V

VIROLOGIA PRCTICA N 22

TEMA:

NECROPSIA EN AVES

OBJETIVOS:
Adquirir los conocimientos necesarios para realizar una necropsia sistemtica de un ave utilizando los materiales adecuados. Inspeccionar de manera adecuada los diferentes rganos y tejidos de un cadver de ave.

REVISIN DE LITERATURA:
NECROPSIAS La necropsia es la diseccin anatmica, rpida, sistmica y ordenada de un cadver, llevada a cabo principalmente para obtener, confirmar o descartar el diagnstico de enfermedades o la muerte de un animal. Tambin las necropsias se llevan a cabo con otros fines por ejemplo: en la investigacin del efecto de sustancias txicas, frmacos, agentes microbiolgicos entre otros. Se usa adems con fines legales para que puedan obtenerse argumentos en la demanda contra alguna empresa, mdicos y otros particulares. Es importante tener en cuanta que la necropsia no se lleva a cabo nicamente para exponer lesiones y tomar muestras, sino que en cada necropsia se deben establecer las relaciones estructurales y funcionales relevantes de los cambios encontrados. Las lesiones deben evaluarse junto con la historia clnica antes y durante el curso de la necropsia, para llevar a cabo una seleccin adecuada de las muestras y enviarlos a los diferentes laboratorios (virologa, parasitologa, histopatologa, etc).

De esta forma se evitar que la persona que lleva a cabo una necropsia se detenga en lesiones obvias, que no tengan inters y que pase por alto las ms importantes y significativas. Los mdicos que realizan necropsias constantemente en forma sistemtica, obtienen beneficios importantes en su desempeo como profesionistas, ya que son fuente importante de informacin y enseanza. Finalmente la necropsia junto a la historia clnica nos permite: Ayudar a identificar las enfermedades prevalentes en las granjas que se estn atendiendo. Conocer los errores o aciertos cometidos durante los tratamientos recomendados. Establecer medidas correctivas en base a lo anterior. Estas medidas pueden evitar prdidas econmicas importantes, siempre y cuando la necropsia y la historia clnica estn completas y bien hechas. DESCRIPCIN DE LAS LESIONES: La descripcin de lesiones es la base para la obtencin de un diagnstico morfolgico, ya que proporciona la experiencia y los conocimientos necesarios para asignar los nombres especficos a las lesiones observadas sin hacer interpretaciones errneas de las mismas. Los criterios bsicos que hay que tomar en cuenta al hacer la descripcin de lesiones son: 1. Objetividad; no ver lo que se espera o quiere encontrar, sino lo que realmente est observando. 2. La terminologa tiene que ser descriptiva, debe ser sugerida por el aspecto de la lesin y viceversa, la descripcin en el lector tiene que evocar un cuadro mental preciso del aspecto que tena la lesin. Se debe evitar confundir los trminos. 3. Hay que describir nicamente las caractersticas de lo observado. 4. Cuando no se observan lesiones en un rgano, se expresa anotando sin cambios patolgicos aparentes (s.c.p.a) aunque tambin se pueden describir los rganos que no tienen cambios patolgicos aparentes, haciendo la aclaracin correspondiente.

5. La secuencia en la que se hacen las descripciones es siempre de lo general a lo particular, describiendo primero lo que es comn a toda la extensin del rgano, posteriormente describiendo los hallazgos observados en porciones determinadas del mismo. 6. es conveniente incluir esquemas, principalmente referentes a la distribucin y la forma de las lesiones observadas. TERMINOLOGA ADECUADA PARA LA DESCRIPCIN DE LESIONES La descripcin de lesiones se hace con las siguientes especificaciones:

a. Localizacin.- es indispensable tener conocimientos precisos acerca de la

anatoma de los rganos, para poder indicar la localizacin exacta de las lesiones encontradas, la descripcin se debe basar en la terminologa empleada para anatoma.

b. Relacin.- se debe describir si existen cambios de relacin entre los rganos

observados in situ o bien, entre una lesin determinada y las estructuras anatmicas de su contorno.

c. Nmero y extensin de la lesin.- se debe determinar el nmero de lesiones

observadas; hasta diez estructuras se pueden observar fcilmente, pero pueden utilizarse tambin estimaciones como docenas, cientos. Se debe evitar las definiciones como pocas, muchas, etc. La evaluacin de la extensin de una lesin, puede estimarse en porcentaje respecto al tamao del rgano.

