Pesquisa

Biotransformao de LEOS E GORDURAS

Utilizao de lipases para obteno de biocombustvel
Aspectos Gerais As lipases, E.C.3.1.1.3., fazem parte de um grupo de enzimas hidrolticas, com cerca de 300 resduos de aminocidos, que catalisam a quebra de ligaes steres de acil gliceris. Elas no requerem cofatores, so de baixo custo, regioespecficas, atuam em uma larga faixa de pH e, alm de efetuar reaes de hidrlise, podem tambm exercer atividade cataltica (Figura 1). nesse seguimento ainda no est suficientemente difundido (Bon e Pereira 1999). Segundo alguns trabalhos, que fazem parte da literatura, as lipases tm sido empregadas em processos de extrao de leos, melhoramento das propriedades fsicas e nutricionais de gorduras por interesterificao (Macrae 1983, Pecnik e col.1992, Konishi e col. 1995, Hayes 1996, Glosh e col.1997, Facioli e col. 1998), limpezas de tripas em abatedouros bovinos (Burin e col.1994), hidrlise e degomagem de leos vegetais na industria (Bon e Pereira 1999). Biocombustveis Com exceo de hidreltricas e da energia nuclear, a maior parte de toda a energia consumida no mundo vem do petrleo, do carvo e do gs natural. Como essas fontes so limitadas e devero se esgotar no futuro, a viso de uma fonte alternativa de energia de vital importncia. A produo de biocombustveis alternativos para o leo diesel, provenientes de leos vegetais brutos, tem sido tema de diversos estudos. Historicamente, relata-se que o prprio Rudolf Diesel desenvolveu pesquisas utilizando leos vegetais em seus motores. Apesar de favorvel energeticamente, o uso direto desse produto em motores problemtico devido sua alta viscosidade (11 a 17 vezes maior que a do leo diesel) e baixa volatilidade, o que impede a sua queima completamente, formando depsitos nos bicos injetores dos motores. Deve-se considerar tambm, que a decomposio do glicerol produz acrolena (substncia altamente

Maria da Graa Nascimento

Doutora em Qumica Orgnica pela UNICAMP e professora do DQ-UFSC graca@qmc.ufsc.br

Pedro Ramos da Costa Neto

Doutorando no DQ-UFSC Licenciado pelo CEFET/PR ramos@qmc.ufsc.br

Lilian Maria Mazzuco

Iniciao Cientfica no DQ-UFSC lilian@newsite.com.br Departamento de Qumica Universidade Federal de Santa Catarina - SC Fotos cedidas pelos autores

Figura 1. Reaes catalisadas por lipases

As lipases so dotadas de uma especificidade pelo substrato que supera todas as outras enzimas conhecidas. Isso lhes confere uma aplicao de fronteiras. Elas podem ser empregadas na produo de frmacos, cosmticos, detergentes, alimentos, perfumaria, diagnsticos mdicos, sntese de compostos opticamente ativos, resoluo de racematos, produo de aromas e fragrncias, modificaes de gorduras e tratamento de couros (Basheer 1995, Bon e Pereira 1999, Faber 1997). Considerando-se as transformaes de leos e gorduras em derivados ou matrias-primas industriais, o potencial de aplicaes de enzimas

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txica). Portanto, visando a reduzir a alta viscosidade dos leos vegetais, diferentes alternativas tm sido consideradas, tais como: diluio; microemulso com metanol ou etanol; decomposio trmica; craqueamento cataltico; e reao de transesterificao com etanol ou metanol. Entre essas alternativas, a transesterificao a melhor escolha. Os steres de cidos graxos obtidos so conhecidos como biodiesel e apresentam caractersticas fsicas semelhantes s do leo diesel, podendo ser utilizados em motores do ciclo diesel sem nenhuma modificao (Schuchardt e col. 1998, Costa Neto e col. 2000). A transesterificao de leos e gorduras pelo processo qumico, embora seja simples, rpido e com alto rendimento, apresenta algumas desvantagens. A primeira refere-se ao catalisador (cido ou base), que, ao final do processo, permanece misturado com o principal subproduto da reao, que a glicerina, dificultando sua separao e purificao. Utilizando um processo enzimtico, essas dificuldades podem ser minimizadas e existir a possibilidade de obter-se tanto biodiesel como glicerina, com maior grau de pureza e possibilidade de reutilizao do biocatalisador. Uma segunda desvantagem do processo qumico est relacionada com o tipo de lcool utilizado, que, de modo geral, utiliza-se metanol. Nesse caso, a alcolise enzimtica com etanol hidratado apresenta grandes vantagens em relao ao metanol, tais como custo e toxidade. Alm disso, o etanol um produto obtido atravs de biomassas e, dessa maneira, o processo se torna totalmente independente do petrleo (tabela 1). Embora os processos de transesterificao enzimtica para obteno de biodiesel ainda no sejam comercialmente desenvolvidos, novos resultados tm sido reportados em artigos e patentes (Schuchardt, et. al. 1998). O aspecto comum desses estudos consiste na otimizao das condies de reao (solvente, temperatura, pH, tipo de microorganismo que gera a enzima, etc.), a fim de estabelecer as caractersticas para aplica-

