет
собой мозаику клеток с различными наследственными факторами. Как известно в
настоящее время, централь
ный постулат теории Вей
Линия
смана о неравнонаследствен
половых ных делениях не соответству
клеток ет действительности Вме
сте с тем идея о генети
ческом «неравенстве» диф
ференцирующихся клеток са
ма по себе оказалась плодо
творной и привела в итоге
к открытию функциональной
Линия регуляции активности генов
соматических
клеток как предпосылки детермина
ции и дифференциации кле
ток. Следует заметить, что
А.
титезы своей теории допус
кал и принципиально иную
Рис. 9. Схема, иллюстрирующая идею А. Вейсмана о
неравнонаследственном делении как основе процессов возможность, а именно, что
дифференциации: в линии половых клеток сохраняются все эмбриональная дифференци
наследственные факторы, в линиях соматических клеток ация может быть обусловле
происходит их дифференциальное распределение. на межклеточными взаимо
действиями, что впоследствии привело к открытию явления эмбриональной ин
дукции.
Наряду с теоретической разработкой проблемы факторов индивидуального раз
вития 1880-е годы ознаменовались возникновением новой отрасли — эксперимен
тальной эмбриологии. Основоположником этого направления по праву считается
14
Вильгельм Ру (1850-1924) (рис. 10) Ру дал концеп
туальное обоснование необходимости создания меха
ники развития как науки о движущих силах ин
дивидуального развития, основанной на каузалыю-
аналитическом подходе к исследованию онтогенеза.
Предметом каузально-аналитического направления, с о
средоточенного на изучении «непосредственных» при
чин развития, стало осмысление роли в процессах диф
ференциации физических и химических факторов, яд
ра и цитоплазмы, взаимодействий между клетками и
зачатками зародыша. Для этого направления характер
но стремление разложит! сложные процессы развития
на элементарные события и выяснить причинную связь
между ними. В таких исследованиях широко использу
ется воздействие на зародыш — общее или локальное-- рис ю Вильгельм Ру
различными химическими и физическими факторами с (1850-1924).
целью усилить или подавить какие-то события и таким образом установить их зна
чение в эмбриогенезе. Экспериментальная эмбриология, исповедующая каузально
аналитический принцип j широко использует разного рода преднамеренные наруше
ния естественных святей между' клерками и зачатками органов методами микрохи
рургии. В частности, применяются всевозможные трансплантации, или пересадки
за .атков в несвойственные им, или эктопические области тела. Различают гомо- и
гетеротрансплантации в зависимости от того, пересаживается зачаток реципиенту
того же вида, что и донор, или же реципиенту другого вида. При прослеживании
с у д ь б ы изолированного зачатка часто используют методы эксплантации in vitro.
Удаление, или экстирпация зачатка применяется в тех случаях, когда исследуется
значение этого зачатка для нормального морфогенеза.
Для понимания роли межклеточных взаимодействий широко используется дис
социация зародыша или его органов на клетки и, наоборот, агрегация клеток разных
типов в единую систему. Наряду с экстирпацией применяется локальное уничтоже
ние клеток путем облучения рентгеновскими, ультрафиолетовыми или лазерными
лучами, а также специфическое «выключение» функций с помощью разного ро
да ингибиторов. На современном этапе развития экспериментальная эмбриология
сохраняет свою принципиальную установку на раскрытие причинно-следственных
отношений между' различными событиями, наблюдаемыми в индивидуальном раз
витии. В ее арсенале появились не только модификации старых аналитических при
емов с более высокой степенью разрешения, но и методики, позволяющие экспери
ментатору вмешиваться непосредственно в транскрипционную активность генома,
контролировать и регулировать ее.
Исследования изменений потенций клеток в раннем развитии, открывшие путь
к пониманию механизма клеточной дифференциации, на долгое время стали одной
из центральных задач эмбриологии. Представление о мозаичном характере дробле
ния, которое предполагалось Гисом и постулировалось теорией Вейсмана, вытека
ло также из опытов Вильгельма Ру. Ру установил, что плоскость первого деления
дробления у лягушки обычно соответствует медиальной плоскости, которая делит
зародыш на две симметричные - левую и правую - части. Прижигая один из двух
бластомеров раскаленной иглой, Ру обнаружил, что из неповрежденного бластоме
15
ра, сохранявшего контакт с убитым, развивалась половинная нейрула. Из этих опы
тов он сделал вывод, что зародыш лягушки представляет собой мозаику способных
к автономной дифференциации частей, поскольку уже на стадии двух бластомеров
каждая клетка снабжена специфическими неидентичными детерминантами.
Уверенность в правильности или, по крайней ме
ре, в универсальности мозаичной теории Вейсмана — Ру
была поколеблена экспериментами Ганса Дриша (1867
1941) (рис. 11), который изолировал бластомеры дро
бящегося яйца морского ежа или, сдавливая дробяще
еся яйцо, добивался смещения бластомеров в несвой
ственное им положение. Дриш показал, что изолирован
ные бластомеры способны к формированию нормаль
ных животных. После изоляции бластомеров на ста
дии двух или четырех клеток формировались личин
ки, которые отличались от нормальных животных лишь
меньшими размерами. Способность к эмбриональной
регуляции, т. е. к восстановлению нормального хода раз
вития, была обнаружена и в опытах по изменению по
Рис. 11. Ганс Дриш ложения бластомеров дробящегося зародыша. Из экс
(1867-1941). периментов Дриша следовало, что развитие зародыша
Фотография любезно морского ежа, по крайней мере, на стадии раннего дроб
предоставлена
проф. К. Зандером.
ления, не носит мозаичного характера, что первые де
ления дробления равнонаследственны, а образующиеся
бластомеры имеют одинаковые потенции, т. е. эквипотенциальны. Проспективная
потенция части организма оказалась более широкой, чем ее реальная судьба, кото
рая находится в зависимости от положения клетки или зачатка в целостной системе
и, возможно, обусловлена какими-то взаимодействиями с окружающими клетками
или зачатками. Эксперименты Дриша поставили сложные вопросы перед эмбрио
логией, показав, что не все проблемы развития решаются в рамках однозначного
детерминизма (Белоусов, 1987). Данные о том, что бластомеры яйца могут быть
одновременно и частью целого и целым привели Дриша к витализму, к призна
нию некоей идеальной силы — энтелехии, которая является носителем идеи целого
и предопределяет целостность развивающегося организма независимо от того, раз
вивается он из яйца или из его части. Историческое значение экспериментов Дриша
несомненно. Они открыли принципиально новое явление и сыграли существенную
роль в становлении современной биологии развития. Вместе с тем нельзя и абсолю
тизировать регулятивность, считая ее имманентным свойством зародыша. У некото
рых животных способность к регуляции проявляется на ранних стадиях развития,
но затем исчезает; у других она отсутствует изначально, у третьих может появиться
на относительно поздних стадиях онтогенеза.
Самые крупные достижения каузально-аналитической эмбриологии в первой по
ловине X X столетия связаны с открытием явления эмбриональной индукции. Ганс
Шпеман (1869-1941) (рис. 12), его ученики и последователи показали, что диффе
ренциация тканей и зачатков многих органов зародышей амфибий и других позво
ночных животных имеет зависимый характер и возможна только при взаимодей
ствии этих зачатков. В процессе индукции способная к восприятию индуцирующего
сигнала компетентная ткань детерминируется под действием этого сигнала в стро
16
го определенном направлении. Развитие предстало в
виде последовательного ряда индуктивных взаимодей
ствий, в цепи которых завершение одного индуктивного
события открывает возможности для реализации после
дующего. В результате этих исследований стало ясно,
что представление о мозаичной автономной дифферен
циации как единственном или, по крайней мере, глав
ном способе определения судьбы частей развивающего
ся зародыша не соответствует действительности.
Открытие взаимодействующих систем как факто
ра дифференциации поставило вопрос о природе сиг
налов, с помощью которых осуществляется это взаи
модействие, а также о механизмах, генерирующих эти
сигналы в нужное время и в нужном месте. Реальный
Прогресс В ЭТОЙ Области намеТИЛСЯ ЛИШЬ ВО ВТОРОЙ ПО- рш: 12. Ганс Шпеман
ловине XX столетия, когда благодаря молекулярной ге- (1869-1941).
нетике было доказано, что управление всеми жизненными проявлениями клетки,
ее метаболизмом и спецификацией ее функциональных белков связано с генами,
которые ранее рассматривались лишь как факторы наследственности. Стало оче
видно, что решение проблемы межклеточных взаимодействий в раннем эмбриогене
зе лежит в плоскости раскрытия механизмов, с помощью которых осуществляется
пространственно-временная регуляция активности генов
В тридцатые годы X X столетия выдающийся эм
бриолог и генетик Томас Морган (1866-1945) (рис. 13)
предложил концепцию, согласно которой в основе диф
ференциации зародыша лежит последовательное вклю
чение цепи генов: активность более ранних генов пред
определяет активность последующих. В конечном сче
те последовательное включение все новых и новых ге
нов приводит к возникновению разнообразных призна
ков. Эта идея долгое время не воспринималась серьез
но экспериментальной эмбриологией, как слишком аб
страктная и далекая от реальных событий, происходя
щих в период эмбрионального развития. Открытие в се
редине X X столетия ДНК, се роли в хранении и пере
даче наследственной информации и, что особенно важ
но, в управлении биологической активностью клетки в j 3 Томас Морган
корне изменило ситуацию. Хотя у некоторых животных (1866-1945)
в раннем онтогенезе дифференциация и может быть связана с необратимыми изме
нениями генома, в настоящее время общепризнанным является утверждение, что
генеральный путь дифференциации зародыша обеспечивается дифференциальной
экспрессией генов.
В предлагаемой книге мы постараемся показать, что морфологическое разнооб
разие животных формируется в процессе индивидуального развития. Мы постара
емся также показать, что развитие животных во всех его проявлениях контролиру
ется генетическими программами. Но если мы докажем, что морфология животного
возникает в процессе развития, а процесс развития контролируется генетическими
17
программами, то мы придем к неизбежному и существенному заключению, что эво
люция морфологии животных происходит на основе эволюгщи этих генетических
программ.
Литература
М узрукова Е. Б. Развитие цитоэмбриологических исследований в конце XIX - нача
ле X X столетий / / Т. X. Морган и генетика: научная программа школы Т. X. Моргана в
контексте развития биологии XX столетия. М., 2002. С. 15-61.
М узрукова Е. Б. Т. X. Морган и эмбриология / / Там же. С. 62-85.
Некрасов А . Д ., А рт ем ов Н. М. Александр Онуфриевич Ковалевский / / А. О. Ковалев
ский. Избранные работы. М., 1951. С. 536-621.
Райков Б. Е. О жизни и научной деятельности К. М. Бэра / / К. М. Бэр. История разви
тия животных. В 2 т. Т. 1. М., 1950. С. 383-438.
Саксен Л., Тойвонен С. Исторические основы проблемы индукции / / Первичная эм
бриональная индукция. М., 1963. С. 17-26.
Филипченко Ю. А. Предмет и методы экспериментальной морфологии / / Эксперимен
тальная зоология. М., 1932. С. 1-10.
Часть I
ХАРАКТЕРИСТИКА ОСНОВНЫХ ЭТАПОВ
ИНДИВИДУАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ
Глава 1. ГАМЕТОГЕНЕЗ
19
В ходе оогенеза (от греч. coov— яйцо; y e v e o k ; — творение, происхождение), т. е.
при формировании женских половых клеток, их специализация определяется в
первую очередь необходимостью создания запасов веществ, обеспечивающих энер
гетические потребности эмбриона до начала периода активного питания, которое
становится возможным только по достижении относительно высокого уровня раз
вития зародыша. У многих животных дифференциация женских половых клеток
сопряжена с формированием анизотропии яйцевой клетки, в частности с образова
нием ее первичной полярности. Неоднородность разных областей яйца обусловле
на неравномерным распределением разного рода органелл, белков, иРНК и других
соединений. Некоторые из этих веществ играют роль цитоплазматических детерми
нантов, т. е. факторов, предопределяющих направление дифференциации клеток, в
которые они попадают при дроблении. В процессе оогенеза формируется сложно ор
ганизованный цитоскелет, который необходим для дробления и перераспределения
компонентов яйцевой клетки после ее активации.
Дифференциация мужских гамет, или сперматогенез (от греч. акЕр[ао( — семя)
характеризуется иной стратегией: она направлена на максимальную компактизацию
ядерных структур, развитие органелл движения или иных органелл, обеспечиваю
щих встречу и соединение спсрмия с яйцеклеткой.
У мужских и женских половых клеток глубокую специализацию претерпевает
и поверхностный аппарат, который обеспечивает высокую точность распознавания
родственных гамет противоположного пола. Специализированные плазматические
мембраны гамет при определенных условиях создают возможность видоспецифиче
ского слияния гамет.
Одной из центральных проблем эволюционной биологии развития является во
прос о механизмах спецификации половых клеток. Организация процесса гаметоге-
неза обнаруживает поразительное разнообразие форм. По необходимости в учебнике
могут быть изложены данные лишь по некоторым наиболее полно изученным объ
ектам, но у читателя не должно создаться впечатления, что эти данные можно без
оговорок экстраполировать на другие виды. Тем не менее, в процессе гаметогене-
за можно выделить несколько последовательных этапов, каждый из которых имеет
свои морфофункциональные характеристики (рис. 1- 1 ).
Клетки половой линии обычно обособляются на ранних этапах эмбрионального
развития. Клетки, потомки которых дают начало исключительно гаметам, называ
ются примордиальными (от лат. primordium — начало, зарождение), или первичны
ми половыми клетками (ППК). На более ранних стадиях иногда обнаруживаются
презумптивные примордиальные половые клетки, в результате асимметричных де
лений которых образуются клетки половой и соматической линий.
Известны два способа спецификации клеток половой линии: эпигенетический,
при котором свойства половой клетки индуцируются внешними по отношению к
клетке факторами, и преформационный, обусловленный материнскими детерминан
тами, унаследованными клеткой вместе с цитоплазмой ооцита (рис. 1- 2 ).
Как свидетельствует распространение этих способов спецификации линии по
ловых клеток, эпигенетический путь является эволюционно первичным (Extavour,
Akam, 2003) (рис. 1-3).
ППК представляют собой диплоидные клетки, способные к митотическим деле
ниям. У многих животных они способны к миграции и благодаря этому заселяют
зачатки гонад, которые закладываются и формируются независимо, а иногда и на
20
Набор Количество
Период Половые продукты
хромосом ДНК
Период
размножения
Вне гонад Первичные 2N 2С/4С
половые клетки
Период
созревания
Первичные ооциты
Первый мейотический цикл и сперматоциты 2N 4С
Вторичные ооциты
Второй мейотический цикл и сперматоциты N 2С
Период
формировании
Спермиогенез Сперматиды N С
Яйцеклетки
Гаметы и сперматозоиды N С
21
—И Porifera
■ Ctenophora
—Ш Cnidaria
—И Acoelomorpha
—□ Priapulida
—Ш Kynorhyncha
—О Nematoda
—ЦБ Onychophora
—■ Tardigrada
—Ш Arpthropoa
—О Rotifera
—Ш Plathelminthes
—■ Gastrotricha
—■ Phoronida
—■ Brachiopoda
—■ Ectoprocta
—□ Entoprocta
■ Nemertea
—Щ] Annelida
—■ Pogonophora
—■ Echiura
—■ Sipunculida
НЮ Mollusca
-D Gnathostomata
—О Chaetognatha
—■ Echinodermata
—■ Hemichordata
—О Urochordata
—■ Cephalochordata
■ Agnatha
—Щ ] Chondrichthyes
—OH Actinopteiygii
—■ Dipnoi
—О Anura “ Iл
CaudataJ Amphlbla
Testudines “ I
T .j - Reptilia
LepidosaunaJ
-О Archosauria
Monotremata"
Metatheria Mammalia
Eutheria
Puc. 1-3. Способы спецификации половых клеток у Metazoa (по: Extavour, Akam, 2003).
■ — эпигенетическая спецификация; О — преформационная спецификация; Ь — имеются оба
способа спецификации; □ — не исследовано.
22
созревания, называют цитами: в мужских и женских гонадах различают соответ
ственно сперматоциты и ооциты. До завершения первого деления созревания поло
вые клетки называют первичными сперматоцитами ( ооцитами), или сперматоци-
тами (ооцитами) первого порядка. После первого деления созревания это уже вто
ричные сперматоциты ( ооциты) или сперматоциты ( ооциты) второго порядка.
После завершения деления созревания вторичный ооцит становится зрелой яйцевой
клеткой. Вторичный сперматоцит в результате второго деления созревания образует
гаплоидную сперматиду. В процессе сперматогенеза различают особый период фор
мирования, в течение которого сперматида преобразуется в зрелый сперматозоид.
23
Рис. 1-4•Диминуция хроматина в раннем дроблении лошадиной аскариды
(по: Boveri, 1899).
А — начало второго деления дробления; Б — фрагментация хромосом в бласто
мере АВ в ходе второго деления; В - на стадии 4 бластомеров фрагменты хромосом
наблюдаются в бластомерах А и В; Г — начало третьего деления: фрагментация
хромосом в бластомере EMSt. АВ, А, В, EMSt — бластомеры соматической линии;
P i , Р 2 — бластомеры половой линии; е — фрагменты хромосом.
24
Ро Р0
г- L - , I— I— I
AB P, AB P.
I I
I-------Л I------- I
EMS P, EMS P,
,2 I I2
MS E С P, MS E "MS" "E"
— 1 I— *--- 1 I Ц I— ^---I
END-1:GFP D P, END-1:GFP END-1 :GFP
Z2 Z3
Рис. 1-6.Образование клеток половой линии у нематоды
Caenorhabditis elegans (по: Seydoux, Strome, 1999).
А — клетки половой линии (темные) отделяются от соматических (светлые) в
период раннего дробления (2-7). ППК Z2 и Z3 возникают у стоклеточного зародыша
(8) и дают начало всем половым клеткам личинки (9, 10) и взрослого животного
(1). Ядра клеток половой линии всегда содержат белок MES. Транскрипционная
инертность ядер клеток половой линии поддерживается белком PIE-1. АВ, EMS,
С, D — соматические бластомеры; Р 0 -Р 4 ~ - клетки половой линии. Б — мутация
гена p iel (-) нарушает нормальное развитие клеток половой линии. В отсутствии
белка PIE-1 в клетках половой линии начинается преждевременная транскрипция,
и бластомер Р 2 дает клетки соматической природы.
25
мутации материнского гена pie-1 у зародышей вместо бластомера половой ишии Рз
после третьего деления дробления образуется соматическая клетка (рис. 1- 6 ).
Нечто подобное описано у ракообразных. Например, у некоторых копепод в пе
риод дробления при митотических делениях происходит асимметричное распреде
ление особых телец, эктосом, которые маркируют клетки половой линии вплоть до
образования первичных половых клеток (рис. 1-7).
26
в
27
ной формы В, имеющей мутации multiple wing hair и ebony (mwh, e). В этом случае
закладка половых клеток под влиянием полярной плазмы происходила не только
в задней области, как обычно, но и в передней области зародыша. Для того чтобы
эти половые клетки попали в гонады и превратились в зрелые гаметы, их пересажи
вали из передней в заднюю область зародышей генетической формы С (например,
yellow или white). Часть прооперированных зародышей завершила развитие и дала
A (WT) В (mwh, е)
С (у, w)
I5
28
фертильных животных, гаметы которых имели не только ожидаемый генотип С, но
и генотип В. Таким образом, эти опыты отчетливо показали, что полярная плазма
яйца дрозофилы формы А инициировала образование половых клеток на переднем
конце яйца дрозофилы формы В (рис. 1-10).
Участие полярной плазмы в детерминации половых клеток дрозофилы подтвер
ждается и данными анализа ряда мутаций, при которых образуется стерильное
потомство. Так, у гомозиготных мутантных самок grandchildless, скрещенных с нор
мальными самцами, потомство стерильное. У этих мутантов ядра дробления не ми
грируют в заднюю область яйца, в результате чего формирование половых клеток
становится невозможным. При мутации agametic наблюдается быстрый распад гра
нул полярной плазмы и резкое уменьшение числа половых клеток.
Состав полярной плазмы ооцита дрозофилы довольно сложен. Он отличается
большим количеством митохондрий, фибрилл и гранул. Важными составными эле
ментами полярной плазмы служат белки GCL (Germ cell-less), Oskar, Nanos и Vasa,
митохондриальная РНК. Непосредственное участие в спецификации половых кле
ток дрозофилы принимает белок GCL. Соответствующая иРНК синтезируется под
контролем гена gel в период гаметогенеза в цистоцитах (см. с. 30), транспортиру
ется в ооцит и концентрируется в его задней области. Транспортировка иРНК 6 ,
nPHKosfcar, а также белка Staufen в заднюю область ооцита блокируется при мута
ции генов cappuccino и spire. Синтез белка GCL происходит вскоре после оплодотво
рения. В спецификации половых клеток каким-то образом участвует и белок Oskar.
Ро всяком случае, эктопическая инъекция nPHKosfcar вызывает появление половых
клеток в несвойственных для них местах.
Интригующие данные были получены японскими исследователями С. Кобаяши и
М. Окада (1989), которые установили, что компонентом полярной плазмы дрозофи
лы является также рибосомальная РНК митохондрий (мтрРНК), которая входит
в состав полярных гранул. Если зародышам после ультрафиолетового облучения
в дозах, подавляющих гаметогенез, инъецировать мтрРНК, то формирование по
ловых клеток восстанавливается. В составе полярных гранул дрозофилы и других
животных сравнительно недавно обнаружены модуляторы трансляции — микроРНК
(miRNA; Ambros, 2001). Таким образом, возможно, полярные гранулы участвуют в
образовании микроРНК или же способствуют их объединению с иРНК, трансляция
которых контролируется.
Характерной морфологической особенностью первичных половых клеток многих
животных является наличие так называемых перинуклеарных телец. Они описаны
у кишечнополостных, нематод, полихет, щетинкочелюстных, асцидий, ланцетника,
практически у всех позвоночных. Функции этих образований в настоящее время не
известны. В большинстве случаев они, скорее, могут служить лишь маркерами кле
ток половой линии. В отношении некоторых животных имеются лишь косвенные
свидетельства возможной роли цитоплазматических факторов в спецификации кле
ток половой линии. Например, у бесхвостых амфибий ультрафиолетовое облучение
вегетативной области яйца, где сосредоточены половые гранулы (рис. 1- 11 ), ведет к
развитию стерильного животного.
Раннее обособление клеток половой линии не является универсальным правилом.
Часто линия половых клеток возникает на сравнительно поздних стадиях дробления
или даже в период гаструляции. Первичные половые клетки на стадии дробления
были выявлены среди позвоночных лишь у бесхвостых амфибий, у которых они об-
29
Рис. 1-11. Половая цитоплазма в бластомерах лягушки
Rana temporaria (по: Бунур, 1968).
Перемещение половой цитоплазмы с периферии клетки (А) в область
ядра (Б): 1 - половая цитоплазма; 2 — ядро; 3 — митохондрии.
30
5
Рис. 1-12. Схема диапедеза первичных половых клеток в кро
веносные сосуды куриного эмбриона (по: Дьюкар, 1978).
1-4 -первичные половые клетки; 5 — клетки кров!.; 6 -
э: .догелиальная клетка стенки кровеносного сосуда. Стрелка
ми показано направление движения ППК.
1.2. Гонии
ППК, заселившие гонады, называют гониями. У многих животных выявлены
особые стволовые половые клетки (СПК), которые поддерживают непрерывность
гаметогенеза в течение долгого периода времени, а то и на протяжении всей жизни
животных. Различают два типа СПК — стереотипный и популяцгюнный. Стволо
вые клетки первого типа характеризуются асимметричным делением, в результате
которого одна из дочерних клеток остается стволовой, а другая вступает на путь
дифференциации. Например, у дрозофилы стволовая клетке, которая находится в
терминальной области гермария яйцевой трубки (см. рис. 1-17), делится и образует
две клетки: дочернюю СПК, сохраняющую контакт с апикальными соматическими
клетками терминальной нити, и цистобласт — клетку, последующие деления кото
рой дают ооцит и связанные с ним цистоциты. При делении СПК популяционного
типа образуются две равнозначные клетки, судьба которых зависит от место но чо-
жения клетки в яйцевой трубке. Так, у С. elegans клетки, которые оказываются
близ дистальной концевой клетки трубчатой гонады, сохраняют способность к ми
тотическим делениям. Эта способность поддерживается сигналами, исходящими из
концевой клетки. По мере удаления гоний от источника сигнала, поддерживающего
митотическую активность, клетки переходят к дифференциации и вступают в фазу
мейоза. Митогенный сигнал концевой клетки опосредуется геном glp-1 (рис. 1-13).
Мутация этого гена ведет к резкому снижению уровня пролиферации гоний. Так, в
семенной трубке С. elegans при рецессивной мутации glp-1 вместо полутора тысяч
образуется всего лишь десяток спермиев.
У зародыша мыши гонии, заселившие зачатки яичника, продолжают размно
жаться, существенно увеличивая число женских половых клеток. Наибольшее число
оогоний наблюдается у 13,5-суточных зародышей, когда гонии прекращают мито
тические деления и вступают в мейоз, становясь ооцитами. Идентичные процессы
происходят и в яичнике плода человека, где максимальное число оогоний (около
7-10е) приходится на 20-ю неделю беременности. Следует заметить, что у родив
шихся особей женского пола млекопитающих число ооцитов значительно меньше.
Ко времени рождения у мышей, крыс и человека более 2/3 пула потенциальных
женских половых клеток уничтожается путем апоптоза. У женщин при рождении
имеется около одного миллиона ооцитов, при достижении половой зрелости их оста-
31
I _ „ .Промежуточная . _ .
р—Зона м е и о з о в — 30н а ------ — Зона митозов—*,
клетка
В се клетки в мейозе
ется меньше 4-105, а к 50 годам менее 1-103, т. е. к этому моменту погибает 99,9%
ооцитов, имевшихся в яичниках при рождении.
1.3. Мейоз
32
вследствие начавшейся конденсации хроматина появляются тонкие нити хромосом,
состоящих из двух хроматид Затем следует зиготени, стадия, на которой с по
мощью особого синаптонемного комплекса осуществляется попарное соединение
гомологичных хромосом, или их конъюгация. Попарно соединенные хромосомы —
биваленты отчетливо видны на стадии толстых нитей, или пахитены. На, стадии
зиготены — пахитены начинается кроссинговер (от англ. crossing-over — перекрест).
Разрушение синаптонемного комплекса и расхождение гомологов происходит на ста
дии двойных нитей, или диплотены. Гомологичные хромосомы в это время связаны
между' собой лишь в области хиазм. Завершается профаза мейоза конденсацией
бивалентов, состоящих из четырех хроматид. Сестринские хроматиды связаны цен-
тромерными областями, а хроматиды гомологов - - хиазмами. Эту стадию называют
диакинезом.
Процесс мейоза находится под строгим генетическим контролем. Так, например,
образование синаптонемного комплекса у мыши связано с экспрессией гетта Sycpl.
Кодируемый им белок необходим для построения центрального элемента комплекса
и сперм атоцитов, и ооцитов. Экспрессия одного и того же гена Sycpl у мужских и
женских особей обеспечивается благодаря существованию у этого гена специфиче
ских «мужского» и «женского» промоторов.
У млекопитающих первое мейотическое деление ооцитов обычно имеет весьма
продолжительную профазу, так как они в своем развитии останавливаются на ста
дии диакинеза. На этой стадии первичные ооциты окружаются специализированны
ми соматическими клетками и образуют первичные фолликулы. Стадия диакинеза
может продолжаться годы (у человека до 50 лет). После образования полости фол
ликул называют вторичным. Полость заполняется фолликулярной жидкостью, ее
объем достигает максимума на стадии граафова пузырька — третичного фоллику
ла, который выступает над поверхностью яичника.
33
Вслед за профазой следуют мета-, ана- и телофаза первого мейотического деле
ния. После завершения первого мейотического деления образуются вторичные спер
матоциты и ооциты. Ранее полагали, что именно первое деление созревания является
редукционным вследствие расхождения гомологичных хромосом, тогда как второе
деление, следующее за первым без дополнительного синтеза ДНК, —эквационное, в
ходе которого расходятся хроматиды (рис. 1-14). В действительности, в ходе и пер
вого и второго мейотического деления в одних бивалентах расходятся гомологичные
хромосомы (т. е. происходит редукционное деление), а в других — хроматиды (эква
ционное деление).
В ходе мейоза осуществляется не только редукция числа хромосом. Благодаря
случайному распределению гомологичных хромосом по клеткам возможное число
генетических комбинаций при гаметогенезе равно 2П, где п — число пар хромосом.
Так, у человека каждая особь может дать теоретически около 8,5 миллионов (223)
генетически различающихся типов гамет. Учитывая же кроссинговер, можно ска
зать, что это разнообразие практически бесконечно.
1.4. Оогенез
34
Рис. 1-15. Схема строения желточной оболочки яйца полихеты
Nereis virens.
1 — микроворсинка; 2 —воротничок; 3 — наружный слой; 4 — промежу
точный слой; 5 — срез через канал желточной оболочки; 6 — внутренний
слой.
35
1.4 -2. П ут и формирования энергетических запасов
( РАЗВИТИЕ )
- активное питание
Прямые Косвенные
- внутриутробное
энергетически сборка органелл,
развитие
богатые синтез энергоемких
соединения: соединений, в т.н. - паразитизм
- желток - митохондрии
- липиды - рибосомы
- гликоген - иРНК
- АТФ и др. - тРНК
- полимеразы НК
36
Создание необходимого запаса энергоемких структур и веществ в яйцевой клетке
сопряжспо с существенным увеличением размеров яйца. Если принять за единицу
диаметр средней соматической клетки взрослого животного (15 мкм), то диаметр
яйца морского ежа (150 мкм) превосходит его на порядок, диаметр яйца лягушки
(примерно 1500 мкм) в 100 раз, а яиц рептилий и птиц более чем в 1000 раз. У птиц
95% массы яйца составляет так называемый желток.
Объем запасов энергетических и пластических веществ в яйце зависит от слож
ной комбинации многих условий, которые у данного вида иногда могут действовать в
противоположных направлениях. Среди факторов, влияющих на объем запасаемых
веществ, можно назвать время достижения стадии, когда становится возможным
активное питание. Чем раньше наступает активное питание, тем меньше требуется
запасов в яйце. Другим фактором является высота организации животного. При
прочих равных условиях более сложная структурная организация животного тре
бует большего времени для своего развития, и, соответственно, больших запасов
энергии и пластических веществ. Существенное значение имеет характер трофиче
ских связей зародыша с окружающей его средой. При паразитическом развитии,
когда зародыш питается за счет хозяина, запасы в яйце минимальны. Аналогичная
картина наблюдается и при внутриутробном развитии.
37
ПОЗВОНОЧНЫЕ НАСЕКОМЫЕ АННЕЛИДЫ
Синтез желтка
основного по своей массе белка, необходимого для оогенеза, что, безусловно, говорит
о высоком адаптивном значении такой организации вителлогенеза.
Разные типы гонад и оогенеза служат одной из причин большого многообра
зия яйцевых клеток животных. Бросается в глаза, в частности, разнообразие форм
яиц, связанное с пространственной локализацией желточных и иных трофических
включений. Как правило, животные имеют эндолецитальные яйца, у которых жел
ток сосредоточен внутри ооцита. По характеру локализации желточных включений
различают изолецитальные (гомолецитальные), телолецитальные и центролециталь-
ные яйца. Изолециталъными называют яйца с равномерным распределением желт
ка; телолецитальные характеризуются концентрацией желтка у одного из полюсов
яйца; к центролециталъным относят такие яйца, у которых плотные желточные
включения сосредоточены в центральной области, тогда как цитоплазма, свободная
от включений, располагается преимущественно на периферии яйца. По количеству
желтка различают алециталъные (без желтка), олиголециталъные (с малым содер
жанием желтка), мезолециталъные (с умеренным содержанием желтка) и полиле-
циталъные (с большим содержанием желтка) яйца. Иногда, если желтка в яйце
очень мало, как, например, в яйцах Eutheria, говорят об алецитальных яйцах, хотя
38
Рис. 1-18. Экзолецитальный тип развития у плос
кого червя Monocehs fusca (подкласс Neoophora) (по:
Giesa, 1966).
1 — желточный эпителий; 2 — желточные клетки;
3 — зародыш; 4 — капсула.
39
Рис. 1-19. Полигеномный тип оогенеза у гидры (по: Айзенштадт, 1984).
Поперечный разрез через женскую гонаду: 1 — эпидермис; 2 — ооциты с
питающими клетками; 3 — мезоглея; 4 — гастродерма.
Диффузный тип оогенеза встречается у низших Metazoa. Ооциты в этом случае об
ладают амебоидной подвижностью и способностью к фагоцитозу. Солитарный тип
оогенеза с автономным синтезом макромолекул в ооците имеет весьма ограниченное
распространение. Полигеномный тип оогенеза можно рассматривать как своеобраз
ное проявление принципа кооперативности. Для этого типа характерно подключение
к формированию яйцевой клетки большого числа однотипных геномов. В ходе эво
люции неоднократно и независимо возникал неполный цитокинез митотически деля
щихся гоний, в результате чего последние формировали синцитиальную структуру.
Один из элементов синцития становился ооцитом, все остальные вспомогательны
ми клетками. Полигеномный тип оогенеза с синцитиальными клеточными клонами,
формирующимися из клеток половой линии, описан у некоторых книдарий (рис. 1-
19), гребневиков (рис. 1- 20), аннелид, насекомых, у отдельных видов позвоночных.
Неполный цитокинез, характерный для полигеномного типа оогенеза, в процессе
эволюции иногда трансформировался в эндомитоз, в результате которого возникали
многоядерные ооциты. Такие полигеномные ооциты описаны у хвостатой лягушки
Ascaphus truei (гладконог). У сумчатой лягушки Flectonotus pygmaeus ооциты на
считывают до 3000 ядер, из которых лишь одно становится женским пронуклеусом.
Возможно образование многоядерности и в результате слияния многих ооцитов, что
наблюдается, например, у аннелиды Dinophilus.
