Machine Translated by Google
ОРИГИНАЛЬНЫЕ
Под
редакцией: Тони
Д. Джеймс, Университет Бата, Великобритания
Рассмотрено:
Чао Дэн,
Университет Сучжоу, Китай
Лейонг Ван,
Нанкинский университет, Китай
*Переписка:
Лин Ан
anlinhx@sina.com.cn
Цзы-мин
Чжао zzm_chn@sina.com.cn
Раздел специализации:
Эта статья была представлена
Супрамолекулярная химия,
раздел журнала
Границы в химии
Получено: 01 мая 2019 г.
Принято: 14 октября 2019 г.
Опубликовано: 07 ноября 2019 г.
Цитата:
Ан Л, Ван Дж, Лю Дж, Чжао Цзи и
Песня Y (2019) Дизайн, подготовка и
характеристика романа
Каликс[4]арен Биоактивный носитель для
доставки противоопухолевых препаратов.
Фронт. хим. 7:732.
doi: 10.3389/fchem.2019.00732
Границы в химии | www.frontiersin.org
ИССЛЕДОВАНИЯ опубликовано: 07
ноября 2019 г. doi: 10.3389/fchem.2019.00732
Дизайн, подготовка и
Характеристика романа
Каликс[4]арен Биоактивный носитель для
Доставка противоопухолевых препаратов
Лин Ан1,2 *, Цзя-вэй Ван1,2, Цзя-дун Лю1,2, Цзы-мин Чжао1,2 * и Юань-цзянь Сун3
1 2
Фармацевтический колледж Сюйчжоуского медицинского университета, Сюйчжоу, Китай, Ключевая лаборатория Цзянсу по исследованию новых лекарств и
3
Клиническая аптека, Сюйчжоуский медицинский университет, Сюйчжоу, Китай, Отдел генетики, Научно-исследовательский центр
Морфология, Сюйчжоуский медицинский университет, Сюйчжоу, Китай
Разработано и успешно синтезировано амфифильное и биоактивное производное каликс[4]арена 8 (CA) из трет-
бутилкаликс[4]арена 1 путем последовательного обратного FC алкилирования, нитрования, O-алкилирования,
этерификации, аминолиза, восстановления и реакции ацилирования. . Пустые мицеллы FA-CA и мицеллы FA-CA-DOX ,
нагруженные доксорубицином (DOX) , получают, подвергая впоследствии самосборке и диализу CA и DSPE-PEG2000-FA.
Кривая кинетики высвобождения лекарственного средства инкапсулированной мицеллы DOX демонстрирует быстрое
высвобождение в мягких условиях, что указывает на хорошую способность реагировать на рН. Кроме того, также была
исследована цитотоксичность мицеллы, нагруженной DOX, по отношению к пустой мицелле против семи различных клеток
карциномы человека (A549, HeLa, HepG2, HCT116, MCF-7, MDA-MB231 и SW480). Результаты подтверждают более
значительный ингибирующий эффект мицеллы, нагруженной ДОКС, чем эффект ДОКС и пустых мицелл. Расчеты CDI
показывают синергетический эффект между пустыми мицеллами и DOX в индукции гибели опухолевых клеток.
В заключение, мицеллы FA-CA , о которых сообщалось в этой работе, были многообещающим средством доставки лекарств
для направленной терапии опухолей.
Ключевые слова: амфифильный каликсарен, биоактивный носитель, доставка лекарств, самосборка, доксорубицин.
ВСТУПЛЕНИЕ
Злокачественные опухоли являются одними из самых тяжелых заболеваний, угрожающих в настоящее время здоровью человека.
Клинически традиционная химиотерапия остается основным средством лечения рака (Galsky et al., 2016; Gupta et al., 2018),
поскольку она может эффективно убивать раковые клетки. К сожалению, при введении тяжелые токсические побочные эффекты
на здоровые ткани приводят к различным осложнениям (Лившиц и др., 2014; Макин, 2014). Кроме того, химиотерапия связана с
такими проблемами, как плохая растворимость, плохая длительная циркуляция, низкая биодоступность и отсутствие
специфичности (Corot et al., 2006; Guo et al., 2013; Qi et al., 2013; Shah et al. , 2014), что ограничило его клиническое применение.
Система доставки лекарств, которая может специально доставлять лекарство, использовалась в качестве мощной стратегии
для облегчения или даже решения этих проблем (Hossen et al., 2019). Большое количество результатов клинических испытаний
подтвердило, что идеальные носители лекарств способны комплексно преодолевать различные биологические препятствия при
системном введении и достигать оптимального противоопухолевого эффекта (Whitehead et al., 2009; Gomes-da-Silva et al., 2012;
Zhang et al., 2012): (а) гематоэнцефалический барьер: переносчику лекарственного средства необходимо поддерживать длительное
время цикла в кровообращении; (b) Ориентация на опухоль: специфическая
1 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732
Machine Translated by Google
Ан и др. Противораковый эффект мицелл каликсарена

обогащение опухолевой ткани; в) тканевый барьер опухоли: проникновение в Singh, 2018) и каликсарен (Narkhede et al., 2018). Каликсарены, которые образуются
различные части опухоли; (г) барьер клеточной мембраны: эффективное в результате конденсации нескольких фенольных звеньев и формальдегида,
проникновение в опухолевые клетки; (e) Внутриклеточный барьер: быстрое считаются представителем третьего поколения супрамолекулярной химии
высвобождение лекарственного средства в целевом месте. «хозяин-гость». Природа основной части, в том числе гибкая и изменчивая
Супрамолекулярная химия, преимущественно основанная на межмолекулярных полость, превосходная биосовместимость и низкая цитотоксичность, делают их
взаимодействиях (хозяин-гость, водородная связь, π-π- стэкинг, перенос заряда), идеальными в качестве платформы для доставки лекарств и других химических
может эффективно устранить некоторые ограничения, препятствующие молекул (Basilio et al., 2012; Guo and Liu, 2014; Zhou et al. , 2015). Как потенциальные
традиционной химиотерапии (Murray et al., 2017; Zhou et al., 2017). Используя переносчики лекарств, каликсарены могут размещать различные лекарства в

преимущества супрамолекулярных систем доставки лекарств, можно точно полую полость, что приводит к образованию комплекса включения хозяин-гость
контролировать загрузку или высвобождение лекарств. Система переносчиков (Fahmy et al., 2017). С другой стороны, был предложен совершенно другой метод
лекарств на основе супрамолекул постепенно становится все более интересной доставки лекарств, в котором лекарства могут быть инкапсулированы в
областью. Супрамолекулярные соединения-хозяева в основном включают наночастицы за счет самосборки функционального каликсарена (Chen et al., 2016).
кукурбитурил (Plumb et al., 2012; Isaacs, 2014; Oun et al., 2014; Assaf and Nau, 2015;
Barrow et al., 2015; Chen et al., 2017), Pillararene (Duan et al., al., 2013; Wheate et al.,
2016; Huang et al., 2017; Li et al., 2017; Cheng et al., 2019) циклодекстрин (Lu et al.,

2015; Bhunia et al., 2018), краун-эфир (кумбхат и Совсем недавно сообщалось, что каликсарены и их производные являются
противоопухолевыми агентами путем умной и осуществимой модификации их
основного ядра и обода.