d. Tamao y peso.- se pueden utilizar unidades conocidas del sistema mtrico (mm,
cm, m), de peso (mg, g, Kg.), de volumen (ml, cc); Tambin se deben describir las caractersticas morfolgicas del rgano relacionas con el cambio de tamao, por ejemplo: el aspecto y estado de los bordes de un rgano, etc.

e. Forma.- se deben utilizar trminos comparativos aproximados y relacionados con

figuras geomtricas, como: redondeado, ovalado, estrellado, nodular, triangular, irregular, forma de frijol, evitando comparaciones con formas rebuscadas o poco comunes.

f. Color.- se pueden utilizar todos los colores comunes: rojo, amarillo, negro, se
pueden utilizar tambin combinaciones de colores, por ejemplo rojo negruzco, verde amarillento, se deben precisar adems la tonalidad y la transparencia, con trminos como claro, oscuro, plido, intenso, brillante, transparente, turbio, etc. No se deben usar colores que denoten interpretaciones, por ejemplo anmico, ictrico, ciantico.

g. Consistencia.- para determinar la consistencia se utilizan trminos como acuoso,

seroso, mucoso, espeso, duro, firme, blando, friable, esponjoso, elstico, pegajoso, arenoso, gelatinoso, granular, viscoso, crepitante.

h. Olor.- se utilizan trminos como amoniacal, ftido, cido, dulzn, medicamentoso. i. Superficie de corte.- se describe el color, la consistencia y la posible salida de
lquidos que se pueden observar al ir haciendo los cortes del parnquima de los rganos, utilizando trminos como liso, irregular, ulcerado, erosionado, elevado, deprimido.

j. Contenido de cavidades y rganos tubulares.- primero se describen las

caractersticas del contenido: localizacin, cantidad, composicin, consistencia, color, olor, si coagula al contacto con el aire, si tiene burbujas y el tamao de las mismas, si tiene material en suspensin, etc. Posteriormente se describe la mucosa de los rganos tubulares y el endotelio de los vasos sanguneos.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:

MATERIALES:

Estuche de diseccin para necropsia de especies menores.

Jabn REACTIVOS: Agua Bandeja de diseccin para especies menores. Guantes desechables

Mascarilla

PROCEDIMIENTO:
Examen externo Inspeccionar el plumaje, los anejos, y los orificios externos, efectuar las medidas pertinentes. Evaluar el estado de nutricin (ngulo pectoral) y musculacin del ave. Mojar las plumas del abdomen, pecho y cuello del ave con desinfectante para evitar la volatilizacin de polvo de plumas y patgenos potenciales.

 Desplumar dichas zonas. Necropsia y examen interno Abrir el pico y cortar la mandbula en su comisura izquierda. Cortar la piel en el lado izquierdo del cuello, luego siguiendo la cresta del esternn y la mediana hasta la cloaca. Abrir la piel y preparar lateralmente. Evaluar la presencia de grasa, y el aspecto de grasa, tejido subcutneo y musculatura. Si lo permite el tamao del ave: Desarticular ambas caderas. (para mejor posicin del cadver y mayor comodidad en la necropsia) Cortar los msculos pectorales a ambos lados de la apertura del pecho, cortar ambas clavculas y coracoides. Cortar las costillas de un lado y levantar primero el caparazn del esternn y los msculos pectorales desde un lateral costillar, para inspeccionar los sacos areos torcicos craneales y caudales. Cortar las costillas del lado opuesto, levantar el esternn y retirar hacia atrs quitando tambin la pared abdominal. Inspeccionar los rganos y las serosas visibles antes de empezar la extraccin. Cortar el tronco vascular del corazn, y quitar el mismo junto con el pericardio. En caso de sospecha de septicemia, y en un cadver reciente (<12 horas muerto), remitir el corazn sin abrir; o tras abrirlo con una tijera estril tomar una muestra del interior y remitir este hisopo en medio de transporte a un laboratorio de microbiologa. En ausencia de sospechas, abrir el pericardio, y retirar, luego abrir el corazn con un corte transversal desde la punta. Si procede, localizar la tiroides, y paratiroides examinar su tamao y apariencia y extraerlas. En pollos y animales jvenes examinar el cuello por la presencia del timo, y en su caso extraerlo. Examinar el saco areo abdominal, si no se encuentra liso, brillante y transparente tomar una muestra. Si no se observan alteraciones romper este saco areo a ambos lados del paquete intestinal. Cortar el esfago a la altura de la bifurcacin trqueal, y extraer proventrculo, ventrculo, hgado, bazo y paquete intestinal, incluida la cloaca y en su caso el oviducto, juntos. En aves jvenes separar la bolsa de Fabricio que se encuentra en la cara dorsal de la cloaca.