У ктенофор гонии проходят несколько циклов митотических делений с непол
ным цитокинезом, образуя комплекс, который состоит приблизительно из ста вза
имосвязанных клеток, одна из которых становится ооцитом (рис. 1-20). Как пола
гают, наиболее близко лежащие к ооциту питающие клетки синтезируют желток и
формируют центральную эндоплазму ооцита, тогда как находящиеся на периферии
40
комплекса клетки участвуют в формировании эктоплазмы — поверхностного слоя
ооцита.
Полигеномный тип оогенеза у дрозофилы. У многих насекомых в составе
аналогичного синцития или цисты различают ооцит и вспомогательные клетки
цистоциты. В литературе сохранилось историческое название этих вспомогатель
ных клеток — «.питающие» клетки, или «трофоциты» (от греч. трофос; — кормя
щий, питающий), которое отражает устаревшее представление о главной функции
41
этих клеток. Взаимоотношения между цистоцитами и ооцитом у разных видов насе
комых варьируют. В политрофных трубочках ооцит и цистоциты образуют относи-
тельно компактный комплекс. Окруженная мезодермальным фолликулярным эпи
телием циста представляет собой яйцевую камеру (рис. 1 -21). В телот.рофных яйце
вых трубочках гонады «трофоциты» занимают проксимальную область, тогда как
ооцит смещается дистально, сохраняя, однако, связь со своей «питающей клеткой»,
поскольку цитоплазматические мостики трансформируются в удлиненные транс
портные каналы (рис. 1 22). Полигеномность усиливается благодаря многократной
42
полнплоидизации цистоцитов. Благодаря полиплоидизации в цисте дрозофилы, со
стоящей из диплоидного ооцита и пятнадцати полиплоидных цистоцитов, насчиты
вается около 7000 диплоидных эквивалентов, работающих на один ооцит.
Основная функция цистоцитов в яичнике насекомых состоит в выработке рРНК,
иРНК и многих нежелтковых белков. Из цистоцитов в ооцит поступают много
численные митохондрии. Синтез предшественника желтка — внтеллогенина, однако,
происходит за пределами яичника — в жировом теле, откуда транспортируется по
гемолимфе и поглощается ооцитом путем пиноцитоза. У дрозофилы при мутации
гена fs29 нарушается функция рецепции внтеллогенина. Такие мутанты стерильны,
так как в их ооцитах желток не накапливается, несмотря на интенсивный синтез его
предшественника в жировом теле.
Фолликулярная клетка
/-----N
DPP .DPP
Стволовая ПК
Цистобласт
Ядро
Спектросома
43
В результате асимметричного митоза образуются дочерняя стволовая клетка и
так называемый цистобласт (см. рис. 1-21, А; 1-23). Асимметричность деления
СПК обусловлена наличием особых цитоплазматических структур — спектросом.
Спектросомы содержат мембранные пузырьки и скелетные мембранные белки — а-
и /3-спектрин, анкирин и HTS (HULITAISHAO). Во время митоза спектросома нахо
дится в контакте с тем полюсом митотического веретена, который обращен к базаль
ной клетке терминальной нити (рис. 1-23). Спектросомы, связываясь с веретеном,
определяют его ориентацию таким образом, что одна из образующихся при деле
нии клеток остается в контакту с терминальной нитью, а другая отдаляется от нее.
Вместе с тем спектросомы играют роль и в локализации некоторых регуляторных
молекул, например циклина А.
Расхождение путей развития клеток, возникших в результате деления СПК, у
дрозофилы связывают с активностью генов pumilio (рит), па,nos (nos) и bag o f mar
bles (bam). Активность гена рит необходима для поддержания линии стволовых
клеток. Связывающийся с РНК белок Pum служит фактором репрессии трансля
ции и, видимо, избирательно подавляет трансляцию некоторых РНК уже комми-
тированной стволовой клетки, препятствуя, таким образом, началу ее дифферен
циации. Переход к дифференциации коррелирует с резким снижением уровня Pum
(см. рис. 1-23). Ген nos необходим для дифференциации цистобластов. Переход от
СПК к цистобласту сопровождается существенным увеличением содержания белка
Nos. В процессе переключения СПК на путь дифференциации важную роль играет
также ген bam., мутации которого закрывают путь дифференциации клеток поло-
Синтез белка
ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ
ООЦИТА
44
вой линии. Значительные количества белка В а т характерны для цистобластов и
цистоцитов, что существенно отличает их от стволовых клеток.
Асимметричность делений СПК определяется и сигналами, исходящими из со
матических клеток гонады. Так, уничтожение лучами лазера апикальной части тер
минального филамента дрозофилы увеличивает частоту делений СПК. Как выяс
няется, участие клеток терминального филамента в регуляции делений СПК обу
словлено активностью генов piwi и fs{ 1) Yb ( Yb). В отсутствии этих генов стволовые
клетки не сохраняются. По-видимому, путь, контролируемый геном Yb, специфичен
для женских гонад, тогда как ген pivd необходим для поддержания линии СПК в
гонадах обоих полов.
Важную роль в сохранении линии СПК, вероятно,
играет и белок Dpp (гомолог ВМ Р2/4), кодируемый
геном dpp (decapentaplegic). Показано, что сигнал Dpp
вырабатывается соматическими клетками, окружаю
щими СПК. Впрочем, не исключено, что Dpp может
быть и паракринным фактором дифференцирующих
ся половых клеток или даже аутокринным фактором,
вырабатываемым самими стволовыми клетками.
Хотя цисгобласты и сохраняют способность к
митотическим делениям, последние характеризуются
неполным цитокинезом, благодаря чему между обра
зующимися клетками сохраняются цитоплазматиче
ские мостики, или кольцевые каналы. У дрозофилы
в результате четырех делений цистобласта образуется
циста из шестнадцати клеток (см. рис. 1-21, Б). При
этом две клетки цисты — проооциты имеют по четы
ре кольцевых канала, соединяющих их с соседними
клетками. Одна из этих клеток становится ооцитом,
тогда как остальные 15 оогоний превращаются в по
липлоидные цистоциты.
Необходимым условием развития ооцита дрозофи
лы является экспрессия гена Bicaudal-D (Bic-D) (рис.
1-24). Мутация Bic-D ведет к стерильности самки,
поскольку в этом случае все 16 клеток цисты раз
виваются как цистоциты. Локализация viPHKB%c~D в
будущем ооците зависит от активности гена egalitar
ian (egl), мутация которого также вызывает стериль
ность. Незадолго ДО вителлогенеза нРНКВгс~С транс- Рис- 1-25- Схема строения па-
лируется, и образующийся белок после фосфорилиро- ноисгической яйцевой грубочки
_ кузнечика lachycines.
вания приобретает свойства фактора, который обес- j _ гермарий; 2 — вител-
печнвает дифференциацию ооцита. В случае мутации лярий. Питающие клетки отсут-
гена Bic-D возникает дефектный белок Bic-D, кото- ствуют. Снаружи трубочка по-
г , , Г) крыта фолликулярным эпители-
рыи не способен к фосфорилированию. Вследствие
этого необходимый для дифференциации фактор не
образуется, и развития ооцита не происходит.
Суммарный гаплоидный эквивалент цистоцитов составляет более 14000 С.
С учетом того, что гаплоидный набор хромосом дрозофилы содержит примерно
45
250 рибосомных генов, в яйцевой камере имеется около 3,8-106 рибосомных генов,
работающих на обеспечение одной яйцевой клетки. Благодаря этому за трое суток
оогенеза в ооците запасается до 160 нг рРНК. Интересно, что количество рРНК
может быть фактором, ограничивающим скорость оогенеза у дрозофилы. Так, в
случае мутации bobbed, при которой происходит делеция разных участков кластера
рибосомных генов, продолжительность оогенеза зависит от числа оставшихся ри-
босомалъных генов: при наличии 1/3 нормального сод ерж ан т рДНК оогенез про
должается почти в три раза дольше (206 час вместо 75). Благодаря такой задержке
зрелые яйца самок bobbed содержат нормальное количество рРНК.
Кроме рРНК в цистоцитах под контролем материнских генов (гены материнского
действия) синтезируются иРНК, которые после оплодотворения яйца обеспечивают
морфогенетически значимой информацией процесс раннего эмбриогенеза. Хромо
сомы ооцита у дрозофилы инактивированы. Эта инактивация, впрочем, не обяза-
46
тельна при полигеномном осгенезе. У некоторых насекомых, например у комаров,
жуков и полужесткокрылых, геном ооцита активно участвует в создании пула раз
ных типов РНК. В ооцитах жука-плавунца Dytiscus, долгоножки Tipula (Diptera),
Chrysopa (Neuroptera) происходит амплификация генов рРНК. Амплифицирован-
ная ДНК сконцентрирована в виде небольшого тельца, которое располагается в яд
ре ооцита, но отсутствует в ядрах цистоцитов. У Dytiscus ДНК-содержащее тельце
несет около 3-106 амплифицированных генов рРНК.
Перемещение РНК и белков из цистоцитов в ооцит обеспечивается механизмами
внутриклеточного транспорта. Пслагают, что перемещению макромолекул может
способствовать электрический градиент (1 В /см ), который устанавливается в систе
ме цистоциты — ооцит. На завершающих этапах оогенеза содержимое цистоцитов
транспортируется в ооцит благодаря сократительным движениям этих клеток.
Полигеномный принцип организации оогенеза обеспечивает высокие скорости
формирования яиц. Продолжительность оогенеза у дрозофилы, где на каждый
ооцит приходится 1 ,4-104 гаплоидных геномов, составляет всего 3-5 дней. У сверчка
с его паноистическим типом оогенеза (рис. 1-25), при котором цистоциты отсут
ствуют и формирование ооцита обеспечивается всего четырьмя гаплоидными экви
валентами, оогенез продолжается более трех месяцев. Нельзя не отметить, что па-
ноистический способ оогенеза характерен для прямокрылых (Orthoptera) и стрекоз
(Odonata), т. е. для наиболее примитивных отрядов подкласса Настоящих насеко
мых.
Гипертранскрипционный тип оогенеза с участием хромосом типа лам
повых щеток. Природе известен и другой путь существенной интенсификации
метаболических процессов, необходимых для формирования яйцевых клеток. Этот
путь характерен для вторичноротых. Здесь не происходит превращения части по
ловых клеток во вспомогательные. Вителлогенин и в этом случае синтезируется
вне гонады. Однако интенсивное накопление в яйце разных форм РНК обеспечива
ется благодаря функциональному и структурному видоизменению хромосом само
го ооцита, создающему предпосылки максимальной продуктивности транскрипции.
Подобный тип организации оогенеза мы будем называть гипертранскрипционным.
Впервые такие видоизмененные хромосомы были описаны в 1882 году
В. Флеммингом в ооцитах тритона, а в 1892 году они были подробно исследованы
И. Рюккертом в ооцитах акулы. Поскольку эти хромосомы имеют большое число
боковых петель ДНК, которые на микроскопических препаратах имеют вид отрост
ков, расположенных на центральной оси, Рюккерт назвал их «ламповыми щетками»,
подразумевая их сходство с «ершиком», использовавшимся в те далекие времена для
очистки стекол керосиновых ламп.
Хромосомы типа ламповых щеток появляются в профазе мейоза. Они представ
ляют собой биваленты, т. е. спаренные в области хиазм гомологичные хромосомы
(рис. 1-26). Каждая хромосома бивалента состоит из двух дуплексов конденсиро
ванной ДНК. Каждый дуплекс ДНК образует многочисленные симметричные пет
ли, образованные идентичными последовательностями. Боковые петли деконденси-
рованной ДНК служат местом интенсивного синтеза РНК. У гомозиготных жи
вотных каждый активный локус представлен четырьмя петлями (по две на каж
дом гомологе). Локализация некоторых крупных петель и их форма может иметь
специфический для вида характер (см. рис. 1-26). Число петель и единиц тран
скрипции хромосомы не совпадает, так как одна петля может содержать более од
47
ной единицы транскрипции. Расправление (спрединг) хромосом по Миллеру сделало
возможным визуализацию транскрипции в электронном микроскопе. В результате
была обнаружена исключительно высокая плотность молекул РНК-полимеразы на
петле ДНК. В хромосомах типа ламповых щеток расстояние между последователь
но расположенными молекулами РНК-полимеразы составляет 100-200 нуклеотидов.
Такая плотная посадка полимераз предопределяет высокую продуктивность тран
скрипции. Действительно, в ооците с хромосомами типа ламповых щеток, где одна
молекула РНК-полимеразы приходится на 102 нуклеотидов ДНК, в 1 мин произво
дится 2 пг РНК. В соматических же клетках, где одна молекула РНК-полимеразы
приходится примерно ria 104 нуклеотидов нити ДНК, за такое же время синтезиру
ется всего 0,015 пг РНК.
Продукты транскрипции после сплайсинга и полиаденплирования экспортиру
ются в цитоплазму ооцита. До 80% иРНК в цитоплазме образует комплексы с бел
ками секвестрации, которые инактивируют иРНК. Эти запасаемые в ооците и акти
вируемые после оплодотворения РНП-част.щы были названы А. Спириным инфор-
мосомами (1966).
Синтез рРНК при гипертранскрипциопном оогенезе происходит в ооците или в
фолликулярных клетках. У рыб и амфибий имеет место многократная репликация
ДНК рибосомных генов, или амплификация (от англ. amplification —увеличение)
рДНК. У Xenopus в результате амплификации количество рДНК в ооците увеличи
вается примерно в 1000 раз. Амплификация начинается на стадии гоний и достигает
пика на стадии пахитены. Амплифицированные гены рРНК образуют многочислен
ные экстрахромосомные ядрышки.
Оогенез с участием хромосом типа ламповых
щеток имеет очевидные адаптивные преимуще
ства. Благодаря постоянному обновлению иРНК
создаются предпосылки длительного поддержания
жизнеспособности яйцевой клетки, находящейся
в яичнике. Это позволяет при неблагоприятных
условиях избегать обязательной откладки яиц сра
зу же после завершения оогенеза.
Своеобразный характер приобретает принцип
кооперативности в оогенезе птиц и рептилий. У
рептилий синтез рРНК осуществляется грушевид
ными клетками фолликулярного эпителия (рис. 1-
Рис. 1-27. Предполагаемая схема
участия клеток фолликулярного
27). На определенном этапе своего развития гру
эпителия в формировании ооцита у шевидные клетки соединяются с ооцитом, образуя
пресмыкающихся (по: Айзенштат, цитоплазматический мостики. Если у насекомых
1984). с полигепомным типом оогенеза функцию постав
1 - оболочка яичника; 2 фол
ликулярные клетки; 3 — ооцит; 4 — щика рРНК выполняют цистоциты, которые пред
грушевидная клетка. ставляют собой впдоизмененпые половые клетки,
то у рептилий аналогичную функцию выполняют
соматические фолликулярные клетки. Если в первом случае цитоплазматические
мостики, через которые транспортируется рРНК, образуются вследствие неполно
го цитокинеза при делении гоний, то у рептилий они, по-видимому, образуются при
слиянии мембран половой и фолликулярной клеток. В каждом фолликуле ящерицы
насчитывается до 10 000 грушевидных клеток.
48
Рис. 1-28. Образование трансосом клетками фолликулярного эпителия у птиц
(по: Press, L964).
1 — желточная оболочка ооцита; 2 —ооцит; 3 — трансосомы; 4 - фолликулярная
клетка.
1.5. Сперматогенез
49
научную литературу К. Бэром (LSI 7). Окончатель
ное решение вопроса о природе сперматозоидов как
мужских половых клеток принадлежит Альберту
Кёлликеру (1817-1905), который на нескольких десят
ках видов беспозвоночных доказал развитие спермиев
из клеток семенников. Кёлликер не только продемон
стрировал все переходные формы от недифференциро
ванной ППК до высокоспециализированного спермия,
но и установил видовую специфичность спермиев и да
же обнаружил у некоторых видов полиморфизм спер
миев. Тем не менее явление редукции числа хромосом
в ходе сперматогенеза оставалось незамеченным вплоть
до последней четверти XIX столетия, когда Ван Бене-
ден, исследуя развитие мужских и женских половых
клеток аскариды, описал мейоз (van Beneden, 1884). Но
вая страница в изучении структуры и функции сперми
ев была открыта в 50-е годы XX столетия, когда с ис
пользованием электронной микроскопии обнаружились
принципиально новые особенности тонкой организации
половых клеток.
По структурной организации и способу функци
онирования сперматозоиды можно подразделить на
несколько типов. У подавляющего большинства ви-
Рис. 1-29. Сперматозоид че-
ловека в изображении Нико- Д0Б сперматозоиды жгутиковые. Гакие сперматозоиды
ласа Хартсёкера (Nicolas Hart- обычно имеют три четко выраженных отдела: головку,
soeker, 1694; по: Нидхеы, 1947). Б которой расположено ядро, среднюю часть, или шейку
и жгутик (рис. 1-30). Известны некоторые группы жи
вотных, у которых спермин не имеют жгутиков. Безжгутиковые сперматозоиды
характерны для некоторых Ecdysozoa. Так, у круглых червей сперматозоиды аме
боидные (рис 1-31). Своеобразные безжгутиковые спермин обнаружены и у многих
членистоногих, их спермин округлой или звездчатой формы (рис. 1-32, 1-33) могут
перемещаться с помощью псевдоподий или остаются неподвижными.
50
Рис. 1-31. Амебоидный спермий нематоды Enoplus de-
mani (по: Yushin, Malakhov, 1994)
1 — псевдоподии; 2 — митохондрии; 3 — плотные мем
бранные образования; 4 - мембранные образования; 5 —
ядерная оболочка; 6 — ядро.
52
копитающих, акросомный пузырек в процессе формирования спермия принимает
вид шапочки, облегающей переднюю часть ядра (рис. 1-34). У иглокожих между
акросомным пузырьком и ядром имеется субакросомное пространство, в котором
локализуются молекулы глобулярного актина.
Митохондрии часто сливаются между собой, образуя крупную хондросферу. Они
обычно локализуются в основании жгутика зокруг центриоли и, как полагают, гене
рируют энергию для движения жгутика. Иногда, например в сперматидах насеко
мых, моллюсков и кольчатых червей, слившиеся митохондрии располагаются в виде
«побочного ядра» сбоку от ядра. Тзм не менее, в конечном счете, митохондриальное
побочное ядро окружает аксонему жгутика, или располагается рядом с ним.
Центриолъ, которая в период делений сперматогониев и сперматоцитов опре
деляет формирование веретена, в ходе спермиогенеза преобразуется в базальное
тельце жгутика. Эта трансформация центриоли дрозофилы происходит при уча
стии центросомина, особого белка центросомы. Мутация m/s, при которой синтез
центросомина не происходит, вызывает нарушение спермиогенеза и, как следствие
этого, стерильность самцов.
Основу жгутика составляет так называемый осевой комплекс, или аксонема, со
стоящая из двух центральных одиночных мнкротрубочек, вокруг которых распо
ложены девять дублетов микротрубочек. Кроме этого комплекса спермии многих
видов имеют еще одно внешнее кольцо, также состоящее из девяти фибрилл и прида
ющее жгутику необходимую жесткость. Иногда в заднем отделе спермия образуется
•ундулирующая мембрана.
До настоящего времени не разгадано явление полиморфизма спермиев: у ря
да животных в семеннике развиваются спермии двух разновидностей. Например, у
некоторых гастропод (Prosobranchia) наряду с типичными жгутиковыми, или эупи-
ренными сперматозоидами, обладающими оплодотворяющей способностью, разви
ваются короткие червеобразные апиренные формы, часто с аномальным гаплоид
ным набором хромосом. В других случаях апиренные спермии имеют два жгутика.
Доля апиренных сперматозоидов постоянна для данного вида.
У ряда американских сумчатых наблюдается феномен попарного соединения зре
лых спермиев, поступивших в эпидидимис. При этом лежащая над акросомой плаз
матическая мембрана одного сперматозоида плотно соединяется с соответствующей
областью другого. Предполагается, что это объединение спермиев, жгутики которых
расположены асимметрично относительно ядра, улучшает их подвижность.
Число спермиев, выводимых при осеменении, огромно. Так, у опоссума оно до
стигает 13 млн, у кролика их на порядок больше. У человека ежедневно может
формироваться более 100 млн спермиев. Естественно, что этот интенсивный процесс
требует координации пролиферации стволовых клеток и включения программ спер
матогенеза, контролирующих преобразование диплоидных сперматогониев в зрелые
гаплоидные сперматозоиды.
Сперматогенез подразделяется на несколько фаз (рис. 1-35) Первая из них — фа
за размножения, в течение которой образующиеся после деления стволовых клеток
сперматогонии митотически делятся. Число митотических циклов у разных видов
варьирует от 1 до 14. Вторая фаза — фаза коммитации, в течение которой вклю
чаются генетические программы инициации сперматогенеза. Третья фаза — фаза
созревания. Этот этап охватывает премейотический синтез ДНК и два мейотиче-
ских деления. Мужские половые клетки, находящиеся в первом мейотическом цик-
53
возобновление
резерва второе
стволовых мейотичес- енез
клеток инициация премейоти- первое кое деле-г Л 1
ние (1N/1C]
/
'^спермато-
\ генеза
ческий мейотичес-
синтезДНК кое деле
ние ( c rv
c rv
c rv
Коммитиро- Первичный Вторичные Сперма-
c rv
Спермато- Спермин
гоний ВаНтогони1рМа~ спеРмат°Цит сперматоциты тиды
54
образования аппарата движения, формирования механизмов заякоривания и слия
ния с женской гаметой.
Процесс сперматогенеза предполагает тесную корреляцию митотических и мей
отических циклов со сложной программой клеточной дифференциации. О суще
ствовании относительной автономии программы мейоза свидетельствует мутация
twine, вызывающая у дрозофилы существенные аномалии мейоза и вместе с тем не
затрагивающая заметным образом дифференциацию сперма,тид. Несмотря на нару
шения сегрегации мейотических хромосом и цитокинеза, в семенниках мутантных
самцов наблюдаются половые клетки, у которых происходит конденсация хромати
на, характерное видоизменение формы ядра и образование жгутика. Наряду с этим
известны мутации, которые блокируют одновременно и мейоз и спермиогенез. Эти
мутации свидетельствуют о том, что на определенной стадии сперматогенеза дей
ствует сопряженная программа развития, в равной степени необходимая как для
мейотического цикла, так и для дифференциации сперматид.
Семенник позвоночных подразделен на два отдела: семенные канальцы и межка-
нальцевое пространство, или соединительнотканную строму. В последней находится
обширная сеть кровеносных сосудов, интерстициальные клетки или клетки Лейди-
га, а также макрофаги, фибробласты, .лимфоциты и тучные клетки. Семенные ка
нальцы отделены от стромы так называемой ограничивающей мембраной, которая
образована уплощенными клетками, расположенными в 2-3 слоя. Полагают, что эти
клетки могут превращаться в клетки Лейдига. Эпителий семенных канальцев имеет
сложный состав и образован клетками двух типов: половыми (гоноциты) и сомати
ческими клетками фолликулярного эпителия. Последние часто называют клетками
Сертоли, или опорными клетками. Реже их называют сустентоцитами (от лат.
sustentas — поддерживающий). Между половыми и опорными клетками в течение
всего сперматогенеза (у крысы цикл сперматогенеза длится 42 дня, у человека 74
дня) сохраняется постоянная взаимосвязь. Клетки Сертоли многофункциональны.
Они обеспечивают питание дифференцирующихся мужских половых клеток и спо
собствуют созданию необходимой для нормального сперматогенеза концентрации
андрогенов. Опорные клетки играют также важную роль в перемещении половых
клеток из базального отсека канальца в околополостной. Они участвуют в созда
нии гематотестикулярного барьера, который предохраняет половые клетки от раз
ного рода метаболитов и токсинов, а также предотвращает автоиммунизацию орга
низма против собственных спермиев. Благодаря строго скоординированной сборке
и разборке плотных контактов между клетками Сертоли происходит своего рода
«шлюзование» сперматоцитов в околополостной компартмент канальца с сохране
нием непроницаемой границы между отсеками (рис. 1-36).
Функциональная активность семенника у позвоночных во многом определяет
ся гормональной регуляцией со стороны гипоталамо-гипофизарной системы. Ини
циация сперматогенеза обусловлена секрецией лютеинизирующего гормона (ЛГ) и
фолликулстимулирующего гормона (ФСГ) (рис. 1-37), которые вырабатываются в
передней доле гипофиза. В канальцах мишенями ФСГ являются клетки Сертоли, а
в строме — макрофаги. Действие ЛГ на сперматогенез опосредовано клетками Лей
дига: под действием ЛГ в этих клетках активируется синтез мужского полового
гормона тестостерона, наличие которого является непременным условием сперма
тогенеза. В обоих случаях происходит выработка паракринных (т. е. действующих
вблизи от места секреции) факторов, поддерживающих активность клеток Лейди-
55
Рис. 1-36. Схема, перемещения первичного сперматоцита
млекопитающих в околополостной отсек семенной трубки из базального.
Отсеки существуют благодаря наличию плотных контактов между клет
ками Сертоли (черные полоски). Скоординированная сборка-разборка плот
ных контактов при перемещении сперматоцитов поддерживает непроницае
мость барьера, образуемого клетками Сертоли.
А — сперматоцит в базальном, Б — транзитном, В — в околополостном от
секах.
Масса
беяка, Сиермато- Спермато- Сиерма- Спермий
гоний цит тида
кДа
105
100
93
88
85
80
71
67
58
55
48
35
31
26
Рис. 1-38. Экспрессия различных антигенов в половых клетках мыши
в период сперматогенеза (по: Tanake, Nishimune, 1998).
Каждая стадия характеризуется экспрессией специфического на
бора антигенов.
57
responsive element). Соответственно транскрипционные факторы, связывающиеся с
CRE, называются CREB (C R E binding protein) и CREM (C R E modulator). Оказа
лось, что эти факторы играют важную роль в спермиогенезе. У мышей половое со
зревание сопровождается появлением больших количеств фактора CREM. Ген сгет
экспрессируется в сперматоцитах начиная со стадии пахитены. Синтез же соответ
ствующего белка происходит только на стадии ранней сперматиды. У сперматозо
идов белок CREM отсутствует. Наблюдения на нокаутированных мышах сгет~
показали, что такие мыши не имеют видимых отклонений от нормы за исключе
нием изменения семенников, масса которых на 20-25% меньше массы семенников
нормальных мышей. Гомозиготные самцы сгет.~/~ в отличие от самок были сте
рильными: в семенной жидкости сперматозоиды отсутствовали. При микроскопи
ческом исследовании семенных канальцев оказалось, что сперматогенез у мышей,
лишенных гена сгет, не шел дальше стадии ранней сперматиды. Спермиогенез был
полностью подавлен, хотя клетки Сертоли имели нормальный вид.
У дрозофилы во время спермиогенеза экспрессируется специфический для муж
ских половых клеток ген don juan. Начало синтеза белка Don Juan приходится
на стадию удлиненной сперматиды и продолжается в течение всего спермиогене
за. Этот белок молекулярной массой 29 кДа характеризуется высоким содержанием
лизина. Как полагают, белок Don Juan участвует в дифференциации митохондрий
и обеспечивает морфогенез жгутика спермия.
Важный момент в дифференциации сперматид — экспрессия специфических для
сперматозоидов трансмембранных белков, которые обеспечивают адгезию мужской
гаметы и ооцита. У млекопитающих эту функцию выполняют /3-1,4-галактозил-
трансфераза, зонадгезин и фертилин. Последний принадлежит семейству белков
ADAM (a disintegrin and metalloprotease), одна из функций которых состоит в про
цессинге рецепторов плазматической мембраны.
Л итература
59
мужских ii женских половых клеток (рис. 2-1). В научной литературе события, свя
занные со сближением гамет иногда называют осеменением различая наружное и
внутреннее осеменение, в зависимости от того, выводятся мужские половые клетки
в окружающую среду или в половые органы женской особи. Наружное осеменение
характерно для животных, обитающих в водной среде. Внутреннее осеменение при
суще главным образом наземным животным, хотя оно достаточно часто встречается
и у обитателей водной среды. Осеменение может быть свободным при котором все
области ооцита доступны спермиям, но может быть и ограниченным, когда на по
верхности яйцеклетки имеется плотная оболочка с микропиле (рис. 2-2). При внут
реннем осеменении у ряда животных мужские гаметы передаются самкам в виде
сперматофоров (от греч. сптер^а — семя; (ророс — несущий), особых капсул, содер
жащих сперматозоиды. Сперматофоры сначала выводятся в окружающую среду, а
затем тем или иным способом переносятся в половые пути самки.
Соединение гамет предопределяет возможность кариогамии (от греч. xapuov —
орех, ядро; уб^ос — брак), или слияния ядер. Благодаря кариогамии происходит объ
единение отцовских и материнских хромосом, ведущее к образованию генома новой
особи. В результате слияния гамет возникает диплоидная зигота, восстанавливает
ся способность к репликации ДНК и начинается подготовка к делениям дробления.
Механизмы активации яйца к развитию относительно автономны. Их включение мо
жет быть осуществлено и помимо оплодотворения, что происходит, например, при
естественном или искусственном девственном развитии, или партеногенезе (от греч.
Ttap’Sevioc — девственный).
Интерес к проблеме оплодотворения выходит далеко за рамки собственно эм
бриологии. Слияние гамет — плодотворно используемая модель для изучения тонких
молекулярных и клеточных механизмов специфического взаимодействия клеточных
мембран; для изучения молекулярных основ активации метаболизма и пролифе
рации соматических клеток. Общебиологический интерес представляет и то, что
оплодотворение являет собой яркий и, может быть, уникальный пример полного об
ращения клеточной дифференциации. Действительно, высокоспециализированные
половые клетки не способны к самовоспроизведению. Они гаплоидны и не могут
делиться. Однако после слияния они превращаются в тотипотентную клетку, кото
рая служит источником формирования всех клеточных типов, присущих данному
организму.
История открытия оплодотворения теряется в глубине веков. Во всяком слу
чае, в XVIII столетии итальянский естествоиспытатель аббат Лаццаро Спалланца
ни (1729-1799) экспериментально доказал, что оплодотворение зависит от наличия
спермы, и впервые осуществил искусственное оплодотворение яиц лягушки, смеши
вая их со спермой, полученной из семенников. Тем не менее смысл происходящих
при этом событий оставался неясным практически до последней четверти XIX ве
ка, когда Оскар Гертвиг (1849-1922) в конце 1870-х годов, изучая оплодотворение у
морских ежей, пришел к заключению, что сущность этого процесса состоит в сли
янии ядер половых клеток. Вместе с работами бельгийца Эдуарда ван Бенедена
(1883, аскарида), немецкого ученого Теодора Бовери (1887, аскарида), швейцарско
го зоолога Германа Фоля (1887, морская звезда) исследования О. Гертвига заложили
основу современных представлений об оплодотворении. Следует подчеркнуть, что
именно эти работы послужили веским основанием для предположения о том, что
ядро является носителем наследственных свойств. Именно Т. Бовери (1862-1915) в
60
серии блестящих цитологических исследований обосновал в конце 1880-х годов тео
рию индивидуальности хромосом и создал основу цитогенетики.
Вскоре после выяснения сущности оплодотворения исследователи сосредоточи
ли внимание на механизмах, лежащих в основе этого процесса. Эта область иссле
дований сохраняет актуальность и в наше время. Пальма первенства в построении
теории оплодотворения принадлежит американскому исследователю Франку Лилли
(1862-1915). Изучая свойства «яичной воды», т. е. морской воды, в которой некото
рое время находились неоплодот воренные яйца морского ежа АгЪасга или полихеты
Nereis, Лилли обнаружил, что из яиц выделяется вещество, которое обладает способ
ностью склеивать спермин в комки. Наблюдаемая агглютинация оказалась видоспе
цифичной, и Лилли назвал фактор агглютинации, выделяемый неоплодотворенным
яйцом, веществом оплодотворения, или фертилизином (от англ. fertilization — опло
дотворение). Суть выдвинутой Лилли теории оплодотворения состоит в признании
того, что в периферической области яйца находится фертилизин, который имеет
сродство к поверхностным рецепторам спермия (антифертилизин спермия). Благо
даря этому сродству фертилизин связывает, согласно Лилли, спермии (рис. 2-3).
Однако, чтобы претендовать на универсальность и объяснить не только механизм
соединения гамет, но и причины агглютинации спермиев, возможность предотвраще
ния полиспермии, высокую специфичность процесса оплодотворения и т д., теория
фертилизина нуждалась в многочисленных допущениях, под гнетом которых она в
конце концов и угасла.
sp .gr
61
тифертилизином трансформировалась в гипотезу специфического фагоцитоза. Со
гласно этой концепции, наличие на поверхности яйца и спермия взаимодействующих
молекул обеспечивает комплементарную реакцию по принципу застежки «молнии»,
благодаря которой спермий оказывается поглощенным яйцом.
Несмотря на известную умозрительность, эти и многие другие подобные гипоте
зы о механизмах взаимодействия сперматозоидов и яиц сыграли свою положитель
ную роль, обнаружив, во-первых, существование целого семейства специфических
молекул на поверхности взаимодействующих гамет и, во-вторых, положив начало
планомерным исследованиям природы этих молекул.
Вторая половина прошлого столетия — период расцвета ультраструктурных и
молекулярно-биологических исследовании, которые выявили большое разнообразие
конкретных форм клеточного взаимодействия при оплодотворении. Стало ясно, что
универсальная теория оплодотворения, если и может существовать, то только как
свод некоторых самых общих принципов организации этого процесса.
Конкретные механизмы оплодотворения зависят от множества факторов. Доста
точно сказать о своеобразии оплодотворения у животных с наружным и внутренним
осеменением. Очевидно, что определенные различия процесса оплодотворения обу
словлены и тем, что у разных животных проникновение спермия в яйцо происходит
на разных этапах оогенеза. У многих аннелид, моллюсков, нематод и ракообразных
сперматозоид проникает в ооциты первого порядка на стадии профазы. У других
кольчатых червей, моллюсков и у насекомых — на стадии метафазы первичного
ооцита. Для многих позвоночных характерно осеменение на стадии метафазы вто
ричного ооцита. У некоторых кишечнополостных и у морских ежей оплодотворение
происходит на стадии зрелого яйца уже после завершения делений созревания и вы
деления направительных, или редукционных телец. Наконец, нельзя не вспомнить
и разнообразие типов сперматозоидов, среди которых имеются жгутиковые формы
и спермии без жгутиков (например, амебоидные спермии нематод), с акросомой и
без нее, имеющие акросомную нить и лишенные ее. Естественно, что в каждом та
ком случае конкретные механизмы, обеспечивающие тонкое взаимодействие между
половыми клетками, различаются.
