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PROCESOS BIOTECNOLOGICOS
Q. EN .A. LUZ CARMEN CASTILLO MTZ.

Estructura
Eucariota: Ncleo esta definido.
Procariota: Su significado del griego es "Antes del ncleo" ya que no poseen un ncleo celular lo que conlleva a que su ADN no tenga una envoltura nuclear y que este libremente en el citoplasma Bacteria: Son organismos unicelulares muy pequeos y relativamente sencillos. Son procariotas.

ELEMENTOS OBLIGADOS Pared celular Membrana plasmtica Citoplasma Ribosomas Regin nuclear

ELEMENTOS FACULTATIVOS Flagelos Pelos Endosporas Inclusiones citoplsmicas Cpsula

PROCARIOTA

La clula bacteriana consta de elementos: obligados como el citoplasma. Presenta un aspecto viscoso, y en su zona central aparece un nucleoide que contiene la mayor parte del ADN bacteriano. Facultativos: Muchas bacterias pueden presentar flagelos generalmente rgidos, implantados en la membrana mediante un corpsculo basal . Pueden poseer tambin, fimbrias o pili muy numerosos y cortos, que pueden servir como pelos sexuales para el paso de ADN de una clula a otra

Movilidad y fijacin

Examples of bacterial flagella arrangement schemes. A-Monotrichous; B-Lophotrichous; C-Amphitrichous; D-Peritrichous

Morfologa de las bacterias

La clasificacin de las bacterias se basa en el estudio de sus caractersticas mediante tcnicas que oscilan entre las ms sencillas tinciones y los ms complejos estudios moleculares.

La bacterias se pueden agrupacin y color: Gram positivas o Gram negativas. La mayor parte de las bacterias puede ser ubicada en uno de estos dos grupos o en un tercero, de acuerdo a la resistencia al cido alcohol que presenten.

Tincin de Gram

 Con la tincin diferencial de Gram, herramienta de gran utilidad, una proporcin importante de bacterias puede dividirse en dos grandes grupos: Gram positivas (se observan de color azul - debido al colorante cristal violeta) y Gram negativas (pierden el cristal violeta y conservan la safranina - se aprecian de color rojo).

La tcnica se basa en las diferencias fsicas fundamentales de la pared celular y emplea colorantes catinicos (cristal violeta y safranina), que se combinan con elementos cargados negativamente.

La pared celular de los procariotas

La capa responsable de la rigidez en las paredes de Gram (+) y Gram (-) es el peptidoglicano (o murena).
Gram positivas Gram negativas

En Bacteria el peptidoglicano representa hasta el 90% de la pared

En Bacteria el peptidoglicano constituye el 10% de la pared

Bacteria Gram positivas

La pared contiene adems del peptidoglicano pequeas cantidades de cidos teitoicos. Muchas Bacteria Gram positivas tienen varias capas de peptidoglicano (hasta 25). En Bacteria Gram negativas la pared contiene adems de peptidoglicano una capa adicional compuesta de lipolisacrido Envoltura celular - Cuenta con 3 capas: membrana citoplsmica, pared celular y cpsula/glicoclix

Gramnegativas
Bacilos aerobios: Acinetobacter, Flavobacterium, Pseudomonas.
Bacilos facultativos: Aromonas, Citrobacter, Salmonella, Shigella, Vibrio, Yersinia, Serratia, Escherichia, Campylobacter

Tipos de metabolismo

Fuente de carbono
AUTOTROFOS: Carbono Inorgnico
Cuya fuente nica de carbono es el CO2

HETEROTROFOS: Carbono Orgnico Cuando su fuente de Carbono es materia orgnica.

Fuente de energa
FOTOTROFOS: Energa Solar (LUZ).
FOTOHETETROFOS: Utilizan la luz como fuente de energa y las biomleculas como fuente de Carbono LUZ Compuesto Clulas Orgnicos FOTOAUTTROFOS: Utilizan la luz como fuente de energa y el CO2 como fuente de Carbono Luz O2 CO2 Clulas

Fuente de energa
QUIMIOTROFOS:
Energa qumica. QUIMIOHETERTROFOS: O2 CO2 Compuesto Clulas Orgnicas QUIMIAUTOTROFOS: Cuya fuente de energa es un compuesto qumico que se oxida. Fe +2 Fe +3 H2S S CO2 Clulas

Formas bacterias.
Oval o esfrica (coco) Cilndrica o en forma de bastn (bacilo) Formas intermedias de algunos casos anteriores.(Esfrica y bastn = cocobacilo) Espiral o helicoidal (espirilo) Filamentosa

Agrupacin bacteriana
COCOS (aislado)
En parejas: Diplococos. En cadena: Estreptococos. En cubo: Ttradas. En racimos: Estafilococos. En forma cbica de 8 elementos: Sarcinas.

