ADRIANA HADDAD NUDI

Avaliao da contaminao de manguezais da Baa de Guanabara utilizando caranguejos Ucides cordatus como bioindicador de poluentes de petrleo e desenvolvimento de metodologias de anlises

Tese de Doutorado

Tese apresentada ao Departamento de Qumica da PUC-Rio, como requisito parcial para obteno do ttulo de Doutor em Qumica Analtica.

Orientador: Angela de Luca Rebello Wagener Co-orientador: Eleine Francioni de Lima

Rio de Janeiro Julho de 2005

ADRIANA HADDAD NUDI

Avaliao da contaminao de manguezais da Baa de Guanabara utilizando caranguejos Ucides cordatus como bioindicador de poluentes de petrleo e desenvolvimento de metodologias de anlises
Tese apresentada ao Departamento de Qumica da PUC-Rio, como requisito parcial para obteno do ttulo de Doutor em Qumica Analtica. Aprovada pela Comisso Examinadora abaixo assinada. Profa. Angela de Luca Rebello Wagener Orientador Departamento de Qumica - PUC-Rio Dra. Eleine Francioni de Lima Co-orientador CENPES- Petrobrs Dr. Josino Costa Moreira Fiocruz Profa. Isabel Maria Neto da Silva Moreira Departamento de Qumica - PUC-Rio Prof. Jos Marcus de Oliveira Godoy Departamento de Qumica - PUC-Rio Dr. Arthur de Lemos Scofield Jos Eugenio Leal Coordenador Setorial de Ps-graduao e Pesquisa do Centro Tcnico Cientfico - PUC-Rio Rio de Janeiro, 29 de julho de 2005

Todos os direitos reservados. proibida a reproduo total ou parcial do trabalho sem autorizao da universidade, do autor e do orientador.

Adriana Haddad Nudi Graduou-se em Qumica: Bacharelado e Licenciatura pela Universidade Estadual de Londrina (PR) em 1987. Mestre em Cincias pela Universidade Estadual de Maring (PR) em 1992.

Ficha Catalogrfica

Nudi, Adriana Haddad

Avaliao da contaminao de manguezais da Baa de Guanabara utilizando caranguejos Ucides cordatus como bioindicador de poluentes de petrleo e desenvolvimento de metodologias de anlises.

233 f. : l. ; 30 cm.

Tese (doutorado) - Pontifcia Universidade Catlica do Rio de Janeiro, Departamento de Qumica.

Inclu referncias bibliogrficas.

1. Qumica - Teses. 2. Hidrocarbonetos policclicos aromticos. 3. CG/EM. 4. Biomarcadores biolgicos. 5. CLAE/F. 6. Ucides cordatus. I. Wagener, ngela de Luca Rebello. II. Francioni, Eleine de Lima. III. Pontifcia Universidade Catlica do Rio de Janeiro. Departamento de Qumica. IV. Ttulo.

Eu aprendi... ...que so os pequenos acontecimentos dirios que tornam a vida espetacular; William Shaskeapeare

Ao Hlio, Gabriel e Matheus,.... Aos meus pais e irmos, com amor.

Agradecimentos
Meus sinceros agradecimentos a todos que contriburam para a realizao deste trabalho:

Dra. Angela de Luca Rebello Wagener, pela confiana, orientao e apoio na realizao desta tese. Eleine Francioni, pela co-orientao, apoio e amizade durante a execuo deste trabalho. Ao Dr. Arthur de Lemos Scofield, pela positiva participao na co-orientao deste trabalho. Dra Maria Isabel Paes da Silva pela viabilizao do uso de nitrognio lquido e ao tcnico Henrique pelo auxlio no laboratrio. Ao Dr. Norbert Miekeley, por permitir a utilizao da gua MilliQ. CAPES e FAPERJ, pelo apoio financeiro. Claudia por toda a ateno e apoio ao longo da realizao deste trabalho. s queridas companheiras de luta Juliana, Tereza Cristina, Lvia, pelo apoio. Cssia, pela amizade e fora no final da tese. Ao amigo Andr Victor Sartori por ter participado de forma positiva em uma etapa do trabalho.

Aos amigos do laboratrio do Labman, Ricardo, Francine e Priscila. s minhas queridas estagirias Luana e Carlinha, pela disposio, bom humor e dedicao na realizao desta tese. Ao Rodrigo e Catarina, pela positiva participao no incio do trabalho. Valeu o perrengue nas coletas. Ao Jos Vitor, pescador de caranguejo, batalhador, fundamental nas coletas. Ao Mauro pela fora durante as coletas. Ao lvaro Pereira, Adriana e Ivael (PUC-Rio) pela pronta ateno quando solicitados. Ao pessoal do LEA, pela amizade e o emprstimo da mufla. s minhas queridas amigas Flvia, Patrcia e Geisamanda, pela positiva relao desenvolvida nesses anos. Valdeto, Jorge, Norberto, Anselmo, Carlos e demais tcnicos e funcionrios do Departamento de Qumica da PUC, pela amizade e pelo apoio de sempre nas horas necessrias. Ftima e Maria Ligia, sempre prontas para ajudar. Ao professor lvaro (eltrica) pelo tratamento estatstico dos dados. Aos meus filhos, pela pacincia que tiveram. Ao Hlio, pela super pacincia que teve. Todos aqueles no citados, mas que contriburam, direta ou indiretamente, para a realizao deste trabalho.