Активация движения спермиев. Сперматозоиды, энергетический ресурс ко
торых ничтожен, и активная жизнь в лучшем случае продолжается считанные часы,
находятся в семенниках и семенной жидкости в неподвижном состоянии. Процесс
активации сперматозоидов широко распространен в животном мире и у разных жи
вотных, изученных в этом отношении, обнаруживаются различные ее механизмы.
Во многих случаях инициация движения сперматозоидов обусловлена сигнала
ми, идущими из внешней среды. Среди этих сигналов — разнообразные физические
и химические факторы, такие, как изменение соотношения О 2/С О 2, pH, концентра
ции тяжелых металлов и др.
У лососевых рыб спермии неподвижны в среде с высокой концентрацией К + ,
характерной для семенной жидкости. В среде с низкой концентрацией К + спермии
приобретают подвижность, что, видимо, связано с выходом К + через соответству
ющие каналы плазматической мембраны. Действительно, блокаторы К +-каналов,
подавляющие выход К+, предотвращают и начало движения спермиев. При выхо
де К+ изменяется заряд плазматической мембраны спермия и повышается концен
трация внутриклеточного Са2+, который высвобождается из внутренних депо или
поступает извне. При этом происходит активация аденилилциклазы и усиливает
62
ся синтез циклического АМФ, который активирует протеинкиназу А. Активность
этого фермента является предпосылкой активации тирозинкиназы. Последняя обес
печивает фосфорилирование тирозипоных остатков особого фосфопротеина (MIPP,
motility initiating phosohoprotein). локализованного в основании жгутика спермия,
по-видимому, в его центриолярной области и ин1щиирующего его движение.
Сперматозоиды костистых рыб и некоторых других животных находятся в со
стоянии покоя, если среда изотояична семенной жидкости, осмолярность которой
у рыб составляет около 300 мОсм/кг. У пресноводных костистых рыб и амфибий
спермин приобретают подвижность при разбавлении семенной жидкости гипотони
ческим раствором, тогда как у морских костистых рыб тот же эффект достига
ется гипертоническим раствором. Другими словами, подвижность спермиев у рыб
обусловлена не абсолютным значением осмолярности, а ее соответствием условиям
среды, в которой происходит естественный нерест животного (рис.2-4).
Иглобрюх Данио
(солоноводная форма) (пресноводная форма)
-700^
-300 8 -
-150В
к
S
о.
50 50
6
о
к
и
fc
о
t
с
75 120
Время, с
63
Спермии S. purpuratus Спермин A. punctulata
64
половых клеток у нематоды С. elegans обусловле
но интегральным белком плазматической мембраны
спермия — SPE-9, который в качестве лиганда (от
лат. ligo — связывать) взаимодействует с соответству
ющим рецептором ооцита (рис. 2-6). У млекопитаю
щих первичное связывание спермия с яйцом происхо
дит только после изменения структуры его плазмати
ческой мембраны и надмембранного комплекса. Спер
матозоид, взятый из эпидидимиса и уже способный к
активному движению, тем не менее, не может закре
питься на поверхности яйцевой клетки. Эту способ Рис. 2-6. Первичное связыва
ность спермии приобретают в половых путях самки, ние гамет нематоды Caenorhabdi-
tis elegans.
где под воздействием среды происходит преобразова 1 — белок SPE-9; 2 — рецептор
ние мембраны сперматозоида — так называемая капа- ооцита.
ситация (от англ. capacity — способность). В ходе ка-
паситации, как полагают, происходит изменение липидного состава плазматической
мембраны спермия, ведущее к ее дестабилизации в области акросомного пузырька.
Важными элементами капаситации являются удаление своеобразного молекуляр
ного покрова с поверхности спермия и разблокировка молекул адгезии, которые
обеспечивают первичное соединение спермия с яйцеклеткой. У млекопитающих мо
лекулы адгезии сперматозоида представлены, в частности, ферментом галактози-
лтрансферазой. Галактозилтрансфераза (ГалТаза) принадлежит к обширному се
мейству гликозилтрансфераз, участвующих обычно в синтезе полисахаридных це
пей разных гликоконъюгатов, включая гликопротеины, гликолипиды и др. Функция
гликозилтрансфераз состоит в переносе сахарного остатка с молекулы донора на
акцептор. В отсутствии акцептора гликозилтрансферазы образуют инактивирован
ный комплекс с молекулой-донором. Галактозилтрансфераза обнаруживается уже
на стадии первичных половых клеток, где она как молекула клеточной адгезии,
видимо, обеспечивает миграцию первичных половых клеток в зачатки гонад. На
ранних этапах сперматогенеза ГалТаза равномерно распределена по поверхности
сперматоцитов, но при формировании сперматид она концентрируется в той области
клетки, которая дает переднюю половину головки спермия. В эпидидимисе ГалТаза
спермия инактивируется благодаря взаимодействию с галактозамингликаном —N-
ацетилгалактозамином, молекулы которого плотно прикрывают активные участки
галактозилтрансферазы. В ходе капаситации эти полимерные молекулы удаляются
с поверхности сперматозоида, в результате чего молекулы плазматической мембра
ны последнего приобретают способность к взаимодействию с поверхностью яйца
(рис. 2-7).
Значение галактозилтрансферазы для оплодотворения у млекопитающих ярко
проявляется у мышей, имеющих мутации комплекса T/t. Этот комплекс, распо
ложенный в проксимальной области 17-й хромосомы, состоит из большого числа
аллелей — доминантных (Т ) и рецессивных (t). При мутациях комплекса T/t обна
руживаются различного рода нарушения сперматогенеза, оплодотворения и ранне
го эмбриогенеза. Сперматозоиды, имеющие мутантные аллели, отличаются большей
оплодотворяющей способностью по сравнению с нормальными спермиями. Если при
скрещивании самцов дикого типа ( + / + ) и мутантных самок (tl2 / + ) соотношение
потомков с генотипами ( + / + ) и (tl2 / + ) составляет 1: 1, то среди потомков сам-
65
Рис. 2-7. Распределение встроенной в мембрану галактозилтрансферазы
(ГалТаза) на разных этапах сперматогенеза и
у функционально зрелого сперматозоида (по: Shur. 1989).
А — первичная половая клетка; Б — сперматопит; В — сперматида; Г —
спермий из эпидидимиса, инактивированный лактозамингликаном (LAG);
Д — капаситация, деблокировка ГалТазы; Е — взаимодействие ГалТазы спер
мия с молекулами zona pellucida яйца.
66
стой оболочке выявлен сульфатированный гликопротеин (ARIS, acrosome reaction
inducible substance), который при наличии особого кофактора видоспецифически
индуцирует акросомную реакцию. У морских ежей аналогичную функцию выпол
няют гликопротеины 82 и 138 кДа. Восприятие этих сигналов обеспечивается соот
ветствующими рецепторами мембраны спермия, в частности гликопротеином, кото
рый, возможно, является Са2+-каналом или же эффектором поступления внешнего
Са2+.
В результате активации указанных рецепторов увеличивается концентрация
Са2+ в цитозоле клетки, усиливается выход Н+ и повышается pH внутри сперма
тозоида. Как известно, увеличение концентрации ионов кальция в клетке обычно
служит предпосылкой различного рода секреторных процессов, будь то секреция
инсулина в клетках поджелудочной железы или выделение нейротрансмиттеров в
синаптических окончаниях. У сперматозоида повышение уровня внутриклеточного
кальция сверх определенного порога служит сигналом к началу экзоцитоза содер
жимого акросомного пузырька, в ходе которого мембрана пузырька сливается с
плазматической мембраной сперматозоида. Благодаря этому содержимое пузырька
секретируется во внешнюю среду, а различные гидролитические ферменты, нахо
дившиеся в акросомпом пузырьке, приходят в контакт со студенистой и желточной
оболочками яйца и начинают их разрушать (рис. 2- 8 ).
Рис. 2-8. Акросомная реакция спермия морског о ежа (по Saunders, 1970).
А — головка спермия до акросомной реакции; Б, В — экзоцитоз акро
сомного пузырька; Г, Д — формирование акросомной нити (полимеризация
актина) .
X— мембрана акросомного пузырька; 2 — плазматическая мембрана: 3 —
гранулярный актин; 4 - - экзоцитоз акросомного пузырька; 5 — акросомная
нить; 6 —фибриллярный актин; 7 — область локализации биндина.
67
Выведение Разрушение I
гидролаз желточной
оболочки
Экзоцитоз
►tCa2' акросомного
пузырька
ARIS Связывание
Экспозиция сперматозоида
биндина с ооцитом
Рецептор
спермия
Полимеризация Образование
акросомной
актина нити
iH 3 Рост pH
Усиление
Активация подвижности
АТфазы сперматозоида
68
плекс из четырех одинаковых гликопротеиновых субъединиц Каждая субъедини
ца 350 кДа имеет короткую карбокситерминальную цитоплазматическую область,
трансмембранную область и, наконец, внеклеточный взаимодействующий с бинди-
ном домен, часть которого имеет структурное сходство с белком теплового шока
Hsp 70. Во внеклеточном домене выявлена зона с высоким содержанием цистеина.
Как полагают, именно здесь образуются дисульфидные мостики, соединяющие субъ
единицы в гомотетрамер— функционально активный рецептор биндина. Яйцо мор
ского ежа содержит около 1,25-106 молекул этого рецептора, которые распределены
на поверхности яйца неравномерно, что в известной степени предопределяет воз
можную область проникновения сперматозоида в яйцо. Предполагается, что кроме
связывания сперматозоида с яйцом биндин участвует в процессе слияния мембран
взаимодействующих гамет.
У млекопитающих акросомной реакции предшествует заякоривание спермия на
оболочке яйца. Акросомная пить у них не образуется (рис. 2-11). Аналогом желточ
ной оболочки у млекопитающих служит zona pellucida, которая представляет собой
своего рода внеклеточный матрикс, образующийся вокруг ооцита в период роста
последнего. ГГри оплодотворении zona pellucida выполняет несколько важных функ
ций, в том числе она обеспечивает узнавание яйца спермием, первичное связывание
спермия, запуск акросомной реакции и, наконец, блокировку полиспермии. Zona pel
lucida образована гликопротеинами, число разновидностей которых у разных видов
млекопитающих колеблется от 2 до 4. У мыши выделены три гликопротеина ZP. ZP2
и ZP3 образуют гетеродимеры, которые соединяются в виде цепочек. ZP1 образуют
гомодимеры, служащие поперечными связками этих цепочек. Главным компонен
том является гликопротеин ZP3 (83 кДа), который кроме структурной выполняет
69
еще, по крайней мере, две функции, обеспечивая первичное связывание сперматозо
ида и индуцируя акросомную реакцию. Карбокситерминальная область белка ZP3
сильно гликозилирована. Эта углеводная часть молекулы играет главную роль в
связывании сперматозоида. Что касается акросомной реакции, то она определяется
и углеводной и белковой частями этого гликопротеина.
Первичное связывание гамет у мыши обеспечивается, по меньшей мере, тремя
разными белками плазматической мембраны сперматозоида, взаимодействующими
с гликопротеином ZP3. Во-первых, это упоминавшаяся уже галактозилтрансфераза
мембраны спермия, которая взаимодействует с терминальной N-ацетилглюкозамин-
ной группой олигосахарида, входящего в состав ZP3. Во-вторых, у сперматозоида
имеется особый рецептор, взаимодействующий с остатком галактозы ZP3, и, на
конец, на поверхности мужской гаметы обнаружена протеаза, которая специфиче
ски связывается с определенным участком гликопротеина ZP3. После оплодотворе
ния ZP3 под действием гликозидаз кортикальных гранул ооцита модифицируется
и утрачивает свою биологическую активность. Гомологи ZP3 выявлены у других
млекопитающих и человека. По-видимому, у млекопитающих разных видов имеется
своя специфика молекулярных механизмов первичного (до акросомной реакции) и
вторичного (после нее) связывания сперматозоида на поверхности оболочки яйца.
У мыши во вторичном заякоривании участвует белок ZP2. У спермиев свиньи оно
опосредуется содержащимся в акросоме проакрозином, предшественником протео-
литического фермента акрозина. Проакрозин в качестве молекулы адгезии функци
онирует как белок, способный к связыванию фукозы zona pellucida. Особые белки
связывания обнаружены и у морской свинки.
Условием начала акросомной реакции у сперматозоидов мыши, по-видимому, яв
ляется его взаимодействие с олигосахаридами молекулы ZP3. Предполагается, что
начало акросомной реакции обусловлено агрегацией соответствующих рецепторов
(белок 95 кДа и другие) в плоскости плазматической мембраны спермия. Эта агре
гация стимулирует активность встроенной в мембрану тирозинкиназы и инициирует
тем самым цепь процессов, ведущих к акросомному экзоцитозу.
Закрепление сперматозоида на яйцевой оболочке создает условия, обеспечиваю
щие высокую локальную концентрацию протеолитических ферментов, излившихся
из акросомного пузырька. Важную роль в разрушении zona pellucida играет, напри
мер, /J-N-ацетилглюкозаминидаза, которая высвобождается при акросомной реак
ции и облегчает прохождение спермия сквозь яйцевую оболочку.
У моллюска Hciliotis rufescens (морское ушко) в ходе акросомной реакции вы
деляется белок лизин (16 кДа), который образует отверстие в желточной оболочке
яйца на основе неферментативного стоихиометрического механизма. Действие ли
зина в высшей степени видоспецифично.
Так или иначе, в результате акросомной реакции оболочка яйца подвергается
энергичному разрушению. Прохождению сперматозоида сквозь оболочки яйца спо
собствует и усиление двигательной активности жгута. Все это приводит к установ
лению тесного контакта между плазматическими мембранами мужской и женской
гамет.
Ключевым элементом механизма активации акросомной реакции сперматозои
дов животных служат гуаниннуклеотид-связывающие белки, или G-белки. Эти бел
ки плазматической мембраны играют роль посредника между рецепторами мем
браны и разнообразными белками-эффекторами клетки. G-белки стимулируют или
70
ингибируют эффективные белки, интегрируя сигналы от разного рода рецепторов,
усиливая сигналы рецептора и т. п.
Участие G-белков в процессах активации гамет, по-видимому, является одним из
древнейших свойств эукариот. Известно, например, что у дрожжей Saccharomyces
cerevisiac в половом процессе участвуют клетки а- и a -типов спаривания, которые
вырабатывают особые факторы спаривания — феромоны. Показано, что феромоны
одного партнера активируют G-белки другого партнера, запуская, таким образом,
целый ряд процессов, необходимых для спаривания клеток: блокируются клеточ
ные деления, высвобождаются ионы кальция, изменяется активность транскрипции
генов. В частности, начинается экспрессия генов молекул адгезии — агглютининов,
обеспечивающих взаимное связывание клеток. Феромоны индуцируют также экс
прессию генов fusl и fus2, белковые продукты которых локализуются на вершинах
клеточных отростков и обеспечивают слияние взаимодействующих клеток.
Слияние гамет. Место слияния мембран сперматозоида и яйцеклетки обыч
но ограничено областью связывания сперматозоида. В ооцитах многих животных в
этой области часто возникает особый цитоплазматический вы рост— конус оплодо
творения (рис. 2- 12 ), и образуются многочисленные микроворсинки, охватывающие
сперматозоид. Актиновый цитоскелет микроворсинок служит дополнительным ис
точником энергии, направленной на погружение мужской гаметы в яйцо.
71
в яйцо, но и служит фактором активации последнего. Одновременно возникают
разнообразные явления, препятствующие множественному проникновению сперма
тозоидов, или полиспермии, поскольку последняя ведет к нарушениям развития и
даже к гибели зародыша (рис. 2-13). У морского ежа одним из следствий связыва
ния сперматозоида оказывается кратковременное поступление Na+ в яйцо, которое,
возможно, обусловлено действием акросомных белков на Ма+-каналы. Увеличение
концентрации Na+ в клетке ведет к ее деполяризации, связанной с резким изменени
ем потенциала покоя. Перед оплодотворением потенциал покоя яйца морского ежа
составляет около -70 мВ. Спустя несколько секунд после слияния мембран гамет он
возрастает до +20 мВ. При этом плазматическая мембрана яйца теряет способность
к взаимодействию с мембраной добавочных спермиев. Это явление называют быст
рой блокировкой полиспе-рмии. При сохранении потенциала покоя на уровне —70 мВ
или при низкой концентрации Na+ в среде полиспермия не блокируется. Наобо
рот, при искусственном поддержании в пеоплодотворенном яйце положительного
потенциала взаимодействие гамет (и, следовательно, оплодотворение) становится
неосуществимым.
72
тикальную вспышку» — активацию ионных каналов плазматической мембраны яй
ца, благодаря которой происходит синхронный приток Са2+ из внешней среды по
всей поверхности яйца. Этому механизму противопоставляли выведение эндогенно
го Са2+, из внутренних депо яйцеклетки вторичноротых, которое начинается в точке
проникновения сперматозоида и распространяется в виде волны по всему яйцу. Од
нако изучение динамики концентрации ионов кальция с помощью конфокального
лазерного сканирующего микроскопа показало необоснованность такого протпвопо-
ставления. Оказалось, что и у морских ежей в момент связывания спермия с яй
цом в кортикальном слое последнего происходит почти мгновенный подъем [Са2+|
в результате открытия Са2+-каналов оолеммы. Са 2+-волна, независимая от внеш
них источников кальция, наблюдалась лишь через некоторое время после быстрого
подъема [Са2+].
Описаны два главных типа кальциевых волн в оплодотворенных яйцах. Так, у
иглокожих, рыб и амфибий обнаруживается единичная кальциевая волна. У мле
копитающих и асцидий наблюдается серия многократных (12-25 раз) подъемов
[Ca2+ ]j. Природа этих осцилляций не вполне ясна. Предполагается, что в сперма
тозоидах млекопитающих имеется особый осцилогенный фактор. Действительно,
эффект кальциевой осцилляции можно получить в опытах по микроинъекции спер
матозоида в яйцо или после инъекции в яйцо фактора, экстрагированного из спер
матозоида.
Исследование особенностей динамики содержания ионов Са2+ после оплодотво
рения у новых объектов обнаруживает большее разнообразие типов, чем это пред
полагалось ранее. Например, у немертин вслед за возникающей через 30 с после
контакта со сперматозоидом «кортикальной вспышкой», и характерной для первич
норотых, начинается кальциевая осцилляция, типичная для млекопитающих. Эта
осцилляция обусловлена периодическим высвобождением Са2+ из внутриклеточ
ного депо, поскольку она продолжается и при перенесении оплодотворенных яиц
немертины в бескальциевую воду.
К настоящему времени подробно исследованы молекулярные механизмы вы
свобождения Са2+ из запасов яйцеклетки у вторичноротых. Ведущим событием
здесь является активация G-белков, которые, в свою очередь, активируют фос-
фолипазу С (рис. 2-14). Этот фермент расщепляет связанный с мембраной ли
пид фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат па диацилглицерол и инозитолтрифосфат
(ИТФ). ИТФ способствует высвобождению внутриклеточного запаса Са2+, тогда
как диацилглицерол, активируя протеинкпназу С, усиливает функцию Na+ /H +-
насоса. Результатом этой активации является откачка Н+ во внешнюю среду, под-
кнсление которой отмечалось уже первыми исследователями физиологии оплодо
творения, описавшими выделение «кислоты оплодотворения». Повышение внутри
клеточного pH, которое обусловлено активацией N a + /H + -HacocoB, служит необхо
димым условием для стимуляции синтеза ДНК, синтеза белков, для активации си
стем внутриклеточного транспорта. Как полагают в неоплодотворенной яйцеклет
ке имеется фактор, ингибирующий ключевой, или «критический» белок (например,
один из белков рибосомы), подавление функциональной активности которого ве
дет к угнетению фундаментальных клеточных процессов. Гипотеза «критического
белка» допускает, что имеется пороговое значение pH, превышение которого ведет к
диссоциации комплекса «ингибитор/критический белок» и к активации этого белка.
Эта гипотеза согласуется с данными о том, что у морского ежа клеточный транс-
73
Рис. 2-14• Схема, иллюстрирующая возможные механизмы высвобождения Са2+
в оплодотворенном яйце (по: Myazaki et al., 1993).
Затемнена область слияния плазматических мембран (ПМ) спермия и ооцита (светлая).
X — гипотетический фактор плазматической мембраны спермия; Y — гипотетический цито
зольный фактор спермия; R — рецептор илазмалеммы ооцита; САМ — молекула клеточной
адгезии; DAG — диацилглицерол; ER — эндоплазматическая сеть; G — G-белок; IP 3 —
инозитолтрифосфат; PIP 2 — фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат; РКС - протеинкиназа С;
PLC — фосфолипаза С; РТК — протеинтирозинкиназа.
74
Рис. 2-15. Кортикальная реакция ооцита морского ежа
(по: Muller, Hassel, 1999).
1 — рецептор биндина; 2 — плазматическая мембрана ооцита; 3 — биндин; 4 — акро
сомная нить; 5 — спермин; 6 Н+-насос; 7 — Na+ -канал; 8 — оболочка оплодотворения
(отслаивающаяся желточная оболочка); 9 — эндоплазматическая сеть; 10 — кортикальная
гранула; 11 — экзоцитоз кортикальной гранулы. DAG — диацилглицерол; 1Рз — инози-
толтрифосфат; PIP 2 — фосфатидил-инозитолдифосфат; РКС — протеинкиназа С; PLC —
фосфолипаза С; черными кружками обозначены ионы Са2 + .
75
а эхинонектин через 5 мин. Такая последовательность выведения компонентов, по-
видимому, и определяет многослойность гиалинового слоя.
Формирование мужского пронуклеуса. Важным событием процесса опло
дотворения является преобразование ядра спермия в мужской пронуклеус. У мор
ского ежа ядро спермия имеет коническую форму. Хроматин ядра, содержащий
специфические спермийные гистоны (SpHl, SpH2), сильно конденсирован. После
попадания ядра спермия в цитоплазму яйцеклетки оно утрачивает свою оболочку.
Sp-гпстоны фосфорилируются и заменяются «гистонами стадии дробления» (CS-
гистоны, cleavage stage) (рис. 2-16). В результате этой замены в хроматине восста
навливается обычная длина нуклеосомного повтора (210 нуклеотидов), хроматин
деконденсируется, и таким образом создаются необходимые предпосылки для воз
обновления репликации ДНК и транскрипции РНК.
I--------------- 1 V
J______________________ I______________________ !_________________
CS1 Н 0,2
Spl - о
76
ступенчатый процесс. Условия этого превращения успешно исследуются в опытах
по микроинъекции изолированных ядер мужских гамет в ооцитьг разных стадий со
зревания, до и после оплодотворения. В такого рода экспериментах было показано,
в частности, что развитое мужского пронуклеуса не зависит от концентрации Са2+.
но требует определенного уровня pH.
77
точки вхождения сперматозоида, неизбежно приходит в контакт с микротрубочками
звезды, после чего начинает мигрировать в направлении минус-конца микротрубо
чек, сближаясь таким образом с мужским пронуклеусом. Слияние пронуклеусов,
или кариогамия завершает процесс оплодотворения. Объединившиеся пронуклеусы
образуют диплоидное ядро зиготы, или синкарион, хотя у ряда видов самостоятель
ные пронуклеусы сохраняются вплоть до первого деления дробления.
В некоторых случаях активность синкариона проявляется тотчас после его воз
никновения. У животных, яйца которых богаты желтком, часто наблюдается есте
ственная полиспермия, при которой в ооцит попадает несколько спермиев. У трито
на Cynops, например, в яйце бывает до 20 мужских пронуклеусов. При нормальном
развитии после образования синкариона невостребованные пронуклеусы дегенери
руют, и образуется нормальное митотическое веретено. Если же синкарион из зи
готы удатить, то центриоли дополнительных спермиев образуют мультиполярное
веретено, при этом нормальный ход дробления нарушается. В опытах с наложени
ем лигатуры, отделяющей синкарион от дополнительных мужских пронуклеусов,
выяснилось, что синкарион Cynops является источником фактора ASSA (accessory
sperm suppression activity). ASSA подавляет, в частности, репликацию центриолей,
привнесенных сверхчисленными сперматозоидами, и таким образом предотвращает
нарушение процессов дробления.
Зиготическая центросома дуплицируется и расщепляется непосредственно пе
ред завершением оплодотворения. Образование диплоидного ядра зиготы, восста
новление способности к репликации ДНК и транскрипционной активности, нако
нец, формирование центриолярного аппарата — все эти процессы финального этапа
оплодотворения — необходимые звенья в цепи событий, подготавливающих начало
следующей стадии эмбрионального развития стадии дробления.
Л итература
79
Рис. 3-1. Типы дробления.
А — голобластический тип: дробление яйца голотурии Leptosynapta inhaerens
(по: Runnstrom, 1927); Б — меробластическпй тип: дпскоидальное дробление кара
катицы (по: Vialleton, 1888); В — абластический тип: раннее развитие наездника
Prcstwichia aquatica (по: Иванова-Казас, 1У50), слева видна оосома. — маркер клеток
половой линии.
моллюсков (рис. 3-2, Б), или иными причинами, как в случае образования микро
меров у морского ежа (рис. 3-2, В).
Меробластическое дробление (от греч. церос; — часть, доля). Этот тип дробления
наблюдается у животных с телолецитальнъгми яйцами, которые отличаются высокой
степенью концентрации желтка в вегетативной области. У головоногих моллюсков,
многих рыб, а также у рептилий и птиц дробление происходит только в относитель
но небольшой части яйца, образующей как бы диск на поверхности яйцеклетки, —
дискоидальное дробление.
80
Рис. 3-3. Основные типы дробления.
А — радиальное; Б — билатеральное; В — бирадиальное; Г — спиральное;
Д — полиаксиальное; Е — табличная палинтомия. I — стадия 4 клеток; II —
стадия 8 клеток; III — стадия 16 клеток.
81
ную цитоплазматическую бластему, или периплазму ( от греч. Tiepi — вокруг) ядра
образуют синцитиальную бластодерму, которая позднее целлюляризуется и дает на
чало клеточной бластодерме зародыша.
По характеру расположения бластомеров в развивающемся зародыше различа
ют несколько типов дробления, в частности радиальное, бирадиальное, спиральное,
билатеральное, ротационное и неупорядоченное дробление, а также табличную па-
линтомию и полиаксиальный тип дробления (рис. 3-3).
Радиальное дробление. У многих животных (книдарии, иглокожие, некоторые
первично-хордовые, рыбы и амфибии) дробящееся яйцо имеет радиальную ось сим
метрии, при которой плоскость, проходящая через любой меридиан, делит зародыш
на две геометрически тождественные половины. При радиальном дроблении два
первых деления проходят во взаимно перпендикулярных меридиональных плоско
стях, а третье — в экваториальной плоскости. Последующие деления чередуются в
широтной и меридиональной плоскостях. Если третье деление происходит в эква
ториальной плоскости, то дробление равномерное, если же плоскость этого деления
смещена в анимальное полушарие, то дробление неравномерное и ведет к образова
нию микромеров в анимальном и макромеров в вегетативном полушариях.
Спиральное дробление. У аннелид и моллюсков в результате первых двух взаимно
перпендикулярных меридиональных делений образуется стадия четырех бластоме
ров. Начиная с третьего деления дробления митотические веретена располагаются
под некоторым углом к меридиональной плоское™. Благодаря этому образующиеся
четыре клетки анимального полушария несколько смешаются относительно клеток
вегетативного квартета и располагаются в промежутках между его бластомерами
квадрантами (рис. 3-4). Если смещение происходит по часовой стрелке (при наблю
дении с анимального полюса), дробление называют дексиотропным (от лат. dexter —
правый), если же смещение происходит в противоположном направлении, дробление
называют леотропным. При последующих делениях наклоны веретен чередуются:
за дексиотропным следует леотропное деление и наоборот. В случае спирального
дробления его неравномерность может обнаружиться уже после первого деления
дробления. Если на стадии 4 бластоыеров все клетки одинаковых размеров, гово
рят о гомоквадрантном дроблении, если же они различаются по размерам, то — о
гетероквадрантном (рис. 3-5).
Неравномерност ь дробления может проявляться и вдоль анимально-вегетативной
оси: при достаточно больших запасах желтка основной (вегетативный) квартет пред
ставлен макроморами, а анимальный —- микромерами. В ходе спирального дробле
ния бластомеры занимают строго фиксированное положение в системе и обознача
ются специальными индексами (см. подробнее 8 .1).
82
Рис. 3-5. Гомоквадрантное и гетероквадрантное дробление.
Стадия четырех бластомеров: А — эхиуриды Urechis саиро (по:
Newby, 1940), Б — полихеты Arenicola (по: Child, 1900).
Билатеральный тип дробления (рис. 3-6). Этот тип дробления характерен для
нематод, а также для многих низших хордовых, в том числе для асцидий, аппен-
дикулярий и бесчерепных. Характерной его особенностью является раннее проявле
ние билатеральной симметрии. Например, у оболочников подразделение на левую
и правую части происходит уже при первом меридиональном делении дробления,
плоскость которого рассекает желтый серп оплодотворенного яйца на две симмет
ричные половины. Билатеральность становится очевидной, когда вторая, тоже мери
диональная борозда отделяет крупные передние бластомеры от задних более мелких
клеток.
83
на? Конечно, характер дробления, как мы видели, отчасти определяется особенно
стями распределения желтка в яйцеклетке: увеличение концентрации желтка обыч
но приводит к замедлению образования борозд в вегетативном полушарии или даже
к полному прекращению делений. В этих случаях наблюдается меробластическое
или абластическое дробление.
Вместе с тем очевидно, что особенности того или иного типа дробления являют
ся результатом длительной эволюции и контролируются не только концентрацией
желтка, но многими факторами, природа которых но многом остается еще не рас
крытой.
Сравнение разных типов дробления у животных позволило выдающемуся немец
кому исследователю конца XIX — начала X X столетня О.Герткигу вывести эмпири
ческие правила («правила Гертвига»), которые, как первоначально казалось, дают
ключ к пониманию причины того или иного положения плоскости деления яйца или
бластомеров. Согласно одному из этих правил, ядро в яйцеклетке или бластомере
занимает центр «активной» (то есть незагруженной желтком) цитоплазмы. Таким
образом, при асимметричном расположении активной цитоплазмы предопределяет
ся и аналогичное положение ядра. Согласно другому правилу Гертвига, ось верете
на деления совпадает с направлением наибольшей протяженности цитоплазмы. Во
многих случаях правила, установленные Гертвигом, оправдываются. Тем не менее
они верны не всегда и, очевидно, будучи лишь результатом визуального анализа, не
раскрывают реальных механизмов детерминации плоскостей дробления.
Выполненные в конце 1930-х годов известным шведским эмбриологом Свеном
Герстадиусом (1898 1996) опыты на морском еже показали, что положение веретен
в последовательные моменты дробления предопределяется какими-то процессами в
цитоплазме, которые активируются после оплодотворения. Герстадиус обнаружил,
что, помещая яйца морского ежа в гипотоническую сред,' или подвергая их встряхи
ванию, можно задержать то или иное деление дробления. При этом оказалось, что
время появления того или иного положения веретена относительно момента оплодо
творения остается неизменным. Например, если задержать первое деление на один
цикл, то экваториальное деление, которое в норме является третьим, произойдет на
стадии двух бластомеров, хотя при нормальном развитии для этой стадии характер
но меридиональное деление. Как известно, микромеры вегетативного полушария у
морского ежа возникают при четвертом делении дробления, т. е. на стадии образо
вания 16-клеточного зародыша. Однако при задержке третьего деления дробления
формирование микромеров происходит строго «по расписанию», т. е. через такое же
время после оплодотворения, что и при нормальном развитии, но на стадии 4 бла
стомеров, а не 8 , как при нормальном развитии (рис. 3-7).
Из опытов Герстадиуса вытекало два важных следствия. Во-первых, они сви
детельствовали, что в дробящемся яйце имеется некий счетчик времени, который,
будучи независимым, тем не менее сопряжен с процессами, непосредственно контро
лирующими кариокинез. Во-вторых, эти опыты указывали на существование меха
низма, который предопределяет последовательный ряд событий, реализующих ге
нетически детерминированную ориентацию веретен деления.
Важный вклад в понимание проблемы дробления примерно в то же время внесла
американский эмбриолог Этель Гарвей (1885-1968), работы которой также показа
ли, что механизмы кариокинеза и цитокинеза относительно автономны и могут быть
разобщены в эксперименте. Центрифугируя неоплодотворенные яйца морского ежа
84
Рис. 3-7. Схема эксперимента Герстадиуса по задержке делений дробления
у морского ежа (по: Гилберт, 1994).
А — нормальное развитие; Б — развитие при подавлении первого клеточного
цикла; В — развитие при подавлении третьего клеточного цикла.
в растворе сахарозы той же плотности, что и яйца, она смогла разделить яйцо на
две половины — мерогоны. В легкой половине оставалось ядро, а в тяжелой концен
трировался желток и пигментные зерна. После активации гипертонической морской
водой наблюдалась партеногенетическая мерогоиия: безъядерные половинки начи
нали дробиться и формировали аномальные бластулы, которые после вылупления
погибали, поскольку составляющие их клетки не имели ядер.
Относительная автономия кариокинеза и цитокинеза обусловлена тем, что в их
основе лежат различные клеточные механизмы. Поскольку эти механизмы и, в част
ности, роль цитоскелета в осуществлении клеточного деления подробно рассматри
ваются в курсе цитологии, здесь мы ограничимся лишь кратким упоминанием о
85
не связанными между собой веретеном. Можно предполагать, что область форми
рования сократительного кольца микрофиламентов определяется взаимодействием
микротрубочек звезд с кортексом яйца.
