Par Valentina Soledad ESPINA PEREZ

Fractionnement de protines du lait par filtration dynamique

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Thse prsente pour lobtention du grade de Docteur de lUTC

Soutenue le 30 octobre 2009 Spcialit : Gnie des Dveloppement Durable

Procds

Industriels

et

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FRACTIONEMMENT DE PROTEINES DU
tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

LAIT PAR FILTRATION DYNAMIQUE

Soutenue le 30 octobre 2009 devant le jury compos de :

Mme. M. RABILLER-BAUDRY M. M. M. M. M. P. JAOUEN E. VOROBIEV J.L. GRASSI M.Y. JAFFRIN L.H. DING

(Rapporteur) (Rapporteur) (Prsident du jury) (Membre du jury) (Directeur de thse) (Co-Directeur de thse)

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Cette thse a t effectue avec le soutien du Programme Alan, Programme de Bourse de Haut Niveau de lUnion Europenne pour lAmrique Latine, bourse n E06D101610CL Supported by the Programme Alan, the European Union Programme of High Level Scholarships for Latin America, scholarship n E06D101610CL

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A mes parents,

et mon frre

ma sur

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REMERCIEMENTS
Cette thse a t ralise au seins des laboratoires UMR CNRS 6600 Biomcanique et Bioingnierie et de lEquipe dAccueil 4297 Transformations Intgres de la Matire Renouvelable , de lUniversit de Technologie de Compigne (UTC). Je voudrais dabord remercier toutes les personnes de ces deux laboratoires qui, dune faon ou dune autre, ont particip la ralisation de ce travail. Ce travail a t ralis sous la direction de M. Michel Jaffrin (Professeur Emrite de lUTC) et de M. LuHui Ding (Professeur de lUTC). Je tiens leur adresser mes remerciements les plus sincres pour mavoir accueillie au sein du laboratoire, pour leur patience au dbut de cette thse et pour la confiance tmoigne lors de la ralisation de ce travail. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Je tiens remercier le Programme Alan, Programme de Bourses de Haut Niveau de lUnion Europenne pour lAmrique Latine (bourse n E06D101610CL) qui ma permis de raliser ma thse lUTC. Jadresse mes vifs remerciements Mme Murielle Rabiller-Baudry, Professeur lUniversit de Rennes 1, et M. Pascal Jaouen, Professeur lUniversit de Nantes, pour avoir accept dtre rapporteurs de mon travail. Je remercie aussi M. Eugne Vorobiev, Professeur de lUTC de mavoir fait lhonneur de prsider le jury de cette thse, ainsi que M. Jean-Luc Grassi, Directeur de lusine de Socit Laitire de Clermont (Lactalis), pour avoir accept dtre examinateur. Je remercie trs chaleureusement Mlle. Beatriz Cancino, Professeur la Pontificia Universidad Catolica de Valparaiso, pour mavoir montr le chemin de la recherche, pour la confiance porte en moi pour maider faire mon doctorat en France. Merci Doctora pour votre aide distance, pour votre constante proccupation et pour votre amiti, sans vous cette thse naurai jamais existe. Je voudrais remercier Matthieu Frappart pour mavoir aide pendant la ralisation de cette thse. Merci Matthieu pour avoir partag avec moi tes connaissances sur la filtration dynamique, pour toutes les discussions sur le travail et autres, pour avoir lu le manuscrit plusieurs fois et corrig les fautes de franais, merci pour ton aide et pour ton amiti. Jadresse un grand merci Patrick Paullier, pour son aide technique lors des essais et pour les conseils donns au cours de mes trois annes au sein du laboratoire.

Je remercie mes collgues de laboratoire : Zhenghuan Tu, Johann Walter, Benot Carpentier, MarieValrie Moreno, Yannick Lefevre, Lina Li, Sana Bousbiat, Jianquan Luo et Munir Mellal, pour tous les bons moments partags au cours de cette thse. Je remercie galement Mme. Chantal Guilbert pour toutes les conversations que nous avons eues et laide administrative donne au cours de cette thse. Un grand merci M. Herv Adenier, Mme. Claudia Orellana et M. Frank Merlier, pour mavoir appris utiliser lHPLC et pour leur aide technique. Je voudrais remercier de tout mon cur : Hlne Morel, Patricia Ruiz-Sanchez, Pedro Castillo, Karem et Francis Mairet, Frdric Paviet, Van Hinh Vu, Anh-Tuan Luong, Dinh Vinh Do, Maria Beatriz Rocha, tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Sergio Rodriguez, Roberto Diaz et la communaut mexicaine, pour leur amiti et leur support pendant ces trois annes. Vous avez t ma famille en France, je vous serai toujours reconnaissante et je garderai avec moi des excellents souvenirs. Je remercie Guillaume Sanahuja, pour son soutien et son amour qui mont aide dans les moments de faiblesse. Je remercie galement Monique, Francis et Julien Sanahuja, pour mavoir accueillie dans votre famille. Je remercie mes amis au Chili : Fiorella Casazza, Carla Arancibia, Carolina Astudillo, Stephany Gonzalez, Patricia Fuentes, Carolina Robles, Paula Muoz, Rodrigo Gatica, Sofia Pavez, Alexis Gatica, Paula Gatica, Francisco Rossier, Francisco Alonso, Eduardo Rossel, Daniela Olate, Cristian Cuadra, Pablo Valencia, Juan Aguirre, Juan Palacios et Katia Puyol, pour leur encouragement tout au long de cette thse et pour leur amiti inconditionnelle. Merci mes chrs amis pour votre support distance et pour me maintenir connecte avec mon pays. Je voudrais remercier la famille Khle-Muoz, pour lattention quils mont tmoigne et pour mavoir accueillie dans leur famille comme une de leurs filles. Pour finir je voudrais remercier de tout mon cur mes parents, ma sur et mon frre, pour leur amour inconditionnel, pour mavoir toujours encourage continuer mes tudes et ce que javais rv. Merci pour avoir accept mes dcisions et pour me soutenir, sans votre soutien et amour je naurais jamais pu finir ma thse.

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Rsum

Fractionnement des protines du lait par filtration dynamique

Thse de Doctorat, Gnie des Procds Industriels et Dveloppement Durable. UTC Compigne, 2009

RESUME
Ce mmoire de thse est consacr au fractionnement des protines du lait par filtration dynamique. Un procd en cascade a t propos pour sparer les protines du lait en trois fractions principales : les casines, l-Lactalbumine et la -Lactoglobuline. La premire tape du procd consiste en une microfiltration du lait afin de sparer les casines des protines du tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 lactosrum. Une comparaison entre les performances des deux modules de filtration dynamique : le module Multi Shaft Disk (MSD) et le module disque rotatif, a t effectue. Nous avons obtenu les meilleurs rsultats avec le prototype MSD, fournissant des flux de permat levs, ainsi que une trs bonne transmission de protines solubles et une rtention leve des micelles de casines. La deuxime tape du procd est la sparation d-Lactalbumine de la -Lactoglobuline, par ultrafiltration. Le prototype disque rotatif muni dun disque ailettes tournant 2000 tr.min-1 a t utilis. Nous avons obtenu des transmissions de protines et des slectivits constantes lors de la concentration du lactosrum. Ceci constitue un avantage des systmes dynamiques, car en filtration tangentielle les transmissions de protines et les slectivits diminuent avec la concentration. Les slectivits obtenues en filtration dynamique, sans modification de pH ni de la force ionique, sont de lordre de grandeur de celles obtenues en filtration tangentielle aprs optimisation du pH et de la force ionique. Mots cls : Filtration dynamique, -Lactalbumine, -Lactoglobuline, microfiltration et ultrafiltration.

Abstract

Milk proteins fractionation by dynamic filtration

PhD Thesis, Industrial Processes Engineering and Sustainable Development. UTC Compigne, 2009

ABSTRACT
This thesis focuses on milk proteins fractionation by dynamic filtration. A two-stage process has been proposed in order to separate milk proteins into three main fractions: casein micelles, -Lactalbumin and -Lactoglobulin. The first stage of the process consists in microfiltration of skim milk for separating casein micelles from whey proteins. The performances of two dynamic filtration modules: the Multi Shaft Disk (MSD) module and the rotating disk module have been compared. The results have shown that the MSD module presents high tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 permeate flux, good whey proteins transmission and high casein micelles rejection. The second stage of the process is the separation of -Lactalbumin from -Lactoglobulin by ultrafiltration. The rotating disk module equipped with a disk with vanes and rotating at 2000 rpm, was used. The protein transmission and selectivity were constant during whey concentration. This is an advantage of dynamic filtration because in crossflow filtration protein transmission and selectivity decreased during whey concentration. The selectivities obtained with dynamic filtration, without changes in pH and ionic strength of the solution, were in the same range as those obtained with crossflow filtration after pH and ionic strength optimization. Key Words: Dynamic filtration, -Lactalbumin, -Lactoglobulin, microfiltration and ultrafiltration

ii

Sommaire

SOMMAIRE
NOMENCLATURE .................................................................................................1 INTRODUCTION GENERALE.............................................................................4 CHAPITRE I : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE .....................................................6
I.1. Modles de Polarisation de Concentration et Colmatage ...................................................................................7 I.1.1. Modle de Transfert de Matire (Thorie du Film)..........................................................................................7 I.1.2. Modle de rsistances en srie..............................................................................................................................9 I.1.3. Modle de la pression osmotique pour le flux limite......................................................................................10 I.2. Mthodes de limitation du colmatage pour augmenter les performances de la membrane........................10 I.2.1. Prtraitement de la solution dalimentation......................................................................................................11 I.2.2. Choix des matriaux membranaires...................................................................................................................11 I.2.3. Cration dinstabilits. ..........................................................................................................................................11 I.2.3.1. Promoteurs de turbulence.............................................................................................. 12 I.2.3.2. Backflushing et backpulsing. ........................................................................................ 12 I.2.3.3. Ecoulements pulss....................................................................................................... 13 I.2.4. Champs lectriques...............................................................................................................................................13 I.2.5. Ultrasons.................................................................................................................................................................14 I.2.6. Filtration dynamique.............................................................................................................................................14 I.2.6.1. Systmes membrane vibrante ..................................................................................... 15 I.2.6.1.1. VSEP (Vibratory Shear Enhanced Processing)....................................................... 15 I.2.6.1.2. Systme PallSep.................................................................................................... 16 I.2.6.2. Systmes disque rotatif............................................................................................... 16 I.2.6.2.1. Dynamic Cross Flow Filter DYNO........................................................................ 16 I.2.6.2.2. Cross Rotational Membrane Filtration OPTIFILTER CR. ...................................... 16 I.2.6.2.3. High Shear Rotary Filter SPINTEK. ...................................................................... 17 I.2.6.2.4. Dynamic Membrane Filter DMF............................................................................ 17 I.2.6.2.5. RVFTM. ................................................................................................................. 17 I.2.6.2.6. Multi Shaft Disk MSD........................................................................................... 17 I.2.6.2.7. ROTOSTREAM.................................................................................................... 18 I.2.6.2.8. Single Shaft Disk Filter SSDF. .............................................................................. 18 I.2.6.2.9. Systmes cylindre rotatif..................................................................................... 19 I.2.6.2.10. Systme CMS (Centrifugal Membrane Separation). ............................................. 19 I.3. Le lait et ses protines..............................................................................................................................................20 I.3.1. Proprits fonctionnelles des protines du lait................................................................................................23 I.3.1.1. Casines. ...................................................................................................................... 23 I.3.1.1.1. Proprits mulsifiantes......................................................................................... 23 I.3.1.1.2. Proprits moussantes. .......................................................................................... 24 I.3.1.1.3. Coagulation de casines et micelles de casines. .................................................... 24 I.3.1.2. Protines du lactosrum. ............................................................................................... 24 I.3.1.2.1. -Lactoglobuline (-Lg) ........................................................................................ 25

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ii

Sommaire
I.3.1.2.2. -Lactalbumine (-La) .......................................................................................... 26 I.3.1.2.3. Srum dAlbumine Bovine. ................................................................................... 26 I.3.1.2.4. Immunoglobulines................................................................................................. 27 I.3.1.2.5. Lactoferrine .......................................................................................................... 27 I.4. Applications des procds membranaires dans lindustrie laitire...................................................................27 I.4.1. Procds membranaires pour le fractionnement du lait. ...............................................................................29 I.4.1.1. Sparation et fractionnement de la crme. ..................................................................... 29 I.4.1.2. Elimination de bactries et spores prsentes dans le lait. ................................................ 30 I.4.1.3. Concentration de micelles de casines partir du lait crm......................................... 32 I.4.1.4. Rcupration des protines du lactosrum. .................................................................... 34 I.4.1.4.1. Sparation de l-Lactalbumine (-La). ................................................................. 35 I.4.1.4.2. Sparation de -Lactoglobuline (-Lg) .................................................................. 43 I.4.1.4.3. Sparation du srum dalbumine bovine (BSA)...................................................... 46

CHAPITRE II : MATERIELS ET METHODES .................................................48 tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

II.1. Module Multi Shaft Disk (MSD)..........................................................................................................................49 II.1.1. Calcul de la vitesse diffrentielle dans la zone de recouvrement dans le MSD........................................50 II.1.2. Dtermination de la PTM partir de pression du carter pc dans le MSD................................................50 II.1.3. Dtermination du taux de cisaillement............................................................................................................51 II.1.4. Montage exprimental ........................................................................................................................................52 II.2. Module Disque Rotatif .......................................................................................................................................53 II.2.1. Calcul du taux de cisaillement ...........................................................................................................................54 II.2.2. Montage exprimental ........................................................................................................................................55 II.3. Membranes utilises ...............................................................................................................................................56 II.4. Fluides utiliss..........................................................................................................................................................56 II.4.1. Lait UHT crm.................................................................................................................................................57 II.4.2. Lait pasteuris crm.........................................................................................................................................57 II.5. Analyses physico-chimiques..................................................................................................................................57 II.5.1. Dtermination des transmissions de casines par turbidit.........................................................................57 II.5.2. Dtermination de la concentration des protines solubles par HPLC (High Performance Liquid Chromatography) ............................................................................................................................................................57 II.5.3. Prparation des chantillons..............................................................................................................................60 II.5.4. Mesures de viscosit du lait ...............................................................................................................................61 II.6. Prtraitement de la membrane PVDF ................................................................................................................61 II.7. Protocole de nettoyage des membranes et du systme....................................................................................61 II.8. Protocole opratoire des essais effectus. ..........................................................................................................61

CHAPITRE III : SEPARATION DES CASEINES PAR MICROFILTRATION : COMPARAISON DES MODULES MSD ET A DISQUE ROTATIF. ................62
III.1. Essais sur le module MSD...................................................................................................................................63 III.1.1. Essais avec lait UHT crm ...........................................................................................................................63

iii

Sommaire
III.1.1.1. Variation du flux, de la rtention de casines et des transmissions de protines solubles avec la PTM FRV = 1..................................................................................................................... 64 III.1.1.1.1. Comparaison entre les configurations 6 disques cramiques sur 1 arbre et 6 disques cramiques plus 6 disques lisses. ........................................................................................... 64 III.1.1.1.2. Comparaison entre les configurations 6 disques cramiques sur 1 arbre et 6 disques cramiques plus 6 disques mtalliques ailettes. ................................................................... 68 III.1.1.2. Variation du flux, de la rtention de casines et des transmissions de protines de lactosrum avec le FRV..................................................................................................................... 73 III.1.2. Essais avec du lait pasteuris crm. ............................................................................................................78 III.2. Comparaison des MF du lait pasteuris et du lait UHT utilisant le module MSD....................................84 III.3. Comparaison des rsultats avec ceux en filtration tangentielle de la littrature.........................................87 III.4. Etude de rsistances..............................................................................................................................................89 III.4.1. Rsistances FRV constant.............................................................................................................................89 III.4.2. Rsistances FRV variable ..............................................................................................................................93 III.5. Essais sur le module disque rotatif utilisant des membranes organiques de MF....................................94 III.5.1. Variation du flux, de la rtention de casines et de la transmission de protines de lactosrum avec la PTM FRV=1.................................................................................................................................................................94 III.5.2. Variation du flux, de la rtention de casines et des transmissions de protines de lactosrum avec le FRV. ................................................................................................................................................................................99 III.6. Comparaison entre le module disque rotatif et le module MSD............................................................ 102

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

CHAPITRE

IV

SEPARATION

D-LACTALBUMINE

ET

DE

LACTOGLOBULINE PAR ULTRAFILTRATION........................................... 106

I.1. Ultrafiltration du lactosrum du lait UHT et du lait pasteuris..................................................................... 107 I.1.1. Variation du flux et des transmissions de protines avec la PTM FRV = 1. ....................................... 108 I.1.2. Variation du flux et des transmissions de protines avec le FRV. ............................................................ 111 I.2. Etude des rsistances la filtration .................................................................................................................... 121

CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES............................................................... 124 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ............................................................ 128 LISTE DE TRAVAUX ...........................................................................................141

iv

Nomenclature

NOMENCLATURE
A C CB CG Ci CT Cp Cr
C ps

aire sous le pic chromatographique (mm2) concentration de solut retenus sur la membrane (g.L-1) concentration de la solution (g.L-1) concentration gel sur la surface de la membrane (g.L-1) concentration de la protine i dans le permat ou rtentat, selon le cas (g.L-1) concentration totale de protines dans le permat ou rtentat, selon le cas (g.L-1) concentration dans le permat (g.L-1) concentration dans le rtentat (g.L-1) concentration de la protine soluble (-Lactalbumine ou -Lactoglobuline) dans le

permat ou dans le rtentat, selon le cas (g.L-1) tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 C La
C Lg

concentration d-Lactalbumine (g.L-1) concentration de -Lactoglobuline (g.L-1) coefficient de diffusion (m2.h-1) frquence doscillation du VSEP (Hz) facteur de rduction volumique facteur de sparation flux convectif de solut (L.h-1.m-2) flux de permat (L.h-1.m-2) flux rtrodiffusif de solut (L.h-1.m-2) flux net de solut vers la membrane (L.h-1.m-2) flux limite (L.h-1.m-2) coefficient de transfert de matire (m.h-1) coefficient dentranement du fluide. permabilit de la membrane (L.h-1.m-2.Pa-1) masse (g) vitesse de rotation (tr.min-1) vitesse de rotation des disques cramiques dans le module multishaft disk

D F FRV FS JS
J

J RS J net

J lim
kt k Lpf M N Nc

(tr.min-1) Nm_l vitesse de rotation des disques mtalliques lisses dans le module multishaft disk (tr.min-1)

Nomenclature Nm_a vitesse de rotation des disques mtalliques ailettes dans le module multishaft disk (tr.min-1) PTM P pp ps Pi P0 Pf pc Pc Q tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Re Rm Rf Rif Rrf R1 R2 r RT RCP Re d pression transmembranaire (Pa) puret pression du permat dans module multishaft disk (Pa) pression lentre de larbre creux dans le module multishaft disk (Pa) pression dentre ct rtentat dans le module disque rotatif (Pa) pression de sortie ct rtentat dans le module disque rotatif (Pa) pression de sortie ct filtrat dans le module disque rotatif (Pa) pression dans le carter (Pa) pression au priphrique (Pa) dbit dalimentation (L.h-1) nombre de Reynolds rsistance membranaire (m-1) rsistance du colmatage (m-1) rsistance irrversible (m-1) rsistance rversible (m-1) rayon externe de la membrane (m) rayon interne de la membrane (m) rayon de la membrane (m) rsistance totale (m-1) rsistance de polarisation de concentration (m-1) nombre de Reynolds bas sur le rayon et la vitesse priphrique du disque nombre de Reynolds local =

Rd
2

Re r Re s
Sc s Tr Vav V Y

r 2

s 2

nombre de Reynolds bas sur lentrefer = nombre de Schmidt

entrefer (distance entre les deux disques/cylindres) (m) transmissions de protines vitesse moyenne sur la membrane (m.s-1) vitesse moyenne (m.s-1) rcupration, rendement

Nomenclature Symboles grecs

paisseur de la couche limite (m)

l

taux de cisaillement local (s-1) taux de cisaillement sur la membrane (s-1) taux de cisaillement moyen sur la membrane (s-1) taux de cisaillement maximum sur la membrane (s-1) coefficient gomtrique viscosit dynamique du permat (Pa.s) pression osmotique (Pa) masse volumique du fluide (kg.m-3)

max

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

contrainte de cisaillement moyen (Pa) viscosit cinmatique du fluide (m2.s-1) vitesse angulaire (rad.s-1)

Introduction Gnrale

INTRODUCTION GENERALE
Les protines du lait sont trs utilises comme des ingrdients dans divers aliments, car leurs proprits fonctionnelles amliorent la qualit de ces derniers. Les fonctionnalits des protines du lait pourraient tre utilises dune faon plus efficace si ces protines taient spares des autres composants du lait et purifies. A titre dexemple, les casines sont lingrdient principal dans la fabrication de fromage. Le rendement et la qualit des fromages peuvent tre augments par une concentration des micelles des casines en soustrayant des protines solubles. Les casines sont aussi utilises dans la standardisation du lait et dans la fabrication de yaourts. Les protines solubles ou protines de lactosrum ont un intrt dans lindustrie agroalimentaire et dans lindustrie pharmaceutique, par leur haute valeur nutritionnelle et leurs proprits fonctionnelles telles que les proprits glifiantes, moussantes et mulsifiantes. Citons, la tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Lactoglobuline ayant des proprits glifiantes et pouvant tre utilise dans la fabrication des produits de charcuterie, l-Lactalbumine ayant une haute valeur nutritionnelle mais aussi des proprits anti carcinognes. Pour sa part, la lactoferrine a des proprits antimicrobiennes et les immunoglobulines peuvent tre utilises pour favoriser les dfenses immunitaires. Actuellement, les protines sont commercialises sous forme de concentrts et/ou disolats. Pour leur valorisation individuelle, il est ncessaire de les dtenir grande chelle et les plus pures possible, notamment dans lindustrie pharmaceutique. Diffrentes mthodes classiques de sparation existent pour le fractionnement de protines du lait comme la chromatographie et la prcipitation slective. Cependant, ces mthodes sont chres et longues, ce qui augmente le prix des protines pures sur le march. La sparation membranaire est apparue comme une alternative ces mthodes classiques. En effet, elle permet de sparer les diffrents composants du lait par leur taille. Par ailleurs, ce procd naltre pas la conformation des protines. Depuis plus de vingt ans, la filtration membranaire tangentielle a t tudie pour concentrer les micelles de casines et les protines de lactosrum. Le problme le plus important de cette technique est la diminution rapide des flux de permat cause de la formation dun dpt sur la membrane, entrainant un colmatage. Il y a dix ans environ, des tudes ont t effectues pour sparer les protines de lactosrum et aussi pour produire des concentrts enrichis en une protine spcifique, gnralement l-Lactalbumine. Ces tudes ont montr galement que la diminution du flux de permat et la formation dun dpt sur la membrane limitent la sparation de protines, car la slectivit de la membrane diminue. Une solution pour le problme du colmatage, et qui est utilise actuellement dans lindustrie, est laugmentation du dbit dalimentation des systmes membranaires et lutilisation des systmes pression

Introduction Gnrale transmembranaire uniforme (PTMU), mais cela demande une consommation dnergie leve. Une autre alternative est la filtration dynamique, qui permet daugmenter les flux de permat avec un faible dbit dalimentation et aussi de diminuer la formation du dpt sur la membrane grce aux taux de cisaillement levs gnrs par ces systmes. Les systmes de filtration dynamique ont t utiliss en ultrafiltration, nanofiltration et osmose inverse pour le traitement deffluents (Postlethwaite et al., 2004; Akoum et al., 2004; Frappart, 2006; Shi & Benjamin, 2008; Zouboulis & Petala, 2008) et aussi pour la concentration de micelles de casines (Al-Akoum et al., 2002a), en obtenant de meilleures performances quen filtration tangentielle. Cest pour cela que notre objectif est de proposer un procd de filtration en cascade pour la sparation des protines du lait partir du lait crm en trois fractions principales : casines, -Lactalbumine et -Lactoglobuline, en faisant intervenir la filtration dynamique afin daugmenter les flux de permat et diminuer le colmatage de la membrane. La diminution du tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 colmatage pourrait ainsi augmenter les flux de permat et la slectivit au cours de la filtration. Le premier chapitre de la thse est ddi une revue bibliographique des modles de polarisation de concentration et de colmatage de la membrane et des techniques limitant ces phnomnes. Nous verrons aussi les proprits fonctionnelles des protines du lait et lapplication de la filtration membranaire pour la sparation des protines du lait. Le deuxime chapitre est consacr la description des modules de filtration dynamique, les membranes et les fluides utiliss dans cette tude, ainsi que les mthodes danalyse et les protocoles opratoires. Le troisime chapitre dcrit les rsultats de la premire tape du procd en cascade : la sparation des micelles de casines par microfiltration. Nous avons utilis le module Multi Shaft Disk (MSD), conu par Westfalia Separator (Allemagne). Ce module avait t dj utilis pour la microfiltration des solutions modles de suspensions minrales, mais est pour la premire fois test sur des fluides biologiques. Les performances obtenues avec le module MSD ont t compares avec le prototype disque rotatif, conu par lquipe dOrganes Artificiels et Procds Membranaires de lUMR 6600 de lUniversit de Technologie de Compigne. Une comparaison a t aussi faite avec les rsultats reports dans la littrature en filtration tangentielle. Le quatrime chapitre est consacr aux rsultats de la deuxime partie du procd en cascade : la sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration. Le prototype disque rotatif t utilis et une comparaison entre les performances de ce systme dynamique avec la filtration tangentielle a t effectue.

Chapitre I : Etude Bibliographique

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

CHAPITRE I : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE

Chapitre I : Etude Bibliographique Ce chapitre se compose de quatre parties distinctes. En premier lieu, nous prsentons les diffrents modles de polarisation de concentration et de colmatage gnralement utiliss lors de la filtration membranaire, puis nous introduirons les techniques permettant de limiter le colmatage des membranes, en portant une attention particulire sur les modules de filtration dynamique existants. Nous exposerons ensuite les diffrentes proprits du lait et de ses protines, et pour finir nous montrerons les applications de la filtration membranaire dans le domaine laitier, en particulier pour le fractionnement des protines. I.1. Modles de Polarisation de Concentration et Colmatage Divers modles mathmatiques sont disponibles dans la bibliographie pour dcrire les mcanismes de transport travers des membranes. Nous aborderons ici les plus utiliss en filtration membranaire tangentielle. I.1.1. Modle de Transfert de Matire (Thorie du Film) tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Ce modle est un des plus simples et le plus largement utilis pour modliser le flux lors quil devient indpendant de la pression. Quand une solution est filtre, le solut est amen la surface de la membrane par transport convectif et le flux massique, JS, (Figure I.1) est :

J S = JC

(I.1)

o J est le flux de permat (L.h-1m-2) et C est la concentration du solut (g.L-1). La diffrence de concentration entre celle rgnant dans la couche limite et celle de la veine fluide engendre, par effets diffusionnels, un flux de solut rtrodiffusif vers la veine fluide. Si nous ne tenons pas compte de la diffrence de concentration axiale, le flux rtrodiffusif sera donn par :

J RS = D

C x

(I.2)

o D est le coefficient de diffusion et C/x est le gradient de concentration dans la couche limite. En rgime stationnaire, ces flux squilibrent, et les quations (I.1) et (I.2) peuvent tre combines (Cheryan, 1986), le flux net de solut vers la membrane est donc donn par :
J net = J S J RS = JC D C x

(I.3)

Chapitre I : Etude Bibliographique

Figure I.1. Schma de la polarisation de concentration pendant lultrafiltration de soluts collodaux et macromolculaires, montrant la formation de la couche de polarisation et la couche limite de concentration associe. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Si Jnet = 0, lintgration de lquation I.3 dans la couche limite donne (Cheryan, 1986) :

J=

ln

CG C = k t ln G C C

(I.4)

o k t = D est le coefficient de transfert de matire, avec les mmes units que le flux J, est lpaisseur de la couche limite de concentration et CG est la concentration gel sur la surface de la membrane. On remarque bien que dans ce modle, le flux est indpendant de la pression. Dans lquation I.4, si kt est constant, la valeur de flux limite dpend de CB et la courbe J lim = f (ln C ) est une droite dont la pente est gale au coefficient de transfert de masse travers la membrane. Labscisse du point obtenu par extrapolation au flux nul correspond CG. Les valeurs extrapoles de CG nont pas toujours de signification physique (Wijmans et al., 1984) et peuvent dpendre de la gomtrie du module et des conditions opratoires, ce qui nest pas prvu par le modle. Les valeurs du coefficient de transfert de masse k, qui dpendent du rgime dcoulement, peuvent tre exprimes en fonction des paramtres physicochimiques de la solution (viscosit dynamique, coefficient de diffusion, etc.) et des paramtres hydrodynamiques du systme (taux de cisaillement, vitesse de circulation tangentielle, etc.) et donc, par analogie aux transferts de chaleur, on peut obtenir une loi du type (Porter, 1972; Cheryan, 1986) : k t = D Re a Sc b (I.5)

Chapitre I : Etude Bibliographique o est un coefficient qui dpend des paramtres gomtriques, Re le nombre de Reynolds, Sc le nombre de Schmidt et D, le coefficient de diffusion. De cette faon, il a t montr que le coefficient kt est dautant plus lev que le nombre de Reynolds est grand. Laugmentation de la vitesse tangentielle de circulation aura donc pour effet, en limitant laccumulation de solut dans la couche limite, damliorer le flux de permat. Par ailleurs, lorsque la nature du produit traiter et la tenue des membranes le permettent, laugmentation de la temprature, en rduisant la viscosit du fluide et en augmentant la diffusion, a galement un effet favorable. I.1.2. Modle de rsistances en srie. Aucun des deux modles discuts prcdemment ne dcrit le comportement du flux avec la pression observ pendant un processus de filtration typique (rgime limit par la pression, puis par le transfert de masse). Cependant, par analogie avec le transfert de chaleur, une mthode tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 faisant intervenir des rsistances en sries peut tre utilise. Pour une membrane et une solution idale (eau pure), le flux de permat, J, est donn par :

J=

PTM p Rm

(I.6)

o J est le flux de permat (L.h-1.m-2), Rm est la rsistance la filtration de la membrane dtermine a partir de la permabilit de la membrane leau pure (m-1), PTM la pression transmembranaire (Pa) et
p

la viscosit dynamique du permat (Pa.s).

Dans une opration avec une solution relle, la rsistance de la membrane ne sera seulement quune petite partie de la rsistance totale puisque une rsistance due la couche de polarisation et au colmatage sera galement prsente (Cheryan, 1986). Au cours de la filtration, la prsence de soluts, rejets par la membrane et demeurant sa surface, gnre un colmatage responsable de la chute du flux. Ce colmatage se traduit par lajout dune rsistance RT (rsistance due au colmatage) dans lquation I.7 :

J=

PTM (Rm + RT )

I.7)

Cette composante RT peut se dcomposer en deux termes : un terme d au colmatage irrversible (RCI) et un second d au colmatage rversible d la polarisation de concentration (RCP). RCI sobtient aisment aprs lessai de filtration par la mesure de la permabilit hydraulique finale aprs le rinage leau de la membrane (quation I.8). Par diffrence, nous pourrons ainsi retrouver RCP.

