ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ

ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

«МАЙКОПСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ

УНИВЕРСИТЕТ»
МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
КАФЕДРА ФАРМАЦИИ

КУРСОВАЯ РАБОТА
ПО БИОТЕХНОЛОГИИ
по специальности 33.05.01 Фармация
на тему: «Биотехнология получения Пиобактериофага поливалентного»

Выполнил:
студент V курса, группы Ф-51
Якуб Д. А.
Руководитель:
доцент кафедры фармации, к.б.н. Дьякова И.Н.

Дата защиты______________
Оценка___________________
Подпись__________________

Майкоп, 2022
 Оглавление

Введение.....................................................................................................................
5
Глава 1. Бактериофаги: свойства, перспективы применения и производства.....
7
1.1. Бактериофаги. Историография, распространение в природе,
морфология, химический состав............................................................
7
1.2. Особенности пиобактериофага поливалентного: физико-
химические и антигенные свойства.......................................................
9
Глава 2. Биотехнология производства пиобактериофага поливалентного..........
11
2.1. Выделение штаммов бактериофага из объектов внешней среды ......
11
2.2. Питательная среда...................................................................................
12
2.3. Приготовление фильтратов....................................................................
14
2.4. Культивирование, очистка фаголизатов и определение литической
активности................................................................................................
15
2.5. Контроль производства...........................................................................
19
2.6. Стандартизация пиобактериофага поливалентного ............................
21
Глава 3. Применение в медицине.............................................................................
25
3.1. Применение пиобактериофага поливалентного...................................

2
 25
3.2. Препараты бактериофагов. Лекарственные формы.............................
25
3.3. Анализ рынка лекарственных препаратов (ЛП) пиобактериофага
поливалентного .......................................................................................
27
Глава 4. Качественный анализ гомеопатического лекарственного средства –
климаксан...................................................................................................................
31
4.1. Характеристика лекарственной формы (ЛФ).......................................
31
4.2. Описание гомеопатического препарата................................................
31
4.3. Испытания на подлинность....................................................................
33
Заключение.................................................................................................................
40
Список используемой литературы...........................................................................
42

3
 Введение

Актуальность темы. Лечение заболеваний инфекционной природы

является одной из центральных задач современной медицины и представляет
существенную проблему как с клинических, так и с эпидемиологических
позиций. К числу наиболее часто встречающихся заболеваний относятся
инфекции, вызванные условно патогенными микроорганизмами, в том числе
Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus, Streptococcus spp. Традиционными препаратами
этиотропной терапии гнойно-воспалительных заболеваний являются
антибиотики. Однако применение антибиотиков сопряжено не только с
гибелью патогенных агентов, поддерживающих инфекционный процесс, но и
с нарушением жизнедеятельности организма - поражение органов и
функциональных систем. Вопрос об успешной профилактике и терапии
гнойно-септических инфекций приобретает чрезвычайную актуальность в
условиях формирования полирезистентности микроорганизмов к
антибиотикам. В связи с этим интенсифицируются исследования по
совершенствованию и разработке альтернативных методов лечения, в том
числе и фаготерапии. Основными достоинствами препаратов бактериофагов
являются: высокая чувствительность к ним патогенной микрофлоры,
сочетаемость со всеми видами традиционной антибактериальной терапии,
отсутствие противопоказаний к применению.
Распространенными формами выпуска препаратов бактериофагов
являются жидкие лекарственные формы и таблетированные с
кислотоустойчивой оболочкой. Известны желудочно-резистентные
(кишечно-растворимые) таблетки бактериофагов без оболочки с пектиновой
защитой, пригодные только для стабильных видов монобактериофагов
кишечной группы (дизентерийный, брюшнотифозный и сальмонеллезный).
В условиях смешанных инфекций, вызванных условно патогенными
микроорганизмами, наиболее целесообразно и актуально изучение и
4
дальнейшее совершенствование биотехнологических процессов,
направленных на разработку лекарственных форм на основе поливалентных
комплексных бактериофагов
Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение
биотехнологии комплексного препарата Пиобактериофаг поливалентный.
Для реализации поставленной цели необходимо было решить
следующие задачи:
1. Изучить процесс культивирования и способ очистки жидкого
Пиобактериофага поливалентного;
2. Изучить состав и технологию изготовления Пиобактериофага
поливалентного;
3. Изучить стандартизацию препарата Пиобактериофаг
поливалентный;
4. Изучить анализ цен и производителей препарата
Пиобактериофага поливалентного;

5
 Глава 1. Бактериофаги: свойства, перспективы применения и
производства

1.1. Бактериофаги. Историография, распространение в природе,

морфология, химический состав
Историография.
В 1896 году Эрнест Ханкин (британский бактериолог) впервые
сообщил о наличии антибактериальной активности (против холерного
вибриона) в водах рек Ганг и Ямуна в Индии. Он предположил, что
неопознанное вещество (которое проходило через тонкие фарфоровые
фильтры и было термостойким) было ответственно за это явление и за
сдерживание распространения эпидемий холеры.
В 1898 году Гамалея (русский бактериолог) наблюдал подобное
явление во время работы с Bacillus subtilis. В то же время несколько других
исследователей также сообщили о подобном явлении. В 1915 году Фредерик
Уильям Творт (медицинский бактериолог из Англии) сообщил о подобном
явлении и выдвинул гипотезу, что это могло быть связано с присутствием
вируса. В 1910 году Феликс д'Эрель (франко-канадский микробиолог из
Института Пастера в Париже) впервые наблюдал феномен бактериофага,
изучая микробиологические средства борьбы с эпизоотией саранчи в
Мексике. В 1915 году произошла вспышка тяжелой геморрагической
дизентерии среди французских войск, дислоцированных в Париже.
Несколько солдат были госпитализированы, и д'Эрелю было поручено
провести расследование вспышки.
Д'Эрель проводил эксперименты и наблюдал появление небольших и
четких участков на агаровых культурах, которые он первоначально назвал
тачами, а позже бляшками. В 1917 году результаты д'Эреля были
представлены на заседании Академии наук.
Он почти не сомневался в природе этого явления. Он предположил, что
это было вызвано вирусом, который был способен паразитировать на
6
бактериях. Д'Эрель также предложил название "бактериофаг" (по-гречески
Бакерион означает бактерии, а Фагеин - есть).
В 1952 году два американских биолога, Нортон Зиндер и Джошуа
Ледерберг из Висконсинского университета, обнаружили, что фаг может
включать свои гены в бактериальную хромосому. Затем гены фага
передаются от одного поколения к другому. В 1980 году английский
биохимик Фредерик Сэнгер был удостоен Нобелевской премии за
определение нуклеотидной последовательности в ДНК с помощью
бактериофагов [11,13].
Морфология. Большинство фагов имеют форму головастика с
шестиугольной головой и цилиндрическим хвостом. Другие фаги выглядят
кубическими, нитевидными или плеоморфными. Крупные фаги обычно
состоят из головы и хвоста. Содержимое головки окружено мембраной
(капсидом) толщиной около 35 Å. Капсид состоит примерно из 2000
капсомеров (белков), и каждая белковая субъединица имеет молекулярную
массу около 80 000. Головка заключает в себе линейную двухцепочечную
ДНК, которая содержит более 75 генов. ДНК остается сильно свернутой [19].
Химический состав. Физические и химические исследования
установили, что Т–четные фаги полностью состоят из ДНК и белка. ДНК
составляет 40% по весу, а белок остается на 60%. ДНК находится внутри
головы. Головная мембрана, оболочка и волокна хвоста состоят из различных
белков. В бактериофаге MS2 генетическим материалом является РНК вместо
ДНК.
Херши и Чейз (1952) пометили белок радиоактивной серой (35S) и
ДНК радиоактивным фосфором (32P) в фаге Т2 и установили, что
генетическим материалом вируса является его ДНК, а не белок. Это
согласуется с открытием Эйвери, Маклеода и Маккарти бактерии Diplococcus
pneumoniae. [9, 21].