Положение митотического веретена, а следовательно, и звезд зависит не толь
ко от элементов цитоскелета, но и от других цитоплазматических факторов, хотя
реальный механизм их действия пока не известен. Например, у животных со спи
ральным типом дробления обнаружено, что ориентация плоскости третьего деления
в правую или левую сторону (т. е. дексиотропность или леотропность) контролиру
ется цитоплазматическим фактором, который синтезируется под контролем генов
материнского организма в период оогенеза. Значение этого фактора было показано
как в опытах, в которых цитоплазму из яиц одного типа инъецировали в яйца дру
гого типа, так и в генетических исследованиях закрученности раковины у моллюска
Lymnea, которая коррелирует с ориентацией веретена при дроблении. Так, у Lym-
пеа аллель правозакрученности доминантен (D), а левозакрученности рецессивен
(d). При скрещивании самок DD с самцами dd все потомки Dd были правозакру
ченными. При скрещивании самцов DD с самками dd все потомки Dd были левоза
крученными, а при скрещивании самцов Dd с самками Dd потомки (1DD: 2Dd: ldd)
были все правозакрученными.
Прямые доказательства участия генетических факторов в определении характе
ра дробления получены на нематоде Caenorhabditis elegans, у которой первое деление
дробления дает крупный передний бластомер АВ и задний бластомер Р1 меньших
размеров. При втором делении образуется характерная Т-образная фигура, так как
оси митотических веретен в указанных бластомерах располагаются взаимно пер
пендикулярно. Асимметрия деления яйца у С. elegans определяется белками PAR и
МЕХ, локализованными в кортикальном слое. Обнаружено 6 генов par (partitioning-
defective). У большинства мутантов par первое деление равномерное, а веретена до-
черних клеток расположены вдоль одной оси, а не взаимно перпендикулярны. Эти
нарушения коррелируют с изменениями локализации белков PAR. У животных ди
кого типа белки PAR-3 и PAR -6 локализованы в передней области кортекса, тогда
как PAR-1 и PAR-2 — в задней. Отсутствие одного из белков передней группы ведет
в распространению задних факторов вперед. В отсутствии PAR-2 факторы перед
него комплекса распространяются назад.
В настоящее время эмбриология не располагает данными, которые позволили бы
дать сколько-нибудь связный очерк механизмов, лежащих в основе формирования
тех или иных конкретных типов дробления. Тем не менее даже те отрывочные све
дения, которые имеются в нашем распоряжении, позволяют утверждать, что тип
дробления определяется сложным комплексом факторов, в том числе генетиче
скими и клеточными механизмами, которые контролируют и интегрируют мно
гие элементарные процессы. Среди последних особое значение имеют события, свя
занные с синтезом ДНК, организацией митотического деления ядра (кариокинез)
и делением цитоплазматического тела клетки (цитокинез). Относительная автоно
мия этих элементарных процессов создает предпосылки для формирования в ходе
эволюции животных разнообразных типов дробления. Например, в основе возникно
вения поверхностного типа дробления лежит возможность разобщения кариокинеза
и цитокинеза.
Особенности клеточного цикла в период дробления. Дробление оплодо
творенного яйца представляет собой палинтомический процесс (от греч. KaXiv —
86
Рис. 3 ‘S. Схема палинтомического (А)
и моно!омического (Б) клеточных циклов.
Т1 - Т 4 —последовательные клеточные циклы. Штриховая линия - количество
ДНК (2С — 4С), сплошная — масса клетки. При палинтомическом цикле отсутствует
компенсаторный рост клетки; цикл не имеет gap-ф эз. Клеточный цикл монотомиче-
ского типа имеет фазу синтеза ДНК (S), иресинтетическую (G1) и иремитотическую
(G2) фазы, а также фазу митоза (М ). После каждого деления масса клетки восста
навливается до исходного уровня.
87
Дробление Стадия нейрулы
89
Поиск молекул, инициирующих деления созревания ооцитов Xenopus, привел к
обнаружению фактора созревания, или MPF (maturation promoting factor), слож
ного фосфопротеииа, состоящего из двух субъединиц. Впоследствии оказалось, что
MPF не только выполняет свою функцию при мейозе, но и выступает в роли факте -
ра регуляции митотических клеточных циклов, так что теперь аббревиатура MPF
расшифровывается как mitosis promoting factor. Было установлено, что активность
MPF изменяется циклически: она достигает максимальных значений в митозе и су
щественно падает в фазе синтеза ДНК (рис. 3-11). При этом обнаруженная циклич
ность не связана непсср*. дственно с ядром, поскольку она наблюдается и в энукле-
ированных яйцах.
Если дробящееся яйцо обработать ин
гибитором синтеза белка то дробление
окажется заблокированным в интерфа
зе. Микроинъекция очищенной фракции
MPF в такое яйцо восстанавливает про
цесс клеточной репродукции: после инъ-
екциг наблюдаются разрыв ядерной обо
лочки, конденсация хромосом и харак
терная реорганизация цитоскелета, свя
Рис. 3-11. Изменение содержания циклина (1)
и MPF (2) в ходе клеточных циклов в период занная с подготовкой к митозу.
дробления яйца лягушки (по: Епифанова, 1997). Изучение структуры MPF показало,
М — митоз. Черные стрелки — активация MPF, что малая субъединица комплекса пред
светлые — деструкция MPF. По оси абсцисс —
время, по оси ординат — концентрация белка,
ставляет собой протеинкшшзу. Наличие
уел. ед. этой протеи нкиназы обеспечивает фос-
форилирование ряда белков. В частно
сти, фосфори.пирование гистона Hi ведет к конденсации хромосом, а гиперфосфо-
рилирование белков ядерной оболочки (ламинов) служит предпосылкой разборки
этой оболочки. Протеинкиназа MPF обладает высокой степенью консервативности,
она идентична белку р34 дрожжей, который контролируется одним из генов регуля
ции клеточного цикла (так называемые cdc-гены, cell division cycle), а именно геном
cdc2 (p34cdc2). У мутантных по гену cdc2 форм дрожжей митотические деления
подавлены. Однако, если у этих мутантов интродуцировать ген малой субъединицы
MPF, то деление дрожжевых клеток восстанавливается.
Большая субъединица MPF представляет собой белок 56 кДа, идентичный дрож
жевому белку р56Ыс13. Этот белок был назван циклином, поскольку его взаимодей
ствие с протеинкшгазой периодически меняется в ходе клеточного цикла. Оказалось,
что активность взаимодействия начинает расти в S-фазе цикла, достигает макси
мума в начале митоза, но в начале анафазы резко падает из-за быстрой деграда
ции белка (см. рис. 3-11). Распад циклила ведет к инактивации малой субъединицы
MPF. После инактивации протеинкиназы прекращается фосфорилирование гистона
Н1, ламинов и других белков мишеней, а это, в свою очередь, вызывает завершение
митоза и переход в интерфазу.
В яйцах Xenopus был выявлен цитостатический фактор CSF (cytostatic factor),
контролируемый геном c-mos. Этот фактор блокирует мейоз в метафазе второго
деления созревания (см. рис. 3-10). Блокирующее действие CSF обусловлено тем,
что он предотвращает деградацию циклина. В результате сохраняется активность
MPF, и клетка не выходит из митоза. При оплодотворении, как мы знаем, в яйце
90
происходит увеличение концентрации ионов Са2+, что вызывает инактивацию CSF
и завершение делений созревания.
Если в период дробления синтез циклина и других активаторов протеинкиназы
идет на материнских матрицах, запасенных в период оогенеза, то к концу дробле
ния этот запас исчерпывается. Так, после 13-го деления у дрозофилы происходит
деградация материнской иРНКл/Г!Г'г/ и на 14-м цикле начинается ресинтез зиготиче-
ской формы циклина. Возможно, что это обстоятельство является одной из причин
замедления и десинхронизации делений клеток, наблюдаемых в это время.
Ооплазматическая сегрегация. В ходе дробления происходит распределение
различных веществ, содержащихся в цитоплазме яйцеклетки, по бластомерам. При
этом разнородные по составу участки цитоплазмы попадают в клетки, которые да
ют начало разным зачаткам. Так, наиболее богатые желтком вегетативные участки
яйца попадают при дроблении в бластомеры, которые дают начало энтодерме.
Особое значение для судьбы развивающегося зародыша имеет, однако, сегрега
ция инструктивных молекул, наблюдаемая в период дробления у многих животных.
Материнские цитоплазматические факторы, попадая в те или иные бластомеры,
активируют специфические программы развития и детерминируют разнообразные
зачатки.
Истоки исследований цитоплазматической локализации морфогенетических
факторов в раннем эмбриональном развитии обнаруживаются в эмбриологических
работах конца X IX столетия. А. О. Ковалевский (1840-1901), изучавший эмбрио
нальное развитие аннелпд, по-видимому, впервые (1871), описал стволовые клет
ки мезодермы телобласты (от греч. теАсс — конец, окончание; рХсготос; — росток),
деление которых приводит к образованию парных мезодермальных полосок червя.
Позднее К. Уитменом (1878) у пиявки Clepsine были описаны не только мезотелоб-
ласты, но и пейробласты, дающие соответственно мезодермальную и нейральную
зачатковые полоски.
Благодаря относительно небольшому числу клеток и в высшей степени консер
вативному характеру дробления у зародышей аннелид и моллюсков удалось с боль
шой точностью проследить судьбу каждого бластомера. Поклеточное прослежива
ние (cell lineage) показало, что в основе развития многих структур животного лежат
клеточные клоны, возникающие в результате деления индивидуальных бластомеров.
Так, у полихеты Polyyordius клетки прототроха возникают из шестнадцати тро-
хобластое, личиночные органы выделения, протонефрндии, из нефробластое, пе
редняя кишка из стомагпобластов и т.п. Такой принцип формирования тела, при
котором бластомеры в ходе дробления становятся основателями клонов специфи
чески дифференцирующихся клеток, можно назвать телобластическим. Развитие
с образованием клеток-основателышц клонов широко распространено у животных.
Существование телобластов свидетельствует о том, что у зародыша имеются генети
чески обусловленные механизмы дробления, которые обеспечивают строгое наследо
вание данным бластомером определенной области цитоплазмы яйца. Распределение
разнородных компонентов цитоплазмы ооцита по зародышу создает своеобразную
мозаику цитоплазматических детерминант, почему такой тип развития и стали на
зывать мозаичным.
Детерминированный характер бластомеров, возникающих в ходе мозаичного
дробления подтвердился в многочисленных экспериментах по изоляции или устра
нению бластомеров и частей зародыша.
91
Оказалось, что зародыш моллюска Patella после содержания в бескальциевой
морской воде распадается на отдельные клетки. После переноса, в нормальную среду
эти изолированные клетки могут продолжить развитие. При этом, например, тро-
хобласты сохраняют нормальный ритм делений, и их потомки, как при нормальном
развитии, образуют группы ресничных клеток. Изолированные макромеры основ
ного квартета, дают энтодермальные клетки, а клетки анимального полушария —
сенсорные (чувствительные) клетки.
У малощетинкового червя Tubifex яйцо в полярных областях имеет два скопле
ния свободной от желтка и богатой митохондриями цитоплазмы (рис. 3-12). Бла
годаря активности цитоскелета яйца эти полярные зоны (рис. 3-13) соединяются в
общую массу, которая в процессе дробления попадает сначала в бластомер CD, а за
тем в макромер D. Если ультрафиолетовым облучением убить клетки, содержащие
полярную плазму, то в ходе развития возникают уродливые зародыши, состоящие
из скопления энтодермальных клеток, прикрытых эктодермальным колпачком. Ес
ли же облучить все клетки, кроме бластомера D, то среди потомков последнего, как
и в норме, образуются первый и второй соматобласты — клетки 2d и 4d, которые со
держат материал полярной плазмы и дают соответственно эктодерму и мезодерму.
Если убить бластомер 2d, то подавляется развитие эктодермы зародыша, тогда как
мезодерма дифференцируется нормальным образом. Более того, за счет потомков
второго соматобласта, дающего в норме мезодерму, возникают типично эктодер
мальные производные: эпидермис, нервная система и передняя кишка. При облуче
нии бластомера 4d или мезодермальных телобластов развитие мезодермы полностью
подавляется, тогда как дифференциация эктодермы происходит нормально. Опыты
на олигохете Tubifex интересны тем, что они обнаружили не только роль полярной
Рис. 3-12. Ооплазматическая сегрегация у аннелид (по: Shimizu, 1999). Вид сбоку.
А — однополюсная сегрегация прозрачной цитоплазмы у полихет: G V — заро
дышевый пузырек. Б — биполярная сегрегация прозрачной цитоплазмы у олигохет.
Стрелками в кружках показано направление движения светлой цитоплазмы, ани-
мальный полюс вверху.
92
Рис. 3-1S. Локализация F-актина (светлые обла
сти) в полярных скоплениях прозрачной цитоплазмы
у малощетинкового червя Tubifex (по: Shimizu, 1999)
Вид сбоку, анимальный полюс вверху.
93
предшественницах хорды и нервной ткани, темно-серая попадает в клетки, дающие
начало энтодерме, а прозрачная цитоплазма оказывается в клетках будущей экто
дермы (рис. 3-14).
Свои выводы Конклин обосновал не только описанием судьбы бластомеров при
нормальном развитии, но и опытами с разрушением и изоляцией бластомеров. Ока
залось, что развитие изолированных бластомеров детерминировано и соответствует
развитию при нормальном эмбриогенезе. Современные исследования в принципе
подтвердили выводы Конклина, хотя и внесли в них ряд уточнений. Показано, что
у зародышей асцидий уже в период дробления происходит экспрессия генов, специ
фических для разных зачатков.
Происходящая в период дробления ооплазматическая сегрегация лежит в основе
явления автономной детерминации (см. том 2 , гл. 2 ), которая наряду с эмбриональ
ной индукцией (см. том 2 , гл. 3), представляет собой один из важнейших модусов
детерминации зачатков зародыша.
Детерминативный и регулятивный типы развития. Традиционно в эм
бриологии различают животных с детерминативным и регулятивным типом раз
вития. При этом под детерминативным (от лат. determinatio — определение) по
нимают развитие, при котором определение судьбы клеток происходит в период
дробления, еще до начала морфогенетических движений клеточных масс. Детерми
нативный характер развития присущ представителям Ctenophora, Lophotrochozoa,
Ecdysozoa и низшим Deuterostomia. Регулятивный тип развития с относительно
поздним определением судьбы зачатков характерен для многих книдарий и выс
ших Deuterostomia. У позвоночных животных, как это было показано московским
эмбриологом А. А. Нейфахом (1962), активность собственного генома и детермина
ция зачатков наблюдаются обычно после завершения дробления, на стадии, когда
зародыш представлен многими тысячами клеток.
У насекомых с синцитиальной структурой зародыша, возникающей при абласти-
ческом типе дробления, образование клонов (за исключением рано обособляющихся
первичных половых клеток) в период дробления невозможно в принципе. Специ
фикация клеток у этих животных происходит только на стадии целлюляризации в
соответствии с позиционными сигналами, установка которых осуществляется еще в
период оогенеза.
Здесь будет уместно заметить, что под детерминацией зачатка понимается со
вокупность процессов, благодаря которым устанавливается (определяется) судьба
его развития. Если речь вдет о детерминации отдельных клеток, чаще использу
ется термин коммитирование (от англ. commitment — арест). Ранний, обратимый
этап детерминации, в течение которого происходит первоначальное программирова
ние судьбы зачатка или клетки, называют спецификацией (от англ. specification —
определение, уточнение).
Естественным следствием ранней детерминации клеток является снижение ре
гулятивных потенций зародыша. Напротив, способность к регуляции должна сохра
няться дольше в развитии тех животных, у которых судьба клеток детерминируется
на относительно поздних стадиях эмбриогенеза. Подразделение на регулятивный и
детерминативный типы развития весьма условно. По мере накопления сведений о
молекулярно-биологических особенностях раннего эмбриогенеза, по-видимому, все
труднее говорить об обособленных типах развития. Скорее, их можно рассматривать
как основные тенденции эволюции эмбриогенеза. При детерминативном типе раз
94
витая ка первый план выступает клеточный механизм формирования тела за счет
специфического паттерна дробления, р ходе которого клетки-родоначальницы кло
нов занимают строго определенное положение в зародыше. Спецификация клеток-
основательниц клонов, которые впоследствии формируют разные зачатки зароды-
in;. коррелирует с ранней экспрессией генов Например, у морских ежей зародыши
в конце дробления представлены мозаикой клеток с разной судьбой. Начинающаяся
сразу же после оплодотворения транскрипция достигает максимального уровне (в
расчете на одно ядро) именно на средних стадиях дробления (Davidson, 2000).
Ограничения потенций формообразования, наблюдаемые при детерминативном
типе развития, в процессе эволюции преодолевались разными способами. Один из
них, по-видимому, состоял в достройке онтогенеза примитивных анцестральных
форм, которые у некоторых современных морских билатеральных беспозвоночных
сохранились в виде личинок (см. том 2, гл. 5 и 10). Другой путь, возможно, был свя
зан с появлением механизмов, которые обеспечивали отсрочку детерминации клеток
зародыша в результате продолжительной паузы транскрипции, вплоть до стадии
бластулы. Благодаря длительному выключению транскрипции в период дробления
происходило в основном накопление клеточной массы. При этом цитоплазматиче
ские детерминанты материнского происхождения могли оказывать свое действие
главным образом после достижения стадии, на которой начинаются морфогенети
ческие движения.
Как считает известный американский исследователь Э. Дэвидсон (2000), если
сг дификация клеток и зачатков у животного происходит в период дробления, то
пространственная организация тела создается на уровне паттерна дробления, т. е.
она предопределяется прежде всего осями яйцеклетки и положением веретен де
лений дробления относительно этих осей. У животных с поздней спецификацией
зачатков, по Дэвидсону, имеются особые системы генетической регионализации за
родыша, которые будут рассмотрены во втором томе.
Прежние представления о причинах ранней детерминации клеток в эмбриогенезе
базировались исключительно на предположении об ооплазматической сегрегации, в
ходе которой происходит асимметричное распределение цитоплазматических фак
торов яйца, инициирующих то или иное направление дифференциации клеток. Оче
видно, однако, что в качестве механизма ранней детерминации бластомеров может
выступать и индуктивное взаимодействие клеток, обусловленное передачей неких
сигналов от клетки к клетке.
Бластула. Процесс дробления завершается образованием бластулы — обычно
однослойного многоклеточного зародыша, состоящего из внешне недифференциро
ванных клеток. В настоящее время мы знаем, однако, что эти клетки во многих
случаях определенным образом специфицированы. Граница, отделяющая стадию
дробления от стадии бластулы достаточно условна. Тем не менее в отношении каж
дого конкретного вида обычно имеются вполне определенные критерии, которые
позволяют не только отличать стадию бластулы от более ранних и более позд
них этапов развития, но и подразделять стадию бластулы на раннюю, среднюю и
позднюю. Разнообразные типы дробления, естественно, дают огромное число разно
видностей бластулы. Бластулы некоторых животных имеют полость — бластоцелъ.
Эта полость носит название первичной, или бэровской полости животного. Клет
ки бластулы поляризуются. Обращенные к полости базальные поверхности клеток
формируют базальную мембрану. Благодаря активности бластомеров бластоцель
95
заполняется жидкостью, объем которой может возрастать и играть определенную
формообразовательную роль.
Однослойный сферический зародыш с обширной первичной полостью называет
ся це.побластулой (рис. 3-15, А). При неравномерном дроблении телолецитальных
яиц бластоцель расположен в анимальном полушарии (рис. 3-15, Б). В этом случае
стенка бластулы, образованная мелкими клетками анимального полушария, фор
мирует крышу, а крупноклеточная стенка вегетативного полушария — дно бластулы.
Если в конце дробления образуется зародыш без полости, его называют морулой (от
лат. morum — тутовая ягода) (рис. 3-15, Д ). В отличие от морулы, представляющей
собой плотный конгломерат бластомеров, в котором имеются и периферические и
внутренние клетки, однослойную бластулу без выраженной полости, состоящую из
высоких цилиндрических клеток, называют стерробластулой (от греч. сттеррос —
твердый, плотный) (рис. 3-15, В, Г). Если полость бластулы занята желточными
включениями, как, например, при развитии насекомых, а на поверхности желтка
располагается слой клеток — бластодерма, зародыш называют перибластулой (от
греч. Kepi- вокруг). При дискоидальном типе дробления образуется дискобласту
ла (рис. 3-15, Е) — уплощенный зародыш с щелевидной подзародышевой полостью
между бластодермой и желтком.
96
что многие параметры существенно изменя
ются на стадии средней бластулы. На гра
фике (рис. 3-16) видно, что после 12-го цик
ла генерационное время резко возрастает. У
Xenopus laevis период между двумя последо
вательными митозами в течение первых 11
циклов составляет немногим более 30 мин, но
на 12-м цикле достигает 70 мин и продол
жает увеличиваться. Естественно, что в это
время происходит уменьшение прироста ДНК
в единицу времени в расчете на одного за
родыша. Одновременно наблюдается измене
ние двигательной активности клеток. Если по Рис. 3-16. Точка перехода (М В ТР) на
движность бластомеров до 11-го цикла выра стадии средней бластулы у амфибий.
1 - генерационное время; 2 - прирост
жается лишь в сокращениях кортекса, то в количества ДН К в единицу времени в рас
период 12-го цикла бластомеры приобретают чете на одного зародыша; 3 — количество
способность к образованию псевдоподий и аме синтезируемой РНК.
боидной подвижности. Синтез РНК, о котором
судили по включению радиоактивного уридинтрифосфата, у X. laevis в течение пер
вых 11 циклов очень слаб; 12-й цикл характеризуется резким возрастанием включе
ния этого предшественника РНК, что связано с началом массового синтеза малых
ядерпых РНК (так называемых «снурп’ов», snurp — small nuclear R N P ) и транс
портной РНК. Чем объясняется это одновременное изменение таких разнородных
параметров, как синтез ДНК, частота клеточных делений, синтез РНК и клеточная
подвижность? Поскольку аналогичное совокупное изменение ряда параметров про
исходит не только в целом зародыше, но и в изолированных бластомерах, логично
предположить существование какого-то механизма клеточной природы, действую
щего одновременно во всех клетках зародыша и выполняющего функцию биологи
ческих часов.
Предположение о том, что в установлении этой ритмики играют роль деления
дробления у X. laevis было отвергнуто опытами с цитохалазином, который подав
лял цитотомию, но не влиял ни на синтез ДНК, ни на время наступления активации
процессов синтеза РНК. Как и в условиях нормального развития, изменения пара
метров синтеза нуклеиновых кислот в опытах с цитохалазином наблюдались лишь
через 6 ч после оплодотворения.
Время изменения свойств бластомеров X. laevis (так называемая точка перехода
на стадии средней бластулы, или МВТР, mid blastula transition point) не зависит
и от синтеза РНК. Если использовать ингибитор синтеза РНК аманитин на стадии
средней бластулы, то синтез РНК подавляется на 80-100%. Если же воздейство
вать аманитином на яйцо Xenopus, то дробление вдет нормально, и изменение его
частоты происходит, как и в контроле, на 12-м цикле.
Наступление точки перехода на стадии бластулы не зависит и от числа прошед
ших раундов синтеза ДНК. Это было показано в эксперименте, в котором на яйцо
накладывали лигатуру и после начала дробления одну половину яйца в течение
двух циклов сохраняли безъядерной. Затем, ослабив лигатуру, пропускали ядро в
недробившуюся половинку яйца. При этом оказалось, что точка перехода в этой
половине наступала на два клеточных цикла позднее. Другими словами, в той по
97
ловине, где дробление начиналось раньше, точка перехода приходилась на 12-й цикл
репликации, а в другой, где дробление задерживалось, на 14-й цикл.
Из этих наблюдений следует, что критическим параметром, контролирующим
наступление точки перехода, может быть ядерно-цитоплазматическое отношение.
В пользу такого предположения говорит и то, что точка перехода в гаплоидных
яйцах наступает на один цикл позднее, тогда как при искусственно вызванной по
лиспермии, увеличивающей исходное количество ДНК примерно в 4 раза, начало
активного синтеза РНК наблюдали на два цикла раньше, чем в норме. Связь между
нормализацией ядерно-цитоплазматического отношения и началом транскрипцион
ной активности развивающегося зародыша впервые была исследована известным
московским эмбриологом А. А. Нейфахом (1926-1997).
Таким образом, наступление точки перехода на стадии средней бластулы у низ
ших позвоночных животных определяется ядерно- цитоплазматическим отношением
или, возможно, соотношением количества ДНК и цитоплазмы. Высказано предпо
ложение, что в яйце имеется цитоплазматический компонент, который служит инги
битором какой-то ключевой реакции, необходимой для активации таких разнород
ных функций, как синтез РНК, клеточное движение и события клеточного цикла,
и вместе с тем имеет сродство к ДНК. Согласно этой гипотезе (гипотеза «истоще
ния») каждое ядро связывает определенное количество ингибитора, и образующиеся
в ходе дробления ядра как бы «титруют» цитоплазму. При увеличении концентра
ции ДНК, обусловленном отсутствием компенсаторного роста бластомеров, по мере
дробления происходит уменьшение концентрации ингибитора до некоего порогового
значения, достижение которого и знаменует собой точку перехода (МВТР.)
Гипотеза истощения нашла свое подтверждение в опытах с инъекцией плазмиды
с дрожжевым геном транспортной РНК в оплодотворенное яйцо X . lac vis. В пери
од дробления транскрипция инъецированной дрожжевой т-РНК прекращалась, что
указывало на наличие ингибитора в цитоплазме ооцита. После прохождения МВТР
синтез РНК восстанавливался. Если же в яйцо инъецировали большие количества
экзогенной ДНК, супрессии транскрипции не происходило, как предполагалось, из-
за связывания ингибитора с избыточной экзогенной ДНК.
Литература
99
Процесс первоначального морфо 1гнетического преобразования бластулы, в ходе
которого возникает пространственное обособление зачатков, дающих при дальней
шем развитии покровы, нервную ткань, пищеварительную систему и — у трехслой
ных животных -мускулатуру и ткани внутренней среды, называется гаструляцией
(от греч. уаатгр — желудок). У двухслойных животных речь идет о двух основных
зачатках — наружном и внутреннем. Наружный листок, или эктодерма (от греч. ех-
тос — вне, снаружи; Бер^а — кожа) является источником покровной и нервной ткани.
Внутренний листок, или энтодерма (греч. evxoc;— внутри, в) дает пищеварительную
систему. У трехслойных животных кроме этих двух зачатков имеется еще средний
листок, или мезодерма (греч. [ieooc — средний, находящийся в середине), которая
образует мускулатуру, соединительную ткань, кровь, целомический эпителий, хря
щевой и костный скелеты.
Гаструляция происходит у всех типов многоклеточных животных за исключени
ем губок, у которых нет пищеварительной системы, образованной энтодермой (по
дробнее см. гл. 6). По завершении гаструляции обычно образуются обособленные в
пространстве клеточные территории — зародышевые листки. Впервые зародышевые
листки были описаны у позвоночных животных. К. Бэр считал, что зародышевые
листки — универсальные структуры, которые возникают на ранних этапах эмбрио
генеза всех позвоночных животных. Важным этапом развития учения о зародыше
вых листках было установление принципа специфичности, согласно которому каж
дый зародышевый листок у разных животных дает одинаковый круг производных.
Позднее А. О. Ковалевский (1871) показал, что формирование зародышевых листков
является общим свойством эмбрионального развития многоклеточных животных,
включая беспозвоночных. Провозглашая идею единства происхождения многокле
точных, он постулировал гомологию зародышевых листков у представителей всех
групп животных.
В соответствии с биогенетическим законом Геккеля утвердилось более чем спор
ное представление, согласно которому гомология зародышевых листков является
следствием того, что они рекапитулируют первичные органы примитивных Metazoa.
Привнесение «рекапитуляционного мотива» в теорию зародышевых листков завело
ее в тупик неразрешимых противоречий.
В основе формирования зародышевых листков лежат различные морфогенети
ческие процессы, в том числе иммиграция, или ингрессия, эпиболия, деламинация
и инвагинация (рис. 4-1). Гаструляция путем иммиграции обычна для стрекающих,
у которых энтодерма возникает в результате выселения клеток из стенки бластулы
внутрь зародыша. Если выселение носит повсеместный характер, говорят о муль-
типолярной иммиграции, если же оно сосредоточено в одной области зародыша, ее
называют униполярной. При гаструляции путем деламинации элементы энтодермы
образуются в результате направленного деления клеток бластулы, митотические ве
ретена которых ориентированы перпендикулярно поверхности зародыша. Моруляр-
ной де.паминацией называют образование энтодермы путем спецификации клеток,
занимающих внутреннюю часть морулы. Гаструляция может происходить и вслед
ствие впячивания эпителиальной стенки бластулы, или инвагинации. Если эптодер-
мальный слой образуется в результате обрастания внутренних клеток поверхност
ными, говорят об эпиболии. У позвоночных при образовании зародышевых листков
обычно имеется сложное сочетание разных типов клеточных движений.
100
Рис. 4~1■ Типы морфогенетических процессов, наблюдаемые при гаструляции
(по: О.М. Иванова-Казас, 1995).
А — мультиполярная иммиграция; Б — униполярная иммиграция; В — моруляр-
ная делами нация; Г — клеточная деламинация; Д — инвагинация; Е — эпибол ия.
Стрелками показано направление движения клеток.
101
мый сложный состав зародышевых листков. Например, в составе первичной кишки
зародыша амфибий обнаруживается материал не только будущей энтодермы, но и
клетки-предшественницы мезодермы.
По-видимому, нет и достаточных теоретических оснований для предположения,
что спецификация клеток в раннем эмбриогенезе должна быть напрямую связана
с морфогенетическими движениями. Наоборот, имеются многочисленные данные,
которые свидетельствуют о том, что спецификация клеток представляет собой са
мостоятельный класс явлений и что она, не будучи жестко связанной с морфогене
тическими движениями в раннем эмбриогенезе, может реализоваться как в период
дробления, так и после него. Представление о первичной сопряженности формиро
вания зародышевых листков и цитодифференциации ошибочно.
Наличие зародышевых листков в онтогенезе всех многоклеточных животных за
исключением губок объясняется отнюдь не тем, что в онтогенезе этих животных
происходит рекапитуляция процессов, характерных для некой анцестральной фор
мы. Оно может быть понято с учетом того, что обособление клеток в виде зароды
шевых листков — важный элемент и универсальный инструмент формообразования.
Гаструляция не является каким-то уникальным и высоко специфическим морфоге
нетическим процессом. Характерные для гаструляции перемещения клеточных пла
стов или миграции мезенхимы — это частное проявление общих морфогенетических
принципов. Перемещения пластов ни в коей мере не зависят от того, являются ли
они гетерогенными, содержащими различные презумптивные зачатки, или же одно
родными, дифференцирующимися в ходе или после завершения гаструляции.
Универсальные механизмы эпителиального формообразования, равно как и ме
ханизмы, обеспечивающие миграцию мезенхимы гаи эпиболию, при которой один
слой клеток распространяется по поверхности другого слоя, возникли в эволюции
независимо от гаструляции. Разнообразные морфогенетические движения, которые
обеспечивают гаструляцию двухслойных и трехслойных животных, существовали
уже у губок, хотя у них гаструляция отсутствует. Нельзя не отметить, что у тех
стрекающих, у которых гаструляция происходит путем иммиграции или делами-
нации, эпителиальный морфогенез с его инвагинациями и эвагинациями широко
~Т"
ЭКТОДЕРМА МЕЗОДЕРМА ЭНТОДЕРМА
Производные эктодермы: Производные мезодермы: Производные энтодермы:
102
—►[]—*E S> —►О —►CD
Литература
104
Рис. 5-2. Непрямое развитие
у насекомых (по: Правдин, 1984).
Последовательные стадии развития
крыжовниковой пяденицы Abraxas
grossul lariata.
1 — гусеница; 2 — куколка; 3 —
имаго.
1
О-
105
Личиночная стадия может возникнуть и как вставочная фаза в онтог енезе, имев
шем ранее установку на развитие дефинитивной формы (рис. 5-4). Адаптивное зна
чение такой вставки, по-видимому, состоит в разделении фазы репродукции, свой
ственной половозрелой форме, и фазы накопления энергетических ресурсов, которое
становится теперь прерогативой главным образом личинки. Появление личиночной
фазы может расширить ареал обитания вида благодаря освоению личинкой допол
нительных экологических ниш. Личинок, возникающих в результате видоизменения
прямого развития, будем называть вторичными. У подобного рода личинок часто
имеются высокоспециализированные органы, характерные только для этой стадии
онтогенеза.
Эмбриональный Дефинитивная
период стадия
Анцестральная
форма
I
Производная
форма
Эмбриональный Личинка Дефинитивная
период стадия
106
id а
Личинка с хюстом
Утрата питания с
помощью ресничек
■ ■ Диплеврупа
Ресничный шнур,
окаймляющий роговую
впадину
107
ферация и спецификация этих резервных клеток подпадала под действие вновь
возникавших генетических систем управления. Можно предположить, что подоб
ные резервные клеточные популяции могли формироваться, например, в результате
временной блокировки дифференциации первичных половых клеток. Исходно такая
форма онтогенеза с отсроченной спецификацией части клеток по-видимому, имела
некоторые преимущества перед анцестральной, поскольку способствовала накопле
нию энергетических ресурсов, необходимых для гаметогенеза. Не являются ли от
крытые недавно белки полярных гранул, блокирующие процессы транскрипции в
первичных половых клетках ряда беспозвоночных, отзвуком этих событий далекого
прошлого?
В природе наблюдается обратная зависимость между числом производимых
ооцитов и количеством запасенного в них желтка. Многие животные производят
огромное количество яиц относительно бедных желтком. Так, самки некоторых мор
ских ежей за год продуцируют примерно 400 млн яиц. Запасов питательных веществ
в япце часто хватает лишь для формирования очень просто устроенной личинки.
