Основы биохимии

--Отдел глобальной технической поддержки оборудования для

диагностики in vitro
 Обзор курса

• Функция химических систем

• Классификация химических систем
• Принцип работы химической системы
• Калибровка и контроль качества химической системы
• Вопросы и ответы

2 © 2020 Mindray Confidential

 Обзор курса

• Функция химических систем

• Классификация химических систем
• Принцип работы химической системы
• Калибровка и контроль качества химической системы
• Вопросы и ответы

3 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — тип пробы

Плазма Сыворотка
крови
Антикоагулянт Да Нет

Фибриноген Да Нет
Плазма и сыворотка

Моча
Спинномозговая жидкость

4 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — основные анализы
ALT, AST, GGT, ALP, UREA, UA, CK, CK-MB, a- Glu, HbA1C,
ALB, TP, BIL-T, BIL- CO2, Cys-C, HBDH, LDH, β-HB, FUN
D, PA, TBA, CHE, β2-MG, RBP, HS-CRP, MYO,
AFU, 5’-NT, ADA MALB, CREA, D-Dimer
TPUC

Печень Почка Миокард Сахарный диабет

TC, TG, IgG, IgA, CRP, ASO α-AMY, LPS

HDL-C, LDL-C, IgM, IgE RF
ApoA1, ApoB, C3
Lp(a) C4

Липиды Иммунология Ревматизм Поджелудочная железа

CO2, FER, UIBC, ADA ACE

Ca, P, Mg, Fe, TRF, G6PD

TDM/DAT

Ионы анемия Тромбоз, легочный инфаркт

5 © 2020 Mindray Confidential

 Обзор курса

• Функция химических систем

• Классификация химических систем
• Принцип работы химической системы
• Калибровка и контроль качества химической системы
• Вопросы и ответы

6 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — классификация

Режим Авто

l Жидкостная l Полуавтоматиче
химия ский
l Сухая химия l Автоматический
l TLA

7 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — классификация по режимам

Режим проточной
кюветы
Перистальтический насос
Жидкостная
химия

Дискретный режим

Сухая химия

8 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — классификация по скорости

<300 тестов в час 300–1000 тестов в час 1000–2000 тестов в час

До 8800 тестов в час

9 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — классификация по автоматизации

Полуавтоматический Автоматический Полная автоматизация лаборатории

10 © 2020 Mindray Confidential

 Обзор курса

• Функция химических систем

• Классификация химических систем
• Принцип работы химической системы
• Калибровка и контроль качества химической системы
• Вопросы и ответы

11 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — элементы биохимической системы

Анализатор и контроллер
Набор Реагент, калибратор, Сканер штрихкодов и
(LIS: дополнительно и локально)
принадлежностей КК, чистящее средство модуль ISE
(например, CD80) (дополнительно)

Система обработки и подачи воды

ИБП >=4 кВ*А Запасные части, набор для
(локально) технического обслуживания
(локально)
(очень важно)
Дополнительно: основная функция не будет изменена без модуля
Локально: приобретается на местном рынке, не поставляется компанией Mindray

12 © 2020 Mindray Confidential

 Процедура анализа

Добавление
R1 Отчет
(первый этап)

Добавление Смешивание Мониторинг Обработка

Смешивание Инкубация Мониторинг
R2 Инкубация реакции данных

Добавление
Очистка
проба
(второй этап)

13 © 2020 Mindray Confidential

 Добавление пробы Добавление R2

Время инкубации
Время
инкубации

Добавление R1

14 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — принцип измерения
Как измерить концентрацию растворов?

Принцип измерения

• Колориметрический метод

• Турбидиметрия и нефелометрия

15 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — колориметрический метод
Закон Ламберта-Бера

Поглощение: в спектроскопии поглощение A

определяется как A=−log( / )

: интенсивность света до того, как он попадает в пробу,

или интенсивность падающего света.

: интенсивность света, прошедшего через пробу

(интенсивность прошедшего света).

«Закон Ламберта-Бера: поглощение становится линейным при формуле концентрации A=εcl, где l — это
расстояние прохождения света через материал, а ε — это коэффициент поглощения этого материала.

Предварительное условие: слабый раствор и монохроматический свет.

