Алеся Фурс

1
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
Биологический факультет
Кафедра биохимии
Изучение эффективности гепатопротекторного действия

некоторых синтетических простаноидов на эксперементальной
модели повреждения печени CCl4 in vivo
Дипломная работа
студентки 5 курса
Фурс А.З.
Научный руководитель
канд. биол. наук, доцент

Губич О.И.
«Допустить к защите»
заведующий кафедрой биохимии
канд. биол. наук, доцент
Семак И.В. ____________
“ ___” ___________ 2013
Минск, 2013
2
Содержание
стр
Переченьусловных обозначений……………………………………………… 3
Введение……………………………………………………………………….. 4
ГЛАВА 1. Обзор литературы……………………………………………….. 6
1.2 Основные положения биохимии простагландинов……………………… 10
1.3 Простагландины как потенциальные гепатопротекторные средства… 18
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования…………………………….. 23
2.1 Реактивы………………………………………………………………….. 23
2.2 Получение сыворотки крови……………………………………………. 23
2.3 Определение активности щелочной фосфатазы ……………………….. 23
2.4 Определение активности аланинаминотрансферазы…………………… 24
2.5 Определение содержания билирубина в сыворотке крови крыс……. 26
2.6 Определение содержание белка в сыворотке крови …………….……... 26
2.7 Математический анализ и статистическая обработка результатов……. 28
ГЛАВА 3. Результаты и их обсуждение…………………………………… 29
3.1 Постановка эксперементальной модели повреждения печени 29
ССl4 in vivo…………………………………………………………………......
3.2 Изучение гепатопротекторных свойств синтетических 37
простанойдов……………………………………………………………………
Выводы………………………………………………………………………..... 48
Список использованной литературы………………………………………… 49
Благодарности…………………………………………………………………. 54
3
Перечень условных сокращений

АлАТ ‒ аланинаминотрансфераза
АТФ – аденозин-5’-трифосфат
АЦ – аденилатциклаза
ВОЗ – Всемирная организация здравоохранения
Лт – лейкотриен
НАД+ – никотинамидаденозиндинуклеотид окисленный
НАДФН – никотинамидаденозиндинуклеотидфосфат восстановленный
ПГ – простагландин
ПОЛ – перекисное окисление липидов
ПЦ – простациклин
СОЖ – слозистая оболочка желудка
Тх – тромбоксан
Фл – фосфолипаза
цАМФ – 3’ 5’ –аденозинмонофосфат циклический
ЦНС – центральная нервная система
ЩФ – щелочная фосфатаза
ЭФЛ ‒ эссенциальные фосфолипиды
Сa2+ ‒ ионы кальция (II)
СCl4 – четыреххлористый углерод
СОХ – циклооксигеназа
DP – рецептор простагландинов группы D
EP ‒ рецептор простагландинов группы E
FP ‒ рецептор простагландинов группы F
IL – интерлейкин
IP ‒ рецептор простагландинов группы I
TNF – фактор некроза опухолей
TP – рецептор тромбоксанов
TGF – фактор роста опухолей
4
Введение
Четыреххлористый углерод (СCl4) – бесцветная, негорючая, летучая
жидкость с отличительным запахом, нерастворимая в воде, получаемая в
промышленных условиях путем хлорирования метана, этана, пропана или
пропена. СCl4 широко применяется в качестве бытового растворителя,
чистящего агента, химического реагента. В тоже время клинические
исследования показывают, что хроническое вдыхание паров этого соединения
может подавлять активность ЦНС и вызывать дегенерацию печени и почек [32].
Он обладает умеренно выраженным местным раздражающим действием и
способен вызывать дерматит, конъюнктивит, ларинготрахеит, гастроэнтерит
[47]. СCl4 резко повышает чувствительность миокарда к адреналину и
адреномицетикам. Известно, что хлорированные углеводороды быстро
всасываются в желудочно-кишечном тракте и в легких, и уже через несколько
минут их можно определить в крови. Хорошо известны факты, когда спустя
несколько минут после вдыхания паров СCl4 или его попадания внутрь per os
наблюдалась потеря сознания и развитие резко выраженной клинической
картины интоксикации [48].
Значительные количества данного яда накапливаются в жировой ткани.
Смертельная доза СCl4 при его приеме внутрь (LD100) составляет 20-30 мл для
взрослого человека и 10-15 мл для ребенка [48]. С 1970 года использование
СCl4 в качестве растворителя в США запрещено из-за его токсичности, но он
все еще производится в больших количествах во всем мире с различными
целями [32]. Смертность от острого отравления СCl4 чрезвычайно высока,
особенно у детей. По данным ВОЗ, он занимает четвертое место среди
наиболее опасных химических токсикантов и ежегодно уносит жизни 114 000
человек [32].
Несмотря на то, что СCl4 широко применяют в экспериментальных
моделях оценки терапевтического потенциала новых потенциальных
лекарственных средств и природных антиоксидантов, до сих пор не найдены
5
лекарственные препараты, способные нейтрализовать его токсическое

действие на различные органы [30]. Наиболее широко распространенным
способом лечения подобных отравлений СCl4 является экстренный гемо- и
гепатодиализ, а также переливание больших обьемов донорской крови в
первый час после попадания данного токсиканта в организм [32].
В этой связи особый интерес клиницистов привлекают природные ПГ и
их синтетические аналоги, способные не только обеспечивать поддержание
гомеостаза, но и проявляющие множество защитных эффектов in vivo и in
vitro. Например защищающие нейроны от токсического действия стрихнина и
барбитуратов, потенциирующие и терминирующие процесс воспаления,
оказывающие противоупухолевое и противовирусное действие,
восстанавливающие микроциркуляцию после различных повреждений тканей,
проявляющие цитопротекторные свойства на клетки печени при воздействии
на них этанола, Д – галактозамина и ряда факторов физической природы [14,
44]. Не исключается возможность использования простаноидов в качестве
гепатопротекторов при воздействии на организм галогензамещенных
углеводородов [8].
Таким образом, целью настоящей работы является оценка
гепатопротекторных свойств синтетических простаноидов на
эксперементальной модели острого токсического повреждения печени CCL4 in
vivo.
6
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Биохимические пути реализации токсического действия
четыреххлористого углерода
На сегодняшний день известно, что токсическое действие СCl4 реализуется в
организме четырьмя важнейшими биохимическими путями:
1. непосредственным воздействием на печень (эффект растворителя)
2. инициацией перекисного окисления липидов
3. нарушением Сa2+ - гомеостаза
4. повреждением нуклеиновых кислот [41].
Ни один из этих процессов не является непосредственной причиной СCl4-
индуцированной клеточной гибели, но в совокупности они обеспечивают
летальный эффект, действуя однократно в высокой дозе или в течение
продолжительного периода в низких дозах. Повреждение печени,
индуцированное СCl4, было смоделировано в экспериментах на монослоях
гепатоцитов крыс, с акцентом на вовлеченность ковалентного связывания
метаболитов СCl4 с компонентами клетки и/или пероксидативного повреждения
как основной причины повреждения клеток. В ходе проведения подобного
эксперимента было установлено [32]:
1. Ковалентное связывание C14-метаболитов регистрировалось в
гепатоцитах сразу после воздействия СCl4.
2. Низкое парциальное давление O2 увеличивало биотрансформацию СCl4 и,
таким образом, ковалентное связывание возрастало.
3. CCl4 связывался с липидами и белками всех клеточных фракций.
Связывание происходило с триацилглицеролами и фосфолипидами.
4. СCl4 снижал скорость секреции триацилглицерола.
5. α-токоферол блокировал окисление липидов, но нековалентное
связывание и секреция липопротеинов была заингибирована.
6. Радикальная ловушка (пиперонил бутоксида) предотвращала СCl4 -
индуцированное окисление липидов, ковалентное связывание
7
метаболитов СCl4 с клеточными компонентами и нарушение метаболизма

липопротеинов. Таким образом, ковалентное связывание радикала CCl3∙ с
клеточными компонентами инициируют ингибирование секреции
липопротеинов. Это приводит к образованию аддуктов и,
соответственно, возможной инициации рака. С другой стороны реакция
радикала CCl3∙ с O2 инициирует окисление липидов и вызывает
нарушение Сa2+-гомеостаза, и, соответственно, инициирует апоптоз и
клеточную гибель. Эти процессы взаимосвязаны, и то какой процесс
будет иметь место зависит от парциального давления кислорода [42].
Непосредственное повреждение печени CCl4. Согласно данным
литературы, ранняя гибель гепатоцитов в культуре не зависит от метаболизма
СCl4, и может быть связана с прямым действием СCl4 на внутриклеточные
мембраны. СCl4 усиливает клеточную проницаемость in vitro в концентрациях,
которые способны вызвать клеточную гибель [41].
Инициация СCl4 перекисного окисления липидов. Установлено, что
СCl4 подвергается биотрансформации в печени цитохромами: (CYP)2E1,
(CYP)2B1, (CYP)2B2, а возможно, и (CYP)3А, формируя трихлорметильный
радикал (CCl3∙). Данный радикал может образовывать сшивки с
биологическими молекулами (нуклеиновыми кислотами, белками, липидами),
вызывая нарушения важнейших клеточных процессов, таких как метаболизм
липидов, нарушение матричных процессов с соответствующими
последствиями, в виде липидной дегенерации, некроза и апоптоза, а также
реагировать с молекулярным кислородом, формируя трихлорметилперекисный
радикал (CCl3COO∙)[12]. CCl3COO∙ инициирует цепную реакцию окисления
липидов, которая повреждает полиненасыщенные жирные кислоты, входящие
в состав фосфолипидов. Это вызывает изменение проницаемости мембран
митохондрий, эритроцитов, плазматических мембран, приводя к нарушению
клеточного гомеостаза и кальциевого обмена, что и приводит к гибели клеток.
Среди продуктов деградации жирных кислот преобладают реактивные
8
альдегиды, особенно 4-гидроксиноненаль, который легко связывается с