Agrupaciones helicoidales
HELICOIDAL
Borrelia Treponema Leptospira

Reproduccin
Las bacterias se bacterianas pueden desarrollan a un tamao duplicarse hasta en 9.8 fijo, y cuando se minutos. reproducen lo hacen a travs de fisin binaria es una forma de reproduccin asexual. Bajo condiciones optimas una bacteria puede desarrollarse y dividirse extremadamente rpido, as las poblaciones

Reproduccin
Generalmente las bacterias reproducen por biparticin. se

Tras la duplicacin del ADN, que est dirigida por la ADN-polimerasa que se encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias.

Reproduccin por biparticin

 Tras la duplicacin de ADN, que esta dirigida por al ADN-polimerasa que se encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias. Pero adems de este tipo de reproduccin asexual, las bacterias poseen unos mecanismos de produccin sexual o parasexual, mediante los cuales se intercambias fragmentos de ADN. Que puede realizar por: Transformacin. Conjugacin Transduccin

Transformacin
Consiste en el intercambio gentico producido cuando una bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se encuentran dispersos en el medio donde vive.

Conjugacin
En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a travs de un puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora F-. La bacteria que se llama F+ posee un plsmido, adems del cromosoma bacteriano

Transduccin
En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra, se realiza a travs de un virus bacterigrafo, que se comporta como vector intermedio entre las dos bacterias.

Tarea 1

Realizar una investigacin de la clula eucariota, y realizar un cuadro comparativo entre los eucariotas y las procariotas

Ejemplos:
LEVADURAS
ALGAS PROTOZOOS

PROTOZOO
Su tamao va desde 1 m, son visible a simple vista. Se multiplican por biparticin o gemacin o esporulacin o reproduccin asexual. Se encuentran en agua dulce, salada, suelos, plantas y parsitos animales

Alga celular
Pueden ser microscpicos o gigantes de mas de 100 pies. Su reproduccin es por fisin binaria asexual. Crecen en agua dulce y marina y en el suelo.

Algas y microalgas: biohidrgeno

Organismos fotosintticos. Viven usualmente en medios acuticos aunque tambin se pueden encontrar en ambientes terrestres y algunas especies pueden en condiciones hetertrofas. Especies: Formas unicelulares (microalgas) Estructuras muy complejas (macroalgas). Alimento: Son fosfatos y nitratos que pueden extraer de residuos orgnicos.

Aplicaciones: Como fertilizantes, como alimento y suplemento de efluentes y como materia prima para cosmticos. En aos recientes se han estudiado como alternativa para la obtencin de biocombustibles: biodcel, bioetanol, biohidrgeno y biometano. Biorremediacin: Degradacin de sustratos.

VIRUS
No son considerados como clulas. Son parsitos obligados es decir requieren una clula viva para su propagacin. Su tamao es de 0.015 m a 0.2 m Consta de una cadena de c. Nuclico o ADN O RNA envuelta en una capa de protena.

Tarea 2
Realizar un esquema de cada de las siguientes bacterias su forma, tipo de bacterias por su tincin gram, tipo de alimentacin y su reproduccin. 1.- Escherichia coli 2.- Bacillus subtilis. 3.-Streptococcus faecalis 4.- Staphylococcus aureus 5.-Pseudomonas 6.- Saccaromyces cereviceae

Aislamiento e identificacin

Aislamiento e identificacin

Introduccin
Para que un M.O. pueda desarrollar debe tomar del ambiente las sustancias necesarias para obtencin de energa que ser empleada para la biosntesis y como consecuencia particular la reproduccin celular. A estas sustancias se les llama nutrientes. Un medio de cultivo debe contener todos los nutrientes necesarios en cantidades adecuadas para sobrevivir.