1.2. Особенности Пиобактериофага поливалентного: физико-

7
химические и антигенные свойства
Бактериофаг относится к группе высокодисперсных коллоидов и обладает
свойствами амфотерных белков, способных в растворах, более щелочных,
чем их изоэлектрическая точка, диссоциировать на катионы и на более
кислые анионы [14, 19].
Благодаря наличию белковых мембран частицы фага являются антигенами,
которые, вызывая образование антител, столь же специфичны, как и
антигены бактерий [5, 19]. Каждый штамм фага характеризуется своей
специфической антигенной структурой, поэтому фаги могут принадлежать к
разным серологическим группам, даже если они лизируют один и тот же
бактериальный штамм. Однако перекрестные серологические реакции всегда
происходят между фагами.
Отношения между молекулами антител и частицами фага сложны. После
адсорбции фагов бактериями их размножение не может быть остановлено
нейтрализующими антителами. Обработка частиц фага антисывороткой не
полностью устраняет их способность адсорбироваться на бактериях. Многие
виды фагов сохраняют по крайней мере часть своей способности
адсорбироваться бактериями. Твердо установлено, что серологического
родства между частицами фага и бактериями не существует. Антифаговые
антитела не вступают в реакцию с бактериями, и, наоборот, антитела,
вызванные введением бактериальных антигенов в кровь животных, не
нейтрализуют частицы фага. Скорость образования антител зависит от пути
введения фага [11].

Вывод по главе
Был проведен анализ данных литературы по строению, химическому
составу бактериофагов, в том числе исследуемого препарата
Пиобактериофага поливалентного, были изучены история происхождения
фага, физико- химические и антигенные свойства.

8
 Глава 2. Биотехнология производства пиобактериофага
поливалентного

2.1. Выделение штаммов бактериофага из объектов внешней

среды
Отбор образцов окружающей среды. Для выделения бактериофагов
Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Klebsiella, Ε. coli, Pseudomonas
aeruginosas, входящих в состав Пиобактериофага поливалентного, отбирают
5 образцов почвы и 5 образцов воды. Отбор образцов почвы и воды проводят
в стерильную посуду объёмом 500 мл, отбор проб воды ведут на глубине 15-
20 см, отбор проб почвы осуществляют с поверхностного слоя глубиной
до 10 см. Образцы транспортируют и хранят при температуре 4...8°С в
непрозрачной и защищённой от прямых солнечных лучей упаковке.
Штаммы бактерий. Для выделения, пассажа бактериофага и описания
его свойств используют клинические штаммы Staphylococcus, Streptococcus,
Proteus, Klebsiella, Ε. coli.. Данные штаммы обладают лекарственной
устойчивостью к пенициллинам, фторхиналонам I-III поколения,
триметоприму. Для изучения специфичности выделенных бактериофагов
используют Ps. aeruginosa 153 – штамм, выделенный с поверхности
испорченных мясных продуктов и Bacillus subtilis – стандартный образец
сенной палочки. Технологическая схема производства таблеток
Пиобактериофага поливалентного представлена на рис. 1.

9
 Рис. 1. – Технологическая схема производства Пиобактериофага
поливалентного

2.2. Питательная среда

Используются стандартные питательные среды. В зависимости от вида
бактерии, выбирают питательные среды, на которых исследуемый
микроорганизм через минимальное для данного вида время инкубации при