функциональными группами белка, и ингибирует активность клеточных
ферментов [32].
Перекисное окисление липидов лежит и в основе повреждающего
действия СCl4 на мембраны лизосом. Снижение стабильности и повышение
проницаемости лизосомальных мембран приводит к высвобождению
лизосомальных ферментов и, соответственно, к повреждению различных
структур клетки, лизосомальными ферментами. Повышение хрупкости
лизосомальных мембран может быть также вызвано низким энергетическим
уровнем паренхимальных клеток вследствие подавления СCl4 синтеза АТФ
поврежденными митохондриями [43].
Нарушение Сa2+-гомеостаза. Нарушение Сa2+-гомеостаза – второй
важнейший механизм реализации токсического действия СCl4 [46]. При
воздействии СCl4 происходит повышение уровня цитозольного Сa2+. Это
связано с ингибированием Сa2+ - и Mg2+ - АТФаз, которые переносят ионы
кальция из эндоплазматического ретикулума. Повышение уровня цитозольного
Сa2+ является и результатом активации Сa2+ - каналов. Ингибирование СCl4-
индуцированного высвобождения Сa2+, 4-метилпиразолем и антиCYP2E1, а
также необходимость НАДФН показывает, что метаболизм СCl4 необходим для
активации высвобождения Сa2+. Способность СCl4 инициировать нарушение
Сa2+ - гомеостаза опосредуется через первоначальное восстановление до CCl3∙,
цитохромом Р450. Образованные или свободные радикалы повреждают
важнейшие метаболические системы, такие как АТФ-зависимый
микросомальный Сa2+-насос [47]. Высвобождение Сa2+ обеспечивается
тиольными оксидантами, такими как 2,2- дитиодипиридин. Липофильные
тиолы могут частично обращать СCl4-индуцированное высвобождение Сa2+
[47] .
Примечательно, что индуцированный СCl4 выход Сa2+ блокируется
рутениумом красным – специфическим ингибитором гуанозинового рецептора.
9
Рутениум красный не блокирует метаболизм СCl4 в СCl3. СCl4 блокирует

связывание гуанозина – специфического лиганда гуанозин-чувствительного
Сa2+- канала. Метаболизм СCl4 в реактивные формы цитохромом Р450 приводит
к активации гуанозин-чувствительного Сa2+- канала, вследствие окисления
липофильных тиолов канала. Активация Сa2+-высвобождающих каналов играет
важную роль в повышении уровня цитозольного Сa2+, обнаруженного в печени
после воздействия гепатотоксинов [47].
Показано также, что ингибирующее действие СCl4 на активность
кальциевого насоса эндоплазматического ретикулума и плазматических
мембран вызывало потерю митохондриями способности удерживать ионы
кальция, приводило к изменению кальциевого гомеостаза вследствие
перераспределения указанных ионов между эндоплазматическим ретикулумом
и митохондриями с одной стороны, цитозолем – с другой стороны. В ряде
экспериментов инкубация изолированных гепатоцитов крысы с СCl4 вызывала
значительное снижение содержания Сa2+ в митохондриальном и
экстрамитохондрильном компартментах [35].
Влияние СCl4 на нуклеиновые кислоты и процессы матричного
синтеза. Действие СCl4 на нуклеиновые кислоты опосредуется его
свободнорадикальными аддуктами (CCl3COO∙) и (CCl3∙), образующимися в ходе
метаболического превращения данного ксенобиотика. CCl3∙ может
образовывать связи с нуклеиновыми кислотами, вызывая развитие
патологических процессов [35].
Интересно, что СCl4 оказывает влияние на экспрессию генов в печени
крыс. Однократная доза СCl4 вызывает изменения в экспрессии генов и синтезе
белка, что может быть связано с механизмом его токсического действия. На
молекулярном уровне СCl4 активирует TNF-α, NO и трансформирующие
ростовые факторы TGF-α и β в клетке, направляет клетку в сторону апоптоза
или фиброза. TNF-α вызывает апоптотические изменения, в то время как TGF-α
направляет клетку в сторону фиброза. Il-6, индуцированный TNF-α, проявляет
10
антиапоптотический эффект; Il-10 частично предотвращает действие TNF-α.

Таким образом, оба интерлейкина способны инициировать восстановление
клеток, поврежденных СCl4 [36].
Воздействие СCl4 на крыс в течение 3 недель приводило к
гипометилированию ДНК печени, по сравнению с ДНК печени контрольных
животных, которая может быть метилирована in vitro с использованием в
качестве донора [H3-метил]- S-аденозинметионина. Эффект СCl4 на
метилирование ДНК корректировался введением S-аденозинметионина, причем
уровень включенности метильных групп в ДНК был сопоставим с аналогичным
показателем контрольных животных [35].
СCl4 также индуцировал значительное снижение сывороточного уровня
гомоцистеина, причем данный эффект частично предотвращался введением S-
аденозинметионина [35].
1.2 Основные положения биохимии простагландинов

Номенклатура простагландинов. Согласно современным
представлениям, ПГ представляют собой отдельную группу биогенных
физиологических активных веществ, индивидуально различающихся по
деталям химического строения и физиологической (фармакологической)
активности [3, 17]. В 30-х гг. 20 века было обнаружено, что семенная
жидкость человека способна вызвать сокращения матки и гладких мышц
других органов. Как выяснилось позже, эти вещества синтезируются в
предстательной железе, и поэтому назвали их простагландины. В 1957 г. ПГ
были выделены из бараньих семенных пузырьков в кристаллическом виде, а в
1962 г. установлена их структура [15]. В настоящее время идентифицировано
14 природных простагландинов, 13 из которых в различных концентрациях
обнаружены почти во всех тканях млекопитающих и человека: в головном
мозге и легких, тимусе и печени, щитовидной и поджелудочных железа,
радужной оболочке глаза и амниотической жидкости [3, 48]. В последующем
11
ПГ были открыты во всех тканях животных, микроорганизмов, грибах и

низших растениях. Содержание простагландинов в большинстве тканей
невелико. Единственный богатый природный источник ПГ ‒ горгониевые
кораллы (Plexaura homomalla), в которых содержание ПГА2 и его производных
достигает 1,5-2% от сухого веса [48].
Все ПГ относятся к ряду жирных кислот. В основе их строения лежит
простаноевая кислота, состоящая из 20-членной углеродной цепи, часть
которой включена в 5-углеродное лактонное кольцо [15]. В связи с этим, ПГ
природной конфигурации можно рассматривать как производные простаноевой
кислоты, в 5-членном кольце которой находятся различные заместители. Все
подобные соединения содержат транс-двойную связь в положении 13 и 15 S-
OH-группу (кроме ПГ G). Кроме того, в молекуле могут находится цис-
двойные связи в положении 5 и 17 [4].
В зависимости от числа двойных связей в боковых цепях каждая группа
подразделяется на серии и нумеруется числовым индексом, например, ПГА 1,
ПГЕ2, ПГI3. Индексация буквами α и β расположения заместителей у
ассиметричного центра принята только в кольце молекулы (α ‒ под плоскостью
кольца, β ‒ над), например, ПГF2α, ПГF2β [4].
Помимо вышеперечисленной полусистематической номенклатуры, для
наименования ПГ в современной биохимии используются правила
номенклатуры терпенов и стероидов (IUPAC): например, ПГЕ2 по
систематической номенклатуре именуется как (5z,11α,13E, 15 S) -11,15-диокси -
9-оксопропан - 5, 13 - диен -1-овая кислота [4].
Биосинтез и метаболизм простагландинов. Химическая близость ПГ к
ненасыщенным жирным кислотам явилась основанием для изучения роли этих
кислот в биосинтезе ПГ. ПГ с одной двойной связью в боковых цепях
синтезируются из эйкозатриеновой (дигомо-γ-линоленовой), с двумя –
эйкозатетраеновой (арахидоновой), с тремя – эйкозапентаеновой
(тимнодоновой) кислот [4]. В экспериментах in vitro инкубация дигомо-γ-
12
линоленовой, арахидоновой и 5,8,11,14,17- эйкозапентаеновой кислот (цис-

форма) с гомогенатом семенных пузырьков барана (источник ферментов
биосинтеза) приводила к образованию ПГЕ1 и ПГЕ2, а при использовании в
качестве источника фермента легких крупного рогатого скота наблюдался
синтез ПГ группы F. Таким образом ненасыщенные жирные кислоты
действительно являются предшественниками ПГ [15].
Первичной реакцией образования ПГ является двойное окисление
ненасыщенной жирной кислоты с образованием лабильного промежуточного
ПГН. Реакция трансформации жирной кислоты включает присоединение 2
молекул О2, образование эндоперекиси, изомеризацию углеродного скелета и
восстановление гидроперекисной группы до оксигруппы. Все реакции
превращения ненасыщенной кислоты в ПГН осуществляется одним ферментом
– мембранным гемогликопротеином – эндопероксид ПГ-синтетазой (ПГН-
синтазой, или СОХ), которая катализирует как реакцию циклооксигенирования,
так и реакцию восстановления гидроперекисной группы (пероксидазная
реакция) [4].
Существует две изоформы СОХ: конститутивная (СОХ-1) и
индуцибельная (СОХ-2), экспрессия которой усиливается
противовоспалительными цитокинами. Именно эта изоформа и является
основной мишенью действия противовоспалительных препаратов, таких как
аспирин и индометацин [43, 48]. В последнее время появляются данные о
третьей изоформе фермента ‒ СОХ-3, которая обнаружена в ЦНС и
рассматривается как мишень действия анальгетика-антипиретика
парацетамола; этим обьясняется отсутствие у него противовоспалительных
свойств и нетипичность гастропатий как проявлений побочного действия[47].
В систему ПГ-синтазы входят разные ферменты, принимающие участие в
биосинтезе ПГ: диоксигеназа, изомераза; донор водорода – НАДФН и др. Для
ее успешного функционирования требуется молекулярный кислород [24].
13
На дальнейших стадиях биосинтеза ПГ происходит образование из

эндопероксидов ПГЕ2 и ПГF2α. Этот процесс протекает в эндоплазматическом
ретикулуме, осуществляется с помощью изомераз и редуктаз. Данные ПГ
являются первичными, так как из них синтезируются соединения других серий,
например, из ПГЕ2 образуется ПГА2, который может превращаться в изомеры:
ПГВ или ПГС. Это подтверждается в экспериментах in vitro: в присутствии
слабой кислоты или щелочи ПГЕ2 подвергается дегидрированию кольца, в
результате чего образуется ПГА. В присутствии сильной щелочи двойная связь
в положении С:10 – С:11 перемещается в позицию С:11 – С:12 и образуется
ПГВ [24].
Особенность биосинтеза ПГ заключается в том, что процесс не является
органоспецифиеским и протекает во всех органах и тканях. Спецификация
образования ПГ той или иной группы в том или ином органе осуществляется на
уровне «вторых» ферментов, трансформирующих ПГ Н в специфический для
данного органа на данном этапе существования в физиологических или
патологических условиях ПГ. Эти органоспецифические ферменты синтеза ПГ
обьединены общим названием ПГН- конвертазы: фермент мембран головного
мозга – эндопероксид –ПГD-изомераза – конвертирует ПГН в ПГD2, ферменты
везикулярных желез – ПГЕ-изомераза и F- редуктаза – в ПГЕ2 и ПГF2 [4]. Тх, в
частности Тх А2, синтезируется преимущественно в ткани мозга, селезенки,
легких, почек, а также в тромбоцитах и воспалительной гранулеме из ПГН под
действием ТхА- синтетазы, а из Тх А2 образуются все остальные Тх. ПГI2
синтезируется преимущественно в эндотелии сосудов, сердечной мышце, ткани
матки и слизистой оболочке желудка из ПГН под действием ПГI-синтетазы
[22].
Простагландины не депонируются в тканях, а синтезируются в весьма
ограниченном количестве по мере физиологической необходимости, и имеют
короткий жизненный цикл. Их биологическое действие реализуется в трех
основных направлениях:
14
1. действие на клетку, в которой они вырабатываются;

