Ferreira M et al

REVISO

OXPHOS: Dce do Complexo I

ISSN 0871-3413 ArquiMed, 2008

Cadeia Respiratria Mitocondrial Aspectos Clnicos, Bioqumicos, Enzimticos e Moleculares Associados ao Dce do Complexo I
Mariana Ferreira, Tatiana Aguiar, Laura Vilarinho Laboratrio de Investigao, Centro de Gentica Mdica Jacinto Magalhes, INSA

As citopatias mitocondriais constituem um grupo heterogneo de doenas que se caracterizam por alteraes da estrutura mitocondrial e decincia da fosforilao oxidativa (OXPHOS). A OXPHOS constituda por cinco complexos proteicos e dois transportadores de electes. A NADHubiquinona oxidoreductase complexo I, o primeiro e maior dos cinco complexos o principal ponto de entrada de electres, provenientes do ciclo de Krebs, no sistema OXPHOS. Os dces do complexo I so um diagnstico relativamente frequente de citopatia mitocondrial, sendo causados por mutaes no DNA mitocondrial ou no DNA nuclear. Devido a este controlo gentico duplo, que contribui para a complexidade do sistema OXPHOS, defeitos no complexo I resultam numa variedade de fentipos clnicos, que esto geralmente associados a disfunes metablicas graves da infncia, incluindo cardiomiopatia progressiva, encefalomiopatia, leucodistroa ou sndrome de Leigh. Na investigao dos mecanismos subjacentes aos dces do complexo I, so utilizados vrios modelos, tais como a Neuropora crassa e os cbridos, que conjuntamente com o uso de novas ferramentas bioqumicas (Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis), revelam-se de extrema importncia para o processo. Perante a complexidade deste sistema enzimtico, quer estrutural como na sua manuteno, difcil efectuar um diagnstico molecular na rotina laboratorial. Em Portugal, o estudo destes pacientes tem sido restrito medio da actividade enzimtica dos complexos da cadeia respiratria e pesquisa das mutaes pontuais mais comuns e rearranjos do mtDNA, at h alguns meses atrs. Como consequncia a maioria dos casos de dces do complexo I continuam por esclarecer sob o ponto de vista molecular, tornando-se assim indispensvel avanar para uma investigao mais abrangente, possibilitando desta forma um aconselhamento gentico adequado e um diagnstico pr-natal para as famlias de risco. Palavras-chave: OXPHOS; complexo I; mtDNA; nDNA; CRM; citopatias mitocondriais.

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INTRODUO A mitocndria um organelo intracelular existente na maioria das clulas eucariticas, desempenhando um importante papel na produo de ATP celular. A mitocndria est envolvida na homeostasia celular, tendo um importante papel na sinalizao intracelular, apoptose, metabolismo de aminocidos, lpidos, colesterol, esterides e nucletidos. Contudo, a sua principal funo no metabolismo energtico, nomedamente, -oxidao dos cidos gordos, ciclo da ureia e na via nal comum de produo de ATP cadeia respiratria. Os componentes da cadeia respiratria localizam-se na membrana interna da mitocndria sob a forma de quatro complexos protena-lpidos, o complexo I (NADHubiquinona oxidoreductase EC 1.6.5.3) com mais de 40 polipptidos, o complexo II (succinato-ubiquinona oxidoreductase EC 1.3.5.1), o complexo III (ubiquinol-