10
оптимальной температуре дает хороший, видимый глазом рост. Питательная
среда готовится из сухой среды промышленного производства в
соответствии с инструкцией изготовителя. После автоклавирования
питательную среду разливают в стерильные чашки Петри любого диаметра
(60 – 90 - 100 мм и др.), в зависимости от объема исследования. Среда
разливается в чашки слоем не более 4 мм. Чашки оставляют при комнатной
температуре для застывания и подсушивания для того, чтобы хорошо
впитывался фаголизат и испарился конденсат. Неиспользованные чашки с
агаром хранят в условиях холодильника при +4 – +8°С. Допускается
использование чашек с готовой питательной средой, расфасованных в чашки
производителем.
Для культивирования бактерий и пассажей бактериофагов, входящих
в состав Пиобактериофага поливалентного , используют мясопептонный
бульон (МПБ) (Nutrient Broth, «Himedia», India). Для хранения бактерий,
выделения бактериофагов, определения титра по Грациа и описания
морфологии бляшкообразующих единиц (БОЕ) используют 2% питательный
агар (МПА) (Nutrient Agar «Himedia», India). Для фильтрации отобранных
образцов и фаголизатов используют бумажный фильтр «Красная лента» и
мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм Agilent Captiva (Agilent
Technologies, USA).
Получение фильтратов почвенных образцов. 50 г образца почвы
заливают 500 мл стерильного фосфатно-солевого буфера pH 7,4 (ФСБ), далее
комок почвы тщательно измельчают до получения как можно более
однородной суспензии и ставят на качалку на 6 часов. Через 6 часов
суспензию почвы фильтруют через бумажный фильтр «Красная лента»,
затем, для инактивации патогенных микроорганизмов в полученный
фильтрат добавляют хлороформ до концентрации 0,1% и выдерживают в
течении 24 часов при температуре 4...8° С. Далее образцы фильтруют через
бумажный фильтр и через бактериальный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Образцы хранят стерильно в тёмном месте при темпера-туре 4...8°С [9].
11
 2.3. Приготовление фильтратов
Получение фильтратов почвенных образцов. 50 г образца почвы
заливают 500 мл стерильного фосфатно-солевого буфера pH 7,4 (ФСБ),
далее комок почвы тщательно измельчают до получения как можно
более однородной суспензии и ставят на качалку на 6 часов. Через 6 часов
суспензию почвы фильтруют через бумажный фильтр «Красная лента»,
затем, для инактивации патогенных микроорганизмов в полученный
фильтрат добавляют хлороформ до концентрации 0,1% и выдерживают в
течении 24 часов при температуре 4...8° С. Далее образцы фильтруют через
бумажный фильтр и через бактериальный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Образцы хранят стерильно в тёмном месте при температуре 4...8°С .
Получение фильтратов водных образцов. Для инактивации
патогенных микроорганизмов в водные образцы добавляют хлороформ до
концентрации 0,1% и выдерживают в течении 24 ча-сов при температуре
4...8° С. Водный образец фильтруют через бумажный фильтр и через
бактериальный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Образцы хранят
стерильно в тёмном месте при температуре 4...8°С [17]. ДНК из
полученных фильтратов выделяют с помощью набора для экстракции
PureLinkViralDNA/RNAMiniKit («Invitrogen», USA) по протоколу фирмы-
производителя. Концентрацию выделенной ДНК определяют при помощи
набора Qubit dsDNA HS (High Sensitivity) согласно инструкции, для
флюориметра Qubit 2,0. Анализ качества геномных библиотек проводят на
приборе Agilent 2100, при использовании прилагаемых чипов согласно
инструкции производителя [18]. Метагеномный анализ отобранных образцов
проводят методом множественного параллельного секвенирования при
использовании прибора Illumina MiSeq [19]. Контроль качества
выполняют с помощью программы Fast QC. Затем полученные данные
обработывают в Trimmomatic v. 0.36, последовательности короче 50
нуклеотидов ислючаются из анализа; адаптеры удаляются. После
12
удаления некачественных считываний и обрезки адаптеров
последовательности анализируют программой Kaiju с использованием базы
данных не избыточных белков: бактерий, архей, вирусов, грибов и
микробных эукариот (NCBI BLAST nr + euk) с параметрами по умолчанию
[14].

2.4. Культивирование, очистка фаголизатов и определение

литической активности
Культивирование используемых штаммов бактерий проводят в
реакторах (объем реакторов – от 250 до 1000 л) в течении 24 часов при 37°С.
Проверяют бактериальные культуры на наличие лизогенных бактериофагов.
Чашки Петри с подготовленным 2% питательным агаром засевают
сплошным газоном 24 часовой бактериальной культурой. Через 18 часов
инкубации при 37°С фиксируют рост сплошного газона бактерий с
отсутствием каких-либо зон лизиса, после чего открытые чашки Петри
облучают ультрафиолетом в течении 10 минут на расстоянии 10 см.
Облучённые бактерии смывают 10 мл питательного бульона и
культивировали 2 часа при 37°С, затем в бактериальную суспензию
добавляют 500 мкл хлороформа (50 мкл на 1 мл суспензии), встряхивают,
после чего откручивают 10 минут при 6000 об/мин [20]. Наличие
бактериофагов в полученном надосадке определяют методом Отто.
Определение наличия бактериофагов методом Отто.
Расплавленный 2 % питательный агар разливают по стерильным чашкам
Петри, охлаждают, подсушивают в термостате 10-15 мин. Сплошным
газоном засевают на чашки 24 ч культуру бактерий. Наносят каплю
образца ближе к одной из сторон чашки, затем чашку наклоняют и дают
капле стечь до противоположного края чашки. Чашки инкубируют при 37°С
в течение 12 ч после чего фиксируют результат. Если в образце содержался
бактериофаг, то по пути стекания капли образца формируется зона лизиса
[8].
13
 Обогащение бактериофагами фильтратов, полученных от образцов
окружающей среды. К 45 мкл подготовленного фильтрата добавляют 5 мл
10-кратного МПБ, 5 мл суспензии индикаторных бактерий находящихся в
лаг-фазе роста и 100 мкл MgSO4. Для обеспечения инфицированности
бактерий вирусами и репродукции новых дочерних вирусных частиц смесь
культивируют в течении 18 – 24 ч при 37°С с аэрацией. Далее полученный
фаголизат центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об/мин. Супернатант
отфильтровывают через бактериальные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм.
Очищенные фаголизаты, хранят в стерильных условиях при 4...8°С [15].
Наличие фага в фильтрате определяют методом Отто [12]. Освобождение
фаголизитов от продуктов жизнедеятельности бактерий, эндо- и
экзотоксинов, продуктов фаголизиса бактериальных клеток должно быть
обеспечено дополнительными методами очистки (ультрафильтрацией,
афинной хроматографией и т.д.). После завершения процесса фаголизиса
бактериальной взвеси осуществляется стерилизующая фильтрация
фаголизатов, затем очищение от бактериальных метаболитов и токсинов,
компонентов питательной среды, далее фаголизаты подвергаются
концентрированию, полученные концентраты стерилизуются.
После концентрирования из фаголизатов готовят:
 жидкие препараты, которые доводятся до финального титра
буферными растворами pH 6,0 — 8,0, стерилизуют и разливают в стерильные
флаконы, укупориваются герметично и стерильно;
 лиофилизированную биомассу, используемую для получения
таблеток, суппозиториев, мазей, линиментов и др.
Выделение бактериофагов на твёрдой питательной среде.
Очищенный от бактерий фаголизат 10-кратно титруют до получения девяти
разведений. Каждое разведение объёмом 1 мл смешивали с 14 мл 2%
питательного агара и добавляли 1 мл 24 часовой культуры индикаторных
бактерий. Полученную смесь заливают в чашки Петри и инкубируют в
течении 18 часов при 37°С. В качестве контроля используют ту же смесь, но
14
вместо водного образца добавляют 1 мл стерильного фосфатного буфера. По
истечению срока инкубации визуально фиксируют формирование отдельных
БОЕ на сплошном газоне бактериальной культуры.
Выделение чистых линий бактериофагов. После обнаружения БОЕ
на сплошном газоне бактериальной культуры выбирают отдельно
стоящую зону лизиса при максимальном разведении фаголизата, вырезают её
стерильным шпателем или микробиологической петлёй и помещают в
стерильную пробирку. В ту же пробирку добавляли 5 мл стерильного
питательного бульона, и инкубируют в шейкер-термостате при 37°С и 100
об/мин. Через 2 часа инкубации весь питательный бульон из пробирки, в
стерильных условиях пропускают через мембранный фильтр с диаметром
пор 0,45 мкм и добавляют 100 мкл 24 часовой культуры индикаторных
бактерий. Полученную смесь культивируют 18 часов при 37°С, после чего
центрифугируют 10 минут при 6000 об/мин и пропускают через
мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Далее из полученной
фаголизата отбирают 100 мкл и проводят девять 10-кратных разведений в 900
мкл стерильного ФСБ. Каждое разведение смешивают с 14 мл 2%
питательного агара и 1 мл 24 ча-совой культуры индикаторных бактерий,
заливают в чашки Петри и культивируют 18 часов при 37°С. После
культивирования фиксируют БОЕ при максимальном разведении,
вырезают отдельно стоящую зону лизиса и повторно проводят посев фага по
вышеописанной методике. Для получения чистой линии бактериофага
последовательно проводят три пассажа каждый раз вырезая отдельно
стоящую зону лизиса при максимальном разведении.
Накопительный пассаж бактериофагов. В стерильные 50-ти мл
пробирки разливают по 40 мл стерильного МПБ, далее добавляют 500 мкл
фаголизата пассируемого бактериофага и 5 мл суточной культуры
бактерий-хозяев. Культивирование проводят в течении 24 часа при 37°С.
После культивирования, полученные фаголизаты последовательно
очищают центрифугированием в течении 30 минут при 6000 об/мин и
15
фильтрацией через мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм.
Фаголизаты хранят в стерильных условиях при температуре 4...8° С [10].
Определение литической активности полученных фаголизатов
проводят методом Аппельмана , путем последовательного приготовления
десятичных разведений препарата от 10"1 до 10"8. Исходным разведением
является 1 мл образца препарата в 10 мл бульона, взятого для титрования, с
обязательной сменой пипеток при каждом разведении. Для контроля
используют 10 мл бульона без фага. Во все пробирки вносят по 0,03 мл
взвеси суточной культуры, содержащей 10 9 микробных клеток в 1 мл.
Результат учитывают через 22±2 ч выдерживания проб при температуре
36±1°С [15].
Наличие зон лизиса свидетельствует о чувствительности штамма к
бактериофагу. Активностью бактериофага считают величину,
соответствующую последнему разведению, в котором рост культуры
визуально не наблюдается. Активностью бактериофага обозначают
отрицательную степенью десяти, где степень указывает разведение
бактериофага. При определении специфической активности по Аппельману
результаты титрования выражают в титрах (отрицательная степень десяти,
где степень указывает разведение бактериофага) [5, 13].