Medios de cultivo
Conjunto de nutrientes con determinadas condiciones ambientales que permiten que los microorganismos crezcan y se reproduzcan. Aportan carbn y nitrgeno y elementos minerales, factores decrecimiento, agua y pH adecuado.

Usos
1) Separacin y aislamiento de los diferentes especies de microbios presentes en una siembra. 2) Como paso previo para el estudio e identificacin del mio. Problema. 3) Estudios microscpicos. Visualizacin de las caractersticas de las colonias en medios slidos. 4) La realizacin de antibiogramas para determinar la sensibilidad. 5) Pruebas CMI (Concentracin mnima de inhibicin) 6) Para conservacin de especias microbianas o muestras.

Requerimientos
ENERGETICO Fuentes de Carbono: Azucares Fuentes de Nitrgeno; Gelatinas NO ENERGETICOS Fuentes de Azufre: Aminocidos. Fuentes de fsforos: Fosfatos. Factores de crecimiento: Sales. Factores de arranque: Factores inhibidores:

Componentes principales
Agar. Vitaminas. Factores de crecimiento. Extractos de carne o levaduras Minerales

Extracto de carne
Contiene las substancias hidrosolubles del tejido animal que incluyen carbohidratos, compuestos orgnicos de nitrgeno, vitaminas hidrosolubles y sales.

Pectona
Principal fuente de Nitrgeno orgnico: puede contener adems algunas vitaminas y a veces carbohidratos, dependiendo del material proteico digerido.

pH
pH ptimo 6.5 a 7.5 La mayora de las bacterias asociadas a la vida vegetal o animal.
pH mnimo 0.5 o mximo de 9.5 para algunas especies exticas

Agua
Presin Osmtica: Tensin que se ejerce cuando el agua difunde a travs de una membrana. Presin hidrosttica: Tensin al lquido.
Halofilicas: Bacterias que viven en altas concentraciones de NaCl. Halofilicas facultativas: Bacterias que viven con o sin NaCl. Plasmolisis: La bacteria explota.

Agar
Usado como agente solidificante; el agar disuelto se gelifica cuando la temperatura se reduce por debajo de 45 C; el agar no es fuente de nutrientes para las bacterias.

Extracto de levadura
Una fuente muy rica de vitaminas B; contiene adems nitrgeno orgnico y compuestos carbonados.

5.- Clasificacin de los medios

1. Medios basales: Son medios simples que contienen en general los nutrientes esenciales para promover el desarrollo a microorganismos poco exigentes nutricionalmente in vitro . Ejemplo : A.N. M. E.
2. Medios enriquecidos: Son medios que han sido complementado con otros nutrientes que proporcionan, Factor de crecimiento cuya finalidad es promover el desarrollo de M.O. mas exigentes. Ejemplo G.A.S., G.Ch.

3.- Medios selectivos o inhibitorios: Se utiliza para suprimir el desarrollo y al mismo tiempo promover y/o seleccionar el crecimiento de los M.O. patgenos que pudieran encontrarse en dicha muestra. Ejemplo: A.V.B. y A.BP. 4.Medios Diferenciales: Contienen sustancias qumicas o indicadores que permiten identificar con facilidad algunos gneros o especies bacterianas por el aspecto caracterstico de las colonias y su capacidad bioqumica. Ejemplo: Las bioqumicas.

5.Medios de enriquecimiento: Son generalmente caldos que poseen un efecto inhibitorio sobre gneros bacterianos favoreciendo al mismo tiempo al desarrollo de otro que interesa ms. Ejemplo: Caldo tetrationato. 6.- Medios de transporte: Sirven para mantener viables a los M.O., por un lapso corto de tiempo y que posteriormente deseamos recuperar. Tienen la capacidad amortiguadora que facilita la viabilidad del M.O., para que no se multiplique pero que permanezca latente. Ejemplo: Cary-Blair

7.- Medios de conservacin: Son generalmente medios basales, destinados para el mantenimiento de bacterias, estos medios deben estar desprovistos de carbohidratos, esto es con el propsito de que el medio no se acidifique y las bacterias no mueran. Ejemplo: B.A.B.

