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FACULDADE DE MEDICINA VETERINRIA E ZOOTECNIA - CAMPUS DE BOTUCATU DEPARTAMENTO DE CLNICA VETERINRIA LABORATRIO DE ENFERMIDADES PARASITRIAS Profs Raimundo Souza

Lopes E Regina Kiomi Takahira

TCNICAS EXAMES COPROPARASITOLGICOS

Tcnica de Willis Mollay (1921) OBJETIVO Identificao de ovos e larvas de nematdeos, oocistos de protozorios PRINCPIO Flutuao. A soluo empregada de elevada densidade (1:1200), e sendo os ovos e oocistos de menor densidade, tendem a subir, aderindo a superfcie inferior da lamina. Exame microscpico qualitativo direto, aps concentrao das fezes

MATERIAL NECESSRIO Trs a cinco gramas de fezes Copo Basto de vidro Tamis (coador) Copo de Borrel (embalagem de filme fotogrfico). Placa de Petri Soluo hipersaturada de Nacl Lamina e lamnula TCNICA Utilizando um basto de vidro ou colher, coletar 2 - 5g de fezes aproximadamente no copo Acrescentar 20 ml de soluo hipersaturada de NaCl Filtrar a suspenso de fezes atravs de um tamis para outro copo. Colocar a soluo de fezes em um tubo de filme (que dever estar dentro de uma placa de Petri) Completar o volume com soluo hipersaturada de NaCl, at formar um menisco nas bordas do copo. Colocar, com cuidado, uma lmina sobre tubo de filme No dever conter bolhas de ar entre lmina e a superfcie do lquido. Deixar o conjunto em repouso por 10 15 minutos. Remover a lmina, invertendo a sua posio, rapidamente, para evitar a queda dos ovos de nematdeos Examinar ao microscpio.

PRINCIPAIS OVOS DE NEMATDEOS ENCONTRADOS DE CES E GATOS

Ancylostoma caninum

(58-75m) Toxocara sp

(75m x 90m)

Trichuris vulpis

(50 m -85m) PRINCIPAIS OOCISTOS DE PROTOZORIOS ENCONTRADO EM CES E GATOS NO WILLIS Canino (Cystoisospora canis e Cystoisospora ohiensis ) Felino (Cystoisospora felis e Cystoisospora rivolta)

(aumento de 40x)

(aumento de 1000x)

TCNICAS EXAMES COPROPARASITOLGICOS Tcnica de Faust e Colaboradores OBJETIVO Pesquisa de ovos e larvas de helmintos, oocistos e cistos de protozorios. Exame especifico para Giardia sp. PRINCPIO Mtodo de centrfugo-flutuao. Na ultima centrifugao, os ovos de helmintos, oocistos e cistos de protozorios, flutuaro na superfcie. Exame microscpico qualitativo direto, aps concentrao das fezes

MATERIAL NECESSRIO Uma a trs gramas de fezes Copo Tamis (coador) Soluo de sulfato de zinco (densidade 1.182) 33g de sulfato de zinco para 100 ml de gua destilada. (Agitar 24 horas) Centrifuga e tubos Lugol Lamina e lamnula TCNICA Misturar as fezes com 10 ml de gua. Filtrar a suspenso de fezes atravs de um tamis para outro copo. Colocar a suspenso em um tubo de centrfuga com capacidade de 15 ml. Centrifugar o filtrado durante 1 minuto a 2500rpm. Decantar o sobrenadante e reter o sedimento. Adicionar ao sedimento 10 ml de gua. Repetir essa operao 2 a 3 vezes at que o lquido sobrenadante fique claro. Desprezar o sobrenadante e reter o sedimento. Adicionar ao sedimento soluo de sulfato de zinco at chegar a 1 cm da borda do tubo. Centrifugar durante 1 minuto a 2500 rpm. Uma vez parando de centrifugar acrescentar mais um pouco de sulfato de zinco at forma um menisco e colocar lamnula neste menisco, deixando repousar por 5 minutos. Ao passar os 5 minutos, colocar uma gota de lugol em uma lamina e colocar a lamnula sobre esta.