2.5. Контроль производства

В процессе производства бактериофагов на разных этапах получают
промежуточные продукты, которые должны соответствовать определенному
уровню качества.
При подготовке производственных штаммов бактерий контроль
посевных культур бактериальных штаммов-продуцентов включает в себя
следующие показатели:
 чистота;
 типичность биологических свойств;
 отсутствие легко индуцируемых профагов.
16
 При подготовке маточных бактериофагов контроль маточных
бактериофагов включает в себя следующие показатели:
 содержание фаговых частиц в 1 мл, определяемое методом
агаровых слоев по Грациа;
 специфическая активность, определяемая титрованием в жидкой
питательной среде по методу Аппельмана на посевных бактериальных
штаммах;
 стабильность лизиса (сохранность полученных результатов
лизиса по методу Аппельмана) в течение 48 часов инкубации при
температуре 37 ± 1 °C. Температурный режим и время инкубации зависят от
специфических особенностей бактерий и их фагов;
 стерильность.
Стерильность проверяют высевом на питательные среды,
культивированием в термостате при температуре 37 °С для выявления
бактериальной микрофлоры и при 24 °С - для выявления грибковой флоры.
Препарат считается годным, если через восемь суток в средах не
обнаруживается рост микроорганизмов. При выявлении роста бактерий или
грибов в одной из пробирок проводят повторный контроль из удвоенного
количества образцов. При повторном приросте сред препарат бракуют.
Активность и специфичность бактериофагов устанавливают на жидких
и твердых питательных средах титрованием с соответствующим видом
бактерий. Если результаты проверки не соответствуют требованиям
инструкции по изготовлению и контролю, такой препарат не подлежит
выпуску.
Безвредность препарата проверяют путем введения лабораторным
животным, например, брюшнотифозный и дизентерийный бактериофаги
вводят подкожно трем мышам по 1 мл, или кролику внутривенно 5 мл.
Наблюдение за животными ведется в течение трех-четырех суток; если
препарат безвреден, животные остаются здоровыми и бодрыми.
По мере завершения очистки фаголизатов, концентрирования,
17
стерилизующей фильтрации проводится определение показателей pH,
стерильности, специфической активности по методу Аппельмана.
Для получения жидкого препарата после финальной стадии
бактериофаг разливают по флаконам и укупоривают.
Для получения других лекарственных форм препаратов бактериофагов:
 в концентрированный бактериофаг добавляют стабилизаторы и
лиофилизируют. Сухую массу бактериофага контролируют в тестах на
специфическую активность и микробиологическую чистоту;
 после добавления наполнителей осуществляют технологические
процессы, соответствующие заданной лекарственной форме (таблетки,
капсулы, суппозитории, линименты, мази);
 готовый продукт контролируют по всем показателям,
соответствующим лекарственной форме.
К специфическим методам исследования, используемым для
характеристики лечебно-профилактических бактериофагов, относятся
методы Аппельмана и Грациа [1, 15].

2.6. Стандартизация Пиобактериофага поливалентного

Согласно ОФС.1.7.1.0002.15 Бактериофаги лечебно-
профилактические, стандартизируют препарат после проведения
необходимых испытаний (рис. 2), предусмотренных для лечебно-
профилактических бактериофагов в соответствующей лекарственной форме.