16 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — иммунотурбидиметрический метод
Реакция антиген-антитело Турбидиметрия и нефелометрия

C3, C4, IgA, IgG, IgM, IgE

Apo-A1, Apo-B

17 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — принцип работы

1. Конечная точка

2. Кинетический

3. Фиксированное время

18 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — принцип работы
Конечная точка

• Реакция достигает равновесия через определенный период.

• Изменение поглощения пропорционально концентрации вещества.
• Например: TP, UA, Glu, HbA1c, TC…

равновесие

19 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — принцип работы
Кинетический
• скорость реакции остается постоянной в ходе процесса.
• Поглощение реагирующей жидкости изменяется равномерно, что пропорционально активности
субъекта (обычно ферментов).
• Например: ALT, ALP, LDH, CK, ACE…

Постоянная
скорость

20 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — принцип работы
Фиксированное время
• Для достижения равновесия реакции с фиксированным временем требуется значительное время.
• В определенный период реакции скорость реакции (v) пропорциональна концентрации субстрата [S].
• Например: ASO, CO2

Определе
нный
период

21 © 2020 Mindray Confidential

 Обзор курса

• Функция химических систем

• Классификация химических систем
• Принцип работы химической системы
• Калибровка и контроль качества химической системы
• Вопросы и ответы

22 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — калибровка и контроль качества
1. Калибровка
2. Контроль качества

23 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — калибровка
Цель
• Получение отношения Отклика и Концентрации
• Стандартизация

24 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — калибровка
Линейная калибровка: используется для тех аналитов (например, TP, ALB и TC), изменение поглощения которых
при различных концентрациях образует линейный график.
• Одноточечная линейная
• Двухточечная линейная
R R=aC+b
• Многоточечная линейная
R=aC

Нелинейная калибровка: используется для тех компонентов пробы (например,

специфические белки и иммунологические анализы на IgM, IgE), поглощение которых C
при различных концентрациях не образует линейный график.
• Logit-Log 4P/5P
• Экспоненциальная/полиномиальная 5P
• Парабола R=Xa
• Сплайн R

C
25 © 2020 Mindray Confidential
 Базовые знания — калибровка
Линейная калибровка:
Формула расчета: C= K×(R-R0). R0 — это ответ холостого реагента.

Одноточечная калибровка

Двухточечная калибровка

26 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — калибровка
Нелинейная калибровка:
• Logit-Log 4P: для этой математической модели калибровки
требуется не менее четырех калибраторов. Данные четыре
коэффициента можно рассчитать методом L-M.
• Logit–Log 5P: эта математическая модель находит такое же применение, как и Logit-
Log 4P, но обеспечивает более хорошую аппроксимацию.
• Экспоненциальная 5P: калибровка этого типа применяется к химическим
анализам с калибровочной кривой, у которой ответ прямо пропорционален
концентрации.
• Полиномиальная 5P: для этой математической модели калибровки
требуется не менее пяти калибраторов.
• Парабола: для этой математической модели калибровки требуется не менее
трех калибраторов. Три коэффициента можно рассчитать методом наименьших
квадратов.
• Сплайн: для этой математической модели калибровки требуется от 2 до
9 калибраторов. Благодаря аппроксимации подсекций эта математическая
модель обеспечивает лучшее соответствие кривых по сравнению с другими
моделями.
27 © 2020 Mindray Confidential
 Базовые знания — калибровка

28 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — контроль качества

29 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — контроль качества
Правила Вестгарда: КК с несколькими правилами использует комбинацию критериев принятия решения
или правил контроля, чтобы решить, находятся ли результаты анализа в пределах допустимого
диапазона.

30 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — контроль качества
• Внутренний контроль качества (ВКК)

• Внешняя оценка качества (ВОК)

– Randox RIQAS
– Biorad EQAS
– CAP
…

31 © 2020 Mindray Confidential

 Базовые знания — система клинического анализа

Фиксированная
комбинация анализатора,
реагента и калибратора
лежит в основе обеспечения
отслеживаемости.

