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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
EXPERIMENTO 1:
a)
Se preparo 6 tubos de ensayo y coloco cantidades apropiadas solucin sulfato de amonio 0.1 M para obtener:
TUBO
1 2 3 4 5 6
b) c)
Se completo cada tubo con agua destilada hasta obtener un volumen de 4.6 ml. Se mezclo bien y aadi 0.4 mL de reactivo de Nessler, se espero un tiempo aproximado de 10 min para completar la reaccin a temperatura ambiente. Se obtiene la lectura del espectrofotmetro, contra un blanco de n agua destilada, con longitud de onda 415 nm. SISTEMA DE TUBOS DE ENSAYO COMPONENTES sulfato de amonio 1 0.1 2 0.2 3 0.3 4 0.4 5 0.5 6 0.6
d)
4.5 0.4
4.4 0.4
4.3 0.4
4.2 0.4
4.1 0.4
4.0 0.4
e)
Se mezclo uniformemente cada tubo, prepare 4.6 de agua destilada mas 0.4 de reactivo de Nessler.
SISTEMA DE TUBOS DE ENSAYO COMPONENTES sulfato de amonio agua destilada 1 0.1 4.5 2 0.2 4.4 3 0.3 4.3 4 0.4 4.2 5 0.5 4.1 6 0.6 4.0
TUBOS
ABSORBANCIA R L
CONCENTRACION CONCENTRACION DE SULFATO DE AMONIACO AMONIO 0.1 0.1 0.1 0.1 0.2 0.3
1 2 3
4 5 6 7
GRAFICA 1
Promedio
CV
BC
CE
0,6433
y = 0,335x - 0,0304 R2 = 0,9987 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5
460
Con el valor de k se puede construir una nueva recta. La variable incgnita ser la Absorbancia. A= 0.303075 x0.5 y A1= 0.1515 A= 0.303075 x 1.0 y A2= 0.303075 A= 0.303075 x 1.5 y A3= 0.4546 A= 0.303075 x 2.0 y A4= 0.60615 A= 0.303075 x 2.5 y A5= 0.010617 A= 0.303075 x 3.0 y A6= 0.36061 A= 0.303075 x 3.5 y A7= 0.54865
EXPERIMENTO 2:
I.
OBJETIVO:
Comprobar el efecto de la concentracin de la enzima sobre la Vr. el mtodo a seguir es usar diferentes concentraciones de enzima ureasa, manteniendo estables los parmetros que afectan la velocidad.
II. 1.
PROCEDIMIENTO: Pre incubar 5 tubos a 37 C por 5 min. Y luego agregar solucin de ureasa en los volmenes siguientes:
COMPONENTE
SISTEMA DE TUBOS 1 2 0.4 2.56 40 3 0.4 2.54 60 4 0.4 2.52 80 5 0.4 2.50 100
0.4 2.58
Bf+EDTA 20
2.
3.
Completado el tiempo se coloco los tubos de ensayo en un vaso de precipitacin que contena hielo. Se retiro alicotas de 0.3 ml de cada tubo y recibi en otros tubos de igualmente enumerados, los cuales contuvieron 4,3 ml de agua destilada helada. Inmediatamente se agrego a cada tubo 0.5 ml de reactivo de nessler .se espero 10 min a temperatura ambiente.
4.
5.
Se lee en espectrofotmetro a 415 nm observando inicialmente la absorvancia cero de un tubo de agua destilada en blanco. Con los datos obtenidos represente el efecto de la concentracin de enzima sobre la velocidad de reaccin en un papel milimetrado.
COMPONENTE
SISTEMA DE TUBOS
2 4.6 0.02ml
3 4.6 0.02ml
5 4.6 0.02
0.4
0.4
0.4
0.4
III.
TUBOS
ABSORBANCIA R L
1 2 3 4 5 6
GRAFICA 1
Calculamos volmenes.
Regresin lineal
0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 0,5 1 1,5 2
2,5
Concentracin mg/mL
IMAGEN
EXPERIMENTO 3:
Es el mismo procedimiento que el experimento dos solo que en este caso ser en funcin a otra variable.los procedimientos los veremos grficamente.
1 USO DE ENZIMA
3 bao mara
4uso
de las micropipetas
COMPONENTE
SISTEMA DE TUBOS 1 2 4.6 0.02ml 3 4.6 0.02ml 4 4.6 0.02= 20ul 5 4.6 0.02
Agua destilada
4.6
0.4
0.4
0.4
0.4
Comparacin
de
tubos
Leer la absorbancia:
TUBOS
ABSORBANCIA R L
CONCENTRACION CONCENTRACION DE SULFATO DE AMONIACO AMONIO 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.09 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
1 2 3 4 5 6 7
IMGENES
DISCUSION Y ANALISIS:
La velocidad de formacin del producto guarda relacin con la velocidad de descomposicin del sustrato, siendo importante conocer la velocidad de la reaccin sin el aumento de concentracin y compararla con la que si muestra un incremento en la concentracin enzimtica. La temperatura es un facto externo importante para el desarrollo normal de la reaccin, pero como sabemos no todas las reacciones son dependientes de este factor, pero en el caso enzimtico si ya dinamizan las molculas de la solucin creada. La concentracin de amoniaco ante el espectrofotmetro aumenta la absorvancia, debido a que los cuerpos qumicos de esta solucin son afines a la captura de luz aumentando el nmero o capacidad de absorvancia. CONCLUSIONES:
Cuando el sustrato inicial se encuentra en una porcin mnima, la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden. Las graficas de la velocidad de reaccin frente a la concentracin de sustrato pueden presentarse de dos formas tanto en hiprbola como sigmoidea. Muchas la naturaleza de la enzima cuenta ya que puede ser alosterica, si es que obedece a la ecuacin de Michaelis-Menten.
A mayor concentracin de la enzima, la velocidad de reaccin aumenta, ya que esta disminuye el umbral de accin o la energa de la activacin del la sustancia en mencin. La concentracin de la enzima posee efecto catalizador ante una reaccin, la cual debido a su concentracin puede aumentar o disminuir la velocidad con que se efectu una reaccin biolgica-qumica. Esta relacin nos aporta una explicacin sobre las razones que hacen de la KM un parmetro cintico importante. La temperatura ordinaria las reaccin que no requieren un reajuste de enlaces suelen ser rpidas, caso contrario sucede con las reaccin que tienen finalidad de formacin de nuevos productos, como lo son as las que hemos desarrollado en esta prctica. La constante de velocidad en la reaccin qumica est influenciada por factores externos netamente dirigidos a las condiciones en que se trabaja.