Lp f =

1 p (Rm + RCI )

(I.8)

Chapitre I : Etude Bibliographique o Lpf est la permabilit hydraulique de la membrane (L.h-1.m-2.Pa-1) dtermin par un flux leau aprs lessai et rinage de la membrane, et p la viscosit dynamique du permat (Pa.s). I.1.3. Modle de la pression osmotique. Lors quun solut de petit taille est rejet par la membrane, il cre une diffrence de la pression osmotique, , la surface de la membrane qui diminue la pression motrice et lquation I.7 est remplace par (Cheryan, 1986; Clifton et al., 1984) :

J=

PTM (Rm + RT )

I.9

I.2. Mthodes de limitation du colmatage pour augmenter les performances de la membrane. Le colmatage est le facteur limitant dans toutes les applications de filtration membranaire. De manire gnrale, il se manifeste par une diminution du flux au cours du temps bien que tous tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 les paramtres, comme la pression, la temprature, et la concentration dans lalimentation, soient maintenus constants (Cheryan, 1986). La diminution du flux en filtration membranaire est le rsultat de laugmentation de la rsistance de la membrane cause de la formation de nouvelles rsistances. Le blocage de pores augmente la rsistance la filtration, pendant que la formation de la couche limite de concentration cre une rsistance additionnelle au flux de permat. Cest pour cela que le blocage de pores et la formation de la couche de polarisation de concentration sont considrs comme deux mcanismes de colmatage. Dautres facteurs, comme par exemple ladsorption en surface, le dpt de particules dans les pores de la membrane, affectent le colmatage de la membrane (Wakeman & Williams, 2002). Il existe deux types de colmatages possibles dans les procds membranaires : a) Le colmatage rversible : il est essentiellement d au dpt de matire et au phnomne de polarisation de concentration. Les soluts prsents dans la solution filtrer sont entrans sous laction de la force motrice de pression au voisinage de la membrane o se dveloppe un gradient de concentration. Le colmatage rversible se produit trs rapidement (en quelques secondes) et peut tre vit ou supprim avec une bonne slection des conditions opratoires, comme une vitesse leve dalimentation, du backpulsing (mthode pour retirer les particules qui ont t accumules dans les pores et sur la surface dune membrane par inversion de la pression transmembranaire pendant une fraction de seconde) ou laugmentation du taux de cisaillement (Brans et al., 2004). Laccumulation des cellules, de dbris de cellules et (ou) dautres particules rejets sur la surface de la membrane produisent la polarisation de concentration et elle est normalement rversible (Wakeman & Williams, 2002). 10

Chapitre I : Etude Bibliographique b) Le colmatage irrversible : il rsulte de phnomnes de natures diverses modifiant les proprits filtrantes de la membrane, comme par exemple : le dpt et ladsorption des particules dans les pores de la membrane (Wakeman & Williams, 2002). Le colmatage irrversible cause une lente diminution de flux au cours du temps conditions opratoires constantes (sur quelques heures) et ne peut tre supprim qu larrt du processus par un nettoyage chimique. Si le colmatage irrversible se prsente, la performance de la membrane diminue et dterminera aussi sa vie utile (Brans et al., 2004). La quantit de dpt sur la membrane doit tre minimise, car le flux et la slectivit de la sparation en sont affects Plusieurs tudes ont t effectues afin de limiter le colmatage de la membrane. Par la suite, nous exposons les diffrents mthodes de limitation de colmatage. I.2.1. Prtraitement de la solution dalimentation. Les effets du colmatage peuvent tre rduits par un prtraitement du fluide tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 dalimentation. Ces prtraitements peuvent consister en des procds physico-chimiques. Les prtraitements physiques normalement incluent la pr-filtration ou la centrifugation afin de retirer les matires en suspension qui pourraient obturer le module ou la membrane (Wakeman & Williams, 2002). Les procds chimiques comprennent lajustement du pH de la solution dalimentation afin que les molcules colmatantes ou collodales soient loin du point isolectrique, de sorte que la tendance former une couche colmatante soit rduite. Parmi les procds chimiques, figurent la prcipitation, la coagulation ou bien la floculation (Mietton & Ben Aim, 1992). I.2.2. Choix des matriaux membranaires. Le matriau membranaire a une influence importante sur le colmatage en ultra et nanofiltration, cause de la tendance quont certains matriaux adsorber des molcules plus rapidement que dautres. Bien que la membrane affecte ladsorption et la formation du dpt au dbut de la filtration, une fois que la couche limite de concentration est forme, tout effet de la membrane est annul jusquau nettoyage. Le choix adquat dun matriau de membrane peut permettre de diminuer les interactions entre les soluts et la surface membranaire (Wakeman & Williams, 2002). I.2.3. Cration dinstabilits. La polarisation de concentration et la formation de la couche limite de concentration peuvent tre contrles par laugmentation du cisaillement la surface de la membrane ou bien par lutilisation de promoteurs de turbulence (Wakeman & Williams, 2002). Des obstacles, des promoteurs de turbulence, et des inserts sont utiliss pour crer des instabilits, comme les

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Chapitre I : Etude Bibliographique tourbillons de Dean ou les micro turbulences. Un possible dsavantage de ces systmes est le problme de nettoyage, car des zones mortes sont ainsi gnres (Brans et al., 2004). Laugmentation du cisaillement est obtenue, dans les modules commercialement disponibles, avec un haut dbit dalimentation ou bien avec lutilisation des canaux dcoulement minces sous la surface de la membrane (Wakeman & Williams, 2002). Nous dtaillons ci-dessous les principales mthodes pour produire des instabilits. I.2.3.1. Promoteurs de turbulence. La Figure I.2 montre le schma dune membrane tubulaire o un filetage hlicodal concentrique a t insr. Linsert permet un dbit de fluide substantiel dans lespace annulaire. Le filetage en forme semi-circulaire pour permettre quenviron la moiti du flux passe au long la trajectoire hlicodal. Des tourbillons de Dean sont superposs sur lcoulement en hlice ; cela cause un mlange radial dans le flux. Ce systme a t brevet par Bellhouse en 1994. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Bien que les inserts dans le canal dalimentation augmentent la vitesse dalimentation et aussi le cisaillement, ils produisent des coulements secondaires ou instabilits. Malgr des flux entre 50 300% plus levs que dans la filtration conventionnelle, lutilisation de ces inserts nest pas trs communment utilise dans lindustrie (Wakeman & Williams, 2002). Cependant, ils ont t utiliss lors de prtraitement deau par microfiltration destine aux procds de dessalement deau de mer (Ahmad & Mariadas, 2004) ou lors de traitement deau par bioracteur membrane (Xu et al., 2003) et pour la microfiltration de lait crm (Krstic et al., 2002; 2004)

Figure I.2. Vis gnratrice de vortex dans une membrane tubulaire (Bellhouse, 1994). I.2.3.2. Backflushing et backpulsing. Le backpulsing et le backflushing sont efficaces pour supprimer le colmatage de la surface des membranes. Dans ces procdures, le permat est forc par une contre-pression retourner vers le rtentat afin de retirer les soluts accumuls dans les pores de la membrane ou sur la surface de la membrane. Les dpts sur la membrane sont soulevs et vacus par lcoulement. On peut aussi injecter de lair ou de leau pour provoquer cette retrofiltration (Salladini et al., 2007). La diffrence fondamentale entre le backpulsing et le backflushing est la force et la dure des retrofiltrations pour retirer les dpts accumuls sur la membrane. En gnral dans le backflushing, lcoulement inverse a lieu pendant quelques secondes des intervalles de plusieurs

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Chapitre I : Etude Bibliographique minutes, tandis que le backpulsing a lieu frquences levs et le pulsations sont appliques sur un temps trs court (< 1 s) (Ning Koh et al., 2008). Lefficacit des pulses dpend de leurs frquences, de leur dure et du profil de pression. Elle est bien videmment, trs dpendante de la composition du fluide considr (Brans et al., 2004). I.2.3.3. Ecoulements pulss. Cette technique consiste superposer, avec un piston, des pulsations de dbit et de pressions au dbit de la pompe alimentant le module de filtration, lintrieur de membranes tubulaires. Les pulsations de dbit perturbent la formation de la couche de polarisation la membrane, tandis que les pulsations de pression crent un effet de backpulse. Les oscillations et les coulements instables peuvent tre obtenus par lintroduction des pulsations dans lalimentation ou dans le permat (Wakeman & Williams, 2002). Cette technique a t tudie dans diverses applications de microfiltration comme par tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 exemple : dans la clarification de vins rouges (Jaffrin et al., 1994) et de bire (Gan et al., 1997; Gan, 2001) et dans la microfiltration de levures (Howell et al., 1993). Les coulements avec pulsations sont difficiles extrapoler lchelle industrielle, car il faut des pistons de grand volume, sinon les ondes de pression sont absorbes et deviennent moins effectives avec la distance (Brans et al., 2004). I.2.4. Champs lectriques. Les champs lectriques pulss ou constants ont t utiliss pour amliorer la filtration membranaire. Cette technique est efficace pour diminuer la formation de la couche de gel et pour augmenter le flux de filtration (Yukawa et al., 1983). Lapplication dun champ lectrique sur la surface de la membrane peut potentiellement soulever les particules de la surface de la membrane et permet que le flux dalimentation les vacue. En mme temps, llectro-osmose peut permettre daugmenter le flux travers de la membrane. Llectrophorse et llectro-osmose sont souvent un rsultat de lapplication de champs lectriques. Llectrophorse est base sur un mouvement des particules ou despces charges (comme les protines), par exemple : la migration des particules travers un fluide relativement stationnaire. Pour sa part, llectro-osmose a un rapport avec le mouvement du fluide, comme par exemple la permeation dun fluide travers un milieu poreux (membrane)(Jagannadh & Muralidhara, 1996). Les champs lectriques ont t appliqus dans la filtration des solutions de protines (Yukawa et al., 1983; Mameri et al., 2001), lultrafiltration de jus de fruits (Sarkar et al., 2008), la sparation des microorganismes des protines par microfiltration (Chuang et al., 2008) et lultrafiltration pour la production denzymes (Enevoldsen et al., 2007).

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Chapitre I : Etude Bibliographique Il est important de rappeler que, dans le cas de la filtration du lait, les ractions chimiques des lectrodes peuvent conduire une contamination, par des ions mtalliques et/ou composants oxyds. La charge lectrique des protines peut tre influence par le pH, et bien que lajustement du pH du lait ne soit pas conseill, cette mthode pourrait tre utilise dans la purification des protines de srum partir de lactosrum (Brans et al., 2004). I.2.5. Ultrasons. Lutilisation des ultrasons en micro et ultrafiltration a t introduite par Pirkonen (2001). Le passage des ultrasons travers une suspension peut causer divers phnomnes, incluant la dispersion de particules, la rduction de la viscosit, changements dans les proprits de surface de la particule et des cavitations. Bien que cette dispersion, qui pourrait potentiellement augmenter le colmatage, du fait de la formation de dpts qui augmentent la rsistance du colmatage, il est gnralement observ que la combinaison de cavitations et du tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 mouvement relatif entre les phases solides et liquides conjointement avec laction du flux tangentiel est responsable de lamlioration de la filtration (Wakeman & Williams, 2002). Les ultrasons ont t utiliss dans le traitement des effluents (Sawyer et al., 1998; Shu et al., 2007; Dewil et al., 2006) et dans lultrafiltration de lactosrum (Muthukumaran et al., 2005). Cependant, ces ondes ultrasonores ne sont pas favorables au lait, car les cavitations (onde de choc de par la formation de bulle de vapeur) pourraient causer la dnaturation des protines (Brans et al., 2004) et avoir des consquences sur la membrane. I.2.6. Filtration dynamique La filtration dynamique est galement une solution efficace pour augmenter les flux de permat. Elle consiste crer un mouvement relatif entre la membrane et le carter afin de produire des taux de cisaillement levs (Bouzerar et al., 2000b). Le cisaillement peut tre cr de diffrentes manires soit par des membranes tournantes, cylindres ou disques, soit par rotors ou disques tournants (Wakeman & Williams, 2002). Lavantage principal de la filtration dynamique par rapport la filtration tangentielle est quelle permet de travailler faible pression transmembranaire et taux de cisaillements levs, une combinaison que limite la croissance et la compression de la couche de gel (Bouzerar et al., 2000b). Dans la suite, nous exposons brivement les diffrents modules de filtration dynamique existants. Dans le chapitre II Matriels et Mthodes , nous dcrirons plus en dtail les fonctionnements du VSEP, du module disque rotatif et du systme MSD, qui ont t utiliss dans le cadre de cette tude.

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Chapitre I : Etude Bibliographique I.2.6.1. Systmes membrane vibrante I.2.6.1.1. VSEP (Vibratory Shear Enhanced Processing) Conu par la socit New Logic (Emeryville, Californie, Etats-Unis) en 1992, ce module consiste en un carter oscillant autour dun arbre de torsion qui lui transmet une amplitude doscillation maximum denviron 3 cm (Figure I.3). Le VSEP gnre donc un mouvement relatif du fluide au niveau de la surface membranaire qui cre un cisaillement trs lev limitant la formation dun gteau ou de la polarisation de concentration. Le module industriel peut travailler jusqu des pressions denviron 70 bar et des tempratures de 80C.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure I.3. Principe de fonctionnement du VSEP. Le carter de filtration peut, selon le modle, contenir une ou plusieurs membranes (Figure I.4). Ainsi, la srie L (module de laboratoire) contient une unique membrane de 500 cm2, ce type de module est utilis en premire approche sur des problmes de sparation pour des tudes paramtriques. Le pilote industriel (srie LP) permet datteindre des surfaces de 1,5 m2 20 m2 et donc daborder une chelle prindustrielle et dextrapoler les rsultats obtenus sur le module de laboratoire. La srie i (module industriel) est disponible en trois versions : i15 (14 20 m2), i36 (40 55 m2), et i84 (100 140 m2). Chaque module noccupe quune faible surface au sol. Les avantages majeurs prsents par le constructeur propos de ce systme sont des possibilits accrues, du fait de ses caractristiques anti-colmatantes, de traitement de produits hautement chargs ou visqueux difficilement traitables par les techniques classiques, un faible cot opratoire (la puissance consomme par les vibrations, sur le plus grand module industriel est denviron 12 kW) et une compacit importante (Frappart, 2006).

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Chapitre I : Etude Bibliographique

a) Figure I.4. VSEP a) srie i84 et b) srie L.

b)

Le systme vibrant a t utilis dans plusieurs domaines comme llimination de composs naturels non organiques dans leau (Shi & Benjamin, 2008), dans le traitement tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 deffluents de dcharges (Zouboulis & Petala, 2008). En 2007, le VSEP a t utilis pour premire fois en Europe pour le traitement anarobique du lisier de porc. Le systme a t install dans une grande ferme dlevage des porcs en Belgique (Anonyme, 2007). Des recherches sur le traitement de divers produits laitiers ont t ralises au laboratoire en utilisant des membranes de MF, UF, NF et OI (Al-Akoum et al., 2002a; Jaffrin et al., 2004; Akoum et al., 2005; Frappart et al., 2008). I.2.6.1.2. Systme PallSep. Pour les applications dans lagroalimentaire, une licence dexploitation a t cde par New Logic la socit Pall, qui a donc dvelopp un systme similaire au VSEP. La surface filtrante du PallSep peut atteindre 40 m2. Ce systme a t utilis pour la clarification de bire (Postlethwaite et al., 2004). I.2.6.2. Systmes disque rotatif. Plusieurs systmes de ce type sont commercialiss : I.2.6.2.1. Dynamic Cross Flow Filter DYNO. Ce systme est commercialis par la socit Bokela (Allemagne). Il est constitu de disques tournant en face de membranes fixes. La surface membranaire du module est variable entre 0.13 12 m2. Les principales caractristiques de ce systme sont des PTM pouvant atteindre 6 bar, des tempratures admissibles jusqu 200C et lutilisation de membranes polymres, cramiques ou mtalliques avec des diamtres de pores allant de 1 0,01 m (Bott et al., 2000). I.2.6.2.2. Cross Rotational Membrane Filtration OPTIFILTER CR.

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Chapitre I : Etude Bibliographique Conu par la socit Metso Paper (Finlande), il est constitu de rotors lames tournant au-dessus de membranes fixes dont le diamtre peut varier de 50 100 cm. La surface totale de ces membranes peut atteindre 104 m2 selon le modle. La vitesse de rotation permet dobtenir des vitesses tangentielles de lordre de 10 15 m s-1. Ce systme est utilise essentiellement en UF et il peut travailler jusqu tempratures de 80C et des pressions de lordre de quelques bars. I.2.6.2.3. High Shear Rotary Filter SPINTEK. Conu par la socit Spintek (Etats-Unis), cest un module plusieurs tages. Les membranes sont solidaires de larbre de rotation et donc mobiles. Il peut recevoir soit des membranes cramiques (pores de 0,07 3 m), soit des tamis en acier inoxydable (1 10 m) pour des consommations de 1,5 18,75 kW. Plusieurs surfaces sont disponibles : 0,09 0,28 m2 pour un module de laboratoire et 2,3 m2 pour le pilote industriel. I.2.6.2.4. Dynamic Membrane Filter DMF. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Ce systme a t brevet par la Socit Pall. Cest un module en inox strilisable, le rendant adapt la sparation et au traitement des suspensions pharmaceutiques biologiques. Les membranes taient fixes et les disques taient en acier inoxydable sans ailettes. Il nest plus commercialis lheure actuelle. I.2.6.2.5. RVFTM. Ce systme, conu par la socit Profiltra (France), permet lagitation du fluide lintrieur du module par la rotation dune hlice. De chaque ct de cette hlice sont disposes deux membranes stationnaires 3 mm de distance. Des pilotes de laboratoire de 0,03 0,05 m2 ainsi que des pilotes industriels (1 4 m2) ont t proposs. Ce systme nest plus commercialis. I.2.6.2.6. Multi Shaft Disk MSD. Ce systme a t propos par la socit Westfalia Separator (Allemagne). Il est compos lchelle pilote de deux arbres en rotation contenant chacun 6 membranes de filtration en cramique de 9 cm de diamtre et se chevauchant. Le module industriel contenant 8 arbres au total avec des membranes cramiques de 30 cm de diamtre, atteint 80 m2 de surface membranaire. La Figure I.5 montre les deux modules. Dans le chapitre II Matriels et Mthodes nous aborderons plus en dtail son fonctionnement.

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Chapitre I : Etude Bibliographique

(a)

(b)

Figure I.5. Systme MSD (a) chelle pilote (b) chelle industrielle. I.2.6.2.7. ROTOSTREAM. Ce systme commercialis par la socit Buss-SMS-Canzler Gmbh (Allemagne) suit le mme principe que le MSD avec des membranes cramiques tournantes. Le systme est compos tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 de plusieurs arbres, situe dans un mme plan. Il peut atteindre 154 m2 et il existe galement chelle pilote pour des surfaces comprises entre 0,1 et 1 m2. I.2.6.2.8. Single Shaft Disk Filter SSDF. Ce systme est commercialis par la socit Novoflow Gmbh (Allemagne). Il ne comporte que des modules un seul arbre ayant des surfaces pouvant atteindre 10 m2. Les membranes utilises sont gnralement des membranes cramiques et le systme est donn pour avoir des consommations nergtiques comprises entre 0,12 et 0,17 kW h-1. Les modules de 10 m2 peuvent tre coupls pour augmenter la surface. Novoflow offre 3 types diffrents des modules un seul arbre : a) Disque rotatif compact (CRD), dans ce systme laxe du moteur est creux pour vacuer le filtrt afin de minimiser la taille. Ils sont disponibles partir dune surface membranaire de 0,1 m2 (3 disques de 152 mm de diamtre). (Figure I.6a) b) Single Shaft Disk Filter (SSDF)-312: Ce systme est compatible avec les membranes cramiques plus grandes construites par Novoflow (312 mm de diamtre). Entre 75 et100 disques (10-15 m2 surface membranaire) sont monts dans un seul module. (Figure I.6b). c) Single Shaft Disk Filter (SSDF)-500: Dans ce systme 75 disques ou 25 m2 de surface membranaire peuvent tre monts sur un seul module (Figure I.6c) (Liebermann, 2008).

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Chapitre I : Etude Bibliographique

a) SSDF-500.

b)

c)

Figure I.6. Systme membranes rotatives de Novoflow a) CRD ; b) SSDF-312 et c)

I.2.6.2.9. Systmes cylindre rotatif. Ces systmes se composent dune membrane cylindrique tournant dans un second cylindre co-axial fixe, pouvant aussi recevoir une membrane. Le principe de ce systme est la cration de tourbillons de Taylor dans lcoulement de Couette, qui augmentent le cisaillement. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 I.2.6.2.10. Systme CMS (Centrifugal Membrane Separation). Dans ce systme, la membrane est localise la priphrie dun rotor centrifuge. Il sagit dune filtration frontale, cre par la force centrifuge. La pression transmembranaire est gnre par la rotation du rotor. La solution dalimentation entre dans le rotor centrifuge par laxe et scoule vers lextrieur jusqu la priphrie. Le permat est recueilli la priphrie, tandis que le rtentat scoule par larbre creux. La rotation du rotor modifie la circulation du fluide dans llment contenant la membrane du fait de lacclration centripte et des forces de Coriolis (Bergena et al., 2003). Il en rsulte donc des mouvements de fluide secondaires permettant de contrarier la concentration de polarisation et ainsi de rduire le colmatage de la membrane. La Figure I.7 montre un module de laboratoire du CMS.

Figure I.7. Module CMS utilise par Pharoah et al., (2000). Nous dcrivons maintenant le lait auquel cette thse est consacre.

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Chapitre I : Etude Bibliographique I.3. Le lait et ses protines. Le lait est constitu deau, de lipides, de glucides, de protines, de sels, et dune longue liste de constituants divers (Jennes, 1999). Dun point de vue physicochimique, le lait est un fluide trs complexe. Quantitativement, la majorit de la masse du lait est une solution aqueuse de lactose, sels organiques et inorganiques, vitamines et autres petites molcules. Dans cette solution aqueuse, on trouve galement des protines disperses de deux types : des protines (du lactosrum) solubles et des agrgats collodaux (micelles de casines), de diamtre compris entre 50 600 nm. Les lipides (dont les globules ont un diamtre compris entre 0,1 et 20 m) existent dans un tat mulsifi dans cette solution aqueuse (Fox & McSweeney, 1998). La composition typique du lait est dcrite dans le Tableau I.1. Le lait et ses sous-produits sont des composants importants de lalimentation humaine. Ils tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 pourvoient environ 30% des protines et lipides alimentaires et environ 80% du calcium ncessaire dans lalimentation (Fox, 2003). Lindustrie laitire a une grande importance dans lUnion Europenne (UE) car le lait est produit dans tous les pays membres de lUE sans exception. Le lait est le premier secteur productif en terme de valeur, reprsentant environ 14% de la production agricole. En 2004, la production de lait a rapport environ 43 milliards deuros aux producteurs. Le chiffre daffaire du secteur de lindustrie laitire est de 117 milliards deuros. Lindustrie laitire dans lUE est clbre pour la qualit de ses produits laitiers, et pas seulement pour ses fameux fromages mais aussi pour sa grande varit de yaourts, crmes, glaces, et dautres produits forte valeur ajoute. LUE est un acteur important dans le march mondial et lexportateur numro un de plusieurs produits laitiers.

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Chapitre I : Etude Bibliographique Tableau I.1. Composition moyenne du lait bovin : concentration et distribution de taille. (Source : Walstra et al., 1999 cit par Brans et al., (2004)). 1 kDa = 1 kg mol-1 CONCENTRATION DANS LE LAIT ENTIER (%) Eau Matire grasse Casine (en micelles) Protines du lactosrum -Lactalbumine -Lactoglobuline BSA Proteose-peptone Immunoglobulines Lactoferrine Transferrine Autres Lactose Substances minrales Acides organiques Autres 87,1 4,0 2,6 0,7 0,12 0,32 0,04 0,08 0,08 0,01 0,01 0,04 4,6 0,7 0,17 0,15 DISTRIBUTION DE TAILLE (OU POIDS MOLECULAIRES) 0,1-1,5 m, moyen 3,4 m 20-300 nm, moyen 110 nm 3-6 nm 14 kDa 18 kDa (monomre) 66 kDa 4-40 kDa 150-900 kDa 86 kDa 76 kDa 0,35 kDa

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Les applications des produits laitiers se dveloppent constamment. La recherche et linnovation apportent de nouvelles technologies, des formulations pour de nouveaux aliments, lamlioration de la composition des aliments fonctionnels (EC, 2006). La Figure I.8 montre le pourcentage de lait utilis dans les diffrentes catgories de produits laitiers dans lUE. Les diverses utilisations du lait comme matire premire dcoulent des proprits chimiques et physicochimiques de ses composants. Les composants principaux du lait peuvent tre modifis par des mthodes enzymatiques, chimiques et (ou) physiques, ce qui permet la production des nouveaux produits.

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Chapitre I : Etude Bibliographique

Figure I.8. Rpartition en pourcentage des produits laitiers utiliss dans lUE (prvision 2006). Source : European Commission (2006). Ces pourcentages sont bass sur la masse totale de tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 protines et de lipides. Lindustrialisation et la fonctionnalisation du lait et de ses sous-produits sont dtermines par les proprits et les concentrations de ses composants principaux : protines, lipides, lactose et sels (Fox, 2003). Les proprits fonctionnelles des protines dans les aliments sont lies leurs caractristiques structurelles et physicochimiques. Une comprhension fondamentale des proprits physiques, chimiques et fonctionnelles des protines et des changements que les protines endurent pendant leur traitement est essentielle si le rle des protines dans les aliments veut tre amlior et/ou si lon souhaite accrotre lutilisation, dans les produits alimentaires traditionnels, de celles qui ne sont que trs peu utilises, lheure actuelle, comme les protines de lactosrum ou celles des plantes (dorigine vgtale). La stabilit des protines est trs importante dans la dtermination de leur fonctionnalit dans les aliments. En effet, une proprit fonctionnelle particulire est souvent gouverne par une conformation spcifique et la moindre altration de cet tat affecte sa fonctionnalit. La connaissance de ltat de dnaturation des protines est une condition ncessaire pour exprimer leur proprit fonctionnelle. Les changements de conformation des protines, entranes par la dnaturation affectent la qualit fonctionnelle et nutritionnelle des aliments lors de ce traitement. Il est donc important que linterrelation entre la dnaturation des protines et leur fonctionnalit soit tablie (Damodaran & Paraf, 1997).

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Chapitre I : Etude Bibliographique I.3.1. Proprits fonctionnelles des protines du lait. I.3.1.1. Casines. Les casines sont trs bien adaptes la nourriture des nouveaux ns. Leurs structures molculaires ne leur confrent pas dactivit enzymatique (Damodaran & Paraf, 1997). Elles constituent aussi la matire premire des fromages. Environ 95% des casines dans le lait existent sous forme collodale, appels micelles. En base sche, les micelles de casines contiennent 94% de protines, et 6% despces de faible poids molculaire, et qui consistent en calcium, magnsium, phosphate et citrate. Les micelles sont hautement hydrates, elles contiennent environ 2,0 g dH2O par g de protine. La microscopie lectronique montre que les micelles de casines ont une forme gnralement sphrique, avec des diamtres entre 50 500 nm (la moyenne tant de 200 nm) et des masses comprises entre 106 109 Da (avec une moyenne de 108 Da). Il y a de 1014 1016 tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 micelles par ml du lait. Ces micelles sont trs stables haute temprature, elles ne coagulent quaprs un chauffage 140C pendant 15 20 min au pH normal du lait. De telles coagulations sont dues aux changements principaux qui se prsentent quand le lait est expos un tel traitement thermique (diminution du pH cause de la pyrolyse du lactose en divers acides, dphosphorylation de la casine, clivage de la -casine, dnaturation des protines du lactosrum, etc). Les casines sont stables la compaction, c'est--dire quelles peuvent sdimenter par ultracentrifugation mais sont rapidement disperses par agitation. Elles sont stables lhomognisation industrielle, mais elles changent lgrement aux pressions trs hautes (500 MPa). Elles sont stables hautes concentrations de Ca2+, jusqu 200 mM une temprature de 50C. Par contre, les casines sagrgent et prcipitent quand le pH est ajust son point isolectrique (pH 4,6 20C). La prcipitation cette valeur de pH est dpendante de la temprature. Elle nintervient pas des tempratures infrieures 5-8C et se prsente sur une large gamme de pH, comprise entre 3,0 et 5,5, hautes tempratures (environ 70C). Les micelles sont dstabilises par laction de lthanol (40%) pH 6,7 et concentration plus faible si le pH est rduit. Elles peuvent ltre galement par conglation (cryodstabilisation) cause dune diminution de pH et une augmentation de la concentration de calcium dans la phase noncongele du lait (Fox & McSweeney, 1998). I.3.1.1.1. Proprits mulsifiantes. Parmi les protines alimentaires, les casines solubles sont particulirement distingues pour leurs excellentes proprits mulsifiantes. Toutes les casines, except peut tre la -casine, montrant une forte tendance sadsorber aux interfaces air/eau et huile/eau, et sont ainsi

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Chapitre I : Etude Bibliographique utilises dans la fabrication dmulsions stables pour les sauces et crmes pour caf, mais galement dans des produits tels que les crmes de liqueur et produits pour enfants, o la stabilisation long terme est essentielle. Les proprits mulsifiantes des casines proviennent de la structure mme de la protine : celle-ci est amphipathique (avec un cot hydrophobe et un cot hydrophile), juges dans la base de sa structure primaire. Elles possdent une large rgion hydrophobe permettant de lier rapidement des structures hydrophobiques, comme les interfaces huile/eau (Damodaran & Paraf, 1997). Sa proprit amphipathique est due ce que les casines nont pas une structure secondaire ni tertiaire bien dfinie (Fox & McSweeney, 1998). I.3.1.1.2. Proprits moussantes. Par rapport aux autres protines du lait (comme celles de lactosrum), lutilisation des casines assurent aux mousses une stabilit moindre. En effet, les casines sadsorbent bien dans tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 les interfaces air-eau, mais quand elles ragissent entre elles, les casines ne forment pas de fortes couches lamellaires entre les bulles, caractristique principale dune mousse stable. De grands volumes de mousses peuvent tre forms, mais leur stabilit demeure trop faible, et collapse court terme. Ce phnomne est d aux proprits hydrophobes/hydrophiles des casines. Comme nous lavons voqu pour les mulsions, les casines sadsorbent fortement sur une interface air/eau quand grce leurs fractions hydrophyliques saillantes dans la solution gnrant des interactions telles que la stabilit interfaciale sen trouve affaiblie. Cest la raison pour laquelle les casines ne sont pas utilises comme agents formateurs de mousses (Damodaran & Paraf, 1997). I.3.1.1.3. Coagulation de casines et micelles de casines. Les micelles de casines, peuvent tre coagules, prcipites ou former un gel par laction dacide (prcipitation isolectrique), dthanol, ou denzymes protolytiques. La coagulation et glification sont la base de la formation dune grande varit de produits, comme les fromages, yaourts et fromage blanc. Par contre les casines ne forment pas de gels forts par la simple action de chaleur, comme peuvent le faire les protines du lactosrum, et cest pour cela quelles sont essentiellement utilises pour modifier la viscosit du fait de ses structures tendues et de leur capacit de rtention deau, plutt que comme agents glifiants (Damodaran & Paraf, 1997). I.3.1.2. Protines du lactosrum. Le lactosrum qui est un sous-produit de lindustrie fromagre est utilis dans lalimentation animale et comme source des protines pour la nutrition humaine. On peut distinguer deux types de lactosrum :

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Chapitre I : Etude Bibliographique a) le lactosrum doux, qui provient de la coagulation du lait pH 6,6 (comme par exemple, lors de la fabrication du fromage cheddar ou emmental) b) le lactosrum acide qui sobtient partir de la production de fromage pte molle (par exemple, fromage en crme, Camembert, ou petit Suisse), aprs la coagulation acide du lait, et, dans le cas du fromage blanc (Cottage cheese), avec le chauffage du caill. Le lactosrum contient diverses protines ayant, par consquent, plusieurs proprits fonctionnelles, et donc de multiples utilisations possibles. Les protines principales de ce lactosrum sont la -Lactoglobuline et l-Lactalbumine. Elles reprsentent environ 70% du total des protines du lactosrum et sont responsables de lhydratation, glification, et proprits de surface active (proprits mulsifiantes et de formation de mousse) des ingrdients base de protines du lactosrum. Ces protines sont utilises galement pour leurs proprits nutritionnelles et thrapeutiques dans les rgimes basses calories et dans la nutrition entrale en tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 soins intensifs (Damodaran & Paraf, 1997). I.3.1.2.1. -Lactoglobuline (-Lg) La -Lactoglobuline (-Lg) reprsente environ 57% des protines du lactosrum. Sa structure primaire consiste en 162 aminoacides et son poids molculaire est denviron 18,3 kDa. Parmi sept variantes gntiques, les variantes A et B sont les plus abondantes, elles se diffrencient lune de lautre par deux rsidus daminoacides. Les analyses cristallographiques ont montr que la -Lg existe sous forme globulaire, avec groupes hydrophobiques et sulfure (SH) stabilisants situs lintrieur. La conformation et la polymrisation de la -Lg sont sensibles au pH et la temprature. Dans une gamme de pH entre 5,1 et 7,5, la molcule existe comme un dimre denviron 36,7 kDa. En condition acide, spcialement au-dessous dun pH de 3,0, les dimres se dissocient en monomres cause des forces leves de rpulsion lectrostatique, mais lassociation nest pas accompagne par des changements dans la forme molculaire ou dans la conformation des monomres. La dissociation se prsente aussi en condition alcaline (pH >8,0). La molcule souffre de changements de conformation rversibles, elle expose ses groupes carboxyles et thiol, lesquels deviennent plus ractifs. Dans la gamme de pH entre 3,5-5,2, les dimres ttramrisent et forment de octamres denviron 147 kDa. La -Lg prsente des ractions de dnaturation dpendantes du temps et de la temprature, ce qui mne une expansion molculaire gnrale des groupes SH internes, des groupes hydrophobiques et epsilon amine (-NH2) (Prez-Gago & Krochta, 2002). La -Lg a dexcellentes proprits glifiantes avec la temprature et des proprits moussantes et demeure une bonne alternative, qui plus est bon march, lalbumine duf dans

