ANLISIS CUANTITATIVO POR WDFRX El anlisis cuantitativo se obtiene mediante la medida de las intensidades de las energas emitidas por

la muestra. Siendo la intensidad de la emisin (nmero de fotones) proporcional a la concentracin del elemento. En 1913 Henry Moseley demostr que el valor de la energa es caracterstico del tomo que lo produce, y por tanto, diferente para cada elemento qumico, segn lo indica la ecuacin matemtica: 1/= k (Z 1)2 siendo la longitud de onda y Z el nmero atmico. La nica condicin para obtener un anlisis cuantitativo preciso es el disponer de estndares que se aproximen lo ms posible a las muestras tanto en composicin qumica cmo fsica o bien contar con los mtodos adecuados para considerar y corregir los efectos de la matriz que constituyan la muestra. METODOS DE ESTANDARIZACIN. La calibracin es el proceso que permite confirmar que la seal medida por un instrumento es correcta. Se refiere al aseguramiento de que un instrumento y/o aparato funciona correctamente. La estandarizacin es el proceso por el que se determina experimentalmente la relacin entre la seal y la cantidad de analito. Los mtodos de estandarizacin pueden dividirse en dos tipos: los que utilizan estndares externos y los que utilizan estndares aadidos a la muestra. 1. ESTNDARES EXTERNOS: son los que utilizan uno o varios patrones externos que contienen concentraciones conocidas de analito. Se denominan as porque se separan y analizan separadamente de las muestras. 2. ESTNDARES AADIDOS: se dividen a su vez en dos categoras: los que se denominan estndar interno y los de adicin estndar. Los dos requieren aadir una cantidad conocida de estndar a cada muestra que se analiza. 2a) Estndar interno: requiere adicionar el patrn a la muestra as como a la disolucin blanco. El estndar debe ser lo suficientemente diferente qumicamente al analito, para que cuando se le detecte en el mismo experimento, no interfiera en el anlisis y lo suficientemente similar para que tenga el mismo comportamiento. El estndar interno

puede aadirse antes de la preparacin de la muestra o antes de la medida. 2b) Adicin estndar: son cantidades fijas de analito que se aaden a cada muestra, despus de una medida inicial, la medida se vuelve a realizar despus de cada adicin. Las adiciones y las medidas normalmente se llevan a cabo una o dos veces, y por extrapolacin, se averigua la concentracin de analito presente en la muestra al comienzo. La adicin de los patrones, en este proceso, se realiza despus de haber completado la preparacin de la muestra. Para estandarizar un mtodo se determina el valor de k (k = Sref/Cs, siendo Sef la seal y Cs la concentracin conocida del analito) midiendo la seal de una o ms referencias, para cada una de las cuales contiene una cantidad conocida de analito. Curva de calibrado normal Existen dos facetas de calibracin en el anlisis cualitativo, la calibracin instrumental y la calibracin metodolgica. La calibracin instrumental se realiza con estndares que no contienen el analito y se utiliza para asegurar el funcionamiento del instrumento empleado. La calibracin metodolgica se realiza con estndares que contienen el analito para establecer una relacin entre las caractersticas fsicoqumicas del analito y las seales del instrumento. En un proceso analtico se relaciona la seal y caractersticas del analito, de modo que la calibracin se realiza al obtener la seal de respuesta como funcin de la concentracin conocida del analito. Se representan los datos obtenidos y se obtiene la grfica de la seal corregida frente a la concentracin del analito. Lo normal es que la grfica tienda a una lnea recta, donde a medida que aumenta la concentracin, la seal de respuesta es mayor (pendiente positiva). En el modelo de curva de calibracin lineal, la pendiente vendr dada por la ecuacin matemtica:

Siendo m la pendiente, x la concentracin e y la seal de respuesta.