2. влияние на окружающие клетки;
3. эффекты на ткани, находящиеся на значительном отдалении от места
биосинтеза [24].
Организм человека синтезирует в сутки в пределах 100 мкг основных ПГ.
Содержание ПГ в отдельных органах и тканях исчисляется в долях
микрограмма на 1 грамм ткани [20]. Низкое содержание ПГ обусловлено, во
многом, исключительной интенсивностью их распада [15,26]. Смысл наличия в
организме системы быстрого разложения ПГ состоит в том, что эти соединения
способны взаимодействовать с колоссальным количеством рецепторов,
находящихся во всех тканях организма. При первом прохождении ПГ по
малому кругу кровообращения разрушается около 90% этих веществ. Лишь ПГ
группы А, как наиболее устойчивые соединения, поступают в большой круг
кровообращения и оказывают мощное, но непродолжительное действие на
различные органы и их системы [24].
Инактивация ПГ в организме млекопитающего предлагает следующие
превращения:
 окисление аллильной 15-оксигруппы под действием 15-окси-ПГ-
дегидрогеназы;
 восстановление транс 13,14- двойной связи 13,14-ПГ-редуктазой;
 β-окисление α-цепи;
 ω- гидроксилирование и окисление ω-спирта в кислоту;
 β-окисление ω-цепи.
Интенсивность метаболизма ПГ и его конечные продукты различаются как у
разных видов животных, так и индивидуально [4, 26].
Химические свойства простагландинов. В соответствии с химической
структурой и молекулярно-клеточными механизмами действия ПГ
подразделяются на две группы: циклопентановые (Е, F, D) и циклопентеновые
15
(А, В, С). Последние характеризуются наличием высокореакционного α,β-

ненасыщенного карбонила [7].
В отличие от истинных ПГ, действующих через специфические,
ассоциированные с G-белками простаноидные рецепторы плазматических
мембран, циклопентеновые ПГ (15d-∆12,14 ПГJ2, ∆12ПГ J2 и ПГ группы А) не
имеют собственных рецепторов на поверхности клеток. Они способны
свободно транспортироваться внутрь клеток и обеспечивать ряд
биологических эффектов, включая модуляцию стрессовой реакции,
ингибирование клеточного цикла, супрессию вирусной репликации, регуляцию
клеточной дифференциации и развития. Большинство эффектов
циклопентеновых ПГ обеспечивается их действием на ряд генов, таких как
гены белков теплового шока, γ-глутамил-цистеин-синтетазы, коллагена и
гемоксигеназы, а также способностью индуцировать образование активных
форм кислорода и усиливать воспалительную реакцию на TNF-α. Более того,
для циклопентеновых ПГ предполагается существование специфического
рецептора в клеточном ядре [7, 47].
Для проявления специфической биологической активности ПГ группы А
требуется химически активная группировка циклопентенового кольца.
Доказательством этого могут быть следующие факты: циклопентановые ПГ (E,
D, F) не проявляют сходного с ПГА ряда биологических эффектов; коньюгация
реактивного центра с глутатионом элиминирует активность циклопентеновых
ПГ. Наконец, физиологические эффекты циклопентеновых ПГ элиминируется
самим циклопентеноном. Напротив, родственные соединения
циклопентанового ряда ( ПГЕ2, ПГЕ1, ПГD), лишенные подобных активностей,
напрямую демонстрируют, что α, β-ненасыщенное циклопентеновое кольцо
необходимо для проявления специфической биологической активности. Так,
ПГ группы А, характеризующиеся наличием α, β – ненасыщенного
карбонилсодержащего циклопентанового цикла, который содержит
электрофильный центр, способны к реакциям нуклеофильного присоединения
16
(присоединения Михаэля). Химическая модификация β- или ω-цепи ПГ данной

группы (введение в них гетероатомов или гетероциклов) может существенно
изменять их биологическую активность, как в случае синтетических аналогов
ПГ других групп [7].
Физиологические эффекты действия ПГ. ПГ занимают особое место
среди многочисленных молекулярных биорегуляторов, осуществляющих
координацию разнообразных жизненных функций всех живых организмов, по
крайней мере, более сложных, чем одноклеточные. Обладая, в отличие от
классических гормонов, чрезвычайно широким спектром физиологических
эффектов, они относятся к наиболее активным биогенным веществам,
выполняющим в организме млекопитающих три основные функции:
1. поддерживающая – поддержание нормального уровня физиологических и
биохимических явлений, происходящих, в организме;
2. молекулярная – изменение активности других механизмов регуляции;
3. медиаторная – опосредование воздействия на клетки других
биологически активных веществ [2].
Важнейшие физиолого-биохимические функции ПГ представлены в
таблице 1.
17
Таблица 1. Важнейшие физиолого-биохимические эффекты ПГ
Система ПГ Физиологический (биохимический) .

органов Эффект Лит-
ра
Нервная ПГЕ2 Влияние на скорость сердцебиения, частоту 4, 29,
ПГЕ1 дыхания, температуру тела, освобождение 38,
ПГF2α гормонов гипоталамуса и надпочечников, 40
ПГ D регуляция сна.
Кровеносная ТхA2 Обеспечение способности крови сохранять жидкое 6, 14,
ПГI2 состояние, поддержание целостность эндотелия 15, 4,
ПГЕ кровеносных сосудов, создание нетромбогенных 2
ПГЕ2 поверхностей, агрегация тромбоцитов,
сосудосуживающее действие,
Сердце ПГ I2 Усиление сокращений сердечной мышцы,
ПГЕ2 учащение ритма, увеличение выброса крови,
защита миокарда от Сa2+-перегрузки.
Иммунная ПГЕ2 Участие в терминации воспаления, регуляция 15
иммунного ответа, увеличение внутриклеточного
цАМФ в В-клетках, ингибирование экспрессии
комплекса гистосовместимости II, регуляция
вторичного иммунодефицита.
Пищеваритель- ПГЕ2 Антисекреторное действие, сокращение 17,
ная ПГЕ продольной мышцы дна желудка, изменение 18,
ПГЕ1 сократительной способности кардиального 25
ПГF2α сфинктера угнетение двигательной активности
ПГF желудка, усиление моторики желудка, синтез и
выделение гликопротеинов.
Выделительная ПГЕ2 Подавление осмотической проницаемости в 19
ТхA2 собирательных трубочках коркового вещества, 20
ПГI2 усиление транспорта Na+, повышение секреции
ПГD2 ренина, предотвращение развития очагового
ПГF2α некроза и постишемической почечной
недостаточности, улучшение ренальной
гемодинамики, клубочковой фильтрации.
Репродуктивная ПГF2α Поддержание нормального состояния 10,
ПГЕ2 небеременного миометрия, регуляция всех стадий 18
ПГ I2 фертильного цикла регуляция процессов
имплантации зародыша, величины пупочного
кровотока, стимуляция родов и лактации.
18
1.3. Простагландины как потенциальные гепатопротекторные

средства
Регуляция образования свободных радикалов в результате аутоокисление
феррокомплекса цитохрома P450 и, как следствие, активация ПОЛ, в условиях
индукции монооксигеназной системы, играет ключевую роль при поражении
печени рядом ксенобиотиков. Важнейшей задачей является ингибирование этих
процессов путем снижения образования интермедиатов кислорода цитохром-
P450-зависимой системой и обезвреживания радикалов соединениями,
имеющими свойства «радикальных ловушек». ПГ отвечают всем требованиям,
предъявляемым к гепатопротекторам, и обладают следующими защитными
свойствами:
1. являются стабилизаторами микросомальных мембран и антиоксидантами;
2. взаимодействуя с цитохромом P450, они снижают активность
монооксигеназ и генерацию супероксид-аниона;
3. являются регуляторами внутриклеточного метаболизма [22].
Многочисленные эффекты ПГ в печени можно разделить на сосудистые,
метаболические, секреторные и защитные. Гемодинамическое действия ПГ
обусловлено вазоконстрикторным действием ТхA2, ПГD2, ПГF2α, в то время как
ПГЕ2 и ПГI2 понижают артериальное давление крови в печени, а также
увеличением регенерации печени, регуляцией метаболизма углеводов. ПГ
принимают участие и в регуляции синтеза желчи. ПГ, синтезированные в
печени, активируют паренхимные и непаренхимные клетки печени, особенно
при патологических состояниях. ПГЕ2 подавляет синтез NO, стимулируемый
цитокином, и выделение активных промежуточных продуктов окисления в
купферовских клетках. ПГЕ2 стимулирует также потребление кислорода в
гепатоцитах печени посредством возбуждения митохондриального дыхания
через цАМФ-зависимый механизм. Таким образом, ПГЕ2 стимулирует синтез
АТФ в гепатоцитах, что необходимо для клеточной защиты в условиях
эндотоксимии [44].
19
ПГЕ2 и ПГI2 проявляют цитопротекторное действие при повреждениях

печени. Механизмы, обеспечивающие этот эффект, зависят от типа
повреждающего агента. Показано, что ПГЕ2, ПГЕ1, ПГI2 и ПГF2α, равно как и
некоторые синтетические аналоги, например, 16,16-диметил-ПГЕ2 и илопрост
(аналог ПЦ), способны частично или полностью предотвращать острое
повреждение печени, вызванное действием СCl4, D-галактозамина, этанола,
вируса гепатита, гипотермической ишемией и другими факторами физической
и химической природы. Наиболее мощным цитопротекторным действием среди
ПГ обладает ПГI2 [44].
Алкогольное поражение печени является наиболее распространенным
органоспецифическим осложнением хронического алкоголизма. Среди
факторов, способствующих развитию алкогольного поражения печени,
основным является повышенный уровень ПОЛ. Общепризнанной является
гипотеза о роли белок–ацетальных аддуктов в развитии алкогольного гепатоза.
В патогенезе алкогольного поражения печени отмечается снижение биосинтеза
ПГ на фоне недостаточности незаменимых жирных кислот. Индуцируемое
этанолом накопление триацилглицеринов в печени связано с изменениями в
обмене ПГ и незаменимых жирных кислот, поскольку ПГ и некоторые их
предшественники снижают или предупреждают развитие алкогольного стеатоза
печени [16].
ПГ серии Е предупреждают развитие алкогольного поражения печени и
поджелудочной железы. ПГЕ1 в условиях индукции микросомальной системы
многократным введением этанола, фенобарбиталом и ацетоном, а также
однократным введением этанола нормализует активность компонентов
монооксигеназной и антиоксидантной системы [16].
Эссенциальные фосфолипиды и ПГЕ2 предупреждают развитие
недостаточности незаменимых жирных кислот при хронической алкогольной
интоксикации. В экспериментах обнаружено, что стабилизация плазматических
мембран печени ЭФЛ при длительном введении этанола связана с
20
нормализацией вязкости гидрофобных областей липидного бислоя мембран.