 Cortar la mucosa bucal y los huesos hioides y preparar trquea y esfago hacia caudal hasta extraerlo con el pulmn. Extraer los riones con las gnadas y adrenales. En dichas especies los riones estn muy encasilladas en el sacro, es importante intentar extraer al mximo todas las partes de ambos riones. Examinar cada rgano por separado, y tomar las muestras y medidas correspondientes. Separar las asas de intestino, examinar el pncreas y abrir el intestino en toda su longitud, o al menos un trozo de cada parte. Si hay lesiones, enrojecimiento o sospecha de un proceso infeccioso, cerrar trozos de varias regiones (intestino delgado e intestino grueso) anudando hilos en ambos lados, cortar los y remitirlos en un contenedor estril a un laboratorio de microbiologa. Abrir la articulacin de fmur. Romper el hueso y coger las muestras de medula necesarias. Separar la piel del crneo, cortar el hueso detrs de las rbitas, la base de la cera y la base del crneo y extraer el encfalo. Abrir los senos paranasales, cortar el pico delante de los orificios nasales para examinar las conchas nasales.

GRAFICOS:
Dibuja lo observado durante la necropsia

RESULTADOS:
Reporta lo observado en la necropsia.

CONCLUSIONES Y /O RECOMENDACIONES:

BIBLIOGRAFA:
http://www.wcs.org/swhigh_tech_tools/wildlifehealthscience/fvp/168570/guidelinesan dpapers/Necropsymanualspanish/169480/169592 MORENO, B, et al. MANUAL DE NECROPSIAS PATOLOGA GENERAL. UNAM. Seccin de patologa.

PRCTICA N 23 TEMA: NECROPSIA EN CUYES

OBJETIVOS:
Adquirir los conocimientos necesarios para realizar una necropsia sistemtica de un
cuy utilizando los materiales adecuados. Inspeccionar de manera adecuada los diferentes rganos y tejidos de un cadver de cuy.

REVISIN DE LITERATURA:
NECROPSIAS La necropsia es la diseccin anatmica, rpida, sistmica y ordenada de un cadver, llevada a cabo principalmente para obtener, confirmar o descartar el diagnstico de enfermedades o la muerte de un animal. Tambin las necropsias se llevan a cabo con otros fines por ejemplo: en la investigacin del efecto de sustancias txicas, frmacos, agentes microbiolgicos entre otros. Se usa adems con fines legales para que puedan obtenerse argumentos en la demanda contra alguna empresa, mdicos y otros particulares. Es importante tener en cuanta que la necropsia no se lleva a cabo nicamente para exponer lesiones y tomar muestras, sino que en cada necropsia se deben establecer las relaciones estructurales y funcionales relevantes de los cambios encontrados. Las lesiones deben evaluarse junto con la historia clnica antes y durante el curso de la necropsia, para llevar a cabo una seleccin adecuada de las muestras y enviarlos a los diferentes laboratorios (virologa, parasitologa, histopatologa, etc). De esta forma se evitar que la persona que lleva a cabo una necropsia se detenga en lesiones obvias, que no tienen inters y que pase por alto las ms importantes y significativas.