Рис. 2. – Технологическая стандартизация Пиобактериофага

18
 поливалентного

Испытания
Проводят необходимые испытания, предусмотренные для лечебно-
профилактических бактериофагов в соответствующей лекарственной форме.
Описание. Приводится описание физических свойств соответствующей
лекарственной формы лекарственного средства. Испытание проводят
визуально.
Подлинность препарата подтверждается его специфической
активностью.
рН (для растворов) – от 6,6 до 7,8. Испытание проводят
потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».
Извлекаемый объем (для растворов) – не должен быть менее
номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый
объем для лекарственных форм для парентерального применения».
Средняя масса и отклонения от средней массы (для таблеток).
Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые
отклонения от средней массы в соответствии с ОФС «Однородность массы
дозированных лекарственных форм».
Время распадаемости (для таблеток) не должно превышать 30 мин,
если в фармакопейной статье на определенный фаговый препарат нет других
указаний. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Распадаемость
таблеток и капсул». Бактериофаги, выпускаемые в виде
кишечнорастворимых таблеток, не должны распадаться в течение 1 ч в 0,1 М
растворе хлористоводородной кислоты и после промывания водой должны
распадаться в растворе натрия гидрокарбоната (рН от 7,5 до 8,0) в течение 30
мин.
Потеря в массе при высушивании (для таблеток) должна быть не более
4,0 %, если нет других указаний в фармакопейной статье. Определение
проводят в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании» или
19
ОФС «Определение воды».
Стерильность (для растворов). Препарат должен быть стерильным
(категория 5БII согласно ОФС «Микробиологическая чистота»). Испытание
стерильности проводят методом прямого посева или мембранной
фильтрации в соответствии с ОФС «Стерильность».
Микробиологическая чистота (для таблеток) должна соответствовать
категории 5.2Б согласно ОФС «Микробиологическая чистота»:
 общее число непатогенных аэробных бактерий
 единице препарата (1 г);
 отсутствие дрожжевых и плесневых грибов в единице препарата
(1 г);
 отсутствие энтеробактерий в единице препарата (1 г);
 отсутствие Pseudomonas aeruginosa в единице препарата (1 г);
 отсутствие Staphylococcus aureus в единице препарата (1 г).
Испытание проводят в соответствии с требованиями ОФС
«Микробиологическая чистота».
Аномальная токсичность. Введение мышам подкожно 1 мл препарата
бактериофага не должно вызывать гибель животных. Определение проводят
в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Пробоподготовку
препаратов указывают в фармакопейной статье на препарат.
Специфическая активность. Активность бактериофага обозначают
отрицательной степенью десяти, где степень указывает последнее
разведение бактериофага, в котором рост контрольных штаммов бактерий
визуально не наблюдается. Нормативные требования, в том числе количество
используемых контрольных штаммов (не менее 10 штаммов для
монопрепаратов), указывают в фармакопейной статье на препарат.
Определение проводят титрованием в жидкой питательной среде по методу
Аппельмана. Методику и подготовку проб указывают в фармакопейной
статье на конкретный фаговый препарат.

20
 Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Иммунобиологические
лекарственные препараты». В маркировке лекарственной формы «раствор»
должна быть предусмотрена предупредительная надпись «При помутнении
не применять».
Транспортирование. При температуре от 2 до 8 °С, допускается при
температуре от 9 до 25 °С в пределах 1 мес.
Хранение. В сухом, защищенном от света и недоступном для детей
месте, при температуре от 2 до 8 °С [1].

Вывод по главе
В данной главе были изучены способы получения пиобактериофага
поливалентного; продуценты и питательные среды, используемые при
производстве данного комплексного бактериофага, а также была рассмотрена
его технологическая схема производства.
Следовательно, есть преимущества и недостатки данного
биотехнологического метода. Поэтому необходимо изучать и
корректировать производственный способ получения пиобактериофага
поливалентного. Искать более продуктивные штаммы, совершенствовать
методы очистки.

21
 Глава 3. Применение в медицине

Как было раннее подмечено, пиобактериофаг поливалентный

применяется при лечении и профилактики различных форм гнойно-
воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями
Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella
pneumoniae, Escherichia coli.

3.1. Применение пиобактериофага поливалентного

Пиобактериофаг поливалентный очищенный высокоэффективен (88,2 –
100%) применяется при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта
(гастроэнтероколит, холецистит, панкреатит, дисбактериоз кишечника);
заболеваний новорожденных и детей раннего возраста (гастроэнтероколит,
дисбактериоз кишечника, омфалит, пемфигус, пиодермия, септицемия и
септикопиемия различной локализации); хирургических инфекций (раны,
гнойные поражения кожи, ожоги, перитонит, плеврит, мастит, остеомиелит,
абсцесс); урогенитальных инфекций (цистит, пиелонефрит, уретрит,
простатит, эндометрит, вульвит, бартолинит, кольпит, сальпингоофорит);
гнойно-воспалительных заболеваний уха, горла, носа, пазух носа, ротовой
полости, глотки, гортани, бронхов, легких и плевры (отит, ангина, фарингит,
ларингит, стоматит, пародонтит, гайморит, фронтит, бронхит, пневмония,
плеврит); посттравматического конъюнктивита, кератоконъюнктивита,
гнойной язвы роговицы и иридоциклита а также при профилактике
внутрибольничных инфекций [13-20].

3.2. Препараты бактериофагов. Лекарственные формы

В настоящее время предприятиями по производству бактерийных
и вирусных предприятий выпускаются препараты бактериофагов против
основных представителей патогенной и условно-патогенной (гнойно-
септической) флоры. Это дизентерийный, сальмонеллезный,
22
брюшнотифозный, клебсиеллезный, колифаг, энтеробактер, цитробактер,
псевдомонадный, протейный, стафилококковый, стрептококковый и др .
Получили широкое применение бактериофаги в различных комбинациях:
коли-протейный, интестифаг, пиофаг, в которые включены различные виды
вирусов. По спектру действия н а бактерии фаги подразделяются на
поливалентные, лизирующие родственные виды бактерий (сальмонеллезный
бактериофаг) и монофаги, лизирующие бактерии только одного вида
(брюшнотифозный фаг Vi-I), а также типоспецифические фаги, которые
действуют избирательно на отдельные варианты бактерий внутри вида. С
помощью таких фагов производится наиболее тонкая дифференциация
бактерий внутри вида с разделением их на фаговарианты. Например, с
помощью набора фагов Vi-II возбудитель брюшного тифа делится более чем
на 100 фаговариантов. Поскольку, чувствительность бактерий к фагу
является относительно стабильным признаком, связанным с наличием
соответствующих рецепторов, фаготипирование имеет важное
диагностическое и эпидемическое значение [10]. Жидкий бактериофаг в
аэрозольной упаковке и перевязочный материал представлены в единичном
виде. Наименьший ассортимент наблюдаем у таблеток без оболочки
(бактериофаги кишечной группы), и лекарственных пленок. На настоящий
момент имеются данные о разработанных лекарственных пленках с
бактериофагами на основе желатина и их клиническом применении [60], но
нет данных о сроках годности (желатин подвержен микробной
контаминации) и технологических свойствах разработанных препаратов.
Большинство же бактериофагов производят в жидком виде во флаконах, или
ампулах [5-10, 18]. Жидкая лекарственная форма имеет ряд недостатков,
обусловленных низкой стабильностью препарата: при пероральном
применении происходит инактивация бактериофагов желудочным соком.
Немаловажным аспектом является низкая себестоимость производства
таблетированных препаратов бактериофагов. Экономический эффект от
внедрения- в производство таблетированных бактериофагов очевиден (резкое
23
сокращение использования стеклянных флаконов, увеличение сроков
годности, уменьшение объемов при транспортировке и хранении препарата).
Из всех лекарственных форм бактериофагов таблетки наиболее
универсальны по применению (рассасывание, проглатывание или местное
нанесение измельченной массы), обладают более высокой биодоступностью
в сравнении с другими лекарственными формами [14]. Таблетированные
формы представлены растворимыми в кишечнике и имеют, как правило,
кислотоустойчивую оболочку. Это дизентерийный, брюшнотифозный,
сальмонеллезный, колипротейный, стафилококковый, интестифаг,
пиобактериофаг и секстафаг [15,19]. Пиобактериофаг поливалентный
выпускается в жидком виде (прозрачная жидкость коричневатого цвета), в
таблетках серого цвета, покрытых оболочкой.

