Bioclin

BILIRRUBINA
K005
INSTRUES DE USO
FINALIDADE M t o d o pa r a d e t e r m i n a o d a b i l i r r u b i n a d i r e ta e t o ta l . Te s t e colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO DE AO Metodologia: Sims - Horn. A bilirrubina, atravs da reao de acoplamento com o cido sulfanlico diazotado forma um complexo de colorao vermelha (azobilirrubina). A bilirrubina total (direta e indireta) dosada em presena de um acelerador (cafena e benzoato), que permite a solubilizao da bilirrubina indireta (no conjugada), insolvel em gua. A bilirrubina direta (conjugada) dosada em meio aquoso. REAGENTES Nmero 1 - Nitrito de sdio - conservar entre 15 e 30C. Contm: nitrito de sdio 70 mmol/L. Nmero 2 - Reagente sulfanlico - conservar entre 15 e 30C. Contm: cido sulfanlico 6 mmol/L, cido clordrico 130 mmol/L. Nmero 3 - Acelerador - conservar entre 15 e 30C. Contm: cafena 0,2 mmol/L, benzoato de sdio 0,4 mol/L, acetato de sdio 0,7mol/L. APRESENTAO Reagentes Volume Reagente No 1 ................ 5 mL Reagente No 2 ............ 125 mL Reagente No 3 ............ 250 mL EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Espectrofotmetro ou colormetro, relgio ou cronmetro, pipetas, tubos de ensaio, kit Bilirrubina Calibrao Bioclin. Encontram-se no mercado especializado de artigos para Laboratrios de Anlises Clnicas. CONDIES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE A temperatura de armazenamento e transporte dever ser de 15 a 30C. Manter ao abrigo da luz e evitar umidade. CUIDADOS ESPECIAIS 1 - Somente para uso diagnstico in vitro; 2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos; 3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes; 4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados; 5 - A calibrao deve ser repetida periodicamente para verificar alguma alterao na resposta do colormetro ou do espectrofotmetro; 6 - Hemlise, mesmo discreta, interfere na dosagem; 7 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo- se os critrios de biossegurana, de acordo com a legislao vigente. AMOSTRAS Soro livre de hemlise. O analito estvel 03 dias quando a amostra armazenada entre 2 e 8 C e protegida da luz. A amostra para controle teraputico deve ser colhida sempre no mesmo horrio. Branco Reagente N o 2 Diazo reagente gua destilada Reagente N 3 Amostra 500 L 4,5 mL 300 L BD 500 L 4,5 mL 300 L BT 500 L 4,5 mL 300 L

Homogeneizar por agitao, esperar 5 minutos e ler as absorbncias das bilirrubinas direta e total em 525 nm (500 - 540), ajustando o zero com o branco. A cor permanece estvel por 30 minutos. Os valores em mg/dL para as bilirrubinas direta e total so obtidos utilizando o Fator de Calibrao MACRO, obtido com o Kit Bilirrubina Calibrao Bioclin. 2 - TCNICA MICRO Utilizada para dosagem de bilirrubina com concentrao superior a 10 mg/dL (soro de recm-nascidos ictricos). Usar micropipeta de 0,05 mL para pipetar o soro. Rotular 3 tubos de ensaio como na Tcnica Macro e proceder como a seguir: Branco Reagente N 2 Diazo reagente gua destilada Reagente N 3 Amostra 150 L 1,8 mL 50 L BD 150 L 1,8 mL 50 L BT 150 L 1,8 mL 50 L

Homogeneizar por agitao, esperar por 5 minutos e ler as respectivas absorbncias das bilirrubinas direta e total em 525 nm (500 - 540), ajustando o zero com o branco. A cor estvel por 30 minutos. Os valores em mg/dL para as bilirrubinas direta e total so obtidos utilizando o Fator de Calibrao MICRO, obtido com o Kit Bilirrubina Calibrao Bioclin Bioclin. DESCRIO DOS CLCULOS Utilizando o kit Bilirrubina Calibrao Bioclin, efetuar o clculo do fator. Realizar clculos distintos para a tcnica Macro e para a tcnica Micro. Fator de calibrao = Concentrao do padro (10 mg/dL) Absorbncia do padro (mdia) mg/dL = Absorbncia da amostra x Fator de calibrao Bilirrubina indireta = Bilirrubina total Bilirrubina direta. Exemplo: Absorbncia mdia do padro = 0,480 Absorbncia da amostra p/ bilirrubina total = 0,045 Absorbncia da amostra p/ bilirrubina direta = 0,012 10 mg/dL = 20,83 Fator de Calibrao = 0,480 Bilirrubina total mg/dL = 0,045 x 20,83 = 0,93 Bilirrubina direta mg/dL = 0,012 x 20,83 = 0,25 Bilirrubina indireta = 0,93 - 0,25 = 0,68 A reao linear at 15 mg/dL na tcnica Macro e 45 mg/dL na tcnica Micro. Para valores maiores, diluir a amostra com NaCl 0,85 % e repetir a dosagem. Multiplicar o resultado pelo fator de diluio. LIMITAES DO PROCESSO No utilizar a tcnica Micro para valores de bilirrubina inferiores a 10 mg/dL. Algumas drogas como esterides anabolizantes, cido ascrbico, salicilatos e vitamina A podem elevar os valores de bilirrubina. A cafena e as penicilinas podem interferir nas dosagens, diminuindo os valores de bilirrubina. CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a preciso e exatido das dosagens. Deve ser de 5% o erro mximo permitido em relao aos valores pr-estabelecidos para os controles.

