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Mutaes
Definio:
A T G C C G T A T G C G T A A T C G C A T T A C G Transies Transverses
Frameshift
Classes de mutaes
Macroleses
LocusSelvagem Delees ATGCCATACCGC TACGGTATGGCG Duplicaes ATGCCATACCGC TACGGTATGGCG Inseres ATGCCATACCGC TACGGTATGGCG Inverses ATGCCATACCGC TACGGTATGGCG Translocaes ATGCCATACCGC TACGGTATGGCG ATACCGC ATAGGCG ATGCCCCATAGC TACGGGGTATCG ATGCCGACCATATACCGC TACGGCTGGTATATGGCG ATGCCATACCATACCGC TACGGTATGGTATGGCG ATGCCGC TACGGCG Mutao
MutaesPolares
x x
Smbolos usados para descrever gentipos e mutaes em bactrias Nome do gene (em itlico). Ex: lacZ = Deleo. Ex: phoA; (phoA-proC) :: = Insero. Ex: phoA::Tn10 ts = mutante sensvel a temperatura. Ex: phoA(ts)
Cepa auxotrfica: mutante que tem uma ou mais deficincias nutricionais Cepa prototrfica: cepa selvagem da qual o mutante auxotrfico derivou-se
Teste de Flutuao
Mdia = m/n
m = mutantes por cultura n = no. de culturas
Varincia = (m-mdia)2
( n-1)
a=h N
h =no. de mutaes/ cultura= -ln (no. de culturas sem mutao) (no. total de culturas) N = nmero de divises celulares
Pergunta: Um cientista conduziu um teste de flutuao para determinar se mutaes no gene rpoS so espontneas ou induzidas. De 50 tubos contendo 107 bactrias cada, em 40 foram observados mutantes rpoS. A) Calcule a taxa de mutao em rpoS. B) O que pode concluir a respeito da induo de mutaes em rpoS? h = -ln (10/50) = 1.6 a = h/N = 1.6/ 107 = 1.6 x 10-7 mutaes/gerao
20 bilhes de bactrias/dia
C) Agentes Biolgicos
Mecanismo de Ocorrncia de Mutaes Mutaes Espontneas: 1- Erro na incorporao de nucleotdeos da DNA Pol III 10-4 erros/par de bases/clula/gerao Com edio da prpria DNA polimerase III: 10-6-10-7 erros/par de bases/clula/gerao Com mecanismos de reparo de DNA: 10-9-10-10 erros/par de bases/clula/gerao
Mecanismo de Ocorrncia de Mutaes Induo de mutaes- Agentes Fsicos I- Radiao Ionizante: A) Radioatividade (raios alfa, beta e gama) Ex: Tinta de Rdio
B) Raios X
Reverso de mutaes
ATG CAT CTT CTA Met-His-Leu-Leu ATG CAT TTT CTA Met-His-Phe-Leu
Mutaessupressoras
TestedeAmes
Pergunta de Prova
O operon pst formado por 5 genes transcritos na seguinte ordem: pstS-pstC-pstA-pstBphoU. Os genes de pst codificam protenas responsveis pelo transporte de fosfato inorgnico, importantes para permitir o crescimento da bactria em meio limitante em fosfato. Foram isolados dois mutantes denominados 1 e 2. O mutante 1 no produz somente a protena PstC e o mutante 2 alm de no produzir PstC, tambm no capaz de sintetizar as protenas PstA, PstB e PhoU. Qual a provvel natureza de cada uma das mutaes 1 e 2? Explique.
Descobriu em 1944 que a transformao de Streptococcus pneumoniae no-virulento em uma cepa virulenta observada por Griffith foi causada pela transferncia de DNA
Poucas bactrias possuem a capacidade de captar DNA livre do meio. Estas so conhecidas como bactrias naturalmente competentes.
Algumas espcies naturalmente competentes: * Streptococcus pneumoniae *Bacillus subtilis *Neisseria gonorrhoeae *Haemophilus spp.