3.3. Анализ рынка лекарственных препаратов (ЛП)

пиобактериофага поливалентного
Лекарственные формы ЛП пиобактериофага поливалентного:
1. Таблетки.
Содержат низкую концентрацию активных компонентов, поэтому их
нужно пить в большем количестве.
He должны распадаться в течение 1 ч в растворе кислоты
хлористоводородной (0,1 моль/ л) при (37±2) °С и должны распадаться после
промывания водой в 1,5% растворе натрия гидрокарбоната в течение не
более 1 ч.
2. Раствор.
Содержит фильтрат фаголизатов бактерий Staphylococcus,
Streptococcus, Proteus (P. vulgaris, P. mirabilis), Pseudomonas aeruginosa,
энтеропатогенных Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae.
При использовании малых доз (2-8 капель) препарат необходимо
отбирать стерильным шприцем в объеме 0,5 - 1 мл.
24
 Препарат из вскрытого флакона при соблюдении условий хранения,
вышеперечисленных правил и отсутствии помутнения может быть
использован в течение всего срока годности [16].
Таблица 1.
Сравнительная характеристика ЛП пиобактериофага поливалентного

Название ЛП Лекарственная Упаковка ЛП Производитель Цена,

форма руб

Пиобактериофаг Таблетки, ФГУП «НПО 1199

поливалентный покрытые «Микроген»
оболочкой, Россия
179 мг.

Пиобактериофаг Раствор для ФГУП «НПО 837

поливалентный приема «Микроген»
(Секстафаг) внутрь, Россия
местного и
наружного
применения,
20мл 4
ампулы

Также на фармацевтическом рынке имеется довольно много ЛП,

которыми можно заменить пиобактериофаг поливалентный. Лучшими
аналогами являются:
1. Бактериофаг стафилококковый 20мл 4 шт. раствор для приема
внутрь микроген; применяется для лечения и профилактики гнойных
инфекций кожи, слизистых, висцеральных органов, вызванных
стафилококковыми бактериями, а также при дисбактериозах:
25
 2. Пиобактериофаг комплексный 100мл раствор для приема внутрь
и наружного применения; препарат вызывает специфический лизис бактерий
Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, энтеропатогенных Escherichia
coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella
pneumoniae, Klebsiella oxytoca.
3. Бактериофаг колипротейный 100мл раствор для приема внутрь
микроген; препарат используют для приема внутрь (через рот), ректального
введения, аппликаций, орошений, введения в полости ран, вагины, матки,
носа, пазух носа и дренированные полости.
4. Бактериофаг интести 20мл 4 шт. раствор для приема внутрь и
ректального введения микроген; представляет собой смесь стерильных
фильтратов фаголизатов Shigella flexneri 1, 2, 3, 4, 6 сероваров, Shigella
sonnei, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Salmonella typhimurium,
Salmonella infantis, Salmonella choleraesuis, Salmonella oranienburg, Salmonella
enteritidis, энтеропатогенной Escherichia coli различных серогрупп, наиболее
значимых в этиологии энтеральных заболеваний, Proteus vulgaris, Proteus
mirabilis, Enterococcus, Staphylococcus, Pseudomonas aeruginosa [7-8].

Выводы по главе
В результате проведенного анализа был рассмотрен ассортимент
препаратов и их применение, лекарственные формы; было выяснено, что ЛП
являются доступными для пациентов, в экономическом плане препараты не
дешевые, цена варьрует от 800-1200 рублей; принимаются внутрь и местно.
Производитель у обеих лекарственных форм пиобактериофага
поливалентного один.

26
27
 Глава 4. Качественный анализ гомеопатического лекарственного
средства - климаксан.

4.1. Характеристика лекарственной формы (ЛФ)

В соответствии с ГФ РФ XIV издания таблетки – твердая дозированная
лекарственная форма, чаще всего по- лучаемая прессованием порошков или
гранул, содержащих одно или более действующих веществ с добавлением
или без вспомогательных веществ.
Таблетки обычно представляют собой прямые круглые цилиндры с
плоской или двояковыпуклой верхней и нижней поверхностью, цельными
краями. Таблетки могут иметь и иную форму, например, овальную, много-
угольную и др. Возможно наличие фаски.
Наличие оболочки, скорость и характер высвобождения действующего
вещества, способ получения, способ применения таблеток и путь введения
определяют классификационное деление таблеток на группы.
Различают таблетки без оболочки (таблетки) и таблетки, покрытые
оболочкой [3].

4.2. Описание гомеопатического препарата

Климаксан - натуральный препарат, созданный специально для
устранения расстройств, связанных с климаксом. Препарат помогает
уменьшить выраженность основных симптомов климакса.
Активными веществами данного препарата являются экстракты корней
сангвинарии канадской (Sanguinariacanadensis) C200 и корневища с корнями
цимицифугирацемозы (Cimicifugaracemosa).
Лекарственная форма – таблетки гомеопатические, белого или почти
белого цвета, плоскоцилиндрической формы, с фаской.

28
 Рис.1. - Вторичная упаковка Рис.2. - Первичная упаковка

Активные компоненты:
• Cimicifugaracemosa- C200;
• Sanguinariacanadensis- C200.
Вспомогательные компоненты:
• лактозы моногидрат - 0.0024 г;
• целлюлоза микрокристаллическая - 0.0024 г.
Показания к применению
В качестве симптоматического средства в терапии проявлений
климактерического синдрома (раздражительность, эмоциональная
лабильность, нарушения сна, головная боль, головокружение, сердцебиение,
потливость, «приливы»).
Способ применения и дозы
На один прием – 1 таблетку (держать во рту до полного растворения –
не во время приема пищи), принимать 2 раза в день, утром и вечером. В
зависимости от тяжести симптомов возможно увеличение приема препарата
до 3-4 раз в день. Рекомендуемая длительность применения препарата
составляет 6 месяцев. Возможно проведение повторных курсов лечения по
рекомендации врача.
Побочное действие
Возможны реакции повышенной индивидуальной чувствительности к
компонентам препарата.