DESCRIO DO PROCESSO PREPARO DO DIAZO REAGENTE Adicionar 1 gota do reagente N 1 a 1,5 mL do reagente N 2. Homogeneizar bem e usar somente no dia do seu preparo. TCNICA 1 - TCNICA MACRO Rotular 3 tubos de ensaio como B (branco), BD (bilirrubina direta) e BT (bilirrubina total), e proceder como a seguir:

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VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia, em mg/dL, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao de bilirrubina em populaes sadias do sexo masculino e feminino. Adulto Tota l .............................. 0,1 a 1,2 mg/dL Direta ............................ at a 0,4 mg/dL Indireta ......................... 0,1 a 0,8 mg/dL Neonatos 24 hs ............................ <8,8 mg/dL 2 dia ........................... 1,3 a 11,3 mg/dL 3 dia ........................... 0,7 a 12,7 mg/dL 4 ao 6 dia ................. 10,1 a 12,6 mg/dL Crianas > 1 ms: ....... 0,2 a 1,0 mg/dL Para converter os valores de mg/dL para mmol/L (SI) multiplicar por 0,0171. Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida. DESEMPENHO DO PRODUTO Exatido RECUPERAO A anlise de recuperao foi feita com 05 determinaes de amostras. As exatides foram calculadas, e se encontraram em boa concordncia com os valores de referncia, obtendo uma recuperao entre 95 e 103%. COMPARAO DE MTODOS E ESPECIFICIDADE METODOLGICA O kit de bilirrubina foi comparado com outros mtodos para dosagem de bilirrubina total e direta. De acordo com os resultados de 07 amostras clnicas, os mtodos mostraram uma excelente correlao. O coeficiente de correlao para bilirrubina total foi de 0,9998 e a equao da reta foi Y = 0,9998X + 1,0224. O coeficiente de correlao para bilirrubina direta foi de 0,9994 e a equao da reta foi Y = 0,9994X + 1,0197. Preciso REPETIBILIDADE A repetibilidade refere-se a 20 determinaes sucessivas de bilirrubina total e direta, utilizando-se 3 amostras com concentraes diferentes. Foram encontrados os seguintes resultados:

BILIRRUBINA TOTAL Amostra Amostra Amostra 1 2 3 Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 0,7292 0,0116 1,5895 0,8482 0,0253 2,9782 0,7898 0,0225 2,8539

Efeito Matriz Diluies variadas das 05 amostras com soluo salina obtiveram valores de recuperao entre 90% a 108%. Sensibilidade A sensibilidade foi calculada a partir de 20 determinaes de uma amostra de concentrao 0 (zero) de bilirrubina total e direta. A mdia da concentrao de bilirrubina total foi 0,3600 mg/dL, com desvio padro de 0,02542 mg/dL. A sensibilidade, que indica o Limite de Deteco do Mtodo, corresponde a mdia mais 3 vezes o desvio padro, sendo igual a 0,11227 mg/dL. A mdia da concentrao de bilirrubina direta foi 0,0330 mg/dL, com desvio padro de 0,0047 mg/dL. A sensibilidade, que indica o Limite de Deteco do Mtodo, corresponde a mdia mais 3 vezes o desvio padro, sendo igual a 0,0471 mg/dL. SIGNIFICADO DIAGNSTICO A bilirrubina eleva-se no soro na presena de leses hepticas, obstruo biliar ou quando a velocidade de destruio dos glbulos vermelhos est aumentada. O aumento da bilirrubina indireta observado na sndrome hemoltica, na ictercia neonatal, na sndrome de Cligler- Najjar e na doena de Gilbert. A bilirrubina direta est aumentada nas hepatites agudas e crnicas, nas reaes txicas a vrias drogas (clorpromazina, arsenicais orgnicos, metiltestosterona) e nas obstrues do trato biliar. INTERFERENTES Amostras com hemlise mesmo que discreta interferem na dosagem de Bilirrubina. NMERO DE TESTES 110 Testes/300 L de amostra 276 Testes/50 L de amostra REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - JENDRASSIK, H. T. e Grof, P. : Biochem. Zentr. 297:81, 1938. 2 - MALLOY, H. T. e EVELYN, K. A .- J. Biol. Chem. 119:481, 1937. 3 - MARTINEK, R. G.,Clin. Chem. Acta 13, 161, 1966. 4 - POWELL, W. N., Am. J. Clin. Path. 8, 55, 1944. 5 - SIMS, F. H. e Horn, C., Am. J. Clin. Path. 29, 412, 1958. 6 - TONKS, D. B., Clin. Chem. 9, 217, 1983. GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Bioclin so testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes assegurada at a data de validade mencionada na embalagem de apresentao, desde que armazenados e transportados nas condies adequadas. DADOS DO FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: ( 31 ) 3439.5454 - Fax ( 31 ) 3439.5455 e-mail bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Servio de Assessoria ao Cliente Tel.: 0800 0315454. E-mail: sac@bioclin.com.br Nmero de registro do kit de Bilirrubina na ANVISA: 10269360083.

BILIRRUBINA DIRETA Nmero Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) Amostra Amostra Amostra 1 2 3 0,6525 0,0097 1,4813 0,8395 0,0196 2,3341 0,8675 0,0326 3,7563

BILIRRUBINA TOTAL Nmero Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) Amostra Amostra Amostra 1 2 3 0,7425 0,0202 2,7244 0,8765 0,0114 1,2969 0,8100 0,0236 2,9160

REPRODUTIBILIDADE A reprodutibilidade refere-se 20 determinaes de bilirrubina total e direta, em 3 dias diferentes, com 3 amostras de concentraes diferentes. Foram encontrados os seguintes resultados:

BILIRRUBINA DIRETA Amostra Amostra Amostra 1 2 3 Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 0,6543 0,0032 0,4853 0,8415 0,0290 3,4524 0,8613 0,0297 3,4520
Reviso: Novembro/10