РИСУНОК 1 | Дизайн биоактивного амфлического каликсарена и схематическое изображение образования мицелл.

Границы в химии | www.frontiersin.org 2 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732

Machine Translated by Google
Ан и др.
(Коулман и др., 2007; Юсаф и др., 2015; Насир и др., 2017). Например,
каликс[4]арендигидрофосфоновая кислота проявляла эффективную
противоопухолевую активность в отношении клеток фибросаркомы,
меланомы и лейкемии (Coleman et al., 2010). Неагу и др. (2010) сообщили,
что п-сульфонатокаликс[6]арен и каликс[8]арен обладали
фотодинамической активностью в клеточной линии миелогенного
лейкоза человека K562. Кроме того, было обнаружено, что производные
каликс[4]аренамида нацелены на галектин-1 в качестве аллостерических
ингибиторов (Dings et al., 2012, 2013; Astorgues-Xerri et al., 2014; Paz et al.,
2018). Ранее нами было синтезировано производное полигидроксиамина
каликс[4]арена CLX-4 (An et al., 2016), в котором N-(2-гидроксиэтил)амидная
группа была введена в положение 26,28 нижнего обода.
Оценка in vitro показала его очевидное ингибирующее действие на
клетки карциномы человека A549, SKOV3, SW1990, Hela, Raji и MDA-MB-231.
Эти преимущества дают нам захватывающую новую стратегию
разработки новых биоактивных систем доставки лекарств каликсарена,
которые могут играть двойную роль загрузки лекарств и синергетического
эффекта. Доксорубицин (ДОКС) представляет собой коммерчески
используемый противораковый препарат антрациклинового ряда,
который в основном может применяться при лечении острого и
хронического лейкоза, злокачественной лимфомы. Однако применение
ДОКС было ограничено из-за его плохой растворимости в воде,
токсичности и приобретенной лекарственной устойчивости. Стремясь
разрешить клиническое ограничение DOX и продолжая нашу предыдущую
работу, мы сообщаем о новой системе доставки DOX на основе
биоактивных мицелл полимера амфического каликс[4]арена (рис. 1).
В нашей конструкции биологическая активность каликсарена 8 (CA)
гарантируется за счет сохранения активных групп N-(2-гидроксиэтил)амида
в положении 26, 28 на нижнем ободе; гидрофобность повышается за счет
введения длинноцепочечных алкильных групп в положения 25, 27; Цепь
PEG550 прикреплена к верхнему краю для получения превосходных
гидрофильных свойств; амфифильная структура способствует самосборке
образования мицелл; гидрофобные внутри и гидрофильные снаружи
характеристики могут заставить N-(2-гидроксиэтил) амидную группу
скрываться в мицелле и почти не контактировать с нормальными
клетками в кровообращении, что приводит к повышению безопасности
носителя. Чтобы улучшить нацеливание мицелл КА на опухоль,
производное фолиевой кислоты (DSPE-PEG2000- FA) объединяли с КА с
образованием мицелл, модифицированных ФК (FA-CA). Нагруженные
доксорубицином (DOX) мицеллы FA CA-DOX получают путем самосборки
CA, DOX с нацеливающим рецептором фолата (FA). Полученные мицеллы
каликсарена охарактеризованы методами динамического светорассеяния,
просвечивающей электронной микроскопии по гидродинамическому
диаметру, ζ-потенциалу и морфологии. С точки зрения клеточного
поглощения введение ФК способствовало интернализации мицелл КА в
опухолевых клетках. Пустые мицеллы и мицеллы, нагруженные DOX,
обладают значительной цитотоксической активностью в различных
линиях опухолевых клеток. В целом эти результаты демонстрируют, что
амфифильные молекулы на основе каликс[4]арена обладают двойной
противоопухолевой способностью и способностью доставлять лекарства.
Тем не менее фармакокинетические исследования выходят за рамки
настоящей работы.
Границы в химии | www.frontiersin.org
Противораковый эффект мицелл каликсарена
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Синтез и характеристика Синтез амфифильного
производного каликсарена 8 Синтез амфифильного производного
каликсарена 8 протекает, как показано на рис. 2. Используя п-трет-
бутилфенол в качестве сырья, соединение 1 получают по реакции
конденсации с выходом 50% (Gutsche и др., 1986). Затем трет-бутильную
группу верхнего обода удаляли с помощью обратной реакции Фриделя-
Крафта (FC) с получением соединения 2 с выходом 60%. Соединение 2
затем подвергали нитру с использованием смешанного раствора
концентрированной азотной кислоты и ледяной уксусной кислоты с
получением соединения 3 с выходом 75%, за которым следовало
алкилирование гексилиодидом с получением соединения 4 с выходом
65%. Аналогичным образом соединение 4, подвергнутое электрофильному
замещению метилхлорацетатом, дает соединение 5 с выходом 62%.
Затем проводят аминолиз соединения 5 этаноламином с получением
соединения 6 с выходом 61%.
Соединение 6 восстанавливали в этаноле с помощью Pd/C и
гидразингидрата с получением соединения 7 на 78%. Наконец, конечное
соединение 8 было синтезировано путем ацилирования соединения 7 с
помощью NHS PEG550. Соединение 8 охарактеризовано и подтверждено
методами 1H, 13C ЯМР и масс-спектрометрии высокого разрешения.
Измерения гидродинамического диаметра и ζ-
потенциала Средний размер частиц и ζ-потенциал
самоорганизующихся мицелл определяли с использованием
потенциометра наночастиц-Zeta (Nicomp 380/ZLS) со следующими
характеристиками: время отбора проб: автоматическое; количество
измерений: 3 на образец; вязкость: 0,933 сП; показатель преломления:
1,333; угол рассеяния: 90° ; λ = 633 нм; температура: 25 C.
Работоспособность прибора проверяли с помощью монодисперсных
латексных шариков размером 90 нм (Coulter) или стандартного раствора
DTS 50 (malvern) для DLS перед каждой серией экспериментов.
Трансмиссионная электронная
микроскопия ПЭМ-микрофотографии ненагруженных (пустых) и
нагруженных DOX мицелл каликсарена получали с
использованием трансмиссионного электронного микроскопа
(Tecnai Spirit G2 TWIN). Образец готовили по следующей методике:
0,1 мл суспензии мицелл помещали на лицевую сторону медной
сетки, выдерживали 15 мин, излишки суспензии насухо
промокали фильтровальной бумагой. На лицевую сторону
медной сетки капали 0,1 мл 4%-го уранилацетатного негативного
красителя, окрашивали в течение 3 мин, а затем промокали
оставшийся раствор негативного красителя фильтровальной
бумагой. Измерения проводились после естественной сушки.
Приготовление пустых мицелл .
Суспензию пустых мицелл FA-CA готовили на основе способности к
самосборке амфифильного производного каликсарена 8 (CA) с
использованием методики диализа. Двадцать миллиграммов СА и 2 мг
DSPE-PEG2000-FA растворяли в ДМСО, раствор помещали в диализный
мешок (MWCO: 1000 Да), далее диализовали против 1000 мл
дистиллированной воды в течение 24 часов (воду меняли каждые 12
часов). ). Собранный диализат подвергали фильтрации через фильтр 0,45
мкм с получением холостой мицеллярной суспензии FA-CA, хранившейся
в холодильнике при 4°C .
3 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732
Machine Translated by Google
Ан и др. Противораковый эффект мицелл каликсарена