Resumo

Nudi, Adriana Haddad. Avaliao da contaminao de manguezais da Baa de Guanabara utilizando caranguejos Ucides cordatus como bioindicador de poluentes de petrleo e desenvolvimento de metodologias de anlises. Rio de Janeiro, 2005, 232p. Tese de Doutorado - Departamento de Qumica, Pontifcia Universidade Catlica do Rio de Janeiro.

O principal objetivo deste estudo foi validar o caranguejo da espcie Ucides cordatus como organismo indicador de poluio por leo em reas de manguezais da Baa de Guanabara. Para isto foram realizadas as seguintes etapas: (1) anlises qumicas de hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPAs) em amostras de hepatopncreas e sedimento por cromatografia gasosa acoplada ao espectrmetro de massas (CG/EM); (2) bioensaios com experimentos de exposio ao pireno e avaliao das respostas biolgicas atravs das medidas dos metablitos formados em amostras de urina de caranguejos; (3) ensaio do microncleo em hemcitos de caranguejos para verificar conseqncias genotxicas. Amostras de sedimento e caranguejos foram coletadas entre setembro de 2003 e outubro de 2004 em quatro reas de manguezais da Baa de Guanabara: Piedade, Nova Orleans, Suru e Canal do Peteca. O manguezal de Barra de Guaratiba foi escolhido como rea de referncia fora da baa. Foi desenvolvido um mtodo semiquantitativo e no destrutivo para medidas de metablitos em urina de caranguejo utilizando cromatografia lquida de alta eficincia com detector de fluorescncia (CLAE/F). Esta tcnica apresentou boa sensibilidade (LQ= 0,01 g mL-1) e baixo custo. Amostras de urina de caranguejos foram analisadas em todas as reas estudas. Foram conduzidos vrios bioensaios em laboratrio com caranguejos expostos pireno. Durante as primeiras etapas dos experimentos, o metablito 1-pireno-sulfato foi o principal metablito formado. Em urina de caranguejos dos manguezais estudados, o 1pireno-glucosdeo foi o metablito dominante. Foram encontradas diferenas

significativas nos nveis de HPAs totais em amostras de hepatopncreas, variando de 256 g kg-1 (p.s.) para Barra de Guaratiba a 67000 g kg-1 (p.s.) no Suru. Os manguezais de Suru e do Canal do Peteca apresentaram as maiores concentraes de HPAs nas amostras de hepatopncreas e sedimento. Os compostos de 3 a 4 anis aromticos foram mais abundantes que os HPAs de 5 e 6 anis. As concentraes de HPAs nas amostras de sedimento diminuram com a profundidade em todas as estaes estudadas. As concentraes determinadas foram: Barra de Guaratiba (PAH 35-200 g kg-1p.s); Piedade (PAH 311-615 g kg-1 p.s.); Nova Orleans (PAH 270-1134 g kg-1 p.s.); Suru (PAH 1280-31500 g kg-1 p.s.) e no Canal do Peteca (PAH 336-6000 g kg-1 p.s.). Amostras de hepatopncreas de Ucides cordatus apresentaram maiores concentraes de HPAs que as de sedimento. O fator de bioacumulao (FA) variou entre 0,7 e 35, e fator de bioacumulao biota-sedimento (FBA) entre 0,02 e 3,0. Foram encontradas correlaes positivas (r2= 0.70) entre os metablitos de pireno em urina e os nveis de HPAs em hepatopncreas e sedimento dos locais estudados. O ensaio do microncleo foi realizado no laboratrio, em caranguejos expostos ao pireno. Foi observado um aumento do nmero de microncleos nos hemcitos, indicando respostas genotxicas e mutagnicas. Entretanto, o ensaio do microncleo no foi sensvel para avaliar o gradiente de contaminao nos manguezais amostrados, no apresentando correlao com os nveis de contaminao detectados nas amostras de hepatopncreas e sedimento. O Ucides cordatus demonstrou ser um excelente bioindicador para avaliar a qualidade ambiental em reas de manguezais.

Palavras-chave
HPAs, CG/EM, biomarcadores biolgicos, CLAE/F, Ucides cordatus

Abstract

Nudi, Adriana Haddad. EVALUATION OF THE CONTAMINATION FROM GUANABARA BAY MANGROVES USING CRABS UCIDES CORDATUS AS INDICATORS OF OIL POLLUTANTS AND DEVELOPMENT OF ANALYSIS. Rio de Janeiro, 2005, 232p. Tese de Doutorado - Departamento de Qumica, Pontifcia Universidade Catlica do Rio de Janeiro.

The aim of this study was the validation of crab Ucides cordatus as indicator of oil pollution in mangrove areas from Guanabara Bay. For such purpose it was performed: (1) chemical analyses of PAHs in hepatopancreas and sediment samples by gas chromatography with mass spectrometer detector (GC/MS); (2) bioassays with pyrene exposure experiments and evaluation of biological responses through pyrene metabolites measurements in urine samples; (3) micronucleus assay in crab hemocytes to verify genotoxic consequences. Sediment and crab samples were collected from September 2003 to October 2004 in four mangrove areas of Guanabara Bay: Piedade, Nova Orleans, Suru, Canal do Peteca. The mangrove of Barra de Guaratiba was chosen as reference site. It was developed a semiquantitative and nondestructive method for measurements of pyrene metabolites in crab urine using HPLC/Fluorescence. This technique presented several advantages as sensitivity (DL= 0.01g.mL-1) and low cost. Crabs urine was sampled straight from the field in all studied sites. Beside this, it was conducted several bioassays in laboratory with crabs exposed to pyrene. During the first stages of experiments, pyrene-1-sulphate was the main metabolite produced, followed by pyrene-1-glucoside. In crabs urine from mangrove areas, the pyrene-1-glucoside was the dominant metabolite. It was found significant differences on total PAH levels of crab samples among studied sites, which ranged from 256 in Barra de Guaratiba to 67000 g kg-1 dry weight, in Suru. Suru and Canal do Peteca presented the highest PAHs concentrations in crab hepatopancreas and sediment samples. Besides, three and four ring compounds were more abundant than five and six ring PAHs. In sediment samples PAHs