29
 Форма выпуска
Таблетки гомеопатические. По 20 таблеток в контурной ячейковой
упаковке из пленки поливинилхлоридной и фольги алюминиевой. По 1 или 2
контурных ячейковых упаковки вместе с инструкцией по медицинскому
применению помещают в пачку из картона.
Условия хранения
В сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 25 °С.
Хранить в недоступном для детей месте.
Срок годности
3 года. Не применять по истечении срока годности [22].

4.3. Испытания на подлинность

В соответствии с ОФС «Таблетки» были проведены следующие
испытания:
- Описание;
- Количество таблеток в 1г;
- Распадаемость;
- Потеря в массе при высушивании.
А так же качественный анализ на алкалоиды.
1. Описание
Таблетки белого цвета, плоскоцилиндрической формы, с фаской. (20
шт. - упаковки ячейковые контурные - пачки картонные).
По 20 таблеток в контурной ячейковой упаковке из пленки
поливинилхлоридной и фольги алюминиевой (рис. 2).
По 1 или 2 контурных ячейковых упаковки вместе с инструкцией по
медицинскому применению помещают в пачку из картона (рис. 1).
2. Количество таблеток в 1г

30
 В навеске таблеток, взвешенной с точностью до 1г, подсчитали
количество таблеток. В итоге, масса одной таблетки составила 0,238 г (рис.3);
масса 4 таблеток: 0,968 г (рис. 4).

Рис. 3. - Масса 1 таблетки Рис. 4. - Масса 4 таблеток

3. Распадаемость
4 таблетки (1г) поместили в коническую колбу вместимостью 100 мл,
прибавили 50 мл воды очищенной, имеющей температуру 37 °С. Колбу
медленно покачивали 1-2 раза в секунду. Таблетки полностью распались в
течение 3.52 минут (рис. 5).

Рис. 5. - Колба с распавшимися таблетками

4. Потеря в массе при высушивании

31
 Методика: Точную навеску испытуемого вещества, указанную в
фармакопейной статье или нормативной документации, помещают в
предварительно высушенный до постоянной массы и взвешенный в условиях
проведения испытания бюкс (рис. 7). Пробу сушат с открытой крышкой
бюкса до постоянной массы или в течение времени, указанного в
фармакопейной статье или нормативной документации. Пробу высушивают в
течение 2 ч в сушильном шкафу в пределах температурного интервала,
указанного в фармакопейной статье или нормативной документации. Затем
открытый бюкс вместе с крышкой помещают в эксикатор (рис. 6) для
охлаждения на 50 мин, после чего закрывают крышкой и взвешивают.
Последующие взвешивания проводят после каждого часа дальнейшего
высушивания до достижения постоянной массы. При отсутствии других
указаний пробу сушат до постоянной массы при температуре от 100 до
105ºС.

Рис. 6. - Охлаждение бюксов в эксикаторе

32
 Рис. 7. - Высушивание бюксов

Результат:
1) первое высушивание 1 час, затем в эксикаторе охлаждается 30 минут
- вес бюкса: 17.0202
2) второе высушивание 15 минут, в эксикаторе охлаждается 30 минут -
вес бюкса: 16.8845
3) вес бюкса с молотыми таблетками: 18,0805 третье высушивание со
взвесью 2 часа в эксикаторе охлаждается 30 минут - вес с молотыми
таблетками: 18,0596
Исходя из полученных данных, мы рассчитываем потерю в массе при
высушивании (%) по следующей формуле и получаем следующие данные:

m1- масса бюкса, доведенного до постоянной массы, г;

m2- масса бюкса с испытуемым образцом до высушивания, г;
m3- масса бюкса с испытуемым образцом после высушивания, г
Х=(18,0805-18,0596)/(18,0805-16,8845)*100%=1,75%
Результат: потеря в массе при высушивании таблеток гомеопатических
составила 1,75% [3].
5. Качественный анализ

33
 Опираясь на приведенные в источниках сведения провели
качественный анализ на наличие в лекарственном препарате алкалоидов
цимицифугин (Cimicifugaracemosa) и сангвинарин (Sanguinariacanadensis).
Экстракция осуществлялась методом Крамаренко (водой, подкисленной 20%
серной кислотой).
1.Общие (осадочные) реакции на алкалоиды.
Эта группа реакций основана на способности алкалоидов давать
нерастворимые в воде соединения с солями тяжелых металлов, с
комплексными иодидами, комплексными кислотами и другими
соединениями кислотного характера.
Эти реакции позволяют установить наличие алкалоидов даже при
незначительном их содержании.
Реакции проводят с неочищенным извлечением. Обязательным
условием является кислая среда (в щелочной - осадки не образуются или же
образуются за счет разрушения реактивов). Реакции проводят с
минимальным количеством реактива, капельно. Избыток реактива приводит
к растворению осадка.
1) Реактив Майера (раствор дийодида ртути в йодиде калия):
HgI2 + 2KI = K2HgI4
В слабокислых или нейтральных растворах реактив Майера образует с
алкалоидами белый или желтоватый осадок.
2) Реактив Драгендорфа (раствор йодида висмута в йодиде калия):
BiI3 + KI = KBiI4
C большинством алкалоидов образуются оранжево-красные или
кирпично-красные осадки. Этот реактив часто используют для обработки
хроматограмм.
3) Реактив Бушарда (раствор йода в растворе йодида калия в различных
концентрациях):
I2 + KI = КI3
С алкалоидами образуют бурые осадки.
34
 2. С комплексными кислотами.
4) Реактив Зоннештейна - Фосфорно-молибденовая кислота.
H3PO4-12MoO3-2H2O
Это один из наиболее чувствительных реактивов на алкалоиды. Он дает
аморфные осадки желтоватого цвета, которые вследствие восстановления
молибденовой кислоты вскоре приобретают синее или зеленое окрашивание.
5) Раствор танина 0.1% образует с алкалоидами беловатые или
желтоватые аморфные осадки.
6) Раствор пикриновой кислоты 1% - желтые кристаллические осадки –
пикраты [2].

Рис. 8. - Качественные реакции

Результаты наблюдений (рис. 8):

реактив Бушарда - Образование желтоватого оттенка (соответсвует)
реактив Майера - Образование осадка желтоватого оттенка
(соответствует)

35
 реактив Зоннештейна - Светло-голубая окраска испытуемого раствора
(соответствует)
реактив Драгендорфа - Оранжевая окраска испытуемого раствора
(соответствует)
Пикриновая килота 1% - Образование желтоватого осадка
(соответствует)
Раствор танина 0.1% - Образование желтоватого осадка
(соответствует).