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Chapitre I : Etude Bibliographique certaines applications alimentaires. Elle est hautement soluble dans une grande gamme de pH, et particulirement pH faible (97% pH 3.0) (Smithers et al., 1996). Des fractions enrichies en -Lg ont t utilises dans la fabrication de produits base de viande et poisson, aliments formuls, boissons fortifies avec protines ou comme remplaant du blanc duf (Huffman & Harper, 1999). I.3.1.2.2. -Lactalbumine (-La) L-Lactalbumine (-La) est la deuxime plus abondante protine du lactosrum. Elle reprsente environ 19% de lensemble des protines du lactosrum. Cest une protine globulaire avec un poids molculaire de 14 kDa qui comporte 123 aminoacides et quatre ponts disulfures (S-S). A pH =4, l-La connat des changements de conformation. La molcule perd le Ca2+ lequel est fortement li hauts pH. A des pH compris entre 4 et 5, la protine se prsente sous tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 deux formes avec diffrentes stabilits thermiques. A pH 6,5, et 62C, l-La commence se dplier, mais le refroidissement permet un retour la configuration initiale. Par contre, cette rversibilit se perd si les ponts disulfures initiaux sont dtruits (Prez-Gago & Krochta, 2002). La fonction biologique de l-La est de supporter la biosynthse du lactose, laquelle est une source dnergie importante pour les nouveaux-ns. A pH 4,0, l -La se dplie et elle peut tre digre par la pepsine de lestomac (de Wit, 1998). Lintrt commercial principal dans la production de protines de lactosrum enrichies en -La provient du fait que cette protine est la protine principalement prsente dans le lait maternel (Huffman & Harper, 1999). La valeur nutritionnelle de l-La bovine est trs haute, 63% daminoacides prsents sont essentiels, ladditionner aux formules pour enfants serait une avantage certain dans lapport nutritionnel. De plus, la composition protique des formules ainsi modifies deviendrait proche du lait humain. Une bonne formulation en -La avec dautres ingrdients rduirait galement la concentration en -Lg allergnique (Chatterton et al., 1998). I.3.1.2.3. Srum dAlbumine Bovine. Le srum dalbumine bovine (BSA) est une longue protine globulaire avec 582 rsidus daminoacides et un poids molculaire de 66 kDa. Cette protine est identique lalbumine du sang. Elle reprsente environ 7% des protines du lactosrum. La BSA contient 17 pont disulfures et un groupe thiol libre, ce qui la rend trs structure. Elle peut lier diffrents ligands comme les acides gras libres, dautres lipides, et armes (molcules volatiles), lesquels la stabilisent contre la dnaturation thermique (Prez-Gago & Krochta, 2002). Sa liaison avec des acides gras insolubles permet leur transport dans le sang. Cest galement une source importante dans la production du glutathion dans le foie, un peptide qui

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Chapitre I : Etude Bibliographique pourrait avoir une activit de facilitation immunitaire pour les patients atteints par le VIH (de Wit, 1998). I.3.1.2.4. Immunoglobulines Les immunoglobulines forment une famille htrogne de glycoprotines de 100-148 kDa ayant des proprits danticorps. On pense quelles se dnaturent temprature plus haute que la -Lg et l-La. Elles sont dautant plus sensibles la temprature en prsence de BSA, ce qui est probablement d linteraction avec le groupe thiol libre (Damodaran & Paraf, 1997). Les produits enrichis avec des immunoglobulines ont t utiliss pour favoriser les dfenses immunitaires, et diverses tudes ont montr que lingestion dimmunoglobulines partir du colostrum de bovins immuniss peut prvenir des infections par des rotavirus et par Escherichia Coli enterotoxinogne chez les enfants et chez les adultes (Huffman & Harper, 1999). I.3.1.2.5. Lactoferrine tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 La lactoferrine est une mtalloprotine qui a un poids molculaire de 80-92 kDa, elle se compose de 703 rsidus daminoacides et 16 ponts disulfures et une mole de cation Fe3+. A cause de son haut point isolectrique, elle forme un complexe avec la BSA ou la -Lg. Du fait de la prsence du fer, elle a une haute rsistance la dnaturation thermique et possde des proprits antibactriennes similaires celles du lysozyme et de la lactoperoxydase (Damodaran & Paraf, 1997). La lactoferrine se trouve en faible concentration dans le lactosrum (50 150 mg/ml), elle a des activits bactriostatique et bactricide en face dun grand nombre de microorganismes, incluant ceux responsables des infections de gastroentrites, des empoisonnements alimentaires, de la listriose, et des mastites. Les domaines dapplications pour cette protine sont spcialement les formulations dittiques, les agents de prservation naturels, la pharmaceutique et mme les produits de soin personnel comme le dentifrice antibactrien et le rince-bouche (Smithers et al., 1996). La lactoferrine a aussi t utilise en dittique enfantine et animale et elle a quelques applications anticarcinognes. Quelques investigations suggrent quelle pourrait avoir des proprits dimmunomodulation travers lamlioration de lactivit de limmunoglobuline A scrtoire (Huffman & Harper, 1999). I.4. Applications des procds membranaires dans lindustrie laitire. La fonctionnalit des divers composants du lait pourrait tre utilise dune faon plus efficace, si ceux-ci taient disponibles individuellement. Les fractions des composants du lait permettent de maintenir une qualit constante des produits et le dveloppement des nouveaux produits, comme par exemple des films de protection comestibles et des peptides bioactifs. Ainsi, 27

Chapitre I : Etude Bibliographique le fractionnement du lait conduira des utilisations de plus en plus diverses. De plus, travailler avec des produits concentrs peut rduire significativement la consommation deau, donnant ainsi des avantages conomiques et environnementaux non ngligeable lors du transport, notamment. La technologie membranaire parat tre un choix logique pour le fractionnement de lait puisque, comme nous avons pu le voir, les composants du lait pourraient tre spars suivant leur taille. Cependant, cause de cette large distribution de taille des soluts (1 nm-20 m), des fortes concentrations de composants disperss (13% poids) et de sa variabilit naturelle, le lait demeure un fluide alimentaire complexe rendant son fractionnement membranaire tout aussi difficile. Les procds membranaires classiques en industrie laitire, bien que largement prsents, rencontrent un problme majeur : le colmatage. Celui-ci cause de fortes rductions de flux et :ou tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 ncessitent des consommations nergtiques importantes cause des hautes vitesses ncessaires pour le limiter. La slectivit est un paramtre important dans le fractionnement de lait, et elle va tre influence de manire non ngligeable par ce colmatage. Plusieurs facteurs sont importants afin dobtenir une bonne combinaison de transmission et rtention des soluts. Premirement, cause de la non uniformit de la taille de pores de la membrane, certains composants qui devraient tre retenues par la membrane passent travers elle par les pores les plus grands, et inversement, les pores plus petits retiennent des composants qui devraient tre transmis. Deuximement, il serait important que les conditions du processus soient semblables sur toutes les zones membranaires. Cela a conduit, en microfiltration, au dveloppement du concept de pression transmembranaire uniforme (PTMU), qui maintient une pression transmembranaire constante sur toute la longueur du module membranaire en appliquant un dbit identique ct permat gnrant une perte de charge identique celle conscutive la circulation de la solution dalimentation. Des membranes porosit variable obtiennent le mme effet sans recirculation du permat, ce sont : les membranes Isoflux (Socit TAMI) et les membranes Membralox Gradient Porosity gradient de porosit (GP) (Socit des Cramiques Techniques-SCT) (Brans et al., 2004). Les membranes Isoflux et GP prsentent une dcroissance de leur rsistance dans le sens de lcoulement afin dassurer un flux constant, malgr la chute de la pression transmembranaire. Pour les membranes GP, la contre-pression requise ct permat est obtenue par une variation continue de la porosit du support cramique de la membrane, et pour les

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Chapitre I : Etude Bibliographique membranes Isoflux cest une rduction continue de lpaisseur de la membrane qui permet dobtenir une PTMU. Dans les deux cas prcdents ces membranes sont utilises dans des applications bien dfinies, pour des flux et slectivits prcis (Saboya & Maubois, 2000). Lintroduction des membranes cramiques dans le cadre du concept PTMU a permis lapplication commerciale des membranes dans lindustrie pour la rduction de bactries et de spores. Troisimement, le colmatage en profondeur conduit une rduction effective de la taille des pores et par consquent des rtentions diffrentes, de mme que la formation de la couche polarisation ou gel sur la membrane va retenir les petites particules qui devraient passer au travers de cette membrane. Le dveloppement des nouvelles membranes avec une distribution de taille de pores plus homogne, comme les membranes cramiques asymtriques, les microsieves de silicone et les tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 microfiltres de mtal combins avec des conditions optimales de processus, pourraient conduire un fractionnement complet du lait lchelle industrielle (Brans et al., 2004). I.4.1. Procds membranaires pour le fractionnement du lait. Comme nous avons pu lobserver dans le Tableau I.1, le lait prsente un large ventail de soluts ayant des tailles trs diverses rendant son fractionnement par des techniques membranaires trs intressant. Un expos des procds dj disponibles et de ceux ncessitant un dveloppement est prsent dans la section suivante. I.4.1.1. Sparation et fractionnement de la crme. Bien que la sparation de la matire grasse par membranes soit techniquement possible, lindustrie utilise plus gnralement la centrifugation. La crme qui sobtient partir de la centrifugation, contient environ 40% de lipides. Un avantage que prsenterait la sparation par membrane serait la rduction de la consommation dnergie, du fait de dbits relativement faibles utiliss en filtration tangentielle et les moindres dommages causs aux composants sensibles aux forts taux de cisaillements, comme peuvent ltre les membranes cellulaires des globules gras. Celle-ci pourrait donc amliorer la stabilit de la crme et les proprits sensorielles des produits (Brans et al., 2004). Daprs Gouddranche et al., (2000) une forte augmentation du nombre de globules gras par homognisation modifie la sensation buccale du lait. Pour la mme quantit de matire grasse, le lait homognis semble plus sucr et a plus de corps que le lait normal. De plus, la microstructure et la consistance des produits laitiers, comme le fromage, sont grandement affectes par les interactions entre la matrice de la casine et la membrane des globules gras. En

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Chapitre I : Etude Bibliographique consquence, une manire possible daugmenter ou de diminuer ces interactions pourrait tre de modifier la quantit de matire grasse prsente pour une concentration en casines donne. De plus, on peut aussi considrer quune augmentation du nombre de globules gras par leur rduction de taille, aurait des effets diffrents cause de la capacit des membranes cellulaires des globules gras du lait se lier aux molcules deau et de la diffrence de composition entre les globules gras grands et petits. Les mmes auteurs ont valu la transformation des laits liquides, yaourts, crme acide, camembert, petits Suisses, et beurres fabriqus partir de lait, auxquels la matire grasse a t ajuste soit par laddition dune crme standard, soit par laddition dune crme o les globules gras ont t obtenus par MF avec membranes cramiques tubulaires et une taille de pore de 2 m. Les rsultats ont montr quune diffrence significative dans la texture et dans les proprits organoleptiques des produits fabriqus tait prsente. Except pour le beurre, lutilisation de lait avec des globules gras petits donne un produit plus onctueux ayant tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 des caractristiques de texture plus fines en comparaison avec celui fabriqu avec une crme de rfrence ou ayant des globules gras plus grands (Gouddranche et al., 2000). Michalski et al., (2006) ont ralis des microfiltrations de lait entier frais avec des seuils de coupure compris entre 2 et 12 m afin dobtenir des fractions du lait avec diffrentes tailles de globules de matire grasse. Pour ce faire, ils ont utilis des membranes tubulaires multicanaux minrales (Membralox P1940, Pall Exekia, Tarbes, France). Le procd a t optimis avec une taille de pore de 5 m en obtenant deux fractions de lait : une avec globules gras entre 7,5 et 5 m (qui correspond au retntat de MF) et une autre avec globules compris entre 3,3 et 0,9 m (qui correspond au permat de MF). Ce type de MF pourrait tre plus efficace que la sparation par gravit du fait quelle permet de choisir la taille de globules. Michlaski et al., (2007) ont aussi tudi la fonctionnalit et les amliorations des proprits sensorielles dans le fromage Emmental qui a t fabriqu avec des globules de matire grasse avec une taille infrieure celles fabriqus avec des globules gras plus grands. Afin dobtenir un lait avec des globules de matire grasse avec une taille denviron 3,3 m, une MF 5 m a t ralise. Les rsultats ont montr que les fromages labors avec le lait avec des globules gras ayant une taille infrieure ont de meilleures proprits lastiques, mais surtout de meilleures proprits sensorielles. I.4.1.2. Elimination de bactries et spores prsentes dans le lait. La microfiltration (MF) peut rduire la quantit de bactries et spores sans affecter la saveur du lait et donner une dure de conservation plus longue que la pasteurisation. Le facteur de rduction dcimal par la MF est suprieur celui de la bactofugation, qui est un procd de rduction des bactries et des spores par centrifugation. En plus de la production du lait longue

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Chapitre I : Etude Bibliographique dure de conservation (traitement UHT), cette mthode peut tre utilise comme un prtraitement du lait crm pour la production des fromages crus et pour la rduction des spores dans le fromage du lait acide. Cependant, les bactries du lait ayant une distribution de taille entre 0,4-2,0 m, elles se superposent avec les globules de gras, ncessitant un crmage pralable avant traitement. Un procd commercial trs utilis pour la rduction des bactries et spores par membranes est disponible sous le nom de Bactocatch (Socit Alfa Laval). Il est opr haute vitesse (6-8 m.s-1), et une pression transmembranaire uniforme obtenue par recirculation du permat co-courant, et des membranes cramiques. Elwell & Barbano (2006).ont compar la dure de conservation du lait qui a t trait par deux techniques diffrentes : pasteurisation simple (79C, 16 s) et MF+pasteurisation du permat (MF 1,4 m et 100 kPa et pasteurisation de permat 72C pendant 15 s). Ils ont dtermin les tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 caractristiques de croissance des bactries dans le lait pasteuris en fonction de la temprature de stockage, lefficacit du procd de MF+pasteurisation dans la rduction du nombre total de bactries, spores et coliformes dans le lait. Ils ont galement estim la dure de conservation du lait microfiltr et pasteuris en fonction de cette temprature de stockage. La MF a t ralise avec un pilote Tetra Alcross MFS-7 (TetraPak, Pully, Switzerland) muni dune membrane cramique Membralox de seuil de coupure 1,4 m. Leurs rsultats ont montr que la diminution de la temprature de stockage donne une dure de conservation plus longue dans le lait pasteuris. Avec la MF une rduction logarithmique de bactries totales de 3,79 a t obtenue et de 1,84 aprs la pasteurisation du permat de MF, en donnant une rduction totale logarithmique de 5,63 avec la combinaison des deux procds (MF+pasteurisation du permat). Avec la rduction des bactries totales dans le lait des valeurs faibles, la MF et la pasteurisation produisent un lait ayant une dure de conservation plus longue (92 jours 0,1C). Cependant, cette dure de conservation dpend aussi de la temprature de stockage. Le mme lait microfiltr et pasteuris a t conserv 2,0C, 4,2C et 6,1C, donnant des dures de conservation respectivement de 78, 46 et 32 jour du fait de la protolyse cause par les protases natives du lait. Cette protolyse donne de saveurs dsagrables au lait Dans la rduction des bactries et des spores, le contrle du colmatage et la slectivit sont importants. La slectivit doit tre maintenue en retenant tant que possible spores et bactries pendant que les autres soluts traversent la membrane (Brans et al., 2004). Laugmentation du taux de cisaillement sur la membrane en utilisant des grandes vitesses (jusqu 7 m.s-1) na plus deffet, car il entrane une trs grande PTM lentre de la membrane. Le problme de combiner une faible PTM et taux de cisaillement levs dans les membranes

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Chapitre I : Etude Bibliographique tubulaires a t rsolu par le processus PTMU dj dfini. Ce procd a t appliqu pour lindustrie laitire pour la dbactrisation de lait en utilisant des membranes cramiques de 1,4 m (Eckner & Zottola, 1991). I.4.1.3. Concentration de micelles de casines partir du lait crm. Les micelles de casines concentres peuvent tre mlanges avec la crme pour la production de fromage. Dautres applications alimentaires incluent la standardisation du lait et la production de casine native dshydrate. Ces micelles peuvent tre concentres partir du lait crm en utilisant des membranes cramiques ayant une taille de pores comprise entre 0,05 et 0,2 m. Dans la concentration de micelles de casines, le contrle de colmatage est plus important que la slectivit par comparaison avec le procd de rduction des bactries et spores. Cette slectivit est moins importante car quelques protines du lactosrum seront toujours prsentes tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 dans le rtentat de filtration et le taux de casines passant au travers de la membrane finira dans le concentr de protines de lactosrum. Cela peut affecter lconomie du procd car la rcupration des protines de lactosrum partir du lactosrum de fromage devient plus complique lorsque le rendement en fromage augmente. Cest en gnral lultrafiltration (UF) traditionnelle qui est utilise pour ce type dapplication. Lavantage de lUF est dtre lquipement le moins cher : une membrane organique est utilise la place des membranes cramiques, et ne requiert pas lutilisation du PTMU. Cependant, le fait que plus de protines de lactosrum finissent dans le procd de fabrication du fromage est un dsavantage (Brans et al., 2004). Daufin et al., (1993) ont ralis une microfiltration pour sparer les casines des protines de lactosrum avec des membranes cramiques SCT 0,1 m. En faisant des tests flux de permat constant et en contrlant la PTM, ils ont montr que les conditions ncessaires pour une opration stable permettant une bonne rtention et bonne transmission de protines de lactosrum, tait une PTM uniforme. Ils ont aussi tudi les conditions ncessaires pour maintenir la filtration stable (flux de permat et PTM constants). Ils ont obtenu que la limite entre les filtrations stables et instables (i.e. rapide augmentation de la PTM flux constant) peut tre reprsente par une ligne droite dans le plan flux de permat -contrainte de cisaillement
* moyen (m) dcrit par J = k ( m m ) = k meff

Le Berre et Daufin (1996) ont ralis une microfiltration tangentielle de lait crm avec des membranes cramiques de 0,1 lactosrum. Ils ont m pour sparer les micelles de casines des protines de tudi linfluence des conditions opratoires (flux, J et contrainte de

cisaillement, w) et les changements du colmatage. Le flux a t vari entre 30 et 109 L.h-1.m-2 et la 32

Chapitre I : Etude Bibliographique contrainte de cisaillement entre 23 et 97 Pa afin de calculer le rapport (J/m) lequel est une reprsentation de linfluence de la convection et de lrosion dans linterface membrane/solution. Ils ont obtenu une valeur critique pour ce rapport denviron 1 L.h-1.m-2.Pa-1. Au dessus de cette valeur, la MF a t efficace. Cette valeur critique pourrait tre utilise comme paramtre de prdiction pour la slectivit et permabilit dans les procds de MF diffrentes conditions dopration. Au cours des essais, une rtention de micelles de casines >99,5% et une transmission de protines de lactosrum entre 70 et 80% ont t obtenues avec une contrainte de cisaillement de 110 Pa et un flux de 90 L.h-1.m-2. Al-Akoum et al., (2002b) ont tudi lapplication de modules vibrants (VSEP) pour la filtration de lait. Ils ont tudi les performances de la microfiltration 0,1 m de lait pour la sparation de micelles de casines des protines de lactosrum et lultrafiltration 50 kDa pour concentrer les protines solubles. Ils ont tudi leffet du taux de cisaillement moyen W via la tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 diminution de la frquence de vibration. Les auteurs ont montr que le flux de permat en UF variait comme m
1

( )

0 , 533

concentration initiale et comme m

( )

0 , 567

un facteur de rduction

volumique (FRV) de 1,8. Dans leurs tests, le flux critique pour la filtration stable a t de 76 L.h.m-2 une frquence maximale de 60,75 Hz, laquelle correspond un taux de cisaillement moyenne de 6,87 104 s-1. Pour la microfiltration, ils ont observ que le flux de permat augmente avec m , mais avec un exposant infrieur celui en UF, spcialement aux hautes frquences. Le flux critique 60,75 Hz et concentration initiale a t de 64 L.h-1.m-2, flux infrieur celui en UF, du fait dun colmatage interne accru cause des casines. Al-Akoum et al., (2002a) ont aussi utilis le VSEP pour la sparation de micelles de casines de protines de lactosrum partir de lait crm en poudre reconstitu. Ils ont compar les performances de la microfiltration avec des membranes en PTFE 0,1 m et lUF avec une membrane en PES de 50 kDa. Ils ont tudi le flux critique pour obtenir une opration stable de microfiltration en augmentant le flux de permat en contrlant la pression transmembranaire. Celui-ci a t de 50 L.h-1.m-2 un FRV de 2 et une frquence maximale de 60,75 Hz (w = 34 Pa). LUF a permis de minimiser la perte en casines dans le permat avec une faible diminution du flux. La transmission de protines de lactosrum a t de 65-70% pour l-Lactalbumine et de 2530% pour la -Lactoglobuline. Ding et al., (2003) ont tudi la concentration de protines par UF de lait UHT crm avec deux prototypes disque rotatif de 15 et 26 cm de diamtre en utilisant la mme membrane PES de 50 kDa. Des disques comportant des ailettes de diffrentes hauteurs ont t utiliss dans les tests. Les rsultats ont montr que le taux de cisaillement moyen la membrane est

33

Chapitre I : Etude Bibliographique proportionnel m = (k ) , o est la vitesse angulaire (rad.s-1) du disque et k est le coefficient
1,8

dentranement du fluide et qui reprsente la capacit du disque entraner le fluide dans son mouvement. La corrlation entre le flux de permat observ et le taux de cisaillement tait :

J = 0,301

0 , 552 m

Lawrence et al., (2008) ont utilis des membranes spirales pour la concentration des casines par microfiltration partir de lait crm. Ils ont obtenu de bonnes rtentions de casines faible PTM (96% 50 kPa), mais ces mmes conditions opratoires la rtention de Lactoglobuline a t de 78%. Ils ont remarqu que, dans leur systme, le flux et la composition du permat ont peu vari avec le seuil de coupure, ce qui semblerait indiquer que la performance de la membrane est dtermine pour la couche de protines se formant sur celle ci. Les effets de cette couche de protines peuvent tre minimiss en travaillant avec des faibles PTM et un dbit tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 dalimentation lev. I.4.1.4. Rcupration des protines du lactosrum. Quel que soit le mode dobtention (soit par procd traditionnel de fabrication fromagre, soit par sparation membranaire des casines), la composition et la rpartition en protines prsentes dans le lactosrum est globalement identique, mme si certains composs ne se retrouvent pas selon les cas (par exemple : le glycomacropeptide est prsent dans le lactosrum doux, car il est libr partir de la k-casine pendant la production de fromage, mais est trs difficile trouver dans le lactosrum acide) (Brans et al., 2004). Le lactosrum peut tre rcupr aprs production du fromage (prcipitation de casines par voie enzymatique) et partir de la production de casines. Il en existe deux types : a) lactosrum doux, avec un pH suprieur 5,6 et une faible concentration de calcium b) lactosrum acide, avec un pH denviron 4,6 et une haute concentration de calcium. La diffrence de concentration de calcium est due la de solubilisation de phosphate de calcium collodal avec la diminution du pH (Hui, 2006). Le lactosrum est une source nutritive en protines, mais son utilisation dans les aliments ou pour lalimentation des animaux sans dminralisation pralable est limite. Communment, le lactosrum est concentr par vaporation ou par osmose inverse (OI) et dminralis par lectrodialyse ou par rsines changeuses dions. Une alternative pour rduire la quantit de sels et concentrer les protines en une seule tape est la nanofiltration (NF). La NF rduit la consommation nergtique, mais ne donne quune dminralisation partielle. Les protines de lactosrum concentres peuvent tre sches par atomisation et utilises dans lalimentation humaine et animale. En fonction de la concentration des protines, les produits sont appels

34

Chapitre I : Etude Bibliographique concentrs de protines de lactosrum (WPC, 35-80% protines) ou isolats des protines de lactosrum (WPI, 80-95% protines). Nelson et Barbano (2005) ont dvelopp un procd de MF pour retirer un fort pourcentage des protines de lactosrum partir de lait crm en produisant au mme temps un rtentat avec un faible facteur de concentration. Le procd est dcrit sur la Figure I.9. Ils ont ralis une MF de lait crm avec une membrane tubulaire de 0,1 m, le permat de MF a t par la suite diafiltr. A la fin du procd, environ 95% des protines de lactosrum ont t retires

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure I.9. Schma dun procd de trois tapes, avec une MF et deux tapes de diafiltration pour rduire la quantit des protines de lactosrum dans le lait crm. Symboles : PMF : permat de MF, SPC : concentrt de protines de lactosrum, RMF : rtentat de MF, PL : protines de lactosrum. Dailleurs, dans les protines de lactosrum, il est intressant disoler les diffrentes protines, du fait de leurs diffrentes proprits fonctionnelles mentionnes dans la Section I.3.1.2. Les mthodes de fractionnement actuelles sont bases sur lagrgation thermique dLactalbumine, la chromatographie changeuse dions, la prcipitation, lUF ou une combinaison de ces mthodes (Brans et al., 2004). Par la suite, nous verrons les diffrentes mthodes qui ont t dveloppes afin de sparer les diffrentes protines prsentes dans le lactosrum. I.4.1.4.1. Sparation de l-Lactalbumine (-La). Maynard et al., (1989) ont dvelopp un procd pour le fractionnement de lactoferrine et -La humaines en utilisant des membranes de MF et dUF. La Figure I.10 montre un schma du

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Chapitre I : Etude Bibliographique procd. Le lait humain crm a t premirement microfiltr avec une membrane minrale (Carbosep M14) avec un seuil de coupure de 0,2 m. Le rtentat obtenu a t diafiltr, afin dliminer la majeure partie d-La et des peptides, puis concentr deux fois. Le permat de microfiltration (Permat 1) a t ensuite ultrafiltr avec une membrane fibres creuses de 100 kDa. Le rtentat de cette ultrafiltration (Rtentat 2) a t diafiltr jusqu' la rcupration totale d-La dans le permat. Une partie du permat de 100 kDa a t concentre sur une membrane fibres creuses de 10 kDa. Le rtentat obtenu a t diafiltr en continu jusqu limination complte des peptides. Les rsultats ont montr que lultrafiltration 100 kDa spare l-La des autres protines de poids molculaires suprieurs (lactoferrine et BSA). LUF 10 kDa a concentr l-La et limin les fractions de poids molculaire suprieur.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure I.10. Etapes technologiques de fractionnement des protines du lait humain, propos par Maynard et al., (1989). DF : diafiltration. Bramaud et al., (1997b) ont propos un procd de fractionnement des protines de lactosrum de lait de vache, travers la prcipitation isolectrique de l-La sous traitement thermique. Le phnomne de co-prcipitation de la BSA et de lIg a aussi t tudi. Laddition de citrate, un squestrant de calcium, a t propos pour rduire la concentration de calcium libre, et de ce fait dplacer le phnomne de prcipitation une temprature plus faible. Une puret plus leve est obtenue dans la fraction prcipite car le phnomne de co-prcipitation de la BSA est rduit une temprature plus faible. Ils ont acidifi le lactosrum avec laddition de HCl ou bien de acide citrique, afin dobtenir un pH de 3,9. La concentration en calcium libre a t ajuste avec citrate. Leurs rsultats montrent que quand le citrate ntait pas ajout, la prcipitation a lieu une temprature 36

Chapitre I : Etude Bibliographique suprieure 50C. Quand le citrate a t ajout, le phnomne de prcipitation d-La est dplac des tempratures plus faibles. Par exemple, la fraction prcipite d-La est de 0,7 35C, avec lajout de 96 10-3mol.L-1 de citrate. A titre de comparaison, sans laddition de citrate, une temprature denviron 55C est requise. Aprs cette tude, Bramaud et al., (1997a) ont optimis le procd de fractionnement des protines de lactosrum par prcipitation isolectrique de l-La, selon une approche globale. Ils ont montr que le contrle de la concentration en calcium permet doptimiser ltape de prcipitation, car lorsque cette teneur est rduite, le phnomne de prcipitation d-La est amplifi. Ils ont propos lutilisation dacide citrique, lequel permet dajuster simultanment le pH et de rduire la concentration de calcium ionique. Ils ont trouv que la centrifugation tait plus efficace pour sparer les phases solubles et le prcipit que la MF. Deux solutions avec la mme force ionique (0,1 mol.L-1), ont t additionnes pour solubiliser le prcipitt : NaCl et CaCl2. Ils tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 ont obtenu une puret plus leve avec la solution de CaCl2 quavec le NaCl (0,56 versus 0,79), par contre le rendement a t plus faible avec la solution de CaCl2 (0,81 versus 1). Lucas et al., (1998) ont tudi lextraction d-La partir des concentrts de protines de lactosrum avec des membranes inorganiques modifies. Un concentrt de protines de lactosrum acide (WPC, PS 90) a t utilis comme solution dalimentation. Dans ces expriences, quatre types de membranes inorganiques dultrafiltration (M5, M2, M4, M1 respectivement de 10, 15, 50 et 150 kDa, respectivement, Carbosep TechSep) ont t utilises et lune delles a t modifie chimiquement (M1 avec une couche de polythyleneimine PEI, 40000 Da). Afin de changer la charge nette, la couche du polymre de M1-PEI a t partiellement greffe chimiquement avec des fragments de carboxylate et cette membrane a t appele M1PEIC. Leurs rsultats ont montr que les membranes charges positivement (M1-PEI) taient efficaces pour amliorer la slectivit du fait de fortes interactions entre les charges positives et la -Lg. La slectivit est le rapport entre la transmission d-La et la transmission de -Lg, et calcule suivant lquation I.10

S=

Tr La Tr Lg

(I.10)

A faible force ionique (I 0,02 mol L-1), la diminution de la transmission de -Lg et une transmission d-La proche de 10% induit une meilleure slectivit (environ 10) de la membrane faite sur mesure en comparaison avec les membranes inorganiques sans couche (environ 3). La modification de la charge nette par adsorption spcifique dions divalents (M1-PEIC) change la transmission de protines pH 7 : la transmission des protines de lactosrum lies au Ca est augmente et, inversement, ladsorption des ions phosphate diminue la transmission des

37

Chapitre I : Etude Bibliographique protines. Dans les deux cas, les ions divalents ne sont pas suffisamment spcifiques envers une protine cible pour permettre que la slectivit de la membrane soit amliore. Gsan-Guiziou et al., (1999b) ont tudi diffrentes tapes qui comprenaient la prcipitation et lUF de lactosrum afin dobtenir des fractions enrichies d-La et -Lactoglobuline (-Lg). Les tapes successives sont : a) clarification et limination de la matire grasse des concentrts des protines de lactosrum b) prcipitation d-La et sparation de la fraction soluble de -Lg par MF en utilisant des membranes de 0,14 m (Carbosep M14, Orelis) et de 0,1 m (Membralox, SCT, France) c) nettoyage du prcipit d) solubilisation du prcipit e) concentration et purification d-La par diafiltration en utilisant des membranes dUF tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 50kDa (Carbosep M4, Orelis) et 5 kDa (Koch, Abcor Koch International). Ces auteurs ont ralis des essais chelle laboratoire en utilisant un lactosrum acide et dautres essais chelle industrielle avec un lactosrum obtenu partir de la fabrication de fromage Gouda. Les purets obtenues ont t entre 52 et 83% d-La et entre 85 et 94% de -Lg, respectivement. Ils ont obtenu des rcuprations de protines chelle industrielle moindres (6% d-La et 51% de -Lg). Un procd qui combine le traitement thermique slectif et la filtration membranaire pour produire du lactosrum enrichi en -La, a t dvelopp par Kiesner et al., (2000). Ce lactosrum enrichi a t obtenu avec un procd en deux tapes. La premire tape consiste dnaturer une majeure partie des -Lg avec un traitement thermique (90C) en laissant une portion substantielle d-La dans son tat natif. Dans la deuxime tape, les protines de lactosrum qui sont restes en solution ont t spares par MF (membrane tubulaire cramique, 0,1 m). Du lait crm et du lactosrum doux ont t utiliss comme matire premire. Les rsultats obtenus pour les essais raliss avec du lait crm ont montr que, d au traitement thermique slectionn, environ l6% d-La et 1,4% de -Lg restent ltat natif. Le rapport de masse -La/(-La +-Lg) augmente de 0,26 dans le lait initial 3 dans le lait trait thermiquement. Par MF, 5,3% de la quantit initiale d-La a t rcupre dans le permat contre 0,4% de -Lg. Ce qui correspond, pour l-La, un taux de sparation (pourcentage d-La native aprs traitement thermique/pourcentage d -La obtenu aprs MF) de MF de 32% et un rendement pour le procd de 5,3%. Pour le cas du lactosrum doux, le rapport de masse -La/(-La+-Lg) augmente 3 fois aprs le traitement thermique. Le taux de sparation d-La, a t environ 29% et un rendement de 7,5% a t obtenu.