Los mdicos que realizan necropsias constantemente en forma sistemtica, obtienen beneficios importantes en su desempeo como profesionistas, ya que son fuente importante de informacin y enseanza. Finalmente la necropsia junto a la historia clnica nos permite: Ayudar a identificar las enfermedades prevalentes en las granjas que se estn atendiendo. Conocer los errores o aciertos cometidos durante los tratamientos recomendados. Establecer medidas correctivas en base a lo anterior. Estas medidas pueden evitar prdidas econmicas importantes, siempre y cuando la necropsia y la historia clnica estn completas y bien hechas. DESCRIPCIN DE LAS LESIONES: La descripcin de lesiones es la base para la obtencin de un diagnstico morfolgico, ya que proporciona la experiencia y los conocimientos necesarios para asignar los nombres especficos a las lesiones observadas sin hacer interpretaciones erroneas de las mismas. Los criterios bsicos que hay que tomar en cuenta al hacer la descripcin de lesiones son: 7. Objetividad; no ver lo que se espera o quiere encontrar, sino lo que realmente est observando. 8. La terminologa tiene que ser descriptiva, debe ser sugerida por el aspecto de la lesin y viceversa, la descripcin en el lector tiene que evocar un cuadro mental preciso del aspecto que tena la lesin. Se debe evitar confundir los trminos. 9. Hay que describir nicamente las caractersticas de lo observado. 10. Cuando no se observan lesiones en un rgano, se expresa anotando sin cambios patolgicos aparentes (s.c.p.a) aunque tambin se pueden describir los rganos que no tienen cambios patolgicos aparentes, haciendo la aclaracin correspondiente. 11. La secuencia en la que se hacen las descripciones es siempre de lo general a lo particular, describiendo primero lo que es comn a toda la extensin del rgano, posteriormente describiendo los hallazgos observados en porciones determinadas del mismo.

12. es conveniente incluir esquemas, principalmente referentes a la distribucin y la forma de las lesiones observadas. TERMINOLOGA ADECUADA PARA LA DESCRIPCIN DE LESIONES La descripcin de lesiones se hace con las siguientes especificaciones:

a. Localizacin.- es indispensable tener conocimientos precisos acerca de la

anatoma de los rganos, para poder indicar la localizacin exacta de las lesiones encontradas, la descripcin se debe basar en la terminologa empleada para anatoma.

b. Relacin.- se debe describir si existen cambios de relacin entre los rganos

observados in situ o bien, entre una lesin determinada y las estructuras anatmicas de su contorno.

c. Nmero y extensin de la lesin.- se debe determinar el nmero de lesiones

observadas; hasta diez estructuras se pueden observar fcilmente, pero pueden utilizarse tambin estimaciones como docenas, cientos. Se debe evitar las definiciones como pocas, muchas, etc. La evaluacin de la extensin de una lesin, puede estimarse en porcentaje respecto al tamao del rgano.

d. Tamao y peso.- se pueden utilizar unidades conocidas del sistema mtrico (mm,
cm, m), de peso (mg, g, Kg.), de volumen (ml, cc); Tambin se deben describir las caractersticas morfolgicas del rgano relacionas con el cambio de tamao, por ejemplo: el aspecto y estado de los bordes de un rgano, etc.

e. Forma.- se deben utilizar trminos comparativos aproximados y relacionados con

figuras geomtricas, como: redondeado, ovalado, estrellado, nodular, triangular, irregular, forma de frijol, evitando comparaciones con formas rebuscadas o poco comunes.

f. Color.- se pueden utilizar todos los colores comunes: rojo, amarillo, negro, se
pueden utilizar tambin combinaciones de colores, por ejemplo rojo negruzco, verde amarillento, se deben precisar adems la tonalidad y la transparencia, con trminos como claro, oscuro, plido, intenso, brillante, transparente, turbio, etc. No se deben usar colores que denoten interpretaciones, por ejemplo anmico, ictrico, ciantico.

g. Consistencia.- para determinar la consistencia se utilizan trminos como acuoso,

seroso, mucoso, espeso, duro, firme, blando, friable, esponjoso, elstico, pegajoso, arenoso, gelatinoso, granular, viscoso, crepitante.

h. Olor.- se utilizan trminos como amoniacal, ftido, cido, dulzn, medicamentoso.

i. Superficie de corte.- se describe el color, la consistencia y la posible salida de

lquidos que se pueden observar al ir haciendo los cortes del parnquima de los rganos, utilizando trminos como liso, irregular, ulcerado, erosionado, elevado, deprimido.

j. Contenido de cavidades y rganos tubulares.- primero se describen las

caractersticas del contenido: localizacin, cantidad, composicin, consistencia, color, olor, si coagula al contacto con el aire, si tiene burbujas y el tamao de las mismas, si tiene material en suspensin, etc. Posteriormente se describe la mucosa de los rganos tubulares y el endotelio de los vasos sanguneos.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:

MATERIALES: Estuche de diseccin Jabn REACTIVOS: Agua Bandeja de diseccin para especies menores Guantes desechables

Mascarilla

PROCEDIMIENTO:
Examen externo Inspeccionar el pelaje, las plantas y uas, y los orificios externos, efectuar las medidas pertinentes. Identificar, cuantificar y/o recoger parsitos externos. Determinar sexo y edad.