РИСУНОК 2 | Синтез амфифильного производного каликсарена 8.

Получение мицелл, нагруженных DOX Мицеллы , холодильник. Нагруженные лекарственным средством мицеллы CA-DOX, не
нагруженные лекарственным средством, готовили в соответствии с содержащие фолиевой кислоты, получали таким же образом, как описано
процедурой, аналогичной описанной выше, за исключением того, что к выше, но без добавления DSPE-PEG2000-FA.
раствору ДМСО дополнительно добавляли 4 мг DOX. После диализа диализат
фильтровали через фильтр с размером пор 0,45 мкм для удаления Определение нагрузочной способности DOX
несвязанного DOX и других возможных осадков с получением суспензии Для приготовления образцов мицеллы каликсарена, нагруженные ДОКС,
мицелл, нагруженных DOX (FA-CA-DOX). Хранить при 4 C центрифугировали (5000 об/мин, 15 мин), супернатант отбирали.

Границы в химии | www.frontiersin.org 4 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732

Machine Translated by Google
Ан и др.
собирали и супернатант лиофилизировали с получением лиофилизированного
порошка. Лиофилизированный порошок растворяли в метаноле и измеряли
оптическую плотность при 490 нм при 25°С с помощью ридера для
микропланшетов. Содержание ДОКС рассчитывали по стандартной кривой.
Содержание загрузки лекарственным средством и эффективность
инкапсуляции рассчитывают по следующим формулам:
Качество инкапсулированного препарата
ДЛС (%) = × 100%
Общая масса мицелл , загруженных лекарством
Качество инкапсулированного препарата
EE (%) = общее
количество препарата, использованного в препарате.
Кинетика высвобождения DOX in vitro
Высвобождение DOX in vitro из мицелл FA-CA-DOX изучали с использованием
методов, аналогичных описанным в предыдущих исследованиях (Lu et al.,
2011). Вкратце, исследования кинетики высвобождения DOX in vitro проводили
путем диализа (MWCO: 10 кДа) в фосфатно-солевом буфере (PBS, 0,01 М, pH
7,3/6,5, 3% SDS) при различных условиях pH. Приготовленную суспензию
мицелл, нагруженных ДОКС, подвергали диализу против 5 мл PBS при
постоянном перемешивании. Все дополнительные диализные растворы
отбирали в установленное время, измеряли с помощью высокоэффективной
жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при 254 нм и добавляли 5 мл чистой воды
в качестве экстрадиализного раствора. Кумулятивное высвобождение DOX
рассчитывали по стандартной кривой. Параметры ВЭЖХ: колонка: Agilent TC-
C18 (4,6 × 250 мм, 5 мкм), длина волны детектирования: 254 нм, подвижная
фаза: ацетонитрил: вода (1:1), скорость потока: 1 мл/мин, объем ввода 20 мкл,
температура колонки 37 C.
Культура клеток
Линии опухолевых клеток (A549, HeLa, HepG2, HCT116, MCF-7, MDA MB231,
SW480), используемые в этом исследовании, были любезно предоставлены
из банка клеток Китайской академии наук. Клетки выращивали в
культуральной среде DMEM, содержащей 1% раствор пенициллина-
стрептомицина. Клетки хранили при 37 C в среде с насыщенной влажностью
5% CO2.
Анализ поглощения in vitro
Анализ флуоресцентной микроскопии
Анализ флуоресцентной микроскопии проводили путем
наблюдения за поглощением мицелл DOX опухолевыми
клетками. В отличие от обычного препарата мицелл,
нагруженных ДОКС, в этом эксперименте 1 мг флуоресцентного
вещества DSPE-PEG-FITC предварительно добавляли к 2 мл ДМСО
для образования мицеллы вместе с CA, и положение мицелл
было отмечено по зеленой флуоресценции FITC. Вкратце, после
того как мицеллы, нагруженные лекарственным средством,
инкубировали с клетками HeLa в течение 4 ч, клетки трижды
промывали 0,01 М буфером PBS при рН 7,4. Затем клетки
фиксировали 4% параформальдегидом в течение 10 мин, после
чего клетки трижды промывали 0,01 М буфером PBS при рН 7,4.
Далее ядра окрашивали красителем DAPI в течение 5 мин в
темноте, краску удаляли, клетки трижды промывали 0,01 М
буфером PBS, pH 7,4, и хранили в 0,9% растворе NaCl. Во время наблюдается незначительная разница.
теста покровное стекло, содержащее клетки, помещали на Именно по этой причине химические сдвиги в области с соединения 8
предметное стекло, наблюдали под инвертированным флуоресцентным микроскопом
значительно
возрастают
Границы в химии | www.frontiersin.org
Противораковый эффект мицелл каликсарена
Механизм захвата мицелл Клетки HeLa
предварительно инкубировали со 100 мкл различных растворов ингибиторов
захвата в течение 2 ч при 37°С, 5% СО2, после чего удаляли половину среды,
содержащей ингибитор. Добавляли суспензию мицелл, нагруженных ДОКС,
инкубировали 4 ч, затем удаляли супернатант, клетки лизировали лизатом
RIPA. После лечения измеряли поглощение при длине волны 490 нм на 96-
луночном планшет-ридере и сравнивали разницу в поглощении
лекарственного средства в каждой группе.
× 100% Исследование цитотоксичности
Тесты на цитотоксичность проводили на свободном DOX, предшественнике
соединения 7, пустых мицеллах и мицеллах, нагруженных DOX, с помощью
набора SRB (KeyGEN BioTECH). Вкратце, опухолевые клетки инкубировали с
различными препаратами в течение 72 часов (концентрации свободного