Выводы по главе
Лекарственный препарат соответствует нормативным документам по
показателям внешнего вида упаковки и маркировки. Таблетки представляют
собой твердую дозированную лекарственную форму круглой формы, что
свидетельствует о соответствии требованиям нормативной документации.
При проведении качественного анализа испытуемого раствора с
общеалкалоидными и специальными реактивами, мы наблюдали образование
осадков, что доказывает наличие в гомеопатическом препарате климаксан
алкалоидов (цимицифугин и сангвинарин). Подводя итог проделанной
работы, можно сделать вывод о том, что таблетки «КЛИМАКСАН»
полностью соответствуют ОФС.1.4.1.0015.15 «Таблетки» по следующим
показателям: «Описание», «Распадаемость», «Количество таблеток в 1г»,
«Потеря в массе при высушивании» и «Качественный анализ».

Заключение

В ходе курсовой работы была раскрыта тема биотехнологического

получения комплексного препарата пиобактериофага поливалентного,
используемого при лечении и профилактики различных форм гнойно-
воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями
36
Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella
pneumoniae, Escherichia coli.
Для этой цели была изучена и представлена общая характеристика
бактериофагов, а именно морфология, химический состав, физико-
химические и антигенные свойства.
Рассмотрев методы получения препарата, можно сделать вывод о том,
что к специфическим методам исследования, используемым для
характеристики лечебно-профилактических бактериофагов, относятся
методы Аппельмана и Грациа.
Внедрение биотехнологий в промышленость, специализирующуюся на
производстве пиобактериофага поливалентного, позволило во многом
снизить себестоимость получаемого сырья, и как следствие увеличить
объемы потребления.
Помимо этого, был проведен анализ рынка, исходя из полученных
данных, можно сделать вывод, о том, что на сегодняшний день нашим
отечественным предприятием ФГУП «НПО «Микроген» активно
производится пиобактериофаг поливалентный в форме таблеток и раствора
для приема внутрь. Препаратов иностранного производства на рынке
обнаружено не было, поэтому исследования в этом направление будут
продолжаться, а существующие разработки и методы нужно подробно
изучать и модернизировать. Это необходимо для рентабельного и
конкурентно способного производства.
Подводя итоги, следует отметить, что бактериофаги- прекрасная
альтернатива «сметающим все на своем пути» антибиотикам. Воздействуя
только на определенный штамм бактерии, они сохраняют полезную
микрофлору и безопасны при лечении как взрослых, так и маленьких детей.

37
 Список литературы

1. ОФС.1.7.1.0002.15 Бактериофаги
2. ОФС.2.5.0020.15 Красавки трава
3. ОФС.1.4.1.0015.15 Таблетки
4. Алсынбаев, М. М., Медведев, Ю. А., Туйгунов, М. М. Биопрепараты и
ведущие направления их лечебно-профилактического применения:
монография. – Уфа : РИО филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО
«Микроген» МЗ РФ, 2008. – 100 с.
5. Боговазова, Г.Г. Эффективность бактериофага Klebsiella pneumoniae при
терапии экспериментальной клебсиеллезной инфекции / Г.Г. Боговазова,
Н.Н. Ворошилова, В.М. Бондаренко // Журн. микробиологии - 1991. - No
4. - С. 5-8.
6. Боргоякова, М. Б., Ильичев, А. А. Практикум по молекулярной
вирусологии «Бактериофаги»: учеб.-метод. пособие / Новосиб. гос. ун-т.
Новосибирск, 2013. – 34 с.
7. Бухарин, О. В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин. - М. :
Медицина, 1999. - 367 с.
8. Ворошилова, Н.Н. Научные основы и разработка технологий
производства препаратов бактериофагов Shigella и Klebsiella : автореф.
дис. ...д-ра мед. наук/Н.Н. Ворошилова. -Москва, 1992. - 53 с.
9. Габрилович, И. М. Основы бактериофагии. – Минск: Вышэйшая школа,
1973. – 224 с.
10. Дарбеева, О. С., Майская, Л. М., Перепанова, Т. С. Опыт использования
адаптированных препаратов бактериофагов // Биопрепараты. – 2002. – No
1. – С. 13–17.
11. Дроздова, О. М., Брусина, Е. Б. Применение бактериофагов в
эпидемиологической практике: взгляд через столетие // Эпидемиология и
инфекционные болезни. – 2010. – No 5. – С. 20–24.

38
12. Зинченко, А. И., Паруль, Д. А. Основы молекулярной биологии вирусов и
антивирусной терапии. – Минск: Вышэйшая школа, 2005. – 214 с.10.
13. Каттер, Э. Бактериофаги. Биология и практическое применение / под ред.
Э. Каттер, А. Сулакулидзе // М: «Научный мир». – 2012. – 640 с.
14. Кюттер, Э. Фаговая терапия: бактериофаги как антибиотики / Э. Кюттер.
– СПб.: НИИ детских инфекций, 2001. – 41 с.
15. Материалы международной научно-практической конференции
«Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в
медицине, ветеринарии и пищевой промышленности» / – Ульяновск:
ГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. – т. II – 182 с.
16. Павлович С. А., Основы вирусологии: учебное пособие. – Минск:
Вышэйшая школа, 2001. – 192 с.
17. Падруль, М.М., Изучение влияния секстафага на показатели обмена меди
при лечении беременных с пиелонефритом / М.М. Падруль, Е.Л.
Макарова, Н.А. Терёхина // Создание и перспективы применения
медицинских иммунобиологических препаратов : материалы Всерос.
науч.-практ. конф. — Пермь, 2008.-С. 102-104..
18. Стент, Г. Молекулярная биология вирусов бактерий, пер. с англ., М.,
1965.
19. Хейс, У. Генетика бактерий и бактериофагов, пер. с англ., М., 1965.
20. Barrow, P. Use of lytic bacteriophage for control of experimental Escherichia
coli septicemia and meningitis in chickens and calves / P. Barrow, M. Lovell,
A.J. Berchieri // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. - 1998. -
Vol. 5, No 3. - P. 294-298.
21. Bacteriophage therapy rescues mice bacteremic from a clinical isolate of
vancomycin-resistant Enterococcus faechim IB. Biswas, S. Adhya, P. Washart
[et al.] // Infect. Immun. - 2002. - Vol. 70, No 1. - P. 204-210.
22. Климаксан® гомеопатический (Klimaxan homeopathic) инструкция по
применению - https://www.vidal.ru/drugs/klimaksan_homeopathic__35302

39
40