Examen interno

 Efectuar un corte longitudinal a travs de la piel, a lo largo de la mediana ventral del cuerpo desde la boca hasta el ano. Preparar la piel lateralmente y en la zona de la ingle cortar la piel perpendicularmente para poder retirarla. Abrir la cavidad abdominal con un bistur cortando encima de una pinza para evitar daos al tracto digestivo. Preparar la pared abdominal en un lateral a lo largo de la ltima costilla. Presencia de liquido, sangre u otro en la cavidad. Abrir el costillar de un lado a lo largo de la columna vertebral y el esternn. Inspeccionar los rganos en situ. Presencia de lquido o sangre en la cavidad. Retraer y separar esfago y traquea, corazn y pulmones hasta el diafragma. Efectuar una doble ligadura en el esfago y cortarlo. Extraer pulmones con corazn Extraer el bazo, y el resto del tracto digestivo cortando a siguiendo de la aorta. Extraer ambos riones y las glndulas adrenales. En la cabeza: Examinar los ganglios linfticos y tomar muestras. En cuanto a las vsceras es preferible trabajar por apartados, de lo mas limpio a lo mas contaminado, es decir por ltimo el tracto digestivo y empezando por el los sistemas respiratorio y cardiovascular. Examinar el pericardio y separar el corazn en la base de los grandes vasos. Retirar los cogulos, inspeccionar las vlvulas del corazn y pesar el mismo sin pericardio y cogulos. Examinar el pulmn y abrir siguiendo los bronquios. Guardar al menos material de tres localizaciones. Inspeccionar la trquea desde la faringe. Abrir el esfago. Separar el bazo, examinar, pesar y tomar muestras. Localizar ambas glndulas adrenales, pesar y guardarlas. Separar el hgado, localizar el ganglio heptico y filetear, examinar y cortar el hgado, y examinar la vescula biliar. Examinar el pncreas. Localizar los ganglios mesentricos examinar y tomar muestras. Examinar el sistema reproductivo (ovarios, tero). Extraer heces del recto para un coprolgico, y abrir al menos una parte de cada apartado del tracto digestivo. Abrir al menos dos articulaciones.

EXAMEN DE SISTEMAS Y RGANOS Estado fsico y de musculacin Relacin tamao/peso del animal (biometra). En mamferos: presencia y cantidad de grasa perirenal. Presencia de grasa coronaria (corazn). Desarrollo y consistencia de la musculatura.

Sistema esqueltico y musculatura Palpacin de huesos largos, crneo y columna vertebral Examinar piel y tejido subcutneo: Presencia de hematomas, perforaciones etc.

Examinar desarrollo, aspecto, consistencia y lesiones de la musculatura. Examinar las articulaciones: Cantidad de sinovia, aspecto del cartlago (y hueso)
Cavidades

Presencia de lquidos o masas (describir y tomar muestras).

rganos en general: Tamao (Peso, experiencia para la especie, bordes). Forma (Bordes, etc.). Superficie (Serosa): Lisa, brillante, y transparente o depsitos, adherencias, fibrina. Color. Consistencia.

Al corte, salida de lquido

Sistema cardiovascular

Pericardio: a) Superficie: (Lisa, transparente, brillante, fina) Presencia de adherencias, depsitos, engrosamiento. b) Contenido: Cantidad, consistencia, color .

Corazn: Tamao, desarrollo ventrculos, color musculatura, vlvulas, endocardio,

contenido: coagulado o no. Vasos sanguneos. Sistema respiratorio

Orificios nasales: Taponados/libres, secos/destilacin (tipo, color, cantidad).

 Conchas nasales: Forma, color, superficies, oclusiones.

Senos paranasales: Contenido.

Trquea: Color y aspecto superficie interior, contenido de lquido.

Pulmn: retraccin, color, consistencia, salida de lquido al corte.

Sistema digestivo

Orofaringe: Superficie de la mucosa (lisa, hmeda, brillante, color rosado) aspecto y

color.

Glndulas salivales: Tamao, aspecto, contenido.

Esfago: Superficie de la mucosa.