citocromo c oxidoreductase EC 1.10.2.2) e nalmente o complexo IV (citocromo c oxidase EC 1.9.3.1) (Figura 1). A CRM possui ainda dois transportadores de electres, ubiquinona e citocromo c. Estes constituintes bem como o complexo V, ATP sintetase, formam o sistema de fosforilao oxidativa (OXPHOS), que fornece o ATP necessrio clula. A funo global da cadeia respiratria a oxidao de nicotinamida-adenina-dinucletido reduzida (NADH) e avina adenina dinucletido reduzida (FADH2), provenientes de outras vias metablicas, bem como o transporte de equivalentes reduzidos ao longo de uma srie de transportadores para o aceitador nal, o oxignio. Os complexos I, III e IV funcionam como uma bomba de protes. Estes acumulam-se no espao intermembranar, criando uma diferena de potencial electroqumico, utilizado pela ATP sintase na formao de ATP, a partir de ADP e Pi. A velocidade da respirao mitocondrial pode
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Fig. 1 - Representao esquemtica dos complexos da Cadeia Respiratria Mitocondrial. Complexo I (NADH-ubiquinona oxidoreductase EC 1.6.5.3); complexo II (succinato-ubiquinona oxidoreductase EC 1.3.5.1); complexo III (ubiquinol-citocromo c oxidoreductase EC 1.10.2.2) e complexo IV (citocromo c oxidade EC 1.9.3.1).

ser controlada pela disponibilidade de ADP. O sistema OXPHOS, sendo o mecanismo nal de todas as vias metablicas para a produo de energia, procede sua regulao e portanto qualquer dce na CRM tem consequncias nesse sistema. A actividade do ciclo de Krebs regulada pela razo NAD/NADH, que por sua vez est dependente da disponibilidade de ADP e este da utilizao do ATP. Adicionalmente, algumas enzimas do ciclo so tambm reguladas, como o caso, por exemplo, da citrato sintetase que inibida alostericamente pelo ATP e acil-CoA de cadeia longa e da isocitrato desidrogenase que activada pelo ADP e inactivada pelo ATP e NADH. A succinato desidrogenase inibida pelo oxaloacetato, e a sua disponibilidade controlada pela malato desidrogenase, que depende da razo NADH/NAD. Assim no caso de existir um dce na CRM, o NADH no vai ser oxidado a NAD+ e consequentemente este no vai estar disponvel para o ciclo de Krebs, levando acumulao dos seus metabolitos intermedirios. As citopatias mitocondriais so um grupo de doenas multissistmicas de expresso clnica heterognea que tm na sua origem alteraes do metabolismo energtico celular causadas pela disfuno de um ou mais complexos enzimticos do sistema OXPHOS. Estas doenas atingem principalmente o sistema nervoso central, o msculo esqueltico ou ambos, sendo por conseguinte na grande maioria encefalomiopatias. Outros rgos, como o corao, fgado, pncreas, olho e rim podem tambm ser afectados, levando a um complexo espectro de manifestaes clnicas.
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O aparecimento dos primeiros sintomas pode ocorrer em qualquer idade, podendo ser progressivamente lentos, rpidos ou at fatais (1). Embora no exista um tratamento especco para este tipo de doenas, tm sido utilizados tratamentos sintomticos, que melhoram a qualidade de vida destes doentes (2, 3). A marca histolgica das miopatias mitocondriais so as RRFs (ragged red bers) demonstradas atravs da colorao de Tricrmio de Gomori modicado (Figura 2).

Fig. 2 - Corte histolgico onde podem ser visualizadas RRFs (ragged red bers), coradas com o corante de tricrmio de Gomori modicado. (http://www.neuro.wustl.edu/neuromuscular/pathol/mitochondrial.htm).

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A alterao das bras musculares normais para RRFs devida acumulao sub-sarcolmica de mitocndrias anormais quer em nmero quer em tamanho. Apesar da importncia da presena de RRFs no diagnstico das citopatias mitocondriais, a sua ausncia no exclui este tipo de diagnstico, principalmente nas crianas. So tambm efectuados estudos bioqumicos que permitem identicar defeitos na CRM. Contudo, tornou-se evidente que apenas estes estudos no so sucientes para classicar este grupo de doenas to heterogneo. Actualmente recorre-se ao estudo molecular do DNA mitocondrial (mtDNA) para deteco de mutaes, bem como ao Southern Blotting para deteco de rearranjos, tais como deleces simples de grande tamanho ou deleces mltiplas. COMPLEXO I As citopatias mitocondriais so as doenas hereditrias do metabolismo mais frequentes e segundo a literatura o dce do complexo I o mais comum. O complexo I constitudo por um grande nmero de protenas (46 subunidades nos mamferos), com origem gentica dupla nuclear e mitocondrial, sendo sete destas subunidades (ND1-ND6, ND4L) codicadas por genes mitocondriais (Figura 3) e as restantes codicadas por DNA nuclear (nDNA). Contm uma avina mononucletido (FMN) e centros ferro-enxofre [Fe-S] como grupos prostticos.