concentrations decreased with depth for all studied sites: Barra de Guaratiba (PAH 35-200 g kg-1d.w.); Piedade (PAH 311-615 g kg-1d.w.); Nova Orleans (PAH 270-1134 g kg-1d.w.); Suru PAH 1280-31500 g kg-1d.w. and Peteca (PAH 336-6000 g kg-1d.w.). Hepatopancreas samples of crabs Ucides cordatus had higher PAHs concentrations than sediment samples with bioaccumulation factors (BAF) of 0,70 to 35,00 and 0,02 to 3,00 for the bioaccumulation factors biota-sediment (BSAF). Also, it was found high correlations between pyrene metabolites in urine and PAHs levels in crab hepatopancreas and sediments. Pyrene metabolites of crab urine samples presented strong correlation (r2= 0,77) with hepatopancreas and sediment samples from each studied site. In laboratory, micronucleus assay was performed in crabs exposed to pyrene. It was found an increase of micronucleus number in haemocytes, indicating responses of genotoxicity and mutagenicity. However, the micronucleus assay was not sensitive enough for showing contamination gradient among mangrove sites, nor it was significantly correlated with PAHs levels of crabs and sediment samples. Ucides cordatus revealed an excellent bioindicator and suitable for monitoring the environmental quality in mangrove areas.

Keywords
PAHs, GC/MS, biological biomarkers, HPLC/F, Ucides cordatus

Sumrio

1. 2. 2.1. 2.1.1. 2.1.2. 2.1.3. 2.1.4. 2.1.5. 2.2. 2.2.1. 2.2.2. 2.2.3. 2.3. 2.3.1. 2.3.2.

Introduo e Objetivos Reviso Bibliogrfica Hidrocarbonetos policclicos aromticos Estruturas e propriedades fsico-qumicas dos HPAs Fontes de HPAs para o ambiente aqutico Distribuio dos HPAs nos ambientes aquticos Dinmica dos HPAs nos animais aquticos e seus efeitos Concentraes de HPAs em tecidos de caranguejos Biomarcadores e biomonitores Biomarcadores biolgicos Compostos aromticos fluorescentes Utilizao do ensaio de microncleo Manguezal e leo HPAs em sedimentos Biomonitoramento com caranguejos Ucides cordatus da Baa de Guanabara

30 35 35 35 39 41 42 48 50 50 53 56 57 57 59

2.3.2.1. 2.3.2.2. 3. 3.1. 3.2. 4.

Escolha do crustceo como bioindicador Sistema digestivo dos caranguejos reas de estudo Baa de Guanabara Barra de Guaratiba Determinao de metablitos de pireno em caranguejos Ucides cordatus

59 61 62 62 65 68

4.1.

Desenvolvimento de mtodo analtico para determinao de metablitos de pireno em urina de caranguejos Ucides cordatus.

68

4.1.1. 4.1.1.1. 4.1.1.2.

Desenvolvimento da metodologia Escolha do solvente Determinao dos comprimentos de onda e parmetros instrumentais

69 69 70

4.1.1.3. 4.1.1.4. 4.1.1.5. 4.1.1.6. 4.1.1.7. 4.2. 4.2.1.

Anlises preliminares dos padres e amostras Interferncia de matriz Repetibilidade de injeo Otimizao das hidrlises Rendimento da hidrlise Resultados e discusso do mtodo Determinao dos comprimentos de onda e parmetros instrumentais

71 71 71 71 72 73 73

4.2.2. 4.2.3. 4.2.4. 4.2.5. 4.2.5.1.

Resultado da interferncia da matriz Otimizao das hidrlises e identificao dos metablitos Rendimento das hidrlises e repetibilidade Quantificao dos metablitos em equivalentes de 1-OHP Comparao da eficincia de fluorescncia entre 1OHPGr e 1- OHPGs com padro de 1-OHP

73 76 77 78 78

4.3. 4.3.1.

Bioensaios com HPAs Amostragem e montagem do bioensaio para determinao de metablitos de pireno em urina

80 81

4.3.2. 4.3.3. 4.3.3.1.