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Chapitre I : Etude Bibliographique Muller et al., (2003b) ont tudi les conditions dopration pour la prpurification d-La par ultrafiltration en utilisant des membranes cramiques partir du lactosrum de casine. En utilisant la sparation membranaire, ils souhaitent augmenter la puret d-La dans le permat. Au cours de leurs tests, trois types de lactosrum acide de casine partir dun WPC ont t utiliss : PS 75 (liquide), PS 90 (liquide) et PS 90 (poudre). Cinq membranes tubulaires inorganiques ont t testes : une Carbosep M14 monotube (0,14 m) et M1 (150 kDa; 20,6 nm) et une membrane tubulaire Cram 3-canaux avec trois seuils de coupure diffrents 300, 220 et 150 kDa. Cette gamme de seuil de coupure a t choisie afin dobtenir une rtention totale dimmunoglobulines et de BSA sous des conditions opratoires appropries. Les membranes Carbosep ont t utilises sur le PS90 en poudre uniquement et les membranes Cram sur les trois lactosrums acides. Les rsultats obtenus ont montr que, pour les deux protines (-La et BSA), la transmission en utilisant la membrane Carbosep M14 a t suprieure 80%. Pour la Carbosep tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 M1, la transmission d -La a t comprise entre 25 et 58%, suivant la PTM, alors que dans le mme temps, la transmission de BSA variait entre 5 et 18%. La puret na pas augment avec la membrane Carbosep M14 alors que pour la Carbosep M1, la puret d-La sest accrue denviron 12% pendant que la puret de la BSA diminuait de 50%. La puret a t calcule avec lquation I.11.

P=

Ci C T

(I.11)

o Ci est la concentration de la protine i dans le permat et/ou rtentat et CT est la concentration totale de protines dans le permt et/ou rtentat. Ils ont observ quune augmentation du colmatage provoquait une diminution de la transmission de protines, et gnralement une augmentation de la puret d-La dans le permat. Ils ont atteint une puret d-La de 44% et un rendement de 53%, avec une concentration en continu par UF (FRV 9) grce une bonne slection des seuils de coupures (pas de transmission de BSA et IgG) et de bonnes conditions opratoires. Dans une seconde publication, Muller et al., (2003a) ont compar lultrafiltration et la prcipitation pour la purification d-La partir dacide prpurifi. Lultrafiltration du microfiltrat de PS 90 a t ralise avec une membrane Cram 50 kDa. Les conditions opratoires taient : pH 7,0, vitesse tangentielle de 3,4 m.s-1 (contrainte de cisaillement 43 Pa), PTM 1,0 bar, 50C et concentration en continu jusqu un FRV denviron 7,0 (3,5 h). Leurs rsultats pour lUF montrent que la transmission d-La tait suprieure la transmission de -Lg. La transmission de protines avec le microfiltrat de PS 90 tait trois fois plus faible quavec lultrafiltrat de PS 90. A partir de la solution dalimentation ayant une puret initiale d-La de 43%, ltape dUF 50

39

Chapitre I : Etude Bibliographique kDa a produit un permat riche en -La avec une puret denviron 66%, mais avec un faible rendement (23%). Malgr des conditions opratoires favorables de force ionique (0,04 mol.L-1) et une faible concentration de protines (1,6 g.L-1). Le rendement tant calcul par lquation I.12

C V Y La = 1 La , f f C La ,i Vt

(I.12)

o C-La,f est la concentration d-La dans le surnageant final de la centrifugation ralise aprs ltape de solubilisation ; C-La,i est la concentration initiale d-La ; Vf est le volume final de surnageant de la centrifugation ralise aprs ltape de solubilisation et Vi est le volume initial de la solution de protines utilise. Ils justifient cela par une transmission de protines de lactosrum dans lUF gouverne par des effets combins de colmatage de pores et dinteractions lectrostatiques de la membrane colmate, dont la charge, donne par la -Lg adsorbe et les protines du fluide, dpend de la tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 concentration de protines la paroi de la membrane et des concentrations des protines dans le rtentat. Ils ont aussi affirm que la seule manire damliorer la puret d-La et le rendement est doprer avec des tapes dUF successives (au moins trois pour la puret, accompagnes dtapes de diafiltration pour le rendement). Cheang et Zydney (2003) ont dvelopp un procd membranaire pour obtenir des rendements et un facteur de sparation levs pour la sparation d-La et de -Lg. Ils ont test diffrents pH et forces ioniques, en utilisant deux types de membranes : cellulose et PES. Une fois dtermines les conditions optimales pour la sparation des protines (pH, force ionique et dbit dalimentation), une diafiltration en continue a t ralise pour la sparation. Ils ont utilis comme fluide une solution d-La et de -Lg pures, lesquelles ont t dilus dans une solution de NaCl et 1 mM de Na2PO4, le pH a t ajust en ajoutant dHCl ou NaOH. Les filtrations ont t ralises avec un module dultrafiltration contenant des membranes planes de 25 mm de diamtre. Ils ont test une membrane de Biomax PES de 50 kDa et une membrane de cellulose rgnre de 30 kDa. Six taux de tampons ont t tudis en utilisant ces deux membranes. Les donnes ont t obtenues pH 5,5 et 7,2 en utilisant une force ionique de 5, 50 et 150 mM. Le dbit dalimentation a t de 3,4 m.s-1. Une concentration en -la et en -Lg de 1,8 g L-1 et de 3,2 g L-1, respectivement a t utilise. Ils ont observ, dans les essais avec la membrane de 30 kDa, que la transmission des deux protines augmente avec la force ionique du laugmentation des forces lectrostatiques concentrations de sel leves. La transmission d-La a t plus faible pH 7,2 qu pH 5,5 cause de la charge ngative de cette protine pH 7,2. La transmission de -Lg a t plus leve pH 7,2 du au fait que cette protine passe la forme monomre aux pH suprieurs 6,5. Ils ont calcul la slectivit pour les deux membranes, utilisant lquation I.13 40

Chapitre I : Etude Bibliographique

S=

(C (C

Cr ) La Cr ) Lg

(I.13)

La meilleure slectivit a t obtenue avec la membrane de 30 kDa pH 5,5 et une force ionique de 50 mM, obtenant une slectivit de 5818. Cette slectivit diminue jusqu 355 une force ionique de 150 mM. Pour le cas de la membrane de 50 kDa, la slectivit a t infrieure 11 pour tous les pH et forces ioniques. La slectivit maximale (10,50,5) a t obtenue la force ionique plus leve. En se basant sur des rsultats antrieurs, une diafiltration a t ralise pH 5,5 et une force ionique de 50 mM avec la membrane de 30 kDa et un dbit dalimentation de 2,8 m.s-1. Ils ont observ que la concentration d-La diminue rapidement pendant la diafiltration. Par contre, la concentration de -Lg tait constante pendant la diafiltration. A la fin de la diafiltration, ils ont obtenu un rtentat quasi pur en -Lg, avec une concentration d-La de moins de 0,02 g.L-1 et une concentration de -Lg de 2,8 g.L-1. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Dans une deuxime publication, Cheang et Zydney (2004), ont tudi lutilisation dun procd deux tapes dultrafiltration tangentielle pour la purification d-La et de -Lg partir disolats de protines de lactosrum. Ils ont utilis comme solution un isolat de protines de lactosrum commercial, mlang avec de la BSA. La filtration a t ralise avec un module de filtration tangentielle Pellicon XL et des membranes de 100 et 30 kDa de cellulose rgnre avec une surface membranaire de 50 m2. Afin de connatre les conditions optimales de sparation (pH, conductivit et flux) des essais avec recirculation du permat ont t effectus. La sparation de protines a t ralise par diafiltration. Les rsultats quils ont obtenus lors des essais avec recirculation du permat ont montr que les meilleures transmissions et slectivits (-La/BSA) pour la membrane de 100 kDa ont t obtenues une conductivit de 0,2 mS.cm-1. Pour le cas de la membrane de 30 kDa les meilleures transmissions et slectivits ont t obtenues 1,7 mS.cm1

. Ils ont observ que la transmission de -Lg a t 10 fois plus faible avec la membrane de 30

kDa quavec la membrane de 100 kDa. Ils ont observ que la membrane de 100 kDa prsentait une haute slectivit (74) entre l-La et la BSA et une slectivit moyenne (18) entre la -Lg et la BSA, mais une mauvaise sparation entre -La et -Lg. Avec la membrane de 30 kDa, ils ont obtenu une bonne sparation (slectivit de 21) entre -La et -Lg et une sparation totale entre -La et BSA. Cette membrane a donn aussi une slectivit leve entre -Lg et BSA, malgr une faible transmission de -Lg (0,011). En se basant sur ces rsultats, les auteurs ont propos deux stratgies de sparation en utilisant des membranes de 30 et 100 kDa en serie. La stratgie I consiste en une diafiltration 100 kDa pour retirer la BSA et obtenir l-La et la -Lg dans le permat. Le permat rcupr est ensuite diafiltr avec la membrane de 30 kDa afin de sparer l-La de la -Lg. La stratgie II consiste en une diafiltration 30 kDa en obtenant dans le 41

Chapitre I : Etude Bibliographique permat l-La et dans le rtentat la BSA et la -Lg. Le rtentat est ensuite diafiltr 100 kDa pour sparer la BSA de la -Lg. La Figure I.11 montre les schmas pour les deux stratgies proposes.

Figure I.11. Schma des stratgies pour la sparation des protines de lactosrum, proposs par Cheang et Zydney (2004). tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Leurs rsultats avec la premire partie de la stratgie I (DF1) ont montr que la concentration d-La diminue rapidement pendant la diafiltration, et que la concentration de -Lg diminue plus lentement que celle de l-La. La concentration de BSA se maintient constante pendant tout lessai. Ils ont rcupr presque 100% d-La et 78% de -Lg dans cette premire tape. Avant la diafiltration 30 kDa, le permat 1 a t concentr 5 fois et la conductivit a t ajuste 1,7 mS.cm-1, en obtenant des concentrations en -La, -Lg et BSA, respectivement de 0,8, 3,0 et 0,05 g.L-1. Pendant la deuxime diafiltration (DF2) la concentration d-La diminue par un facteur de 10 et la concentration de -Lg se maintient relativement constante. A la fin de la DF 2 ils ont obtenu un rendement de 65% et une puret de 8 pour la -Lg et pour l-La ils ont obtenu un rendement de 95% et une puret de 10. Pour le cas de la stratgie II, leurs rsultats ont montr quaprs la premire tape (DF1, 30 kDa) le rendement d-La a t de 90%. Dans la deuxime tape, ils ont observ que la purification de la -Lg tait faible, sans doute pour deux raisons : premirement, dans la premire tape ils nont pas retir suffisamment d-La, en obtenant plus de 10% d-La rcupr avec la -Lg dans la deuxime tape (DF2, 100 kDa). Deuximement, la conductivit leve au dbut de la DF 2 a permis la transmission de BSA dans le permat. Konrad et Kleinschmidt (2008) ont dvelopp une mthode pour lisolement d-La native partir de lactosrum doux, en combinant la filtration membranaire et un traitement enzymatique par trypsine. Le lactosrum doux a t ultrafiltr avec une membrane plane en PES de 100 kDa, jusqu un facteur de rduction volumique (FRV) de 20 et une PTM de 2,0 bar. Le permat a subi un traitement enzymatique par trypsine. Lhydrolysat a t ultrafiltr en utilisant une membrane 42

Chapitre I : Etude Bibliographique de 10 kDa 53C et FRV de 5. Le rtentat de lUF a t ensuite pasteuris et sch par atomisation. Ces auteurs ont obtenu une transmission de peptides d-La optimale 45C, 2,0 bar et pH 6,7 ; en obtenant une transmission globale de 25% et une puret de 36% et 44% lchelle laboratoire et lchelle pilote, respectivement. La -Lg a t compltement digre par lenzyme et l-La na pas t dgrade. Dans le mme temps, la BSA est reste comme impuret dans lhydrolysat. Aprs une deuxime UF de lhydrolysat 10 kDa, la rcupration d-La a t de 15% avec une puret entre 90 et 95%. I.4.1.4.2. Sparation de -Lactoglobuline (-Lg) La -Lg a t purifie partir de concentrt de protines de lactosrum en utilisant un traitement enzymatique avec de la pepsine et par filtration membranaire. De la pepsine de porc a t ajoute au concentrt de lactosrum (1:200, m/m), et le mlange a t incub pH 2,0 37C pendant 60 min. La fraction de protine a t collecte par prcipitation avec du sulfate tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 dammonium, et le prcipitt a t, soit dialys avec de leau en utilisant une membrane de dialyse (20 kDa), soit filtr en utilisant une membrane dUF de 30 kDa. Les rsultats ont montr que les peptides de -Lg obtenus ntaient pas diffrents de la -Lg talon (Kinekawa & Kitabatake, 1996). Une mthode pour prparer de grandes quantits de -Lg bovine native, adquate pour une utilisation dans le domaine de la recherche, a t propose par Caessens et al., (1997). La protine a t isole en combinant un procd de prcipitation (prcipitation de protines de lactosrum, sauf la -Lg et le caseinomacropeptide (CMP), avec un procd de diafiltration (pour sparer la -Lg du CMP). Leurs rsultats ont montr quaprs la prcipitation avec acide trichloractique (TCA) et la centrifugation, le surnageant contenait seulement des -Lg et CMP. Pendant la diafiltration (10 kDa), le CMP a t retir dans le permat seulement une faible portion de CMP restait dans le rtentat. Le rendement du produit purifi a t denviron 1130 g ( partir de 2880 g), soit environ 60% (sur la base du contenu de -Lg dans le lactosrum). Konrad et al., (2000) ont dvelopp une nouvelle mthode pour isoler la -Lg. Cette mthode comprend un traitement peptidique du lactosrum et une filtration par membrane sous conditions de pression et de flux modrs afin disoler la -Lg native (sans dnaturation). La mthode a t applique 10 m3 de lactosrum trait et la qualit du produit a t compare avec les rsultats chelle pilote de trois autres procds : la prcipitation par ajout dune solution 3% acide trichloroactique (TCA), un procd de salting-out (mthode pour sparer protines base sur leur solubilit hautes concentrations de sel) et une prcipitation slective. Les rendements de -Lg native calculs taient respectivement de 67,3%, 44,9%, 46,7% et 49,6% de -Lg prsent dans le lactosrum en utilisant les quatre mthodes. Ils ont caractris chimiquement les diffrentes -Lg par lectrophorse et IE-FPLC (Fast Protein Liquid

43

Chapitre I : Etude Bibliographique Chromatography) et leurs rsultats ont montr une puret et une condition native maximale pour la -Lg avec la nouvelle mthode. Bhattacharjee et al., (2006b) ont tudi les effets du pH et de la vitesse de rotation de la membrane en ultrafiltration de lactosrum avec un module disque rotatif. Ils ont utilis un module quip de deux moteurs, avec dispositifs de rgulation de vitesse, pour mettre en rotation la fois lagitateur et la membrane. Le module a la possibilit de faire tourner la membrane et lagitateur dans des directions opposes pour donner un taux de cisaillement trs lev sur la membrane. Les membranes utilises taient des membranes planes de PES de 76 mm de diamtre et de seuils de coupure de 10 kDa et 30 kDa. Dans ces tests, la vitesse de lagitateur a t varie entre 0 (sans agitation) et 1000 tr.min-1, alors que la vitesse rotation de la membrane a t fixe 0 (membrane fixe), 300 et 600 tr.min-1. Ils ont aussi vari le pH de la solution, en utilisant les valeurs de 2,8 et 5,7, valeurs respectivement infrieure et suprieure au point isolectrique de tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 la casine. Leurs rsultats ont montr que le flux de permat peut tre amlior avec laugmentation de la vitesse de rotation de la membrane. A cause dune prsence plus leve des dimres de -Lg dans la solution pH 5,7, la rtention avec la membrane de 30 kDa a t suprieure, do cette concentration dans le permat de 30 kDa plus faible qu pH 2,8, avec une puret de -Lg plus faible dans le rtentat de 10 kDa. Ils ont obtenu une puret de 72,3% de -Lg pH 2,8 et seulement 59,7% pH 5,7 (PTM = 4 bar, vitesse dagitation = 500 tr.min-1 et membrane fixe). La puret de -Lg slevait 74,5% pour une vitesse de rotation de la membrane de 300 tr.min-1 et 75,1 600 tr.min-1, en maintenant invariables les autres conditions opratoires. Aprs cette tude, Bhattacharjee et al., (2006a), ont poursuivi ltude sur le fractionnement de -Lg partir de lactosrum de casine en utilisant lUF et une membrane de chromatographie changeuse dions (Figure I.12).

44

Chapitre I : Etude Bibliographique

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure I.12. Schma du procd propos par Bhattacharjee et al., (2006a). Leur objectif a t dexaminer la sparation relative de -Lg partir dun concentr de protines de lactosrum en utilisant une UF en deux tapes avec des membranes de 10 et 30 kDa dans le mme module que celui utilis prcdemment. Une MF pralable a t ralise aprs la centrifugation du lactosrum de casine. Les tests dUF ont t raliss dans des conditions similaires ltude prcdente. Le permat de 10 kDa a t utilis comme solution dalimentation pour la membrane de chromatographie changeuse dions. Leurs rsultats ont montr que le rapport des concentrations -Lg/-La est suprieur faible pH, car, avec la membrane de 30 kDa un pH initial de 2,8, il tait de 3,37, alors que la valeur de ce rapport ntait que de 2,85 dans la solution pH 5,6. Le rapport -Lg/-La dans le rtentat de la membrane de 10 kDa (provenant du permat 30 kDa) tait de 3,64 pH = 2,8 contre 3,07 pH 5,6. La chromatographie changeuse dions a t ralise pH 5,0 car, cette valeur de pH, une meilleure sparation a t obtenue. Le facteur de sparation pour la solution initiale pH 2,8 a t trouv de 17,15 lequel est substantiellement suprieur celui correspondant la solution pH 5 (9,64). Le facteur de sparation a t calcul avec lquation I.14.
FS =

(C

(C

Lg

Lg

C La )a limentation

C La ) permat

(I.14)

Almcija et al., (2007) ont tudi leffet du pH sur le fractionnement des protines de lactosrum avec des membranes cramiques dultrafiltration. Ils ont utilis une membrane tubulaire de 300 kDa et le pH a t vari entre 3 et 10. Ils ont trouv quen travaillant pH proche du point isolectrique des protines, on obtient des flux plus faibles qu pH acide (3) et 45

Chapitre I : Etude Bibliographique basique (9 et 10). Concernant le rendement, ils ont obtenu des valeurs faibles avec les solutions pH 4 et 5 due la prsence des agrgats, tandis que les meilleurs flux ont t obtenus entre pH 7 et 9. Lozano et al., (2008) ont dvelopp une mthode pour lisolement de -Lg en utilisant une prcipitation diffrentielle avec 50% sulfate dammonium. Le prcipitt a t dissous et spar encore une fois avec 70% de sulfate dammonium, en obtenant un surnageant liquide riche en Lg. Aprs avoir fait une tape de dialyse et de lyophilis le surnageant, lisolation de la protine a t effectue par chromatographie dchange dions. Ils ont obtenu un rendement de 14.32% et une puret de 95%. Ils ont effectu diffrentes analyses afin de comparer les proprits physicochimiques et immunochimiques de la protine avec ceux dune protine talon. Leurs rsultats montrent que les proprits sont similaires celles de la protine talon. I.4.1.4.3. Sparation du srum dalbumine bovine (BSA) tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Akoum et al., (2002) ont tudi la performance du VSEP en ultrafiltration de BSA. Ils ont calcul le taux de cisaillement la membrane en fonction de la frquence, le dplacement et la viscosit du fluide dans la limite de grands nombres de Reynolds. Ils ont observ que le flux de permat est proportionnel p
0 , 426

Persson et al., (2003) ont tudi linfluence du pH et de la concentration de sel dans la transmission de BSA en microfiltration tangentielle. Ils ont utilis deux types des membranes de MF : une membrane Nylon0,66 de 0,2 m (Pall Filtron) et une membrane de polythersulfone (PES) 0,16 m (Omega, Pall Filtron). Trois valeurs de pH (3, 5 et 7) ont t testes et la concentration de sel a t de 0 et 0,15M. Une transmission maximale a t obtenue avec la membrane Omega, celle-ci tant affecte par le pH de la solution (100% pH 5, 95% pH 7 et 80% pH 3). Cependant avec la prsence de sel dans la solution, la transmission a t de 100% dans tous les cas. Avec la membrane de Nylon, pH 5, lequel est proche du point isolectrique (pI) de la protine, la transmission a t de 100%, mais pour les valeurs de pH 3 et 7 la transmission tait plus faible (jusqu 40%). Cependant, quand la concentration en sel dans la solution a t augmente, la transmission la t aussi. Leurs rsultats ont montr que les interactions lectrostatiques entre les protines et la couche de polarisation et entre les protines et la membrane affectent la transmission. Laugmentation du flux quand la protine est proche de son point isolectrique est due au fait quil ny a pas de rpulsions lectrostatique entre les protines de la solution et la couche de polarisation. Dans ce chapitre nous avons montr limportance des protines du lait dans lindustrie agroalimentaire et pharmaceutique, et lintrt croissant pour dvelopper des procds pour leur 46

Chapitre I : Etude Bibliographique sparation. La filtration membranaire a t largement tudie pour cette application, montrant que le problme majeur pour obtenir un flux et une slectivit levs sont les phnomnes de polarisation de concentration et de colmatage de la membrane. Nous avons aussi voqu dans ce chapitre les diffrentes mthodes pour contrler le colmatage de la membrane et peu dentre elles ont t utilises pour amliorer la sparation des protines du lait. Cest pour cela cette thse propose un procd en cascade pour sparer les protines du lait en trois fractions principales : les casines, l-Lactalbumine et la -Lactoglobuline, en faisant intervenir la filtration dynamique afin daugmenter les performances en vue dune industrialisation. La Figure I.13 prsente le procd propos.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure I.13. Schma du procd en cascade propos pour la sparation des protines du lait par filtration dynamique.

47

Chapitre II : Matriels et Mthodes

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CHAPITRE II : MATERIELS ET METHODES

48

Chapitre II : Matriels et Mthodes Lobjet de ce chapitre est la prsentation des diffrents moyens et mthodes qui ont t mis en uvre pour la ralisation de ce travail. Il se compose dune description des trois systmes de filtration dynamique qui sont le prototype disque rotatif, le systme vibrant VSEP et le module MSD, ainsi que des diverses mthodes analytiques utilises. II.1. Module Multi Shaft Disk (MSD). Le multi shaft disk (MSD) a t dvelopp par Westfalia Separator (Aalen-Essingen, Germany). Notre pilote de laboratoire, construit par Westfalia Separator, consiste en deux arbres parallles qui tournent la mme vitesse, chaque arbre avec 6 disques de membrane cramiques de 90 mm de diamtre extrieur et de 41 mm de rayon interne (Figure II.2b). La surface membranaire est de 0,121 m2 (chaque membrane = 100,8 cm2). Les disques de chaque arbre se recouvrent sur 15.5% de leur surface. Lentrefer entre les deux disques qui se recouvrent est de 3,75 mm et lpaisseur du disque est de 6 mm (Figure II.1). La distance entre les deux arbres est tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 de 68 mm. Larbre et les disques sont dans un carter dacier inoxydable. Le filtrat est recueilli lintrieur de chaque membrane cramique par 14 canaux, puis il est vacu par les deux axes creux. Il est possible darrter le recueil du permat des membranes dans un axe, par la fermeture de la sortie du laxe. Grce une modification ralise dans notre laboratoire, les axes du module peuvent tourner des vitesses diffrentes.

Figure II.1. Schma de MSD. Il montre seulement trois membranes dans chaque axe. Un des axes peut tre muni des 6 disques mtalliques lisses ou ailettes en aluminium. Les disques ont 90 mm de diamtre extrieur avec un creux central de 1,02 mm, et 6 mm dpaisseur. Les disques ailettes a huit ailettes radiales de 2 mm de hauteur sur chaque ct, donnant 6 mm dpaisseur totale, y compris les ailettes (Figure II.2c).

49

Chapitre II : Matriels et Mthodes

a)

b)

c)

Figure II.2. a) Photographie du module MSD muni de 12 membranes cramiques. b) Disque membranaire cramique. c) Disque mtallique ailettes. II.1.1. Calcul de la vitesse diffrentielle dans la zone de recouvrement dans le MSD. Ding et al., (2006) ont calcul la vitesse diffrentielle dans la zone de recouvrement des disques. Ils ont trouv que lorsque les disques membranaires tournent la mme vitesse sur les tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 deux axes, les vitesses diffrentielles sont constantes dans la rgion de recouvrement. Ces vitesses diffrentielles sont gales di, o di est la distance entre les deux arbres et est la vitesse angulaire. Cest pour cela que le taux de cisaillement peut tre uniforme dans cette rgion. Cependant dans le pilote modifi, o les deux axes tournent des vitesses diffrentes, les vitesses diffrentielles dans la rgion de recouvrement sont plus complexes, et le taux de cisaillement est plus lev lors de lutilisation des disques mtalliques. II.1.2. Dtermination de la PTM partir de pression du carter pc dans le MSD Du fait que le permat recueilli dans les canaux des disques cramiques tourne comme un corps solide, sa pression pp varie avec le carr de la vitesse angulaire d au forces centrifuges, selon :

p p (r ) = p s +

2 r
2

(II.1)

o ps est la pression lentre de larbre creux, est la masse volumique du fluide et est la vitesse angulaire. La valeur moyenne p0 sur la surface de la membrane est donne par lintgration de lquation II.1 sur la surface de la membrane suivant :
p0 = p s +

(R + R
2 2 1

2 2

(II.2)

o R1 et R2 sont les rayons externe et interne de la membrane. Si nous supposons que les variations de la pression radiale du rtentat sont petites en comparaison avec celles du permat, la pression moyenne du rtentat peut tre approxime par la pression mesure dans le carter pc., et donc la PTM peut tre exprime par:

PTM = p c p 0

(II.3)

50

Chapitre II : Matriels et Mthodes II.1.3. Dtermination du taux de cisaillement. Nous pouvons calculer le cisaillement au niveau de la membrane tournante dans le cas de 6 disques membranaires sur un seul arbre. Afin de simplifier le calcul nous avons suppos que le taux de cisaillement sur la membrane est induit principalement par sa propre rotation, car il ny a pas de vitesse relative entre les disques membranaires voisins. La contrainte de cisaillement sur un disque rotatif a t tudie par Murkes & Carlsson (1988), proposant diffrentes expressions pour quatre rgimes dcoulement. Dans notre systme, deux rgimes sont importants : Rgime laminaire et cartement large
Re s =
s 2 r 2

> 4 ; Re r =

< 2 10 5

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Le taux de cisaillement local scrit :

= 1,81
l

0 , 5

(k )

1, 5

(II.4)

Rgime turbulent et cartement large

Re r > 2 10 5 ;

s > 0,5 r

Le taux de cisaillement local scrit

= 0,057
l

0 , 5

(k )

1, 8

r 1, 6

(II.5)

o s est la distance axiale entre le disque et la surface du carter (c'est--dire lentrefer), r est le rayon local du disque, et est la viscosit cinmatique. Res est le nombre de Reynolds dans lentrefer et Rer est le nombre de Reynolds local de rotation. k est le coefficient dentranement du fluide. Le module MSD donne un rapport s (R2 R1 ) de lordre de 0,55. Donc le taux de cisaillement local sur la membrane, pour le cas de 6 disques cramiques sur un arbre, peut tre calcul utilisant les quations II.4 et II.5. Nos pouvons calculer donc, le taux de cisaillement maximal et moyen suivant : Rgime laminaire ( Re d =
Re 2 d

< ~3105)

Le taux de cisaillement maximum sur la membrane se trouve la priphrie du disque membranaire tournant, et il sexprime par :

max

= 1,81 0 , 5 (k ) R 2
1, 5

(II.6)

Le taux de cisaillement moyen sur la membrane est obtenu par intgration de lquation II.4, obtenant 51

Chapitre II : Matriels et Mthodes

=
m

1,207 0 , 5 (k ) ( R13 R23 ) (R12 R22 )

1, 5

(II.7)

Rgime turbulent (Red >~3105) Le taux de cisaillement sur la membrane peut tre calcul par :

max

= 0,057 0 , 5 (k ) R21, 6
1, 8

(II.8)

Le taux de cisaillement moyen sur la membrane est obtenu par intgration de lquation II.5

0,0317 0 , 8 (k ) ( R13, 6 R23 , 6 ) m = (R12 R22 )

1, 8

(II.9)

II.1.4. Montage exprimental La Figure II.3 montre le montage exprimental pour le module MSD. Le fluide est aliment depuis un rservoir thermostat de 12 L vers le module de filtration par une pompe tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 volumtrique. Un capteur de pression est utilis pour mesurer la pression de fonctionnement. Le circuit comprend : Un module de filtration Multishaft disk Deux moteurs, un pour chaque arbre, permettant la rotation des arbres avec une vitesse de rotation allant jusqu 1930 tr.min-1 Une pompe membrane HYDRA-CELL (8 L.min-1 maximum) haute pression (70 bar) Un capteur de pression VALYDINE DP15 (prcision 3%), pour mesurer la pression priphrique qui permettra le calcul de la pression transmembranaire Une balance lectronique SARTORIUS B3100P (mac. 3100 g ; min 5 g) pour mesurer le dbit de permat. Elle est connecte un ordinateur afin denregistrer le dbit de filtration, dduit par la drivation de signal de la balance par rapport au temps. La prcision sur les flux est denviron 5% Une vanne de contre-pression place en sortie du circuit pour rgler la pression dans le module de filtration Un ordinateur muni dune carte dacquisition analogique/numrique pour saisir les donnes avant traitement.

52

Chapitre II : Matriels et Mthodes

Pompe

Pc
00 :00

Vane Rtentat Permat

00000000g

Balance

Ordinateur

Figure II.3. Montage exprimental lors des essais sur le module MSD. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 II.2. Module Disque Rotatif Le module disque rotatif consiste en un disque mtallique qui tourne haute vitesse prs dune membrane circulaire. Ces types de systmes, disponibles lchelle de laboratoire et industrielle, se sont montrs trs efficaces, spcialement pour la rcupration de macromolcules partir de suspensions cellulaires, ainsi quen UF, NF et OI. Le module de filtration utilis est schmatis sur la Figure II.4. Nous pouvons y noter que lalimentation du module de filtration se fait par une entre qui se situe derrire le disque. Le rtentat tait auparavant vacu par larbre de rotation qui tait creux. Dans le systme actuel, la sortie du rtentat seffectue par la face avant du module. Ces modifications ont t ralises afin de permettre datteindre des pressions de fonctionnement plus importantes. Ainsi, cette nouvelle configuration permet de monter des pressions de lordre de 4000 kPa au lieu des 2000 obtenus avec la configuration prcdente. La membrane est fixe face au disque. Le filtrat est recueilli par un orifice situ sur la partie avant du module.

53

Chapitre II : Matriels et Mthodes

Figure II.4 Schma du module disque rotatif. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 II.2.1. Calcul du taux de cisaillement Bouzerar et al., (2000a) ont calcul le cisaillement sur la membrane pour les rgimes laminaire et turbulent. Rgime laminaire (Re <3 105). Le taux de cisaillement sur la membrane est donn par lquation suivante :

= 0,77
p

0 , 5

(k )

1, 5

(II.10)

Le taux de cisaillement maximum la priphrie du disque, o r=R, est :

max

= 0,77 0 , 5 (k ) R
1, 5

(II.11)

Le taux de cisaillement moyen sur la membrane est obtenu par intgration de lquation II.10 sur la surface de la membrane, soit :

m = 0,77 0,5 (k )1,5 R

et pour la contrainte de cisaillement moyen, nous trouvons :

2 3

(II.12)

moy

= =

2 1, 5 0,77 0 , 5 (kw ) R 3

(II.13)

Rgime turbulent (Re>3 105), cest le plus frquent : Le taux de cisaillement sur la membrane est donn par la relation suivante :

= 0,0296
p

0 , 8

(k )

1, 8

r 1, 6

(II.14)

Le taux de cisaillement maximal (sur la priphrie de la membrane) est obtenu en remplaant r par R dans lquation II.14, soit :

max

= 0,0296 0 ,8 (k ) R 1, 6
1, 8

(II.15) 54

Chapitre II : Matriels et Mthodes Le taux de cisaillement moyen sur la membrane est obtenu par intgration de lquation prcdente sur la surface de la membrane, soit :

m = 0,0164 0,8 (k )1,8 R 1, 6

et pour la contrainte de cisaillement moyen, nous trouvons :

(II.16)

moy

= moy = 0,0164( )

0 , 8

(k )

1, 8

R 1, 6

(II.17)

La pression transmembranaire peut tre calcule partir de la pression priphrique (Pc) par lexpression suivante, (Bouzerar et al., 2000a) :
PTM = Pc

k R
2 2

(II.18)

o: : viscosit cinmatique du fluide r: rayon de la membrane (0<r<R) tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 : vitesse angulaire du disque R: rayon extrieur de la membrane (R = 0,0725 m) : masse volumique du fluide k: coefficient dentranement du fluide Les coefficients dentranement du fluide ont t calculs partir de la mesure de la pression priphrique diverses vitesses de rotation et on a trouv que, k est gal 0,42 pour le disque lisse et 0,89 pour le disque ailettes de 6 mm de hauteur (Frappart, 2006). II.2.2. Montage exprimental Le circuit comprend (Figure II.5), hors le module de filtration, le mme montage exprimental que le module MSD (cf II.1.4).