Fig. 3 - Representao esquemtica do genoma mitocondrial (mtDNA), onde se encontram assinalados a cinzento os 7 genes codicantes para subunidades do complexo I - MTND1-MTND6, MTND4L (adaptado de http://www.mitomap.org).

Este complexo contribui signicativamente para a produo de energia na mitocndria, catalizando o primeiro passo da cadeia respiratria mitocondrial, no qual ocorre a oxidao de NADH, usando a ubiquinona (Q) como aceitador de electres. A transferncia de dois electres acompanhada pela translocao de quatro protes (H+) da matriz para o espao intermembranar, criando um gradiente protnico que utilizado para a sntese de ATP (4). NADH + H+ + Q + 4H+ matriz NAD+ + QH + 4H+ 2 espao intermembranar Os dois electres fornecidos pela oxidao do NADH so transferidos, via FMN (aceitador de electres primrio do complexo I), para uma cadeia de clusters [Fe-S], pela seguinte sequncia N3-N1b-N4-N5-N6a-N6b-N2. Pensa-se que a subunidade 49 KDa, que contm o cluster N2 esteja envolvida na ligao da ubiquinona. De acordo com as observaes mais recentes, sete dos oito clusters Fe-S participam na cadeia transportadora de electres do complexo I, porm o cluster N1a encontra-se afastado, o que leva a crer que pouco provvel a sua participao directa no transporte de electres. Contudo, devido localizao do N1 prximo da FMN, pensa-se que possa estar envolvido na preveno do excesso de reduo de FMN, redistribuindo os electres pela cadeia de transporte. Os electres so depois transferidos para o aceitador nal ubiquinona, que ento reduzida a ubiquinol (QH2). O primeiro centro redox um cluster tetranuclear N3 localizado na metaloprotena 51 kDa (NDUFV1), que tambm contm o aceitador primrio de electres FMN e o local de ligao do NADH. Os clusters N1b, N4, N5 e N7 localizam-se na subunidade 75 kDa (NDUFS1), o cluster N6a e N6b localizam-se na subunidade TYKY (NDUFS8) e o ltimo cluster da cadeia N2 encontra-se na subunidade PSST (NDUFS7). O cluster N1a localizase na subunidade de 24 kDa (NDUFV2) (4). Devido sua complexidade e falta de estruturas 3D cristalogrcas de alta resoluo, pouco se sabe acerca de estrutura do complexo I. Contudo tem sido aceite, com os dados de estruturas 3D de baixa resoluo que o complexo I tem uma estrutura cuja forma se assemelha a um L, tal como tem sido demonstrado para a enzima da Neurospora crassa, Yarrowia lipolytica, Esherichia coli e mitocndria do corao do bovino. Esta estrutura constituda por dois braos perpendiculares entre si: um brao hidrofbico embebido na membrana lipidica e um hidroflico, brao perifrico protuberante para a matriz (Figura 4). Existem 14 subunidades essenciais para a catlise da transferncia de electres do NADH para a ubiquinona e para a formao do potencial de membrana. Metade das subunidades so codicas pelo DNA nuclear, sendo as mais conservadas entre as subunidades eucariotas (NDUFS1-3, NDUFS7-8, NDUFV1-2), constituindo o domnio perifrico que compreende todos os centros redox e o local de ligao do substrato NADH. As restantes sete subunidades (ND1-6, ND4L) so codicadas pelo mtDNA, formando o domnio membranar. Supem-se
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Fig. 4 - Representao esquemtica do complexo I dos mamferos, onde se encontram representados os genes humanos (escuro) e os respectivos genes homlogos bovinos.