ЭФЛ и ПГЕ2 восстанавливают трансдукцию сигнала в печени, нарушенную
при хронической алкогольной интоксикации, причем эффект ЭФЛ реализуется
на уровне цАМФ-зависимой системы, тогда как ПГЕ 2 влияет на активность
протеинкиназы С и казеинкиназ. ПГЕ2 оказывает также гепатопротекторное
действие при хронической алкогольной интоксикации, улучшая
морфологическую картину печени и нормализуя активность сывороточных
маркерных ферментов [16].
ПГF2α действует как прооксидант при хронической алкогольной
интоксикации, и антиоксидант в условиях индукции микросомальной системы
ацетоном в сочетании с голоданием. Различные эффекты ПГF2α и ПГЕ2 связаны
с их влиянием на различные изоформы цитохрома P450. Эндогенно
синтезирующиеся ПГ играют существенную роль в предупреждении развития
алкогольного поражения печени, поскольку показано, что ингибитор синтеза
ПГ, индометацин, усиливает повреждающее действие этанола на печень [1].
Снижение ПГЕ и ПГF в СОЖ при хронических заболеваниях печени может
быть связано с возможными изменениями активности специфических
ферментных систем, участвующих в образовании ПГ, сопряженными со
сдвигами в циклазных системах, а также наличием в этиологии болезни
алкоголя, который при хроническом введении ингибирует процессы
превращения арахидоновой кислоты в ПГЕ и ПГF [7].
Известно также, что при обработке гепатоцитов печени СCl4 происходит
активация Ca2+-зависимых мембранных Фл, что вызывает структурную
деградацию мембранных систем и приводит к разрушению клеток. Активация
Фл ингибируется высоким внутриклеточным уровнем цАМФ. ПГI и ПГЕ
стимулируют АЦ после связывания мембранными рецепторами, но
предполагается, то Фл подавляет механизм, лежащий в основе
гепатопротекторного действия ПГ. Вход кальция в гепатоциты может вызвать
первичное повреждение печени, а вторичная активация Фл представляет собой
21
заключительный этап в необратимом повреждении клеток, которое возникает

под влиянием большинства гепатотоксических агентов, действующих на
мембранные системы клеток. Таким образом, предотвращение активации Фл
может уменьшить действие вторичных повреждающих механизмов, но это не
оказывает влияния на инициацию ПОЛ, вызываемую трихлорметил-радикалами
[44].
CCl3COO∙ и CCl3∙ вызывают повреждение и гибель клетки, связанную со
способностью инициировать ПОЛ. ПГЕ2, ПГЕ1 ПГI2, 16,16-диметил- ПГЕ2
защищают печень от повреждения СCl4 и D-галактозамином. Это является
результатом увеличения содержания цАМФ в присутствии ПГ, что связано с
активацией АЦ, образующийся цАМФ стабилизирует плазматическую
мембрану [44].
Возможно использование препаратов ПГ и после трансплантации печени.
Хотя механизмы повреждения печени, вызванные ишемией, нуждаются в
изучении, предполагается, что на функционировании пересаженной печени,
влияет перераспределение свободных радикалов кислорода, что
сопровождается повреждением эндотелиальных клеток и активацией клеток
Купфера, все это приводит к нарушению микрокровообращения в печени.
Оксидативный стресс является ключевым моментом повреждения ткани (а
именно клеток Купфера) при ишемии. Было продемонстрировано, что
реоксигенация после холодной гипоксии, уменьшает синтез ПГЕ2, ПГF2α и ПЦ,
но не ЛТ, обеспечивая повреждение клеток. Сужение сосудов и скопление
тромбоцитов, вызванное синтезом ТхA2 , обычно подавляется ПГI2,

который синтезируется эндотелиальными клетками. Однако эндотелиальные
клетки при ишемии повреждены и неспособны синтезировать ПГI2, который
вызывает адаптивный ответ. Имидазол (ингибитор ТхA2) и илопрост (аналог
ПГI2) улучшают состояние при пересадке печени у животных. ПГЕ усиливает
нарушение микроциркуляции, связанное с ишемией [44].
22
В механизмах предотвращения развития токсико-инфекционного шока

важнейшую роль также играют ПГ. ПГЕ2, активирующий купферовские клетки,
ингибирует в них синтез цитокина. Этот эффект, кроме иммунодепрессивного
действия ПГЕ2 на лейкоциты крови, осуществляет саморегуляцию синтеза
цитокина в макрофагах печени. Ингибирование синтеза цитокина
осуществляется ПГЕ2 действием на EP2- и EP4- подтипы рецепторов в
купферовских клетках, которое ведет к увеличению концентрации цАМФ в
этих клетках. Таким образом, ингибирование синтеза ПГЕ2 в условиях
токсического поражения организма может представлять терапевтический
интерес [44].
Несмотря на то, что механизмы наблюдаемой гепатопротекции в
настоящее время окончательно не установлены, природные и синтетические ПГ
все больше используются при лечении пациентов с острой печеночной
недостаточностью, циррозом и хроническими заболеваниями печени [44].
23
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Реактивы
В работе были использованы следующие реактивы: наборы реактивов для

определения активности ЩФ и в биологических жидкостях кинетическим
методом, набор реактивов «билирубин-диазо» (НТПК «Анализ Х» Беларусь),
ПГI2 («Реахим», Россия), БСА («ДиаМ», Германия), БСА («ДиаМ, Германия),
аналоги Ю-13 и ТЯ-227 (ГНУ «Институт биоорганической химии НАН
Беларуси»). Остальные реактивы, использовавшиеся в работе, имели
квалификацию "ЧДА", "ХЧ" или "ОСЧ".
2.2 Получение сыворотки крови

Работа выполнена на беспородных крысах самцах массой 200-250 г,
находящихся на стандартной диете вивария БГУ. Все проводимые
эксперименты выполнялись в соответствии с правилами гуманного обращения
с лабораторными животными, принятыми на биологическом факультете БГУ.
Кровь крысы (2-3мл) собирали в сухую центрифужную пробирку и
оставляли на 30 мин при 37 °С. По истечении указанного времени тонкой
стеклянной палочкой осторожно обводили стенки пробирки для отделения от
них сгустка, кровь центрифугировали (10 мин, 3000 об/мин). Полученную
сыворотку сливали в чистую пробирку [22].
2.3 Определение активности щелочной фосфатазы
Принцип метода: Кинетический метод определения каталитической

активности ЩФ основан на ферментативной реакции:
ϸ-нитрофенилфосфат + АМР → АМР-фосфат + ϸ-нитрофенол
Ход работы: В кювету помещали 1 мл рабочего реагента состоящего из

0,01% аминометилпропанола, 25 ммоль/л магния хлорида, 4% ϸ-нитро-
24
фенилфосфата. Затем в кювету добавляли 20 мкл сыворотки крови и тщательно

перемешивали. Инкубировали 1 мин при комнатной температуре, измеряли
оптическую плотность раствора по отношению к воде при 405 нм на
спектрофотометре Cary-50 («Varian», Австралия). Точно через 1 и 2 мин
повторяли измерения. Вычисляли среднее значение оптической плотности за 1
мин (∆А/ мин).
Каталитическую активность ЩФ (в Е/л) в исследуемой пробе определяли
по формуле:
Активность ЩФ (Е/л) = ∆А/ мин x 6000
2.4 Определение активности аланинаминотрансферазы
Принцип метода: Кинетический метод определения АлАТ основан на

следующих ферментативных реакциях:
L-аланин + 2-оксоглутарат → глутамат + пируват
Пируват + НАДН+Н+ → лактат + НАД+
Уменьшение концентрации НАДН пропорционально активности АлАТ.
Ход работы: К 1 мл рабочего раствора, содержащего 50 ммоль/л

фосфатный буфер (рН=7,6), 5 ммоль/л НАДН, 5 ммоль/л АлАТ, 0,03% 2-
оксоглутарат Na, добавляли 0,1 мл сыворотки крови, перемешивали и
инкубировали 3 мин. при комнатной температуре. Измеряли оптическую
плотность раствора по отношению к воде при 340 нм на спектрофотометре
«Cary-50» («Varian», Австралия). Затем в течении 3 минут замеряли
оптическую плотность через каждые 60 секунд и рассчитывали среднее
измерение оптической плотности за 1 минуту (∆А/ мин).
Активность АлАТ в исследуемой пробе в определяется по формуле:
Активность АлАт (Е/л) = ∆А/ мин x 1770.
25
2.5 Определение содержания билирубина в сыворотке крови крыс по

Йендрашику
Принцип метода: В основу использования диазометода по Йендрашику,

положена реакция взаимодействия диазотированной сульфаниловой кислоты
со связанным билирубином сыворотки. По интенсивности образующейся
окраски судят о концентрации билирубина, вступающего в прямую реакцию.
При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива несвязанный
билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние, благодаря
чему он также вызывает окрашивание раствора со смесью диазореактивов. По
интенсивности этой окраски фотометрически определяют концентрацию
общего билирубина. По разнице между общим и связанным билирубином
находят находят содержание несвязанного билирубина.
Реактивы:
1. Диазосмесь, содержащая 0,5% сульфониловую кислоту; 0,5% нитрит Na.
2. Кофеиновый реактив, содержащий 5% кофеин; 7,5% бензоат Na; 12,5%
ацетат Na.
Смешивание реагентов проводили по схеме, представленной в таблице 2.
Таблица 2. Порядок смешивания реагентов для определения свободного и
связанного билирубина
Реагенты Общий Связанный Контрольная проба

При определении
билирубин ( мл) билирубин (мл)
(мл)
Сыворотка 0,5 0,5 0,5
Кофеиновый 1,75 ‒ 1,75
реактив
Физиологический ‒ 1,75 0,25
Раствор
Диазосмесь 0,25 0,25 ‒
стоять при комнатной температуре на 20 мин. Для определения связанного
26
билирубина колориметрирование осуществляли через 10 мин после добавления

диазосмеси.
Растворы фотометрировали на спектрофотометре «Cary-50» («Varian»,
Австралия) при длине волны 530 нм. Расчет проводили по градуировочному
графику (рис. 1).
Рис.1. Калибровочная прямая для определения содержания билирубина в крови