Figure II.5 Montage exprimental lors des essais sur disque rotatif

55

Chapitre II : Matriels et Mthodes Le module peut tre quip dun disque lisse ou avec ailettes. Nous avons utilis lors des essais le disque muni d'ailettes de hauteur s = 6 mm et dpaisseur l = 2mm. Ces disques ont un diamtre de 14,5 cm. (Figure II.6).

Figure II.6. Schma de disque ailettes utilis dans le module disque rotatif. II.3. Membranes utilises tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Lors de cette tude, nous avons utilis diffrents types de membrane. Ses caractristiques sont dtailles sur le Tableau II.1 La rsistance de la membrane a t mesure avec lquation II.19 :

Rm =

1 Lp

(II.19)

o Lp est la permabilit de la membrane et est la viscosit de leau (Pa s). La permabilit de la membrane a t calcule traant la courbe de flux deau diffrentes pressions transmembranaires. Tableau II.1. Caractristiques des membranes utilises dans cette tude. Procd Rsistance Seuil de Temprature membranaire coupure/ (C) (m-1) Cut-off Nylon 0,2 m 20 6,75 1011 PVDF 0,2 m 20 7,90 1011 MF PVDF 0,15 m 20 3,07 1012 Cramique 0,2 m 20 6.04 1011 PES 50 kDa 20 9,934,79 1011 (*) UF PES 20 kDa 20 7,56 106 (*) Moyenne des rsistances calcule avec toutes les membranes utilises. Matriaux II.4. Fluides utiliss Dans cette tude deux types de lait crm ont t utiliss : du lait UHT et du lait pasteuris. Fabricant/ Modle Pall Co Nadir/M020 Alfa Laval Aaflow Nadir/UP050 Nadir/UP020

56

Chapitre II : Matriels et Mthodes II.4.1. Lait UHT crm Nous avons utilis un lait crm commercial (lait de montagne, Carrefour) strilis Ultra Haut Temprature (UHT, 140C pendant 2 secondes). La composition moyenne (en g.L-1) du lait UHT selon le fournisseur est la suivante : Protines totales : 32 Glucides (lactose) : 48 Lipides : traces Calcium : 1,2 Sodium : 0,5 II.4.2. Lait pasteuris crm Le lait pasteuris crm a t obtenu dans une laiterie Clermont (Lactel, 60, France). La concentration moyenne de protine totale, selon le fournisseur est de 30 g.L-1, contenant tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 1,270,14 g.L-1 d-La et 2,070,13 g.L-1 de -Lg. Les autres composants nont pas t mesures II.5. Analyses physico-chimiques II.5.1. Dtermination des transmissions de casines par turbidit. La turbidit du permat caractriser la transmission des micelles de casines travers la membrane. La valeur admissible de turbidit lors de la sparation des micelles de casines des protines de lactosrum est de 50 NTU, correspondant une rtention de casines suprieure 98% (Gsan-Guiziou et al., 1999b). La turbidit du permat a t mesure par un turbidimtre HACH (Etas Unis dAmrique). Ltendue de la mesure de lappareil est comprise entre 2 et 2001 NTU. II.5.2. Dtermination de la concentration des protines solubles par HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Afin de calculer la concentration d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline pendant la ralisation de cette tude, nous avons fait un talonnage des ces deux principales protines. Pour ce faire nous avons fabriqu des solutions d-Lactalbumine type III de lait bovin (L6010) et Lactoglobuline de lait bovin (L3908) (Sigma-Aldrich Chimie Sarl, France) diffrentes concentrations, lesquelles ont t analyses par HPLC. La mesure HPLC a t faite sur une colonne Vydac (250x4.6 mm, 5 m, 300 ) selon la mthode de Jaubert & Martin, (1992) dcrite par Akoum (2003). Conditions opratoires : Colonne thermostate 40 C Dbit : 1 ml min-1

57

Chapitre II : Matriels et Mthodes Volume inject : 50 L Tampon A : eau milli-Q+ 0.1% acide trifluoro actique (TFA) Tampon B : un mlange eau milli-Q (20%) + actonitrile (80%) + TFA (0.096%) Gradient de sparation : La sparation de l-La et de la -Lg est obtenue par le gradient suivant : 0-14 min : 52%A-48%B ; 15-16 min : 39%A-61% ; 17-23 min : 0%A-100%B ; 24-34 min : 52%A-48%B. Dtection : La dtection est effectue par un dtecteur UV 280 nm. Ltalonnage de la colonne est ralis sur des solutions talons d-La+ -Lg et est vrifi au dbut de chaque campagne de dosages. La Figure II.7 montre un chromatogramme et la Figure II.8 les courbes dtalonnage.
a-Lactalbumine

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Absorbance 280 nm

-Lactoglobuline

4.2 min

8.2 min

Temps (min)

Figure II.7. Chromatogramme dun mlange d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline pures, en utilisant acetonitrile comme ractif.

58

Chapitre II : Matriels et Mthodes

0,5 0,45 0,4 Concentration (g/L) 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 0 100000 200000 300000 400000 500000
2

C-Lg = 1,1619E-06A R = 0,99965

2

C-La = 6,4433E-07A R = 0,99953

2

a-La b-Lg

600000

700000

800000

Aire pic (mm )

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure II.8. Courbes dtalonnage d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline. Pour le calcul des concentrations des protines solubles, nous avons utilis les quations qui apparaissent sur la Figure II.8. C La = 6,4433 10 7 A
C Lg = 1,1619 10 6 A

R2 = 0.9953 R2 = 0.9965

(II.20) (II.21)

o A est laire sous le pic en mm2. Lerreur relative sur le calcul des concentrations est estime 5 %. A cause de la pnurie dacetonitrile la fin du 2008, nous avons remplac ce solvant par du mthanol. Les tampons ont t prpars avec la mme proportion, mais nous avons chang le gradient de sparation afin davoir une meilleure rsolution. Ce gradient est : 0 min: 30% A70% B; 5 min: 20% A-80% B; 10 min: 10% A-90% B; 15 min: 0% A-100% B; 25 min: 20% A80% B; 30 min: 30% A-70% B; 35 min: 30% A- 70% B. Les concentrations d-La et de -Lg dans ce cas, sont donc calcules par : C La = 6,8906 10 7 A
C Lg = 7,8615 10 7 A

R2 = 0,9846 R2 = 0,9803

(II.22) (II.23)

La Figure II.9 montre un chromatogramme des protines pures quand le mthanol a t utilis comme ractif au lieu de lacetonitrile.

59

Chapitre II : Matriels et Mthodes

-Lactalbumine

Absorbance 280 nm

-Lactoglobuline

10 min 13 min

Temps (min)

Figure II.9. Chromatogramme dun mlange d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 pures, en utilisant mthanol comme ractif. La transmission des protines solubles a t calcule par :
Tr = Cp Cr

(II.24)

o Cp et Cr sont les concentrations de protines, respectivement dans le permat et le rtentat en g.L-1. Dans ce travail nous avons seulement calcul la transmission des deux protines cibles : l-La et la -Lg. La slectivit a t calcul par : S= Tr La Tr Lg (II.25)

La rcupration a t calcule par : Y= V p , c C p ,c Vi C i (II.26)

o Vp,r est le volume finale (L) dans le permat (p) ou dans le rtentat (r), Cp,r est la concentration de protines (g.L-1) dans le permat (p) ou dans le rtentat (r), Vi le volume initial (L) et Ci la concentration initiale de protines (g.L-1). II.5.3. Prparation des chantillons. Avant dinjecter les chantillons dans lHPLC ceux-ci ont suivi un prtraitement afin dviter la prsence de casine dans les chantillons. A chaque chantillon, nous avons additionn de lacide actique (solution 10% m/v) pour provoquer la chute du pH jusqu une valeur proche de 4,3. Aprs 5 minutes de 60

Chapitre II : Matriels et Mthodes stabilisation, nous avons rajout une solution dactate de sodium (M) afin de remonter le pH au pI des casines (4.6), achevant ainsi leur prcipitation. Aprs 20 minutes de stabilisation 40 C, les chantillons ont t filtrs avec des filtres seringue (Minisart RC 25.Sartorius) pour sparer la phase soluble du coagulum. II.5.4. Mesures de viscosit du lait La viscosit dynamique des laits UHT et pasteuris a t mesure par un viscosimtre cylindres coaxiaux (Rheostress Rheometer) dans une gamme de taux de cisaillement comprise entre 500 et 1500 s-1 sur des chantillons du lait UHT, du lait pasteuris, des rtentat et de permat diffrents FRV. Les valeurs de viscosit ont t utilises pour raliser ltude de rsistances lors de la concentration du lait et de lactosrum. II.6. Prtraitement de la membrane PVDF Selon les spcifications donnes par le fournisseur des membranes PVDF, elles doivent tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 suivre un prtraitement avant utilisation. Ce prtraitement consiste tremper la membrane dans une solution dthanol pendant 1 h avant utilisation. Aprs le prtraitement la membrane a t nettoye avec de leau dminralise. II.7. Protocole de nettoyage des membranes et du systme. Les membranes cramiques, tout comme les membranes organiques de PVDF, ont t nettoyes aprs utilisation. Nous avons utilis le protocole de nettoyage suivant lors des essais : Rinage du circuit avec de leau dminralise pour vacuer le lait Nettoyage avec une solution P3-Ultrasil 10 (ECOLAB) une concentration de 0,5% (pH 11). Pendant 1h en circuit ferm et 5 min en circuit ouvert (vidange du systme) Rinage du circuit avec de leau dminralise jusqu obtention du pH initial (7,0). Aprs rinage la permabilit des membranes a t mesure. Nous avons observ dans tous les cas que la permabilit initiale augmente aprs le nettoyage. Pour le nettoyage du systme sans membranes, nous avons suivi le mme protocole dcrit prcdemment, mais en enlevant au pralable la membrane et les disques pour le module disque rotatif et le MSD, quand ils ont t munis de disques mtalliques. II.8. Protocole opratoire des essais effectus. Les essais effectus au cours de cette tude ont tous t raliss suivant le protocole cidessous Calibration des capteurs de pression.

61

Chapitre II : Matriels et Mthodes Mise en place de la membrane ou des membranes (Module MSD) et mesure de sa permabilit avec de leau dminralise. Nous avons vid ensuite compltement le circuit en faisant fonctionner la pompe dalimentation vide. Lalimentation se fait partir du rcipient contenant la solution filtrer (lait crm et permats). Cette solution est pralablement chauffe jusqu ce que la temprature de travail soit atteinte, en utilisant une plaque chauffante. Le bac dalimentation tant muni dune double enveloppe et dun serpentin, cest lui qui assurera le maintien de la temprature. Pour le cas du systme MSD nous avons vid le carter afin denlever leau restante avant dalimenter le systme. Lors du dmarrage de la pompe nous avons, selon le type de module, mis en rotation les disques ou les membranes, ou mis en route les vibrations. Les tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 premiers 200 ml de solution, dilus par leau qui stagnait dans le circuit du VSEP sont rcuprs puis jets. Le module disque rotatif tant quip dune purge, il nest pas ncessaire deffectuer cette opration. Pour le module MSD nous avons rcupr, puis jet, les premiers 500 ml de solution. La premire tape consiste tudier linfluence de la PTM sur le flux (J=f(PTM)). Pour cela, la PTM est fixe et nous avons attendu la stabilisation du flux pour chaque valeur de la PTM. Le temps de stabilisation est variable pour chaque membrane organique. Nous avons pris des chantillons de permat pour chaque PTM, afin de mesurer leur turbidit puis de les analyser par HPLC. Une fois obtenus les rsultats de transmission de protines et de rtention de casines, nous avons choisi la vitesse de rotation, ou la frquence de vibration et la PTM pour effectuer les essais de concentration. Cette fois, nous suivons lvolution du flux en fonction du FRV (J=f(FRV))

62

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

CHAPITRE III : SEPARATION DES CASEINES PAR MICROFILTRATION : COMPARAISON DES MODULES MSD ET A DISQUE ROTATIF.

62

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Cette partie est consacre la premire tape du procd propos et qui correspond ltude de la microfiltration de lait (cadre pointill sur la Figure III.1). Cette tape de microfiltration a comme objectif, dans cette tude, la sparation des casines des protines de lactosrum. Nous avons test deux systmes de filtration dynamique : le module MSD et le module disque rotatif. Nous allons comparer les rsultats obtenus avec ces deux modules. Le pilote MSD navait pas encore t utilis avec du lait et nous verrons par la suite les avantages de ce module en comparaison avec les modules filtration tangentielle et les autres systmes dynamiques. Nous avons valu de nombreux paramtres (cisaillement, pression) pour trouver des conditions optimales de fonctionnement de ces modules pour obtenir la fois une rtention de casines et une transmission de protines de lactosrum maximales.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure III.1. Schma du procd propos pour le fractionnement des protines du lait. III.1. Essais sur le module MSD. La sparation a t teste sur le module MSD avec du lait UHT crm et du lait pasteuris crm. Dans un premier temps, nous avons utilis du lait UHT crm dans les essais car ce lait est plus facilement disponible sur le march et sa dure de conservation est suprieure celle du lait pasteuris. Par la suite nous montrerons les rsultats de performances du module MSD avec du lait UHT, que nous comparerons ceux obtenus avec du lait pasteuris. Cette comparaison a t ralise dans le but de savoir si le lait UHT pourrait tre utilis comme fluide modle, lors de la sparation de micelles de casines. III.1.1. Essais avec lait UHT crm Le module MSD a quatre configurations possibles : a) 6 disques cramiques sur chacun des arbres b) 6 disques cramiques sur 1 arbre. c) 6 disques cramiques sur le premier arbre et 6 disques mtalliques lisses sur le deuxime arbre. 63

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif d) 6 disques cramiques sur le premier arbre et 6 disques mtalliques ailettes sur le deuxime arbre. Nous avons tudi ces cas afin de connatre les effets des disques mtalliques sur les performances. Nous prsentons ici les rsultats obtenus. III.1.1.1. Variation du flux, de la rtention de casines et des transmissions de protines solubles avec la PTM FRV = 1. Dans une premire tape nous avons tudi les trois configurations dcrites prcdemment FRV = 1 et nous avons vari la PTM, afin de dterminer la configuration et conditions opratoires optimales pour la sparation de casines. Pour cela, nous avons fixe la PTM et nous avons attendu la stabilisation du flux avant de monter au prochain palier de PTM. Nous avons observ que la stabilisation du flux avec les membranes cramiques est denviron 10 tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 min. III.1.1.1.1. Comparaison entre les configurations 6 disques cramiques sur 1 arbre et 6 disques cramiques plus 6 disques lisses. Nous comparons ici les performances de module MSD dans les configurations de 6 disques cramiques sur 1 arbre, et 6 disques cramiques sur le premier arbre et 6 disques mtalliques lisses sur le deuxime arbre. Ces essais sont raliss en changeant les vitesses de rotation des disques cramiques (Nc) et des disques mtalliques lisses (Nm_l). Le taux cisaillement gnr par ces disques est plus faible que celui gnr par les disques ailettes. La Figure III.2 montre le flux de permat en fonction de la PTM pour deux essais avec des disques cramiques seuls (symboles pleins), et deux essais avec des disques mtalliques sur le deuxime arbre (symboles creux).

64

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
140 120 100 J (L.h .m )
-2

Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40C. Q = 3 L/min.

80 60 40 20 0 0 50 100 150 200 PTM (kPa)

Nc: 1931 tr/min Nc: 1044 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_l: 560 tr/min Nc: 1194 tr/min; Nm_l: 306 tr/min

-1

250

300

350

400

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure III.2. Evolution du flux en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques lisses. Nm_l : vitesse de rotation de disques mtalliques lisses, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques. Le flux de permat est plus faible avec les disques mtalliques que sans eux. Par exemple, Nc = 1931 tr.min-1 et Nm_l = 560 tr.min-1, le flux de permat maximum a t de 95 L.h-1.m-2, au lieu des 132 L.h-1.m-2 obtenus sans disques mtalliques, les disques cramiques tournant 1931 tr.min-1. Ce phnomne est aussi observ faibles vitesses de rotation, avec un flux maximal de 49 L.h-1.m-2 Nc = 1194 tr.min-1 et Nm_l = 306 tr.min-1, au lieu de 62 L.h-1.m-2 obtenus avec seulement 6 disques cramiques 1044 tr.min-1. Dans tous les cas nous avons obtenu une PTM limite de 70 kPa, ce qui suggre que cette pression ne varie pas avec la configuration du systme, et semble donc plus en relation avec le fluide filtrer. Nous observons que le flux de permat diminue en prsence des disques. Deux hypothses peuvent tre faites pour expliquer ce comportement. La premire est une dstabilisation des micelles de casine cause par les taux de cisaillement gnrs par les disques mtalliques. Les micelles des casines sont formes de sous-micelles denviron 5106 Da lis entre elles avec du phosphate de calcium collodal (Farrel, 1999; Fox, 2003), ces liaisons pourraient tre casss par les taux de cisaillement formant ainsi ces sous-micelles. Les sous micelles, tant par nature plus petits que les micelles, elles pourraient colmater plus facilement les pores de la membrane, diminuant ainsi le flux de permat. Une deuxime hypothse serait une diminution de 65

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif la PTM locale, provoque pour laugmentation de vitesse du fluide entre les disques membranaires et les disques mtalliques. Engler & Wiesner (2000), ont observ un phnomne similaire en utilisant un disque membranaire rotatif. Ce comportement a t attribu une contrepression lie aux forces centrifuges, en rduisant la pression la sortie de laxe et en augmentant la pression lentre de la membrane. Comme laugmentation lentre est moins importante qu la sortie, due en partie la perte de charge travers de la membrane, le rsultat net est une diminution de la PTM locale et donc une diminution du flux de permat. Pour valuer la rtention de micelles de casines, nous avons suivi la turbidit des permats en fonction de la PTM diverses vitesses de rotation. Les rsultats sont tracs sur la Figure III.3. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009
60 50 Turbidit (NTU) 40 30 20 10 0 0 100 200 PTM (kPa) 300 400 500
Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40 Q = 3 L/min. C.

Nc: 1931 tr/min Nc: 1044 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_l: 569 tr/min Nc: 1194 tr/min: Nm_l: 306 tr/min Valeur turbidit admissible

Figure III.3. Turbidit du permat en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques lisses. Nm_l : vitesse de rotation de disques mtalliques lisses, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques. La turbidit du permat a augment de 70% pour une vitesse de rotation de 1931 tr.min-1 en prsence de disques mtalliques, sans doute cause du taux de cisaillement qui augmente la transmission des micelles de casines. Cependant la turbidit a atteint des valeurs infrieures la valeur maximale admissible (50 NTU) pour toutes les vitesses de rotation. Cette augmentation de la turbidit due aux taux de cisaillement levs a aussi t observe par Akoum (2003) pendant la 66

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif MF du lait utilisant un module VSEP une frquence de 60,75 Hz et des membranes en PTFE et en Nylon de 0,1 m. Selon lauteur, le taux de cisaillement lev gnr 60,75 Hz ne permettait pas de crer un dpt des micelles sur la membrane, lequel se comporterait comme une couche filtrante additionnelle, en augmentant ainsi la rtention des micelles de casines.
0,9 0,8 0,7 0,6 Tr -La 0,5 0,4 0,3
Nc: 1931 tr/min Nc: 1044 tr/min Nc: 1931 tr/min: Nm_l: 560 tr/min Nc: 1194 tr/min; Nm_l: 306 tr/min

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

0,2 0,1 0 0 50 100 150 200 PTM (kPa) 250 300 350 400
Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40 Q = 3 L/min. C.

Figure III.4. Transmissions d-La en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques lisses. Nm_l : vitesse de rotation de disques mtalliques lisses, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques.

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Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
0,7 0,6 0,5 Tr -Lg 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 50 100 150
Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40 Q = 3 L/min. C. Nc: Nc: Nc: Nc: 1931 tr/min 1044 tr/min 1931 tr/min; Nm_l: 560 tr/min 1194 tr/min; Nm_l: 306 tr/min

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

200 PTM (kPa)

250

300

350

400

Figure III.5. Transmission de -Lg en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques lisses. Nm_l : vitesse de rotation de disques mtalliques lisses, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques. La Figure III.4 montre la transmission d-La en fonction de la PTM. Nous observons qu faible PTM la transmission augmente de 0,48 0,73 en prsence des disques mtalliques, puis elle diminue avec la PTM en obtenant des valeurs moyennes de 0,4. La transmission de -Lg (Figure III.5) a suivi aussi la mme tendance, augmentant faible PTM de 0,45 0,56. A partir dune PTM 250 kPa, la transmission se maintient constante environ 0,25. Le comportement suivi par les deux protines indique que leffet des taux de cisaillement nest pas trs important quand nous travaillons des PTM suprieures la PTM critique. III.1.1.1.2. Comparaison entre les configurations 6 disques cramiques sur 1 arbre et 6 disques cramiques plus 6 disques mtalliques ailettes. Cette comparaison a t effectue afin de savoir si la configuration comprenant 6 disques mtalliques ailettes donne une meilleure performance que la configuration avec 6 disques sur 1 arbre. Les essais sont effectus en changeant les vitesses de rotation des disques mtalliques ailettes (Nm_a) et en maintenant les disques cramiques la mme vitesse de rotation (Nc), 1931 tr.min-1. La Figure III.6 montre le flux de permat en fonction de la PTM.

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Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
140 120 100 J (L h m )
-2

Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40C. Q = 3 L/min.

80 60 40 20 0 0 50 100

-1

Nc: 1931 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 1069 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 569 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 69 tr/min

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

150 PTM (kPa)

200

250

300

Figure III.6. Evolution du flux de permat en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques ailettes. Nm_a : vitesse de rotation de disques mtalliques ailettes, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques. Nous observons le mme comportement quavec les disques mtalliques lisses, les flux de permat sont entre 26 et 79% plus faibles quavec les 6 disques cramiques sur un arbre. Cependant, le flux de permat augmente avec la vitesse de rotation de disques mtalliques ailettes (Nm_a), d laugmentation du taux de cisaillement. Nous observons que la PTM limite est atteinte vers 120 kPa pour toutes les vitesses de rotation. A la PTM critique, le flux a augment de 64 L.h-1m-2 une Nm_a de 69 tr.min-1 90 L.h-1.m-2 une Nm_a de 1069 tr.min-1. Nos rsultats sont en dsaccord avec les rsultats dHe et al. (2007). En effet, ils avaient montr que le fait dajouter des disques mtalliques avec ailettes augmentait de 67% le flux de permat sur une suspension de CaCO3 200 g.L-1. Les diffrences avec nos rsultats sont dues probablement au fait que le lait est un fluide plus complexe que le CaCO3, dont plusieurs de ses composants peuvent colmater les pores des membranes et donc diminuer le flux de permat. Comme nous lavons dj voqu, une dstabilisation des micelles de casines a pu avoir lieu, colmatant ainsi la membrane. La turbidit en fonction de la PTM est montre sur la Figure III.7.

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Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
500 450 400 Turbidit (NTU) 350 300 250 200 150 100 50 0 0 50 100
Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40 Q = 3 L/min. C. Nc: 1931 tr/min Nc: 1492 tr/min Nc: 1044 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 1069 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 569 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 69 tr/min

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

150 200 PTM (kPa)

250

300

350

Figure III.7. Turbidit du permat en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques ailettes. Nm_a : vitesse de rotation de disques mtalliques ailettes, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques. Les turbidits ont t trs leves en comparaison de celles obtenues avec les 6 disques cramiques sur un arbre. Ceci semble confirmer notre hypothse de dstabilisation des micelles de casines, car laugmentation de turbidit a pu tre cause par la prsence de sous micelles dans le permat. Une autre explication est que laugmentation du taux de cisaillement empche la formation dun dpt sur la membrane, lequel agirait comme une membrane secondaire. Si nous analysons seulement leffet de la vitesse de rotation des disques mtalliques (Nm_a), nous constatons que, pour toutes les vitesses de rotation des disques mtalliques, la turbidit diminue avec la PTM. Nos avons obtenu des valeurs de turbidit trs proches pour chaque vitesse du disque mtallique une mme PTM, ce qui suggre que ce nest pas la vitesse de rotation des disques mtalliques qui influence la transmission de micelles de casines, mais la PTM. Une PTM plus leve augmente laccumulation des protines sur la surface de la membrane et/ou entre les pores, formant ainsi une couche filtrante additionnelle.

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Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
0,7 0,6 0,5 Tr -La 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 50 100
Nc: Nc: Nc: Nc: 1931 tr/min 1931 tr/min; Nm_a: 1069 tr/min 1931 tr/min; Nm_a: 569 tr/min 1931 tr/min; Nm_a: 69 tr/min Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40 Q = 3 L/min. C.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

150 PTM (kPa)

200

250

300

Figure III.8. Transmission d-La en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques ailettes. Nm_a : vitesse de rotation de disques mtalliques ailettes, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques.
0,8 0,7 0,6 0,5 Tr -Lg 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0
Nc: 1931 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 1069 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 569 tr/min Nc: 1931 tr/min; Nm_a: 69 tr/min Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 40 Q = 3 L/min. C.

50

100

150 PTM (kPa)

200

250

300

Figure III.9. Transmissions de -Lg en fonction de la PTM pour deux configurations du module MSD : 6 disques cramiques sur un arbre et 6 disques cramiques+6 disques mtalliques ailettes. Nm_a : vitesse de rotation de disques mtalliques ailettes, Nc : vitesse de rotation de disques cramiques.

71

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif La Figure III.8 montre la transmission d-La en fonction de la PTM. La transmission de -Lg en fonction de la PTM est reprsente sur la Figure III.9. Nous observons que les transmissions pour les deux protines augmentent avec la vitesse de rotation des disques mtalliques. Cela est d laugmentation du taux de cisaillement. Nous avons obtenu une transmission maximale d-La de 0,56 220 kPa et Nm_a = 1069 tr.min-1. Pour le cas de la -Lg, la transmission maximale a t de 0,67 131 kPa et Nm_a = 1069 tr.min-1. Les transmissions sont plus leves que celle obtenues avec 6 disques cramiques, lesquelles ont t entre 0,35 et 0,50 pour l-La et entre 0,3 et 0,40 pour la -Lg. Le fait davoir plus de transmission pour le cas de la -Lg avec les disques ailettes, suggre que le taux de cisaillement produit par les disques mtalliques aurait un effet sur les interactions entre la k-casine et la -Lg. Quand la -Lg est dnature, elle ragit via linteraction sulphydryl disulphide avec dautres protines, spcialement tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 avec la k-casine (Hui, 2006). Dans le traitement UHT, la -Lg est la protine la plus affecte, conduisant la fin du traitement environ 65% de protine dnature (Miralles et al., 2000). Elle serait donc davantage lie la k-casine. Nous avons aussi vu prcdemment que la turbidit tait plus leve en prsence des disques mtalliques cause dune probable dstabilisation des micelles de casines. Si les micelles de casines sont dstabilises, les interactions entre la kcasine et la -Lg le seront aussi, provoquant ainsi une transmission plus leve de cette protine. Conclusions En comparant les rsultats obtenus avec et sans disques mtalliques, nous pouvons conclure que les disques mtalliques nont pas eu leffet escompt. En effet, ils ont augment les transmissions de protines, mais ils ont aussi augment la transmission de micelles de casine, paramtre que nous devons limiter le plus possible. Les flux de permat ont t plus faibles en utilisant des disques mtalliques. Deux hypothses ont t proposes pour ce phnomne. La premire est une dstabilisation des micelles de casines provoque par le taux de cisaillement. Cette dstabilisation consiste en la formation de sous micelles de casines dune taille plus petite, lesquelles ont colmat la membrane, rduisant ainsi les flux de permat. La deuxime hypothse est la diminution de la PTM locale o les disques membranaires et les disques mtalliques se recouvrent, cause de laugmentation de la vitesse la priphrie de la membrane. Comme nous navons pas obtenu des bons rsultats avec lutilisation de disques mtalliques, nous avons dcid de ne pas raliser des essais avec la premire configuration (6 disques cramiques sur chaque arbre, soit 12 membranes). Le fait dutiliser 12 membranes peut

72

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif occasionner une surconcentration entre lentrefer des membranes, qui diminuerait le flux et la transmission des protines. Nous avons dcid de continuer nos essais en utilisant seulement 6 disques cramiques sur un arbre, car cest cette configuration qui a donn les meilleure performances en terme de rtention de micelles de casines et de transmission de protines solubles. III.1.1.2. Variation du flux, de la rtention de casines et des transmissions de protines de lactosrum avec le FRV. Pour ces essais nous avons test 2 vitesses de rotation des membranes : 1931 et 1044 tr.min-1. Les conditions opratoires des essais sont donnes sur le Tableau III.1. Les trois essais ont t raliss une PTM infrieure 60 kPa afin de limiter le colmatage de la membrane. Tableau III.1. Conditions opratoires des essais de concentration de lait UHT crm.
Essai 1 2 3 N (tr.min-1) 1044 1931 1931 PTM (kPa) 55,25,8 59,31,9 58,64,7 Volume initial (L) 11 11 9 Volume permat (L) 8 8,5 6,1 Volume rtentat (L) 2,9 2,3 2,7 FRVmax 3,8 4,2 3,2 C -La initial (g.L-1) 0,398 0,547 0,314 C -Lg initial (g.L-1) 0,139 0,196 0,134

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

La Figure III.10 montre le flux de permat en fonction du ln(FRV).

120 100 80 J (L.h m )
-2 -1.

Essai 1; 1044 tr/min Essai 2; 1931 tr/min Essai 3; 1931 tr/min

X

JEssai 1 = -23,91Ln(FRV) + 53,88 R = 0,994 JEssai 2 = -47,04Ln(FRV) + 103,23 R = 0,988 JEssai 3 = -48,95Ln(FRV) + 106,68 R = 0,994
2 2 2

60 40 20
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. 60 kPa. Q = 3 L/min. T = 40C

max1044= 8,42 10 s

-1

4 -1 max1931= 9,87 10 s

0 1 FRV 10

Figure III.10. Evolution du flux de permat lors de la concentration de lait UHT crm deux vitesses de rotation des membranes.

73

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Nous observons qu partir dun FRV suprieur 1,2 les flux diminuent linairement avec le logarithme nprien du FRV selon la thorie de polarisation de concentration de Blatt et al., (1970), montrant que les flux sont limits par le transfert de matire. Les flux des deux essais raliss 1931 tr.min-1 se superposent, indiquant la reproductibilit des essais. La pente, qui reprsente le coefficient de transfert de matire, est plus faible pour lessai 1044 tr.min-1 (23,91 L.h-1.m-2) que celles des essais 1931 tr.min-1 (47,04 et 48,95 L.h-1.m-2), d laugmentation du taux de cisaillement. La diminution du flux de permat dans lessai 1 et 2 FRV suprieure 3,5 est due laugmentation de la viscosit du lait ce FRV, comme cela a t dj observ par Akoum et al., (2003).
300
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. 60 kPa. Q = 3 L/min. T = 40C

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

250 Turbidit (NTU) 200 150 100 50 0 1 1,5 2 2,5 FRV 3 3,5 4 4,5

Essai 1; 1044 tr/min Essai 2; 1931 tr/min Essai 3; 1931 tr/min

Figure III.11. Evolution de la turbidit lors de la concentration de lait UHT crm deux vitesses de rotation des membranes. La variation de la turbidit avec le FRV est montre sur la Figure III.11. Nous observons que la turbidit diminue rapidement avec le FRV jusqu une valeur de 1,5 NTU, cause de la formation dune couche secondaire de protines sur la membrane qui diminue leur transmission. Des turbidits plus faibles sont observes 1044 tr.min-1, parce qu faible rotation, la formation de la couche de protines sur la membrane est favorise ; do la diminution de la transmission de micelles de casines et le coefficient de transfert de matire plus faible observ (Balakrishnan & Agarwal, 1996). Ceci est mis en vidence sur la Figure III.10 o la pente de lessai 1044 tr min-1 est 2 fois plus faible qu 1931 tr.min-1. 74

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
1 0,9 0,8 0,7 Tr -La 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. 60 kPa. Q = 3 L/min. T = 40 C Essai 1; 1044 tr/min Essai 2; 1931 tr/min Essai 3; 1931 tr/min

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

1,5

2,5

FRV

3,5

4,5

Figure III.12. Transmission d-La lors de la concentration de lait UHT crm.