que as subunidades ND2, ND4 e ND5 fazem parte da maquinaria de translocao de protes. A subunidade ND1 possui um local de ligao da quinona, propondose assim que possa estar relacionada com a ligao da ubiquinona. Est descrito que o papel das 32 subunidades acessrias no complexo I est relacionado com o aumento de estabilidade estrutural ao manter os grupos redox na posio correcta e proteco da enzima dos radicais livres de oxignio. Podem tambm estar implicadas na regulao da actividade ou processamento do complexo I.

Aspectos clnicos Devido aco concertada dos genomas mitocondrial e nuclear na complexidade do sistema OXPHOS, defeitos neste sistema resultam numa variedade de fentipos clnicos. Podem observar-se tambm vrios tipos de hereditariedade, desde a hereditariedade materna, autossmica dominante ou recessiva, ligada ao X ou espordica. No que diz respeito s mutaes no mtDNA, na maioria dos casos, no se observa uma correlao gentipo-fentipo, dado que diferentes mutaes podem resultar em fentipos semelhantes ou as mesmas mutaes podem levar a fentipos clnicos distintos. As decncias do complexo I esto associadas a um grupo heterogneo de doenas. Fentipos clnicos causa52

dos por mutaes nucleares esto geralmente presentes no lactente e primeira infncia, enquanto que aqueles associados a mutaes mitocondriais esto presentes na segunda infncia e adolescncia. LHON (Leber hereditary optic neuropathy) e MELAS (mitochondrial encephalopathy lactic acidosis stroke-like episodes) so dos sndromes mais comummente associados a dces do complexo I causados por mutaes mitocondriais (5, 6). Os fentipos clnicos descritos associados a mutaes nucleares dividem-se em cinco categorias: acidose lctica infantil fatal, sndrome de Leigh, cardiomiopatia neonatal com acidose lctica, leucodistroa com macrocefalia e hepatopatia com tubulopatia renal. Existe ainda um grupo adicional que engloba encefalomiopatias inespeccas que apresentam sintomas neuromusculares e que no podem ser includas em nenhum fentipo especco (4, 7). Aspectos bioqumicos A abordagem bioqumica das citopatias mitocondriais engloba os doseamentos de lactato (L) e piruvato (P) sanguneos, assim como a respectiva razo molar (L/P). Uma alterao da OXPHOS pode provocar um bloqueio do ciclo de Krebs devido ao excesso de NADH ou falta de NAD+, aumentando os nveis de lactato e de piruvato. Assim, uma hiperlactacidemia e uma razo L/P superior a 25 podem ser um indicativo de citopatia mitocondrial (8).

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Podem tambm ser efectuadas determinaes dos corpos cetnicos sanguneos, 3-hidroxibutirato (3OHB) e acetoacetato (AA), e respectiva razo molar (3OHB/AA), onde um aumento de qualquer um destes parmetros um factor importante no diagnstico j que reectem o no consumo de acetil-CoA pelo ciclo do cido ctrico e a sua consequente canalizao para a cetognese. Em caso de citopatia mitocondrial provvel a obteno de um perl anormal de cidos orgnicos urinrios obtido por cromatograa gasosa / espectrometria de massa (GC/MS), nomeadamente um aumento de excreo dos cidos: lctico, 3-metilglutacnico, etilmalnico, 2-etilhidracrlico, metabolitos do ciclo de Krebs (cidos fumrico, succnico e mlico) e corpos cetnicos (3OHB e AA). Pode-se tambm obter um perl anormal dos aminocidos plasmticos aumento de alanina (hiperalaninemia) e/ou urinrios (hiperaminoaciduria generalizada) (8).