Estmago: Contenido, estado de la mucosa en las diferentes zonas. Intestino: Desviaciones, serosa, mucosa, contenido, parsitos (macroscpico), Hgado: Presencia/ausencia de vescula biliar, tamao y contenido de la misma. Tamao (peso), superficie (serosa), forma, color, consistencia; destilacin de lquido,
superficie (plana, cncava, convexa), color, consistencia al corte. Pncreas: Presencia, tamao, superficie, color, consistencia, corte. Sistema de hemopoiesis e inmune

Bazo: Tamao (peso), nmero (bazos adicionales), superficie (serosa), color,

consistencia, corte. Medula sea: Color, consistencia. Timo: Presencia, cantidad, color, consistencia. Sistema urogenital

Riones: Tamao, color, consistencia, corte. Urteres: Dimetro, contenido. Gnadas: Sexo, tamao, color, grado de desarrollo. Oviducto: Tamao (grado de desarrollo), serosa, adherencias, mucosa (aspecto,
color, contenido) y Conductos deferentes. Sistema endocrinolgico Tiroides Paratiroides Glndulas adrenales: Tamao, color.

Sistema nervioso Encfalo: Aspecto de las meninges, aspecto de cerebro, cerebelo etc.

Medula espinal: Integridad, aspecto.

Nervios perifricos.

GRAFICOS:
Dibuja lo observado en la necropsia.

RESULTADOS:
Reporta los resultados de la necropsia.

CONCLUSIONES Y /O RECOMENDACIONES:

BIBLIOGRAFA:
http://www.wcs.org/swhigh_tech_tools/wildlifehealthscience/fvp/168570/guidelinesan dpapers/Necropsymanualspanish/169480/169592 MORENO, B, et al. MANUAL DE NECROPSIAS PATOLOGA GENERAL. UNAM. Seccin de patologa.

PRCTICA N 24 TEMA: APLICACIN DE LA TCNICA DE ELISA

OBJETIVOS:

Conocer la tcnica de Elisa para el diagnstico serlogico de distintas enfermedades infecciosas. Diagnosticar la presencia de antgeno anticuerpo de una muestra de sangre bovina infectada con IBR mediante la tcnica de Elisa.

REVISIN DE LITERATURA:
LA TCNICA ELISA La tcnica de Elisa es un procedimiento de ensayo inmunoenzimtico cuyo nombre resulta de la asociacin de las iniciales de su denominacin inglesa (enzyme linked inmuno sorbent assay). Como todo ensayo inmunoenzimtico, la prueba recurre al empleo de inmungenos anticuerpos marcados con una enzima, para revelar el reactivo complementario a nivel de distintos fluidos biolgicos. Fue concebida independientemente en 1971 en Suecia y Holanda, siendo aplicada posteriormente a la revelacin y a la cuantificacin de los ms diversos tipos de sustancias presentes en lquidos orgnicos (antgenos, anticuerpos, hormonas, frmacos, etc.).

El rea de sus aplicaciones mdicas se ha expandido en forma sostenida, siendo utilizada como el primer sustituto de la tcnica de Radioinmunoensayo en la medicin de hormonas, inmunoglobulinas, antgenos y anticuerpos en infecciones bacterianas, micsicas, parasitarias o virsicas. De un modo general se procede a la fijacin de uno de los componentes de la reaccin inmunolgica (antgeno Ag o anticuerpo Ac) a un soporte slido, poniendo luego ese sistema en contacto con una fase fluida que contiene el reactivo complementario. El complejo inmunolgico formado es enfrentado luego a las molculas capaces de reconocer a su componente ms superficial, marcadas con una enzima (peroxidasa de rbano picante); agregndose posteriormente un sustrato cromognico de la enzima marcadora. La existencia de una reaccin inmunolgica se demuestra y se cuantifica midiendo espectrofotomtricamente la cantidad de producto enzimtico resultante. El procedimiento se efecta de dos formas principalmente: Mtodo indirecto: Tambin conocido como mtodo Sndwich (Anticuerpo-antgenoanticuerpo), se basa en la fijacin de un anticuerpo a la fase slida, el cual atrapa los antgenos homlogos en las muestras que posteriormente son identificados con un anticuerpo especfico marcado con una enzima. En estos casos la cantidad de antgeno es directamente proporcional a la cantidad de producto enzimtico formado. Mtodo competitivo: Se basa en la competencia que se establece entre un antgeno marcado enzimticamente y el mismo antgeno sin marcar (muestra objetivo) al ser colocados frente a una cantidad limitada del anticuerpo homlogo fijado a la fase slida. En estos casos la cantidad de antgeno es indirectamente proporcional a la cantidad de producto enzimtico formado. TIPOS DE TCNICAS ELISA:

Tcnicas cualitativas.- Son tcnicas Elisa que nos indican la ausencia

presencia de un antgeno o anticuerpo determinando. Los kits incluyen controles positivos y negativos para poder determinar esta presencia o ausencia de antgenos. Ejemplo: HIV, Hepatitis, etc.