1 0,9 0,8 0,7 0,6 Tr -Lg 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1 1,5 2 2,5 FRV 3 3,5 4 4,5
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. 60 kPa. Q = 3 L/min. T = 40 C Essai 1; 1044 tr/min Essai 2; 1931 tr/min Essai 3; 1931 tr/min

Figure III.13. Transmission de -Lg lors de la concentration de lait UHT crm. La Figure III.12 et la Figure III.13 prsentent respectivement la variation des transmissions d-La et de -Lg avec le FRV. Les transmissions d-La obtenues 1931 tr.min-1 sont plus leves qu 1044 tr.min-1. Elles demeurent relativement constantes entre 0,8 et 0,9 1931 tr.min-1, alors quelles diminuent de 0,70 0,50 entre FRV 1 et FRV 3 1044 tr.min-1. Pour la -Lg les transmissions sont galement quasi constantes (0,8 et 0,9) 1931 tr.min-1, alors qu 1044 tr.min-1, leur chute est plus marque (de 0,95 0,4). 75

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Les variations de concentration d-La et de -Lg dans le permat avec le FRV sont montres respectivement sur la Figure III.14 et la Figure III.15.
0,6 Concentration d'-La dans le prmeat (g/L)

0,5

0,4

0,3
Essai 1; 1044 tr/min Essai 2; 1931 tr/min Essai 3; 1931 tr/min

0,2

0,1
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. 60 kPa. Q = 3 L/min. T = 40C

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

0 1 1,5 2 2,5 FRV 3 3,5 4 4,5

Figure III.14. Concentration d-La dans le permat lors de la concentration de lait UHT crm.
0,3 Concentration de -Lg dans le prmeat (g/L) 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 1 1,5 2 2,5 FRV 3 3,5 4 4,5
Essai 1; 1044 tr/min Essai 2; 1931 tr/min Essai 3; 1931 tr/min MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. 60 kPa. Q = 3 L/min. T = 40 C

Figure III.15. Concentration de -Lg dans le permat lors de la concentration de lait UHT crm. Les concentrations dans lessai 2 pour les deux protines sont plus leves que pour les autres essais, car leurs concentrations initiales ltaient galement. 76

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Les concentrations initiales et finales d-La et de -Lg dans le permat et dans le rtentat sont dtailles sur le Tableau III.2. Les valeurs varient entre les essais, mme si le lait tait de la mme marque. Ceci est d la variabilit de la composition du lait avec la saison, il faut tenir compte du fait que les trois essais ont t raliss 1 mois dintervalle entre lessai 1 et lessai 2, et avec 3 mois entre lessai 2 et 3. Une autre explication peut tre apporte par lerreur de mesures. Les concentrations finales dans le rtentat ont t plus leves que la concentration initiale, except dans lessai 1044 tr.min-1 o nous avons obtenu une transmission plus faible. La cohrence de ces concentrations peut tre vrifie dans le Tableau III.3 qui montre les masses totales dans le permat et dans le rtentat et leur bilan de matire. Tableau III.2. Concentrations initiale et finale d-La et de -Lg, lors de la concentration tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 de lait UHT crm.
Essai 1 2 3 C -La (g.L-1) Rtentat Rtentat Permat initial final final 0,398 0,608 0,309 0,547 0,992 0,420 0,314 0,371 0,288 C -Lg (g.L-1) Rtentat Rtentat Permat initial final final 0,134 0,183 0,090 0,196 0,463 0,115 0,134 0,233 0,091

Tableau III.3. Masse initiale et finale d-La et de -Lg dans le permat et le rtentat, lors de la concentration de lait UHT crm.
Essai 1 2 3 Masse initiale (g) -La -Lg 4,378 1,474 6,017 2,156 2,826 1,206 Masse finale dans le rtentat (g) -La -Lg 1,763 0,531 2,282 1,003 1,002 0,629 Masse finale dans le permat (g) -La -Lg 2,472 0,720 3,570 0,977 1,757 0,555 Masse totale finale (g) -La -Lg 4,235 1,251 5,852 1,980 2,759 1,184

Nous avons calcul la rcupration, Y (quation II.28), d-La et de -Lg la fin de la concentration, les rsultats figurent sur le Tableau III.4. La rcupration de -Lg est plus faible que celle d-La dans les essais 1 et 2 cause des transmissions plus faibles, tandis que le rendement dans lessai 3 pour la -Lg a t plus lev du des transmissions plus leves obtenues.

77

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Tableau III.4. Rcupration d-La et de -Lg dans le permat lors de la concentration de lait UHT crm. Essai FRVmax 1 2 3
3,8 4,2 3,2

Y dans le permat -La -Lg 0.57 0.49 0.59 0.45 0.62 0.46

III.1.2. Essais avec du lait pasteuris crm. Nous avons effectu des essais avec du lait pasteuris dans le but de nous approcher des conditions industrielles et aussi de savoir si le lait UHT crm pourrait tre utilis comme fluide modle, lors de la sparation de micelles de casines. Comme nous lavons constat pendant la MF de lait UHT crm, la meilleure performance a t obtenue avec le module MSD et les tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 membranes cramiques de 0,2 m, cest pour cela que nous avons dcid de raliser tous les essais de validation avec le module MSD muni de 6 membranes cramiques de 0,2 m sur un arbre. Nous avons ralis ltude de lvolution du flux en fonction du FRV une PTM et vitesse de rotation fixe. Trois essais ont t effectus une PTM de 60 kPa et une vitesse de rotation de 1931 tr.min-1, afin davoir des conditions identiques celles utilises avec le lait UHT pour valider le procd. Nous avons dj observ, quavec le lait UHT crm, les meilleurs flux de permat et transmissions de protines solubles ont t obtenus 60 kPa et 1931 tr.min-1. Les caractristiques de chaque essai sont dtailles sur le Tableau III.5. Afin davoir un FRV plus lev et daccrotre les quantits de matire rcupres, nous avons travaill avec un volume initial de lait plus lev. Comme la capacit du rservoir dalimentation est de 10 L, nous avons ajout du lait pour atteindre le volume initial du lait dsir. Dans le cas de lessai 1, 3,5 L de lait ont t ajouts aprs 14 min de filtration, pour lessai 2 nous avons ajout 5 L aprs 17 min de filtration puis aprs 70 min pour obtenir un total de 20 L. Finalement pour lessai 3, nous avons ajout 5 L 42 min et 4,5 L 84 min pour obtenir un volume total de 19,5 L.

78

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Tableau III.5. Caractristiques des essais de MF de lait pasteuris. Essai 1 2 3 Initial Final Initial Final Initial Final Volume rtentat (L) 13,5 3,86 20,0 4,58 19,5 3,60 Volume permat (L) 0 9,63 0 15,41 0 15,80 FRV 1 3,5 1 4,37 1 5,41 T (C) 45 45 40

Les concentrations et masses d-La et de -Lg, ainsi que la concentration de protines totales sont donnes sur le Tableau III.6. Nous constatons que les concentrations d-La et de Lg sont plus leves que celles du lait UHT (Tableau III.2), ce qui confirme que les protines solubles sont dnatures pendant le traitement UHT. Comme les laits ont t prlevs des jours tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 diffrents, nous avons observ une lgre variation dans les concentrations initiales pour les deux protines solubles. Tableau III.6. Concentration et masse d-La et de -Lg et concentration de protines totales, lors de la MF de lait pasteuris. Essai C -La (g.L-1) M -La (g) C -Lg (g.L-1) M -Lg (g) Protine totale (g.L-1) 30 30 30

1 2 3

R P R P R P R P I 1,228 16,583 2,471 33,359 F 1,902 0,959 3,709 9,248 3,184 2,187 12,306 21,079 I 1,279 25,587 1,719 34,381 1,346 13,671 20,740 F 1,750 1,140 8,032 17,567 2,978 I 1,385 27,016 1,898 37,011 F 1,416 1,387 5,099 21,965 2,522 1,767 9,080 27,992 C : concentration, R : rtentat, P : permat, M : masse, I : initial, F : final.

La Figure III.16 prsente lvolution des flux de permat pour les trois essais avec le logarithme nprien du FRV.

79

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
100 90 80 70 J (L.h .m )
-2

Essai 1 Essai 2 Essai 3

JEssai1 = -40,8Ln(FRV) + 88,9 R = 0,9955 JEssai2 = -43,3Ln(FRV) + 94,6 R = 0,9925 JEssai3 = -37,4Ln(FRV) + 83,5 R = 0,9938
2 2 2

60 50 40 30 20 10 0

-1

MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait pasteuris crm. 1931 tr/min. PTM = 60 kPa. Q = 3 L/min.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

FRV

10

Figure III.16. Evolution du flux de permat avec le FRV (chelle semi-log). Les flux les plus levs ont t obtenus dans les essais 1 et 2, qui ont t effectus 45C. Nous pouvons observer que les flux de permat pour les trois essais diminuent linairement avec le ln(FVR), selon la thorie de polarisation de concentration de Blatt et al., (1970). Nous avons obtenu des valeurs de pente trs semblables entre lessai 1 et 2, par contre une diffrence a t observe pour lessai 3, sans doute parce que cet essai a t ralis une temprature plus faible (40C). Une bonne reproductibilit a t obtenue entre les essais 1 et 2.
200 180 160 Turbidit (NTU) 140 120 100 80 60 40 20 0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 FRV 3,5 4,0 4,5 5,0
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait pasteuris crm. 1931 tr/min. PTM = 60 kPa. Q = 3 L/min. Essai 1 Essai 2 Essai 3

Figure III.17. Turbidit du permat en fonction du FRV. MF du lait pasteuris. 80

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif La turbidit du permat (Figure III.17) a atteint des valeurs suprieures 50 NTU pour les trois essais. Nous observons une diminution de la turbidit partir de FRV = 2.5, ce qui est du la formation dune couche de protines sur la membrane. Mme si les turbidits sont leves, nous avons constat que, lors de lessai, le permat tait dune couleur jaune transparent, indiquant que nous navons pas eu de grandes transmissions de casines. Les transmissions d-La et de -Lg sont reprsentes respectivement sur la Figure III.18 et la Figure III.19.

1 0,9

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

0,8 0,7 0,6 Tr -La 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 FRV 3,5 4,0 4,5 5,0
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait pasteuris crm. 1931 tr/min. PTM = 60 kPa. Q = 3 L/min. Essai 1 Essai 2 Essai 3

Figure III.18. Transmission d-La en fonction du FRV. MF du lait pasteuris.

81

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
1 0,9 0,8 0,7 Tr -Lg 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1,0 1,5 2,0 2,5
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait pasteuris crm. 1931 tr/min. PTM = 60 kPa. Q = 3 L/min. Essai 1 Essai 2 Essai 3

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

3,0 FRV

3,5

4,0

4,5

5,0

Figure III.19. Transmission de -Lg en fonction du FRV. MF du lait pasteuris. Nous observons que les valeurs de transmissions pour les deux protines sont leves et elles ne varient pas ou trs peu avec le FRV. Pour le cas de l-La, nous avons obtenu les valeurs les plus leves au cours de lessai 3 (0,8-0,98). Les transmissions de -Lg ont t plus faibles que celles d-La car cette protine a un poids molculaire suprieur l-La, et se trouve galement lie la k-casine (Hui, 2006), ce qui la rend moins transmissible.
Concentration d'-La dans le permat (g/L) 2,5

2,0

1,5
Essai 1 Essai 2 Essai 3

1,0

0,5
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. 1931 tr/min. PTM = 60 kPa. Q = 3 L/min.

0,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 FRV 3,5 4,0 4,5 5,0

Figure III.20. Concentration d-La dans le permat lors de la MF de lait pasteuris.

82

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 1,0 1,5 2,0 2,5
Essai 1 Essai 2 Essai 3

Concentration de -Lg dans le permat (g/L)

MSD. Membranes cramiques 0,2 m. 1931 tr/min. PTM = 60 kPa. Q = 3 L/min.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

3,0 FRV

3,5

4,0

4,5

5,0

Figure III.21. Concentration de -Lg dans le permat lors de la MF de lait pasteuris. La Figure III.20 montre la concentration dans le permat d-La. Nous constatons que les concentrations d-La restent comprises entre 0,9 et 1,5 g.L-1 avec le FRV, exception de lessai 3 o la concentration augmente jusqu 2 g.L-1 FRV = 4,5. Cette augmentation est due aux transmissions leves observes (Figure III.18). Pour le cas de la -Lg (Figure III.21), nous observons le mme comportement que pour l-La. Les concentrations restent constantes avec le FRV, entre 1,5 et 2 g.L-1, exception de lessai 3 FRV > 3. Cela peut tre aussi expliqu par laugmentation de transmission de -Lg partir de FRV gal 3. Nous avons calcul le facteur de concentration (FC) pour chaque protine avec lquation suivante : FC = C Rf C Ri (III.1)

o CRf est la concentration dans le rtentat final et CRi est la concentration initiale. Le Tableau III.7 prsente les rsultats de FC et le taux de rcupration, Y (quation II.28), dans le permat pour chaque essai. Les facteurs de concentrations varient peu avec le FRV cause des transmissions leves. Les rcuprations ont augment avec le FRV, elles ont t plus leves pour l-La que pour la -Lg dans les essais 2 et 3 avec un FRV plus lev. Cependant la rcupration de -Lg dans lessai 1 avec un FRV plus faible a t suprieure celle de l-La.

83

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Tableau III.7. Facteur de concentration et rcupration des essais de MF de lait pasteuris. Essai 1 2 3 FRV 3,5 4,37 5,41 -La FC Y 1,548 0,56 1,367 0,68 1,022 0,81 -Lg FC Y 1,288 0,63 1,732 0,60 1,329 0,75

III.2. Comparaison des MF du lait pasteuris et du lait UHT utilisant le module MSD. Une comparaison des essais de concentration entre le lait pasteuris et le lait UHT a t faite, afin de vrifier si ce lait, plus disponible en magasin, peut tre utilis comme fluide modle tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 et ainsi prvoir les performances du procd. Le Tableau III.8 prsente les caractristiques pour chaque essai. Tableau III.8. Caractristiques des essais de concentration de lait pasteuris et lait UHT.
Essai 1 2 Lait Pasteuris UHT Initial Final Initial Final Volume rtentat (L) 19,50 3,66 11,00 2,56 Volume permat FRV (L) 0 5,32 15,83 0 4,30 8,44 max (s-1) 9,61104 9,87104 T (C) 40 40 C -La initiale (g.L-1) 1,85 0,547 C -Lg initiale (g.L-1) 1,898 0,297

Sur la Figure III.22 nous observons la comparaison des flux entre les deux types de lait.

84

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
120 100
JEssai1 = -37,11Ln(VRR) + 83,20

MSD. Membranes cramiques 0,2 m. 1931 tr/min. 60 kPa. 40 Q=3 L/min C.

80 J (L.h .m )
-2 -1

R = 0,9941 JEssai2 = -46,48Ln(VRR) + 102,27

60 40 20 0
Essai 1; past Essai 2; UHT

R = 0,9858

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

FRV

10

Figure III.22. Evolution du flux de permat avec le FRV (chelle semi-log). Comparaison entre lait pasteuris et lait UHT. Pour les deux types de lait, le flux varie linairement avec le logarithme nprien du FRV, indiquant que nous avons travaill dans le rgime limit par le transfert de matire. Les flux de permat obtenus avec le lait UHT sont un peu plus levs quavec le lait pasteuris, cause des concentrations infrieures en protines solubles, ce qui a pu provoquer une polarisation de concentration plus faible quavec le lait pasteuris. Nous raliserons une tude des rsistances afin de vrifier cette hypothse, dans les paragraphes suivants. Nous constatons que les pentes des droites des essais sont voisines, ce qui suggre que, pour des mesures de flux, le lait UHT peut tre utilis comme fluide modle lors de la concentration du lait crm par MF.

85

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
1,0 0,9 0,8 0,7 Tr -La 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 1,0 1,5 2,0 2,5
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. 1930 tr/min. 60 kPa. 40 Q=3 L/min C. Essai 1; past Essai 2; UHT

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

3,0 FRV

3,5

4,0

4,5

5,0

Figure III.23. Variation de la transmission d -La avec le FRV. Comparaison entre lait pasteuris et lait UHT.
1,0 0,9 0,8 0,7 Tr -Lg 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 FRV 3,5 4,0 4,5 5,0
MSD. Membranes cramiques 0,2 m. 1930 tr/min. 60 kPa. 40 Q=3 L/min C. Essai 3; past Essai 4; UHT

Figure III.24. Variation de la transmission de -Lg avec le FRV. Comparaison entre lait pasteuris et lait UHT. La transmission d-La (Figure III.23) se maintient constante entre 0,8 et 0,95 pour les deux essais. Il ne semble pas y avoir deffet du FRV sur la transmission. Pour le cas de la -Lg (Figure III.24), nous observons que les transmissions sont lgrement plus faibles dans les essais avec lait pasteuris quavec le lait UHT (0,7 contre 0,9). Cela est d au fait que, dans le lait 86

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif pasteuris, une concentration plus leve de -Lg par rapport au lait UHT est observe (Tableau III.9). Tableau III.9. Concentrations et masses d-La et de -Lg, pour les essais de MF de lait pasteuris et lait UHT. Essai M -La C -Lg M -Lg (g) (g.L-1) (g) R P R P R P R P 3 I 1,385 27,016 1,898 37,011 1,767 9,080 27,992 F 1,416 1,387 5,099 21,965 2,522 4 I 0,547 6,017 0,196 2,156 F 0,992 0,420 2,549 3,468 0,463 0,115 1,191 0,973 C : concentration, R : rtentat, P : permat, M : masse, I : initial, F : final. La comparaison entre les essais raliss avec le lait UHT et le lait pasteuris a donn une bonne reproductibilit en terme de flux et de transmission de protines, ce qui indique que le lait UHT peut tre utilis comme fluide modle lors de la microfiltration dynamique avec le module MSD. III.3. Comparaison des rsultats avec ceux en filtration tangentielle de la littrature Dans cette section nous raliserons une comparaison des performances obtenues sur le MSD avec les rsultats trouvs dans la bibliographie. Cependant, il faut tenir compte du fait que les fluides sont diffrents entre les essais effectus avec le module MSD et les donnes obtenues dans la bibliographie en filtration tangentielle. Nous faisons cette comparaison afin de voir les diffrences de performances entre les deux techniques. Le Berre & Daufin (1996) ont obtenu une transmission d-La entre 0,6 et 0,95 et un flux maximum de 75 L.h-1.m-2 50C, en utilisant une membrane cramique de 0,1 m Membralox, en PTMU (pression transmembranaire uniforme) et recirculation du permat 7,2 m.s-1, lors de la MF du lait crm thermis (63C, 15 s). A la fin des essais, la transmission d-La a diminu 0,30. En utilisant un systme similaire avec une membrane cramique Kerasep et du lait crm thermis (63C, 15 s), Gsan-Guiziou et al., (1999a) ont obtenu des transmissions entre 0,6 et 0,9 pour -La et entre 0,55 et 0,85 pour -Lg avec un flux de permat de 80 L.h-1.m-2 50C. Ils ont obtenu une turbidit entre 100 et 200 NTU FRV = 1. Punidadas & Rizvi (1998) ont utilis des membranes cramiques de 0,2 m et 0,05 m avec une vitesse dalimentation de 5,4 m.s-1 et ils ont obtenu une transmission de protines de 0,7 et un flux de permat de 92 L.h-1.m-2 50C et FRV = 2,5, lors de la MF du lait crm pasteuris. C -La (g.L-1)

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Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Gsan-Guiziou et al., (2000) ont observ une diminution de la transmission de -Lg de 0,95 0,5 aprs 3 h de filtration de lait crm 50C, FRV = 2 et un flux constant de 76 L.h-1.m-2, en utilisant une membrane cramique Kerasep de 0,1 m. Akoum et al., (2002b) ont test le module VSEP pour la microfiltration du lait UHT crm avec une membrane en Tflon de 0,1 m de taille de pores. Ils ont obtenu un flux de permat maximum de 95 L.h-1.m-2 100 kPa et 60,75 Hz. Ils ont observ une diminution du flux de permat de 90 L.h-1.m-2 52 L.h-1.m-2 aprs 60 min de filtration FRV = 1, 60,75 Hz et 100 kPa de PTM. Zulewska et al., (2009) ont microfiltr du lait crm pasteuris en utilisant trois systmes de microfiltration : deux systmes PTMU avec membranes Membralox (0,1 m) et GP (Pall, 0,1 m) et un module spirale (Parker-Hannifin, 0,3 m). La MF a t ralise 50C. Ils ont obtenu des flux de permat de 54,08, 71,79 et 16,21 L.h1

.m-2 respectivement avec les membranes PTMU, GP et spirale, FRV = 3. Leur rcupration de

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

protines de lactosrum a t de 0,64 avec la membrane PTMU, 0,61 avec la membrane GP et 0,38 avec la membrane spirale. Nelson & Barbano (1970) ont microfiltr du lait crm pasteuris avec une membrane tubulaire cramique de 0,1 m en mode PTMU. La PTM a vari entre 23 et 28 kPa, et une temprature de 50C a t utilise. Un flux de permat de 30 L.h-1.m-2 et un pourcentage de protines totales de 0,55% en masse ont t obtenus. Aucune donne sur les transmissions d-La et de -Lg na t reporte. Pour leur part, Akoum et al., (2002a) ont observ une diminution du flux de permat de 50 35 L.h-1.m-2 avec une membrane de 0,1 m en Tflon pendant la MF de lait reconstitu en poudre en utilisant le module VSEP 60,75 Hz, 45C, une PTM de 55 kPa et FRV = 2. Pierre et al., (1992) ont concentr du lait crm pasteuris en utilisant une membrane de 0,2 m, une temprature de 50C. La PTM a vari entre 60 et 90 kPa. Ils ont observ une diminution du flux de permat de 70 L.h-1.m-2 FRV = 1 jusqu 20 L.h-1.m-2 FRV = 3. Lawrence et al., (2008) ont utilis une membrane spirale de 0,3 m pour microfiltrer du lait crm. Ils ont utilis une temprature de 10C, une PTM de 150 kPa. Le flux de permat a diminu de 17 6 L.h-1.m-2 FRV = 3. Ils ont obtenu une transmission de -Lg de 0,31. Nous pouvons constater que nos rsultats avec le module MSD en termes de flux sont plus satisfaisants, en utilisant du lait UHT crm et du lait pasteuris. Les flux obtenus avec le module MSD sont jusqu 400% plus levs quavec les modules tubulaires en PTMU ou non, les modules spiraux et le module VSEP. De plus, de forts FRV peuvent tre obtenus sans avoir une diminution de flux trs importante. Cependant, les valeurs de flux et de FRV pourraient varier si les mmes fluides utiliss en filtration tangentielle sont tests sur le module MSD. Par rapport aux transmissions de protines, nous ne pouvons pas faire une comparaison trs exhaustive car la bibliographie napporte que peu dinformations sur les transmissions des protines cibles dans

88

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif notre tude, pendant la concentration de lait. Nous pouvons seulement faire la comparaison avec les transmissions obtenues par Lawrence et al., (2008), Le Berre & Daufin (1996) et Gsan-Guiziou et al.,(2000). Nos avons obtenu une transmission moyenne de 0,9 d-La et de 0,8 de -Lg ; celles-ci restant constantes avec le FRV. Lawrence et al., (2008) ont obtenu une transmission de -Lg de 0,31 FRV = 3. Le Berre & Daufin (1996) et Gsan-Guiziou et al.,(2000) ont observ une diminution de la transmission des protines solubles avec le FRV. III.4. Etude de rsistances. Nous avons effectu une tude de rsistance afin de connatre la stabilit des performances du module MSD au cours de la filtration, mais aussi afin de savoir leffet de la concentration de protines sur les phnomnes de colmatage de la membrane. Pour ce faire nous avons ralis deux types dessais diffrents, le premier FRV constant pour valuer la stabilit du tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 flux et transmissions de protines au cours de la filtration et le deuxime FRV variable afin de voir leffet de la concentration de protines sur le colmatage de la membrane. Par la suite nous dtaillerons les rsultats obtenus. III.4.1. Rsistances FRV constant Comme nous lavons vu dans les sections prcdentes, le lait UHT a des performances trs semblables au lait pasteuris et donc il peut tre utilis comme fluide modle. Cette tude a t ralise avec du lait UHT crm avec recirculation totale du permat (FRV = 1), une vitesse de rotation des disques cramiques de 1044 tr.min-1, une configuration de 6 disques cramiques sur un arbre et une PTM de 602 kPa qui correspond la PTM critique. Nous avons travaill une vitesse de 1044 tr.min-1, car faible vitesse, la polarisation de concentration et le colmatage de la membrane sont favoriss. La Figure III.25 montre le flux au cours de la filtration.

89

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
70 60 50 J (L.h .m )
-2

45 40 35 30 25 20 15 Temprature ( C)

-1

40 30 20

10 10 0 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300

MSD. Membranes cramiques 0,2 m. Lait UHT crm. FRV = 1. 1044 tr/min. 60 kPa. 40 Q = 3 L/min C.

J Temp

5 0 330

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Temps (min)

Figure III.25. Variation du flux de permat et de la temprature au cours de la filtration. Nous observons que, pendant la premire heure de filtration, le flux augmente de 53 L.h1

.m-2 57 L.h-1.m-2, d laugmentation de la temprature de 33C 40C. Aprs avoir atteint la

temprature de 40C, le flux est rest constant pendant les 5 h de filtration suivantes. Cela confirme le faible colmatage de la membrane faible PTM. La Figure III.26 montre la turbidit au cours de la filtration.
14 12 Turbidit (NTU) 10 8 6 4 2 0 0 30 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 Temps (min)
Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. FRV = 1. 1044 tr/min. 60 kPa. 40 Q = 3 L/min. C.

Figure III.26. Turbidit du permat au cours de la filtration.

90

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Nous observons une augmentation de turbidit au dbut de la filtration, due laugmentation de la temprature. Cependant, les turbidits sont faibles et infrieures 50 NTU. La diminution de la turbidit aprs 90 min de filtration peut tre explique par la formation de la couche de casines sur la membrane, ce qui diminue sa transmission. Sur la Figure III.27, nous montrons les transmissions d-La et de -Lg au cours de la filtration.
0,8 0,7 0,6 Tr -La, -Lg 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 50 100 150 200 Temps (min) 250 300 350
Module MSD. Membranes cramiques 0,2 m. FRV = 1. 1044 tr/min. 60 kPa. 40 Q = 3 L/min. C. a-La b-Lg

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure III.27. Transmissions d-La et de -Lg au cours de la filtration. Les transmissions pour les deux protines se maintiennent constantes pendant toute la filtration. Cela est probablement d au faible colmatage interne de la membrane. Les transmissions au cours de 5 h de filtration peuvent tre compares celles obtenues par Gsan-Guiziou et al.,(2000). Ils ont observ que la transmission de -Lg a diminuait de 0,95 0,50 aprs 3 h de filtration, en MF de lait crm avec une membrane tubulaire Kerasep 7 canaux ayant une taille de pores de 0,1 m, une PTM de 20 kPa et un flux de permat constant de 76 L.h1

.m-2. Nos rsultats pour les flux semblent intressants, car ils se maintiennent constants au

cours des 5 h de filtration. Daprs la bibliographie (Herrero et al., 1997; Martnez et al., 2000; Ho & Zydney, 2000), le flux de permat, en microfiltration de solutions de protines, diminue au cours du temps, avec une forte diminution lors des premiers minutes de filtration suivie dune stabilisation. Selon Herrero et al., (1997) ces volutions de flux peuvent tre analyses en termes 91

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif des modles de cintique de diminution de flux communment utiliss : modle de blocage standard, modle de blocage intermdiaire et modle du gteau. Ces modles peuvent tre rsums avec lquation suivante : Jv n = (1 + Kt ) J v, 0 (m3.s-1), K est la constante cintique de diminution de flux (s-1), t est le temps (s). Pour le modle de blocage standard, n est gal 2, dans le modle de blocage intermdiaire n est gal 1, et n = 0,5 correspond au modle de gteau. Si nous normalisons nos rsultats de flux par Jv/Jv,0 nous obtenons une ligne horizontale, et donc le modle dcrit antrieurement nest pas applicable. Cela indique que grce aux taux de tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 cisaillement gnrs par la rotation des membranes, il est possible de limiter le colmatage et le blocage de la membrane ds le dbut de la filtration et ce pendant 5 h de filtration. Afin de vrifier la prsence du phnomne de polarisation de concentration, une analyse de rsistance a t ralise. Le modle de rsistances en sries a t appliqu (Chapitre I, section 1.2). Nous rappelons que : (III.2)

o Jv est le volume de flux de permat (m3.s-1), Jv,0 est le volume de flux initial de permat

J=

PTM RT

(III.3)

o J est le flux (L.h-1.m-2), PTM est la pression transmembranaire (kPa), est la viscosit (Pa.s) et RT est la rsistance totale (m-1). Cette rsistance totale peut tre calcule de la faon suivante :

RT = RM + RCI + RCP

(III.4)

o, RM est la rsistance de la membrane, RCI est la rsistance du colmatage irrversible et RCP est la rsistance de polarisation de concentration. La rsistance de la membrane (RM), calcule avec le flux deau dminralise, tait de 6,0410 (m-1). La rsistance du colmatage irrversible (RCI) peut tre calcule une fois termine la filtration (5 h dans le cas de notre tude) suivi dun rinage leau de la membrane. Pour ce faire, nous avons mesur le flux deau dminralise diffrentes PTM et linverse de la pente de la droite J=f(PTM) donne la rsistance du colmatage irrversible. Nous avons alors trouv une valeur de 1,541011 (m-1). La rsistance totale (RT), est calcule avec le flux de permat moyen au cours de la filtration et en remplaant cette valeur dans lquation (III.3). Dans notre tude nous avons obtenu une valeur de RT de 3,871012 (m-1). Finalement la rsistance de polarisation de concentration est calcule par diffrence, utilisant lquation (III.4). Nous avons obtenu une
11

92

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif valeur de 3,111012 (m-1) pour la rsistance de polarisation de concentration. Ces rsultats indiquent que la rsistance totale est principalement due au phnomne de polarisation de concentration. Cependant, nous navons pas observ de diminution de flux pendant les premires secondes de filtration (caractristique du phnomne), ce qui indiquerait que les taux de cisaillement gnrs par la rotation des membranes peuvent contrler aussi la polarisation de concentration et limiter ainsi la formation de dpt sur la membrane et le colmatage. Cela nest valable que pour les essais FRV = 1, car pendant la concentration dautres phnomnes interviennent. Par la suite, nous raliserons une tude de rsistances pendant la concentration du lait. III.4.2. Rsistances FRV variable Cette tude de rsistances a t effectue lors de la concentration du lait UHT et du lait tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 pasteuris, afin dvaluer leffet de la concentration de protines sur la rsistance totale. Pour ce faire, le modle de rsistances en sries a t appliqu. Les essais choisis pour cette tude sont les essais 1 et 2 dcrits dans la section III.2 (Tableau III.8). Des mesures de viscosit ont t ralises sur les rtentats finaux pour calculer la rsistance totale. Sur le Tableau III.10 sont donnes les valeurs de la rsistance de la membrane (Rm) et de la rsistance totale (RT) calcules la fin de chaque essai de concentration. Tableau III.10. Rsistances obtenues lors de la concentration du lait UHT et du lait pasteuris. Essai 1 2 Lait Pasteuris UHT FRV 5,32 4,30 Rm RT (m-1) (m-1) 6,041011 9,791011 6,041011 1,351012

Nous observons que, pour les essais avec du lait UHT, la rsistance totale est plus leve que celle de lessai avec du lait pasteuris. Il est intressant davoir obtenu ce rsultat, car nous nous attendions une rsistance totale plus leve avec le lait pasteuris cause de sa concentration de protines plus importante. Gsan et al., (1995) ont montr que la taille et la conformation des particules dun fluide peuvent induire la formation dun dpt moins pais ou que ce dpt naie pas de structure fixe. En effet, les particules de grande taille ne bloquent pas les pores de la membrane et leur rosion par le dbit dalimentation peut tre favorise lors de la filtration. Leur probabilit dtre retrouve dans le dpt est plus faible (Lu & Ju, 1989) et donc celui-ci est moins dense et avec une rsistance plus faible (Tarleton & Wakeman, 1993). La taille de 93