La sensibilidad de calibracin es la pendiente de la curva de calibrado. Por tanto en una curva de calibrado lineal la sensibilidad es siempre la misma y no va a depender de la concentracin, ya que para que se cumpla y = mx + b, las concentraciones deben tener una incertidumbre insignificante. Exactitud Es el grado de concordancia entre el resultado de una determinacin o la media de n resultados y el valor verdadero del analito en la muestra en cuestin. Toda medida tiene un fallo, por lo que el valor verdadero no lo conocemos, pero nos podemos aproximar a el utilizando los siguientes materiales: - Material de referencia: material o sustancia, en el cual una o ms de sus propiedades estn suficientemente bien establecidas para que sea usado en la calibracin de un aparato, la estimacin de un mtodo de medicin o para asignar valores a los materiales. - Material de referencia certificado (MRC): material en el que los valores de una o ms de sus propiedades estn certificados por un procedimiento tcnicamente validado. La exactitud se caracteriza matemticamente por el error sistemtico, que es la diferencia entre el resultado experimental y el resultado real. Se puede expresar de forma absoluta o relativa.

Los errores sistemticos son debidos a alteraciones operacionales, presencia de interferencias, filtracin no completa, contaminacin. Debido a su causa, estas desviaciones son de un signo determinado, por exceso o por defecto.

Los mtodos analticos pueden dividirse en tres grupos segn la magnitud de sus errores relativos: 1. Resultado experimental se encuentra dentro del 1% del resultado correcto, el mtodo analtico es sumamente exacto. 2. Errores relativos situados entre 1% y 5% son mtodos moderadamente exactos. 3. Errores relativos superiores a 5% son mtodos de baja exactitud. Un estndar certificado fue analizado como desconocido para probar la exactitud del programa analtico. La exactitud de los resultados se muestra en la Tabla 1. Los datos en Tabla 2 muestra el excelente acuerdo entre la concentraciones medidas y las certificadas.

Precisin Es el grado de concordancia entre un grupo de resultados obtenidos al aplicar repetitiva e independientemente el mismo mtodo analtico a alcuotas de la misma muestra, o la dispersin de estos resultados entre s y con su media. La precisin se materializa en los errores aleatorios o indeterminados debidos al azar. La precisin de un resultado individual se define como la diferencia entre este y la media aritmtica, lo que coincide con el error sistemtico.

La precisin de un conjunto de resultados se caracteriza por la desviacin estndar:

La precisin se divide en dos categoras: 1. Repetitibilidad: es la dispersin de resultados de ensayos mutuamente independientes, utilizando el mismo mtodo aplicado a alcuotas de la misma muestra, en el mismo laboratorio, por el mismo operador, usando el mismo equipamiento en un intervalo corto de tiempo. Es una medida de la varianza y un reflejo de la mxima precisin que el mtodo pueda alcanzar. 2. Reproducibilidad: es la dispersin de resultados de ensayos mutuamente independientes utilizando el mismo mtodo aplicado a alcuotas de la misma muestra en diferentes condiciones: distintos operadores, diferente equipamiento o diferentes laboratorios. Sensibilidad Es la capacidad para discriminar entre concentraciones semejantes de analito o su capacidad para poder detectar o determinar pequeas concentraciones de analito en la muestra. Depende de dos factores: la pendiente de la curva de calibrado y de la desviacin estndar. El lmite de deteccin es la concentracin o peso mnimo del analito que origina una seal que puede diferenciarse estadsticamente de la seal del blanco. Selectividad Es la capacidad para originar resultados que dependen de forma exclusiva del analito para su identificacin o cuantificacin en la muestra. Se materializa en las interferencias y alteran los resultados analticos son errores sistemticos. Un mtodo es robusto cuando est relativamente libre de interferencias qumicas y puede aplicarse ala determinacin de analitos en muestras con una amplia variedad de matrices Un mtodo es slido cuando es relativamente insensible a los cambios en condiciones experimentales como temperatura, acidez. La Tabla 3 presenta la precisin del mtodo que se demuestra en trminos de la reproducibilidad.

La ilustracin grfica de la precisin analtica de Cd se presenta en la Figura 3.

Las medidas son exactas y precisas en el mtodo cuantitativo por Fluorescencia de rayos-X mediante el uso de muestras estndares.

Elabor: M.en C. Patricia E. Altuzar Coello.