complexos II e III da CRM. Atravs da utilizao de inibidores especcos adequados para cada um dos complexos, so eliminadas as interferncias devido s actividades inespeccas. A actividade da enzima citrato sintetase (CS) enzima do ciclo de Krebs, determinada simultaneamente com os restantes doseamentos, sendo utilizada como controlo de qualidade da amostra e do seu estado de conservao. Os resultados so calculados em funo da actividade das protenas presentes no msculo e referidos actividade da enzima de referncia, CS. A determinao da actividade do complexo I baseia-se na reduo da coenzima Q (decilubiquinona) pelo NADH, sendo feita na presena e ausncia de rotenona, que um inibidor deste complexo.

Aspectos miopatolgicos Na maioria dos casos em que h suspeita de citopatia mitocondrial procede-se a bipsia muscular, que deve ser conservada em azoto lquido ou neve carbnica. A marca histolgica das miopatias mitocondriais so as ragged red bers (RRFs), como foi referido anteriormente. So usadas vrias coloraes histoqumicas / histoenzimticas especcas para as enzimas oxidativas (citocromo c oxidase - COX, succinato desidrogenase - SDH, entre outras) com o objectivo de analisar a distribuio das mitocndrias e vericar a sua actividade enzimtica. A suspeita de citopatia mitocondrial equacionada nos msculos em que se observaram mais de 3% de RRFs por fragmento, mais de 3% de bras com ausncia de actividade COX (bras COX negativas), um aumento da actividade da SDH e presena de incluses paracristalinas (observadas por microscopia electrnica).

Aspectos enzimticos As disfunes da cadeia respiratria mitocondrial podem ser investigadas atravs da determinao da actividade enzimtica dos diversos complexos por espectrofotometria, avaliando assim o dce da cadeia respiratria mitocondrial (CRM). Os estudos espectrofotomtricos consistem em ensaios com enzimas respiratrias isoladas ou combinadas, baseando-se na transferncia dos equivalentes reduzidos cedidos por substratos naturais ou articiais (NADH, succinato, coenzima Q, citocromo c, ascorbato). No requerem o isolamento de fraces mitocondriais e podem ser realizados em homogeneizados de tecido. Por esta razo, a quantidade de material requerida muito pequena e pode ser facilmente derivada de uma amostra de bipsia de msculo (50 100 mg), fgado, rim e miocrdio ou de um pellet de linfcitos. No entando este estudo deve ser efectuado preferencialmente em biopsia de msculo. efectuada a determinao individualizada da actividade dos complexos I, II, III e IV e conjunta dos