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif particules peut varier cause du taux de cisaillement, ce qui change la structure du dpt car lorganisation des particules sur le dpt dpend de la distribution de taille de particules (Gesan et al., 1995). Ceci suggre que la prsence des protines dnatures peut colmater davantage la membrane, peut tre par leur conformation plus linaire quune protine native (Fennema, 2007) et/ou que les protines dnatures soient plus endommages que les protines natives par le taux de cisaillement gnr par la rotation des membranes, devenant ainsi plus petites et formant un dpt sur la membrane plus dense et donc avec une rsistance plus leve. III.5. Essais sur le module disque rotatif utilisant des membranes organiques de MF. Le module disque rotatif a t dj utilis pour le traitement des effluents de lindustrie laitire par NF et OI (Frappart et al., 2006), dans lUF du lait (Ding et al., 2003; Jaffrin et al., 2004), et tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 aussi dans la sparation de oligoglucuronanes (Mellal et al., 2008), en obtenant des bonnes performances en comparaison la filtration tangentielle. Cest pour cela que nous avons dcid de tester ce module pour la sparation de micelles de casines et de comparer ses performances avec le module MSD, lequel a des flux de permat, transmissions de protines solubles et rtentions de micelles de casines levs, et suprieures quen filtration tangentielle. Nous avons utilis trois membranes de microfiltration diffrentes par la taille de pores et matriau, afin de trouver le seuil de coupure adquat pour avoir une haute rtention de micelles de casines et aussi une haute transmission de protines solubles. Nous avons test diffrents matriaux de membranes car il y a t dmontr que la nature de la membrane (hydrophobique ou hydrophilique) peut affecter la transmission de protines (Ricq et al., 1996; Nystrm et al., 1994). Nous avons utilis une membrane Pall de 0,2 m en Nylon, une membrane Alfa Laval de 0,15 m en PVDF et une membrane Microdyn-Nadir de 0,2 m en PVDF. Nous allons, par la suite, comparer les rsultats obtenus pour chaque membrane. Dans tous les essais, un disque quip dailettes a t utilis et effectus avec du lait UHT crm. III.5.1. Variation du flux, de la rtention de casines et de la transmission de protines de lactosrum avec la PTM FRV=1. Comme nous lavons signal dans le protocole opratoire (Chapitre II : Matriels et Mthodes , section II.9), chaque essai a t ralis en montant la pression par palier pour atteindre les conditions opratoires qui permettent davoir une rtention de casines et une transmission de protines de lactosrum maximales. Pour cela, nous avons fix la vitesse de rotation du disque, puis nous avons fix la PTM et nous avons attendu la stabilisation du flux avant de monter au prochain palier de PTM. Une fois tous les paliers de pression effectus, nous

94

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif avons diminu la PTM (ouverture complte de la vanne) et nous avons chang la vitesse de rotation du disque puis nous avons augment la PTM par palier. Pour viter le colmatage de la membrane nous avons toujours commenc avec la vitesse de rotation du disque mtallique la plus leve. Les variations du flux de permat avec la PTM 45C pour des vitesses de rotations du disque de 2500 et 2000 tr.min-1 et pour chaque membrane, sont reprsentes sur la Figure III.28. Les taux de cisaillement la priphrie correspondants chaque vitesse de rotation, sont aussi indiqus sur la Figure III.28.
450 400 350
Module disque rotatif avec disque ailettes. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 45C. Q = 3 L/min

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

J (L.h .m )

300 250 200 150

5 -1 m2500 = 4,885 10 s

-1

-2

100 50 0 0 50 100 150 200 250 300

5 -1 m2000 = 3,269 10 s

350

400

450

PTM (kPa)

Figure III.28. Variation du flux de permat en fonction de la PTM. Comparaison entre les membranes organiques : Pall en Nylon, Alfa Laval en PVDF et Microdyn Nadir en PVDF. Comme nous pouvons lobserver, le flux de permat augmente avec la vitesse de rotation du disque. Nous constatons que le plateau est atteint une PTM de 100 kPa pour les membranes Pall en Nylon et Alfa Laval en PVDF. Pour la membrane Microdyn Nadir en PVDF, le plateau na pas t atteint et le flux continue augmenter avec la PTM mme aux pressions leves (400 kPa). Le mme comportement a t observ 1500 tr.min-1 (non reprsent sur la Figure III.28). Les flux critiques augmentent avec laugmentation de la vitesse de rotation, grce laugmentation du taux de cisaillement. Les flux de permat obtenus avec la membrane Microdyn Nadir en PVDF ont t les plus levs, ce qui est curieux dautant plus que sa permabilit a t plus faible que celle de la membrane Pall en Nylon (465 contre 691 L.h-1.m-2.bar-1). Nous croyons que ce comportement est 95

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif d la diffrence de matriau. Il y a t montr que la nature de la surface des membranes a un rle important sur leur tendance colmater. Les surfaces avec une rugosit plus leve se colmatent plus facilement, parce que la rugosit augmente laire superficielle. Une augmentation de cette aire superficielle augmente le nombre de contacts entre les particules et la surface membranaire (Wong et al., 2009). Selon la littrature, les membranes en Nylon ont une surface moins irrgulire que les membranes en PVDF, ayant une rugosit, respectivement de 73 nm contre 117 nm (Riedl et al., 1998) et donc, logiquement les membranes en Nylon devraient avoir un flux plus lev que les membranes en PVDF. Cependant nous navons pas observ ce comportement. Riedl et al., (1998) ont observ le mme phnomne lors de la clarification de jus de pomme. Ils ont tudi la morphologie du dpt form sur la surface des membranes en Nylon et en PVDF et ont observ que le dpt sur les membranes en Nylon tait plus dense que sur les tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 membranes en PVDF, celui-ci tant plus poreux. Par consquent, le flux est moins affect pour la surface membranaire que les membranes en Nylon. Ceci peut expliquer nos flux plus faibles avec la membrane en Nylon.
3000 2500 Turbidit (NTU) 2000 1500 1000 500 0 0 50 100 150 200 250 PTM (kPa) 300 350 400 450
Module disque rotatif avec disque ailettes. FRV = 1. T = 45 Q = 3 L/min C.

Figure III.29. Evolution de la turbidit en fonction de la PTM. Comparaison entre les membranes organiques : Pall en Nylon et Microdyn Nadir en PVDF

96

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
14 12 10 8 6 4 2 0 0 50 100 150 200 250 300 350
Module disque rotatif avec disque ailettes. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 45 Q = 3 L/min C. 2500 tr/min 2000 tr/min 1500 tr/min

Turbidit (NTU)

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

PTM (kPa)

Figure III.30. Evolution de la turbidit en fonction de la PTM. Membrane Alfa Laval 0,15 m en PVDF. Nous avons obtenu des turbidits trs leves en utilisant les membranes de 0,2 m (Figure III.29), suprieures 500 NTU pour les deux membranes (rsultats non reprsents sur la Figure III.30). Nous avons atteint une valeur de turbidit admissible (32 NTU) la fin de lessai avec la membrane Pall 1500 tr.min-1 et 273 kPa, o la couche limite de concentration tait dj forme et le flux de permat tait faible (31 L.h-1.m-2). Nous navons pas obtenu une turbidit infrieure 50 NTU (valeur admissible (Gsan-Guiziou, 2008)) avec la membrane Microdyn-Nadir, mme 1500 tr.min-1. Pour le cas de la membrane Alfa Laval en PVDF, les valeurs de turbidit (Figure III.30) ont t faibles (infrieures 12 NTU) pour toutes les vitesses essayes. Cela est d la nature hydrophobe du PVDF et la taille de pore plus faible. Cependant, en utilisant la membrane Microdyn Nadir fabriqu avec le mme polymre, les valeurs de turbidit ont t 92% plus leves 2500 tr.min-1 et 38% plus levs 2000 tr.min-1. Cela suggre que la membrane Microdyn Nadir avait un dfaut.

97

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
1 0,9 0,8 0,7 Tr -La 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 50 100 150
Module disque rotatif avec disque ailettes. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 45 Q = 3 L/min C.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

200 250 PTM (kPa)

300

350

400

450

Figure III.31. Variation de la transmission d-La en fonction de la PTM. Comparaison entre les membranes organiques : Pall en Nylon, Alfa Laval en PVDF et Microdyn Nadir en PVDF.
1 0,9 0,8 0,7 Tr -Lg 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 50 100 150 200 250 PTM (kPa) 300 350 400 450
Module disque rotatif avec disque ailettes. Lait UHT crm. FRV = 1. T = 45 Q = 3 L/min C.

Figure III.32. Variation de la transmission de -Lg en fonction de la PTM. Comparaison entre les membranes organiques : Pall en Nylon, Alfa Laval en PVDF et Microdyn Nadir en PVDF. Les transmissions d-La sont reprsentes sur la Figure III.31. Nous observons que les transmissions les plus leves ont t obtenues avec la membrane Pall en Nylon en obtenant des 98

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif transmissions qui fluctuent entre 0,7 et 0,9. Les transmissions ont augment denviron de 33% avec la vitesse de rotation du disque pour les membranes avec une taille de pores de 0,2 m. Laugmentation a t moins marque (environ 2%) pour la membrane de 0,15 m, cela est du sa taille de pore plus faible. Les transmissions de -Lg (Figure III.32) suivent le mme comportement que pour lLa, en obtenant les valeurs les plus leves 2500 tr.min-1 et avec la membrane en Nylon. Les transmissions avec cette membrane ont aussi volu entre 0,7 et 0,9. Nous constatons que les transmissions des deux protines varient peu avec la PTM, les valeurs les plus leves tant obtenues faible PTM et proche de la PTM critique. Cela indique quau-del de la PTM et du flux critique nous nobserverons pas damlioration de la transmission cause de la formation de la couche des protines sur la membrane, laquelle limite les tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 transmissions des protines solubles. Pour les deux protines des transmissions plus faibles ont t obtenues avec les membranes en PVDF, probablement cause de leur nature hydrophobique. Les membranes hydrophobiques ont une forte tendance adsorber les protines et donc leur transmission est plus faible quavec des membranes hydrophiliques, comme les membranes en Nylon (Scott, 1995). Une autre explication est que, comme les membranes en Nylon ont une surface plus irrgulire qui augmenterait le colmatage (Persson et al., 2003), cela augmenterait la diffrence de concentration des protines entre la surface de la membrane et le permat. Cette diffrence de concentration favoriserait la transmission de protines (van Reis et al., 1999). III.5.2. Variation du flux, de la rtention de casines et des transmissions de protines de lactosrum avec le FRV. Comme nous lavons vu prcdemment, les meilleures transmissions ont t obtenues avec la membrane Pall en Nylon, avec par contre une rtention de micelles de casines et des flux faibles. Nous navons pas obtenu une bonne rtention de casines ni une transmission de protines solubles leve, avec aucune autre membrane. Pour raliser lessai de concentration, nous avons privilgi la transmission de protines solubles leve de la membrane en Nylon, sachant quau cours de la filtration la rtention de casines pourrait augmenter grce la formation de la couche de protines sur la membrane. Comme nous lavons voqu prcdemment, il est prfrable de travailler faible PTM pour obtenir des bonnes transmissions, cest pour cela que nous avons effectu lessai 200 kPa. Nous avons choisi une vitesse de rotation du disque de 2000 tr.min-1, car cette vitesse la rtention de casines est plus leve qu 2500 tr.min-1 et la diffrence de flux peu importante.

99

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
180 160 140 J (L.m .h ) 120 100 80 60 40 20 0 1 10 FRV
J = -148,95Ln(FRV) + 133,88 2 R = 0,9857
-1

Module Rotatif avec disque ailettes. 2000 tr/min. Lait UHT crm. Membrane Pall Nylon 0,2 m. 200 kPa. 45C. Q = 3 L/min.

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure III.33. Evolution du flux de permat en fonction du FRV (chelle log). La Figure III.33 montre la variation du flux de permat en fonction du logarithme nprien du FRV. Nous pouvons observer que le flux diminue linairement avec le FRV, en accord avec la thorie de polarisation de concentration, indiquant que nous avons travaill dans le rgime limit par le transfert de matire. Nous avons atteint un FRV gal 2,3 aprs 4 h de filtration.
4000 3500 3000 Turbidit (NTU) 2500 2000 1500 1000 500 0 1 1,2 1,4 1,6 FRV 1,8 2 2,2 2,4
Module Rotatif avec disque ailettes. 2000 tr/min. Lait UHT crm. Membrane Pall Nylon 0,2 m. 200 kPa. 45 Q = 3 L/ min. 45C. C.

Figure III.34. Evolution de la turbidit en fonction du FRV.

-2

100

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif Pendant lessai nous avons suivi la turbidit du permat (Figure III.34). Nous observons que la turbidit diminue quand le FRV augmente, comme nous aurions pu le prvoir. Cette diminution commence au dbut de la filtration, suggrant que la formation de la couche de dpt a lieu aux premires minutes de la concentration. Dans le permat final nous avons obtenu une turbidit de 2700 NTU, valeur trop leve par rapport la turbidit admissible (50 NTU).
1 0,9 0,8 0,7 Tr -La; -Lg 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1 1,2 1,4 1,6 FRV 1,8 2 2,2 2,4
Module Rotatif avec disque ailettes. 2000 tr/min. Lait UHT crm. Membrane Pall Nylon 0,2 m. 200 kPa. 45 Q = 3 L/ min. C.
a-La b-Lg

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Figure III.35. Transmission d-La et de -Lg en fonction du FRV. Les transmissions d-La et de -Lg sont reprsentes sur la Figure III.35. Elles suivent la mme tendance pendant tout lessai de concentration. Les transmissions diminuent partir dun FRV gal 1,8, ce qui suggre qu cette valeur de FRV, le phnomne de polarisation de concentration sur la membrane a lieu. Nous avons obtenu une transmission moyenne de 0,73 et 0,60 respectivement pour l-La et la -Lg. Nous avons rcupr dans le permat 41% d-La et 34% de -Lg du lait initial. Conclusions Dans cette partie, nous avons test des membranes diffrentes en taille de pores et en matriau (PVDF et Nylon), en utilisant le module disque rotatif muni dun disque ailettes. Nous avons pu observer que les flux de permat augmentent avec la vitesse de rotation du disque et la PTM. Les flux obtenus ont t suprieurs ceux reports dans la bibliographie en filtration tangentielle, grce aux forts taux de cisaillements gnrs par la rotation du disque. Nous avons

101

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif constat que, pour avoir une bonne transmission de protines, il est prfrable de travailler une PTM infrieur 100 kPa, qui est la PTM limite. Malgr les flux levs, nous navons pas eu un bon compromis entre une rtention de casines leve et une transmission de protines solubles galement leve, comme nous lavons obtenu avec le module MSD. Ce comportement est d la nature des polymres, les membranes en PVDF tant hydrophobiques prsentent une faible transmission de protines de lactosrum car ces membranes ont une tendance adsorber les protines. Pour leur part les membranes en Nylon, tant hydrophiliques, prsentent une transmission de protines solubles leve, mais aussi pour les micelles de casines. Par la suite nous ralisons une comparaison entre les modules disque rotatif et MSD. III.6. Comparaison entre le module disque rotatif et le module MSD. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Si nous comparons les rsultats obtenus avec le module disque rotatif et le module MSD, nous observons que le module MSD prsente le meilleur compromis entre flux, faible transmission de casines et bonne transmission d-La et de -Lg. Les flux avec le module disque rotatif ont t plus levs quavec le module MSD, car la vitesse priphrique est plus leve. Comme dans le rgime limit par le transfert de matire, le flux de permat est gouvern par le taux de cisaillement la membrane, lequel est aussi fonction de la vitesse moyenne du fluide relative la membrane, nous avons trac sur la Figure III.36 les valeurs du flux maximal stabilis (Jlim), correspondant lessai avec la membrane en PDVF 0,15 m utilis dans le module disque rotatif avec ceux obtenus avec le module MSD, en fonction de la vitesse azimutale du disque moyenne sur laire de la membrane (Vav). Tous ces essais ont t raliss avec du lait UHT crm. Nous avons aussi inclus sur la Figure III.36 les valeurs de flux de permat obtenus par Samuelsson et al., (1997) pendant la MF de lait crm avec une membrane cramique tubulaire de 0,14 m utilisant un systme PTMU diffrentes vitesses de fluide.

102

Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif
300 250 200 Jlim (L h-1 m-2)
y = 17,134x 2 R = 0,9801 MSD 0,2 m Membrane tubulaire en cramique 0,14 m [Samuelsson et al.,1997] Module disque rotatif 0,15 m

150 100 50 0 0 2 4 6 8 10
-1

12

14

16

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Vitesse moyenne (m s )

Figure III.36. Flux limite de permat corrig 45C, en fonction de la vitesse moyenne sur la membrane Vav pour le module MSD et le module disque rotatif et en fonction de la vitesse du fluide V pour les essais sur la membrane tubulaire de Samuelsson et al., (1997) Comme les deux types des membranes, cramique et organique, sont circulaires avec un diamtre interne (R1) et un diamtre externe (R2), les valeurs de Vav sont obtenus par :
R1 2 (R13 R23 ) 2 r 2dr = (R12 R22 ) R2 3(R12 R22 )

Vav =

(III.5)

En utilisant les valeurs de R1 et R2 donnes dans la section de Matriels et Mthodes, nous trouvons que pour le module MSD :

Vav = 0,7615R1
et que pour le module disque rotatif :

(III.6)

Vav = 0,6943R1

(III.7)

Les valeurs de ces vitesses sont donnes sur le Tableau III.11. V est uniforme sur laire de la membrane et quivalente Vav. Comme les essais de Samuelsson et al., (1997) on t raliss 55C, nous avons multipli leurs flux par le rapport de viscosits du lait 55C et 45C : 55C/45C= 0,845 (Tableau III.12), et pour le flux du module MSD : 40C/45C= 1,093. Frappart et al., (2006) ont observ que les flux de permat dans le rgime limit par le transfert de matire

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Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif sont inversement proportionnels la viscosit du fluide, en utilisant le module disque rotatif lors de losmose inverse de lait dilu trois fois 45C. Tableau III.11. Vitesse moyenne sur la membrane et flux limites diffrentes vitesses de rotation pour le module MSD (corrig 45C) et pour le module disque rotatif Vitesse de rotation (tr.min-1) 1930 1492 1044 745 Vitesse de rotation (tr.min-1) 2500 2000 1500 Module MSD Vitesse priphrique (m.s-1) 9,1 7,0 4,9 3,5 Module disque rotatif Vitesse priphrique (rad.s-1) (m.s-1) 262 20,3 209,4 16,23 157 12,17 (rad.s-1) 202 156 109,3 78 Vav (m.s-1) 6,93 5,33 3,75 2,67 Vav (m.s-1) 14,10 11,26 8,45 Jlim (L.h .m-2) 45C 141,2 86,7 62,2 45,6
-1

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Jlim (L.h-1.m-2) 234,8 200,5 147,2

Tableau III.12. Flux limites obtenus en MF de lait crm UHT 55C diffrentes vitesses (V) en PTMU avec une membrane tubulaire cramique de 0,14 m, essais raliss par Samuelsson et al., (1997). V (m.s-1) Jlim (55C) (L.h-1.m-2) Jlim (45C) (L.h-1.m-2) 1,5 25 21,1 2,5 40 33,8 4,0 80 67,7 6,0 125 105,7 8,0 145 122,6

La Figure III.36 montre que tout les flux pour les trois systmes sont proportionnels Vav et ils suivent lquation :

J lim = 17,13Vav

R 2 = 0,980

(III.8)

Il est intressant de trouver que le flux de permat pour les trois systmes suit la mme quation linaire pour une grande gamme de vitesses, de 1,5 14 m.s-1, car cette relation pourrait tre utilise pour prdire le flux limite dans nos systmes dynamiques et les systmes PTMU, en calculant seulement la vitesse moyenne. Conclusions Dans ce chapitre nous avons tudi la sparation des micelles de casines de protines de lactosrum, utilisant deux modules de filtration dynamique : le module MSD et le module

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Chapitre III : Sparation des casines par microfiltration : comparaison des modules MSD et disque rotatif disque rotatif. Nous avons montr que le module MSD muni de 6 disques membranaires en cramique, donne le meilleur compromis entre rtention de micelles de casines et transmission de protines soluble, en comparaison avec le module disque rotatif et avec la filtration tangentielle. Nous avons vu que le module MSD permet limiter la formation de dpt sur les membranes, limitant ainsi le colmatage de la membrane et maintenant un flux de permat et des transmissions des protines solubles constante au cours du temps (5 h) FRV = 1. Nous avons dtermin aussi que les conditions opratoires optimales de ce module, afin dobtenir une rtention de micelles de casines et une transmission de protines solubles maximales, sont une vitesse de rotation de 1931 tr.min-1, une PTM denviron 60 kPa et une temprature de 40C. Un avantage de ce systme dynamique, est quil permet lutilisation des membranes tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 cramiques, qui sont prfrables aux membranes organiques pour leur rsistance au nettoyage et leur dure de vie leve. Lors de la concentration du lait nous avons dmontr que, grce aux taux de cisaillements gnrs par la rotation des membranes, il est possible de maintenir la transmission des protines solubles constante environ 0,95 quelque soit le FRV. Ceci na pas t observ en filtration tangentielle. Nous avons vu que lors de la concentration du lait UHT et du lait pasteuris, la rsistance totale la filtration est plus importante avec le lait UHT quavec le lait pasteuris. Ceci est d la prsence des protines dnatures, qui peuvent colmater plus facilement la membrane quune protine native cause de leur diffrence de conformation. Nous avons trouv que pour les deux systmes dynamiques et un systme tubulaire en PTMU, le flux suit une relation linaire avec la vitesse moyenne du fluide la membrane, permettant ainsi de dduire le flux limite quelque soit la gomtrie du module de filtration utilis. Enfin, nous avons dmontr que le lait UHT peut tre utilis comme fluide modle, lors de la MF, car nous avons obtenu des flux, des transmissions et de rtentions de casines similaires avec ceux obtenus sur le lait pasteuris. Ceci est trs avantageux, car le lait UHT crm, tant facilement disponible en grande quantit et avec une dure de conservation leve par comparaison avec le lait pasteuris, permet deffectuer des essais pendant plusieurs semaines avec le mme lait. Ceci est utile pour comparer diffrents systmes membranaires, lors de la sparation de micelles de casines et optimiser leurs performances.

105

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

CHAPITRE IV : SEPARATION D LACTALBUMINE ET DE -LACTOGLOBULINE PAR ULTRAFILTRATION

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Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration Ce chapitre est consacr ltude de la sparation par ultrafiltration de deux protines solubles prsentes dans les permats de microfiltration du lait : l-Lactalbumine (-La) et la Lactoglobuline (-Lg). Comme nous lavons vu dans le chapitre I Etude Bibliographique , ces deux protines sont importantes dans lindustrie agro-alimentaire et pharmaceutique, do lintrt dobtenir des fractions les plus pures possibles. Comme nous lavons montr dans le Chapitre III, le module MSD muni de 6 membranes cramiques sur 1 arbre a donn les meilleures performances. Cest pour cela que nous avons utilis les permats fournis par le MSD pour ltape suivante dultrafiltration (cadre pointill sur la Figure IV.1). Lultrafiltration a t ralise en utilisant le module disque rotatif muni dun disque ailettes. Le module MSD na pas t test dans cette deuxime tape car sa pression maximale dopration nest que de 5 bar et qu ce jour, des membranes de 50 kDa en cramique pour ce pilote ne sont pas disponibles. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure IV.1. Schma du procd propos pour le fractionnement de protines du lait Comme en microfiltration, nous avons effectu des essais avec les lactosrums provenant de lait UHT et une comparaison a t faite avec les lactosrums de lait pasteuris. I.1. Ultrafiltration du lactosrum du lait UHT et du lait pasteuris. Dans cette tape dUF nous allons recueillir l-La dans le permat tandis que la -Lg restera en majorit dans le rtentat. Compte tenu que les poids molculaires d-La et de -Lg sont proches (14 kDa et 36 kDa, respectivement), nous avons utilis dans un premier temps une membrane de 20 kDa pour tester le fractionnement. Ces tests prliminaires nont montr aucune transmission de protines dans le permat avec ce seuil de coupure. Cest pour cela que nous avons dcid daugmenter le seuil de coupure de la membrane 50 kDa pour la suite de ltude.

107

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration Nous dtaillons ici, les rsultats obtenus avec une membrane en PES de 50 kDa sur le module disque rotatif muni dun disque ailettes tournant 2000 tr.min-1. I.1.1. Variation du flux et des transmissions de protines avec la PTM FRV = 1. Deux essais ont t raliss avec recirculation totale du permat. Lessai 1 correspond au permat obtenu de la MF du lait pasteuris, plus prcisment lessai 1 de la microfiltration du lait pasteuris (Chapitre III, section III.3). Lessai 2 correspond au permat obtenu de la MF du lait UHT, essais 2 dans le Chapitre III, section III.2. Le Tableau IV.1 prsente un rsum des conditions dobtention de ces lactosrums. Tableau IV.1. Conditions dobtention des lactosrums du lait pasteuris et UHT.
Essai Volume final rtentat (L) 3,86 2,3 Volume permat (L) 9,63 8,5 FRV 3,5 4,2 T (C) 45 40 C -La dans le permat final (g.L-1) 0,959 0,420 C -Lg dans le permat final (g.L-1) 1,966 0,130

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

1 (MF lait pasteuris) 2 (MF lait UHT)

La Figure IV.2 reprsente le flux de permat en fonction de la PTM, pour ces deux essais.
400 350 300 J (L.h .m )
-2

Essai 1, lact past Essai 2, lact UHT

250 200 150 100 50 0 0 50 100 150 200 250 300 PTM (kPa) 350 400 450 500
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. T = 40 Q = 3 L/min C.

Figure IV.2. Evolution du flux de permat en fonction de la PTM. Lactosrum du lait UHT crm et pasteuris. Nous observons que le flux de permat augmente avec la PTM, pour atteindre une valeur maximale de 380 L.h-1.m-2 380 kPa. Les flux les plus levs ont t obtenus avec le lactosrum 108

-1

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration du lait pasteuris. Cependant, nous avons observ de grandes diffrences de permabilit leau pour chaque membrane, en effet la membrane utilise dans lessai 1 avait une permabilit de 933 L.h-1.m-2.bar-1 contre 355 L.h-1.m-2.bar-1 pour celle utilise dans lessai 2. Pour liminer ce facteur et ainsi pouvoir mieux analyser les rsultats de flux, nous avons divis le flux de permats obtenus par la permabilit de la membrane (Lp). Les flux normaliss sont reprsents sur la Figure IV.3
12
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. T = 40C. Q = 3 L/min

10 8 J/Lp 6 4

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Essai 1, lact past Essai 2, lact UHT

2 0 0 50 100 150 200 250 300 PTM (kPa) 350 400 450 500

Figure IV.3. Flux de permat normalis en fonction de la PTM. UF de lactosrum du lait UHT crm et pasteuris. Ainsi, nous observons que les flux de permat normaliss de lactosrum du lait UHT sont lgrement plus levs que ceux du lait pasteuris. Cela est d la teneur en protines plus leve dans le lactosrum du lait pasteuris.

109

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration

0,35 0,3 0,25 Tr -La 0,2 0,15 0,1 0,05
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. T = 40 Q = 3 L/min C. Essai 1, lact past Essai 2, lact UHT

0 0 50 100 150 200 250 PTM (kPa) 300 350 400 450 500

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure IV.4. Transmission d-La en fonction de la PTM. UF de lactosrum du lait UHT crm et pasteuris.
0,12 0,1 0,08 Tr -Lg 0,06 0,04 0,02 0 0 50 100 150 200 250 PTM (kPa) 300 350 400 450 500
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. T = 40 Q = 3 L/min C.

Essai 1, lact past Essai 2, lact UHT

Figure IV.5. Transmission de -Lg en fonction de la PTM. UF de lactosrum du lait UHT crm et pasteuris. La transmission d-La (Figure IV.4) et la transmission de -Lg (Figure IV.5) augmentent avec la PTM, et sont plus leves avec le lactosrum du lait pasteuris. La transmission d-La est nettement plus leve que celle de la -Lg, ce qui confirme que l-La sera plus prsente dans le permat que la -Lg, qui elle, restera dans le rtentat. Nous observons que, pour les deux types de lactosrum, la transmission d-La se maintient relativement constante jusqu une PTM de 250 110

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration kPa, au del de cette pression la transmission augmente avec la PTM. Dans le cas de la -Lg, nous pouvons voir que, pour les deux types de lactosrum, la transmission augmente avec la PTM. Nous avons obtenu des transmissions plus leves avec le lactosrum du lait pasteuris quavec le lactosrum du lait UHT, d ce que la permabilit de la membrane utilise dans lessai avec le lactosrum du lait pasteuris tait suprieure celle de lessai avec le lactosrum du lait UHT. Daprs Muller (1996), la transmission de protines diminue avec la PTM cause de la polarisation de concentration et du colmatage irrversible de la membrane. Dans notre cas, les rsultats montrent une augmentation de la transmission avec la PTM, grce aux taux de cisaillement levs qui permettent de limiter le phnomne de colmatage de la membrane. Bien que des diffrences aient t trouves dans les transmissions, la slectivit (quation II.25) (Figure IV.6) diminue avec laugmentation de la PTM cause de laugmentation de la tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 transmission de -Lg avec la PTM.
14 Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. T = 40C. Q = 3 L/min 12 Essai 1 Essai 2 10

Slectivit

0 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500

PTM (kPa)

Figure IV.6. Evolution de la slectivit en fonction de la PTM. Lactosrum du lait UHT crm et du lait pasteuris. I.1.2. Variation du flux et des transmissions de protines avec le FRV. Nous avons effectu quatre essais dUF FRV variable, une PTM de 400 kPa, une temprature de 40C et une vitesse de rotation du disque de 2000 tr.min-1. Nous avons choisi une PTM de 400 kPa afin de favoriser la transmission d-La. De ces quatre essais, deux ont t raliss avec des lactosrums du lait pasteuris et deux avec des lactosrums du lait UHT.

111

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration Le Tableau IV.2 dtaille les caractristiques de chaque essai et la Figure IV.7 montre les flux de permats pour chaque essai. Tableau IV.2. Caractristiques des essais de concentration de lactosrum du lait pasteuris et du lait UHT.
Essai 3 (lactosrum pasteuris) 4 (lactosrum pasteuris) 5 (lactosrum UHT) 6 (lactosrum UHT) Initial Final Initial Final Initial Final Initial Final Volume rtentat (L) 15,29 1,74 15,50 2,89 6,00 1,81 8,58 1,28 Volume permat (L) 13,55 12,61 4,19 7,30 FRV 8,81 5,37 3,31 6,71 C -La initiale (g.L-1) 1,140 1,387 0,243 0,369 C -Lg initiale (g.L-1) 1,346 1,767 0,065 0,169 T (C) 40 40 40 40

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

700
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. 400 kPa. 40 Q = 3 L/min C.

600 500 J (L.h .m )

-2

JEssai 4 = -79,68Ln(FRV) + 475,21 R = 0,9923

2

Essai 3; lact past Essai 4; lact past Essai 5; lact UHT Essai 6; lact UHT

-1

400 300 200 100 0 1 2 3 4

JEssai 3 = -146,57Ln(FRV) + 456,51 R = 0,9703

2

5 FRV

10

Figure IV.7. Evolution du flux de permat en fonction du FRV. Comparaison entre les lactosrums du lait pasteuris et du lait UHT. Pour tous les essais, nous observons une diminution du flux de permat en dbut de la filtration. Cette diminution de flux est due au phnomne de polarisation de concentration de la membrane et ladsorption de protines (Aimar et al., 1988; Labbe et al., 1990; Yee et al., 2009). Les flux de permat pour les essais 3 et 4, aprs la diminution initiale du flux, se maintiennent constants avec le FRV jusqu FRV 2. Au-del nous observons que le flux diminue linairement

112

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration avec le logarithme nprien du FRV. Cette diminution est plus marque sur lessai 3 du au fait dun FRV final plus lev que pour lessai 4. Les lactosrums du lait UHT ont donn des flux plus faibles que ceux du lait pasteuris. Ils diminuent au dbut de la filtration et ils se maintiennent constants partir dun FRV de 1,4. Il est intressant de voir que les flux avec de lactosrum du lait UHT sont plus faibles quavec les lactosrums du lait pasteuris, car comme leur teneur en protine est plus faible, un flux plus lev tait attendu. Ceci est d la prsence des protines dnatures qui ont pu colmater davantage la membrane. Pour confirmer cette hypothse, une tude de rsistance sera ralise dans les paragraphes suivants. Nos flux de permat sont entre 2 et 5 fois plus levs que ceux obtenus par Muller (1996), Gsan-Guiziou et al., (1999b), Bhattacharjee et al., (2006a; 2006b), Metsmuuronen & Nystrm (2009), notamment, grce aux forts taux de cisaillements causs par le disque ailettes. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009
0,3 0,25 0,2 Tr -La 0,15 0,1 0,05
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. 400 kPa. 40 Q = 3 L/min C. Essai 3; lact past Essai 4; lact past Essai 5; lact UHT Essai 6; lact UHT

0 1 1,5 2 2,5 3 FRV 3,5 4 4,5 5 5,5

Figure IV.8. Transmission d-La en fonction du FRV, lors de la concentration des protines de lactosrum.