Montagem do bioensaio para anlise de microncleo Coleta das amostras de urina e hemolinfa Coleta e preparo das amostras de urina para anlise de

83 83 83

metablitos de HPAs 4.3.3.2. 4.3.4. 4.3.5. 4.3.5.1. 4.3.5.2. 4.4. 4.4.1. 4.5. 4.5.1. Preparo das amostras de urina Condies instrumentais Identificao dos metablitos formados Hidrlise com -glucosidase Hidrlise com -glucuronidase/arilsulfatase Ensaio do microncleo Coleta de hemolinfa e preparo das lminas Resultados e discusses do bioensaio Resultados da aplicao do ensaio do microncleo em hemolinfa de caranguejos 4.5.2. Determinao de metablitos de pireno em urina de caranguejos 4.5.2.1. Estudo da exposio ao pireno e identificao dos metablitos conjugados 4.5.2.2. 5. Avaliao dose-resposta injeo de pireno Investigao sobre a contaminao por HPAs nos manguezais da Baa de Guanabara usando sedimento e caranguejos Ucides cordatus 5.1. 5.1.1. 5.1.2. 5.2. 5.2.1. 5.2.1.1. Amostragem de caranguejos e sedimento Amostragem de caranguejos Ucides cordatus Amostragem de sedimento em amostras de campo Metodologia aplicada Pr-tratamento das amostras de caranguejo Determinao de metablitos de HPAs em urina de Ucides cordatus 5.2.1.2. Aplicao do ensaio do microncleo em hemolinfa de 102 100 100 101 101 101 101 92 100 89 88 84 84 84 85 85 85 85 87 87

caranguejos 5.2.1.3. 5.2.1.4. Coleta de hepatopncreas de caranguejos Determinao de HPAs em hepatopncreas de caranguejos Ucides cordatus 5.2.1.4.1. Materiais utilizados e descontaminao 5.2.1.5. Pr-tratamento e procedimento analtico nas amostras de hepatopncreas de caranguejos 5.2.1.5.1. Extrao 5.2.1.5.2. Pr-fracionamento e separao das classes de lipdeos 5.2.1.5.3. Fracionamento dos hidrocarbonetos aromticos 5.2.1.6. Determinao da umidade no material de referncia e amostras 5.2.1.7. 5.2.2. 5.2.2.1. Determinao do teor de lipdeos das amostras Metodologia de anlise para sedimento Metodologia para anlise de HPAs 108 108 108 108 108 109 109 110 110 110 104 105 106 107 103 104 102 103

5.2.2.1.1. Extrao 5.2.2.1.2. Fracionamento e quantificao dos compostos aromticos 5.2.2.2. 5.2.2.3. 5.2.2.4. 5.2.2.5. 5.3. Metodologia de determinao de pH e Eh Metodologia de anlise de carbono orgnico Metodologia de anlise do teor de umidade Metodologia para anlise de granulometria Anlise instrumental para determinao de HPAs em amostras de sedimento e hepatopncreas de caranguejos 5.3.1. 5.3.2. 5.3.3. Determinao qualitativa dos HPAs Determinao quantitativa dos HPAs Brancos das anlises e limite de deteco

111 113 114

5.4. 5.4.1. 5.4.1.1.

Qualidade Analtica Validao de Metodologia Analtica para HPAs Rendimento, validao e repetibilidade do mtodo para determinao de HPAs em sedimentos de manguezais por CGEM

115 115 115

5.5. 5.6. 5.6.1. 5.6.1.1. 5.6.2. 5.6.2.1.

Tratamento estatstico dos dados Resultados e Discusso Urina Resultados das anlises de campo Hemolinfa Resposta do ensaio do microncleo aplicado amostras de campo

119 119 119 119 120 120

5.6.3. 5.6.3.1.

Hepatopncreas Nveis de Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos em hepatopncreas de caranguejos

124 124

5.6.4. 5.6.4.1.

Sedimento Resultados de pH, Eh e TOC

139 139 139 141 147

5.6.4.1.1. Carbono orgnico 5.6.4.1.2. pH e Eh 5.6.4.2. Nveis de Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos em sedimentos 5.6.5. Comparao das concentraes de HPAs nas vrias matrizes: urina, hepatopncrea e sedimento. 5.6.5.1. 5.6.5.2. 5.6.5.3. Comparao das respostas entre urina e hepatopncreas Hemolinfa com hepatopncreas Correlao das concentraes de HPAs em hepatopncreas e em amostras de sedimento

164

164 167 168

5.6.5.3.1. Anlises de componentes principais 5.6.5.3.2. Avaliao de Fontes de HPAs para sedimento e biota atravs de ndices de origem 5.6.5.3.3. Fator de acumulao (FA) e fator de bioacumulao (FBA) biota x sedimento 6. 7. 8. Concluses Referncias Bibliogrficas Anexos

175 179

200

204 206 218

Lista de figuras

Figura 2.1 Figura 2.2 Figura 2.3 Figura 2.4 Figura 2.5 Figura 3.1

Estrutura molecular dos 16 principais HPAs, de acordo com 37 a EPA. Ciclo biogeoqumico dos hidrocarbonetos policclicos 42 aromticos. Metabolismo do Benzo(a)pireno em peixes. Metabolismo de pireno. Uca. Locais de amostragem para amostras de sedimento e 62 caranguejos Ucides cordatus na Baa de Guanabara. 1. Barra de Guaratiba; 2. Canal do Peteca; 3. Suru; 4. Nova Orleans (Mag); 5. Piedade. 44 56

Caranguejo Ucides cordatus conhecido como caranguejo 60

Figura 4.1

Perfil cromatogrfico dos padres de 1- hidroxipireno- 73 glucorondeo, 1-hidroxipireno e pireno, em metanol, obtido por CLAE/F (341/383 nm).