В этих случаях именно активное питание создает предпосылки для постепенного
усложнения личинки. В онтогенезе многих животных наблюдается последователь
ный ряд сменяющих друг друга личиночных форм. Наиболее продвинутые в разви
тии личинки превращаются в ювенильные формы животных. Например, у полихет
в результате спирального дробления образуется личинка трохофора, которая сег
ментируется и становится метатрохофорой. В ходе дифференциации метатрохофо-
ра принимает червеобразный вид и превращается в нектохету, ювенильную форму
червя. За счет пролиферативной активности в зоне роста нектохеты и в результате
сегментации растущего тела происходит многократное увеличение размеров живот
ного, которое постепенно приобретает дефинитивные черты.
Функции, выполняемые личинками, разнообразны. Одна из функций состоит в
обеспечении последующего развития энергией. Среди пелагических личинок беспо
звоночных животных различают лецитотрофные и планктотрофные формы. Энер
гетическим ресурсом лецитотрофных личинок (от греч. ХёхпЭос — яичный желток;
тросрос — кормилец) служит желток, запасенный в яйце. Планктотрофные личинки
питаются, поглощая главным образом фитопланктон. У плапктотрофных личинок
имеются особые личиночные органы -ресничные кольца (трохофора) или реснич
ные шнуры (диплеурула), с помощью которых пищевые частицы направляются в
область ротового отверстия. Питание личинок может происходить и за счет раство
римых предшественников макромолекул, поглощаемых из морской воды непосред
ственно тканями личинки (Дондуа, Федорова, 1986; Jackie, 1995).
Наличие планктотрофной личинки и возможность раннего перехода к активному
питанию позволяет обойтись минимальными запасами желтка в яйце, что особенно
валено при отсутствии у животного специализированных гонад. Стратегия разви
тия, направленная на скорейшее включение механизма активного питания, позво
ляет производить большое количество яиц с умеренными запасами желтка и других
энергоемких веществ и органелл. У лецитотрофных личинок развитие пищевари
тельной системы, напротив, может запаздывать. Так, у бластулоподобных личинок,
паренхимул и планул низших Metazoa структурно оформленная пищеварительная
система отсутствует.
Важной функцией личинок является расселение особей по ареалу, а также (у
бентосных форм) выбор субстратов, подходящих для дальнейшего развития. Адап
108
тивный характер распространения личинок за пределы ареала, занимаемого роди
тельскими организмами, обусловлен и тем, что расселение создает предпосылки для
генетического взаимодействия с представителями других популяций и интенсифи
цирует, таким образом, процесс формирования генетического разнообразия. Реа
лизация этой функции становится возможной благодаря возникновению разнооб
разных органов движения, развитию элементов нервной системы и формированию
специализированных клеток или органов, обеспечивающих прикрепление личинки
к субстрату.
У многих паразитических животных ли
чинка осуществляет выбор хозяина. Ли
чинка моногенетических сосальщиков — он-
комирацидий - снабжена ресничными поя
сами, обеспечивающими двигательную ак
тивность (рис. 5-6). Онкомирацидий име
ет мозговой ганглий, глаза, кишечник, про
тонефридии. С помощью прикрепительного
аппарата, несущего разнообразные крючки,
плавающий мирацидий закрепляется на по
верхности тела головастика, а позднее пре
терпевает метаморфоз и проникает в ткани
хозяина (рис. 5-7). У дигенетических сосаль
щиков в ходе сложного жизненного цикла
образуются разные формы личинок, обеспе
чивающих смену хозяев. Из попавшего в вод
ную среду яйца образуется ресничная ли
чинка — мирацидий (от греч. ^арахюоБ^с —
детский). На переднем конце личинки распо
лагается хоботок со стилетом, глазки и нерв
ный ганглий. Мирацидий проникает в про
межуточного хозяина (обычно моллюски) и
превращается в спороцисту, у которой ор
ганы мирацидия редуцируются. Особые ге
Рис. 5-6. Онкомирацидий моногенетиче- неративные клетки спороцисты дают начало
ского сосальщика Polystomum integerrimum новому партеногенетическому поколению —
(по: Halkin, 1901).
редиям (по имени Ф.Реди), которые остают
1 — ротовое отверстие; 2 — светочувстви
тельные органы; 3 — глотка; 4 — протоне ся в первичном хозяине и за счет своих гене
фридий; 5 — кишка; 6 — прикрепительный ративных клеток образуют новое личиноч
диск; 7 - ресничные пояса. ное поколение — церкарии (от греч. херхос —
хвост). Церкарии имеют характерный хво
стовой придаток, две присоски, иногда стилет и глазки (рис. 5-8). Церкарии покида
ют первичного хозяина и после периода свободной жизни в водной среде проникают
в ткани вторичного промежуточного хозяина, где и претерпевают очередной ме
таморфоз. При поедании промежуточного хозяина личинка паразитического червя
попадает в пищеварительный тракт окончательного хозяина, где и превращается в
дефинитивное половозрелое животное.
Превращение личинки во взрослую форму, или метаморфоз (от греч. ^lexqiop-
фосо — преображать, превращать в другой вид) предполагает замену дифференци-
109
Рис. 5-7. Метаморфоз онкомирацидия Polystomum integerrimum
(по: Быховский, 1957).
110
при образовании дефинитивной формы животного. В некоторых случаях при мета
морфозе происходит отторжение личиночных структур. Например, у немертин из
отряда Heteronemertini имеет место некротический метаморфоз (рис. 5-9). У этих
животных дефинитивное тело образуется за счет особых эктодермальных впячи-
ваний — имагинальных дисков, которые погружаются внутрь личинки и, срастаясь
между собой, формируют новый дефинитивный кожный покров. Молодая немер-
тина, сформировавшаяся внутри пилидия, покидает покровы личинки и съедает
их. Глубина метаморфоза зависит от уровня специализации личиночных тканей и
органов: чем более специализирована личинка, тем более глубокие преобразования
происходят при ее превращении.
111
дни, и неотению, или задержку развития соматических органов. Широко известна
неотения амбистом — хвостатых амфибий, имеющих половозрелых личинок — аксо
лотлей. Задержка развития соматической сферы взрослых животных у амбистом
связана с пониженной функцией щитовидной железы. Популяции аксолотлей могут
поддерживать свое существование без достижения конечной фазы развития.
Литература
113
Lophotrochozoa Ecdysozoa Deuterostomia
II
s
eо
|E 3&§k
H iilii
i S
йhй оrigi
О .С Ц И
R ca
С О <D R О
е й ? s e e d 14
1леиие/-к 1 О Настоящая
(Линька хорда
for из r S Анус из
onacronopaV^y- \__у ода-----
[астонора
Двулучевая
радиальная
( Асимметрия______ - А Трехслоиность,
и б ш«латеральная
ж ------------симметрия
Двуслойностъ,
радиальная симметрия
НАСТОЯЩИЕ
МНОГОЮШТОЧНЫЕ
КОЛОНИАЛЬНЫЕ
ПРОТИСТЫ
114
бластопора (первичного рта), возникающего в процессе гаструляции. У Ecdysozoa
и Lophotrochozoa также имеются эктодермальные, мезодермальные и энтодермаль-
ные производные, но эти группы относятся к первичноротым животным, у которых
рот возникает на месте бластопора.
Стрекающие (Cnidaria) — животные с двумя листками: эктодермой и энтодер
мой. В онтогенезе губок дифференциация клеточных элементов отличается боль
шим своеобразием: у них нет энтодермы, а следовательно, нет и зародышевых лист
ков, хотя некоторые исследователи, стремясь подчеркнуть единство всех Metazoa,
ошибочно сближают губок с двухслойными животными.
В пределах данной книги нет необходимости, да и возможности, описать все
многочисленные типы развития, присущие современным многоклеточным живот
ным. Мы ограничимся общей характеристикой развития лишь некоторых основных
типов. При этом с учетом задачи учебника, предпочтение будет отдано тем группам,
представители которых стали модельными объектами биологии развития.
За последние двадцать лет вновь усилился интерес к проблемам эволюцион
ной эмбриологии. Стало очевидным потенциальное значение современной биоло
гии развития для решения общих проблем эволюционной биологии. Исследование
молекулярно-генетических механизмов эмбрионального развития обнаружило свое
образный парадокс, суть которого состоит в том, что все многообразие форм разви
тия животных, принадлежащих к морфологически различным типам, часто контро
лируется и направляется генами, структура которых в высшей степени консерватив
на. Современная биология развития подошла к решению вопроса о закономерностях
эволюции генетических механизмов онтогенеза. Раздел биологии развития, который
исследует эту проблему, называют эволюционной биологией развития. Очевидно,
что вопрос о том, как эволюция молекулярно-генетических систем, контролирую
щих индивидуальное развитие, преобразуется в эволюционные изменения морфо
логии животных, является ключевым для понимания проблем макроэволюции, т.е.
имеет общебиологическое значение.
В самом общем виде можно сказать, что в основе эволюции форм лежит воз
никновение новых программ развития. Суть этих процессов состоит в мутацион
ном, наследуемом изменении многоступенчатой генетической программы, которая
обеспечивает формирование определенного фенотипа. Если естественный отбор со
храняет видоизмененный фенотип, сохраняется и новая программа развития. Если
внутривидовые эволюционные изменения морфологии требуют, по крайней мере,
трех событий — мутации, репрограммирования и отбора, то эволюция, выходящая
за пределы вида, нуждается, кроме того, и в репродуктивной изоляции (W. Arthur,
2002).
В первом томе учебника основное внимание обращено на морфологическую ха
рактеристику разных типов развития, В отдельных случаях делается попытка оце
нить возможное значение видоизменений онтогенетических путей становления фе
нотипа для процессов макроэволюции. Более глубокое рассмотрение проблем эво
люционной биологии развития возможно после ознакомления с основными механиз
мами генетического контроля над развитием и их эволюцией, представленными во
втором томе.
115
Глава 6. ГУБКИ (PORIFERA)
116
10 9 8
Рис. 6-3. Схема строения и клеточный состав губок
(по: Вощ у-Esnault, Rutzler, 1997).
1 — экзопинакоцит; 2 — актиноцит; 3 — склероцит: 4 — археоцит; 5 — эндопинако-
цит; 6 — колленцит; 7 — хоаноцит; 8 — спонгин; 9 — базопинакоцит; 10 — сферульная
клетка; 11 — коллаген.
117
разная стратегия снабжения будущего зародыша питательными веществами у неко
торых губок состоит в том, что вспомогательные клетки образуют своего рода ассо
циацию с ооцитом, и их содержимое используется уже в ходе эмбриогенеза (рис. 6-4,
Г). В период вителлогенеза ооциты достигают дефинитивных размеров, которые у
разных видов варьируют от 40 до 500 мкм. Принято считать, что ооциты губок не
имеют яйцевых оболочек, хотя, по крайней мере, у одного вида ( Tetilla japonica)
недавно была описана типичная желточная оболочка.
У некоторых губок оплодотворение происходит во внешней среде, куда половые
клетки выводятся через оскулюм. Чаще, однако, эмбриональное развитие идет в
тканях материнского организма. Эмбриональное развитие живородящих губок про
исходит в особых капсулах — фолликулах, формирующихся в конце вителлогенеза
уплощенными соматическими клетками различной природы.
У всех изученных к настоящему времени видов губок дробление полное. Оно
может быть равномерным и — реже — неравномерным. Процесс дробления заверша
ется образованием бластулы.
У известковых губок подкласса
Calcinea и, возможно, некоторых де-
моспонгий бластула имеет выражен
ную полость и называется целобла-
стулой (от греч. xoiXoc— имеющий
полость; рХаотос - зародыш) (рис. 6-5,
А). Иной характер строения у личин
ки Calcinea — калъцибластулы. Клет
ки кальцибластулы снабжены жгути
ками, обеспечивающими ее подвиж
ность. Благодаря ингрессии клеток
полость кальцибластулы заполняется
клетками (рис. 6-5, Б). На этой стадии
личинка прикрепляется к субстрату и
распластывается по нему (рис. 6-5, В).
Рис. 6-5. Схема развития Calcinea Между периферическими клетками и
(рис. А. В. Ересковского). внутренней клеточной массой возни
А — целоблаетула; Б — личинка кальцибластула;
В — метаморфоз.
кают лакуны. При этом находящиеся
на поверхности клетки уплощаются и
дифференцируются как гпшакоциты, а внутренние дают начало хоаноцитам и скле-
робластам. Предполагается, что клетки прикрепившейся личинки еще не коммити-
рованы и дифференцируются в соответствии с занимаемым положением.
У известковых губок из подкласса Calcaronea развитие идет иным путем
(рис. 6- 6 ). У них дробление завершается образованием бластулы, уже состоящей
из клеток двух типов — микромеров, которые формируют жгутики, и зернистых
макромеров. При этом на стадии ранней бластулы— стомобластулы (от греч.
oxojia — рот; рХаотос — зародыш) между макромерами остается отверстие — фиало-
пор (от греч. cpiccXr)— чаша; тсорос — проход). Микромеры имеют жгутики, обращен
ные внутрь полости бластулы (рис. 6- 6 , А). На следующем этапе, благодаря со
гласованной амебоидной активности клеток материнского организма и зернистых
клеток зародыша, происходит выворачивание бластулы через фиалопор, так назы
ваемая инверсия бластулы, или экскурвация (рис. 6- 6 , Б). В результате этого про-
118
Рис. 6-6. Схема развития Caicaronea.
(рис. А. В. Ересковского).
А — стомобластула; Б — экскурвация; В — личинка амфибластула.
цесса образуется амфибластула (от греч. ajicpi — с двух сторон; рХиотос зародыш),
состоящая из двух по-разному дифференцированных областей. Передняя область
образована столбчатыми клетками со жгутиками, обращенными во внешнюю среду,
а задняя — крупными округлыми гранулярными клетками (рис. 6- 6 , В). Амфибла
стула прикрепляется к субстрату передним концом, клетки которого теряют свои
жгутики, и принимает вид уплощенного диска. Из зернистых клеток задней области
личинки образуются пинакоциты. Клетки внутренней массы, которые возникают из
погружающихся внутрь клеток переднего конца личинки, дифференцируются на
периферические и центральные, периферические клетки образуют мезохил с ха
рактерными для него элементами — склеробластами и спикулами, а центральные —
дают хоанодерму. После формирования пор и оскулюма возникает трубкообразная
молодая губка— олинтус (от греч. бХи'йос — незрелый инжир).
У многих Demospongiae (рис. 6-7) в результате неупорядоченного хаотическо
го дробления формируется стерробластула (от греч. атеррос— плотный; рХасттос —
зародыш), или морула (рис. 6-7, А). В дальнейшем она трансформируется в удли
ненную вдоль передне-задней оси личинку — паренхимулу, покрытую жгутиковыми
клетками. Иногда на заднем полюсе или на обоих полюсах личинки жгутиковые
клетки отсутствуют (рис. 6-7, Б). Внутри личинки дифференцируются амебоциты,
а также иные типы клеток, характерные для взрослых особей, в том числе секретор
ные клетки и склеробласты, образующие спикулы скелета. У личинок пресноводных
губок (бадяг) имеются хоаноциты, которые уже на этой стадии могут формировать
хоаноцитные камеры (6-7, В). Паренхимулы прикрепляются к субстрату передним
119
г
120
По-впдимому, в онтогенезе губок хоаноциты могут возникать из разных источников,
в том числе из археоцитов. Так или иначе имеющиеся данные не дают оснований
говорить о наличии у губок зародышевых листков, как особых клеточных популя
ций, дающих начало определенным тканевым образованиям, которые можно было
бы назвать эктодермой или энтодермой.
Наиболее продвинутым в эволюционном отношении следует считать развитие
Homoscleromorpha, выделяемых ныне в ранг отдельного класса (Ересковский, 2002).
При анатомической простоте организации, только эта группа губок имеет настоя
щую базальную мембрану, в состав которой входят тенасцин, ламинин и коллаген
IV типа , т. е. обладает признаками истинных тканей Eumetazoa. Базальная мем
брана подстилает хоанодерму и пинакодерму губки, а в период размножения она
подстилает также сперматоцисту, фолликул яйца и зародыша. Базальная мембрана
характерна и для жгутикового эпителия личинок этих губок.
Для развития Homoscleromorpha характерны следующие основные особенности.
Сперматозоиды имеют акросому. Дробление полное равномерное, неупорядоченное,
приводящее к формированию равномерной неполяризованной морулы (рис. 6- 8 , А).
В результате своеобразной мультиполярной эмиграции, в ходе которой происхо
дит центробежный выход клеток морулы на периферию, образуется целобластула
(рис. 6- 8 , Б). В конце стадии формирования личинки проявляется передне-задняя
полярность. Личинка цинктобластула (от лат. cinctus — опоясанный) состоит из
однослойного жгутикового эпителия, ограничивающего обширную центральную по
лость (рис. 6- 8 , В). Для цинктобластулы характерен пояс жгутиковых клеток с внут-
122
продолжается в течение периода, неблагоприятного для жизни губки, происходит
прорастание геммулы. Перед вылуплением тезоциты многократно делятся, теряя
при этом свои включения и трансформируются, таким образом, в популяцию ги-
стобластов. После разрушения оболочки в области микропиле гистобласты мигри
руют из капсулы и образуют двуслойную пинакодерму. В образовавшийся мешочек
выселяются тезоциты, которые дают начало археоцитам и склеробластам, форми
рующим мезохил новообразованной губки. На конечных этапах развития молодой
губки из археоцитов возникают хоаноциты, образующие хоаноцитные камеры. Ги
стобласты принимают участие в образовании внутренних каналов губки (рис. 6- 10 ).
123
дуальные клетки, и эпителиальные пласты. Первое наблюдается в случае ингрес-
сии (погружение клеток с поверхности внутрь) или в случае эмиграции (вселение
клеток из глубинных слоев в наружные). Наблюдаемые в раннем онтогенезе губок
элементы морфогенетических процессов, в том числе эпителиальные морфогенезы,
характерны для всех Metazoa. По-видимому, именно общность механизмов морфо
генетических процессов определяет внешнее сходство личинок губок и стрекающих.
Итак, мы можем констатировать, что у губок имеется весь спектр элементар
ных морфогенетических движений, которые характерны и для двухслойных, и для
трехслойных животных Это дает основание предположить, что появление систем
клеточной адгезии и механизмов ее пространственного и временного контроля было
необходимой предпосылкой возникновения всех Metazoa.
Литература
125
Рис. 7-1. Микроскопическая ана
томия стенки Hydrozoa (по: Ruppert,
Barnes, 1994).
1— эпидермис; 2 — книдоциль; 3 —
нематоциста; 4 — книдоцит; 5 — рес
ничный рецептор; 6 — эпителиально-мы
шечная клетка; 7 — интерстициальная
клетка; 8 — сенсорная клетка; 9 — ней
рон; 10 — продольные мышечные фиб
риллы; 11 — мезоглея; 12 — базальная
мембрана; 13 — гастродермис; 14 —
кольчатые мышечные фибриллы; 15 —
ядро; 16 - железистая клетка; 17 — гра
нулярный секрет; 18 — ресничка; 19 -
формирующаяся пищевая вакуоль; 20 -
гастродермально-мышечная клетка.
126
у представителей отряда Hydrida). Стадия медузы отсутствует и у кораллов, у ко
торых и половое и бесполое размножение обеспечивается полипами. Однако есть
формы, представленные только медузами. Так, в жизненном цикле животных из
отряда Trachylida нет полипоидной фазы.
Часто полипы образуют колонии с общей гастроваскулярной полостью. В коло
нии Hydrozoa имеются разные типы полипов, или зооидов (см. рис. 7-2). Большая их
часть представлена гастрозооидами, или питающими полипами; у некоторых видов
образуются дактилозооиды, выполняющие благодаря обилию книдоцитов (от греч.
xvi6r] — крапива) защитную функцию. Репродукцию осуществляют гонозооиды, или
медузоидные почки, производящие гаметы. Медузоиды либо отделяются от колонии
и превращаются в медуз, либо остаются в составе колонии в виде гонофоров.
Половые клетки образуются из интерстициальных клеток. Как показали иссле
дования, выполненные на гидрах, среди i-клеток имеется особая популяция, комми-
тированная как линия половых клеток. В процессе оогенеза важную роль в снаб
жении ооцита питательными веществами играют фагоцитоз и слияние клеток. Для
представителей данного типа характерны временные гонады, хотя у Scyphozoa об
разуются постоянные гонады.
Оплодотворение у стрекающих обычно наружное. Тем не менее во всех классах
стрекающих имеются виды с внутренним оплодотворением, вплоть до своеобразной
копуляции, описанной у актинии Sagartia. В последнем случае педальные диски
родительских особей образуют общую камеру, в полость которой выводятся гаметы
и в которой оплодотворенные яйца развиваются до стадии личинки.
Два первых деления дробления меридиональные, а третье — экваториальное. Об
ращает на себя внимание то, что борозды делений дробления не кольцевые, а вре
зающиеся: они начинаются у одного полюса оплодотворенного яйца и постепенно
распространяются к противоположному, где связь между бластомерами наблюдает
ся сравнительно длительное время (рис. 7-3).
Стрекающие отличаются большим разнообразием типов дробления. При полном
и равномерном дроблении часто наблюдается радиальный характер расположения
бластомеров. У некоторых видов, однако, связь между бластомерами слабая, так что
они могут изменять свое положение относительно других клеток. Если происходит
вращение бластомеров, то могут возникать фигуры, напоминающие по внешнему
виду спиральное дробление, т. е. возникает псевдоспиральность (см. рис. 7-3). В
других случаях дробящийся зародыш теряет определенность геометрических форм
(анархический тип дробления, рис. 7-4). При неравномерном дроблении расположе
ние неупорядочено и рисунок его изменчив. В яйцах, богатых желтком, цитотомия
может запаздывать. У некоторых видов центральная масса желтка вообще не де
лится. В этом случае дробление становится поверхностным.
Разнообразие форм дробления сказывается и на структуре бластулы. У стрека
ющих описано несколько типов бластул: полая целобластула, образованная одним
рядом клеток, которые окружают обширный бластоцель; плотная стерробластула,
также образованная одним рядом клеток, но не имеющая бластоцеля, морула и,
наконец, перибластула, для которой характерно расположение внешнего слоя кле
ток на поверхности желточной массы. Клетки целобластулы снабжены жгутиками,
которые обеспечивают ее движение.
На следующем этапе развития происходит гаструляция, в ходе которой у стрека
ющих образуются два основных пласта тела: наружный пласт, или эктодерма (от
127
Рис. 7-3. Дробление и формирование бластулы у Rathkea fasciculata
(по: Мечников, 1886)-
А - яйцо; Б - стадия 2 клеток; В — вторая борозда дробления; Г — ста
дия 4 бластомеров; бластомер слева еще не завершил деление; Д , Е — ложно
спиральное дробление, обусловленное поворотом делящегося бластомера; Ж ,
3 — бластула; И — разрез через бластулу.
128
греч. ехтос; -в н е , сн а р уж и ; бер^а— кож а, ш к у р а ), и внутренний — энтодерма (греч.
evtoc — внутри, в).
У стрекающих животных описаны разнообразные клеточные механизмы форми
рования пластов тела. Широко распространена ингрессия (от лат. ingressus — вступ
ление, вхождение), или иммиграция клеток. При ингрессии некоторые клетки стен
ки целобластулы утрачивают жгутики, приобретают амебоидную подвижность и
вселяются в полость бластулы, заполняя ее полностью. Различают униполярную ин-
грессию, которая происходит в области зародыша, где впоследствии закладывается
ротовое отверстие, и мулътиполярную ингрессию, при которой вселение происходит
по всей поверхности зародыша.
Заселение полости бластулы отдельными клетками может происходить и в ре
зультате ориентированных делений клеток стенки бластулы. Этот процесс называют
деламинацией (от лат. de — отделение, lamina — пластинка, пласт). Клетки, попада
ющие после деления в полость бластулы, формируют энтодерму. Погружение клеток
стенки бластулы может происходить и в составе эпителиального пласта. Такой тип
эпителиального морфогенеза называют впячиванием, или инвагинацией (от лат. in-
vaginatio — впячивание).
Образование эктодермы и энтодермы у мо-
рулы происходит в результате реаранжировки
клеток. Клетки, занимающие внутреннюю об
ласть зародыша, дают энтодерму, клетки внеш
него слоя - эктодерму. Это разделение пластов
называют морулъной, или вторичной делами
нацией.
Наконец, у многих видов описана эпибо-
лия (от греч. етароХг] - облачение, покров), или
обрастание крупных макромеров делящимися
микромерами. Широко представлены также и
смешанные типы обособления пластов.
В результате процесса гаструляции воз
никает обычно радиально-симметричная дву
слойная личинка планула (от греч. TcXavoc —
блуждающий) (рис. 7-5). Наружный эктодер
мальный слой планулы образован ресничны
ми клетками. Между эктодермой и энтодермой
различается тонкий слой внеклеточного мат
рикса — мезоглея. На стадии планулы происхо
дит дифференциация клеточных пластов. Так,
в составе эктодермального эпителия появляют
ся эпителиально-мышечные, железистые и сен Рис. 7-5. Планула Hydrozoa
сорные клетки. В промежутках между эпите (по: Martin et al., 1983)
1 — эктодерма; 2 - сенсорная клет
лиальными располагаются интерстициальные ка; 3 — энтодермальная эпителиально
клетки и их производные, в том числе стре мышечная клетка; 4 — нервная клетка;
кательные клетки. Местом образования интер 5 — железистая клетка; 6 — эктодермаль
стициальных клеток служит энтодерма, где ная эпителиально-мышечная клетка; 7 —
мезоглея; 8 — интерстициальная клетка;
и происходит их коммитирование. В энтодер- 9 — энтодермальная клетка; 10 — немато-
мальном эпителии образуются пищеваритель бласт; 11 — нематоцит.
129
ные и железистые клетки. Плапула имеет удлиненную форму и слегка расширена
на переднем конце, который является преемником вегетативной области дробящего
ся зародыша. Обычно планулы лецитотрофны и необходимое для их жизни питание
в виде желточных зерен, запасенных в период оогенеза, находится в их клетках. У
некоторых Anthozoa описаны планктотрофные планулы, у которых после заверше
ния инвагинации на месте бластопора образуется ротовое отверстие.
Преобразование личинки во взрослую форму носит название метаморфоз В хо
де этого процесса личинка прикрепляется к субстрату передним концом или боко
вой поверхностью. Обычно тело планулы сплющивается в продольном направлении
и превращается в диск, на котором вырастает полип, соединенный с диском сте
бельком (рис. 7-6). У этого первичного гидранта — р о д о н а ч а л ь н и к а колонии -- обра
зуются щупальцы и ротовое отверстие. В других случаях планула превращается в
гидроризу — распластанное по субстрату нитевидное тело, на поверхности которого
формируются полипы. Колониальные формы возникают в результате почкования
первичных гидрантов.
Иногда формирование структур полипа начинается очень рано, еще на стадии
плавающей личинки. В этих случаях личинка сжимается по передне-задней оси.
При этом передняя (будущая аборальная) область уплощается, а задняя (будущая
130
оральная) принимает вид конуса, на вершине которого образуется отверстие с окру
жающим его венчиком щупалец. На аборальном полюсе формируется стебелек. Воз
никший свободный полип, или актинула (от греч. c / k t l v o c — луч) вскоре оседает и
прикрепляется к субстрату (рис. 7-7).
131
может привести к формированию подвижной личинки, характерной для полового
размножения. Это явление, по-видимому, можно расценить как свидетельство су
ществования относительно автономных модульных подпрограмм развития, которые
могут инициироваться как при половом, так и при бесполом размножении. Проверка
этого предположения требует специального исследования.
7 2, Гребневики (Ctenophora)
Гребневики, или ктенофоры (от греч. xteic — гребень; срЕрсо— нести) образуют
обособленный тип животных, в составе которого насчитывается около 200 видов.
Гребневики, как и стрекающие, относятся к радиальным животным (Radiata). В
то же время они характеризуются двулучевой (бирадиальной) симметрией. На по
верхности тела у гребневиков имеется восемь продольных рядов гребных пласти
нок. Гребневики — двуслойные животные. Поверхность тела покрыта эпидермисом,
поверхность кишки— гастродермисом. Сильно развит внеклеточный матрикс, об
разующий толстый слой мезоглеи. Имеются специализированные мышечные эле
менты и мезенхима, которые, впрочем, не образуют выраженного мезодермального
слоя. Тело вытянуто вдоль орально-аборальной оси. Имеются две основные плоско
сти симметрии: сагиттальная, или глоточная, совпадающая с плоскостью глотки, и
перпендикулярная ей латеральная, или щупальцевая, проходящая через основания
щупалец. Различают и третью, анальную, плоскость симметрии, которая проходит
через диагонально расположенные анальные поры.
На оральном конце расположена глотка, имеющая эктодермальную выстилку.
Глотка открывается в эптодермальный желудок с меридиональными каналами. Осо
бые, анальные, каналы соединяют желудок с анальными порами. Имеется прими
тивная нервная система. На аборальном конце расположен апикальный сенсорный
орган со статоцистом, который воспринимает направление силы тяжести и коорди
нирует двигательную активность гребных пластинок.
Обычно гребневики — гермафродиты. Мужские и женские гонады попарно рас
полагаются вдоль меридиональных энтодермальных каналов (рис. 7-8) под рядами
гребных пластинок. Из половых желез гаметы поступают в половые синусы и затем
выводятся через половые протоки. Возникновение у гребневиков постоянных гонад,
в частности яичников, по-видимому, создало необходимые условия для формирова
ния яйцевых клеток с локализованными в пространстве сигнальными молекулами,
которые обеспечивают раннюю спецификацию разнообразных клеточных линий.
Яйца у гребневиков центролецитального типа: на поверхности расположена экто
плазма, богатая митохондриями и элементами эндоплазматической сети. Эктоплаз
ма окружает массив богатой желточными включениями эндоплазмы. Ядро распо
ложено эксцентрично, занимая пограничное между экто- и эндоплазмой положение.
Размеры яиц у разных видов варьируют от 130 до 1200 мкм. Яйцо одето желточной
оболочкой, которая в период овуляции разбухает, и студенистой оболочкой, выраба
тываемой секреторными клетками яйцевода. У некоторых видов описана диссогения
(от греч. бю а ос—двойной; y£vo<; — род), при которой половозрелость индивидуума
достигается дважды — в личиночном и во взрослом состоянии. Размеры яиц при
этом заметно различаются: личинки продуцируют мелкие яйца, взрослые — круп
ные, диаметр которых в 2-3 раза больше диаме тра личиночных яиц.
132
Рис. 7-8. Расположение и структура муж
ских и женских гонад у гребневиков.
А — в левой части рисунка видны ряды
гребных пластинок; в правой — расположенные
под ними гонады (по: Martindale, Henry, 1997):
Т -Т — тентакулярная плоскость; S-S - сагит
тальная плоскость. Б — поперечный разрез че
рез меридиональный энтодерм альный канал и
расположенные над ним гонады (по: Freeman,
Reynolds, 1973). 1 — яичник; 2 — семенник; 3 —
щупальце; 4 гребные пластинки; 5 — субтен-
такулярный меридиональный канал; 6 — суб-
сагиттальный меридиональный канал; 7 — эпи
дермис; 8 — гонопор; 9 — стенка семенника;
10 — сперматиды; 11 — сперматозоиды; 12 — те
стикулярный синус; 13 — сперматогонии; 14 —
сперматоциты; 15 — пищеварительные клетки;
16 — ресничные клетки гастродермы; 17 — ме
зоглея; 18 — полость меридионального канала;
19 отростки пищеварительных клеток; 20 —
ооциты; 21 — питающие клетки; 22 — желези
стый эпителий; 23 — яйцевод; 24 — женский го
нопор; 25 — стенка яичника; 26 — ресничная
бороздка.
133
ред следующим делением эктоплазма вновь стягивается к редукционному полюсу и
вновь вместе с бороздой перемещается к аборальному полюсу. После третьего деле
ния эктоплазма остается в аборальной области. Своеобразие характера дробления
обнаруживается при третьем делении, плоскость которого располагается почти па
раллельно плоскости первого деления дробления, но все же под некоторым углом
к ней. В результате возникает пластинка из восьми клеток, расположенных в два
ряда. Четыре концевых бластомера (Е-бластомеры, от англ. end — конец) несколько
мельче клеток, остающихся в середине полоски, или М-бластомеров (от англ. mid
dle — середина) (см. рис. 7-13). Благодаря косому расположению плоскости третьего
деления дробления концевые клетки смещены к аборальному полюсу.
Надо заметить, что вопрос о полярности яиц низших Metazoa в литературе по
следних лет подвергается переосмыслению. О. М. Иванова-Казас (1995) предлагает
различать первичную (протозойную) и анимально-вегетативную полярность. Пер
вичная полярность, по Ивановой-Казас, определяется местом образования редук
ционных телец, тогда как анимально-вегетативная полярность отражает проспек
тивное значение различных областей цитоплазмы яйца. Цитоплазма, занимающая
анимальную область, связана с развитием эктодермальных производных, вегета
тивная — с развитием энтодермы и мезодермы. С этой точки зрения анимально-
вегетативная полярность у губок отсутствует, поскольку у них нет эктодермы и эн
тодермы, и в ходе эволюции появляется лишь у двуслойных. У двуслойных факторы
спецификации энтодермы, насколько можно судить по имеющимся данным, обычно
134
локализуются в области редукционного полюса. Эта область дает, как мы видели,
заднюю часть планулы стрекающих, а позднее — оральную область взрослого жи
вотного, в которой происходит закладка энтодермы. Из сказанного следует, что если
редукционный полюс яиц двуслойных функционально соответствует вегетативному
полюсу, то образование борозд дробления у них начинается на вегетативном по
люсе. Гомология вегетативных областей зародышей билатеральных и двуслойных
подчеркивается данными об экспрессии ряда генов. Так, у стрекающих в оральной
области, воспреемнице вегетативной области зародыша, и в задней области личинки
(у форм с личинкой), где происходит образование энтодермы, экспрессируются гены
brachyury, wnt, goosecoid, активность которых у зародышей Билатеральных также
локализована в области бластопора. Вопрос о полярности зародышей стрекающих
требует дополнительных специальных исследований. Анимально-вегетативная по
лярность сохраняется у всех двуслойных и трехслойных Metazoa. Однако у Bilateria
редукционному полюсу соответствует не вегетативный, как у двуслойных, а ани-
мальный полюс. Этот признак настолько консервативен, что обычно главным кри
терием анимального полюса у билатеральных животных служит именно отделение
редукционных телец, происходящее в области яйца с наименьшей концентрацией
желточных зерен. Цитоплазма, обогащенная желточными включениями, занимает
вегетативную область зародыша и дает начало энтодерме
Экспериментально было показано, что у гребневиков оральным полюсом личин
ки становится полюс яйца, на котором появляется врезающаяся борозда дробления.