TCNICAS EXAMES COPROPARASITOLGICOS Tcnica de Sedimentao Simples (Hoffman, 1934) OBJETIVO Pesquisa de ovos de trematdeos e cestdeos. Para deteco de ovos pesados (Taenia sp). PRINCPIO Sedimentao de ovos. Exame microscpico qualitativo direto, aps concentrao das fezes

MATERIAL NECESSRIO Cinco a dez gramas de fezes Beaker com capacidade de 250 a 500 ml Tamis (coador) Clice de sedimentao Pipeta Lamina e lamnula TCNICA

Diluir as fezes em 200 ml de soluo fisiolgica ou gua no Becker. Se necessrio, para haver amolecimento, deixar em repouso por 10 a 20 minutos. Tamisar a suspenso diretamente no clice de sedimentao. Deixar em repouso 20-30 minutos. Decantar o lquido sobrenadante e adicionar ao sedimento 200ml de soluo fisiolgica ou gua. Agitar a mistura, deixando sedimentar por 20-30 minutos Decantar o lquido sobrenadante. Coletar com pipeta algumas gotas do sedimento. Examinar ao microscpio entre lmina e lamnula. Se o primeiro resultado for negativo, repetir o exame at trs vezes.

Ovos de Taenia sp.

Ovos de Trematdeos TCNICAS EXAMES COPROPARASITOLGICOS

Tcnica de Baermann - Modificado OBJETIVO Pesquisa de larvas de nematdeos pulmonares (L1) PRINCPIO Termo-hidropismo positivo e sedimentao de larvas. Exame microscpico qualitativo direto, aps concentrao das fezes

MATERIAL NECESSRIO Dois a dez gramas de fezes recentes, coletadas direto do reto gua a temperatura 40 C Pipeta Clice de sedimentao Gaze Cordo Lugol Laminas e lamnulas TCNICA Envolver 2 gramas de fezes frescas em uma gaze dobrada quatro vezes Atar as extremidades formando um saquinho. Colocar o saquinho dentro de um clice de sedimentao, prendendo na parte superior com um arame. Encher o clice de sedimentao com gua de torneira (40o C), de modo que o saquinho com as fezes fique semi-submerso. Deixar repousar por 12 horas. Retirar as fezes do clice, desprezar o sobrenadante. Colocar uma gota do sedimento em uma lmina, com o auxilio de uma pipeta, corar com lugol e colocar a lamnula. Examinar ao microscpio. Montar vrias lminas.

TCNICAS EXAMES COPROPARASITOLGICOS Contagem de ovos por grama (O.P.G) Tcnica de Gordon e Whitlock modificada OBJETIVO Identificao e contagem de ovos de helmintos por grama de fezes (O. P.G). Indicado para fezes de grandes animais (Bovinos, ovinos, caprinos e eqinos) PRINCPIO Mtodo de flutuao associado a contagem de ovos, usando a cmara de Macmaster. Exame microscpico quantitativo.

MATERIAL NECESSRIO 2 gramas de fezes (ovinos e caprinos) ou 4 gramas de fezes (Bovinos e Eqinos) Copo Basto de vidro ou colher Balana Soluo hipersaturada de cloreto de sdio Tamis (coador) Pipeta Cmara de Mcmaster TCNICA Com a colher ou basto de vidro homogenize a amostra. Pese 2g de fezes (ovinos ou caprinos) ou 4 gramas (bovinos e eqinos) num copo plstico Acrescente: 58 ml de soluo hipersaturada (quando usar 2 gramas) 56 ml de soluo hipersaturada (quando usar 4 gramas) Acrescentando, gradativamente este volume as fezes previamente pesadas. Com auxlio do coador ou gaze filtre a suspenso para outro copo Homogenize rigorosamente sempre Com a pipeta retire uma amostra de suspenso e encha os dois compartimentos da cmara de McMaster com cuidado para no formar bolhas de ar Leve a cmara ao microscpio e na objetiva de 10 x focalize as linhas presentes num dos seus compartimentos Conte ovos presentes dentro do limite das linhas Em seguida multiplique o nmero total dos ovos contados dos dois lados da cmara por 100 (para 2 gramas) ou 50 (para 4 gramas) obtendo-se dessa forma a quantidade de ovos por grama (OPG) de fezes. ou

CONTAGEM NA CAMARA DE MCMASTER A cmara de Mcmaster apresenta duas clulas de contagem, tendo cada uma a altura de 0,15 cm e a rea de1,0 cm2 . As clulas de contagem so delimitadas por linhas gravadas as superfcies de cada uma, que est subdividida por traos tambm gravados, apenas para facilitar a contagem. Os ovos encontrados nas duas clulas da cmara devem ser contados separadamente: Strongylideos / Strongyloides / Trichuris / Capillaria / Nematodirus / Parascaris / Ascaris A presena de oocitos de protozorios (coccdeos do gnero Eimeria sp) e de ovos de cestdeos (Moniezia

sp ) ser observada.