Tabela 1. Principais vantagens e desvantagens enzimtico para a produo de biodiesel Processos Vantagens Qumico Simplicidade Alto rendimento Curto tempo de reao

dos processos qumico e Desvantagens Dificuldade de separao do catalisador Impossibilidade de reutilizao do catalisador Dificuldade de utilizao de etanol hidratado Obteno de produtos com menor grau de pureza Longo tempo de reao Custo das enzimas Baixo rendimento

Enzimtico

Facilidade de separao do catalisador (suporte) Obteno de produtos com maior grau de pureza Possibilidade de utilizar etanol hidratado na reao

Tabela 2. Rendimentos (%) dos steres obtidos atravs da reao de transesterificao enzimtica do leo de girassol Lipases C/Solvente lcoois P. fluorescens Mucor mirhei Candida sp 25 79 53 MeOH 82 99 79 EtOH (96%) 80 81 29 n-PrOH 3 MeOH S/Solvente EtOH (anidro) 70 EtOH (96%) 82 n-ButOH 76 Tabela 3. Rendimentos (%) dos steres obtidos atravs da reao de transesterificao enzimtica de triglicerdeos com lcoois primrio e secundrio Lipases C. antarctica P.cepacia lcoois M. miehei Sebo 25,7 MeOH 94,8 13,9 / EtOH (95%) 98,3 13,7 / EtOH (anidro) 68,0 / 61,2 l-PrOH 24,3 44,1 83,8 2-BuOH 19,6 41,0 Soja / MeOH 75,4 14,5 EtOH 97,4 Colza 77,3 MeOH es industriais. Contudo, tanto o rendimento como o tempo de reao ainda so desfavorveis se comparados com o sistema de reao por catlise bsica. A seguir so apresentados alguns desses estudos. A alcolise de leo de girassol, na presena ou ausncia de solvente (ter de petrleo) foi investigada por Mittelbach (1990), que utilizou trs lipases obtidas de diferentes fontes. Os melhores rendimentos foram obtidos com a lipase de Pseudomonas sp e etanol hidratado. Por outro lado, na ausncia de solvente, o rendimento foi menor e o tempo de reao maior (tabela 2). Nelson e col. (1996) investigaram a reao de transesterificao de alguns leos vegetais e sebo bovino, utilizando lcoois primrios, secundrios e diversas lipases. Os melhores resultados foram obtidos na alcolise do sebo com metanol e de etanol com a lipase de Mucor miehei. Os rendimentos
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obtidos com etanol hidratado foram superiores ao do anidro. Utilizando-se lcoois secundrios, a lipase de Candida antartica foi a mais eficiente nesse estudo FIGURA 2. leo de soja aquecido a 180-200 oC, em diferentes tempos (0-81h), para (tabela 3). estu-dos de reaes de transesterificao com lipases A atividade hidroltica representa uma caracterstica bsica das lipases e rendimento total de steres de 98,4%. dos foram usados em reaes de normalmente se associa com a habi- A estabilidade da lipase usada nas trs esterificao do cido lurico, olico, lidade sinttica. Wu e col. (1996) etapas da metanlise foi verificada linolico e esterico com n-pentanol, investigaram essas caractersticas uti- pela repetio de sua aplicao em etanol e metanol, alm da etanlise lizando nove lipases. De acordo com novos substratos, que em cinquenta do leo de soja. Em geral, os produos resultados obtidos, a atividade ciclos de reutilizaes apresentaram tos (steres) foram obtidos com bons hidroltica da lipase pode ter pouco rendimentos superiores a 95%. rendimentos (> 90%) quando a CCL valor na predio da atividade sintfoi imobilizada em gel de gar. tica. Ao contrrio, a lipase pode no Uso de CCL em Sntese Os resultados obtidos para a reaexibir atividade sinttica, mas pode o de esterificao enzimtica do apresentar alta atividade hidroltica. A preparao de suportes com cido lurico foram comparados com Em outro estudo, Wu e col. lipase de Candida rugosa (CCL, Sigma os da enzima livre por meio do tempo (1999) empregaram a metodologia 905 u/mg slido) para posterior utili- de reao. A reutilizao dos suporde superfcie de resposta para otimi- zao em reaes de transesterifica- tes carvo de coco e gel de gar zar parmetros de reao de transes- o de leo de soja novo, e degradado tambm foram avaliados para essa terificao de banha usada em restau- termicamente