крыс (n=3)
Примечание: каждая точка на графике соответствует средней арифметической из трех
независимых измерений.
2.6 Определение содержания белка в сыворотке крови по методу

Бенедикта
Принцип метода: метод Бенедикта основан на способности белков

давать с раствором сернокислой меди фиолетовое окрашивание в щелочной
среде. Для этого метода необходимо наличие двух ОН-групп и трех атомов
азота, находящихся в полипептидной цепи. Группа, образующая пептидную
связь ( - ОС – NH - ) в щелочной среде, присутствует в своей таутомерной
форме. В избытке щелочи происходит диссоциация водорода енольной ОН-
группы, при этом возникает отрицательный заряд, с помощью которого
27
кислород, взаимодействуя с медью, образует соль; кроме того медь образует

дополнительные связи с атомами азота пептидных связей. Возникший комплекс
характеризуется высокой стабильностью.
Ход работы: К 1 мл исследуемого образца, добавляли 3 мл 3% раствора

NaOH и 0,2 мл реактива Бенедикта содержащнго 17,3 % раствора цитрата Na,
10% Na2CO3, 17% CuSO4. Раствор хорошо перемешивали и через 15 мин
определяли оптическую плотность на спектрофотометре «Cary-50» («Varian»,
Австралия) при 330 нм. Содержание белка в исследуемых растворах
рассчитывали по калибровочному графику (рис.2).
Рис. 2. Калибровочная прямая для определения содержания белка в

сыворотке крови крыс по методу Бенедикта (n=3)
Примечание: каждая точка на графике соответствует средней арифметической из трех
независимых измерений.
28
2.7 Математический анализ и статистическая обработка результатов

Экспериментальные данные обрабатывали статистически с подсчетом
среднего арифметического (Х), стандартной ошибки среднего арифметического
(±Sx) и достоверности при уровне значимости p  0,05 [3]
29
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Постановка эксперементальной модели повреждения печени CCl4
in vivo
Как отмечалось в Главе 1, среди наиболее известных гепатотоксинов
четыреххлористый углерод (CCl4) и родственные галогензамещенные
углеводороды занимают одно из первых мест по частоте возникновения и
тяжести протекания последствий случайных и профессиональных
интоксикаций [45]. Кроме того, CCl4 – вещество, широко используемое для
создания экспериментальных моделей острой печеночной недостаточности,
индукции цирроза печени и последующего изучения на этих моделях
молекулярных механизмов действия потенциальных гепатопротекторов
(флавоноидов, антиоксидантов, простаноидов) и ряда лекарственных
препаратов [33]. Ингибирование циклооксигеназы – ключевого фермента
синтеза эндогенных ПГ – в ходе начальной стадии отравления увеличивает
гепатотоксичность CCl4. Это служит важным доказательством наличия у
эйкозаноидов гепатопротекторного действия. Более того, в присутствии ПГI2
(простациклин), 16,16-диметил-ПГЕ2, 15-метил-ПГF2α, ПГЕ1 экспериментально
установлено значительное уменьшение повреждения гепатоцитов в культуре, а
также повышение выживаемости животных с CCl4-индуцированным некрозом
печени [33]. Между тем, несмотря на детальную изученность поражающего
действия CCl4, представления о механизмах гепатопротекторного действия
простагландинов в настоящее время носят фрагментарный характер.
В то же время в литературе описано немало примеров успешного
использования указанных эйкозаноидов в лечении пациентов с острой
печеночной недостаточностью, циррозом печени, а также в случаях
трансплантации печени [39]. Таким образом, анализ молекулярных и клеточных
путей реализации гепатопротекторной активности эйкозаноидов, а также поиск
новых простаноидов, обладающих подобным действием является одной из
актуальных задач современной фармакологии и фармакотерапии.
30
На этом основании, перед нами была поставлена задача оценить in vivo

гепатопротекторные свойства синтетических аналогов простагландинов,
которые, как было показано в ряде работ, проведенных в НИЛ биохимии
обмена веществ при кафедре биохимии, проявляют выраженные
цитопротекторные свойства на клеточной модели повреждения печени 0,5%
CCl4 [9]. В качестве маркеров повреждения печени в нашей работе были
использованы биохимические параметры, широко используемые в
лабораторной диагностике печеночной патологии: содержание билирубина и
общего белка, активность щелочной фосфатазы и аланинаминотрансферазы в
сыворотке крови крыс.
На первом этапе нашей работы мы оценили эффективность и
приемлемость для анализа действия ПГ 2-ух наиболее широко используемых в
экспериментальной практике моделей, характеристика которых приводится в
таблице 3.
Таблица 3 . Характеристика 2 используемых в работе моделей токсического
действия СCl4 [25].
№ п.п. Способ введения Доза ССl4 Кратность Сроки забоя

CCl4 введения животного
1 Внутрижелудочный 0,5 мл/кг 1-кратно Через 24 часа
2 Внутрибрюшинный 0,5 мл/кг 1-кратно Через 24 часа
Примечания: СCl4 перед введением разводили растительным маслом в соотношении
1:1. В контрольных сериях экспериментов животным соответствующими способами вводили
эквивалентное количество растительного масла.
Характер наблюдаемых изменений биохимических маркеров
повреждения печени представлен в табл. 4. и на рис. 3-7.
Как свидетельствуют данные представленные на рис. 3 и в табл. 4
активность AлAT и ЩФ при развитии острой интоксикации СCl4 достоверно
возрастает. Так активность AлAT, при внутрижелудочном введении СCl4 ,
возрастает на 779%, а при внутрибрюшинном введении − на 552% к

31
соответствующему контролю. Активность ЩФ в сыворотке крови

увеличивается на 10% при внутрижелудочном введении СCl4, а при
внутрибрюшинном введении СCl4 - на 18% к соответствующему контролю. Это
хорошо согласуется с данными литературы и свидетельствует о тяжелом
повреждении печени [11,28].
Таблица 4. Результаты измерения основных биохимических маркеров

поражения печени, используемых в клинической диагностике, в крови крыс, в
различных сериях экспериментов
Серия Измеряемые параметры (Х±Sx)

экспериментов Активность Активность Содержание Содержание Содержание
щелочной АлАТ, ед/л белка, мг, свободного связанного
фосфатазы, билирубина билирубина
ед/л мкмоль/л мкмоль/л
Интактные 369,0±9,0 19,8±1,9 96,2±2,5 71,0±3,0 0,5±0,1

крысы (100%) (100%) (100%) (100%) (100%)
Контроль 1 576,3±2,5 24,8±3,3 88,5±4,5 43,0±4,5 5,0±4,0

(раст. масло (156,1%) * (125,3%) * (92,0%) (60,6%)* (1000,0%)*
в/ж, 0,5 мл /кг)
Контроль 2 512,0±5,0 21,6±4,9 101,9±5,5 54,0±2,5 0,7±0,1
(раст. масло (139,2%) * (109,1%) (106,1%) (76,1%) (140,0%) *
в/бр, 0,5 мл /кг)
Опыт 1 540,1±3,6 179,0±3,9 110,9±6,5 643,0±6,5 360,0±5,4

(0,5 мл СCl4/кг, (146,3%) * (904,0%) * (115,5%) * (907,3%) * (72000,0%) *
в/ж)
Опыт 2 580,0±6,4 131,0±7,0 106,8±3,6 430,0±6,4 96,0±3,6
(0,5 мл СCl4/кг, (157,2%) * (661,6) * (111,0%) (605,6%) * (19200,2%) *
в/бр)
Опыт 3 437,6±7,0 31,9±2,4 92,3±2,1 114,0±4,5 46,0±2,9

(50 мкг ПГI2/кг (118,6%)* (160,9%) * (96,0%) (160,6%) * (9200,1%) *
в/бр + 0,5 мл
СCl4/кг в/бр)
Примечание * - результаты достоверны при р≤ 0,05 (n=5).Достоверность эффектов

растительного масла рассчитана по отношению к показателю интактным крыс.
Достоверность токсического действия СCl4 рассчитана по отношению к эффектам
растительного масла. Достоверность эффекта ПГI2 посчитана к эффекту СCl4, введенного
соответствующим образом.
32
А.
*
* * *
*
Б.
*
* *
А ‒ Щелочная фосфатаза
Б ‒ Аланинаминотрансфераза
Рис.3. Влияние CCl4 на изменение активности маркерных ферментов печени в сыворотке
крови крыс.
Серия 1 ‒ интактные крысы
Серия 2 ‒ контроль 1 (растительное масло, в/ж, 1-кратно, 0,5 мл/кг)
Серия 3 ‒ контроль 2 (растительное масло, в/бр, 1-кратно, 0,5 мл/кг)
Серия 4 ‒действие CCl4 (CCl4: растительное масло = 1:1, в/ж, 1-кратно, 0,5 мл/кг).
Серия 5 ‒ действие CCl4 (CCl4: растительное масло = 1:1, в/бр, 1-кратно, 0,5 мл/кг).
Серия 6 ‒ ПГ I2 в/бр, 1-кратно, 50 мкг/кг, через 60 мин после CCl4 (CCl4: растительное масло
= 1:1, внутрижелудочно, 1-кратно, 0,5 мл/кг).
* - результаты достоверны при р≤ 0,05 (n=5). Достоверность эффектов растительного масла
рассчитана сериями (2 и 3) по отношению к показателю интактной серии (1). Достоверность
токсического действия СCl4 рассчитана серией (4 и 5) по отношению к эффектам
растительного масла, введенного соответствующим образом. Достоверность эффекта ПГI2
(серия 6) посчитана к эффекту СCl4 (серия 5), введенного соответствующим образом.
33
Воздействие СCl4 на печень крыс сопровождалось также незначительной

тенденцией к увеличению содержания общего белка в сыворотке крови крыс.
Так, при внутрижелудочном введении СCl4 наблюдалось повышение этого
параметра на 15,5 %, а при внутрибрюшинном введении - на 11 %, по
отношению к показателям нормы (рис. 4). По всей вероятности это
незначительное повышение общего белка связано с выходом печеночных
ферментов в кровяное русло из разрушенных гепатоцитов на фоне понижения
интенсивности процесса биосинтеза белка, как следствие поражение клеток
печени СCl4, и принимая во внимание тот факт, что именно гепатоциты
являются местом образования альбуминов, фибриногена и части глобулинов
крови [11]
Рис 4. Влияние СCl4 на изменение содержания общего белка в сыворотке крови крыс
34
Большое диагностическое значение имеет при повреждении печени