Figura 4.2 Figura 4.3 Figura 4.4 Figura 4.5 Figura 4.6

Perfil cromatogrfico da soluo padro de 1-hidroxipireno- 74 glucorondeo (mol L-1) em metanol. Curva analtica da soluo padro de 1-hidroxipireno- 74 glucorondeo (mol L-1) em metanol. Perfil cromatogrfico de amostra de urina fortificadas com 75 solues padro de 1-hidroxipireno-glucorondeo (molL-1). Curva analtica da soluo padro de 1-hidroxipireno- 75 glucorondeo (mol L-1) em urina de caranguejos. Perfil cromatogrfico em urinas sem hidrlise (a), e em 76 urinas (1:50) hidrolisadas realizadas com enzimas (d). glucosidase (replica)(b,c) e - glucuronidase/ arilsulfatase

Figura 4.7 Figura 4.8

Grfico representando antes e aps hidrlises de urinas com 77 enzimas -glucosidase e glucuronidase/arilsulfatase. Fluxograma do bioensaio com caranguejos Ucides cordatus 82

realizado durante 120 h. Figura 4.9 Figura 4.10 Figura 4.11 Coleta de urina de caranguejos para determinao de 84 compostos fluorescentes. Coleta de amostras de hemolinfa e confeco das lminas 86 para ensaio do microncleo. Grficos de freqncia de MN em caranguejos de Piedade, 87 inoculados com dose nica de pireno (2mg Kg-1), coletadas aps 24, 72 e 120 horas. Figura 4.12 Grficos de freqncia de MN em caranguejos do Peteca, 88 inoculados com dose nica de pireno (2 mg Kg-1) coletados aps 24 horas. Figura 4.13 Perfil de urina coletada 24 horas aps injeo com pireno 90 (a), sem hidrlise; (b). aps hidrlise com enzima glucosidase. Figura 4.14 Perfil cromatogrfico de urina hidrolisada com enzima - 90 glucuronidase / arilsulfatase (a); (b). aps 24 horas de injeo com pireno. Figura 4.15 Perfil cromatogrfico de urina de caranguejos proveniente 91 do manguezal do Canal do Peteca (a); fortificado com padro de 1-hidroxipireno-glucorondeo (b) Figura 4.16 Intensidade de fluorescncia (CLAE/F) medida em urina de 93 caranguejos expostos dose nica de pireno por 120 horas, dos metablitos formados: pireno-sulfato, pireno-glucosdeo e 1-OHP. Figura 4.17 Perfil cromatogrfico de urina de caranguejos do Peteca 94 coletada em campo (a), e aps 24 horas de injeo de pireno (2 mg Kg-1) (b). Figura 4.18 Grfico de correlao entre as concentraes totais de 95 metablitos em urina e de microncleo em hemcitos, formados aps inoculao com pireno. Figura 4.19 Grfico de correlao entre as concentraes de metablitos 96 1-OHP e 1-pireno-glucosdeo em urina e de microncleo em hemcitos, formados aps inoculao com pireno.

Figura 4.20

Grfico de correlao entre as concentraes de metablitos 97 1-OHP e 1-pireno-glucosdeo em urina, formados aps inoculao com pireno em funo do tempo de experimento.

Figura 4.21

Grfico de correlao entre as concentraes de metablitos 99 1-OHP e 1-pireno-glucosdeo em urina, formados aps inoculao com pireno em funo do tempo de experimento.

Figura 5.1 Figura 5.2

Amostras de caranguejos Ucides cordatus, sendo dissecados 103 para retirada de hepatopncreas. Metodologia analtica aplicada para determinao de 107 hidrocarbonetos policclicos aromticos em amostras de hepatopncreas de Ucides cordatus.

Figura 5.3

Metodologia analtica aplicada para determinao de 109 hidrocarbonetos policclicos aromticos em amostras de sedimentos

Figura 5.4

Resultados das anlises em urina de caranguejos in situ das 120 campanhas setembro-03, maio e outubro-04, em equivalentes de OHP proposto neste trabalho.

Figura 5.5

Presena de microncleo em hemcitos de Ucides cordatus 121 da Baa de Guanabara (aumento de 1000 X no microscpio tico).

Figura 5.6

Freqncia de microncleos nos hemcitos de Ucides 123 cordatus coletados na Baa de Guanabara em 2003 e 2004. P- Piedade;SU- Suru; NO Nova Orleans e PT-Peteca.

Figura 5.7

Comparao dos nveis de hidrocarbonetos policclicos 128 aromticos (HPAs) individuais (g Kg-1 peso seco) nas amostras de hepatopncreas de caranguejos de caranguejos de Piedade, coletadas em setembro-03, maio e outubro-04. Estao 1: HP1, HP2 e HP3.

Figura 5.8

Comparao dos nveis de hidrocarbonetos policclicos 131 aromticos (HPAs) individuais (g Kg-1 peso seco) nas amostras de hepatopncreas de caranguejos de Nova Orleans, coletadas em setembro 03, maio e outubro 04. Estao 1: HNO11, HNO12, HNO21, HNO22, HNO31 e