Фримен (1977) маркировал редукционный полюс яйца перед дроблением и, под
вергая оплодотворенные яйца центрифугированию, добивался смещения места воз
никновения униполярной борозды. В другом опыте он маркировал зону появления
первой борозды (рис. 7-10). Выяснилось, что оральная область личинки формирует
ся в той части яйца, где закладывается борозда первого деления дробления. Она не
связана жестко с редукционным полюсом, где образуются редукционные тельца, хо
тя при нормальном ходе событий все эти явления (редукционные деления, закладка
первой борозды, образование оральной области) сопряжены между собой. Пробле
ма эволюции полярности яйца еще ожидает своего решения, для чего необходимо
понимание эволюции молекулярных механизмов, управляющих процессами редук
ционных делений, делений дробления и первичной спецификации клеток зародыша.
Первые деления дробления у гребневиков предопределяют формирование осей
животного. Так, плоскость первой борозды соответствует сагиттальной плоскости
будущего гребневика. Перпендикулярная ей плоскость второго деления предопреде
ляет положение латеральной плоскости симметрии. При четвертом дроблении от
деляются обогащенные эктоплазмой аборальные микромеры (см. рис. 7-9). В ходе
следующих делений эти клетки дают скопление относительно мелких клеток, кото
рые в результате эпиболии распространяются от аборального к оральному полюсу
зародыша (рис. 7-11).
Одновременно с этим происходит отделение и оральных микромеров, которые
вместе с макромерами погружаются внутрь зародыша (рис. 7-11). В результате это
го погружения образуется ротовое отверстие. Вскоре после гаструляции начинается
органогенез, в ходе которого развивается пищеварительная система, закладываются
зачатки щупалец и формируются гребные пластинки. На аборальном полюсе диф
ференцируется сенсорный орган. После выхода зародыша из оболочек происходит
формирование взрослой особи. Некоторые авторы считают, что поскольку на этой
135
Рис. 7-11. Схема гаструляции у гребневиков.
Оральный полюс внизу, аборальный вверху (по: Давыдов, 1914).
А — эпиболия эктодермальных клеток от аборального к оральному полюсу; об
разование оральных мезоглеальных микромеров. Б — образование кишки и пер
вичного ротового отверстия (бластопора). В — смещение оральных микромеров в
аборальную область. 1 — эктодерма; 2 — энтодерма; 3 — оральные микромеры; 4 —
гастральная полость; 5 — мезенхима.
стадии у гребневиков основной план строения тела сформирован, то у них нет ли
чиночной стадии, и развитие у них — прямое. Однако, поскольку на этой стадии
животные имеют небольшие размеры, а форма тела все же существенно отличает
ся от формы взрослых животных, многие исследователи полагают, что личиночная
стадия у гребневиков все же имеется.
В опытах по изоляции или удалению бластомеров выявлен детерминативный ха
рактер раннего эмбриогенеза гребневиков, при котором спецификация клеточных
линий происходит в период дробления. Уже в конце XIX столетия было показано,
что разделение зародыша на стадии двух бластомеров ведет к образованию двух
«половинных» личинок, каждая из которых имеет не восемь, а только четыре греб
ные пластинки. При изоляции клеток на стадии четырех бластомеров формируются
личинки лишь с двумя рядами гребных пластинок.
Позднее было обнаружено, что ограничение потенций разных областей яйца про
исходит в период оплодотворения. Яйца разрезали по экваториальной (рис. 7-12, А)
или орально-аборальной (рис. 7-12, Б) плоскости на половинки и оплодотворяли. В
обоих случаях обе половинки обнаружили плюрипотентность: каждая из них давала
личинку с полным набором гребных пластинок и щупалец. Однако, если разреза
ние в экваториальной плоскости производили на стадии закладки первой борозды,
т.е. в период, когда эктоплазма концентрируется у орального полюса, развивалась
лишь содержащая ядро оральная половинка, которая давала нормальную личинку.
Аборальная часть яйца при изоляции погибала (рис. 7-12, В). При разделении за
родыша надвое в плоскости первой борозды дробления (рис. 7-12, Г), каждый из
двух бластомеров давал «половинную» личинку, которая имела лишь 4 гребных
пластинки, половинку апикального сенсорного органа и одно щупальце. Дезагрега
ция зародыша на стадии четырех бластомеров (рис. 7.-12, Д) вела к образованию
«четвертинок» с двумя гребными пластинкам и, зачаточными щупальцами и руди
ментарным апикальным органом.
Как оказалось, гребные пластинки образуются главным образом из микромеров,
которые отделяются от бластомеров Е (е-микромеры). Если на стадии 16 клеток
удалить все четыре микромера el, то гребные пластинки не закладываются. Лока
лизация факторов, ответственных за развитие гребных пластинок и находящихся в
эктоплазме яйца, происходит после оплодотворения в ходе первого деления дробле
ния. Оказалось, что аналогично ведут себя и факторы, ответственные за специфика-
136
е
О
Д О
Рис. 7-12. Схема экспериментов по изоляции частей яйца
и бластомеров у гребневиков (по: Freeman, 1977).
А, Б — нормальное развитие после разрезания яйца (А — по экватору, Б —
по орально-аборальной оси) на две половины до оплодотворения; В — нормальное
развитие оральной половинки, содержащей ядро, в опыте по изоляции оральной и
аборальной половинок после начала образования первой борозды дробления; Г —
развитие половинных личинок при изоляции клеток на стадии двух бластомеров;
Д — развитие личинок лишь с двумя рядами гребных пластинок, редуцированны
ми щупальцами и апикальным органом, при изоляции клеток на стадии четырех
бластомеров.
137
Рис. 7-13. Схема распределения факторов, детерминирующих развитие
гребных пластинок (С), фотоцитов (L), анальных каналов (А)
и глоточной мускулатуры (М) (по: Mart indale, Henry, 1997).
А — зигота (вид сбоку, оральный полюс внизу); Б — стадия четырех бластоме-
ров: фактор С сконцентрирован на внешнем крае бластомеров, фактор L — вдоль
сагиттальной плоскости в области орального полюса. Производные расположенных
по диагонали бластомеров Е М /, содержат фактор М и дают глоточные и продольные
мышцы; производные бластомеров ЕМ\, которые содержат фактор А, даю т клетки,
образующие эктодермальный анальный канал. Т — тентакулярная плоскость. В —
стадия восьми бластомеров: фактор С сосредоточен преимущественно в бластоме
рах e l; детерминанты фотоцитов сконцентрированы в макромерах М. Г — стадия
16 бластомеров. Б -Г — вид с аборального полюса.
Л итература
139
Спиральный тип дробления возник в глубокой древности и стал важной предпо
сылкой ранней эволюции билатеральных животных. Основные представления об
особенностях спирального чипа развития были заложены исследованиями кница
XiX — начала X X столетия (Kowalevsky, 1871; Whitman. 1878; Wilson, 1889, 1892;
Child, 1900; Ivanoff, 1928 и др.). Исследования эмбриологии Spiralia в настоящее
время переживают новый подъем, обусловленный развитием новых методов.
Несмотря на очевидные различия морфологии взрослых животных, особенности
раннего развития немертии, моллюсков, аннелид и многоветвистых турбеллярий
свидетельствуют о едином принципе организации начальных этапов их онтогенеза,
что, естественно, дает веские основания для предположений о филогенетической
близости этих билатеральных первичноротых. Так, использование современной тех
ники маркировки клеток позволило Д. Генри и М. Мартиндейлу (1998) установить
очевидное сходство карт презумптивных зачатков у немертин, плоскпх червей с со
ответствующими картами аннелид и моллюсков.
Спиральный тип дробления характеризуется четко выраженной и неизменной
последовательностью событий. Это чрезвычайно существенно, так как благодаря
своей инвариантности спиральный тип дробленгя стал эффективным инструментом
пространственной организации паттерна (от англ. pattern — рисунок, узор) личи
ночных структур. В процессе дробления происходит направленная сегрегация цито
плазматических факторов яйца, которые специфицируют разнообразные клеточные
линии в строго определенных областях зародыша.
Первые две борозды дробления проходят меридионально под прямым углом друг
к другу (рис. 8-1). После первого деления образуются бластомеры, которые обозна
чаются индексами АВ и CD. При втором делении возникают бластомеры А, В, С и
Г), которые называют квадрантами (от лат. quadrans— четвертая часть). При описа
нии последующих стадий развития часто говорят о принадлежности потомков этих
бластомеров к тому или иному квадранту зародыша. В случае равномерных первых
двух делений имеет место гомоквадрантное дробление, при неравномерных делени
ях, что бывает значительно чаще, — гетероквадрантное (рис. 8- 2 ).
Бластомер D («Д э большое») содержит факторы, играющие важную роль в спе
цификации клеточных линий, дающих начало эктодерме и мезодерме взрослых жи
вотных. Благодаря концентрации активной цитоплазмы этот бластомер часто вы
деляется своими крупными размерами и несколько эксцентричным положением. У
некоторых видов аннелид и моллюсков активная цитоплазма в период первых деле
ний дробления обособляется в виде полярной лопасти, материал которой в период
второго деления попадает в бластомер D (рис. 8-3). При гомоквадрантном дробле
нии спецификация макромера D как предшественника стволовых мезодермальных
клеток происходит принципиально иным способом, а именно в результате взаимодей
ствия между макромерами и микромерами, которые впервые появляются при тре
тьем делении дробления. Известный голландский эмбриолог Ио ван ден Биггелаар
показал, например, что у моллюска Patella, имеющего гомоквадрантное дробление,
бластомер 4d образует мезодермальные клетки лишь в том случае, если перед сто
обособлением макромер 3D вступит в контакт с микромерами анимального полуша
рия. Следует подчеркнуть, что именно в этот период развития между указанными
бластомерами образуются щелевые соединения (gap junction), что создает условия,
необходимые для прохождения низкомолекулярных веществ из клетки в клетку.
Характерной особенностью спирального дробления является косое расположение
140
Рис. 8-1. Гомоквадрантное дробление яйца брюхоногого моллюска Crepidula plana;
вид с анимального полюса (по: Conklin, 1897).
А — стадия 2 бластомеров: видны веретена второго деления дробления; Б —
подразделение зародыша на равные квадранты А, В, С, D; В — стадия 8 бластоме
ров: отделение первого квартета микромеров (la — Id); Г — стадия 12 бластомеров:
образование второго квартета микромеров (2а — 2d); Д — переход к стадии 16 бла
стомеров: деление первого квартета микромеров; Е — стадия 16 бластомеров. 1 —
полярные тельца; 2 — ядра.
141
Рис. 8-2. Гетероквадрантное дробление яйца полихеты Arenicola\
вид с анимального полюса (по: Child, 1900).
А — стадия 2 бластомеров: видны веретена второго деления дробления и поляр
ные тельца; Б — стадия 4 бластомеров: своими крупными размерами выделяется
квадрант D; В — стадия 8 бластомеров: обособление первого квартета микромеров
(la — Id).
142
Рис. 8-4•Дробление яйца брюхоногого моллюска Trochus
(по: Robert, 1902).
А — стадия 4 бластомеров; Б и В - стадия 8 бластомеров: вид с анимального
полюса (Б) и сбоку (В). Микромеры первого квартета располагаются в промежут
ках между крупными бластомерами основного квартета. 1Q — квадрант основного
квартета; l q — квадрант первого квартета.
то таким же будут все нечетные деления макромеров (пятое, седьмое и т.д.), тогда
как четные деления будут левозакрученными. Этот характер дробления генетически
детерминирован и коррелирует с левым или правым положением бластомера D, а у
моллюсков и с характером закручивания висцеральных органов и раковины. В опы
тах на Lymnaea peregra показано, что инъекция цитоплазмы из декстралъных яиц в
синистралъные (от лат. sinister — левый), дающие левозакрученных животных, вос
станавливала правозакрученный характер раковины, тогда как реципрокная инъек
ция цитоплазмы от синистральных яиц в декстральные не оказывала действия. Это
указывает на доминирующий характер материнских факторов правозакрученности,
которые, как можно полагать, синтезируются в период оогенеза под контролем гена
правозакрученности.
143
Морфологические и экспериментальные исследования показали, что судьба каж
дого бластомера при спиральном дроблении предопределена. Начиная с третьего де
ления дробление обычно идет квартетами: каждый раз практически одновременно
отделяются четыре клетки — по одной в каждом квадранте. Квартеты обозначают
ся буквенными и цифровыми индексами. Буква означает принадлежность к тому
или иному квадранту, а цифра — номер квартета. При этом квартеты макромеров
обозначаются прописными буквами, а квартеты микромеров — строчными. Так, ос
новной квартет A —D при третьем делении дробления отделяет первый квартет
микромеров 1а («один а малое»), lb, lc, Id, превращаясь при этом в первый квар
тет макромеров 1А, IB, 1C, 1D. В ходе четвертого деления дробления образуется
второй квартет микромеров 2а — 2d и второй квартет макромеров 2А - - 2D. Обыч
но образуется четыре квартета микромеров, после чего деления квартета макро
меров приостанавливаются. Продукты делений микромеров сохраняют обозначение
исходного микромера, которое дополняется цифровыми показателями — одним при
первом делении микромера, двумя — при втором и т.д. Например, при делении мик
ромера первого квартета из квадранта A l a образуются две клетки — 1а 1 («один
а малое один») и 1а2, при делении 1а2 возникают микромеры la zl («один а малое
два один») и 1а22 н т.д. После седьмого-восьмого деления дробления закономерное
чередование дексиотропных и леотропных делений нарушается.
Как уже отмечалось, детерминируется не только положение бластомера, но и его
судьба. Продукты деления первых трех квартетов микромеров дают эктодерму и эк
томезодерму. Так, производные первого квартета образуют эктодерму предротовой
области личинки трохофоры. Расположенные в области анималыюго полюса клетки
la 1 — Id 1 образуют апикальный сенсорный орган личинки. Клетки la 2 — Id 2 дают
первичные трохобласты (рис. 8- 6 ), продукты деления которых рано дифференци
руются и формируют двигательный орган личинки -прототрох. Клетки второго
квартета 2а — 2d дают эктодерму остальной части личинки. Бластомер 2d называ
ют первым соматобластом, так как продукты его деления дают эктодермальную
144
спинную пластинку зародыша, а некоторые производные этой клетки образуют зону
роста тела червя.
Клетка 4d, или второй соматобласт у гастропод дает начато как энтеробластаы,
так и парным симметрично расположенным мезобластам. Пролиферация этих ство
ловых клеток ведет к образованию билатеральных мезодермальных полосок, кото
рые впоследствии формируют мезодерму туловища.
Клетки основного квартета вместе с энтеробластами, возникшими при делении
4d, впоследствии погружаются в глубь зародыша и образуют энтодерму.
В период дробления одновременно с увеличением клеточной массы и специфи
кацией клеточных линий происходит детерминация осей будущей личинки. Так,
положение микромеров 2d и 4d, за счет которых образуется большая часть тела
взрослого животного, соответствует дорсальной стороне. Медиальная линия, под
разделяющая тело на левую и правую половины, проходит, как правило, между
нечетными квартетами микромеров квадранта С и D. Оси будущего зародыша во
многом определяются уже на стадии четырех бластомеров. При этом анимальный
полюс соответствует переднему концу зародыша, а вегетативный — заднему. Появле
ние первого квартета микромеров, как было уже сказано, определяет сагитт альную
плоскость и билатеральную симметрию зародыша.
В результате дробления образуется бластула. У многих видов моллюсков и ан-
нелид формируется стерробластула, у которой бластоцель отсутствует или слабо
выражен. Вместе с тем известны виды, у которых возникает типичная целобласту-
ла (например, у моллюска Patella).
После выделения клеточных линий происходит гаструляция — морфогенетиче
ский процесс, в ходе которого уже детерминированные клеточные линии преобра
зуются в зародышевые зачатки — эктодерму, мезодерму и энтодерму.
При наличии бластоцеля гаструляция происходит путем инвагинации клеток ве
гетативной области. У Patella и некоторых других моллюсков описана особая форма
инвагинации — плотное врастание, или эмболия, при которой макромеры вытягива
ются вдоль анимально-вегетативной оси зародыша., заполняя таким образом бласто
цель (рис. 8-7). Затем вследствие деламннации клеток внутреннего слоя образуется
энтодермальный зачаток — первичная кишка, или архентерон.
145
Наиболее распространенным способом гаструляции у моллюсков и аннелид явля
ется эпиболия, в ходе которой клетки, образующие шапочку анимальных микроме
ров, распространяются в направлении вегетативного полюса, обрастая макромеры и
образуя эктодермальный слой личинки (рис. 8- 8). В конце эпиболии остается неза
мкнутым небольшой участок на вегетативном полюсе — бластопор. Мезобласты и
продукты их делений также оказываются под эктодермой и образуют зачаток мезо
дермы.
(
Рис. 8-8. Процесс эпиболии у брюхоногого моллюска
Crepidula plana (по: Conklin, 1897).
А — стерробластула; Б — гаструляция. 1 — эктодерма; 2 — энто
дерма. Стрелками показано направление обрастания.
146
Рис. 8-10. Трохофора брюхоногого Рис. 8-11. Метатрохофора полихеты
моллюска Patella. Вид со спинной Pomatoceros (по: Segrove, 1941).
стороны (по: Patten, 1886). 1 — глаз; 2 — прототрох; 3 — пита
1 — эписфера; 2 — прототрох; 3 — ющие реснички; 4 — метатрох; 5-7 —
гипосфера; 4 — раковинная железа. щетинки 1-го, 2 и 3-го ларвальных сег
ментов; 8 — кишка; 9 — зона роста;
10 — нейротрохоид; 11 — желудок.
147
1928). Оно было названо им первичной гетерономностъю сегментов, в отличие от
вторичной гетероном ности сегментов, которая может возникать в ходе адаптивной
эволюции как приспособительное видоизменение морфологии сегмента.
Различия между ларвальными и пост ларвальным и сегментами касаются не толь
ко способов их развития. Они обнаруживаются и в особенностях их дефинитивного
строения. Так, в ларвальных сегментах пе образуются половые железы, целомо-
дукты, хлорагогенные клетки, имеются некоторые отличия в строении брюшной
нервной цепочки и кровеносной системы. Накапливающиеся данные по генетике
развития полихет дают основание предполагать, что свойства ларвальных и пост-
ларвальных сегментов определяются неидентичными генетическими программами
развития.
Несомненно, что первичная гетерономцость сегментов имеет глубокие филоге
нетические основания, сущность которых еще предстоит раскрыть. Возникновение
онтогенетического механизма, который обеспечиваег субтерминальный рост тела
животного за счет зоны роста, расположенной на переднем крае анальной лопасти,
по-видимому, стал важным этапом в эволюции животных, открыв путь для разви
тия разнообразных полимерных форм Metazoa.
У некоторых наиболее примитивных видов моллюсков из подкласса Proso-
branchia имеются свободноживущие трохофоры. Обычно, однако, наблюдается эм-
брионизация, т. е. смещение стадии трохофоры в эмбриональный период, так что из
яйца выходит характерная для моллюсков личинка велигер (от лат. velum — парус)
(рис. 8- 12), которая имеет видоизмененный, сильно разросшийся прототрох — парус,
и зачаток раковинной железы, за счет активности которой формируется личиночная
раковина. У представителей ряда семейств пластинчатожаберных моллюсков (на-
148
пример, из семейства Unionidae) образуются осо
бые личинки — глохидии (от греч. уXayic, — острие
стрелы). Створки раковинок глохидиев снабжены
крючковидными шипами, что позволяет этим ли
чинкам паразитировать на жабрах и коже рыб
(рис. 8-13).
Многие пресноводные и наземные представите
ли Spiralia утратили стадию личинки и характе
ризуются прямым развитием, при котором из яиц
выходят уже сформированные молодые животные,
минуя личиночную стадию. Прямое развитие ха Рис. 8-13. Глохидий
пластинчатожаберного моллюска
рактерно для пиявок, олигохет, многих легочных
Unio (по: Lillie, 1895).
моллюсков. 1 — створка раковины; 2 — аддук-
ТурбеллярИИ. Характеризуя спиральный Т И П т о р — м ы ш ц а , з а м ы к а ю щ а я р а к о в и -
дробления, нельзя не упомянуть об особенностях НУ г л о х и д и я ; 3 — л и ч и н о ч н а я н и т ь ,
развития турбеллярий, плоских свободноживущих
червей. Развитие паразитических форм плоских червей, которые представлены тре
мя классами: Моногенеи, Цестоды и Трематоды, в данной книге не рассматрива
ется.
Турбеллярии издавна привлекают внимание; эволюционистов-зоологов. Интерес
к этой группе определяется прежде всего предполагаемым ключевым положением
Ресничных червей в филогении Metazoa (В. Н. Беклемишев, 1964; Ю. В. Мамкаев,
1967; А. В. Иванов, 1968; О. М. Иванова-Казас, 1995). Согласно классической точке
зрения, бескишечные турбеллярии (Acoela), составляющие один из отрядов реснич
ных червей, произошли от фагоцителлообразных предков и дали начало всем пер
вичноротым животным (А. В. Иванов, 1968). Считается, что отсутствие кишечника
(ротовое отверстие у них открывается непосредственно в пищеварительную парен
химу7) свидетельствует о примитивности Acoela. Нельзя не заметить, однако, что
данные об ультраструктуре пищеварительной паренхимы, а также специализиро
ванный дуэтный тип дробления, напротив, расценивается некоторыми исследовате
лями как безусловное свидетельство эволюционной вторичности этой группы (Smith,
Tyler, 1985; Ellis, Fausto-Sterling, 1997). Тем не менее молекулярно-биологические ис
следования говорят в пользу существования особого типа Acoelomorpha, в который
входят Acoela и Nemertodermatida. С одной стороны, тип Acoelomorpha является
анцестральным, стоящим у основания билатеральных животных, с другой сторо
ны, турбеллярии Rhabditophora и родственные им Catenulida близки таким трохо-
форным целомическим животным, как моллюски и кольчатые черви (Lockier et al.,
2002).
Дробление у представителей Acoela имеет своеобразный дуэтный тип, при кото
ром в основе формирования зародыша лежат не четыре квадранта, а всего лишь два
основных макромера. Спиральное дробление соответственно начинается уже при пе
реходе к стадии четырех бластомеров: при втором делении базальные макромеры
отделяют «дуэт» — два микромера, которые располагаются в борозде между мак
ромерами. Вслед за первым дуэтом отделяется еще несколько (рис. 8-14). Деление
микромеров начинается обычно после обособления всех дуэтов. За счет микромеров
образуется эктодерма. Макромеры погружаются в глубь зародыша и дают начало
общему энтомезодермальному зачатку, представленному клеточной паренхимой.
149
Рис. 8-14■ Дуэтный тип дробления у бескишечных турбеллярий (по: Gardiner, 1895).
А — стадия 2 бластомеров; Б — стадия 4 бластомеров (два дуэта); В — стадия 8
бластомеров.
2 8 7
150
рядоченным. Заметно варьирует и время спецификации бластомеров. Как показы
вают опыты по изоляции бластомеров, дробление у представителей Polyclada носит
детерминативный характер, в отличие от регулятивного развития бескишечных тур-
беллярий.
У более высокоорганизованных турбеллярий из отряда Polyclada богатые желт
ком бластомеры 4а — 4с и 4А — 4D не участвуют в построении тела зародыша. Они
разрушаются и используются как питательный материал. Источником образова
ния энтодермы и мезодермы становится бластомер 4d. В результате деления это
го мезэнтобласта образуется клетка-родоначальница мезодермы (4dJ) и клетка-
родоначальница энтодермы (4d2). Из микромеров первого квартета образуются
нервные клетки. Эктодерма возникает из микромеров первых трех квартетов. С
помощью прижизненного мечения бластомеров показано, что каждый квадрант (А,
В, С, D) дробящегося яйца дает определенный квадрант личинки (Henry et al., 1995)
(рис. 8-16).
Производные квадрантов
ША О В Й С B D
Развитие турбеллярий может быть прямым или с личинкой. Лобофора (от греч.
Хорос — лопасть, срорёсо— носить), или мюллеровская личинка имеет удлиненное
билатерально-симметричное тело, покрытое ресничками и несущее восемь лопастей,
окаймленных ресничным шнуром (рис. 8-17).
151
Рис. 8-17. Мюллеровская личинка
Polyclada (по: Lang, 1884).
А — общий вид; Б — сагиттальный
разрез. 1 — глаз; 2 — мозг; 3 — паренхима;
4 —личиночные мышцы; 5 — кишка; 6 —
глотка.
152
утрата механизмов спирального дробления, вызванная теми или иными причинами,
по-видимому, лежит в основе формирования брахиопод и других Lophotrochozoa,
ранний онтогенез которых не несет признаков спиральности.
Сопоставляя спиральный тип развития с развитием радиальных животных, сле
дует подчеркнуть важную особенность, которая наблюдается у Spiralia, а именно
возникновение функциональной асимметрии квадрантов дробящегося яйца. Дей
ствительно, если у ктенофор эмбриональные квадранты следуют практически иден
тичным программам дробления и генерируют очень сходные по своему тканевому
составу и общей морфологии области тела, то у Spiralia происходит специализация
квадранта D, предопределяющая его участие в образовании эктодермы и мезодермы
туловища животного.
153
У форошщ образуется пелаги
ческая планктотрофная личинка —
актинотроха (рис. 8-20). У акти-
нотрохи имеется предротовая ло
пасть, или капюшон, по краю ко
торого проходит ресничное кольцо,
гомологичное прототроху аннелид
(Иванова-Казас, 1977). За ротовым
отверстием формируется подково
образный эктодермальный валик,
на котором закладываются зачат
ки щупалец личинки. Венчик щу
палец также снабжен длинными
ресничками, что дает основание го-
мологизировать его с метатрохом
аннелид. Наконец, на заднем конце
личинки образуется телотрох, рас
положенный впереди от анального
отверстия. Находящиеся в первич
ной полости мезодермальные клет
ки образуют цечомический эпите
Рис. 8-20. Актинотроха форониды
лий, мышцы и кровеносные сосу
(по: Selys-Longchamps, 1907). ды. В послеротовой области позд-
1 — капюшон; 2 — личиночное щупальце; 3 - брюш- нее закладывается брюшной кар
ной карман; 4 — телотрох. ман, представляющий собой экто
дермальное впячивание.
Превращение актинотрохи в дефинитивную форму обусловлено разрастанием
цилиндрического выступа на брюшной стороне личинки как раз в области закладки
154
брюшного кармана (рис. 8-21). Разрастаясь, этот выступ дает стебелек будущей
форониды. В процесс образования стебелька вовлекается и кишка, которая как бы
втягивается в стебелек, образуя характерную для всех щупальцевых петлю. Вмест е
с тем анальное отверстие остается в области лофофора, т.е. неподалеку от ротового
отверстия.
Развитие мшанок, несмотря на длительную историю его изучения, таит еще мно
го невыясненных вопросов. В результате дробления, которое у мшанок обычно имеет
радиальный характер, образуется целобластула. Гаструляция у разных видов проис
ходит разными способами. У некоторых мшанок происходит погружение вегетатив
ных клеток внутрь зародыша (эмболия), у других наблюдается иммиграция. У ряда
видов имеется эпиболия. Интересной особенностью развития многих мшанок явля
ется то, что у их личинок не образуется энтодермальный кишечник. В этих случаях
возникающая в ходе гаструляции внутренняя клеточная масса личинки представле
на только мезодермальными клетками.
Типичной личинкой мшанок явля
ется так называемый цифонаут (рис.
8-22). Эта личинка имеет конусовид
ную форму. Оральная область на
ходится в основании конуса, а або-
ральная на его вершине. 11о краю
оральной области расположен кольце
видный локомоторный орган, образо
ванный несколькими рядами реснич
ных клеток. Из эктодермы формиру
ется мантия, клетки которой генери
руют хитиноидную двустворчатую ра
ковину. У планктотрофного цифонау-
та имеется вполне развитая пищевари
тельная система с ротовым отверсти
ем, глоткой, энтодермальным желуд
ком, эктодермальной задней кишкой и
Рис. 8-22. Цифонаут мшанки Electra pilosa
анальным отверстием. (по: Prouho, 1892).
У большинства видов мшанок пи 1 — аборальный орган; 2 —глотка; 3 — нервно
щеварительный канал недоразвит или мускульный тяж; 4 — раковина; 5 — грушевидный
полностью отсутствует. Например, у орган чувств; 6 — проктодеум; 7 — задняя кишка;
8 — желудок.
Bugula neritina внутренняя полость
личинки заполнена паренхимой (рис. 8-23).
Для мшанок из отряда Круглоротых характерно явление полиэмбрионии. Раз
витие зародышей происходит в фолликулах, которые образуются в теле гонозоои-
дов за счет мезодермальных элементов. Фолликулы, имеющие синцитиальное стро
ение, обеспечивают питание зародыша. Бластомеры дробящегося яйца обнаружива
ют значительную автономность. Они могут разъединяться и вновь соединяться друг
с другом, образуя морулоподобный зародыш, который состоит из клеток эктодер
мальной и мезодермальной природы. За счет питающего синцития такой первичный
зародыш растет и, достигая определенных размеров, фрагментируется на вторич
ные зародыши, сохраняя при этом преемственность наружного (эктодермального)
и внутреннего (мезодермального) листков. Вторичные зародыши при обособлении
155
1
имеют около 60 клеток. У некоторых видов описана и т рет ичная генерация заро
дышей, которые образуются в результате фрагментации вторичных. В результате
из одного яйца может сформироваться более ста личинок. Образующиеся личинки
имеют относительно простое строение. У них нет кишечника, ресничного венчика
и некоторых других органов, типичных для цифонаута. По-видимому, цифонаут,
который многие исследователи рассматривают как своеобразно измененную тро-
хофорную личинку, в ходе эволюции мшанок подвергся вторичному упрощению,
в ходе которого редуцировались многие личиночные органы. Причины и значение
этих эволюционных преобразований мало понятны и являются вызовом для новых
поколений эмбриологов.
Литература
Иванова-Казас О. М. Тип Annelida — кольчатые черви. Класс Polychaetr — многощетин-
ковые черви / / Сравнительная эмбриология беспозвоночных животных. М ., 1977. С. 20-62.
Иванова-Казас О. М. Тип Mollusca — моллюски. Класс Gastropoda—брюхоногие мол
люски / / Там же. С. 111-141.
Рэфф Р., Кофмен Т. Эволюция и структурная организация яиц и зародышей / / Эмбри
оны, гены и эволюция. М., 1986. С. 129-143.
Глава 9. БИЛАТЕРАЛЬНЫ Е. ECDYSOZOA
157
характерные для всего типа в целом. Действительно, до последнего времени суще
ствовало мнение, что развитие круглых червей характеризуется высокой степенью
детерминативности и инвариантности. Лишь сравнительно недавно исследование
ряда видов морских свободноживущих нематод показало, что раннее предопределе
ние судьбы бластомеров происходит, вероятно, далеко не у всех видов. На основа
нии опытов с маркировкой бластомеров морской нематоды Enoplus brevis делается
вывод даже о плюрипотентности бластомеров и регулятивном характере раннего
эмбриогенеза. Очевидно, что дальнейший сравнительно-эмбриологический и экспе
риментальный анализ внесет ясность в эту важную проблему.
Первым исследователем эмбриологии аскарид был Теодор Бовери (1862-1915),
который дал ставшее классическим описание ранних стадий развития Ascaris теда-
locephala (по современной номенклатуре — Parascaris equorum). Он обратил внима
ние на то, что в течение нескольких первых делений дробления во время митоза
происходит так называемая диминуция (от лат. diminuo — дробить) хроматина, от
брасывание небольших фрагментов хромосом. Оказалось, что диминуция хроматина
наблюдается лишь в тех бластомерах, потомки которых образуют соматические тка
ни. Диминуция хроматина отсутствует в клетках полового пути (рис. 9-1, А). Как
выяснил Бовери в опытах с нарушением дробления при диспермном оплодотворении
и после центрифугирования оплодотворенных яиц, диминуция хроматина или ее от
сутствие определяются разными свойствами цитоплазмы, образующей анимальную
и вегетативную области яйца (рис. 9-1,Б). Следует заметить, что у большинства
нематод, в том числе у С. elegans, диминуции хроматина не наблюдается.
Дробление Parascaris полное, билатерально симметричное (рис. 9-2). Положе
ние бластомеров в пространстве строго фиксированное. Первое деление происходит
в экваториальной плоскости, в результате чего образуются два бластомера — ани-
мальный АВ (S1) и вегетативный Р 1 . Индекс «Р » указывает на принадлежность
158
Рис. 9-2. Дробление нематоды Parascaris equorum (по: Boveri, 1899).
А — стадия 2 бластомеров; Б — стадия 4 бластомеров, Т-образная фигура; В, Г — та
же стадия, формирование ромба.
этой клетки к линии клеток полового (или, как иногда не вполне корректно го
ворят, «зародышевого») пути. Индекс «S» свидетельствует о соматической приро
де клетки. Действительно, бластомер АВ является источником эктодермы. Второе
деление бластомеров происходит в разных направлениях. Бластомер АВ делится
меридионально на клетки А и В, а борозда, делящая бластомер Р1, расположе
на параллельно экваториальной плоскости. При делении Р 1 возникают бластомеры
S2 (EMSt) и Р2. В результате зародыш принимает Т-образную конфигурурацию
(рис. 9-2, Б), которая, однако, вскоре сменяется ромбовидной, поскольку располо
женный на вегетативном полюсе бластомер Р2 смещается в переднем направлении
и приходит в контакт с бластомером В (рис. 9-2, В,Г)).