определение свободного билирубина в сыворотке крови. Увеличение
концентраций связанного и отчасти свободного билирубина, как
свидетельствуют литературные источники, свойственно желтухе,
возникающей в результате поражения паренхимы печени, факторами
инфекционного и токсического характера [11]. Помимо нарушения экскреции
связанного билирубина в желчные капилляры, вследствие чего он попадает
непосредственно в кровь, отмечается ослабление конъюгации свободного
билирубина и поступление его в гепатоцит. Это влечет за собой повышение
уровня свободного билирубина в сыворотке крови крыс. Это отмечалось нами
при внутрижелудочном введении СCl4 (рис. 5), когда уровень содержания
свободного билирубина возрастал на 846% и связанного билирубина в 71000
раз к показателям контроля крыс. При внутрибрюшинном введении СCl4
нарушение обмена билирубина сопровождалось увеличением содержания в
сыворотке крови свободного билирубина на 529%, а связанного билирубина –в
19060 раз по отношению к соответствующим показателям контроля (рис. 6).
Можно предположить, что подобная гипербилирубения связана с нарушением
конъюгации билирубина в гепатоците или нарушением захвата билирубина
клетками печени, поврежденными СCl4 [11].
35
А.
*
*
Б.
*
*
*
А ‒ Свободный билирубин
Б ‒ Связанный билирубин.
Рис 5. Влияние СCl4 на изменение содержания свободного и связанного билирубина в
36
Суммируя вышесказанное, можно заключить, что введение СCl4 крысам

в дозе 0,5 мл/кг сопровождается выходом в кровь AлAT и ЩФ, нарушение
обмена билирубина в клетках печени, что хорошо согласуется с данными
литературы [28]. Однако, традиционный способ постановки модели острой
токсичности, заключающийся во внутрижелудочном введении CCl4,
обеспечивал проявление более выраженных изменений, поэтому на
последующих этапах работы был использован именно этот способ введения
токсиканта.
Для подтверждения эффективности выбранной модели на последующем
этапе работы мы оценили гепатопротекторный эффект природного ПГI2 в
общепринятой дозе 50 мкг, при однократном внутрибрюшинном его введении
спустя 1 час после внутрибрюшинного введения СCl4 в дозе 0,5 мл/кг. Как
свидетельствуют данные на рис. 3‒5 и в таблице 4, данное соединение снижает
уровень анализируемых маркеров гепатотоксичности фактически до уровня,
характерного интактным животным, что согласуется с данными литературы
[38], и подтверждает эффективность ПГI2 как наиболее широко используемого
в экспериментальной и клинической практике, гепатопротектора
простаноидного типа.
37
3.2. Изучение гепетопротектерных свойств синтетических

простаноидов
На следующем этапе нашей работы мы оценили гепатопротекторное
действие синтетического аналога ПГА Ю-13 на описанной модели патологии
печени. Данный аналог уже подвергался исследованию в НИЛ Биохимии
обмена веществ на кафедре биохимии БГУ. В частности, было установлено, что
данное соединение в концентрации 10-7 – 10-8 моль/л оказывало
цитопротекторное действие на гепатоциты в первичной суспензии после
обработки их 0,5% ССl4 или 0,14% хлороформом [7]. На этом основании
представлялось целесообразным подтверждение его свойств в экспериментах in
vivo.
Принимая во внимание тот факт, что максимальный защитный эффект
исследованный простаноид и ПГ I2 проявляли в одинаковой концентрации – 10-7
моль/ л, а также результаты, полученные нами при изучении
гепатопротекторного действие ПГ I2 in vivo. На начальном этапе было принято
решение использовать аналог Ю-13 в дозе 50 мкг/кг, в расчете как для
внутрибрюшинного, так и для внутрижелудочного введения.
Установлено, что однократное внутрибрюшинное введение Ю-13 в
указанной дозе через 1 час после ССl4 не улучшало значений анализируемых
показателей (табл. 5, рис. 6-8). Это может быть объяснено быстрой
биотрансформацией данного токсиканта цитохромами P450 2E1 и P450 2B1/2 в
свободнорадикальные продукты с последующим вовлечением их в
массированное перекисное окисление липидов плазматических и
внутриклеточных мембран. Известно, что используемая в настоящее время
терапия острых отравлений четыреххлористым углеродом предполагает
проведение экстренных процедур спасения пациента в первый час после
попадания в организм CCl4 [2].
Таким образом, на следующем этапе нашей работы мы сократили время
между введением CCl4 и Ю-13 до 5 минут. В этом случае наблюдалось
38
снижение активности АлАТ в 2,6 раза, снижение содержания свободного

билирубина в 3,7 раза, связанного билирубина в 7,5 раз (табл. 5, рис. 8-10).
Наблюдалась тенденция к снижению активности щелочной фосфатазы,
содержание общего белка в сыворотке крови достоверно не изменилось. Таким
образом, в данной серии эксперимента наблюдалась частичная
гепатопротекция, не приводящая тем не менее к показателям контрольной
серии. Это может быть объяснено тем, что воздействие CCl4 на печень
определяется не только инициацией ПОЛ, но и наличием у данного соединения
эффекта растворителя, который в данном случае не компенсируется.
Примечательно, что внутрижелудочное введение Ю-13 в
охарактеризованной дозе через 5 минут после четыреххлористого углерода не
приводила к описанным выше эффектам и даже значительно увеличивало
такие важнейшие диагностические маркеры повреждения печени как
активность щелочной фосфатазы, а также содержание в сыворотке свободного
и связанного билирубина (табл. 5, рис. 8-10).
Именно поэтому нами была осуществлена попытка добиться
максимального защитного эффекта простаноида путем увеличения вводимой
внутрибрюшинно дозы в 10 раз (до 500 мкг/кг). Было показано, что
использование столь высоких концентраций простаноида оказывает не
гепатопротекторный, а гепатотоксичный эффект, что можно объяснить
значительным превышением его физиологических концентраций
(табл. 5, рис. 8-10).
Таким образом, в ходе данного этапа работы показано наличие у
простаноида Ю-13 гепатопротекторных свойств на модели CCl4-
индуцированной гепатотоксичности in vivo при условии его
внутрибрюшинного введения в дозе 50 мкг/кг спустя 5 мин после введения
четыреххлористого углерода.
39
Таблица 5. Результаты изменения величин основных биохимических маркеров

поражения печени, в сыворотке крови крыс, в различных сериях экспериментов
экспериментов
Активность Активность Содержание Содержание Содержание
Интактные крысы 369,1 ±0,1 19,8±1,9 96,2 ± 2,1 71,0±0,1 0,5 ± 0,1
(100%) (100%) (100%) (100%) (100%)
Контроль 512,3±2,5 21,6±3,3 101,9±5,5 43,0±0,1 5,0±0,1

раст. масло в/бр (139,2%) * (109,1%) (106,1%) (60,6%)* (1000%)*
0,5 мл /кг
0,5 мл СCl4 /кг 540,1 ±9,1 179±3,9 110,5 ± 3,2 643,9± 1,1 360,0±0,2
в/ж,1-кратно (146,3%)* (904%) * (115,5%) (907%)* (72000,0%)*
0,5 мл СCl4/кг в/ж+ 730,1 ± 15,1 115,1 ±8,2 233,0±11,2 634,±2,1 125,0± 2,6
50 мкг/кг Ю- 13 (197%)* (581%)* (224,0%)* (893%)* (25000%)*
в/бр, через 1 час
после введения
СCl4
0,5 мл СCl4/кг в/бр+ 504,2±7,1 68,2± 2,1 140,8±8,1 171,8±0,9 49,0±0,4
50 мкг /кг Ю-13 (136,5%)* (344%)* (135,4%)* (242%)* (9800%)*
в/бр, через 5 мин
СCl4
0,5 мл СCl4 /кг + 754,3 ± 10,7 70,6±4,2 94,5 ± 8,1 1428,5 ± 2,1 531,0± 1,7
500 мкг /кг Ю- 13 (204,3%)* (356,6%)* (90,8%) (2012%)* (106200%)*
в/бр, через 5 мин
СCl4
0,5 мл СCl4 /кг + 50 898,0±11,1 75,0±3,1 127,0± 5,3 5158,9 ± 6,2 108,0±4,2
мкг/кг Ю-13 в/ж (243,4%)* (378,8%)* (122%)* (7266%)* (21600%)*
через 5 мин после
введения СCl4
* - результаты достоверны при р≤ 0,05 (n=5).
40
А.
Активность щелочной фосфатазы, 300

*
250
* *
200 *
150 * *
%
100
50
0
Серия 1 Серия 2 Серия 3 Серия 4 Серия 5 Серия 6 Серия 7
Б.
А ‒ Щелочная фосфатаза
Рис 6. Влияние CCl4 на изменение активности маркерных ферментов печени в сыворотке
Серия 1 – интактные животные.
Серия 2 – контроль (растительное масло, внутрижелудочно, 1-кратно, 1 мл/кг).
Серия 3 – действие CCl4 (CCl4: растительное масло = 1:1, внутрижелудочно, 1-кратно,
0,5 мл/кг).
Серия 4 – Ю-13 внутрибрюшинно, 1-кратно, 50 мкг/кг, через 60 мин после CCl4 (CCl4:
растительное масло = 1:1, внутрижелудочно, 1-кратно, 0,5 мл/кг).
Серия 5 - Ю-13 внутрибрюшинно, 1-кратно, 50 мкг/кг, через 5 мин после CCl4 (CCl4:
Серия 7 - Ю-13 внутрижелудочно, 1-кратно, 50 мкг/кг, через 5 мин после CCl4 (CCl4:
* - результаты достоверны при р≤ 0,05 (n=5). Достоверность эффекта растительного масла
рассчитана по отношению к показателю интактной серии. Достоверность токсического
действия СCl4 рассчитана - по отношению к эффекту растительного масла. Достоверность
эффекта Ю-13 посчитана к эффекту СCl4.
41
Рис 7. Влияние СCl4 и Ю-13 на изменение содержания общего белка в сыворотке крови крыс
Серия 3 – действие CCl4 (CCl4: растительное масло = 1:1, внутрижелудочно, 1-кратно, 0,5
мл/кг).
А.
42
8000 *
7000
6000
Содержание свободного
билирубина, %
5000
4000
3000
*
2000
* *
1000 *
0
*
Серия 1 Серия 2 Серия 3 Серия 4 Серия 5 Серия 6 Серия 7
Б.
* *
* *
Б ‒ Связанный билирубин
сыворотке крови крыс..
мл/кг).
43
На следующем этапе нашей работы мы оценили гепатопротекторное