113

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration

0,25

Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. 400 kPa. 40C. Q = 3 L/min Essai 3; lact past Essai 4; lact past Essai 5; lact UHT Essai 6; lact UHT

0,2

Tr -Lg

0,15

0,1

0,05

0 1 1,5 2 2,5 3 FRV 3,5 4 4,5 5 5,5

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure IV.9. Transmission de la -Lg en fonction du FRV, lors de la concentration des protines de lactosrum. Les transmissions d-La sont reprsentes sur la Figure IV.8. Nous pouvons constater que les transmissions se maintiennent constantes environ 0,17 dans tous les essais. Pour le cas de la -Lg (Figure IV.9), les transmissions diminuent lgrement avec le FRV au dbut de la filtration, et aprs un FRV de 1,5 les transmissions se maintiennent constantes environ 0,05. La diminution de la transmission de la -Lg avec le FRV est semblable la diminution du flux, ce qui suggre que cette protine, du fait de son poids molculaire, est une des responsables de la polarisation de concentration observe au dbut de la concentration. Nos transmissions sont plus leves que celles obtenues par Gsan-Guiziou et al., (1999b) lors de la purification d-La et de -Lg partir de lactosrum de fromage Gouda. Ils ont utilis une membrane tubulaire de 50 kDa, les transmissions d-La et de -Lg ont t respectivement de 0,09 et 0,06. Muller et al. (1996) lors de la purification d-La partir de lactosrum prpurifi ont observ que la transmission d-La diminuait de 0,3 0,15 et celle de -Lg de 0,12 0,05, jusqu un FRV de 7. Nos rsultats sont semblables pour la -Lg, mais dans le cas de l-La nous avons obtenu une transmission constante jusqu FRV = 5. Cependant, Cheang & Sydney (2003; 2004) ont rapport des transmissions plus leves lors de la sparation d-La et de -Lg, les diffrences sont dues au fait que ces auteurs ont travaill avec des protines pures, et donc ils navaient pas dautres composants qui interfrent dans la filtration.

114

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration Les concentrations initiales et finales d-La et de -Lg dans le permat et dans le rtentat, ainsi que le bilan de matire, sont donnes sur le Tableau IV.3. Tableau IV.3. Concentrations et masses initiales et finales d-La et de -Lg, dans le permat (P) et le rtentat (R), lors de la concentration de lactosrums du lait UHT crm et du lait pasteuris. Essai C -La (g.L-1) I F I F I F I F R 1,140 7,103 1,387 5,322 0,243 0,475 0,402 1,834 P 0,381 0,489 0,075 0,130 M -La (g) R P 18,027 12,753 5,340 21,891 15,653 6,331 1,458 0,859 0,314 3,449 2,347 0,949 C -Lg (g.L-1) R P 1,346 10,745 0,147 1,768 8,505 0,231 0,064 0,189 0,011 0,145 0,616 0,012 M -Lg (g) R P 21,559 17,188 4,445 28,210 25,504 2,875 0,384 0,342 0,046 1,244 0,788 0,088

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

3 (lact past) 4 (lact past) 5 (lact UHT) 6 (lact UHT)

Les variations de la concentration d-La et de -Lg avec le FRV figurent respectivement sur la Figure IV.10 et la Figure IV.11. Nous observons que, pour les deux protines, la concentration augmente avec le FRV, du leur faible transmission. Dans tous les essais, les concentrations augmentent quasi linairement avec le FRV.
1,2 Concentration d'-La dans le permat (g/L)
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. 400 kPa. 40 Q = 3 L/min C.

1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 1 1,5 2 2,5 3 FRV 3,5 4 4,5 5 5,5
Essai 3; lact past Essai 4; lact past Essai 5; lact UHT Essai 6; lact UHT

Figure IV.10. Variation de la concentration d-La en fonction du FRV, en UF de lactosrums du lait UHT et du lait pasteuris.

115

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration

0,6 Concentration de -Lg dans le permat (g/L)
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. 400 kPa. 40 Q = 3 L/min C.

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1 1,5 2 2,5 3 FRV 3,5 4 4,5 5 5,5

Essai 3; lact past Essai 4; lact past Essai 5; lact UHT Essai 6; lact UHT

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure IV.11. Variation de la concentration de -Lg en fonction du FRV, en UF de lactosrums du lait UHT et du lait pasteuris. Nous avons calcul la rcupration d-La et de -Lg pour chaque essai avec lquation suivante :

Y=

Mf Mi

(IV.1)

o Mf est la masse finale et Mi est la masse initiale. Comme lobjectif dans cette tude est dobtenir l-La dans le permat et la -Lg dans le rtentat, la rcupration d-La a t calcule en prenant en compte la masse finale obtenue dans le permat. Pour le cas de la rcupration de -Lg, la masse finale dans le rtentat a t prise en compte pour le calcul. Les valeurs obtenues figurent sur le Tableau IV.4. Tableau IV.4. Rcuprations d-La dans le permat et de -Lg dans le rtentat, lors de la concentration des lactosrums du lait pasteuris et du lait UHT. Y Essai 3 (lact past) 4 (lact past) 5 (lact UHT) 6 (lact UHT) FRV 8,81 5,37 3,31 6,71 -La -Lg (permat) (rtentat) 0,296 0,797 0,289 0,904 0,216 0,881 0,276 0,632

116

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration Les rcuprations sont trs semblables pour tous les essais, mme si nous avons travaill FRV plus levs dans les essais 3 5. Les rcuprations ont vari entre 0,21 et 0,29 pour l-La et entre 0,89 et 0,9 pour la -Lg. Lessai 7 a une rcupration en -Lg plus faible du ce que la transmission de cette protine a t lgrement plus leve que dans les autres essais. Sur la Figure IV.12, nous avons reprsent la slectivit en fonction du FRV.
12 10 8 Slectivit 6 4 2 0 1 1,5 2 2,5 3 FRV 3,5 4 4,5 5 5,5
Module disque rotatif. PES 50 kDa. 2000 tr/min. 400 kPa. 40 Q = 3 L/min C. Essai 3; lact past Essai 4; lact past Essai 5; lact UHT Essai 6; lact UHT

tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009

Figure IV.12. Variation de la slectivit en fonction du FRV, en UF de lactosrums du lait UHT et du lait pasteuris. Comme les transmissions de chacune des protines sont semblables pour les lactosrums du lait pasteuris et du lait UHT, les slectivits sont aussi semblables et sont comprises entre 3 et 4 un FRV suprieur 2. Cependant, nous constatons que pour lessai 6, la slectivit augmente avec le FRV en obtenant une slectivit maximale de 8. Les grandes diffrences observes sont dues au fait de la difficult dobserver les pics chromatographiques de la -Lg, pour les chantillons provenant des permats de MF du lait UHT. Comme cette protine est trs dnature par le traitement thermique UHT, elle a une trs faible concentration et par consquent les pics ont une surface trs faible. Si nous observons le Tableau IV.3 la concentration initiale en -Lg est plus faible dans lessai 6 et donc cela a pu entraner des erreurs au moment de la dtermination de la concentration dans les permats. Nos slectivits ont t plus leves que celles obtenues par Bhattacharjee et al., (2006b) lors du fractionnement des protines partir de lactosrum. Ils ont utilis lors de cette tude, une cellule avec agitation magntique. Cette cellule a t galement modifie afin de pouvoir mettre 117

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration en rotation tant lagitateur que la membrane. Les auteurs ont obtenu une slectivit de 1 en utilisant une membrane de 30 kDa, une PTM de 390 kPa, une vitesse dagitation de 500 tr.min-1 avec une membrane fixe. Nos rsultats de slectivit sont plus proches de ceux obtenus par Lucas et al., (1998) qui ont obtenu une slectivit de 3 lors de lextraction d-La partir dun concentrt de protine de lactosrum, soit avec une membrane de 150 kDa ou une membrane de 50 kDa. Un autre paramtre dimportance lors de la sparation des protines est leur puret dans le permat. Elle est calcule avec lquation suivante :

P=

C ps CT

(IV.2)

o Cps est la concentration (g.L-1) de la protine soluble (-La ou -Lg) dans le permat ou dans le rtentat selon le cas, et CT est la concentration totale (g.L-1) de protines dans le permat. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Nous avons pris en compte comme concentration totale de protines dans le permat, la somme des concentrations d-La et de -Lg. La concentration des autres protines na pas t prise en compte car elles ont un poids molculaire plus lev que la -Lg et ont donc t retenues par la membrane. En effet, il existe des kits permettant dterminer la concentration totale de protines, mais lerreur pendant la dtermination est trs leve cause des interfrences entraines par dautres composants prsents dans le lait. Cest pour cela que dans cette tude, nous avons seulement calcul la puret dans le permat, car dans le rtentat dautres protines, dont les concentrations nont pas t mesures, sont prsentes. Le Tableau IV.5 montre les purets d-La obtenues pour chaque essai. Tableau IV.5. Puret d-La dans le permat, lors de la concentration de lactosrums du lait pasteuris et du lait UHT. Essai 3 (lact past) 4 (lact past) 5 (lact UHT) 6 (lact UHT) Puret -La dans le permat 0,721 0,679 0,875 0,895

Nos observons que les purets obtenues avec le lactosrum du lait UHT sont plus leves que celles du lactosrum du lait pasteuris. Cela est d aux problmes de dtermination de pics chromatographiques de la -Lg dans le permat des lactosrums du lait UHT, comme expliqu prcdemment.

118

Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration Nos purets sont lgrement plus leves que celle obtenues par Muller (1996), pendant la sparation d-La et de -Lg en utilisant une membrane tubulaire cramique de 50 kDa. Cet auteur a obtenu une puret maximale de 0,66 en travaillant avec des concentrts de protines de lactosrum une concentration de 1,6 g L-1 et une force ionique de 0,04 M. La rcupration dLa t denviron 0,25. Discussion Nos rsultats montrent que les flux de permat et les transmissions sont amliors par rapport la filtration tangentielle, grce aux taux de cisaillement levs gnrs par le disque ailettes. Cependant, les comparaisons entre les performances du prototype disque rotatif et la filtration tangentielle ont t faites afin de voir les diffrences entre ces deux systmes. Les fluides utiliss en filtration tangentielle dans la bibliographie ont t principalement des concentrts de tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 protines de lactosrum et/ ou des protines pures, donc les performances du module disque rotatif pourraient tre diffrents si on utilisait les mmes fluides quen filtration tangentielle. Bien que nous ayons obtenu des rsultats prometteurs, ils ne correspondent pas tout fait nos attentes. Il a t dj prouv que les systmes dynamiques diminuent les phnomnes de polarisation de concentration et de colmatage de la membrane, problme principal lors de la sparation de protines par filtration membranaire tangentielle, cause de la diminution du flux et de la slectivit. Il tait donc logique de sattendre ce que la slectivit soit augmente par les taux de cisaillement. Diffrentes causes peuvent tre attribues ce comportement. Premirement, il faut prendre en compte que tous nos essais ont t raliss avec du lactosrum rel et donc les interfrences des divers composants sont plus leves que si nous avions travaill avec des solutions modles de protines (concentrts, isolats et/ou protines pures). Un point important, qui a t tudi ces dernires annes, est comment les interactions entre les protines et la membrane, ainsi quavec leur environnement peuvent influencer la slectivit lors de la sparation des protines. Pour pouvoir comprendre ces effets dans notre cas, nous devons connatre les charges des protines prsentes dans la solution et la charge de la membrane. Les protines sont charges ngativement si le pH de la solution est suprieur au point isolectrique (pI) de la protine, et elles sont charges positivement si le pH de la solution est infrieur au point isolectrique (Fennema, 2007). Nos protines cibles, -La et -Lg, ont un pI respectivement de 4,5-4,8 et 5,2. Le pH dans tous nos essais a t denviron 6, variant entre 6 et 6,5. Par consquent, les deux protines ont une charge ngative dans tous nos essais. Pour sa part, la membrane en PES a aussi une charge. Nous navons pas mesur la charge de nos membranes, mais la littrature indique que les membranes en PES ont une charge ngative partir dun pH de

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Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration 3 (Burns & Zydney, 1999), avec un pI de 3,1 (Ponti et al., 1998) ; donc la membrane avait aussi une charge ngative dans nos essais. Cela peut expliquer les faibles transmissions observes malgr laugmentation des taux de cisaillements, car il y a une rpulsion entre les protines et la membrane. Une solution ce problme serait de travailler un pH gal au pI, car au pI, les protines auraient une charge neutre, et il ny aurait ds lors plus dinteractions lectrostatiques entre la protine et la membrane (Balakrishnan & Agarwal, 1996). Cependant les points isolectriques de l-La et de la -Lg sont trs proches et leffet de charge ne serait pas trs significatif. Aussi, il faut tenir compte quau pI, la solubilit des protines est minimale et quelles tendent prcipiter, ce qui pourrait diminuer la transmission. Par ailleurs, quand le pH est proche du pI, les protines ont une charge nette proche de zro permettant leur adsorption par interactions hydrophobiques. Ceci contribue au colmatage et donc abaisse le flux de permat (Ricq et al., 1996). tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Le changement de force ionique a une influence sur le mcanisme dexclusion. A faible concentration de NaCl, le mcanisme dexclusion est altr par la charge lectrique de la protine. Le signe de la charge (lequel dpend du pI et du pH de la solution) peut amliorer ou diminuer la transmission (Munch et al., 1979; Balakrishnan & Agarwal, 1996). Pendant la sparation entre la lysozyme, lovalbumine et la myoglobine, Balakrishnan & Agarwal (1996) ont observ que la transmissions dovalbumine augmente avec la concentration de NaCl. Cette protine avait une charge ngative pour les pH des essais et elle est repousse par la membrane en PES. Cela suggre quaugmenter la concentration en sel aiderait surmonter les interactions dfavorables entre les protines et la membrane, augmentant ainsi la transmission des protines. Si cela tait vrai pour nos solutions, nous pourrions augmenter la transmission d-La en changeant la force ionique. Cependant, comme nos deux protines ont des charges ngatives, laugmentation de la concentration en sel pourrait aussi augmenter la transmission de -Lg. Muller (1996) a observ une augmentation de la transmissions des protines avec la force ionique. La transmission d-La a augment de 0,18 0,25 en augmentant la force ionique de 0,04 M 0,2 M. Pour sa part, la transmission de -Lg a aussi augment de 0,04 0,13 sous les mmes conditions daugmentation de force ionique. Cela dmontre quaugmenter la force ionique diminue la slectivit. Lucas et al., (1998) ont aussi observ une augmentation des transmissions d-La et de -Lg avec la force ionique. Ils ont observ aussi que la slectivit se maintient constante avec la force ionique. Ils ont obtenu une slectivit de 10 une force ionique nulle et utilisant une membrane cramique chimiquement modifie de 150 kDa, laquelle avait une charge positive pH 7. Cela montre que travailler avec des membranes positivement charges permet dobtenir des slectivits leves. Cependant, notre module disque rotatif ne peut fonctionner quavec des membranes organiques

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Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration et que le march actuel propose principalement des membranes en PES, lesquelles, comme nous lavons dj voqu, ont une charge ngative partir dun pH de 3,1. Une solution ce problme serait de travailler avec le module MSD, mais des modifications devraient tre faites pour que ce module puisse fonctionner pressions leves. La pression maximale dopration actuelle du module MSD est de 5 bar. I.2. Etude des rsistances la filtration Une tude de ces rsistances a t effectue lors de la concentration du lait UHT et lait pasteuris. Cette tude a t ralise sur les quatre essais dcrits dans la section antrieure (Tableau IV.2). Des mesures de viscosit ont t ralises sur les rtentats finaux pour calculer les rsistances totales. Le calcul des rsistances a t ralis comme dans la section III.4.1 du Chapitre III. tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 Sur le Tableau IV.6 sont donnes les valeurs de la rsistance de la membrane (Rm), la rsistance totale (RT), la rsistance du colmatage (RCI) et la rsistance de polarisation de concentration (RCP) la fin de chaque essai de concentration. Tableau IV.6. Rsistances obtenues lors de la concentration du lactosrum du lait UHT et du lactosrum du lait pasteuris par UF Essai 3 (lact past) 4 (lact past) 5 (lact UHT) 6 (lact UHT) FRV 8,81 5,37 3,31 6,71 Rm (m-1) RT (m-1) RCI (m-1) 7,731012 3,551012 7,581012 4,581012 RCP (m-1) 6,581012 2,031012 2,591012 2,271013 RCI/RT (%) 51,89 54,49 67,37 15,77 RCP/RT (%) 44,16 31,13 23,03 78,16

5,891011 1,491013 9,361011 6,511012 1,081012 1,131013 1,761012 2,901013

Nous pouvons constater que les rsistances membranaires sont diffrentes pour chaque essai. Cela est d ce que, pour chaque essai, une membrane neuve a t utilise. Ceci confirme que les membranes organiques dun mme type peuvent avoir diffrentes permabilits, ce qui peut expliquer des rsultats diffrents de flux et transmissions. Les rsistances de polarisation de concentration (RCP) et les rsistances du colmatage (RCI) augmentent avec le FRV car la concentration augmente. Nous constatons que la rsistance de la membrane (Rm) est faible devant les autres deux rsistances. Un rsultat intressant est davoir obtenu les rsistances totales (RT) les plus leves aux environs du mme FRV (essais 4 et 6),

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Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration pour les lactosrums du lait UHT. Cela suggre que les protines dnatures (principalement la Lg) contribuent au colmatage de la membrane, car la concentration de protines est plus faible dans les essais effectus avec le lactosrum du lait UHT que celle avec le lactosrum du lait pasteuris et donc, ce nest pas une concentration de protines plus leve qui caus une augmentation de la rsistance totale. Une autre raison du colmatage observ est la prcipitation des sels du calcium, spcialement du phosphate de calcium, dans les pores de la membrane (Lee & Merson, 1976; Patocka & Jelen, 1987; Taddei et al., 1988; Labbe et al., 1990; Musale & Kulkarni, 1998). Cependant, nous prfrons garder lhypothse que les protines sont les causes principales du colmatage. Hanemaaijer et al., (1989) ont tudi le rle de ladsorption des protines et de la concentration de sels sur le colmatage lors de lUF de lactosrum. Ils ont dmontr que la formation dun dpt de calcium et de phosphate est moins svre pendant lUF de lactosrum. Cet effet est d une action inhibitrice de la cristallisation que peuvent avoir certains composants tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 du lactosrum. Quelques polypeptides avec un nombre lev des rsidus de phosphoserine peuvent diminuer, par 50 fois ou plus, la cristallisation du phosphate de calcium des solutions sursatures. Ils ont observ aussi que ladsorption des protines joue un rle trs important dans la limitation du flux de permat, elle peut augmenter par plus de 10 fois la rsistance additionnelle (de polarisation de concentration et/ou de colmatage). Par ailleurs, sur les membranes en PES, le colmatage d aux minraux (lactose, phosphates, calcium, etc) est principalement rversible au contraire des protines (Rabiller-Baudry et al., 2002). Cette adsorption a lieu au dbut de lUF (Yee et al., 2009; James et al., 2003). Conclusions Dans ce chapitre, nous avons tudi le potentiel de la filtration dynamique pour la sparation d-La et de -Lg. Nous avons obtenu des flux entre 2 5 fois plus levs quen filtration tangentielle. Les transmissions d-La se maintiennent constantes avec le FRV tandis que les transmissions de -Lg diminuent lgrement, ce qui permet daugmenter la slectivit au cours de la concentration. Le fait davoir des transmissions d-La constantes avec le FRV, reprsente un avantage des systmes dynamiques sur la filtration tangentielle. En filtration tangentielle, la transmission diminue avec le FRV cause de la polarisation de concentration et du colmatage de la membrane. Comme les systmes dynamiques permettent de diminuer ces deux phnomnes, nous avons pu maintenir la transmission constante au cours de nos essais. La comparaison entre les performances de filtration utilisant des lactosrums du lait UHT et du lait pasteuris a montr des variations de performances entre les deux fluides. Les allures de flux de permat ne sont pas semblables, puisque nous obtenons des flux constants partir dun

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Chapitre IV : Sparation d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline par ultrafiltration FRV suprieur 2 pour les lactosrums du lait UHT, alors quavec les lactosrums du lait pasteuris, les flux de permat diminuent linairement avec le logarithme nprien du FRV. Bien que nous ayons obtenu des allures des courbes des transmissions d-La et de -Lg trs semblables entre les deux types de lactosrum, lerreur sur la concentration de la -Lg, qui est faible dans le lait UHT, est leves. Cest pour cela que nous pouvons conclure que les lactosrums du lait UHT ne peuvent pas tre utiliss comme fluides modles, lors de la sparation des protines. Nos rsultats de slectivit obtenus avec les lactosrums du lait pasteuris, sont prometteurs en comparaison avec la filtration tangentielle. Ils sont lgrement plus levs que ceux rapports dans la littrature sans changements de pH, de force ionique de la solution ni de charge de la membrane. En filtration tangentielle, plusieurs auteurs ont d changer la force ionique pour obtenir des slectivits de lordre de 3 et 4, valeurs que nous avons obtenu en tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 augmentant seulement le taux de cisaillement. Ceci indique quen utilisant les systmes dynamiques et en changeant la force ionique et/ou le type de polymre de membrane, de meilleures slectivits pourraient tre obtenues, cependant des contraintes de rpulsion lectrostatiques existent et doivent tre prises en compte.

123

Conclusions et Perspectives

CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES
Lobjectif de cette tude tait de proposer un procd en cascade pour sparer les protines du lait en trois fractions principales : les casines, l-Lactalbumine et la Lactoglobuline. Le procd mis au point consiste en la sparation des micelles de casines des protines de lactosrum par microfiltration et une deuxime tape dultrafiltration pour sparer l-Lactalbumine de la -Lactoglobuline. Lintrt du procd est que ces deux tapes de filtration sont ralises avec des systmes de filtration dynamique. Une comparaison entre les performances en microfiltration, des deux pilotes de laboratoire de filtration dynamique : le module Multi Shaft Disk (MSD) et le prototype disque rotatif, a t ralise. Il a t montr que le module qui prsente le meilleur compromis entre rtention de casines et transmission des protines de lactosrum tait le module MSD. La tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 meilleure configuration pour le MSD fut celle avec 1 arbre de 6 membranes. Pour le pilote disque rotatif, malgr des flux plus levs, les vitesses engendres ne permettent pas une rtention acceptable des micelles de casines. Il a t aussi montr que le module MSD permet de maintenir la transmission de protines solubles constante (environ 0,95) pendant la concentration, ce qui nest pas le cas en filtration tangentielle. Les rsultats obtenus avec le module MSD ont t compars avec les donnes trouves dans la littrature en filtration tangentielle pendant la concentration de casines, obtenant ainsi des meilleurs flux de permat, rtention de casines et transmission de protines de lactosrum avec le module MSD en travaillant une temprature plus faible. Le fait de travailler temprature plus faible permet de diminuer, qui plus est, les effets de celle-ci sur les protines (dnaturation) Une bonne similitude des rsultats a t trouve entre les essais raliss avec le lait UHT et le lait pasteuris indiquant que le lait UHT peut tre utilis comme fluide modle dans des tudes de fractionnement des protines. Toutefois, la prsence des protines dnatures dans le lait UHT augmente la rsistance totale lors de la concentration, en comparaison avec le lait pasteuris. Comme les modules MSD industriels permettent de diminuer lnergie consomme par m3 de permat de 60%, daprs le constructeur, ils pourraient remplacer les systmes UTP recirculation de permat qui sont gourmands en nergie. Ces modules sont disponibles avec une surface membranaire de 80 m2. La deuxime tape de sparation par UF a t ralise avec le prototype disque rotatif muni dun disque ailettes. Les rsultats obtenus ont montr quen comparaison avec la filtration

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Conclusions et Perspectives tangentielle, les flux de permat et la transmission d-Lactalbumine ont t amliors. Les flux de permat ont t entre 2 5 fois plus levs quen filtration tangentielle. Le module disque rotatif permet, comme le module MSD, de maintenir la transmission de protines constante au cours de la concentration. Lobjectif de cette tape tait dobtenir l-Lactalbumine dans le permat avec une slectivit leve (transmission de -Lactoglobuline proche zro) en augmentant seulement le taux de cisaillement. Les rsultats ont montr que la slectivit d-Lactalbumine augmente ou se maintient constante au cours de la concentration car les transmissions d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline dpendent peu du FRV. Ceci est un avantage des systmes dynamiques, car en filtration tangentielle, la slectivit diminue lors de la concentration cause de la polarisation de concentration et le colmatage de la membrane. Une comparaison des slectivits obtenues en filtration dynamique avec celles trouves dans la littrature en filtration tangentielle a t galement effectue. Cette comparaison a tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 montre que la slectivit en filtration dynamique est du mme ordre de grandeur quen filtration tangentielle. Cependant, il faut prendre en compte, quen filtration tangentielle, pour avoir une slectivit de 4, il est ncessaire de changer lenvironnement de la solution (changement de force ionique et/ou de pH). Des slectivits plus levs nont pas t obtenues dans cette tude, due dexclusions lectrostatiques entre les protines et la membrane. Dans cette partie, il a t aussi montr que le lactosrum provenant du lait UHT ne peut pas tre aussi utilis comme fluide modle lors de la sparation de protines, car le degr de dnaturation de la -Lg dans le lait UHT, entrane des erreurs leves pendant la dtermination de la concentration de cette protine. Perspectives : Ce travail aura des perspectives intressantes, car toutes les conditions opratoires, notamment au niveau du choix de la membrane et des paramtres physicochimiques nont pas t optimises. Dans ltape de microfiltration, il serait intressant de tester le pilote MSD dans sa configuration normale avec 12 membranes sur deux axes, mais en espaant davantage les membranes, de manire dviter des zones de surconcentration. En effet, ce mode de fonctionnement qui accroit le cisaillement pour une mme vitesse de rotation est normalement plus efficace que celui de membranes sur un seul arbre, mais il faudrait pour cela disposer de nouveaux arbres modifis. Un pilote de plus grande taille permettrait galement deffectuer des mesures de consommation nergtique plus ralistes car les frottements internes du moteur ne reprsentent quune partie plus faible de lnergie totale consomme par m3 de permat.

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Conclusions et Perspectives Afin deffectuer une comparaison plus juste entre le systme disque rotatif et le module pilot MSD, des essais sur le module disque rotatif semi-industriel, disponible dans notre laboratoire, pourraient tre faits. Ce module semi-industriel permet lutilisation des membranes cramiques et des traiter des volumes plus levs. De cette faon nous pourrions comparer les performances des systmes prenant en compte seulement lhydrodynamique des systmes, car les membranes seront du mme matriau. Cela nest pas possible dans notre pilote disque rotatif. Nous avons vu dans le chapitre de sparation des micelles de casines de protines de lactosrum, que les taux de cisaillement pourraient dstabiliser la structure des micelles. Il serait donc trs intressant dtudier si cette hypothse peut tre valide. Pour ce faire, des mesures de taille des micelles de casines devraient tre ralises dans le rtentat et dans le permat, diffrents taux de cisaillement. En faisant cette tude, nous pourrions dterminer le taux de cisaillement critique pour les micelles de casines. Un bilan de matire devrait tre aussi effectu tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 pour vrifier si les sous-micelles sont adsorbes par les pores de la membrane, diminuant ainsi le flux de permat quand les taux de cisaillement sont levs. Dans ltape dUF plusieurs dmarches peuvent tre raliss afin doptimiser le procd. Il serait intressant dtudier leffet de la force ionique sur la transmission de protines et flux de permat, ainsi que leffet du pH. Comme nous avons dj voqu dans le chapitre IV, la charge de la membrane joue un rle important sur les transmissions des protines, donc il serait aussi intressant de vrifier leffet du potentiel zta des membranes sur les transmissions en fonction du pH et de la force ionique du fluide. Pour ce faire, des membranes fabriques avec des diffrents types de polymre pourraient tre compares, de mme que des membranes modifies chimiquement. Nous avons vu sur ltude des rsistances lors de lUF, que les protines et surtout les protines dnatures, sont les causes principales du colmatage de la membrane. Plusieurs tudes ont t ralises pour tudier le colmatage et le blocage des pores en filtration tangentielle, il serait donc intressant de raliser ce type dtude sur les membranes utilises dans les systmes dynamiques. Pour cela des analyses de microscopie lectronique balayage (SEM) et/ou de spectroscopie infrarouge transform de Fourier en mode rflexion totale attnue (ATR-FTIR) peuvent tre raliss sur les membranes, diffrents tapes de la filtration, taux de cisaillement, pH et force ionique. Il serait sans doute intressant de voir si la rcupration finale d-La peut tre augmente en effectuant une diafiltration la suite de la concentration lors de lultrafiltration

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Conclusions et Perspectives Dautres tapes dultrafiltration doit tre mises en place afin de sparer la BSA et le lactose, pour purifier la fraction de -Lactoglobuline dans le rtentat et liminer les interfrences ventuelles causs pour le lactose. Il serait aussi intressant de raliser une tude sur leffet du taux de cisaillement lev gnr par les systmes dynamiques sur les proprits fonctionnelles des protines solubles et leur dnaturation ventuelle. Pour sapprocher davantage des conditions industrielles, il serait intressant de raliser des essais en utilisant de lactosrum provenant dune fromagerie. Pour tudier les performances du procd avec ce type de fluide, une prcipitation du lait pasteuris crm pH 4,6 peut tre ralise suivi dune centrifugation et une filtration 0,45-1 m pour liminer les particules de grande taille. Finalement, il serait intressant de disposer dun pilote MSD adapt lultrafiltration c'esttel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 -dire pouvant supporter des pressions plus leves jusqu 1000 kPa et avoir un choix plus grand de seuil de coupure, entre 20 et 100 kDa car le seuil de coupure idal sur de membranes cramiques peut tre diffrent de celui de membranes organiques.

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LISTE DE TRAVAUX
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Liste de Travaux Modelling-From the micro to the macro scale. 25-28 Mai 2008 Algarve, Portugal. Pages: 423-424. Communication Poster. V. Espina. Casein concentration and whey proteins separation by microfiltration using a multishaft ceramic disks (MSD) system. Proceedings of Network Young Membrains 10th meeting. Berlin, Germany. 18-19 Septembre 2008. Pages 154-155. Communication orale. Valentina Espina, Michel Jaffrin, Matthieu Frappart, Lu Hui Ding. Separation of caseins from whey proteins by high shear microfiltration using rotating ceramic membranes. Proceedings of the IDF/INRA 1st International Symposium on MINERALS & DAIRY PRODUCTS. 1-3 Octobre 2008, Saint-Malo, France. Page 72. Communication poster. V. Espina, M. Y Jaffrin, M. Frappart, L.H Ding. Separation of caseins from whey tel-00433359, version 1 - 19 Nov 2009 proteins by dynamic filtration. Proceedings of the12th Aachener Membran Kolloquium. ISBN 978-3-00-026060-5. 29-30 Octobre 2008, Aachen, Allemagne. Pages 623-629. Communication poster. V. Espina, M. Y. Jaffrin and L.H. Ding. Separation of -Lactalbumin and Lactoglobulin from skim milk by dynamic filtration. Euromembrane 2009 Conference, 6-10 Septembre 2009, Montepellier France. Communication oral. Student Travel Award. V. Espina, M. Jaffrin, L. Ding & M. Frappart. Study of -Lactalbumin and Lactoglobulin Separation from Pasteurized Milk Using Dynamic Ultrafiltration. 6th NIZO Dairy Conference: Dairy ingredients: innovations in functionality. 30 Septembre-2 Octobre 2009, Papendal, Pays-Bas. Communication oral. Nomine au Young Scientist Award. V. Espina, M. Jaffrin, M. Frappart, L. Ding. Etude de la faisabilit de lextraction d-Lactalbumine et de -Lactoglobuline partir de lait crm par un procd de filtration dynamique deux tages. Rcents Progrs en Gnie de Procds. Numro 98. 2009. ISBN 2-910239-72-1. Ed. SFGP, Paris, France. XIIme Congrs de la Socit de Gnie des Procds. 14-16 Octobre 2009, Marseille, France. Communication poster.

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