AISLAMIENTO DE HONGOS RESISTENTES A METALES PESADOS A PARTIR DE DESECHOS MINEROS Y SU CAPACIDAD DE REMOCIN DE METALES PESADOS Y FLOR EN SOLUCIN Ma.

Del Pilar Daz, Ma. de Guadalupe Moctezuma e Ismael Acosta. Centro de Investigacin y de Estudios de Posgrado. Fac. de Ciencias Qumicas. UASLP. Av. Dr. Manuel Nava No. 6. Zona Universitaria. San Luis Potos, S.L.P. C.P. 78320.Tel: 014448262440 ext. 115. Fax: 014448262372. email iacosta@uaslp.mx

RESUMEN El objetivo de este trabajo fue aislar y caracterizar hongos resistentes a metales pesados a partir de desechos mineros obtenidos de una mina de Zimapan, Hidalgo, y probar su capacidad para bioadsorber iones metlicos en solucin, para tratar de implementar filtros biolgicos. Los hongos fueron aislados a partir de 1 g de desechos mineros contenidos en 9 ml de agua tridesionizada estril y sembrando en Agar Extracto de Malta + 200 ppm de Cobre. Las cepas obtenidas se resembraron en medio mnimo de sales + 200 ppm de Cobre. Se aislaron 7 hongos (5 Aspergillus flavus y 2 Aspergillus fumigatus), que crecen bien a 500 ppm de Plomo y Zinc, y a 200 ppm de Cobre y Plata, pero no crecen en presencia de Cadmio, Arsnico y Mercurio. Las 7 biomasas celulares presentaron diferentes porcentajes de remocin de metales pesados y Flor en solucin, por ejemplo: A, flavus I y A. flavus II remueven eficientemente Flor (50% y 54% respectivamente), el A. fumigatus I, Cobre (51%) y el A. flavus V Plomo (57%), mientras que el A. fumigatus II fue el nico que bioadsorbi Arsnico, aunque en muy baja proporcin (8.5%).

INTRODUCCIN En la literatura se han reportado una gran diversidad de hongos como bioadsorbentes naturales de diferentes metales pesados, pero del gnero Aspergillus hay pocos reportes. Se ha estudiado la captacin de oro (Kuyucak y Volesky, 1988), cobre (Townsley, cols., 1993) por A. famsta, con porcentajes de bioadsorcin eficientes nicamente para el oro (176 mg/g de bioadsorbente), pero no hay reportes del uso de bioadsorbentes celulares de A. flavus y A. fumigatus en la remocin de metales pesados en solucin, por lo que el objetivo de este trabajo fue el aislamiento de algunos hongos a partir de desechos mineros y estudiar su capacidad de captacin de As, Cu, Cd, Zn, Cr (VI), Co, Pb y F (del cual se ha reportado que, en nuestro Estado es un problema de salud pblica debido a las altas concentraciones encontradas en diferentes zonas) en solucin.

MTODOS

Para el aislamiento de los hongos, se peso 1 g de cada desecho, (obtenidos de una mina de Zimapan, Hidalgo) y se coloc en un tubo de ensaye conteniendo 9 ml de agua tridesionizada estril, y se agit para homogenizar la muestra. Despus se hicieron mediciones con la misma agua, y se tomaron alcuotas de 100 l de cada dilucin, y se sembraron por duplicado en Agar Extracto de Malta adicionado de 200 ppm de sulfato de cobre (AEM-Cu), incubando a 28o C por 3 das. Las colonias resultantes se purificaron por resiembras sucesivas en AEM-Cu, se inocularon por picadura en medio mnimo con cobre (MM-Cu), se incubaron a 28o C durante 6-8 das, y se refrigeraron a 4o C. Las cepas puras se identificaron por sus caractersticas macro y microscpicas cultivadas en Agar Sabouraud Dextrosa (ASD). Para determinar la tolerancia de los hongos aislados a metales pesados, se utiliz la tcnica de resistencia en placa, utilizando AEM adicionado de 200 y 500 ppm de Cd, Cu, Hg, Pb, Zn; As y Ag. Para la obtencin de la biomasa celular, se sembraron 1 x 106 esporas en 200 ml de caldo tioglicolato, incubando a 28o C en agitacin constante durante 72 h. La biomasa celular obtenida, se separ del medio por filtracin y se lav con agua tridesionizada, se sec a 80o C/20 min., se pulveriz y guard en frasco mbar hasta su uso. Para determinar la capacidad de remocin de metales pesados y flor en solucin, se prepar una solucin estndar del metal a probar a pH = 4.1, aadiendo 80 mg de biomasa/200 ml de solucin a analizar, tomando alcuotas de 10 ml a diferentes tiempos, removiendo la biomasa por centrifugacin a 3 000 rpm/5 min., y al sobrenadante se le determin el porcentaje del in metlico no adsorbido por la biomasa celular, determinando por diferencia del total la cantidad removida por la biomasa. El Pb, Cd y Zn se determinaron por el mtodo de la Ditizona, el Cu y As por el de Absorcin Atmica, el F por el del in selectivo, el Co por el de la metilisobutilcetona y el Cr (VI) por el de la difenilcarbazida. Los resultados obtenido fueron analizados estadsticamente mediante el anlisis de varianza y la prueba de comparacin mltiple de Tukey.

