LE FACTEUR VIII COAGULANT

EL KHORASSANI M., BENKIRANE AGOUMI N.

INTRODUCTION Le facteur VIIIc ou facteur anti-hmophilique A est une glycoprotine prsente dans le plasma l'tat de traces, jouant un rle de cofacteur dans la cascade de la coagulation. Il est absent ou non fonctionnel dans l'hmophilie A. La maladie est caractrise par un saignement spontan ou post traumatique anormalement prolong. Le facteur VIIIc est synthtis sous forme d'une prprotine de 330 kD. Dans le plasma, il circule sous forme d'un dimre stabilis par le facteur de Von WILLEBRAND. Son gne localis au niveau du chromosome X, a pu tre clon (Genentech, Genetic Institute, Transgne (3). Ceci a permis de produire du facteur VIII par Gnie gntique, dpourvu de tout risque de contamination virale. Dans la coagulation, il joue un rle central. Il s'agit du cofacteur de facteur IX. Le facteur VIII, activ par la thrombine, devient le catalyseur de la raction d'activation du facteur X par le facteur IX activ, en prsence d'ion calcium et de phospholipides. La raction d'activation du facteur X est acclre environ 200 000 fois en prsence du facteur VIII. Le facteur X activ acquiert une activit catalytique qui lui permet de transformer la prothrombine en thrombine. Celle-ci dgrade le fibrinogne en fibrine. Le caillot ainsi form sera stabilis par le facteur XIII, ce qui permet l'arrt du saignement. Gne du facteur VIII Le clonage du facteur VIII est rendu possible partir de culture de cellules eucaryotes (2, 3, 9). Son gne est l'un des plus long gne humain. Il est situ sur l'extrmit distale du bras long du chromosome X. Il a une longueur de 186 000 paires de bases
Laboratoire d'Hmatologie et de transfusion, Hpital Ibn Sina Rabat (Maroc)

(bp), ce qui reprsente 0,1 % du chromosome X. L'ADN codant pour l'ARNm de la protine est constitue de 26 exons contenant 69 3 106 bp. Les 25 introns se rpartissent entre 207 32 400 bp. L'ARNm a une longueur de 9 029 bp (8 860 nuclotides). La squence non codante en 5" une longueur de 170 nuclotides, celle de la partie 3" non codante comporte 1 692 nuclotides. Facteur VIII : Synthse, structure, activation, inactivation La source principale du facteur VIII semble tre le foie (4, 7). Cependant l'augmentation du taux de facteur VIII dans les insuffisance hpato-cellulaire, suppose d'autres sources. En effet l'ARNm du facteur VIII a t retrouv au niveau de cellules rnales, splniques et des lymphocytes (7, 8). Plusieurs tudes ont t effectues pour mettre en vidence le lieu de synthse du facteur VIII (8, 10) ; les plus classiques taient bases sur les greffes d'organes chez des animaux normaux et hmophiles. La transplantation de foie chez l'animal hmophile, s'accompagne d'une augmentation de la production de facteur VIII chez celui-ci. Par contre la greffe de foie hmophile des animaux normaux n'entrane pas obligatoirement une chute du taux de la protine. Ceci confirme le rle du foie dans la synthse du facteur VIII sans qu'il soit exclusif. En effet ceci a pu tre confirm par la mise en vidence de l'ARNm de ce facteur au niveau d'autres organes, en particulier, le rein, la rate et au niveau des lymphocytes (10). L'utilisation des anticorps monoclonaux a prouv le rle essentiel de l'hpatocyte dans cette synthse. Par contre, l'endothlium vasculaire lieu de production du facteur Von WILLEBRAND, ne serait qu'un lieu de stockage du facteur VIII (7, 8, 10).

Le contrle de la synthse de ce facteur reste obscur. L'influence hormonale serait sans ngligeance (4, 9). L'uti-