Tcnicas para aislar e identificacin de microorganismos

1. Material de siembra
2. Inoculo 3. Mtodos de aislamiento

Preparacin de Inoculo
Definicin: Es una cantidad suficiente y representativa de la bacteria problema. Debe partir de un cultivo puro con una concentracin adecuada. Preparacin: Si la muestra es slida o semislida se tomada con asa estril. Si la muestra es lquida se tomar con pipeta graduada o pipeta Pasteur una cantidad suficiente despus se homogeniza. Incubacin :A temperatura adecuada de 12 a 24 horas

Mtodos de siembra
1. Siembra del inoculo en medio lquido.

a)Si se utiliza asa de siembra se toma de la muestra problema y se adiciona al medio lquido agitando el asa. b)Si se realiza con pipeta se toma el volumen conocido (segn dilucin) de la muestra problema y se vierte al medio de cultivo lquido agitando vigorosamente. c)Si se realiza con hisopo realice igual que en a).

Siembra del inoculo en medio slido.

Tcnica de Barry

Aislamiento en Estra

Estra mltiple

Tcnica de los cuatro cuadrantes

Tcnica por dilucin

Siembra del inoculo por picadura

a) Siembra por picadura

Siembra por estra en tubo con medio slido inclinado (bisel o pico de flauta)

Siembra por picadura y estra

Temperatura

PSICRFIALAS: CRECEN DE 0-20 C

MESFILAS: CRECEN DE 25-40 C

TERMFILAS FACULTATIVAS: CRECEN DE 25-55 C TERMFILAS: CRECEN A TEMP >A 50 C

Requerimientos del oxigeno

AEROBIAS: CRECEN SOLO EN PRESENCIA DE O2 LIBRE

. . .

ANAEROBIAS: CRECEN SOLO EN AUSENCIA DE O2 LIBRE ANAEROBIAS FACULTATIVAS: CRECEN EN PRESENCIA O AUSENCIA O2 LIBRE MICROAEROFILAS: CRECEN EN PEQUEAS CANTIDADES DE O2 LIBRE

Morfologia
Entre las principales caractersticas de las bacterias se encuentran su tamao, forma, estructura y tipo o modo de agrupacin. Todas estas caractersticas van a constituir la morfologa propias de las clulas bacterianas:

Agrupacin
Las agrupaciones macroscpicas son visibles a simple vista y corresponden a su crecimiento en un punto en un medio de cultivo slido para formar colonias que sern distintas y caractersticas para cada tipo bacteriano. Agrupaciones microscpicas solo por microscopa y corresponde a lo que realmente se entiende por agrupacin bacteriana, es decir las tendencia que representan los distintos tipos bacterianos para asociarse entre s formando pequeos grupos de 2 o ms bacterias,

Morfologa microscpica
Tras el periodo de incubacin estimado como el adecuado en el medio slido donde se ha realizado la siembra, debern aparecer pequeas masas visibles a simple vista. La reproduccin de esa bacteria en otras muchas en ese punto del medio slido origina lo que se conoce como colonia Estas colonias presentaran una morfologa microscpica fcilmente reconocible y variable en funcin de: 1. Caractersticas o tipo de medio de cultivo slido. Criterio importante a la hora de una valoracin taxonmica de los mismos. 2. Tipo de microorganismo problema.

Conteo de colonias en los diferentes medios de cultivo y como se reporta

Conteo de UFC
Sin colonias
Reportar menos de 1 por el inverso de la dilucin ms baja. Ejemplo: No existe crecimiento de UFC en placa de 1:100, entonces se reporta: >100 UFC/ml Valor estimado.

Conteo de UFC
Ms de 250 UFC / g o ml
Reportar mayor de 6,500 5,700 veces por el inverso de la dilucin ms baja. REPORTAR:

>250 UFC/ 10g o ml de muestra valor estimado.

Tarea 3
1.- Eres el Jefe de Laboratorio de Microbiologa, de Chiken Happy y te piden que le realices una prueba al producto final. Como control de calidad. Las caractersticas son: Es polvo, con pH de 7.0, sabemos que pueden crecer microorganismos mesolticos, psicrofilas. Es necesario crear un medio rico en nutrientes que crezcan de todo. Adems describe el procedimiento como lo haras (no omitas ningn paso, ni medio de cultivo).