DOX в диапазоне от 0,03 до 10 мкМ, для соединения 7 в диапазоне от 0,075
до 25 мкМ, концентрации CA в пустых мицеллах в диапазоне от 0,075 до 25
мкМ и мицеллы, нагруженные DOX, с концентрациями DOX ). в диапазоне от
0,03 до 10 мкМ). После обработки в соответствии с инструкциями к набору
значения поглощения измеряли при 515 нм с использованием устройства
для считывания микропланшетов.
Статистический анализ . Данные
были рассчитаны с использованием непараметрической дисперсии.
Сравнения между группами были подвергнуты статистическому анализу. P <
0,05 считался статистически значимым. Статистический анализ проводился с
использованием SPSS 16.0 (SPSS, Чикаго, Иллинойс, США).
ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Получение и характеристика амфифильного производного
каликсарена 8 и его мицелл Согласно результатам предыдущих исследований
нашей группы (An et al., 2016), амфифильный каликсарен 8 был синтезирован
серией дериватизаций с использованием п-трет-бутилфенола в качестве
сырья. Репрезентативные продукты реакции были охарактеризованы с
помощью 1H ЯМР, 13C ЯМР и масс-спектрометрии высокого разрешения (см.
Дополнительный материал). Сравнение спектров ЯМР 1H производного
каликсарена 7, 8 и mPEG550-NHS показано на рисунке 3.
Как видно на рисунке 3, зеленая линия внизу представляет спектры ЯМР
1H mPEG550-NHS, тогда как фиолетовые и синие области представляют
спектры предшественника 7, целевого соединения 8, соответственно. Кроме
того, для сравнения выделены пять основных областей a, b, c, d и e.
Аналогичные мультиплеты в сильном поле, отображающие в области а,
представлены гексильными группами, которые невозможно различить в
предшественнике 7 и соединении 8.
Как показано в области b, предшественник 7 показывает отчетливые сигналы
ароматических протонов, которые проявляются в виде набора при 6,44 м.д.
(с), 6,38 м.д. (г), 6,31 м.д. (с), 6,08 м.д. (г) и 5,96 м.д. (г), тогда как химическое
окружение ароматических протонов в соединении 8 изменилось
незначительно, что привело к появлению широких мультиплетов в области
7.30–6.07 м.д. за счет введения группы mPEG550-NHS . Таким образом,
и делали
флуоресцентную
и проявляются фотографию.
в виде широких мультиплетов в диапазоне
5 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732
Machine Translated by Google

Ан и др. Противораковый эффект мицелл каликсарена

РИСУНОК 3 | Сравнение спектров ЯМР 1H производных каликсарена 7, 8 и mPEG550-NHS.

Критическая концентрация мицеллообразования соединения 8 определялась

методом флуоренового зонда. Спектр флуоресценции пирена в воде имеет
пять основных пиков, а отношение интенсивностей первого пика (I1 при 373
нм) к третьему пику (I3 при 384 нм) может отражать полярность микроокружения,
в котором находится зонд ( Годдард и др., 1985). Когда образовались мицеллы,
соотношение I373 и I384 внезапно изменилось.

Как показано на рисунке 4, критическая концентрация мицеллообразования

соединения 8 составляет 0,25 мг/л.
ДОКС является распространенным гидрофобным противоопухолевым
препаратом. Он может накапливаться в гидрофобном слое мицелл и липосом,
тем самым улучшая его растворимость в воде и снижая токсические побочные
эффекты (Liang et al., 2018; Zhang et al., 2019). В этом эксперименте биоактивные
мицеллы каликсарена FA-CA были приготовлены методом диализа (Takata et al.,
2017). Раствор в ДМСО, содержащий производное каликсарена 8 и другие
вспомогательные вещества, помещали в диализный мешок и подвергали
диализу против дистиллированной воды с получением суспензии мицелл.

РИСУНОК 4 | Графики отношения интенсивностей (I373/I384) из спектров Нагруженные DOX мицеллы FA-CA-DOX получали аналогичным образом с
флуоресценции пирена в зависимости от log C производного каликсарена 8. молярным соотношением CA:DOX 5:1. DOX концентрируется в гидрофобном
ядре внутри мицеллы. Содержание лекарственного средства, эффективность
инкапсуляции, а также размер частиц и дзета-потенциал мицелл показаны в

от 4,10 до 3,00 частей на миллион, что соответствует группам -CH2CH2O-, Ar таблице 1.

CH2-Ar и -CONHCH2CH2- . Наиболее важно, что сигнал группы ПЭГ550-CONH-Ar Как показано в таблице 1, эффективность загрузки DOX и эффективность

в соединении 8 появляется при 9,00 м.д., что можно использовать в качестве инкапсулирования приготовленных мицелл каликсарена составляют 6,85 ±

характерного признака наличия цепи ПЭГ. Таким образом, мы успешно 0,6% и 41,10 ± 3,60% (масса/масса, n = 3) соответственно. Содержание

синтезировали целевое соединение 8. лекарственной нагрузки находится на рациональном уровне. PDI составляют
0,96 ± 0,67 и 0,63 ± 0,25. ζ - потенциал имеет тенденцию быть равным 0 мВ, подобным

Границы в химии | www.frontiersin.org 6 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732

Machine Translated by Google
Ан и др. Противораковый эффект мицелл каликсарена

ТАБЛИЦА 1 | Размер частиц и дзета-потенциал мицелл FA-CA и FA-CA-DOX .