Aspectos moleculares As decincias do complexo I so uma das causas mais comuns das citopatias mitocondriais (7, 9). Dada a complexidade das enzimas do sistema de fosforilao oxidativa, tanto na estrutura como na manuteno, nem sempre fcil obter um diagnstico molecular devido ao elevado nmero de genes envolvidos. Decncias do complexo I podem ser causadas por mutaes quer no mtDNA quer no nDNA. A investigao molecular passa pela extraco de DNA a partir de sangue ou bipsia muscular (quando existente o material mais adequado para a identicao de mutaes no mtDNA). A tcnica de Polymerase Chain Reaction (PCR), seguida de sequenciao directa dos genes que codicam para subunidades do complexo I a estratgia utilizada para a pesquisa de mutaes. A abordagem gentica deste estudo deve iniciar-se pela pesquisa das mutaes mais comuns e deleces de grande tamanho do mtDNA (3243A >G, 3271T>C, 8344A >G, 8356T>C, 8993T>C/G) (5, 10, 11). Seguidamente estudam-se os sete genes mitocondriais (MTND1-MTND6, MTND4L) e posteriormente, so sequenciados os onze genes nucleares onde at data foram descritas mutaes NDUFS1, NDUFS2, NDUFS3, NDUFS4, NDUFS6, NDUFS7, NDUFS8, NDUFV1, NDUFV2, NDUFA1 e NDUFA8. Se todo o estudo for negativo pode ainda efectuar-se a pesquisa de mutaes nos genes B17.2L e NDUFAF1 (CIA30), que codicam para factores de processamento do complexo I, bem como em genes que codicam para subunidades onde no foram ainda descritas mutaes. Actualmente esto descritas 46 mutaes no nDNA em 10 genes que codicam subunidades do complexo I e trs mutaes em genes codicantes dos factores de processamento (Tabela 1), e ainda cerca de 43 mutaes patognicas no mtDNA (12). Mutaes nos genes nucleares NDUFS1, NDUFS4, NDUFS7, NDUFS8, e NDUFV1 resultam em doenas neurolgicas, maioritariamente sndrome de Leigh. Por outro lado, mutaes nos genes NDUFS2 e NDUFV2 esto associados a cardiomiopatia hipertrca e encefalomiopatia. Alteraes nos genes mitocondriais esto associadas a uma grande variedade de sintomas, que podem envolver
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Tabela 1 - Mutaes nucleares associadas ao dce do complexo I, j descritas, e respectivos fentipos clnicos.

Gene

Gentipo L231V R241W/R557X D252G/del codo 222 Q522K M707V/deleo de grande escala

Fentipo Clnico

Referncia

NDUFS1

Sndrome de Leigh 17 Sndrome de Leigh 18 18 Leucodistroa Leucoencefalopatia. Regresso psicomotora, evoluindo 19 para uma tetraparsia espstica Sndrome de Leigh 18 Encefalomiopatia 19 Hipotonia neonatal, caractersticas dismrcas, epilepsia e envolvimento neurolgico 20 Cardiomiopatia hipertrca e encefalomiopatia

NDUFS2

A224V (NDUFA8: E109K) R228Q P229Q S413P

NDUFS3

T145I/R199W IVSnt-1 W15X W96X R106X L158fs (duplicao de 5 pb) IVS2nt+2 / Deleo de grande escala V122M R145H c.17-1167 C>G R18C/P79L P79L/R102H P85L/R138H R59X/T423M Y204/C206G A211V E214L/IVS8nt+4 A341V A432P/Del nt 989-990

Sndrome de Leigh Sndrome de Leigh Leigh-like syndrome Leigh-like syndrome Leigh-like syndrome Sndrome de Leigh Doena mitocondrial infantil fatal Sndrome de Leigh Sndrome de Leigh Sndrome de Leigh Encefalomiopatia Sndrome de Leigh Sndrome de Leigh de revelao tardia Encefalomiopatia Sndrome de Leigh Hipotonia muscular e nistagmus Sndrome de Leigh Leucodistroa e epilepsia mioclnica Leucoencefalopatia Sndrome de Leigh Cardiomiopatia hipertrca e encefalomiopatia

21 22 23 24 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 18 34 18 33 19 18 35

NDUFS4

NDUFS6

NDUFS7

NDUFS8

NDUFV1

NDUFV2 NDUFA8 NDUFA1 (ligado ao X) B17.2L NDUFAF1

IVS2+5_+8del1GTAA E109K (NDUFS2: A224V) G8R R37S R45X T207P/K253R

Encefalomiopatia Hipotonia neonatal, caractersticas dismrcas, epilep- 19 sia e envolvimento neurolgico Sndrome de Leigh Epilepsia mioclnica: atraso de desenvolvimento 36

Encefalopatia progressiva. Caractersticas semelhan- 37 tes a leucoencefalopatia com "vanishing white matter" Cardiomiopatia hipertrca, atraso de desenvolvimento, 38 hipotonia e acidose lctica, cifoscoliose, perda de viso

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um nico rgo ou serem multissistmicas.