HNO32. Figura 5.9 Comparao dos nveis de hidrocarbonetos policclicos 134 aromticos (HPAs) individuais (g Kg-1 peso seco) nas amostras de hepatopncreas de caranguejos de Suru, coletadas em setembro-03, maio e outubro-04. Estao 1: HS11, HS12, HS21, HS22, HS31 e HS32. Figura 5.10 Comparao dos nveis de hidrocarbonetos policclicos 136 aromticos (HPAs) individuais (g Kg-1 peso seco) nas amostras de hepatopncreas de 1: HG11, HG12, HG31 e HG32. Figura 5.11 Comparao dos nveis de hidrocarbonetos policclicos 138 aromticos (HPAs) individuais (g Kg-1 peso seco) nas amostras de hepatopncreas de HPT12, HPT31 e HPT32. Figura 5.12 Concentrao em percentual de carbono orgnico nas 140 amostras de sedimento coletadas nos manguezais nas duas sries de amostragens. Figura 5.13 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 142 sedimento setembro 2003. Figura 5.14 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 142 sedimento Figura 5.15 coletadas no manguezal de Nova Orleans, estao 1, setembro 2003. Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 143 sedimento coletadas no manguezal de Nova Orleans, estao 2, setembro 2003. Figura 5.16 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 143 sedimento coletadas no setembro 2003. Figura 5.17 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 144 sedimento coletadas no manguezal de Suru, estao 2, manguezal de Suru, estao 1, coletadas no manguezal de Piedade, caranguejos do Peteca, coletadas em setembro 03 e outubro 04. Estao 1: HPT11, caranguejos de Barra de Guaratiba, coletadas em setembro 03 e outubro 04. Estao

setembro 2003. Figura 5.18 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 144 sedimento coletadas no manguezal de Reduc, estaes 1 e 2, janeiro 2004. Figura 5.19 Figura 5.20 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 145 sedimentocoletadas no manguezal de Piedade,outubro 2004. Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 145 sedimento coletadas no manguezal de Nova Orleans, estao 1, outubro 2004. Figura 5.21 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 146 sedimento coletadas no manguezal de Nova Orleans, estao 2, outubro 2004. Figura 5.22 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 146 sedimento coletadas no outubro 2004. Figura 5.23 Distribuio dos valores de pH e Eh (mV) nas amostras de 147 sedimento outubro 2004. Figura 5.24 Figura 5.25 Figura 5.26 Figura 5.27 Figura 5.28 Figura 5.29 Figura 5.30 Figura 5.31 Perfil cromatogrfico dos HPAs do manguezal de Piedade, 150 na campanha de setembro de 2003 Perfil cromatogrfico de HPAs de sedimento do manguezal 151 de Piedade, na campanha de outubro de 2004. Perfil cromatogrfico dos HPAs do manguezal de Nova 152 Orleans, estao 1, campanha de setembro de 2003. Perfil cromatogrfico dos HPAs do manguezal de Nova 153 Orleans, estao 2, campanha de setembro de 2003. Perfil cromatogrfico dos HPAs do manguezal de Nova 154 Orleans, estao1, campanha de outubro de 2004. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal de Nova 155 Orleans, estao 2, outubro 2004. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal de Suru, 156 estao 1, setembro de 2003. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal de Suru, 157 coletadas no manguezal de Suru, estao 2, manguezal de Suru, estao 1,

estao 2, setembro de 2003. Figura 5.32 Figura 5.33 Figura 5.34 Figura 5.35 Figura 5.36 Figura 5.37 Figura 5.38 Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal de Suru, 158 estao 1, outubro de 2004. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal de Suru, 159 estao 2, outubro de 2004. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal de Barra 160 de Guaratiba, estao 1, janeiro de 2004. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal de Barra 161 de Guaratiba, estao 1, janeiro de 2004. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal do Canal 162 do Peteca, estao 1, janeiro de 2004. Perfil cromatogrfico de sedimento do manguezal do Canal 163 do Peteca, estao 2, janeiro de 2004. Grfico de correlao entre HPAs em hepatopncreas (g 164 Kg-1, peso seco) e em equivalentes de 1-OHP (g L-1) em urina de caranguejos da Baa de Guanabara (Teste de correlao de Spearman, p<0,05). Figura 5.39 Correlao entre concentrao de equivalentes de 1-OHP 165 (g L-1) em urina de caranguejos com concentrao do somatrio de HPAs (g Kg-1, peso seco) em amostras de sedimento (0-28, 28-58 e 58-90 cm). Figura 5.40 Grfico de correlao entre somatrio de HPAs (g Kg-1, 167 peso seco) e freqncia de microncleo dos locais caranguejos amostrados na Baa de Guanabara. Figura 5.41 Matriz de correlao entre somatrio de HPAs e dos 16 169 HPAs presentes no hepatopncreas de caranguejos e nas amostras de sedimento (camadas 0-28, 28-58 2 58- 90 cm). Figura 5.42 Figura 5.43 Grfico do percentual dos 16 HPAs versus HPAs totais em 174 sedimento e hepatopncreas da Baa de Guanabara. Resultados da anlise de componentes principais em 178 amostras de hepatopncreas e sedimento da Baa de Guanabara. Figura 5.44 Grficos representando os valores de Fluoranteno/Pireno e 183