VISUALIZAAO DE OVOS NA CAMARA DE MACMASTER

OVOS DO NEMATODEOS DE RUMINANTES QUE NO PODEM SER IDENTIFICADOS GENERICAMENTE

Estrongylideos (60 a 105m )

Estrongyloides (45m x 35m)

TCNICAS EXAMES COPROPARASITOLGICOS Interpretao da contagem de ovos de por grama (o.p.g) O mtodo quantitativo tem como objetivo determinar a intensidade do parasitismo. A relao entre o numero de parasitas, sua patogenicidade e os sintomas clnicos difcil de ser analisada. Uma alta contagem de ovos por grama indicativa de um numero alto de vermes adultos ovopositores no hospedeiro. Uma contagem baixa no significa necessariamente uma pequena quantidade de vermes no animal. Um OPG negativo no descarta a possibilidade de que o animal esteja parasitado (Perodo pr-patente, vermes em fase de migrao, vermes em tecidos que no o trato gastrintestinal, como ocorre na hipobiose, onde as larvas permanecem encistada nos msculos do hospedeiro) O significado da contagem de ovos (OPG) no indicativo real do grau de infeco do hospedeiro, devendo-se sempre levar em considerao vrios fatores que fazem variar a quantidade de ovos nas fezes, entre eles: IDADE DO HOSPEDEIRO Animais jovens so mais afetados que os animais adultos (mais resistentes). A imunidade de animais adultos reconhecidamente um fator que limita o aparecimento de sintomas clnicos e o aumento da carga parasitria. Os nematdeos que parasitam animais adultos, portadores de certo grau de resistncia, pe relativamente menos ovos em comparao com os que parasitam animais jovens, j que esses animais mais novos so mais sensveis ao parasitismo. NUTRIO Os animais bem nutridos, ainda que sendo portadores de helmintos em nmero relativamente grande, geralmente no apresentam sintomas clnicos. Entretanto, em animais mal nutridos e com o mesmo grau de infeco, constata-se a exaltao de sintomas clnicos.

PREVALNCIA DOS NEMATDEOS GASTRINTESTINAIS NA REGIO As espcies de nematdeos e suas prevalncias so muito variveis, j que dependem de fatores topogrficos, temperatura, clima, umidade, precipitao pluviomtrica, pastagem e outros fatores ambientais determinantes para cada espcie. Por exemplo, a incidncia de Fasciola heptica maior em regies de campos encharcados, j que necessitam de um caramujo vetor para sua transmisso.

NUMERO DE PARASITAS NO HOSPEDEIRO Um numero reduzido de helmintos nem sempre indicativo de efeitos leves no animal. Isso depender do grau de patogenicidade da espcie de nematdeo gastrintestinal

PROLIFICIDADE DE UM PARASITA

Haemonchus um verme altamente prolifero, chegando a produzir cerca de 5.000 a 10.000 ovos por dia por fmea do verme. IDADE DOS PARASITAS A contagem de ovos no reflete o numero de parasitas existentes nos animais. As formas imaturas dos helmintos no produzem ovos, e por isso no se pode evidenciar os mesmos atravs dos exames coproparsitolgicos. Deves-e lembrar que a verminose severa causada por formas jovens dos vermes, podendo conduzir o animal a morte antes mesmo que os helmintos possam alcanar a sua completa maturao. PATOGENICIDADE DOS PARASITAS O significado da contagem de ovos de helmintos gastrintestinais depende, principalmente, da patogenicidade das espcies parasitas. Haemonchus sp sugam o sangue do hospedeiro, portanto a patogenicidade destes vermes muito alta. Se um animal parasitado por 5.000 Haemonchus, por exemplo, neste animal haver uma perda diria de 205 ml de sangue, o que provocaria uma forte anemia em um curto espao de tempo. Em contrapartida, o mesmo numero da espcie Trichostrongylus causa pouca patogenicidade em comparao com os de Haemonchus.. Os parasitas da espcie Strongyloides no produzem quase nenhuma patogenicidade nas mesmas circunstancias.

ALTERAES FISIOLGICAS E PATOLGICAS DO SISTEMA DIGESTIVO DO HOSPEDEIRO MANEJO REINFECAO DO HOSPEDEIRO RELAO DE PARASITAS MACHOS E FMEAS VERMIFUGAOES ANTERIORES

A PARTIR DESSA CONTAGEM ACONSELHA-SE A ADMINISTRAAO DE ANTIHELMINTICOS: OVINOS BOVINOS EQUINOS 500 300 300

Ateno! Verificar, Sintomatologia (palidez das mucosas e desidratao) e VG e Protenas