Esterilizacin > Agentes fsicos

Calor
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos. La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:

y y

Temperatura Tiempo de exposicin

Calor Hmedo
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:

El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la produccin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas temperaturas. El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los materiales hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada durante la condensacin.

El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121 C (una atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos formadores de esporas.

Presin [atm]

Temperatura [C] Descarga completa del aire 109 115 121 126 130 133 Descarga de 2/3 del aire 100 109 115 121 126 130 Descarga de 1/2 del aire 90 100 109 115 121 126 Sin descarga del aire 72 90 100 109 115 121

1/3 2/3 1 4/3 5/3 2

Influencia de la descarga incompleta de aire en la temperatura del autoclave

Ventajas Rpido calentamiento y penetracin Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material expuesto Econmico

y y y y y

Desventajas No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

y y

Calor Seco
El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que son ms difciles de romper por el calor seco. La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin. Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser esterilizados a ms de 160C. Ventajas No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

y y

Desventajas Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

Existen otras formas de eliminar microorganismos por calor seco. La incineracin se utiliza para destruir material descartable contaminado. La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al rojo el material de metal como ansas, lancetas, agujas de diseccin.

Radiaciones

Su accin depende de:

y y y

Tipo de radiacin Tiempo de exposicin Dosis

Ionizantes
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.

Ultravioletas
Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.

Esterilizacin > Agentes qumicos

Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antispticos. La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan.

Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentracin del agente puede producir un efecto diferente en distintos microorganismos. Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo. pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el grado de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efectividad.

Alcoholes Iodo Antispticos Agentes catinicos, aninicos y anfteros Organo Mercuriales

Colorantes Cloro y Compuestos clorados Aldehdos Desinfectantes y/o Esterilizantes Oxido de Etileno Compuestos Fenlicos Acidos y Alcalis

Antispticos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan la estructura fosfolipdica. No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.

Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc. Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante. Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.

Agentes inicos y anfteros

Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la disposicin de las protenas y de los fosfolpidos, por lo que se liberan metabolitos desde la clula, se interfiere con el metabolismo energtico y el transporte activo. No son esporicidas ni tubercolicidas an en altas concentraciones. Sus principales ventajas se hallan en que son inodoros, no tien, no son corrosivos de metales, estables, no txicos y baratos.

y y y

Catinicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor actividad a pH alcalino y los Gram + son ms susceptibles. Aninicos: Jabones y cidos grasos. Tienen mayor actividad a pH cido y son eficaces contra Gram +. Anfteros: Actan como catinicos o aninicos segn el pH.