A protena fluorescente verde (GFP) uma protena de 27 kDa de 238 aminocidos de comprimento, que foi originalmente isolado do bioluminescentes

s medusa Aequorea Victoria. GFP intrinsecamente fluorescentes e, portanto, ideal como um marcador no-invasivo em clulas vivas. usado como um marcador de linhagem celular, o reprter da expresso gnica, uma medida de interaes entre protenas e como um indicador de pH intracelular. GFP pode funcionar como uma marca de protena como ela tolera fuso N-e C-terminal de uma ampla variedade de protenas. GFP selvagem-tipo fluoresce quando animado mximo de 395 nm, com um pico secundrio em 475 nm. picos de emisso de fluorescncia em 509 nm. estvel na faixa de pH 5,5 a 12. Desnaturao ocorre em temperaturas acima de 70 C. Diversas variantes com uma melhor absoro ou espectros de emisso ou o aumento da intensidade de fluorescncia, foram entretanto desenvolvidos. Variantes tambm apresentam thermosensitivities diferente. Para os fins deste estudo, GFPuv de Clonetech foi considerado o mais candidato apropriado para os fins do presente experimento. Os espectros de excitao mxima de GFPuv 395nm, enquanto se espectros de emisso mxima em 509nm, que semelhante ao da GFP selvagem. Comparado com GFP selvagem, GFPuv contm trs substituies de aminocidos (Fen-99 para Ser, Met-153 para Thr e Val-163 a Ala [com base na numerao do aminocido do tipo selvagem GFP]), nenhuma das quais alterar a seqncia do cromforo. A principal vantagem desta variante mais GFP selvagem a sua grande quantidade de fluorescncia quando animado com ultra-violeta (UV) em 395nm. GFPuv 18 vezes mais brilhante que a GFP selvagem sob excitao ultra-violeta e pode ser facilmente detectadas pelo olho, sem a necessidade de equipamentos especializados. Sua grande quantidade de fluorescncia, portanto, torna-o adequado para esta experincia que exige a deteco de alteraes na fluorescncia .. Alm disso, GFPuv expressa em E. coli uma protena fluorescente solvel em contraste com a GFP selvagem, muito do que pode ser expressa ressa como uma protena nonfluorescent em corpos de incluso. Por conseguinte, o gene GFPuv expressa de forma muito eficiente em E. coli.

A protena fluorescente verde (GFP 1), originalmente isolada de gua-viva Aequorea Victoria, uma protena globular nico domnio de 238 aminocidos, o que gera um autocatalytically covalentemente cromforo quando dobrado corretamente e, portanto, sem fluorescncia cofatores externo. GFP notvel por sua estabilidade estrutural e alto rendimento quntico de fluorescncia. GFP e seus anlogos tm sido amplamente

utilizados em pesquisa biolgica e mdica como um marcador da expresso gnica e localizao de protenas (1), como um marcador eficiente nas investigaes fisiolgicas (2), como um indicador da interao protenaprotena (3) ou um reprter do dobramento de protenas de fuso (4, 5), e at mesmo como um biossensor (6). GFP uma protena tpica de um barril. Sua mutante, GFPuv ou C3-GFP (F99S/M153T/V163A), de forma cilndrica e compreende 11-costas com um dentro da hlice e curto R segmentos helicoidais nas extremidades do cilindro (Figura 1). O cilindro tem um dimetro de cerca de 30 e um comprimento de cerca de 40 . O cromforo altamente protegido (Ser65/Tyr66/Gly67) est localizado na hlice central dentro de alguns angstroms do centro geomtrico do cilindro (7). Apesar de 42 vezes mais do que fluorescente GFP selvagem, GFPuv tem as mesmas caractersticas espectrais, topologia e estrutura geral de tipo selvagem, assim como dobradura similares e ao intercmbio de hidrognio comportamento (8). tm sido realizados sobre a dobrar e desdobrar cintica da GFP (7-10). Por exemplo, o grupo Kuwajima investigou a dobra de GFPuv em detalhes por desnaturao de cido (11, 12), e do grupo Jackson descobriu que GFP significativamente preenche um estado intermedirio em condies de equilbrio durante a desnaturao qumica (13). Recentemente, um superfolder GFP foi projetado e caracterizado (14). O efeito de uma srie de chaperones moleculares sobre o dobramento das boas prticas agrcolas tambm tem sido estudada como fator desencadeante (TF) de Thermus thermophilus (15), Hsp70 e acompanhantes Hsp100 (16) e os chaperoninas (17). Aqui, ns descrevemos investigao da dobradura de GFPuv guanidina desnaturado na presena e na ausncia de Escherichia coli TF.