3-6 anis alquilados / srie de 5 anis alquilados nas amostras analisadas de sedimento de manguezal. Figura 5.45 Figura 5.46 Grficos representando as variveis C2DbzTio/C2Fen e 186 C3DibzTio/C3Fen em sedimento da Baa de Guanabara. ndice Fluoranteno/Pireno versus 3-6 anis alquilados / 191 srie de 5 anis alquilados aplicados em amostras de hepatopncreas. Figura 5.47 Figura 5.48 ndice C2DbzTio/C2Fen e C3DbzTio/C3Fen aplicados em 192 amostras de hepatopncreas. ndices Fluoranteno/Pireno 3-6 anis alquilados / srie de 193 5 anis alquilados aplicados em amostras de hepatopncreas e sedimento do manguezal de Suru. Figura 5.49 ndices Fluoranteno/Pireno versus 3-6 anis alquilados / 194 srie de 5 anis alquilados aplicados em amostras de hepatopncreas e sedimento do manguezal de Nova Orleans. Figura 5.50 ndices Fluoranteno/Pireno versus 3-6 anis alquilados / 195 srie de 5 anis alquilados aplicados em amostras de hepatopncreas e sedimento do manguezal de Guaratiba e no Canal do Peteca. Figura 5.51 ndices C2DbzTio/C2Fen e C3DbzTio/C3Fen aplicados em 196 amostras de hepatopncreas e sedimento do manguezal Nova Orleans. Figura 5.52 ndices C2DbzTio/C2Fen e C3DbzTio/C3Fen aplicados em 197 amostras de hepatopncreas e sedimento do manguezal de Suru. Figura 5.53 ndices C2DbzTio/C2Fen e C3DbzTio/C3Fen aplicados em 198 amostras hepatopncreas e sedimento do manguezal do Canal do Peteca. Figura 5.54 Relao entre C2-dibenzotiofeno e C2-fenantreno aplicados 199 em todas amostras de hepatopncreas e sedimento do manguezal da Baa de Guanabara.

Lista de tabelas

Tabela 2.1 Tabela.2.2

Massa molecular e propriedades fsico-qumicas dos principais 38 HPAs de acordo com a EPA. Concentraes de HPAs em tecidos de organismos marinhos, 47 realizados em ambientes naturais. Concentraes expressas em g g-1 p.s.

Tabela 2.3

Concentraes mdias de HPAs totais em tecidos de caranguejos 50 em estudos realizados em ambientes naturais. Concentraes expressas em g kg-1 p.s.

Tabela 2.4

Concentraes de HPAs em sedimentos em estudos realizados em 58 ambientes naturais. Concentraes expressas em g kg-1, peso seco.

Tabela 3.1 Tabela 4.1 Tabela 4.2 Tabela 4.3 Tabela 4.4 Tabela 4.5 Tabela 4.6 Tabela 4.7 Tabela 5.1 Tabela 5.2 Tabela 5.3

Ameaas Baa de Guanabara. CLAE/F. Resultados do rendimento das hidrlises realizadas. Teste de repetibilidade de injeo. (n=4), regresso linear do tipo (y=ax).

64

Condies de anlise das amostras de hepatopncreas por 70 77 78

Resultados da srie de calibrao em soluo padro de 1-OHP 78 Resultados da srie de calibrao em soluo padro de 1-OHPGr 78 (n=4), regresso linear do tipo (y=ax). Resultados da srie de calibrao em soluo padro de 1-pireno- 79 glucosdeo (n=3), regresso linear do tipo (y=ax). Comparao das declividades entre os compostos 1-OHP, 1- 79 OHPG e 1-OHPGs. Condies de anlise das amostras de hepatopncreas por CPC. por CG/EM. HPAs determinados e seus alquilados homlogos, com os 112 respectivos nmero reteno (T.R.). de anis, ons caractersticos e tempo de 106 Condies de anlise das amostras de sedimento e hepatopncreas 111

Tabela 5.4 Tabela 5.5 Tabela 5.6 Tabela 5.7 Tabela 5.8

Tabela de padres internos. CG/EM.

113

Limites de deteco instrumental nos HPAs determinados por 114 Resultados de repetibilidade e recuperao de HPAs em amostra 116 de material de referncia de sedimentos (n=4), IAEA 383. Resultados de repetibilidade e recuperao de HPAs em amostra 116 de material de referncia de peixes (n=3), IAEA 406. Resultados de repetibilidade, mdia, desvio padro, desvio padro 118 relativo e recuperao do mtodo aplicado amostra de hepatopncreas do Canal do Peteca (estao 1 , set. 03).

Tabela 5.9

Somatrio das concentraes de hidrocarbonetos aromticos totais 125 e dos 16 HPAs em hepatopncreas de caranguejos Ucides cordatus da Baa de Guanabara. Resultados expressos em g Kg-1 peso seco. Amostras realizadas em triplicata.

Tabela 5.10

Critrio adotado pelo NOAA para nveis de contaminao por 126 HPAs em peixes. Concentraes expressas em g kg-1 peso mido.

Tabela 5.11

Somatrio das concentraes de hidrocarbonetos aromticos totais 148 e dos 16 HPAs em sedimentos da Baa de Guanabara, nas diferentes camadas. Resultados expressos em g Kg-1 , peso seco.

Tabela 5.12 Tabela 5.13

Nveis de concentrao, em g Kg-1, de HPAs relacionados sua 149 toxicidade. Teste de correlao de Spearman aplicado entre as concentraes 170 dos compostos individuais em hepatopncreas e em sedimento da 1 camada (0-28 cm)

Tabela 5.14

Teste de correlao de Spearman aplicado entre as concentraes 171 dos compostos individuais em hepatopncreas e em sedimento da 2 camada (28-58 cm).