32 © 2020 Mindray Confidential

 Соответствующая система AAA с полной отслеживаемостью
Уровень Прибор, реагент, калибратор Примечание

Анализатор, реагенты и
калибраторы одной марки Система согласования с
Система AAA зарегистрированы как системное системной интеграцией
решение, и система обладает обеспечивает точность
прослеживанием.
Анализатор, реагенты и
Открытая система без
калибраторы разных
возможности интеграции,
Система ABB производителей, не
точность и
или ABC зарегистрированы как системное
сопоставимость не
решение, производительность не
гарантируются.
подтверждена.

Примечание. A, B, C обозначают прибор, реагент, калибратор различных компаний.

33 © 2020 Mindray Confidential
 Обзор курса

• Функция химических систем

• Классификация химических систем
• Принцип работы химической системы
• Калибровка и контроль качества химической системы
• Вопросы и ответы

34 © 2020 Mindray Confidential

 Вопрос 1. Почему длина волны обнаружения одинакова для
АСТ и АЛТ?

• Потому что они используют одну и ту

же систему индикаторов:
NADH/NADPH. Ее пик поглощения
составляет 340 нм.

• NAD+→NADH (NADP+ → NADPH)

Аланинамино
трансфераза

Аспартатамин
отрансфераза

35 © 2020 Mindray Confidential

 Вопрос 2. Сколько существует цветовых индикаторов?

Ø NAD+→NADH (NADP+ → NADPH)

Ø Фенольные соли → п-нитрофенол (405 нм)
Пример: ALP (контрольный метод IFCC)

Ø H2O2 и 4-аминоантипирин (546 нм)

Пример: UA (метод уриказы-POD)

Ø Объединение антигена и антитела → Иммунный комплекс

Пример: C4 (иммунотурбидиметрический метод)

Ø Другая реакция с окрашиванием: Ca, Mg…

36 © 2020 Mindray Confidential

 Вопрос 3. В чем состоит преимущество двойной длины волны?
1. Преимущество двойной длины волны — устранение помех, не связанных с реакцией

Изменение сдвига
Сдерживание
шума
колебаний
Сокращение

кюветы
Предотвращение дифф.
37 © 2020 Mindray Confidential
 Вопрос 3. В чем состоит преимущество двойной длины волны?
2 Преимущество двойной длины волны — устранение эндогенных помех
ü Предположим, что компонент X является
определяемой составляющей, а компонент Y — X Y
основным отвлекающим фактором. A
ü λ1 и λ2 — две использованные длины волны.
ü Мы используем ΔA для расчета значения
поглощения
A  A1  A2  (Ax1  Ay1) （Ax2  Ay2）
В соответствии с кривой поглощения мы получаем:
y y
∵ A 1  A 2
∴  A  A x 1  A x 2 2
1 X — определяемая
Вывод: Y не повлияет на измерение X составляющая
Y — отвлекающий фактор

38 © 2020 Mindray Confidential

 Вопрос 4. Почему у разных анализаторов есть постоянная скорость и
непостоянная скорость?

• Есть 4 основные причины ограничения пропускной способности:

– Оптическая система: обычно решетчатая, имеет более высокую эффективность, чем
система фильтров.
– Промывочный узел: система без станции промывки требует перерыва для замены
кюветы.
– Позиция инкубации: небольшой диск реакции будет легко насыщаться.
– Постоянная загрузка: устройствам с ограниченным числом датчиков не хватит
времени, чтобы завершить впрыск S/R1/R2 за один период.

39 © 2020 Mindray Confidential

 Вопрос 5. В чем преимущество использования R1 вместо S в начале
реакции?
Если начинать с S (пробы)...

Если начинать с R (реагента)...

• Избежание неточного ввода пробы из-за
капли жидкости на конце иглы
пробоотборника.
• Датчик проверяет уровень жидкости R1 перед
впрыском, чтобы проверить дозировку R1.

40 © 2020 Mindray Confidential

 Сводка ключевых моментов

• Отношение светопоглощения к концентрации пробы основывается на

законе Ламберта-Бера
• Калибратор используется для построения графика R-C (ответ-концентрация)
• Контроль качества используется для мониторинга производительности
системы
• Система AAA полностью отслеживаема

41 © 2020 Mindray Confidential

Спасибо!
 История изменений

Версия Автор Дата Содержание

1,0 Celia Tang (Селия Тан) 12.06.2021 г. Пересмотрено

43 © 2020 Mindray Confidential