При следующем делении S2 образует переднюю клетку MSt й заднюю Е. Бла
стомер MSt при последующих делениях дает начало популяциям мезодермальных
клеток ( т и [i) и клеткам зачатка стомодеума (st и ах). Р2 делится на вентральную
РЗ и дорсальную S3, или C-клетку — основательницу клона дорсальной эктодермы.
159
При переходе к стадии 16 бластомеров РЗ делится на эктодермальную клетку
D и клетку-основательницу полового зачатка Р4, которая делится и образует две
первичные половые клетки G 1 и G2.
Генеалогия бластомеров и паттерн раннего развития P.equorum имеют большое
сходство с таковыми С. elegans (рис. 9-3, рис. 9-4). Тем больший интерес представ
ляют результаты исследования эмбриогенеза этого модельного объекта биологии
развития, выполненные с помощью цейтраферной видеозаписи и компьютерного
анализа изображений (Schnabel et al., 1997). Точная регистрация времени делений
клеток, их первоначального положения в развивающемся зародыше и последующего
перемещения обнаружила вариабельность этих параметров, которая ранее ускольза
ла от исследователей. Вместе с тем, несмотря на выявленную изменчивость ранних
зародышей, перед началом морфогенеза возникает инвариантная стадия со строго
фиксированными дискретными областям!, клетки которых имеют вполне опреде
ленную спецификацию. Инвариантность клеточной судьбы, как полагают, определя
ется специфическими индуктивными межклеточными взаимодействиями на ранних
стадиях развития, когда топология бластомеров у разных зародышей еще достаточ
но однообразна, чтобы обеспечить воспроизводимость паттернов индукции.
На стадии 24 клеток, т. е. после выделения клетки полового зачатка Р4, дочер
ние клетки бластомера Е погружаются внутрь зародыша, где после нескольких де
лении образуют среднюю кишку, состоящую из 20 клеток. При этом перемещении
t, мин Число
клеток
0 Оплодотворенное яйцо
10
20 Р0
30 АВ (Зигота)
40
2 ___ I___
EMS
50 4
60 Гиподерма MS
8
70 Нейроны
Мыщцы глотки
80 Одна мыщца тела
90 24 Железы D
100 (389)
Мыщцы тела
110 Мыщцы глотки Кишка
120 Нейроны
Железы (20) Гиподерма
130 (80) Мыщцы тела
140 Два нейрона
150 (47)
Мыщцы тела
160
170
100 (20)
п
G 1G 2
Линия
половых
клеток
160
Рис. 9-4■ Основные варианты раннего дробления нематод
(по: Иванова-Казас, 1975).
А — аскаридный; Б — промежуточный; В — параллельный; Г — линей
ный. Объяснения в тексте.
161
или тагмы (от греч. тс/у[1с/— строй, порядок). У членистоногих насчитывают три
тагмы — голова, грудь и брюшко. Сегменты и тагмы могут сливаться друг с другом,
образуя сложные комплексные структуры. Спереди тело ограничено головной ло
пастью, или акроном (от греч. axpov — на самом краю), сзади — анальной лопастью,
или телъсоном (от греч. teXctov — граница). Членистоногие имеют наружный хити
новый скелет. Хитиновая кутикула ограничивает рост развивающегося животного,
который поэтому возможен только при линьке, т. е. периодической смене затверде
вающего покрова. Как у всех Ecdysozoa, у членистоногих отсутствуют ресничные
покровы.
162
происходит редукция числа иреоральных и туловищных придатков, а также исчез
новение ветвления ног. Интересно, что такой важный систематический признак, как
неразветвленность ног насекомых обусловлен сравнительно простым генетическим
механизмом — отсутствием активности гена wnt в дорсальной области имагиналь-
ного диска конечности (Struhl, Basler, 1993).
9.2.1. Хелицеровые
163
Рис. 9-7. Образование постларвальной мезодермы в зоне роста
у мечехвоста Limulus moluccanus (по: Иванов, 1933).
1 — эктодерма; 2 — телопор; 3 — мезодерма; 4 — целомический мешок.
164
Рис. 9-8. Образование амниона и серозы у скорпионов (по: Иванова-Казас, 1979).
А — закладка зародышевых оболочек; Б — стадия формирования зародышевой полоски
(сагиттальные разрезы, анимальный полюс вверху). Стрелкой указано направление роста
зародыша. 1 — кольцевая амниотическая складка; 2 — бластодиск; 3 — амнион; 4 — сероза;
5 — эктодерма; 6 — мезодерма; 7 — энтодерма; 8 — вителлофаги
165
дерму (пауки), либо мигрирующие клетки изначально репрезентируют энтодерму и
мезодерму (клещи).
Как и у мечехвостов, у паукообразных мезодерма возникает из двух источников.
После образования первичной мезодермы, которая сегментируется и дает несколь
ко «ларвальных» сегментов, на заднем конце зародыша образуется зона роста, где
благодаря миграции клеток эктобласта образуется мезодерма, входящая в состав
последовательно закладывающихся «постларвальных» сегментов. Местоположение
границы между этими группами сегментов варьирует, но часто оно соответствует
заднему краю просомы.
У скорпионов, которые развиваются с образованием зародышевого диска, из пе
риферической области последнего развиваются зародышевые оболочки — амнион и
сероза — структуры, которые независимым образом, конвергентно, возникают и в
эмбриогенезе насекомых (рис. 9-8).
У пауков подробно описано замечательное явление — бластокинез, или реверсия
(рис. 9-9) Благодаря реверсии масса желтка, которая в период формирования за
родышевой полоски находится на спинной стороне зародыша, попадает на его вен
тральную сторону. Симметричные половинки полоски разъединяются по медиаль
ной вентральной линии за исключением головного и хвостового участков, и вслед за
этим начинают движение, как бы «плывут», по поверхности желтка. Поверхность
яйца в промежутке между расходящимися половинками полоски покрыта лишь тон
ким слоем эктодермы. Движение клеток завершается, когда ранее свободные лате
ральные участки полоски смыкаются друг с другом на спинной стороне.
9.2.2. Многономски
166
возникает бластодерма. В силу асимметричной миграции ядер или благодаря нерав
номерной интенсивности пролиферации на поверхности яйца образуется зародыше
вый диск, состоящий из нескольких слоев клеток.
Зародышевый диск вытягивается в длину, в результате чего образуется зароды
шевая полоска, Под поверхностным эктодермальным слоем клеток зародышевой по
лоски располагаются два симметричных тяжа мезодермы, разделенных свободным
пространством по срединной линии зародыша (рис. 9-11). Выселяющиеся из полоски
клетки располагаются на поверхности желтка, образуя энтодермальный эпителий,
или погружаются в желток, давая начало так называемым желточным клеткам, или
вителлофагам (от лат. vitellus — желток, греч. (payeiv — пожирать), участвующим в
переработке и утилизации желтка. Интересно, что у Scutigera, одного из предста
вителей губоногих многоножек, вителлофаги, по-видимому, формируют среднюю
кишку, так что их можно рассматривать как энтодермальный зачаток. У других ви
дов энтодерма возникает помимо вителлофагов. Анализируя проблему образования
энтодермы у многоножек, О. М. Иванова-Казас (1981) отмечает большое разнообра
зие способов ее возникновения. Так, у губоногих многоножек энтодерма образуется
путем диффузной иммиграции клеток вдоль всей зародышевой полоски или путем
иммиграции на переднем и заднем концах полоски, или, наконец, в результате уни
полярной иммиграции на заднем конце полоски. У двупарноногих многоножек энто
дерма образуется иным способом, а именно обособляясь от зародышевой полоски в
виде клеточных тяжей, врастающих внутрь зародыша. Что касается мезодермы, то
она образуется в результате ингрессии клеток по всей длине зародышевой полоски.
Сегментация тела у многоножек происходит в два этапа. Первый этап приурочен
к эмбриональному периоду, когда одновременно образуется относительно небольшое
число сегментов. Второй этап происходит после вылупления личинки, когда сегмен
ты формируются последовательно за счет активности особой зоны роста.
1 2 3
167
После сегментации вследствие продолжающегося роста зародышевой полоски ее
передний и задний концы загибаются на спинную сторону. Завершающий этап фор
мирования тела животного, как и у пауков, связан с бластокинезом, в ходе которого
происходит, во-первых, расхождение симметричных половинок зародышевой полос
ки в дорсальном направлении и, во-вторых, движение переднего и заднего отделов
зародыша в направлении вентральной стороны тела. Вследствие этих процессов го
лова и задняя область туловища возвращаются на вентральную сторону, где обра
зуется разделяющая их глубокая складка.
168
Рис. 9-13. Дробление и формирование зародышевого диска
у равноногого рака Iron (по: Nair, 1956).
А, Б — последовательные стадии выхода ядер дробления на по
верхность яйца; В — миграция клеток к вегетативному полюсу; Г —
зародышевое пятно (диск).
169
раков с богатыми желтком яйцами. Выход ядер на поверхность яйца и образование
бластодермы наблюдается, например, у мизид. После образования бластодермы за
счет клеток, концентрирующихся на будущей вентральной стороне зародыша, фор
мируется зародышевый диск (рис. 9-13). У некоторых видов этот диск образуется
благодаря амебоидной подвижности индивидуальных клеток, вышедших на поверх
ность зародыша.
У некоторых паразитических веслоногих дробление резко неравномерное. В ходе
дробления на поверхности очень крупной и богатой желтком клетки, из которой
впоследствии образуется энтодерма, формируется колпачок мелких клеток (рис. 9-
14). Эти клетки, продолжая делиться, дают начало эктодерме и мезодерме.
Разнообразны у ракообразных и способы гаструляции. В этом классе образование
мезодермального и энтодермального листков происходит в результате иммиграции,
полярного врастания клеток, путем эпиболии и, наконец, с помощью инвагинации.
Часто отмечается двухфазность гаструляции, что проявляется в разновременном об
разовании мезодермы и энтодермы. У жаброногого рака Arthemia salina гаструляция
имеет именно такой сложный характер. Сначала происходит иммиграция клеток на
Рис. 9-15. Гаструляция у жаброногого рачка Artemia salina (по: Benesch, 1969).
А — вселение клеток вегетативного полушария в бластоцель; Б — завершение гастру
ляции. 1 — бластоцель; 2 — стомодеум; 3 — мезодерма 1-го антеннального сегмента; 4 —
энтодерма; 5 — половой зачаток; 6 — мезодерма мандибулярного сегмента.
4
Рис. 9-16. Гаструляция у веслоногого рачка Cyclops (по: Fuchs, 1914).
А — сагиттальный разрез через зародыш в конце дробления; Б — начало гаструляции; В — ин-
вагинационная гаструла, в архентероне которой представлены клетки-родоначальницы мезодермы,
энтодермы и полового зачатка. 1 — эктодермальные клетки; 2 — клетки-родоначальницы мезодер
мы; 3 — клетки-родоначальницы энтодермы; 4 — первичная половая клетка.
170
заднем конце зародыша. Эти клет
ки образуют мезодермальный зача
ток, который вскоре сегментируется
(рис. 9-15). Несколько позже в перед
ней области в виде единого зачатка
инвагинирует эпителиальная стенка
бластулы, содержащая материал энто
дермы и эктодермального стомодеума.
Типичная инвагинационная гаструла
характерна дня развития циклопов )
(рис. 9-16) Гаструляция путем эпибо
лии ярко выражена у паразитическо
го веслоногого Lernaeocera br'anchialis
(рис. 9-17). Своеобразие этого эпи-
болического процесса состоит в том,
что он не ограничивается просто об Рис. 9-17. Гаструляция путем эпиболии у
паразитического веслоногого рачка Lernaeocera
растанием эктодермальных клеток, но
branchiahs (по: Kohler, 1976).
сопровождается одновременным отде- 1 — эктобласт; 2 — желточная клетка; 3 — крае-
лением (деламинацией) мезодермаль- вая клетка; 4 — клетка полового зачатка. Стрелка-
НЫХ клеток, которые располагаются ми показано направление движения эктобласта по
желточной клетке.
между экто- и энтодермой.
У некоторых ракообразных уже перед началом гаструляции удается устано
вить судьбу клеток, расположенных в разных областях зародышевого диска. Так,
Рис. 9-18. Карта презумптивных зачат Рис. 9-19. Закладка конечностей науплиуса
ков в области зародышевого пятна у мизи- веслоногого Lernaeocera branchialis (по Kohler,
ды Hemimysis lamomae (по: Manton, 1928). 1976).
1 — эктодерма; 2 — эктотелобласты; 3 — 1 — зачаток антенны I; 2 — зачаток антенны
головные лопасти; 4 — мезодерма; 5 — энто II; 3 — зачаток мандибулы; 4 — зона пролифе
дерма; 6 — половой зачаток. рации; 5 — мезодерма.
171
у Hemimysis lamornae зародышевое пятно имеет V-образную форму (рис. 9-18). В
его средней части располагаются клетки рано обособляющейся половой линии, ко
торые дадут половой зачаток. Каудальнее располагается материал будущей энто
дермы, а латеральнее лежат эктотелобласты, служащие источником образования
постларвальной эктодермы, а также клетки, которые в ходе гаструляции образуют
мезодерму.
Знакомство с развитием ракообразных убедительно свидетельствует о том, что
формирование основного плана строения животного не зависит напрямую ни от ти
па дробления, ни от способа гаструляции: один и тот ж е план строения может
достигаться разными путями. Все разнообразные способы дробления и гастру
ляции у ракообразных ведут к развитию билатерально-симметричного зародыша с
тремя парами зачатков конечност ей (антенпулы, антенны и мандибулы) в головной
области (рис. 9-19). На заднем конце зародыша возникает зона роста, в которой
расположены эктодермальные и мезодермальные телобласты, за счет активности
которых формируется тело животного с его грудными и абдоминальными сегмен
тами. По-видимому, в яйце имеется какая-то система сигналов, предопределяющая
направление морфогенетических процессов. Природа генетических программ разви
тия, существо молекулярно-биологических механизмов, лежащих в основе морфо
генетических процессов, у ракообразных практически не исследованы.
Экто- и мезотелобласты являются стволовыми клетками, т. е. клегками, деления
которых асимметричны: одна из дочерних клеток сохраняет статус стволовой, тогда
как другая вступает на путь специализации. При каждом делении эктотелобласто в
возникает один ряд эктодермальных клеток. В результате пролиферации этих кле
ток формируется пространственно ограниченная совокупность клеток, своего рода
«генеалогическая единица». В результате дифференциации этой клеточной сово
купности формируется парасегмент, который соответствуег задней четверти одного
сегмента и трем четвертям следующего сегмента. Таким образом, каждое деление
172
эктотелобластов обеспечивает формирование одного парасегмепта. Эта особенность
развития, связанная с парасегментной организацией тела развивающегося живот
ного, характерна, как мы увидим, и для насекомых.
Обычно эмбриональное развитие ракооб
разных завершается образованием личинки —
шуплиуса (рис. 9-20). У высших раков, од
нако, науплиальная стадия проходит в яйце,
и эмбриональный период завершается обра
зованием молодого животного или личинки,
тело которой образовано не только наупли-
альными, но и метанауплиалъными сегмен
тами, которые последовательно возникают в
зоне роста за счет активности экто- и мезоб-
ластов.
Как у всех Ecdysozoa, покровный эпителий
у Ракообразных секретирует кутикулу, ко
торая, затвердевая, ограничивает рост. Рост
становится возможным благодаря периодиче Рис. 9-21. Зоэа краба Callinectes sapidus
ским линькам, в промежутках между которы (по: Brusca, Brusca, 1990).
ми к ларвальным сегментам науплиуса добав
ляются новые сегменты. Эта особенность развития является одной из причин су
ществования многочисленных метанауплиальных форм ракообразных. В качестве
примера можно привести креветок, у которых науплиус после линьки трансформи
руется в протозоэа. Протозоэа после ряда линек дает личинку зоэа с характерным
заостренным шлемом, стебельчатыми глазами и тремя парами максиллопедий (рис.
9-21). Наконец, зоэа превращается в ювенильную форму животного.
9.2.4■ Насекомые
173
бенностями организации оогенеза. Если для Apterygota и Hemimetabola характерны
паноистические яйцевые трубки, то Holomet.abola присущи в основном мероистиче-
ские яичники, причем у перепончатокрылых, бабочек и мух это так называемые по-
литрофные мероистические яичники (см. гл. 1). Такая корреляция примечательна.
Она позволяет думать, что эволюционные преобразования, затрагивающие репро
дуктивную систему животных, важны не только непосредственно для репродуктив
ных процессов per se, но, открывая новые возможности для организации оогенеза,
косвенным образом могут затрагивать сущностные события онтогенеза животных.
За исключением бескрылых ногохвосток и ряда живородящих и паразитических
видов крылатых насекомых (щитовки, наездники и др.), у которых дробление пол
ное, насекомые имеют поверхностньт тип дробления яйца, что связывают с исклю
чительно высоким содержанием желтка. Яйцо обычно имеет достаточно жесткую
наружную оболочку — хорион, защищающий зародыш от механических поврежде
ний и высыхания. При осеменении спермии проникают в яйцо через особое отверстие
хориона— микропиле, которое обычно расположено на переднем конце яйца, хотя
у некоторых насекомых, например у прямокрылых (Orthoptera), положение микро
пиле может быть и иным.
Деление ядра зиготы, которое окружено цитоплазматическим «двориком», про
исходит автономно, т. е. не сопровождается делением цитоплазмы. В результате син
хронных кариокинетических делений возникают многочисленные ядра. Ядерные
энергиды, т. е. ядра с окружающей их цитоплазмой, согласованно перемещаются по
цитоплазматическим тяжам из глубоких слоев яйца на его периферию (рис. 9-22).
В период делений ядер и вплоть до их выхода на поверхность яйца зародыш
имеет синцитиальную структуру. Это своеобразие ранних этапов развития имеет
174
'м
Рис. 9-23. Целлюляризация поверхности яйца дрозофилы
(по: Fullibove, Jacobson, 1971).
А, Б - митотическое деление и возникновение борозды дробле
ния; В, Г — удлинение ядра и распространение режущей борозды в
глубь цитоплазмы; Д — клеточная бластодерма. 1 — поверхность яй
ца; 2 — формирующаяся борозда дробления; 3 — ядро; 4 — желток.
175
существенные физиологические последствия. Действительно, отсутствие разделяю
щих ядра клеточных мембран исключает возможность межклеточных взаимодей
ствий с помощью лигандов и мембранных рецепторов, но обеспечивает свободную
диффузию РНК и белков, запасенных в период оогенеза или синтезированных по
сле оплодотворения, по всему зародышу, если они специально не зафиксированы
в какой-либо области яйцевой клетки. Эти условия распространения сигнальных
молекул у ранних зародышей насекомых резко отличаются от того, что имеется у
животных, дробящиеся зародыши которых имеют клеточную структуру.
После выхода ядер в поверхностный слой цитоплазмы яйца— периплазму (у дро
зофилы это происходит в конце 9-го цикла дробления), образуется синцитиальная
бластодерма (рис. 9-23, А-Б). В результате формирования мембран, разграничива
ющих клеточные территории, поверхность зародыша дробится на отдельные клетки
(«поверхностное» дробление) и возникает клеточная бластодерма (рис. 9-23, Д).
Часть энергид дробления остается в желтке, становясь вителлофагами. Вител-
лофаги —это специализированные, часто полиплоидизированные клетки, которые
участвуют в переработке и усвоении желтка. Образуемый вителлофагами желточ
ный синцитий, возможно, играет и морфогенетическую роль, способствуя направ
ленному разрастанию зародышевой полоски.
Зародышевая полоска представляет собой сгущение клеток бластодермы, кото
рое обычно возникает на вентральной стороне яйца. Сгущение клеток происходит
прежде всего благодаря изменению их формы — в области полоски они становятся
столбчатыми. Различают три типа зародышевых полосок: короткие, полудлшшые
(промежуточные) и длинные (рис. 9-24). Короткие полоски имеют вид диска, мате
риал которого дает начало сегментам головы, тогда как рост зародыша обеспечива
ется лежащей сзади от диска пролиферативной зоной. Полудлинные зародышевые
полоски широко распространены у Hemimetabola, они образуют два вентролате-
ральных скопления клеток, которые смыкаются на вентральной стороне и дают
начало голове и сегментам груди, тогда как остальные сегменты формируются за
счет клеток зоны рост'а. Длинные полоски характерны для Holometabola. Они содер
жат материал всех сегментов и не имеют зоны роста, занимая не менее 80% длины
яйца.
Как показывают наблюдения за судьбой клеток зародышевой полоски, ее меди
альная часть на большем протяжении занята материалом презумптивной мезодер
мы, тогда как передняя и задняя области полоски — презумптивной энтодермой. По
бокам от медиальных зачатков располагаются симметричные полоски нейроэкто
дермы.
%
100
80
60
40
176
Способы обособления зародышевых листков у насекомых многообразны. Погру
жение материала будущей мезодермы и энтодермы может происходить одновремен
но, но иногда эти процессы разобщены во времени. Разнообразны и механизмы пе
ремещения клеточного материала с поверхности зародыша. У многих насекомых
происходит иммиграция, т. е. выселение отдельных клеток, которые располагаются
между эпибластом и желтком. У некоторых видов погружающиеся вглубь клетки
не теряют эпителиальной структуры. Так, например, у Scolia quadrijmnctata имеет
место своеобразная эпиболия. R ходе этого процесса медиальная часть зародышевой
полоски отделяется продольными бороздами от ее латеральных частей. Последние
своими свободными краями нарастают по поверхности отделившейся медиальной
полоски навстречу друг другу и смыкаются, в конце концов, по средней линии за
родыша. У многих насекомых, в том числе и у дрозофилы, происходит инвагинация
медиальной части зародышевой полоски, в результате которой формируется про
дольно расположенная мезодермальная трубка (рис. 9-25). На стадии гаструляции
в той области, где происходит иммиграция, инвагинация или эпиболия, некоторое
время сохраняется продольная бороздка.
177
Рис. 9-26. Схема формирования брюшной нервной цепочки у насекомых
(по: Johansen, Butt, 1941). Поперечные срезы. Вентральная область внизу.
А — стадия обособления мезодермального зачатка и образования первичной бо
роздки; Б, В — последовательные стадии спецификации нейробластов; Г — образо
вание брюшной нервной цепочки. 1 — желточное ядро; 2 — мезодерма; 3 — амнио
тическая складка; 4 — эктодерма; 5 — первичная бороздка; 6 — сероза; 7 — амнион;
8 - нейробласты; 9 — целом; 10 — висцеральный листок мезодермы; 11 — клетки
крови; 12 — жировое тело; 13 — соматический листок мезодермы; 14 — брюшная
нервная цепочка.
178
жащие в пределах одного сегмента, соединяются двумя компссурами. С ипсилате-
ральными ганглиями, т. е. с ганглиями, .лежащими на одной и той же стороне тела
(от лат. ipse — сам), они соединяются с помощью копнектив.
Энтодермальные зачатки средней кишки образуются обычно на переднем и зад
нем концах зародышевой полоски (рис. 9-27). Впоследствии в област и этих зачатков
происходит инвагинация эктодермы и образуются — на переднем конце стомодеум,
эктодермальный зачаток передней кишки, и на заднем конце проктодеум, экто
дермальный зачаток задней кишки. На границе между задней и средней кишкой
формируются органы выделительной системы насекомого — мальпигиевы трубоч
ки, открывающиеся в заднюю кишку.
Одновременно с гаструляцией происходит растяжение зародышевой полоски. У
видов с длинной зародышевой полоской в результате этого процесса она, распро
страняясь по срединной линии зародыша, огибает заднюю оконечность желточной
массы и движется в переднем направлении по спинной стороне зародыша. При
этом задний конец полоски приближается к ее переднему концу. В период растя
жения полоска обнаруживает первые признаки метамеризации, поскольку образу
ются парасегменты и /детерминируются границы будущих сегментов тела (подроб
нее см. том 2). На следующем этапе развития происходит укорочение зародыше
вой полоски, и ее задний конец вновь совпадает с задней оконечностью желточной
массы.
179
Рас. 9-28. Схема развития амниотической полости у насекомых
(по: Chapman, 1982).
А — появление латеральных складок, растущих в медиальном направлении (ука
зано стрелками); Б — смыкание складок; В — слияние складок с образованием двух
оболочек — амниона и серозы. 1 — бластодерма; 2 — желток; 3 — зародышевая
полоска; 4 — амниотическая складка; 5 — сероза; 6 — амнион; 7 — амниотическая
полость.
180
6
Рис. 9-29. Бластокинез у стрекозы Calopteryx (по: Johansen, Butt, 1941).
A- В — анатрепсис; Г -Е — кататрепсис. 1 — оболочка яйца (хорион); 2 — сероза;
3 — желток; 4 — задний конец зародыша; 5 — амнион, 6 — передний конец зародыша;
7 — амниотическая полость.
181
Рис. 9-30. Перемещение полового зачатка в ходе формирования зародышевых листков
у мухи Dacus (по: Anderson, 1962).
1 — задний зачаток средней кишки; 2 — половой зачаток; 3 — проктодеум; 4 — желточ
ный синцитий; 5 — бластодерма; 6 — стомодеум; 7 — передний зачаток средней кишки; 8 —
мезодерма; 9 — эктодерма.
вая система, отсутствуют крылья и некоторые другие органы взрослых форм, или
имаго (от лат. imago — изображение, портрет). Вместе с тем личинки имеют свои
специфические органы, позволяющие им продолжать развитие, рост и накопление
энергетических резервов, которые потребуются на стадии имаго для процессов раз
множения. Адаптивное значение личиночной стадии очевидно. Именно благодаря
личиночной стадии становится реальным создание энергетического запаса, необхо
димого для достижения дефинитивного состояния и продолжения рода.
Поскольку покровный эпителий насекомых, как и у всех Ecdysozoa, вырабаты
вает жесткий кутикулярный экзоскелет, рост и развитие личинки возможны только
благодаря периодическим линькам, в ходе которых покровы животного утрачива
ют связь с кутикулой. После линьки, или эк&изиса (от греч. ех6и<ж — удаление)
открывается возможность роста. У насекомых, как и других членистоногих, име
ются особые гормоны, контролирующие процессы линьки. Гормоном линьки слу
жит экдизон, который вырабатывается в особых проторакальных (экдизиальных)
железах личинок. Под влиянием экдизона в гиподерме личинки стимулируется про
лиферация клеток и инициируется отделение кутикулы. Поддержание способности
к линькам обеспечивается ювенильным гормоном, который продуцируется так на
зываемыми прилежащими телами (corpora allata). Хирургическое удаление corpora
allata ведет к преждевременному прекращению линек и формированию карликовых
животных. Наоборот, трансплантация прилежащих тел от молодых личинок позд
ним продлевает период линек и способствует образованию ненормально крупных
насекомых (Pflugfelder, 1958).
Начавшийся после линьки период роста завершается образованием экзоскелета,
после чего рост останавливается. Периодическое сбрасывание кутикулярного покро
ва завершается по достижении имагинальной стадии. У некоторых насекомых число
линек строго детерминировано и обычно невелико (до шести линек), у других чис
ло линек зависит от условий существования и достигает 20 (поденки) или даже 40
(платяная моль).
182
У Hemimetabola вышедшая из яйцевых оболочек молодь имеет значительное
сходство с имаго, хотя и отличается от взрослых форм размерами и отсутствием
крыльев, зачатки которых, впрочем, появляются уже после первой линьки. Юве
нильные формы (от лат. juvenilis — юный) Hemimetabola называются нимфами (от
греч. vujifpa — девица, невеста) или (у веснянок, поденок, стрекоз) наядами (от греч.
vaiac — нимфа вод). По мере развития нимфы растут и приобретают все характер
ные для имаго признаки.
У Holometabola личинки резко отличаются от взрослых форм. Как правило, они
имеют червеобразное тело. У некоторых видов личинки лишены ног, у других имеют
только грудные ноги, личинки третьих обладают и грудными и брюшными конеч
ностями. В отличие от нимф личинки Holometabola в процессе роста и развития
сохраняют свой личиночный облик. Трансформация в этом случае происходит на
стадии куколки, когда возникают специфические признаки взрослого животного с
характерным членением тела, с конечностями и крыльями. Появлению взрослого
животного предшествует последняя линька.
В ходе развития многие ткани личинки полиплоидизируются и при превращении
личинки во взрослую особь замещаются диплоидными. Глубина метаморфоза личи
нок варьирует. Например, у многих мух и перепончатокрылых в ходе метаморфоза
практически вся личиночная гиподерма разрушается и замещается имагинальной.
Разрушаются личиночные лабиальные железы. Радикальной перестройке подверга
ется мускулатура. Новый облик приобретает трахейная дыхательная система. Раз
рушение личиночных тканей происходит путем гистолиза и фагоцитоза. Активную
роль в процессах метаморфоза играет апоптоз.
Построение новых органов взрослой особи происходит при участии специальных
зачатков — так называемых имагинальпых дисков, или особых резервных скоплений
диплоидных имагинальных клеток — гистобластов, входящих в состав функциони
рующих полиплоидных тканей личинки. Дифференциация имагинальных дисков и
гистобластов начинается при получении соответствующего гормонального сигнала
на стадии куколки, тогда как спецификация клеток происходит на стадии бласто
дермы. Характер спецификации клеток, образующих впоследствии имагинальные
диски, зависит от положения этих клеток вдоль передне-задней и дорсо-вентральной
осей. Эти детерминированные на образование дисков клетки практически не про
лиферируют, однако на личиночной стадии клеточные деления возобновляются, и
соответственно происходит рост дисков. У дрозофилы имеется десять основных пар
183
имагинальных дисков и один непарный диск в задней области тела, идущий на
построение репродуктивных органов животного. Наиболее крупный диск дрозофи
лы — имагинальный диск крыла содержит около 60 тыс. клеток, имагинальные дис
ки ног или жужжалец — примерно по 10 тыс. клеток.
Литература
И ванова-Казас О. М. Класс Nematodes — круглые черви / / Сравнительная эмбриология
беспозвоночных животных. Новосибирск, 1975. С. 102-136.
И ванова-Казас О. М. Класс Arachnoidea— паукообразные / / Сравнительная эмбриоло
гия беспозвоночных животных. Членистоногие. М., 1979. С. 54—76.
И ванова-Казас О. М. Класс Crustacea —ракообразные / / Там же. С. 112-174.
И ванова-Казас О. М. Крылатые насекомые / / Сравнительная эмбриология беспозво
ночных животных. Неполноусые. М., 1981. С. 47-83.
Иванова-Казас О. М. Многоножки / / Там же. С. 5-20.
Иванова-Казас О. М. Вторичные личинки / / Эволюционная эмбриология животных.
СПб., 1995. С. 406-421.
Глава 10. DEUTEROSTOM IA.
ИГЛОКОЖ ИЕ (ECHINODERM АТА)
185
мезодермальный зачаток образуется благодаря пролиферации особых стволовых
клеток — мезотелобластов, коммитирование которых происходит на стадии дроб
ления.
В действительности у билатеральных животных имеются разнообразные спосо
бы формирования мезодермы. Мы видели, например, что у многих членистоногих,
мезодерма специфицируется в виде двух симметричных вентролатеральных поло
сок, расположенных вдоль длинной оси зародыша, которые погружаются в глубь
зародыша, сохраняя эпителиальную структуру Наоборот, у позвоночных мезодер
ма образуется главным образом в результате иммиграции клеток зародышевой по
лоски. В наиболее отчетливом виде телобластический и энтероцельный способы об
разования мезодермы сохранились лишь у наиболее примитивных представителей,
соответственно первично- и вторичноротых.
186
Характерной особенностью иглокожих является наличие биоминерального эн
доскелета, представленного различного рода пластинками и иглами, лежащими
в соединительной ткани. Другой особенностью иглокожих служит наличие амбу
лакральной, или водно-сосудистой системы, которая обеспечивает локомоторную
функцию органов движения.
Дня иглокожих характерно наружное оплодотворение. Дробление обычно
полное, радиальное, завершающееся формированием подвижной целобластулы
(рис. 10-1). Два первых деления меридиональные, их плоскости проходят перпенди
кулярно друг другу. Третья борозда — экваториальная. У многих иглокожих (мор
ские звезды, голотурии) дробление равномерное. У морских ежей, начиная с четвер
того цикла, дробление приобретает неравномерный характер, так как бластомеры
анимального полушария делятся меридионально, тогда как вегетативная четверка
делится широтной бороздой на мелкие вегетативные клетки и крупные, лежащие
в экваториальной области Таким образом, на стадии 16-бластомеров образуются 8
анимальных мезомеров, за которыми следуют 4 макромера и, наконец, на вегета
тивном полюсе располагаются 4 микромера (рис. 10-1, В). При следующем делении
микромеры дают большие, прилегающие к макромерам, и малые микромеры, кото
рые занимают вегетативную оконечность зародыша. Как обнаруживается в опытах
с прижизненной маркировкой бластомеров, а также в опытах по изоляции бласто
меров, мезомеры анимального полушария представляют собой зачаток эктодерм!,i
зародыша и по завершении дробления образуют жгутики.
Известный шведский исследователь Свен Херстадиус (Horstadius, 1939) изолиро
вал разные области зародыша морского ежа на стадии 64 клеток. Из изолированных
анимальных венцов бластомеров (рис. 10- 2 ) возникали миниатюрные бластулопо-
Д CD
187
добньге зародыши, в составе которых были только эктодермальные клетки. Такие
зародыши получили наименование «вечной бластулы», так как они активно пла
вали, но их развитие дальше не шло, гаструляция не происходила, и никаких иных
дифференцированных элементов кроме эктодермальных жгутиковых клеток не воз
никало. Клетки вегетативного полушария имеют более широкий круг производных,
включая эктодерму, энтодерму и мезодерму. При изоляции анимачьных венцов вме
сте с вегетативными клетками развивались аномальные зародыши, но тем не менее
с кишечником и элементами скелета.
Ведущая роль в спецификации клеток развивающегося зародыша морского ежа
принадлежит микромерам. В частности, микромеры способны индуцировать обра
зование энтодермы. Как было показано в экспериментах Герстадиуса, при объедине
нии мезомеров анимальной половины с микромерами часть клеток презумптивной
эктодермы превращалась в энтодермальный зачаток, и формировался плутеус. Роль
микромеров в индукции энтодермы была продемонстрирована в опытах по пересадке
микромеров на анимальное полушарие зародыша морского ежа на стадии 16 клеток.