Aspectos funcionais No aspecto funcional, o estudo dos dces do complexo I pode ter diferentes abordagens, desde tcnicas bioqumicas at modelos eucariticos. O BN-Page (Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis) uma tcnica bioqumica desenvolvida para anlise de protenas de membrana. Associada colorao histoqumica, esta tcnica permite a anlise e caracterizao dos complexos enzimticos da CRM, nomeadamente a integridade dos mesmos (13). A origem mitocondrial do defeito enzimtico pode ser demonstrada utilizando a tcnica de transferncia de hibridos citoplasmticos, mais conhecida, por cbridos (14). Estes so linhas celulares eucariticas produzidas pela fuso de clulas enucleadas com clulas desprovidas do seu prprio mtDNA (rho-zero). Assim, um cbrido uma clula hbrida que combina o genoma nuclear de uma fonte com o genoma mitocondrial de outra, permitindo dissociar a contribuio gentica do genoma mitocondrial do genoma nuclear. As alteraes nucleares podem ser estudadas recorrendo ao organismo mais extensivamente utilizado para o estudo da biognese do complexo I - fungo aerbio Neurospora crassa. O complexo I deste fungo muito similar ao de mamferos e, actualmente, o nico organismo eucaritico em que possvel fazer experimentao gentica e bioqumica avanada, no que diz respeito a esta enzima, fazendo dele um modelo de extrema importncia para o estudo do complexo I (15, 16).

que o compem, dicultando assim a caracterizao molecular destes doentes. Presentemente procedemos ao estudo dos genes mitocondriais MTND1-MTND6, MTND4L, bem como dos genes nucleares referidos anteriormente, onde j foram identicadas mutaes. Contudo, est descrito que em cerca de 60% dos doentes no foram encontradas mutaes em nenhum destes genes, o que sugere que factores envolvidos no processamento e manuteno do complexo I sejam tambm relevantes na etiologia da doena. Nesta conformidade, pretendemos alargar o estudo aos genes, j conhecidos, que codicam para factores de processamento (NDUFAF1 e B17.2L), assim como aos que codicam para subunidades do complexo I, e nos quais no foram descritas mutaes at data. Esperamos que esta investigao mais aprofundada permita aumentar o nmero de doentes com diagnstico denitivo, bem como contribuir de forma valiosa para um melhor conhecimento da histria natural destas patologias numa perspectiva mundial. Agradecimentos Este trabalho foi parcialmentre nanciado pela Fundao para a Cincia e a Tecnologia (SFRH/BD/28197/2006).

REFERNCIAS
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CONSIDERAES FINAIS Na nossa casustica, os dces da CRM mais frequentes estavam associados ao complexo IV, contrariamente a outros estudos, que referem o dce do complexo I como sendo o mais comum (10). De 1500 bipsias musculares investigadas nos ltimos dez anos, s cerca de 1 % apresentavam um dce isolado do complexo I e 1,3% dos casos dces combinados, em que o complexo I estava envolvido. Destes casos apenas em aproximadamente 18 % dos dces isolados e 37% dos dces combinados foi possvel identicar a mutao patognica causal desta doena, com a estratgia utilizada h alguns anos, neste centro, para o estudo de deleces e mutaes mais comuns do mtDNA. Atendendo ao nmero de casos ainda sem diagnstico molecular, tornou-se urgente avanarmos para uma investigao mais abrangente, de forma a caracterizar um maior nmero de doentes. Assim, ser possvel oferecer um aconselhamento gentico adequado e um diagnstico pr-natal molecular s famlias de risco, uma vez que no existe um tratamento efectivo destas patologias. A investigao dos dces do complexo I de elevada complexidade devido ao grande nmero de subunidades

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Correspondncia: Dr. Laura Vilarinho Centro de Gentica Mdica Jacinto Magalhes Praa Pedro Nunes, 88 4099-028 Porto e-mail: laura.vilarinho@igm.min-saude.pt

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