Мицелла Средний диаметр (нм) ПДиа DLCb (мас.%) EEb (вес.%) ζ-потенциал (мВ)

ФА-КА 75,1 ± 2,0 0,42 ± 0,02 – – 0,96 ± 0,67

ФА-КА-ДОКС 81,8 ± 3,6 0,36 ± 0,02 6,85 ± 0,6 41,10 ± 3,60 0,63 ± 0,25

аПоказатель полидисперсности пустых мицелл/мицелл, нагруженных DOX, полученный из измерений DLS.

b Измерено УФ-спектрофотометром при 490 нм; «–» Указывает, что препарат не содержится.
Данные показывают среднее ± стандартное отклонение трех независимых определений.

РИСУНОК 5 | ПЭМ-изображения пустых мицелл (FA-CA) (A) и мицелл, нагруженных DOX (FA-CA-DOX) (B).

к неионогенным поверхностно-активным веществам, но сохраняет хорошую стабильность благодаря

к его стерическому отталкиванию. Чистые мицеллы имеют размер частиц

75,1 ± 2,0 нм, тогда как у мицелл, нагруженных лекарственным средством, выше
(81,8 ± 3,6 нм). Описанное незначительное увеличение размера частиц
основан на данных о размере частиц, измеренных DLC. Он находится в
в соответствии с литературными данными (Liu et al., 2007), в основном
за счет расширения ядра и оболочки мицелл, вызванного
скоплением молекул ДОКС в гидрофобной полости
мицелл.

Просвечивающие электронные микрофотографии выставлены в

Рисунок 5. Как видно на изображениях ПЭМ (рис. 5), мицеллы
имели квазисферическую форму и были умеренно однородными.
в распределении размеров. В частности, размер частиц заготовок
перевозчики, кажется, меньше, чем у DOX-нагруженных
перевозчики. Поведение может быть рационализировано, предположил, что
сухие частицы разрушаются на поверхности мицелл в течение
процесс сушки. Размер частиц становится меньше, и
особенно развал холостых носителей более очевиден. РИСУНОК 6 | Изменения размера частиц мицелл FA-CA-DOX в PBS (0,15 М,
рН 7,4) при 4°С.
Таким образом, размер частиц чистых носителей оказывается равным
примерно на 50% меньше, чем у носителей наркотиков. Кроме того,
размер частиц, оцененный с помощью ПЭМ, был меньше, чем у
частица, измеренная с помощью DLS, потому что DLS измеряет Кинетика высвобождения DOX из мицелл FA-CA-DOX соответствует
гидродинамический диаметр ядра частиц вместе с к гиперболическому профилю с начальным всплеском в течение 10 ч, а затем
сольватный слой, прикрепленный к частицам (Zhao et al., устойчивыми родами в течение 24–48 ч (рис. 7). предполагается
2015). что быстрый выпуск DOX исходит от части
При хранении мицелл FA-CA-DOX при 4°C в течение мицеллы вблизи границы между гидрофильным слоем и
48 часов, они оставались стабильными и без видимых изменений в размере частиц. гидрофобный слой. На медленно высвобождающуюся часть приходится
наблюдалось (рис. 6). Результаты показали, что FA-CA-DOX DOX инкапсулирован в ядро мицеллы. По мере распространения наркотика
мицеллы обеспечивают хорошую стабильность. постоянно скорость высвобождения соответственно снижается.

Границы в химии | www.frontiersin.org 7 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732