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lisation de la vaso-pressine et ses analogues, peut entraner une augmentation du taux du facteur VIII chez le sujet normal ou chez un hmophile modr. La vasoprssine semble agir par un mcanisme pouvant tre bloqu par le propanolol. D'o le rle soulev des rcepteurs adrnergiques. La production du facteur VIII commence par la synthse d'un polypeptide de 2 351 acides amins (AA) (1, 4, 8, 9, 10). Au niveau du rticulum endoplasmique, la protine perd son peptide signal de 19 AA et subit une srie de glycosylation. La molcule finale a un poids molculaire de 265 330 kDa, et contient 2 332 AA. Les protines de transport (binding protein) vont se dtacher de la molcule. Celle-ci, toujours monomrique, transite dans l'appareil de golgi o s'effectuent les modifications post-traductionnelle. Le monomre de 330 kDa va subir une coupure en un dimre, form d'une chane lourde de 210 kDa et d'une chane lgre de 80. L'association entre ces deux chanes se fait par l'intermdiaire d'un ion divalent sont la nature exacte reste inconnue. On sait que l'activit coagulante est restaure si les deux chanes sont mises en prsence d'ion Ca ++ ou Mn ++ (3, 9). Le site d'interaction des deux monomres par l'ion divalent serait situ entre les domaines A 1 et A 3. Sous cette forme la molcule est rapidement dtruite par les serines protases. Ainsi, avant sa scrtion le dimre est stabilis par le facteur Von WILLEBRAND au niveau du cytoplasme cellulaire. Dans le plasma, le facteur VIII, stabilis par le facteur Von WILLEBRAND existe un taux de 0,1 g/ml. A l'tat libre, il est rapidement cliv par les serines protases, ce qui rend difficile son isolement et sa purification. L'introduction des mthodes d'immuno-purification a permis de piger cette molcule et de l'isoler. Chez le sujet normal, la demi-vie du facteur VIII est comprise entre 8 12 heures, la molcule dpourvu de facteur Von WILLEBRAND a une demi-vie raccourcie environ 2,4 heures (2, 5, 6). L'analyse de la molcule facteur VIII montre qu'elle est constitue de trois domaines distincts A, B, C (1, 5, 7, 9). Le domaine A de 330 AA est fait de trois exemplaires A1, A2, A3. Le domaine B de 983 AA est unique. Le domaine C fait de deux segments C1, C2 de 150 AA chacun. La squence des diffrents domaines partir de l'extrmit amino-terminale est A1-A2-B-A3-C1-C2. Il existe des

homologies de structure entre, les domaines A du facteur VIII et celle du facteur V (30 40 %) et la cruloplasmine. Plusieurs serines protases peuvent activer le facteur VIII. Il s'agit surtout de la thrombine, du facteur Xa et du facteur IXa. Les sites d'action de la thrombine ont pu tre identifi (1, 6). Il s'agit des sites 372 et 1 689 du facteur VIII. La thrombine protolyse le facteur VIII (dimre) pour donner un complexe form de trois monomres 70-50-45 kDa. La thrombine agit d'abord sur la chane lourde, aprs 740 pour donner un peptide de 90 kDa. Celui-ci est protolys ensuite aprs le rsidu 372 en deux fragments 50-45 kDa. La chane lgre (80 kDa) est clive en position 1 689 pour donner un monomre de 70 kDa. Le facteur Von WILLEBRAND se dtache du complexe, emportant avec lui un peptide de 7 kDa. Le facteur VIII activ se prsente alors sous forme d'un tripeptide libre 70-50-45 kDa. L'inactivation de ce facteur peut se faire par plusieurs mcanismes dont le plus important est celui de la protine C. Celle-ci aprs son activation par la thrombine, se lie la chane lgre du facteur VIII, au niveau de l'extrmit C terminale). Le tripeptide 50-45-70 kDa sera dcoup en deux fragments, un dimre de 50-70 kDa et un peptide de 45 kDa. La mutation ponctuelle de l'arginine 336 en lysine ou isoleucine provoque une inhibition de l'inactivation du facteur VIII par la protine C active (1, 2, 5, 7). Le facteur VIII peut subir une inactivation par la thrombine et par le facteur X activ. Ce dernier protolyse les deux monomres de 70 et 50 kDa pour donner deux fragments inactifs, respectivement de 67 et 45 kDa. Facteur VIII : facteur anti-hmophilique A Depuis longtemps, le traitement des hmophiles est bas sur l'utilisation des produits plasmatiques. Leur risque infectieux tait vident. Malgr les efforts dploys, les infections au virus HB et VIH taient invitables. La production de facteur VIII recombinants a permis de produire une molcule dpourvue de tous risques infectieux. Son efficacit hmostatique a t dmontr chez de nombreux patients (1, 2, 5, 9). Son cot reste lev. Cependant, la mise au point de techniques nouvelles de purification, tend produire un facteur VIII recombinant accessible tout hmophile.

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