действие синтетического аналога 11-дезокси ПГЕ1 - ТЯ-227 на описанной
модели ССl4 индуцированного повреждения печени.
Данный простаноид, так же как и аналог Ю-13, зарекомендовал себя
эффективным цитопротектером in vitro, проявлявшим свой защитный эффект в
концентрации 10-7 моль/л. Именно поэтому тестирование свойств данного,
соединения проводились аналогично экспериментальной процедуре,
использованной для Ю-13. Установлено, что однократное внутрибрюшинное
введение ТЯ-227 в дозе 50 мкг/кг через 30 мин после ССl4 значительно не
улучшало значений анализируемых показателей (табл. 6, рис. 9-11).
На следующем этапе нашей работы мы сократили время между
введением CCl4 и ТЯ-227 до 5 минут. В этом случае наблюдалось снижение
активности АлАТ в 3,1 раз, снижение содержания свободного билирубина в 2,7
раз, связанного билирубина в 7,8 раз (табл. 6, рис. 9-11). Наблюдалась
тенденция к снижению активности щелочной фосфатазы и содержание общего
белка в сыворотке крови до показателей контрольной серии. Таким образом, в
данной серии эксперимента наблюдалась частичная гепатопротекция, не
приводящая тем не менее к показателям контрольной серии. Это может быть
объяснено тем, что воздействие CCl4 на печень определяется не только
инициацией ПОЛ, но и наличием у данного соединения эффекта растворителя,
который в данном случае не компенсируется.
Примечательно, что внутрижелудочное введение ТЯ-227 в
охарактеризованной дозе через 5 минут после четыреххлористого углерода не
приводила к описанным выше эффектам и даже достоверно увеличивало такие
важнейшие диагностические маркеры повреждения печени как активность
АлАТ, а также содержание в сыворотке свободного и связанного билирубина
(табл. 6, рис. 9-11).
Таким образом, в ходе заключительного этапа работы показано наличие у
простаноида ТЯ-227 гепатопротекторных свойств на модели CCl4-
44
индуцированной гепатотоксичности in vivo при условии его

внутрибрюшинного введения в дозе 50 мкг/кг спустя 5 мин после введения
четыреххлористого углерода.
Таблица 6. Влияние различных способов, доз введения аналога 11-
дезокси ПГЕ1-ТЯ-227 на основные биохимические показатели поражения
печени, вызванного введением ССl4.
экспериментов Активность Активность Содержание Содержание Содержание
Интактные 369,1 ±2,3 19,8±1,9 96,2 ±2,5 71,0±0,1 0,5 ± 0,1
крысы (100%) (100%) (100%) (100%) (100%)
Контроль 512,3 ±2,5 21,6 ±3,3 101,9 ±4,5 43,0±0,1 5,0±0,1

раст. масло в/бр (139,2%)* (109,1%) (106,1%) (60,6%)* (1000%)*
0,5 мл /кг
0,5 мл СCl4 /кг 540,1 ±9,1 179,1 ± 2,6 110,9 ±5,5 643,9± 1,1 360,0±0,2
в/ж,1-кратно (146,3%)* (904,3%)* (115,5%) (907%)* (73469,1%)*
0,5 мл СCl4/кг 417,1 ±3,6 90,3 ±2,9 100,3 ±6,5 1443,6 ±6,4 65,2 ±175
в/ж+ 50 мкг /кг (113,1%) (456,4%)* (104%) (1025%)* (13000%)*
ТЯ-227 в/бр,
через 30 мин
СCl4
0,5 мл СCl4/кг 413,4 ±5,9 57,4 ±1,4 90,0 ±3,6 240,1 ±32 47,5 ±154
в/ж+ 50 мкг/кг (112,3%) (290,0%)* (93,75%) (338%)* (9500,2%)*
ТЯ-227 в/бр,
через 5 мин
СCl4
0,5 мл СCl4 /кг + 412,5 ±7,1 64,4 ±1,8 108,1 ±2,1 1183,3 ±62 92,3 ±185
50 мкг /кг ТЯ- (111,8%) (325,4%)* (112,5%) (1666,6%)* (18400%)*
227 в/ж, через 5
мин после
введения СCl4
* - результаты достоверны при р≤ 0,05 (n=5).
45
А
* *
Б
*
* *
А ‒ Щелочная фосфатаза.
Рис 9. Влияние CCl4 на изменение активности маркерных ферментов печени в сыворотке
мл/кг).
Серия 4 – ТЯ-227 внутрибрюшинно, 1-кратно, 50 мкг/кг, через 30 мин после CCl4 (CCl4:
Серия 5 - ТЯ-227 внутрибрюшинно, 1-кратно, 50 мкг/кг, через 5 мин после CCl4 (CCl4:
Серия 6 - ТЯ-227 внутрижелудочно, 1-кратно, 50 мкг/кг, через 5 мин после CCl4 (CCl4:
растительное масло = 1:1, внутрижелудочно, 1-кратно, 0,5 мл/кг)
46
Рис 11. Влияние СCl4 и ТЯ-227 на изменение содержания общего белка в сыворотке крови
крыс
мл/кг).
А
47
* *
*
*
*
* *
*
Б ‒ Связанный билирубин
мл/кг).
48
Выводы
1.Внутрижелудочное и внутрибрюшинное введение ССl4 в дозе 0,5 мл/кг
сопровождалось выходом в кровь АлАТ и ЩФ (повышение активности АлАТ в
сыворотке крови составило 804,7 % и 561,0 %, соответственно; ЩФ – 114,7% и
127,0% соответственно), содержание свободного билирубина возросло на
787,3% и 505,6% при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении ССl4
соответственно; связанного билирубина – в 72 раза и 19 раз. При
внутрижелудочном введении токсиканта фиксировалось достоверное
увеличение (20% к контролю содержания общего белка сыворотки). На этом
основании модель, предполагающая внутрижелудочное введение ССl4 в дозе
0,5 мл/кг, обеспечивает проявление более выраженных изменений в
анализируемых маркерах и является более приемлемой для экспериментальной
работы.
2.Природный ПГI2 оказывает гепатопротекторное действие при
внутрибрюшинном введении в дозе 50 мкг/кг спустя 1 час после введения ССl4,
проявляющиеся в снижении активности АлАТ в сыворотке крови в 5,6 раза,
ЩФ ‒ в 1,23 раз, содержание свободного билирубина ‒ в 5,6раза, связанного
билирубина ‒ в 7,8 раз, общего белка ‒ в 1,2 раза.
3.Внутрибрюшинное введение аналога Ю-13 в дозе 50 мкг/кг спустя 5 мин
после внутрижелудочного введения CCl4 в дозе 0,5 мл/кг обеспечивало
проявление гепатопротекторных свойств, выражавшихся в снижении
активности АлАТ в крови в 2,6 раз, содержания свободного билирубина ‒ в 3,7
раза, связанного билирубина ‒ в 7,5 раз, общего белка ‒ на 20%.
4.Внутрибрюшинное введение аналога 11-дезокси ПГЕ 1-ТЯ-227 в дозе 50
мкг/кг спустя 5 мин после внутрижелудочного введения CCl4 вызывало
снижение активности АлАТ в сыворотке крови в 3,1 раза, ЩФ ‒ в 1,3 раза,
содержания свободного билирубина ‒ в 2,7 раз, связанного билирубина ‒ в
7,8 раз, общего белка ‒ на 22%, что подтверждает наличие у него
гепатопротекторной активности.
49
Список использованной литературы
1. Ажгихин, И.С. Простагландины / И.С. Ажгихин. М.: Медицина, 1978-

416 с.
2. Бороян, Р.Г. Простагландины и сердце / Р.Г. Бороян. М.: Знание, 1983. –
191 с.
3. Варфоломеев, С.Д. Простагландины – новый тип биологических
регуляторов // Соросовский образовательный журнал. – 1996. – №1. – С.40-47.
4. Варфоломеев, С.Д., Мевх, А.Т. Простагландины – молекулярные
биорегуляторы / С.Д. Варфоломеев, А.Т. Мевх. М: Изд-во Московского ун-та,
1985. – 308 с.
5. Высоцкая, Р.А., Логинов, А.С., Кондашова, З.Д. и др. Простагландины
слизистой желудка при церрозе печени// Вопросы медицинской химии. –
1992. – Т. 38, №1. – С.27-28.
6. Гланц, Р.Г., Скупская, Р.В., Бондарь, Н.Ф., Кузьмицкий, Б. Б.
Имуномоделирующая и радиозащитная активность тиосодержащих
бициклогептановых аналогов простагландинов // Фармакологические
свойства новых химических соединений и некоторых лекарственных
препаратов. – 1994. – С. 94-95.
7. Губич, О.И., Шолух, М.В. Биохимия простагландинов группы А //
Биохимия. – 2006. – Т.71, №3. – С. 293-304.
8. Губич, О.И., Шолух, М.В. Исследование цитопротекторных свойств 11-
дезокси-аналогов простагландина Е1 // Труды Бел. гос. ун-та. – Серия физиол.,
биохим. и молекулярн. основы функционирования биосистем. –2008. – т. 3. –
с. 99-104.
9. Губич, О.И., Петрова, С.М., Грицук, О.Е., Шолух, М.В. Исследование
цитопротекторного действия 9,11-этаноаналогов простагландинов группы Н //
Новости мед.-биол. наук. – 2009. - №3. – с. 57-60.
10. Гуляева, Л.С. Простагландины: выбор препаротов группы простинов //
Рецепт. – 2001. – Т. 16, №1-2. – С. 108-111.
50
11. Колб, В.Г., Камышников, В.С., Справочник по клинической химии//

Минск, Беларусь.1982 г. – С. 366.
12. Костюк, В.А., Потапович, А.И. Биорадикалы и биоантиоксиданты / В.А.
Костюк, А.И. Потапович // Минск, БГУ. 2004.- С. 178.
13. Кошкин, В.М. Механизмы действия вазопростана // Вазопростан: Сб.
научных статей. 1995. – С. 32.
14. Крючко, Т.А. Влияние простагландинов на состояние гемостаза,
перекисное окисление липидов и физиологической антиоксидантной системы
организма: Автореферат дис. канд. биол. наук – Львов, 1991.–18 С.
15. Кудрин, А.Н. Фармакология / А.Н. Кудрин. М.: Медицина, 1991. – 261-265
с.
16. Мальцев, А.Н. Механизмы гепатопротекторного действия эссенциальных
фосфолипидов и простагландина Е2 при алкогольном поражении печени:
Автореферат дис. канд. биол. наук./ М., 1998. – 25 с.
17. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. Мн.:
«Беларусь», 1987. – 1 т. – 456-459 с.
18. Мосин, В.И. Циклические нуклеотиды, простагландины и патология
желудка.– Ставрополь: Ставропольское книжное издательство, 1984.–175 с.
19. Парнова, Р.Г. Молекулярные механизмы действия простагландина Е 2 в
регуляции осмотической проницаемости // Биол. мембраны. – 1999. – т.16 №2.
– с. 230-239.
20. Пелюх, П.Ф. Влияние простагландинов Е2 и F2α на электрическую и
механическую активность гладких мышц мочеточника морской свинки:
Автореферат дис. канд. биол. наук./ Львов, 1991. – 17 с.
21. Рокицкий, П.Ф. Биологическая статистика / П.Ф. Рокицкий. – Минск.:
Вышэйшая школа, 1973. – 319 с.
22. Садовничий, В.В. Функциональные и структурные изменения