Machine Translated by Google
Ан и др.
РИСУНОК 7 | Накопленные профили высвобождения DOX из мицелл FA-CA-DOX в 0,15
моль/л PBS (pH 6,5, pH 7,4), содержащем 3% SDS. Вставка: линейная кривая DOX.
Отмечено, что профиль высвобождения DOX указывает на то, что FA-CA DOX
чувствителен к pH, а скорость высвобождения в слабокислых условиях намного выше, чем в
нормальных физиологических условиях (pH 7,4). В основном это связано с амидной связью
(группа -CONH PEG550 ) на верхнем ободе ароматических колец в носителе, которая обычно
считается чувствительной к pH (Cao et al., 2014; Li et al., 2018; Панджа и др., 2018). Сам процесс
высвобождения лекарственного средства представляет собой поведение пассивной диффузии:
DOX, загруженный в мицеллы, высвобождается в среду посредством пассивной диффузии,
амидная связь частично гидролизуется в слабокислых условиях, что может разрушить
целостность структуры мицеллы и, кроме того, сделать DOX, загруженный в мицеллы
высвобождаются быстрее.
Напротив, в нейтральных условиях целостность мицелл сохраняется хорошо, а скорость
высвобождения DOX из мицелл в среду значительно ниже. Следовательно, большая часть
высвобождаемого ДОКС находится вокруг гидрофильно-эстерофильной границы мицелл,
ДОКС, содержащийся в ядре мицелл, в основном не высвобождается.
Клеточное поглощение мицеллы Клетки HeLa
представляют собой опухолевые клетки, которые сверхэкспрессируют рецепторы
фолиевой кислоты. Поглощение мицелл опухолевыми клетками исследовали
путем инкубации мицелл, нагруженных DOX, с клетками HeLa в течение 4 часов. Мицеллы имеют
ранее были помечены FITC. Как показано на рисунке 8, зеленая флуоресценция представляет
собой положение мицеллы, полученной из FITC. Красная флуоресценция создается самим
DOX и представляет собой положение препарата. Между тем, синяя флуоресценция является
результатом DAPI и отражает положение ядра. Результаты подтвердили, что группа FITC-FA
CA-DOX продемонстрировала наилучшую активность при приеме внутрь после совместной
инкубации с клетками HeLa в течение 4 часов. После этого наблюдалось проникновение в
клетки только небольшого количества мицелл, нагруженных ДОКС.
При добавлении свободной ФК в качестве конкурентного антагониста эффект проникновения
мицелл FITC-FA-CA-DOX в клетки значительно снижался, что свидетельствует о значительном
положительном влиянии ФК на мицеллы, проникающие в клетки.
Границы в химии | www.frontiersin.org
Противораковый эффект мицелл каликсарена
Профиль клеточного поглощения мицеллами после добавления различных ингибиторов
клеточного поглощения показан на рисунке 9.
Как показано на рисунке 9, тубулин и клатрин оказывают большое влияние на поглощение
клетками. После применения соответствующих ингибиторов скорость поглощения мицелл
клетками снизилась на 28,96 и 18,14% соответственно.
Цитотоксическое действие пустых мицелл и мицелл,
нагруженных ДОКС . Для изучения активности пустых
мицелл FA-CA in vivo методом МТТ оценивали цитотоксическое
действие на различные семь типов опухолевых клеток. Прекурсор
7 был добавлен в качестве контрольной группы, чтобы проверить,
может ли введение гидрофильной цепи ПЭГ повлиять на его
активность.
В этом эксперименте большинство выбранных линий опухолевых клеток, таких как
клетки A549, HCT116, MDA-MB231 и SW480, были чувствительны к DOX. Ингибирование клеток
оценивали через 72 ч после обработки, и кривые доза-эффект показаны на фигуре 10. Пустые
мицеллы FA-CA продемонстрировали значительно сниженное цитотоксическое действие на
протестированные клетки A549, HCT16, SW480 и MDA-MB231 по сравнению с предшественником
7. предположили, что введение четырех цепей ПЭГ550 в верхний край пустых мицелл FA-CA,
вероятно, было недостатком цитотоксичности. Причина может быть сложной, что можно
объяснить предположением о том, что увеличение гидрофильности и молекулярной массы,
приписываемое цепям PEG550 , затрудняет проникновение через клеточную мембрану.
Кроме того, повышенные стерические затруднения, снижение водородных связей, вызванное
цепью ПЭГ, также приводят к плохой фармакологической активности. Интересно, что пустые
мицеллы FA-CA были наиболее эффективны в отношении ингибирования клеток HepG2, мы
провели дополнительную цитотоксичность свободных DOX, мицелл FA-CA-DOX и мицелл CA
DOX против клеток HepG2, и результаты показаны на фигуре 11.
К нашему удовлетворению, мицеллы, загруженные лекарством, были значительно выше,
чем у свободного DOX, а значение IC50 было снижено с 1,52 до 0,31 мкМ в пересчете на дозу
DOX. По сравнению с КА-ДОКС введение фолиевой кислоты в ФК-КА-ДОКС не оказывало
существенного влияния на токсичность. Это может быть связано с инкубационным периодом.
Через 72 часа клетки, стимулирующие фолиевую кислоту, могут полностью проникнуть в
клетки независимо от поглощения мицелл, нагруженных DOX. Взаимодействия между
пустыми мицеллами и DOX показаны в таблице 2. С точки зрения ингибирования роста клеток
HepG2 слабый синергизм проявлялся при низких концентрациях (0,3–1,0 мкМ), CDI < 1.
Для дальнейшего подтверждения безопасности пустых мицелл FA-CA по сравнению с
соединением 7 также исследовали токсичность в отношении нормальных клеток HUVEC
(эндотелиальных клеток пупочной вены человека).
Результаты, показанные на рисунке 12, доказывают, что синтезированный нами биологически
активный каликсареновый препарат безопасен, поскольку он не обладает значительной
токсичностью по отношению к нормальным клеткам в концентрации 25 мкМ.
ОБСУЖДЕНИЕ
Основываясь на предыдущем исследовании нашей группы (An et al., 2016), в настоящей
работе предполагалось сконструировать мицеллу каликс[4]арена, нагруженную биоактивным
лекарственным средством, в попытке изучить его лекарственное средство.
8 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732
Machine Translated by Google
Ан и др. Противораковый эффект мицелл каликсарена

РИСУНОК 8 | Наблюдение с помощью инвертированного флуоресцентного микроскопа профилей внутриклеточной интернализации мицелл FITC-FA-CA-DOX, FITC-CA-DOX и свободных
мицелл FA + FITC-FA-CA-DOX после инкубации с клетками HeLa. Синяя флуоресценция представляет собой DAPI, зеленая флуоресценция представляет собой FITC, а красная флуоресценция
представляет собой DOX.

способность к инкапсуляции, доставке и высвобождению и оценить успешно синтезировано и охарактеризовано производное

его эффективность in vitro, особенно для выявления синергетического
эффекта. Впервые разработано и получено биоактивное производное
каликсарена 8 (КА), в котором гидроксиламиновая группа на нижнем
ободе действует как противоопухолевая активная группа, гексильная
цепь и бензольное кольцо действуют как гидрофобные фрагменты, а
цепь ПЭГ на верхнем ободе действует как гидрофильная часть
(показано на рисунке 1). Из-за конформации каликс[4]арена компактное
уплотнение гидрофобной части на его более узком ободе повышает
его способность к самосборке в водной среде (Gallego-Yerga et al.,
2015). В полученных мицеллах гидрофобный хвост и противоопухолевые 2016). Загрузка лекарственного средства мало влияет на свойства
активные группы расположены в ядре мицеллы и, как ожидается,
хорошо подходят для содержания гидрофобных лекарственных
средств. Следует отметить, что, учитывая проблему активного
нацеливания, мы вводили молекулы фолиевой кислоты во время
приготовления мицелл (Stella et al., 2000). Хотя молекула фолиевой
кислоты не подвергается прямой ковалентной модификации молекулы
каликсарена, она все же может способствовать поглощению клетками
(рис. 8). Новый амфифильный препарат, нагруженный DOX
каликс[4]арена 8.
При приготовлении мицелл, содержащих лекарственное средство,
DOX совместно растворяют с производным каликсарена 8, DSPE-
PEG2000-FA перед диализом, что позволяет DOX эффективно
интегрироваться в мицеллы. Нагруженные лекарственным средством
мицеллы, полученные этим методом, имеют эффективность загрузки
лекарственного средства и эффективность инкапсуляции 6,85 ± 0,6 и
41,10 ± 3,60%, что согласуется с общей емкостью загрузки
лекарственного средства наноносителей (Zhao et al., 2015; Conte et al. .,
мицелл. После введения ДОКС размер частиц мицелл увеличился
незначительно (табл. 1). Подтверждено, что как пустые мицеллы, так и
мицеллы с лекарственным средством являются квазисферическими.
Размер частиц мицелл немного увеличивался после загрузки
лекарственным средством из-за заполнения лекарственным средством.
Возможная причина заключается в незначительном снижении степени
агрегации гидрофобной части каликсарена из-за вхождения препарата в гидрофобн
Это также может быть отражено на фотографии ПЭМ (рис. 5).