Tcnicas cuantitativas.- son tcnicas Elisa que nos indican la cantidad de antgeno anticuerpo presente en la muestra. Ejemplo: Hormonas, Marcadores tumorales, etc.

Tcnicas semi-cuantitativa.- son tcnicas Elisa que nos dan un indicio de la cantidad de antgeno anticuerpo presente en la muestra con la utilizacin de un standard calibrador. Ejemplo: ANA, nDNA, etc.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:

Materiales:

Kit ELI-VET para el diagnstico de rinotraequeitis infecciosa bovina, el kit contiene: solucin reveladora (cromgeno 5), solucin de lavado (amortiguador de lavado diluido 1:10), conjugado, solucin sustrato (sustrato amortiguador 4), solucin interruptora en cada pozo (solucin interruptora 6).

Pipetas Papel absorbente

Equipo: Micropipeta Reactivos:

Suero sanguneo de bovino infectado con IBR (Rinotraqueitis Infecciosa Bovina)

PROCEDIMIENTO:
1. Abra la envoltura con la placa sensibilizada y tome el nmero de mdulos necesarios as como el armazn y cierre cuidadosamente el sobre. 2. Acomode los mdulos en el armazn, tomando en cuenta la presencia de salientes. 3. Distribuya las muestras diluidas y los sueros de referencia en la placa, 100 ml. por pozo. Cada muestra debe ser aplicada en un pozo sensibilizado con el virus (columnas impares) en los pozos sensibilizados con el antgeno control (columnas pares). Utilice una punta por cada muestra. 4. Incube la placa a una temperatura de 26C durante una hora. 5. Rpidamente voltee la placa sobre un vertedero para cosechar su contenido. Sujete el armazn firmemente de sus extremos largos para conservar las estructuras en su lugar.

6. Sumerja la placa en una solucin de lavado (amortiguador de lavado diluido 1:10).

Asegurndose que los pozos hayan sido enjuagados correctamente, evite hacer burbujas. Voltee la placa hacia abajo sobre el vertedero para que esta quede exenta de lquido. Repita esta operacin 5 veces. 7. Seque la placa sobre un papel absorbente. 8. Utilizando una pipeta, distribuya el conjugado previamente diluido (conjugado 7) en cada pozo y luego incube otra vez por una hora a 26C. 9. Una vez terminado, lave adecuadamente la placa como se sealo en los prrafos 6 y 7. 10. Prepare la solucin reveladora mediante la adicin de una gota de solucin TMB (cromgeno 5) a 1ml de solucin sustrato (sustrato amortiguador 4). La solucin preparada debe ser protegida de la luz, metales y agentes oxidantes. Utilice esta solucin tan pronto como sea posible porque tiene una estabilidad de corta duracin. Esta solucin debe ser incolora. 11. Rpidamente distribuya 100ml de solucin reveladora en cada pozo. 12. Observe la aparicin de un color azul lo cual ocurre normalmente en los pozos positivos despus de pocos minutos. Cuando el color sea lo bastante intenso, bloquee la reaccin inmediatamente con la adicin de 50ml de solucin interruptora en cada pozo (solucin interruptora 6)

GRAFICOS:
Dibuja lo observado en la placa de Elisa

RESULTADOS:
Reporta el resultado obtenido del anlisis de la muestra.

CONCLUSIONES Y /O RECOMENDACIONES:
CONCLUSIONES RECOMENDACIONES

BIBLIOGRAFA:

www.labgeminis.com/publicidad/la_tecnica_elisa.htm

LICEA, J. et al. MANUAL ILUSTRADO DE PRCTICAS EN EL LABORATORIO DE INMUNOLOGA VETERINARIA. UNAM. Seccin Microbiologa.