Посте такой трансплантации у зародыша энтодерма возникала и на вегетативном и
на анимальном полюсе. Соответственно возникали две области инвагинации и фор
мировались два архентерона (рис. 10-3).
188
Б
Оральная Аборальная Оральная Аборальная
эктодерма эктодерма эктодерма эктодерма
(18) (22)
Вегетативная
пластинка
(8 )
Скелетогенные Скелетогенные
микромеры микромерь: Малые
( 8) Малые микромеры
микромеры
(4)
Рис. 10-4 Регионализация бластулы морского ежа (по: Davidson, 1989).
А — объемная модель: Б — схема расположения зачатков, экспрессирующих разные регуля
торные гены и имеющих, соответственно, различные проспективные значения, перед началом га
струляции. В скобках — число клеток, составляющих данную зону.
189
Рис. 10-6. Рост архентерона мор
ского ежа за счет ре аранжировки его
клеток (по: Wray, 1997).
Прослеживается изменение по
ложения клеток (1-7), ведущее к
растягиванию архентерона.
190
Рис. 10-7. Начальные стадии формирования личинки морского ежа
(по: Onoda, 1931).
А — переход от стадии гаструлы к стадии призмы: A-V — анимально-ве-
гетативная ось; or-abor — орально-аборальная ось. Б — стадия призмы: 1 —
пищевод; 2 — желудок; 3 — скелетная игла; 4 — бластопор.
191
архентеропа (непарный энтероцель), хотя иногда целомические мешки возникают
как парное образование на боковых стенках первичной кишки. Непарный мешок
личинки морского ежа (рис. 10-8) подразделяется на правый и левый целомы. Они,
в свою очередь, делятся перешнуровками на передний, средний и задний отделы —
аксоцелъ, гидроцелъ и соматоцелъ соответственно. На основе левых аксо- и гид-
роцеля происходит развитие амбулакральной системы животного Левый аксоцель
дает начало поровому каналу, а левый гидроцель в ходе развития принимает фор
му 5-лопастного диска и впоследствии формирует амбулакральное кольцо, основу
водно-сосудистой системы взрослого животного. Правые аксо- и гидроцели часто де
генерируют, а соматоцели обычно образуют мезентерий и целомическую выстилку
полости тела.
Развитие иглокожих обычно непрямое, хотя у многих видов развитие с личин
кой может утрачиваться. При непрямом развитии после гаструляции формируется
личинка, которая затем претерпевает метаморфоз и превращается во взрослое жи
вотное.
Имеется два основных типа развития с личинкой: развитие с планктотроф-
ной личинкой типа диплеврулы, которая питается микроскопическими организмами
планктона, и развитие с лецитотрофной личинкой, т. е. личинкой, имеющей боль
шие запасы питательных веществ в виде желтка, синтезированного еще в период
оогенеза в материнском организме. В первом случае личинки имеют разнообраз
ные приспособления к пелагическому образу жизни. У морских звезд пелагическая
192
Рис. 10-10. Аурику лярия голотурии
Synapta villata (по: Mortensen, 1937).
А — вид с брюшной стороны; Б — вид
сбоку. 1 — известковое тельце; 2 — реснич
ный шнур; 3 — рот; 4 — личиночная нервная
система; 5 желудок; 6 — анус. д
193
10
Рис. 10-12. Эхиноплутеус морского ежа Strongylocentrotus droebachiensis.
Вид со спинной стороны (по: Стрелков, 1985).
1 — ротовое отверстие; 2 — преоральная лопасть; 3 — передние
дорсальные руки; 4 — посторальные руки; 5 — задние дорсальные
руки; 6 — гидропор; 7 — передний левый целом; 8 — средний левый
целом; 9 — задний левый целом; 10 — задняя кишка; 11 — средняя
кишка; 12 — эполеты; 13 — скелет рук; 14 — передняя кишка; 15 —
известковая дужка; 16 — мезенхима; 17 — ресничный шнур.
194
ка служит впячивание эктодермы на левой
же стороне тела личинки. Это впячива
ние называют амниотическим. Амниотиче
ское впячивание иногда полностью отшну-
ровывается от поверхности тела в виде за
мкнутого мешочка, хотя у некоторых ви
дов оно может сохранять связь с внеш
ней средой. Утолщенная эктодерма, кото
рая образует дно амниотической полости,
в области 5-лучевого гидроцеля также ста
новится 5-угольной и представляет собой
зачаток органов оральной области будуще
го животного. Во время метаморфоза на
правой стороне личинки начинают форми
роваться органы аборальной области мор
ского ежа. Одновременно происходит ре Рис. 10-14•Метаморфоз у морских ежей
(по: Mac Bride, 1905).
дукция личиночных органов, перестройка 1 — правый передний целом; 2 — мадрепоро-
кишечника и развитие дефинитивного ске вый пузырек; 3 — левый передний целом; 4 —
лета. правый задний целом; 5 — амниотическая по
лость; 6 — гидроцель; 7 — левый задний целом;
8 — педицеллярий.
Л итература
196
Chordata
I----------------------------------------------------------------------------------------- 1
Tunicata Cephalochordata Vertebrata
197
ток, представленных шестью типами тканей. Асцидии привлекают внимание еще и
потому, что у многих видов разные области яйца по-разному окрашены, и при дроб
лении естественным образом маркированная цитоплазма попадает в разные бласто
меры. Это обстоятельство в сочетании с малым числом клеток и быстрым темпом
развития (менее суток от оплодотворения до плавающей личинки) облегчает деталь
ное исследование родословных разных клеточных линий. В наши дни обнаружилось
еще одно привлекательное свойство асцидий как модельного объекта. Оказалось, что
у асцидий сравнительно небольшой геном, а это существенно облегчает процедуру
выделения и клонирования генов, контролирующих процессы развития.
Дробление у асцидий билатеральное. Уже первая борозда, которая проходит по
меридиану через середину желтого серпа (рис. 11-3, Б, В), делит яйцо на симмет
ричные половины, так что миоплазма равномерно распределяется между левым,
и правым бластомерами. Вторая борозда также меридиональная, но проходит под
прямым углом к первой и делит зародыш на переднюю и заднюю половины. Мио
плазма при этом остается в задних бластомерах (рис. 11-3). Третья борозда — эква
ториальная. Она делит зародыш на анимальную и вегетативную половины, каждая
из которых на этой стадии насчитывает по 4 клетки.
198
черкиваются снизу. Индексы левой половины остаются без подчеркивания. Цифра,
следующая за литерой, указывает номер генерационного цикла: яйцо — первая ге
нерация, 2 бластомера — вторая, 4 бластомера — третья и т.д. Вторая цифра, отде
ленная от первой точкой, обозначает номер клетки в данном квадранте зародыша:
номера идут в определенной последовательности, а именно, от передних вегетатив
ных к задним вегетативным и далее от передних анимальных к задним анимальпым.
Эти номера являются «сквозными» для данного квадранта. Например, на стадии 16
клеток в каждом квадранте имеется по 4 клетки, и вторая цифра индекса принимает
значения 1, 2, 3, 4; на стадии 32 клеток — от 1 до 8.
Первые два бластомера обозначаются как АВ2 и АВ2 На стадии 4 клеток име
ются две передние клетки АЗ, АЗ и две задние ВЗ и ВЗ. На стадии 8 бластомеров в
вегетативном полушарии спереди расположены клетки А4.1 и А4.1. а сзади В4.1 и
В4.1, тогда как в анимальном полушарии спереди расположены а4.2 и а4.2, а сзади
Ь4.2 и Ь4.2. Итак, если клетка имеет, например, индекс В6.8, то это означает, что
это клетка 32-клеточного зародыша (индекс 6; 2^6-1^ — 32), что она расположена
в вегетативном полушарии слева (прописная литера без подчеркивания), причем
занимает крайнее заднее положение (8 — последний номер, так как на стадии 32
клеток в каждом квадранте 32 :4 = 8 клеток).
Изучение клеточных родословных позволя
ет построить карту презумптивных зачатков на
разных стадиях развития. Так, эта карта, спро
ецированная на яйцо, показывает, какие обла
сти яйца дают в ходе дробления те или иные
зачатки (рис. 11-4). Видно, что материал ани-
малъной области яйца в процессе дробления по
падает в бластомеры, дающие начало эктодер
ме личинки, тогда как цитоплазма вегетативной
области — в клетки будущей энтодермы. Судьба
Рис. 11-4- Карта презумптивных за
цитоплазмы экваториальной области различна.
чатков асцидии на стадии двух бласто
В будущей задней области расположен матери меров (по: Brien, 1958).
ал желтого серпа, или миоплазма, связанная с 1 — редукционные тельца на анималь
дифференциацией мезенхимы и мускулатуры, а ном полюсе; 2 — эктодерма; 3 — нейраль
ный зачаток; 4 — материал хорды; 5 —
в будущей передней области лежит цитоплазма,
энтодерма; 6 — мезодерма; 7 — каудаль
которая войдет в состав бластомеров, дающих ная мезодерма.
начало хорде и зачатку нервной системы.
Органообразующие области хорошо просматриваются и на стадиях дробления.
Так, на стадии 32 бластомеров из 16 клеток анимального полушария 14 дают впо
следствии эктодерму. В вегетативном полушарии в центре расположены 6 богатых
желтком бластомеров, потомки которых образуют энтодерму, имеется 6 бластоме-
ров, содержащих миоплазму и соответственно дающих начало клеткам мезодермы,
и, наконец, 4 клетки у переднего края —зачаток хорды и нервной системы.
В результате дробления, которое завершается на седьмом цикле, возникает
несколько уплощенная в анимально-вегетативном направлении бластула, не име
ющая выраженной полости.
Следующий этап развития — гаструляция — у асцидий обеспечивается тремя ско
ординированными процессами перемещения клеток — инвагинацией, инволюцией и
эпиболией (рис. 11-5).
199
Рис. 11-5. Гаструляция у асцидий (по: Conklin, 1905).
А -В — последовательные стадии процесса: 1 — редукционные тельца;
2 — эктодерма; 3 — энтодерма; 4 — нейральный зачаток; 5 — хорда; 6 —
каудальная мезодерма; 7 — мезенхима. Стрелкой обозначена передне-задняя
ось тела.
200
Рис. 11-6. Презумптивные зачатки асцидии Styela на стадии бластулы
и ранней гаструлы (по: Conklin, 1905).
А — стадия 64 бластомеров; Б — ранняя гаструла (переход к 128 бластомерам).
1 — энтодерма; 2 — хорда; 3 — нейральный зачаток; 4 — мезенхима; 5 — каудальная
мезодерма.
Рис. 11-7. Личинка асцидии Сгопа. Вид с левой стороны (по: Kowalevsky, 1871).
1 — прикрепительные присоски; 2 — подбородок; 3 — эндостиль; 4 — ротовое отверстие; 5 —
мозговой пузырь; 6 — глаз; 7 — кишка; 8 — нервная трубка; 9 — хорда; 10 — место образова
ния анального отверстия; 11 — оттолит; 12 — отверствие перибранхиальных мешков; 13 — мышцы
хвоста; 14 — жаберная глотка; 15 — жаберные щели.
201
у высших хордовых, возможно, было распространение зачатков хорды и нервной
системы до самого переднего конца зародыша, которое стало возможным после ука
занного перемещения закладки ротового отверстия.
Вслед за гаструляцией происходит нейруляция, или процесс формирования нерв
ной трубки. Суть нейруляции состоит в том, что нервная пластинка изгибается
внутрь, образуя сначала желобок, который затем замыкается на спинной стороне.
Замыкание нервной трубки начинается на заднем ее конце и затем распространяет
ся вперед. Небольшое отверстие, которое соединяет полость нервной трубки с внеш
ней средой, нейропор, сохраняется на переднем конце зародыша до конца нейру
ляции. Передний конец нервной трубки расширяется и принимает вид пузырька
(чувствительный, или церебральный пузырек). Из стенок пузырька образуются ор
ганы чувств личинки — глаз и статолит. Задняя часть трубки дифференцируется
как спинной мозг.
202
11.2. Головохордовые, или Бесчерепные (Cephalocliordata, Acrania)
203
Рис. 11-9. Дробление яйца ланцетника (по Conklin, 1932).
А — яйцо перед началом дробления (сагиттальный срез); Б —
стадия 4 бластомеров (вид с анимального полюса); В — стадия 8
бластомеров (вид сбоку: передние бластомеры слева, анимальный по
люс вверху); Г — стадия 32 бластомеров. 1 — редукционное тельце;
2 — мужской и женский пронуклеусы. Стрелкой показано положение
передне-задней оси.
204
эктодермальные клетки анимального полушария делятся быстрее, чем энтодермаль-
ные, занимающие центральную область вегетативного полушария.
После пятого деления дробления внешняя билатеральность зародыша утрачива
ется. В результате дробления образуется целобластула (рис. 11-10). Полость бласту
лы заполнена студенистым веществом, роль которого, возможно, связана с растя
жением зародыша. Исследование судьбы клеток, занимающих разные области бла
стулы, позволило построить карту презумптивных зачатков на стадии дробления
(рис.11-11, Б). На вегетативном полюсе расположены относительно крупные клет
ки, дающие после гаструляции начало энтодермальному зачатку. Сзади этот зача
ток ограничен презумптивной мезодермой, клетки которой наследуют цитоплазму
мезодермального серпа оплодотворенного яйца. Впереди от презумптивной энтодер
мы располагаются клетки, которые впоследствии образуют хорду и нервную ткань.
Сравнение карт презумптивных зачатков ланцетника и асцидий убеждает в принци
пиальном сходстве пространственной организации зародышей представителей под
типа Бесчерепных и подтипа Оболочников (см. рис. 11-4 и 11-11).
2
2
3
5
205
Рис. 11-12. Гаструляция у ланцетника (по: Шмидт, 1953)-
А — начало гаструляции: видно легкое впячивание энтодермаль-
ной пластинки (справа); Б — ранняя гаструла; В — средняя гаструла,
завершение инвагинации; Г — поздняя гаструла.
206
латеральные и вентральную области первич
ной кишки. Замыкаясь в трубку, этот матери
ал образует зачаток кишки личинки.
Вслед за гаструляциеи происходит нейру-
ляция, в течение которой формируется за
чаток центральной нервной системы (рис. 11-
15). На начальных этапах нейруляции ней
роэктодерма, занимающая дорсальное поло
жение, утрачивает связь с эктодермальным
пластом. При этом свободные концы экто
дермального пласта получают возможность
расти по поверхности нервной пластинки, в
результате чего последняя изолируется от
внешней среды покровным эпителием. Лате
ральные концы нервной пластинки приподни
маются и образуют желобок, смыкающийся
позднее вдоль дорсальной линии в трубку. На
переднем конце полость нервной трубки неко
торое время сообщается с внешней средой с
помощью пейропора, тогда как на заднем об Рис. 11-14• Образование сомитов и
нервной трубки у ланцетника (по: Conklin,
разуется первно-кишечный канал, связываю 1933).
щий полость нервной трубки с полостью ар 1 — хорда; 2 — кишка; 3 — нервная труб
хентерона. Как и гаструляция, нейруляция у ка; 4 — нервно-кишечный канал; 5 — соми
ланцетника и асцидий обнаруживает большое ты.
сходство.
1 ?
207
дит лишь на стадии метаморфоза. Некоторые исследователи придают наблюдаемой
асимметрии закладки органов филогенетическое значение, усматривая в ней исто
рические свидетельства происхождения бесчерепных животных.
Литература
Иванова-Казас О. М. Подтип Acrania / / Сравнительная эмбриология беспозвоночных
животных. Низшие хордовые. М., 1978. С. 5 23.
Иванова-Казас О. М. Класс Ascidiacea — асцидии / / Там же. С. 23-56.
Иванова-Казас О. М. Очерки по филогении низших хордовых / / Труды СПбОЕ. 1995.
Т. 84. Вып. 4. 159 с.
Малахов В. В. Новый взгляд на происхождение хордовых / / Природа. 1982. Т. 5. С. 12-
19.
Глава 12. DEUTEROSTOM IA.
НИЗШ ИЕ ПОЗВОНОЧНЫЕ (A N A M N IA )
209
12.1. Круглоротые (Cyclosfomata). Минога
Рис. 12-1. Схема расположения презумп Рис. 12-2. Сагиттальный разрез через гастру-
тивных зачатков перед гаструляцией у ми лу миноги на стадии нарастания спинной губы
ноги (рис. Чекановской из; Иванов, 1945). бластопора (по: Иванов, 1945)-
1 — нейральный зачаток; 2 — зачаток 1 — бластоцель; 2 — бластопор; 3 — зачаток
хорды; 3 — эктодерма; 4 — мезодерма; 5 — хорды; 4 — нейральная пластинка; 5 — энто
энтодерма. Ж ирной линией обозначено ме дерма.
стоположение спинной губы бластопора.
210
ста в результате конвергентного удлинения. Сколько-нибудь заметной инвагинации
не наблюдается. Закладка спинной губы бластопора происходит в результате ин-
грессии. Вслед за этим в результате деления, но главным образом вследствие интер-
каляции смещающихся в медиальном направлении клеток, формирующих спинную
губу, последняя растет в заднем направлении, прикрывая при этом не гастроцель,
как у ланцетника, а энтодермальный зачаток, образованный клетками вегетативно
го полушария (рис. 12-2).
Боковые и задняя губы бластопора образуются на завершающей стадии гастру
ляции и окончательно закрывают зачаток энтодермы. Дальнейшее развитие состо
ит в дифференциации нервной трубки, хорды, мезодермы и кишечника. Следует
подчеркнуть своеобразие нейруляции у миноги, у которой первоначально заклады
вается нервный тяж, тогда как полость нервной трубки, как и у рыб, возникает
позднее.
211
Рис. 12-3. Схема строения ооцита амфи
бии (по: Brachet, 1980).
В левой части схемы представлено рас
пределение желточных гранул; в правой —
распределение рибосом. 1 — ядро; 2 — жел
точные гранулы; 3 — рибосомы; 4 — фолли
кулярные клетки. А и V — соответственно
анимальный и вегетативный полюс
—►
твс
212
спинной губы бластопора. Плоскость меридиана, который проходит через середину
серого серпа, представляет собой сагиттальную плоскость зародыша.
Дробление синхронное, полное, но неравномерное. Первые две борозды проходят
меридионально и перпендикулярно друг другу. Первая борозда проходит через сере
дину серого серпа и делит яйцо на правую и левую части (рис. 12-5), подобно тому,
как это происходит у асцидий и ланцетника. Третья борозда — широтная, или ла-
титудиналъная (от лат. latitudo — географическая широта) проходит в плоскости,
параллельной экваториальной, и отделяет анимальные бластомеры меньших разме
ров от крупных вегетативных (рис. 12-5). В результате четвертого меридионального
и пятого широтного деления образуется стадия 32 бластомеров. В процессе дроб
ления кортикальная цитоплазма, сопровождающая борозды дробления, частично
перемещается в глубь зародыша, что ведет к новым связям между основными ком
понентами яйца. На 12-м клеточном цикле наступает момент, так называемая точка
перехода на стадии средней бластулы (М ВТ point), когда синхронность дробления
нарушается.
213
Рис. 12-6. Схема строения бластулы амфи Рис. 12-7. Схема расположения презумп-
бии (по: Huttner, 1949). тивных зачатков перед гаструляцией зароды
ИМЗ — инволюирующая область мар ша амфибии (по: Иванов, 1947).
гинальной зоны; КБ — крыша бластоцеля; 1 — нейральный зачаток; 2 — зачаток хорды;
М3 — маргинальная зона. 1 — бластодель; 2 — 3 — мезодерма; 4 — мезенхима; 5 — эктодерма;
первичные половые клетки б — энтодерма; 7 — зачаток головной кишки.
Ж ирной линией обозначено местоположение
спинной губы бластопора.
214
отличие касается прежде всего презумптивного нейрального зачатка, большая часть
которого у амфибий перемещается на анимальную полоЕину зародыша. Смеще
ние нейрогенной зоны в анимальное полушарие, возможно, коррелирует с прогрес
сивным развитием нервной системы в ряду «низшие хордовые — низшие позвоноч
ные», и создает предпосылки для вовлечения в процесс нейрогенеза большего числа
клеток.
Отношение между положением нейрального зачатка и основной осью зародыша
варьирует у хвостатых и бесхвостых: у аксолотля нейрогенная зона распространя
ется практически до самого анимального полюса, тогда как у шпорцевой лягуш
ки граница нейрального зачатка отстоит от анимального полюса примерно на 45°
(рис. 12-8).
Гаструляция у амфибий благодаря развитию массивного энтодермального зачат
ка представляется еще более сложным процессом, чем у круглоротых. Первым при
знаком начавшейся гаструляции служит появление спинной губы бластопора. Она
возникает на дорсальной стороне в маргинальной области, разделяющей бластулу
на анимальное и вегетативное полушария. Спинная губа бластопора возникает в ви
де небольшой дугообразной щели, врезающейся в поверхность зародыша в области
серого серпа (рис. 12-9, 12-10). Появление этого щелевидного углубления обуслов
лено сокращением апикальных концов, удлинением тела и расширением базальных
областей лежащих здесь клеток энтодермального зачатка. Благодаря указанным из
менениям клетки принимают бутылковидную форму (рис. 12-11, В). Процесс фор
мирования бутылковидных клеток распространяется по окружности в латеральном
215
Рис. 12-10. Схема гаструляции у лягушки. Сагиттальный срез
(по: Шмидт, 1953).
А — бластула; В — начало гаструляции; В — стадия серповидного бластопора;
Г — стадия подковообразного бластопора; Д, Е — стадия желточной пробки. 1 — бла
стоцель; 2 — спинная губа бластопора; 3 — полость первичной кишки; 4 — эктодерма;
5 — энтодерма.
216
направлении, а позднее — назад, вызывая появление соответственно латеральных и
вентральной губ бластопора.
217
них лет, которые широко распространены в учебной литературе, в настоящее время
признается, что полость архентерона, в том числе и его крыша, выстлана энто
дермой.
Процессы, которые начинаются на спинной стороне зародыша, постепенно рас
пространяются латерально и назад, что приводит к образованию на поверхности
зародыша кольцевого бластопора, в центре которого долгое время сохраняются за
нимавшие вегетативный полюс богатые желтком клетки энтодермального зачатка,
так называемая желточная пробка.
Значение отдельных элементов морфогенетических движений у разных видов
амфибий заметно варьирует. В частности, у некоторых хвостатых амфибий и у ля
гушки Rana pipiens движущей силой гаструляции служит направленная миграция
клеток, тогда как у X. laevis образование архентерона может происходить и в от
сутствии миграции клеток.
После гаструляции основные зачатки зародыша располагаются следующим об
разом. Поверхность гаструлы образована эктодермой, вентральная область которой
впоследствии становится эпидермисом зародыша, а дорсальная дифференцируется
как нейральная ткань. Непосредственно под эктодермой в дорсальной области ле
жит дорсальная мезодерма, которая без резких границ переходит в латеральную и
далее в вентральную мезодерму. Полость архентерона образована энтодермой, кры
ша архентерона однослойна, тогда как его дно сформировано массивным зачатком,
состоящим из крупных, богатых желтком клеток.
Нейроэктодерма дорсальной области представлена столбчатыми клетками, ко
торые образуют нервную пластинку, лежащую непосредственно над зачатком хор
ды. У хвостатых амфибий клетки нервной пластинки, граничащие с эпидермисом,
сильно вытягиваются в высоту, сокращаясь при этом на вершинах. Края нервной
пластинки приподнимаются в виде нервных складок. Эти складки растут в меди
альном направлении и смыкаются по срединной линии зародыша. В области смыка
ния складок эпидермальные слои левой и правой стороны зародыша соединяются в
непрерывный пласт покровного эпителия, а нейроэктодерма складок замыкается в
нервную трубку. При этом дорсальная часть материала нервных складок обособля
ется в виде нервного гребня (рис. 12-12, 12-13), клетки которого обладают широкими
потенциями и, мигрируя в разные части тела, дифференцируются в разнообраз
ные структуры. У бесхвостых нервная пластинка состоит из поверхностного слоя и
внутреннего — сенсорного. Нервная трубка у них образуется только за счет клеток
сенсорного слоя (рис. 12-13).
Процесс образования нервных валиков начинается в головной области и после
довательно распространяется в заднем направлении. Скорость сближения нервных
валиков различна вдоль передне-задней оси зародыша. Она максимальна в средней
218
области туловища. Благодаря этому за
мыкание нервной трубки сначала про
исходит в средней части тела и из этой
области распространяется вперед и на
зад. Как и у низших хордовых, у амфи
бий на переднем конце образуется ней-
ропор, связывающий полость нервной
трубки с внешней средой. Задние кон
цы нервных валиков при смыкании об
разуют свод, прикрывающий бластопор,
который таким образом превращается в
нервно-кишечный канал.
Механизмы удлинения нервной пла
стинки у хвостатых и бесхвостых ам
фибий, по-видимому, также различны.
Во всяком случае в условиях орган
ной культуры однослойная нервная пла
стинка A. mexicanum растет в длину
только при наличии зачатка хорды, то
гда как у X. laevis удлинение многоряд
ной нейроэктодермы происходит и в от
сутствии хорды, за счет механизма кон
вергенции и растяжения.
Следует заметить, что возникнове
ние механизмов формообразования го
ловы с обособленным головным мозгом,
органами чувств и челюстями — органа
ми, которые сделали возможным и мно
гократно интенсифицировали активное
питание животных, стало важнейшей
вехой в их эволюции. Появление этих
механизмов, естественно, в сочетании
с другими преобразованиями онтогене Рис. 12-13. Схема формирования
за, открыло новые пути эволюции по нервной трубки у Xenopus laevis
звоночных, которые привели к появле (по: Elinson, 1997).
А — нервная пластинка, состоящая из поверх
нию Рыб, Амфибий, Рептилий, Птиц и
ностного (светлый) и сенсорного (темный) слоя;
Млекопитающих. Указанием на эволю Б, В — формирование нервной трубки за счет
ционную новизну краниогенеза, видимо, клеток сенсорного слоя.
может служить то обстоятельство, что
принципиальная схема развития головы
заметно отличается от схемы развития туловища.
Головной мозг у амфибий возникает из широкой передней части нервной пла
стинки. Рядом перетяжек головной мозг подразделяется на три главных отдела —
передний (prosencephalon), средний (mesencephalon) и задний (rhombencephalon)
мозг (рис. 12-14). Передний мозг после своего обособления подразделяется на две
области - лежащий впереди конечный мозг (telencephalon) и расположенный непо
средственно за ним промежуточный мозг (diencephalon), который сзади граничит
219
со средним мозгом. Конечный мозг
подразделяется билатерально, образуя
симметричные левое и правое полуша
рия и лежащие впереди от них обоня
тельные доли. У амфибий полушария
головного мозга развиты слабо. Проме
жуточный мозг дает начало глазным
пузырям, гипоталамусу и нейральной
части гипофиза, этого важнейшего ор
гана внутренней секреции.
Развитие глаза. После того, как
Шпеманн обнаружил зависимое разви
тие структур глаза, обусловленное ин
дукционными взаимодействиями (см.
том 2), развитие глаза амфибий стало
Рис. 12 -Ц ■ Строение головного мозга классической моделью эксперименталь
зародыша амфибий (по: Hugh, 1951). ной эмбриологии. Зачатки глаз возни
1 — конечный мозг (telencephalon); 2 — проме
жуточный мозг (diencephalon); 3 — средний мозг
кают в виде глазных пузырей — сим
(mesencephalon); 4 — задний, или ромбовидный метричных выростов, связанных с про
мозг (rhombencephalon); 5 — спинной мозг; 6 межуточным мозгом глазным стебель
глотка; 7 — печеночный вырост, 8 — закладка ком. Вначале короткий и широкий глаз
сердца; 9 — зачаток стомодеума.
ной стебелек по мере развития глаза
становится длинным и узким. Глазные пузыри растут в дистальном направлении
и достигают' эктодермы зародыша. Эктодермальные клетки в области контакта с
глазным пузырем становятся столбчатыми и образуют так называемую хрустали-
220
Г1
1 1
Рис. 12-16. Схема дифференциации голов
ного мозга и закладка органов чувств у позво
ночных (по; Waddington, 1956).
1 — передний мозг: 1.1 — telencephalon;
1.2 — diencephalon; 2 — средний мозг (mesen
cephalon); 3 — задний мозг: 3.1 — metencephalon;
3.2 — myencephalon; 4 — обонятельная плакода;
5 — инвагинация хрусталиковой плакоды; 6 —
слуховая плакода; 7 — сомит.
коеую плакоду (от греч. ттХахоО<; — лепешка, пирожок) (рис. 12-15). Обращенная к
плакоде стенка глазного пузыря инвагинирует в первичную полость глаза и обра
зует двухслойную чашу— глазной бокал (рис. 12-16). Внутренний листок глазного
бокала представляет собой зачаток сетчатки, а наружный листок — зачаток пиг
ментного эпителия. Хрусталиковая плакода также инвагинирует и образует пузы
рек, который затем отшнуровывается от покровной эктодермы (см. рис. 12-15) и
дифференцируется как хрусталик.
В процессе формирования глазной чаши первичная полость глаза исчезает, так
как ее листки тесно смыкаются, хотя и не срастаются друг с другом. Снаружи
глазной бокал окружается мезенхимными клетками, которые впоследствии дают
начало сосудистой оболочке и склере глаза. Кожный эпителий в области зачатка
глаза после обособления материала хрусталика дает начало роговице.
Нервный гребень. Важное значение в развитии позвоночных животных имеют'
клетки нервного гребня — удивительная популяция клеток эктодермального проис
хождения, дающая необычайно широкий спектр производных. Возникая на стыке
эпидермального и нейрального эпителиев, эти клетки в момент смыкания нервных
складок и образования нервной трубки теряют эпителиальную структуру и актив
но мигрируют', иногда на весьма большие расстояния. Среди производных нервного
гребня имеются разного рода пигментные клетки, спинальные ганглии, ганглии веге
тативной нервной системы, клетки глии, шванновские клетки, клетки эндокринных
желез, мезенхима и соединительная ткань, хондробласты, одонтобласты.
221
Рис. 12-17. Распространение клеток нервного гребня
в головной области зародыша амфибии (по: Stone, 1929).
А — нейрула; Б — стадия ранней хвостовой почки; В — стадия поздней хвостовой почки. 1 -
мандибулярный, 2 — гиоидный и 3 — жаберный потоки миграции клеток нервного гребня; 4 —
зачаток глаза; 5 — обонятельная плакода; 6 — слуховая плакода; 7 — пронефрос.
Особую роль играют клетки нервного гребня переднего отдела нервной трубки,
дающего головной мозг. Действительно, они дифференцируются не только как эле
менты сенсорной нервной системы (тройничный, лицевой, языкоглоточный, блужда
ющий ганглии), не только как парасимпатические ганглии, но и как скелетогенные
элементы, за счет которых строится большая часть черепа. После замыкания нерв
ной трубки наблюдается три основных потока миграции клеток нервного гребня —
мандибулярный, гиоидный и жаберный (рис. 12-17). Этот процесс столь интенсивен,
что на стадии поздней нейрулы массу мигрирующих клеток можно наблюдать при
жизненно по вздутиям эктодермы. Самый передний (мандибулярный) поток обра
зуется клетками гребня, расположенного в области среднего мозга. Мандибулярный
поток огибает зачатки глаз и устремляется вперед, окружая ротовое отверстие. Эти
клетки формируют переднюю часть нейрокраниума и хрящи челюстей. Гиоидный
поток образуется в зоне, расположенной впереди слухового пузырька, и дает хрящ,
подстилающий дно рта. В области, лежащей за слуховым пузырьком, мигрируют
клетки, которые образуют жаберные дужки. У головастика имеется четыре жабер
ные щели, через которые вода выводится из глотки наружу. Жаберные дужки свя
заны с образованием наружных жабр, которые во взрослом состоянии сохраняются
у хвостатых амфибий, а у бесхвостых заменяются на внутренние жабры.
Широкое участие клеток краниального нервного гребня в формировании хряще
вого черепа рассматривается как свидетельство в пользу гипотезы о том, что голова
позвоночных возникла как эволюционное новообразование, дополнившее план тела
протохордат (Gans, Northcutt, 1983). Реализация этого новообразования, как можно
полагать, оказалась возможной благодаря тому, что клетки краниального нервного
гребня вопреки, казалось бы, своей эктодермальной природе приобрели способность
стать новым источником хряща, который заменил отсутствующий в краниальной
области традиционный источник скелетогенной мезодермы — сомиты.
После завершения нейруляции зародыши амфибий приобретают общий для всех
позвоночных план строения тела (рис. 12-18), характерный для стадии фарингулы
(от лат. pharynx — глотка), т. е. стадии, на которой происходит образование жабер
ных щелей, лежащих по обе стороны глотки. На этой стадии под эпидермальным
эпителием находятся нервная трубка, которая преобразуется в спинной мозг, а так
же нервный гребень туловища. В отличие от краниального отдела клетки нервного
гребня туловища не способны к хондрогенезу.
222
Рис. 12-18. Поперечный разрез через зародыш амфи
бии на стадии фарингулы (по: Balinsky, 1981).
1 — нервный гребень; 2 — нервная трубка; 3 — сомит;
4 — субхордальный стержень; 5 — задняя кардинальная
вена; в — мезонефрос; 7 — мезодерма боковой пластинки;
8 — аорта; 9 — хорда; 10 — боковая линия; 11 — эктодерма;
12 — мезенхима; 13 — кишка.
223
Рис. 12-19. Последовательные стадии
формирования почки конечности у амфи
бий (по: Balinsky, 1981).
А — стадия скопления мезенхимы на бо
ковой поверхности тела зародыша; Б — об
разование почки конечности. 1 — спинной
мозг- 2 — хорда; 3 — пронефрос; 4 — ме
зенхима зачатка конечности; 5 — париеталь
ный листок мезодермы; 6 — висцеральный
листок мезодермы; 7 — почка конечности.