RESULTADOS

Se aislaron 7 hongos (5 Aspergillus flavus y 2 Aspergillus fumigatus) que crecen bien a 200 y 500 ppm de Pb y Zn, y a 200 ppm de Cu y Ag, pero no crecen en presencia de Cd, As y Hg (Tabla No. 1). Sus biomasas muestran diferentes porcentajes de captacin de los distintos metales pesados y flor en solucin, siendo estas diferencias estadsticamente significativas. Por ejemplo, el Cu fue removido en un rango de 17.2% a 51% por los 7 bioadsorbentes estudiados, y el cadmio entre 8% y 47%, mientras que el F fue removido ms eficientemente por el A. flavus-I y A. flavus-II (50% y 54% respectivamente). El As fue captado solo por A. fumigatus II (8.5%) y A. flavus V (3%) (Tabla No. 2).

Tabla 1.- Anlisis de resistencia a metales pesados de los diferente hongos estudiados. ______________________________________________________________________________ A. flavus A. fumigatus

Concentracin I II III IV V I II del metal ______________________________________________________________________________ Cd 200 Cd 500 Pb 200 Pb 500 Cu 200 Cu 500 Zn 200 Zn 500 As 200 As 500 Ag 200 Ag 500 ----+++ ++ +++ --+++ +++ ----++ + ----+++ ++ +++ --+++ +++ ----+ + ----+++ ++ +++ --+++ +++ ----++ + ----+++ ++ +++ --+++ +++ ----+ + ----+++ ++ +++ --+++ +++ ----++ + ----+++ ++ +++ --+++ +++ ----++ + ----+++ ++ +++ --+++ +++ ----+ +

______________________________________________________________________________ Dimetro de crecimiento (cm) ---= 0.0-0.5 cm +++= 5.1-7.5 cm += 0.6-2.5 cm ++= 2.6-5.0 cm ++++= 7.5-9.0cm

Tabla 2.- Porcentaje de remocin de metales pesados y flor en solucin por las biomasas fngicas analizadas. ______________________________________________________________________________ BIOMASA UTILIZADA A. flavus A. fumigatus

Porcentaje de bioadsorcin I II III IV V I II del metal analizado ______________________________________________________________________________

Arsnico Cobre Cadmio Zinc Cromo Cobalto Plomo Flor

0.0 23.0 47.0 25.2 28.4 37.0 13.5 50.0

0.0 37.0 12.5 16.0 32.1 28.0 6.0 54.5

0.0 21.6 8.0 38.0 7.4 13.4 5.6 0.0

0.0 17.2 28.0 28.0 30.1 10.7 1.4 6.5

3.0 43.0 27.0 0.0 53.0 22.0 57.0 7.0

0.0 51.0 12.0 22.0 47.0 31.0 35.0 38.0

8.5 39.0 36.0 12.0 33.0 5.0 50.0 25.0

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CONCLUSIONES

Se aislaron 7 hongos (% A. flavus y 2 A. fumigatus) que presentan resistencia a 500 ppm de Pb, Cu y Zn, y a 200 ppm de Ag, mientras que son muy sensibles a Cd, As y Hg. Los bioadsorbentes analizados presentan diferentes porcentajes de remocin de los diferentes metales pesados y flor en solucin, y algunos de ellos pueden ser utilizados (solos o una mezcla de los ms eficientes) para descontaminar nichos acuticos, pues son baratos, eficientes, selectivos y se pueden utilizar en zonas donde otros bioadsorbentes no se pueden implementar, sobre todo para la remocin de F, Cu, Cd, Cr (VI) y P. Las diferencias en la bioadsorcin, pueden deberse a cambios no conocidos en los componentes de la pared celular de los hongos, pues se han reportado diferencias en la exposicin de sitios de la pared celular con afinidad por metales an en las mismas especies (GDA, 1992). Adems, la obtencin de cepas tolerantes a metales pesados, indica que los desechos mineros estn contaminando los lugares cercanos a las zonas mineras, siendo un riesgo para la salud humana.

BIBLIOGRAFA

Gadd, G.M. (1992). Microbial control of heavy metals pollution. pp 59-88. Khalid, A.M., Ashfaq, S.R., Bhatti, T.M., Anwar, M.A., Shemsi, A.M. and Akhtar, K. (1993a). The uptake of microbially leached uranium by immobilized microbial biomass. Biohidrometallurgical Technologies, Torma, A.E., Apel, M.L., Brierley, C. eds. The minerals and materials Society. Warrendale, P.A. 2. pp 299-308. Kuyucak, N. and Volesky, B. (1988). Biosorbent for gold. U.S. Patent 4. pp769. Laws, E.A. (1993). Aquatic pollution. John Wiley, New York. P) pp 611. Leyva, R., Jurez, A. and guerrero Coronado, R.M. (1994). Absorption of chromium (VI) from aqueous solutions on activated carbon. Wat. Sci. Tech. 30. No. 9. pp 191-197. Volesky, B. And Holan, Z. (1995). Biosorption of heavy metals. Biotechnol. Progr. 11. pp 235250.