монооксигеназной системы под влиянием простагландинов: Автореферат дис.
канд. биол. наук./ Гродно, 1995. – 19 с.
51
23. Семак, И.В., Зырянова, Т.Н., Губич, О.И., Биохимия белков. – Минск,
БГУ. 2008 - С.40.
24. Сергеев, П.В. Биохимическая фармакология. – М.: Высшая школа, 1982. –
207 - 218с.
25. Таиров, М.М., Дерибас, В.И., Берисимбаев, Р.И., Салганик, Р.И.,
Механизмы слизестимулирующего действия простагландина Е2 и его участие
в процессах защиты слизистой оболочки желудка // Синтетические и
прикладные исследования простагландинов: тезисы 2-го Всесоюзного
совещания. – 1984. – с.122.
26. Толстиков, Г.А., Мифтахов, М.С., Лазарева, Д.Н. и др. Простагландины
и их аналоги в репродукции животных и человека. – Уфа: Изд-во БНЦ УроО
АН СССР, 1989. – 416 с.
27. Трахтенберг, И.М., Сова, Р.Е., Шефтель, В.О., Оникиенко, Ф.А.
Проблема нормы в токсикологии. – М: Медицина, 1991. – 204 с.
28. Тутельян, В.А., Аксенов, И.В., Кравченко, Л.В. и др. Характеристика

острого токсического действия CCl4, как модели описательного стресса //
Токсикологический вестник. – 2009. – № 1.- 12-17.
29. Шпаков, А.О. Молекулярные основы функционального сопряжения
рецепторов и GTF- связывающих белков // Биол. мембраны. – 1995. – Т.12,
№5. – с. 453-467.
30. Шульцев Г.П. Простагландины и их клиническое значение. – М.:
Минздрав СССР, 1983. – с. 12.
31. Abraham, P. Lyzosomal enzyme activity during development of carbon
tetrachloride induced cirrhozis in rat / P. Abraham // Indian J. Physiol. Pharmacol. –
2004. – Vol. 48 №2 – P. 206-212.
32. Basu, S. Carbon tetrachloride- induced lipid peroxidation: eicosanoid formation
and their regulation by antioxidant nutrients / S. Basu // Toxicology. – 2003. –
Vol.189.- P.113-127.
52
33. Brooks, A.C., Whelan, C.J., Purcell, W.M. Reactive oxygen generation and
histamine release by activated mast cells: modulation by nitric oxide synthase
inhibition // Brit. J. Pharmac. – 1999. – Vol. 128. – P. 585-590.
34. Brum-Fernandes, A.J., Morrisset, S., Braily, G., Party, C. Characterization of

the PG E2 receptor subtype in bovine chondcytes in culture // Brinish J.
Pharmacology. – 1996. – v.118.№3. – P.1597 – 1604.
35. Carbon tetrachloride-induced hepatic injury is associated with global DNA
hypomethylation and homocysteinemia: effect of S-adenosylmethionine treatment/
G. Valera-Moreiras [et al.]// Hepatology. – 1995. – Vol. 22, №4 – P.1310-1315.
36. Clawson, G. A. Mechanism in carbon tetrachloride hepatotoxicity / G.
A. Clawson // Pathol. Immunopatol. Res, - 1989. – Vol. 269, №3. – P.1286-1291.
37. Hirata,M., Ushikubi F., Narumia S. Prostaglandin I receptor and prostaglandin
D receptor // J. Lipid mediators and cell signaling. – 1995. - №12. – P.393-404.
38. Filip, C., Ungureanu D., Nechifor, C., et.al.- The role of some prostaglandin
analogues in experimental intoxication produced by carbon tetrachloride in RATS//
Rev. Med Chir. Soc. Med. Nat. – 2003- vol. 107 №2. P.388-392/
39. Hu, V.Y., Malley, S. COX-2 and prostanoid expression in micrurition pathways
after cyclophosphamide-induced cystitis in the rat // Am. J. Physiol. Regul. Integr.
Comp. Physiol. – 2003. – Vol. 284. – P. 574-585.
40. Hunges, F. J., Buttery, L.D., Hukkanen, M.V. Cytokine- induced prostaglandin
E2 synthesis and cyklooxygenase 2 activity are regulted both by a nitric oxide-
dependent and – independent mechanism in rat osteoblasts in vitro // J. Biol. Chem.
– 1999- v. 274 № 3. – P. 1776-1782.
41. Johnston, D.E., Kroening, C. Mechanism of early carbon tetrachloride toxicity
in culture rat hepatocytes / D.E. Johnston, C Kroening // Toxicol. – 1998. – Vol. 83,
№3. – P.231-239.
53
42. Kluba-Wojewoda, U. Cytoprotective effect of prostaglandin E1 and I2 in

experimental liver damage / U. Kluba-Wojewoda // Pol. J. Pathol. – 1994. – Vol.
45, № 1. – P.55-62.
43. Pathological mechanism in carbon tetrachloride hepatotoxicity / W.
J. Brattin [et al.] // J. Free Radic. Biol. Med. – 1985. – V.1 № 1- P.27-38.
44. Quirogo, J., Prieto, J. Liver cytoprotection by prostaglandins // Pharmac. Ther.
– 1993. – V. 58, №1. – P.67-91.
45. Püschel, G.P., Kirchner, C., Schroder, A. et. al. Glycogenolytic and
antiglycogenolytic prostaglandin E2 actions in rat hepatocytes are mediated via
different signalling pathways // Eur. J. Biochem. – 1993. – Vol. 218. – P. 1083-
1089.
46. Ray, P., Moore, L. Carbon tetrachloride-induced release of calcium from
isolated hepatocytes / P.Ray, L. Moore // Toxicology. – 1986. – Vol. 41, №2. – P.
205-212.
47. Stoyanovsky, D.A., Cederbaum, A.J. Tiol oxidation and cytochrome P-450 –
dependent metabolism CCl4 of triggers Ca2+ release from liver microsomes / D.A.
Stoyanovsky, A.J. Cederbaum // Biochemistry. – 1996. Vol. 35. №49. – P.15839-
15845.
48. www.xumuk.ru
54
Благодарности
Автор выражает благодарность научному руководителю — кандитату

биологических наук, доценту кафедры биохимии БГУ — О.И. Губич за
помощь в постановке экспериментов и обсуждении результатов работы, а также
кандидату биологических наук, доценту кафедры биохимии Новикову
Дмитрию Алексеевичу за помощь в работе с лабораторными животными,
сотрудникам ГНУ «Институт биоорганической химии НАН Беларуси» за
предоставленные препараты простаноидов.

Язык

Алеся Фурс

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Алеся Фурс

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

1

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Изучение эффективности гепатопротекторного действия

канд. биол. наук, доцент

Перечень условных сокращений

лекарственные препараты, способные нейтрализовать его токсическое

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

метаболитов СCl4 с клеточными компонентами и нарушение метаболизма

альдегиды, особенно 4-гидроксиноненаль, который легко связывается с

Рутениум красный не блокирует метаболизм СCl4 в СCl3. СCl4 блокирует

антиапоптотический эффект; Il-10 частично предотвращает действие TNF-α.

1.2 Основные положения биохимии простагландинов

ПГ были открыты во всех тканях животных, микроорганизмов, грибах и

линоленовой, арахидоновой и 5,8,11,14,17- эйкозапентаеновой кислот (цис-

На дальнейших стадиях биосинтеза ПГ происходит образование из

1. действие на клетку, в которой они вырабатываются;

(А, В, С). Последние характеризуются наличием высокореакционного α,β-

(присоединения Михаэля). Химическая модификация β- или ω-цепи ПГ данной

Таблица 1. Важнейшие физиолого-биохимические эффекты ПГ

Система ПГ Физиологический (биохимический) .

1.3. Простагландины как потенциальные гепатопротекторные

ПГЕ2 и ПГI2 проявляют цитопротекторное действие при повреждениях

нормализацией вязкости гидрофобных областей липидного бислоя мембран.

заключительный этап в необратимом повреждении клеток, которое возникает

тромбоцитов, вызванное синтезом ТхA2 , обычно подавляется ПГI2,

В механизмах предотвращения развития токсико-инфекционного шока

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В работе были использованы следующие реактивы: наборы реактивов для

2.2 Получение сыворотки крови

2.3 Определение активности щелочной фосфатазы

Принцип метода: Кинетический метод определения каталитической

ϸ-нитрофенилфосфат + АМР → АМР-фосфат + ϸ-нитрофенол

Ход работы: В кювету помещали 1 мл рабочего реагента состоящего из

фенилфосфата. Затем в кювету добавляли 20 мкл сыворотки крови и тщательно

Принцип метода: Кинетический метод определения АлАТ основан на

L-аланин + 2-оксоглутарат → глутамат + пируват

Пируват + НАДН+Н+ → лактат + НАД+

Уменьшение концентрации НАДН пропорционально активности АлАТ.

Ход работы: К 1 мл рабочего раствора, содержащего 50 ммоль/л

2.5 Определение содержания билирубина в сыворотке крови крыс по

Принцип метода: В основу использования диазометода по Йендрашику,

Реагенты Общий Связанный Контрольная проба

билирубина колориметрирование осуществляли через 10 мин после добавления

Рис.1. Калибровочная прямая для определения содержания билирубина в крови

2.6 Определение содержания белка в сыворотке крови по методу

Принцип метода: метод Бенедикта основан на способности белков

кислород, взаимодействуя с медью, образует соль; кроме того медь образует

Ход работы: К 1 мл исследуемого образца, добавляли 3 мл 3% раствора

Рис. 2. Калибровочная прямая для определения содержания белка в

2.7 Математический анализ и статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На этом основании, перед нами была поставлена задача оценить in vivo

№ п.п. Способ введения Доза ССl4 Кратность Сроки забоя

возрастает на 779%, а при внутрибрюшинном введении − на 552% к

соответствующему контролю. Активность ЩФ в сыворотке крови

Таблица 4. Результаты измерения основных биохимических маркеров

Серия Измеряемые параметры (Х±Sx)

Интактные 369,0±9,0 19,8±1,9 96,2±2,5 71,0±3,0 0,5±0,1

Контроль 1 576,3±2,5 24,8±3,3 88,5±4,5 43,0±4,5 5,0±4,0

Опыт 1 540,1±3,6 179,0±3,9 110,9±6,5 643,0±6,5 360,0±5,4

Опыт 3 437,6±7,0 31,9±2,4 92,3±2,1 114,0±4,5 46,0±2,9

Примечание * - результаты достоверны при р≤ 0,05 (n=5).Достоверность эффектов

Воздействие СCl4 на печень крыс сопровождалось также незначительной