Границы в химии | www.frontiersin.org 9 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732

Machine Translated by Google
Ан и др.
РИСУНОК 9 | Влияние различных ингибиторов (хлорпромазин 10 мкг/мл, колхицин 50 мкг/
мл, азид натрия 1 мг/мл, нистатин 6 мкг/мл, фолиевая кислота 10 мкг/мл) на поглощение
мицелл FA-CA-DOX клетками в течение 4 ч после инкубация с клетками в течение 2 часов.
Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3, *P <0,05 по сравнению
с контрольной группой, ***P <0,001 по сравнению с контрольной группой.
размер частиц, измеренный DLS, немного больше, чем у TEM. Учитывая
разные принципы этих двух методов, это кажется разумным. Хорошо известно,
что DLS измеряет гидродинамический диаметр ядра частицы и сольватного
слоя, прикрепленного к частице (Palma et al., 2007). При диспергировании
мицелл каликс[4]арена в воде снаружи наночастицы формировался гидратный
слой. Однако после подготовки образца под ПЭМ гидратный слой отсутствовал
(Pyrz and Buttrey, 2008). Кроме того, ζ-потенциал по-прежнему составляет
около 0 мВ до и после введения препарата.
Высвобождение лекарственного средства из мицелл, нагруженных
лекарственным средством, представляет собой сложный процесс, на который
могут влиять многие факторы, в том числе деградация и эрозия матрицы
мицелл, диффузия лекарственного средства и сродство связывания между
мицеллой и лекарственным средством (Mohanraj and Chen, 2006). Кинетика
высвобождения DOX из мицелл FA-CA-DOX совместима со структурой собранной мицеллы.
Поскольку лекарство вблизи гидрофильного слоя может быстро
высвобождаться в водном растворе, в профиле высвобождения наблюдается
начальный период быстрого высвобождения. Оставшееся лекарство
медленно высвобождается путем диффузии, что также является возможной
причиной длительного высвобождения лекарства. И по мере того, как
количество препарата, остающегося внутри мицелл, уменьшается, скорость
высвобождения DOX становится все медленнее и медленнее. Стоит отметить,
что мицеллы FA-CA-DOX также обладают определенной способностью
реагировать на рН (рис. 7), что можно объяснить частичным гидролизом
амидной связи на боковой цепи ПЭГ в слабокислых условиях (Li et al., 2018). ;
Панджа и др., 2018). Из-за слабой чувствительности к кислотам в слабокислых
условиях происходит частичный разрыв амидной связи, в результате чего
нарушается гидрофильность и липофильный баланс молекулы каликсарена,
тем самым разрушается состав мицелл, лекарство внутри мицелл быстро
высвобождается.
В данной работе приготовленные мицеллы FA-CA-DOX были стабильны
более 2 сут при 4°С и рН 7,4. Там
Границы в химии | www.frontiersin.org
Противораковый эффект мицелл каликсарена
никакого изменения размера частиц мицелл не наблюдалось (Фигура 6).
В настоящее время основным недостатком ДОКС как противоопухолевого
препарата является плохая растворимость в воде и сильные побочные
эффекты (Zhang et al., 2018). Хотя DOX·HCl был разработан для улучшения
растворимости DOX в воде, он по-прежнему не может устранить недостаток
побочных эффектов (Pu et al., 2013). Исследуемый биоактивный носитель на
основе каликсарена может эффективно улавливать DOX (таблица 1),
растворять его в воде без сорастворителя и полностью высвобождать в
микроокружении опухолевой ткани (pH 6,5) примерно через 48 ч (рис. 7).
Кроме того, мицеллы FA-CA-DOX нацелены на основе эффекта ЭПР
наноносителей и эффекта молекулярного нацеливания взаимодействий
фолиевой кислоты и фолиевой кислоты. Его можно обогащать в очаге
опухоли, уменьшая побочные эффекты, вызванные неспецифическим
распределением препарата.
Согласно нашим предыдущим исследованиям, значение IC50 для
производных каликс[4]аренов, вызывающих гибель клеток, составляет
примерно 1–10 мкМ (An et al., 2016). В этом исследовании оценивают
противоопухолевую активность пустых мицелл и соединения 7 в отношении
различных типов линий опухолевых клеток (фиг. 10). Результаты показали,
что у них была разная степень ингибирования. Введение боковых цепей ПЭГ,
по-видимому, имело небольшой недостаток для клеточного ингибирования
каликсарена, несмотря на его идеальную гидрофильность. Это можно
объяснить двумя способами: (а) поскольку аминогруппа верхнего обода
амидирована, количество водородных связей, образующихся между
соединением и рецептором на клеточной мембране или родственным
белком, уменьшается, что приводит к ослаблению сила взаимодействия
соединения с клеткой. Следовательно, фармакологическая активность
снижается; (b) Взаимодействие между соединением и его рецептором тесно
связано со стереоконфигурацией соединения. Особенно это касается
супрамолекулярных соединений. Цепь ПЭГ, прикрепленная к верхнему ободу,
значительно увеличивает молекулярную массу, снижает липофильность и
вызывает большее стерическое затруднение, а также снижает его
фармакологическую активность. Интересно, что в экспериментах с клетками
HepG2 ингибирование клеток HepG2 усиливалось после введения боковой
цепи ПЭГ. Это свидетельствует о том, что ингибирующее действие наших
соединений на опухолевые клетки тесно связано с типом опухолевых клеток.
Таким образом, разработанные нами пустые мицеллы обладают способностью
ингибировать пролиферацию опухолевых клеток.
Опухолесупрессивное действие мицелл FA-CA-DOX и CA-DOX изучали на
клетках HepG2, а свободный DOX использовали в качестве положительного
контроля. Было обнаружено, что цитостатическая активность препарата
значительно выше, чем у свободного ДОКС, но присутствие фолиевой
кислоты не влияло на окончательный эффект подавления опухоли. Это
явление может быть связано со временем совместной инкубации до 72 часов,
поэтому даже без взаимодействия фолат-фолатных рецепторов мицеллы
могут полностью проникать в клетку, оказывая ингибирующее действие.
Кроме того, мы рассчитали, существует ли синергетический эффект между
пустыми мицеллами и DOX в ингибировании роста клеток HepG2 на основании
данных о цитотоксичности (Acevedo et al., 2014). Как показано в таблице 2,
пустые мицеллы действительно обладали слабым синергетическим эффектом
с ДОКС при низких и средних концентрациях, что указывает на то, что общее
улучшение эффективности было связано не только со стимулированием
проникновения ДОКС в клетки, но и с противоопухолевым эффектом. самих
мицелл.
10 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732
Machine Translated by Google
Ан и др. Противораковый эффект мицелл каликсарена

РИСУНОК 10 | Цитотоксичность мицелл FA-CA и соединения 7 по отношению к разным опухолевым клеткам в разных концентрациях измеряли с помощью стандартного анализа SRB. Данные
представлено как среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3.