visando obteno de reao. rantes com etanol hidratado, utilizan- biodiesel por via enzimtica, tem sido A Figura 4 mostra os rendimentos do do as lipases de P. cepacia e C. realizada no Laboratrio de Biocatli- laurato de n-pentila obtidos pela utiantarctica. O melhor rendimento da se da UFSC, por Nascimento e col. lizao da CCL livre e imobilizada nos reao (96%) foi obtido quando utili- 1999. (Figura 2). diferentes suportes. O melhor resulzaram-se simultaneamente, as duas Os suportes avaliados para esse tado foi obtido com a CCL imobilizalipases. fim foram os carves ativos de casca da em gel de gar, aps 24 horas. A otimizao da reao de de coco, pinus e bauxita ativada, to- Utilizando-se a CCL livre (mtodo de transesterificao de leo de soja e dos granulados e com reas superfici- Klibanov), obtm-se o ster em rencolza com metanol, utilizando-se li- ais de 854, 1.038 e 100 m2/g, respec- dimento quantitativo, aps 165 hopase de Candida antartica imobili- tivamente. Com a mesma finalidade, ras. Com os demais suportes, os renzada em cermica foi estudada por outro suporte que vem sendo estuda- dimentos dos produtos foram relatiShimada e col. (1999). Nessa reao, do o de gel de gar. (Figura 3). vamente baixos (< 40%) e o tempo de necessita-se de trs equivalentes de Os biocatalisadores assim prepara- reao muito longo (> 400 horas). A metanol para um de leo; foi reutilizao desses suportes observado que o equivalenmostra que o gel de gar pode te molar de metanol, superiser reutilizado pelo menos trs or a 1,5, provocou a inativavezes sem perda da atividade o da enzima. Portanto, a cataltica da enzima. Porm, reao foi conduzida com a quando a CCL foi imobilizada adio do lcool em etapas. em carvo de coco, houve Na primeira, a reao foi diminuio no rendimento de conduzida com um equivaster, que foi de 40%, 18% e lente de MeOH, por 10 ho11%. (Figura 5). ras. Aps a converso de Os resultados preliminares 95% do metanol colocado obtidos para a reao de traninicialmente, foi acrescentasesterificao do leo de soja do mais um equivalente e comercial com etanol, usando deixado em reao por 14 Figura 3. Suportes com CCL imobilizada (bauxita a CCL imobilizada nos referihoras. O terceiro equivalen- ativada, carvo ativo de pinus, de casca de coco e dos suportes, tem apresentado te foi finalmente adicionado de gel de gar) comportamento similar ao das e a reao continuou por reaes de esterificao. mais 24 horas, obtendo-se As reaes tm sido conduzi30 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Figura 4. Influncia do tempo no rendimento da reao de esterificao do cido lurico com n-pentanol em hexano, com a CCL livre e imobilizada em carvo de coco, pinus, bauxita e em gel de gar, a 35 oC, (massa de CCL em cada suporte, 27 mg/g) Os transsteres derivados do etanol foram obtidos com rendimento quantitativo, aps 36 h de reao a 35 o C com a CCL imobilizada em gel de gar. Utilizando-se a CCL livre nas mesmas condies experimentais, o rendimento foi inferior a 50 %. Usando-se a lipase imobilizada em carvo de coco, nas mesmas condies experimentais descritas anteriormente, no foi verificada formao do produto. Consideraes Finais A busca de novas alternativas para produo de energia deve ser considerada e avaliada. Assim, a investigao do uso de lipases imobilizadas para produo de biodiesel de relevante importncia, considerando-se o crescimento da utilizao desse biocombustvel em mbito mundial, no somente pelo aspecto de meio ambiente, mas, principalmente, por se tratar de uma fonte de energia renovvel. Agradecimentos Os autores agradecem a UFSC, CAPES, CEFET/PR, UNICAMP, FBCPR e NOVO NORDISK. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS Basheer, S.; Mogi, K.; and Nakajima, M. Interesterification Kinetics of

Figura 5. Variao do rendimento do laurato de n-pentila em sucessivas reutilizaes com a CCL imobilizada em carvo de coco e gel de gar, em hexano a 35 oC

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