Bactrias podem ser artificialmente induzidas a captar DNA livre atravs de vrias tcnicas: - CaCl2 - PEG-DMSO - Eletroporao
A eficincia de eletroporao 10-100 vezes maior que os demais mtodos e pode ser utilizada para transformar praticamente todos os tipos de microrganismos
Molculas de DNA geralmente (mas no sempre) circulares que contm genes que geralmente (mas no sempre) codificam protenas noessenciais para a sobrevivncia da bactria Os plasmdios possuem uma origem de replicao (replicon) prpria tal que uma nica clula pode comportar de 1 a 700 cpias do mesmo plasmdio
Transformao de Plasmdios
Se o plasmdio transformado possuir uma origem de replicao reconhecida pela DNA polimerase da clula ele ser replicado de forma independente. Caso contrrio, ele poder ser...
OU
Transformao de Plasmdios
Tipos de Plasmdios
Plasmdios R
So plasmdios encontrados em bactrias entricas que conferem resistncia a um amplo espectro de compostos antimicrobianos como antibiticos, metais pesados, formaldedo etc.
oriV- origem de replicao repA- funo de replicao mer- resistncia a mercrio
Plasmdio R100
sul- resistncia a sulfonamida str- resistncia a streptomicina cat- resistncia a cloranfenicol tet- resistncia a tetraciclina oriT- origem de transferncia
Tipos de Plasmdios
Plasmdios de Virulncia Plasmdios que carregam genes codificadores de fatores de virulncia como endotoxinas, enterotoxinas, adesinas, hemolisina, coagulase etc.
Plasmdios Artificiais
Plasmdios Artificiais
Conjugao
Joshua Lederberg
Edward Tatum
Exemplodeplasmdioconjugativo
oriV- origem de replicao repA- funo de replicao mer- resistncia a mercrio sul- resistncia a sulfonamida str- resistncia a streptomicina cat- resistncia a cloranfenicol tet- resistncia a tetraciclina oriT- origem de transferncia
Conjugao
FATORFclassificao
FormaodeHfr
Transferncia deHfr
Formao de F'
Transferncia deF'
ResumoFatorF
Nome Estado do fator F No h FF+ F Propriedades Receptor de fator F
Hfr
Transfere eficientemente o fator F para a clula receptora Fator F carrega segmentos de DNA Transfere o fator F e segmentos cromossmico. Ex.: F lac cromossmicos; pode haver (geralmente no) recombinao homloga com regies do cromossomo Fator F integrado no cromossomo Transfere regies cromossomicas com da bactria alta eficincia a partir de um ponto fixo (de acordo com a posio do Hfr)
OmapacromossomaldeE.coli
EXEMPLO:
Doador: StrS Pro+ (F' lac proA-B) X Receptor: StrR Pro- (F-)
Fago T2
CiclodeVidadeumFagoTemperado
Transduoatransfernciadematerialgentico deumabactriaoutraviainfecoviral
Descobertaem1952porJoshuaLederbergeNortonZinder
Alguns clculos
Fagos P1 infectaram e lisaram uma cultura de E. coli selvagem para o gene B (B+). Trs em cada 1000 fagos empacota acidentalmente 2% de alguma poro do cromossomo de E.coli, ou seja, 100 Kb.
1) Qual a probabilidade de um fago empacotar o gene B+? 3/1000 X 1/50 = 3/50000 2) Sabendo que somente 2% do DNA injetado sofre recombinao, qual a porcentagem real de fagos transdutores (em relao a quantidade inicial de fagos)? 3/50000 X 1/50 = 3/2.500.000
Isolamento de fago especifico para a bactria Enterocouccus faecalis e sua utilizao na eliminao de bactrias em tbulos dentrios
Mapeamento gentico
Fentipos das colnias TcR Arg- Rif R Arg- Rif S Arg+ Rif S Arg+ Rif R No. de colnias 16 40 44 0
Pergunta de Prova
Foi realizado um experimento de transduo com o fago P1 para determinar a ordem dos genes phoA (que codifica a enzima fosfatase alcalina), lacZ ( que codifica a enzima -galactosidade) e proC (que codifica enzima envolvida na biossntese de prolina). A cepa doadora era phoA+ lacZ- proC+ e a receptora phoA- lacZ+ proC-. A seleo foi feita para transductantes proC+ . As 180 colnias obtidas foram tambm testadas em relao aos gentipos de phoA e lacZ, e o resultado est descrito na tabela abaixo: phoA lacZ + + + + no. de colnias 98 44 29 9
a) Qual a ordem dos genes no cromossomo? b) Sabendo que P1 empacota 100 kb de DNA da bactria doadora, qual a distncia aproximada entre os trs genes?