Tabela 5.15 Tabela 5.16

Massa molecular e coeficientes de partio octanol/gua dos 173 HPAs alquilados de acordo com referncia. Resultados da matriz de componentes rotacionada para os 5 176 primeiros componentes da ACP para HPAs, obtidos em amostras de sedimento e hepatopncreas de caranguejos da Baa de

Guanabara. Tabela 5.17 Tabela 5.18 Razes diagnsticas de hidrocarbonetos policclicos aromticos 180 (HPAs) totais distino de fontes petrognicas de pirolticas. Razes diagnsticas de hidrocarbonetos policclicos aromticos 181 (HPAs) para sedimentos coletados na Baa de Guanabara em set. 03 e out. 04. Valores em g Kg-1(peso seco). Os valores em azul indicam fontes pirolticas e, em amarelo, petrognicas e incolor, mistura das duas fontes. Tabela 5.19 Razes diagnsticas de hidrocarbonetos policclicos aromticos 187 (HPAs) para caranguejos coletados na Baa de Guanabara em set. 03, maio e out. 04. Valores em g Kg-1(peso seco). Os valores em azul indicam fontes pirolticas e, em amarelo, petrognicas e incolor, mistura das duas fontes. Tabela 5.20 Valores de fator de acumulao (FA) e fator de bioacumulao 203 (FBA) entre as concentraes dos 16 HPAs e HPAs nos hepatopncreas dos caranguejos e nos sedimentos (0-28, 28-58, 58-90 cm) dos locais amostrados (set. 03 e out. 04).

Lista de Abreviaturas e Smbolos

1-OHP 1-OHPGr 1-OHPGs MN ADN CLAE/F CG/EM GPC SP111 SP112 SP113 SP211 SP212 SP213 SNO111 SNO112 SNO113 SNO121 SNO122 SNO123 SNO211 SNO212 SNO213 SNO221 SNO222 SNO223 SS111 SS112 SS113 SS121 SS122 SS123

- 1-hidroxipireno - 1-hidroxipirenoglucorondeo - 1-hidroxipirenoglucosdeo - Microncleo - cido desoxirubonuclico - Cromatografia lquida de alta eficincia com detector de fluorescncia - Cromatografia gasosa acoplada ao espectrmetro de massas - Cromatografia por permeao em gel - Sedimento de Piedade, setembro-03, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Piedade, setembro-03, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Piedade, setembro-03, estao 1, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Piedade, outubro-04, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Piedade, outubro-04, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Piedade, outubro-04, estao 1, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Nova Orleans, setembro-03, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Nova Orleans, setembro-03, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Nova Orleans, setembro-03, estao 1, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Nova Orleans, setembro-03, estao 2, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Nova Orleans, setembro-03, estao 2, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Nova Orleans, setembro-03, estao 2, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Nova Orleans, outubro-04, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Nova Orleans, outubro-04, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Nova Orleans, outubro-04, estao 1, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Nova Orleans, outubro-04, estao 2, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Nova Orleans, outubro-04, estao 2, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Nova Orleans, outubro-04, estao 2, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Suru, setembro-03, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Suru, setembro-03, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Suru, setembro-03, estao 1, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Suru, setembro-03, estao 2, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Suru, setembro-03, estao 2, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Suru, setembro-03, estao 2, 3 camada (58-90 cm)

SS211 SS212 SS213 SS221 SS222 SS223 SG111 SG112 SG121 SG122 SPT111 SPT112 SPT121 SPT122 HP11 HP21 HP31 HNO11 HNO12 HNO21 HNO22 HNO31 HNO32 HS11 HS12 HS21 HS22 HS31 HS32 HG11 HG12 HG31 HG32 SPT11 SPT12

- Sedimento de Suru, outubro-04, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Suru, outubro-04, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Suru, outubro-04, estao 1, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Suru, outubro-04, estao 2, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Suru, outubro-04, estao 2, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Suru, outubro-04, estao 2, 3 camada (58-90 cm) - Sedimento de Guaratiba, janeiro- 04, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Guaratiba, janeiro- 04, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento de Guaratiba, janeiro- 04, estao 2, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento de Guaratiba, janeiro- 04, estao 2, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento do Peteca, janeiro- 04, estao 1, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento do Peteca, janeiro- 04, estao 1, 2 camada (28-58 cm) - Sedimento do Peteca, janeiro- 04, estao 2, 1 camada (0-28 cm) - Sedimento do Peteca, janeiro- 04, estao 2, 2 camada (28-58 cm) - Hepatopncreas de Piedade, setembro-03, estao 1 - Hepatopncreas de Piedade, maio-04, estao 1 - Hepatopncreas de Piedade, outubro-04, estao 1 - Hepatopncreas de Nova Orleans, setembro-03,estao 1 - Hepatopncreas de Nova Orleans, setembro-03, estao 2 - Hepatopncreas de Nova Orleans, maio-04, estao 1 - Hepatopncreas de Nova Orleans, maio- 04, estao 2 - Hepatopncreas de Nova Orleans, outubro-04, estao 1 - Hepatopncreas de Nova Orleans, outubro-04, estao 2 - Hepatopncreas de Suru, setembro-03, estao 1 - Hepatopncreas de Suru, setembro-03, estao 2 - Hepatopncreas de Suru, maio-04, estao 1 - Hepatopncreas de Suru, maio-04, estao 2 - Hepatopncreas de Suru, outubro-04, estao 1 - Hepatopncreas de Suru, outubro-04, estao 2 - Hepatopncreas de Guaratiba, setembro-03, estao 1 - Hepatopncreas de Guaratiba, setembro-03, estao 2 - Hepatopncreas de Guaratiba, outubro-04, estao 1 - Hepatopncreas de Guaratiba, outubro-04, estao 2 - Hepatopncreas do Peteca, setembro-03, estao 1 - Hepatopncreas do Peteca, setembro-03, estao 2

SPT31 SPT32

- Hepatopncreas do Peteca, outubro-04, estao 1 - Hepatopncreas do Peteca, outubro-04, estao 2