Безопасность препарата также является одним из факторов вектор и соединение-предшественник 7 поддерживали клеточную активность
что не нужно рассматривать. В экспериментах по цитотоксичности более 90% при концентрации 25 мкМ (рис. 12). Это
на нормальных клеточных линиях (клетки HUVEC) мы обнаружили, что пустой показано, что каликсареновые мицеллы обладают хорошей безопасностью для

Границы в химии | www.frontiersin.org 11 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732

Machine Translated by Google

Ан и др. Противораковый эффект мицелл каликсарена

РИСУНОК 11 | Цитотоксичность мицелл FA-CA-DOX , мицелл CA-DOX и свободных

РИСУНОК 12 | Цитотоксичность мицелл FA-CA , а также соединения 7 к
DOX в клетки HepG2 при различных концентрациях, измеренных стандартом
Клетки HUVEC при различных концентрациях, измеренных стандартным анализом SRB.
анализ СРБ. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение, n = 3.
Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение, n = 3.

ТАБЛИЦА 2 | Взаимодействие между пустым вектором и DOX.

растворимость ДОКС. Предлагаемые наномицеллы дополнительно доказаны

Концентрация (мкМ) DOX 10 3 1 0,3 0,1 0,03 быть биосовместимым в исследовании безопасности. Введение ПЭГ
придавал мицеллам низкую склонность к адсорбции белков. Наличие
СА 147 44,1 14,7 4.4 1,5 0,44 фолиевая кислота также придает ему активную способность нацеливания в дополнение к
CDIA 3,51 1,74 0,98 0,91 1,13 1,08 к пассивному нацеливанию, опосредованному эффектами ЭПР, и может использоваться

для опухолеспецифической доставки лекарств. Это позволяет им обходить

aCDI = AB/(A + B). Среди них A и B — активность клеток при использовании каждого препарата.

сам по себе AB представляет собой клеточную активность при сочетании двух препаратов. Когда CDI < 1, два здоровые клетки и, таким образом, уменьшить токсические побочные эффекты DOX.
препараты имеют синергический эффект, CDI = 1, два препарата имеют эффект суперпозиции, когда Мы продолжим проводить соответствующие фармакокинетические исследования in vivo.
CDI > 1 оба препарата обладают антагонистическими эффектами. оценки в наших лабораториях в будущем.

ЗАЯВЛЕНИЕ О НАЛИЧИИ ДАННЫХ

нормальные клетки. Кроме того, для увеличения накопления

препаратов в месте опухоли, чтобы уменьшить побочные эффекты и улучшить Все наборы данных, созданные для этого исследования, включены в

эффективность, стратегия использования ПЭГ в качестве скрытого покрытия очень статья/Дополнительный материал.

эффективный. Он не только обладает гидрофильностью, но и препятствует образованию сыворотки.

белок и мицеллы от связывания, продлевает кровообращение АВТОРСКИЙ ВКЛАД

время носительства в кровеносных сосудах и взаимодействует с ЭПР

эффект и таргетинг фолиевой кислоты для улучшения накопления LA и ZZ разработали работу. JW и JL внесли свой вклад

препаратов в опухолевых очагах. Кроме того, ПЭГ также обладает отличными к экспериментам и коллективным данным. YS и ZZ предусмотрены

безопасность. Эти характеристики заставляют нас использовать ПЭГ в качестве существенная техническая поддержка. LA и JW написали статью.

гидрофильная группа. Все авторы подробно обсуждали результаты,

рукопись и утвердил окончательный вариант рукописи для
быть представлен.
ВЫВОД

Насколько нам известно, концепция основанных на каликсаренах ФИНАНСИРОВАНИЕ

биоактивные носители, описанные в этой статье, были впервые предложены
Наша группа. Вводя функциональные группы, двойственная функция Эта работа была финансово поддержана Национальным природным

можно получить лекарственную нагрузку и биологическую активность. Научный фонд Китая (№ 81202490).

полученное производное каликс[4]арена дает соответствующее

каликсареновые мицеллы путем самосборки. Свойства загрузки и высвобождения ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ МАТЕРИАЛ
лекарственного средства мицелл тесно связаны с
Молекулярная структура каликсарена. В тесте на цитотоксичность Дополнительный материал к этой статье можно найти
мицеллы, нагруженные лекарством, обладают большей противоопухолевой активностью, чем в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fchem.
свободная формула DOX, преодолевающая проблему плохой воды 2019.00732/полный#дополнительный материал

Границы в химии | www.frontiersin.org 12 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732

Machine Translated by Google
Ан и др.
РЕКОМЕНДАЦИИ
Асеведо М.Л., Тео Д., Адамс Д., Никсон А., Цзинцюань Дж., Грейс Л. и др.
(2014). Дазатиниб (BMS-35482) потенцирует активность гемцитабина и доцетаксела в
клеточных линиях лейомиосаркомы. Гинекол.Онкол. Рез. Практика. 1, 1–10. дои:
10.1186/2053-6844-1-2
Ан, Л., Хан, Л.Л., Чжэн, Ю.Г., Пэн, С.Н., Сюэ, Ю.С., Гу, С.К., и др. (2016). Синтез,
рентгеноструктурный анализ и противоопухолевая активность производных
каликс[n]арена полигидроксиамина. Евро. Дж. Мед. хим. 123, 21–30. doi: 10.1016/j.
ejmech.2016.07.016 Ассаф, К.И., и Нау, В.М. (2015). Кукурбитурилы: от синтеза к
высокоаффинному связыванию и катализу. хим. соц. Откр. 44, 394–418. doi: 10.1039/
c4cs00273c Astorgues-Xerri, L., Riveiro, ME, Tijeras-Raballand, A., Serova, M., Rabinovich,
GA, Bieche, I., et al. (2014). Otx008, селективный низкомолекулярный ингибитор галектина-1,
подавляет пролиферацию раковых клеток, инвазию и ангиогенез опухоли. Евро. Дж.
Рак 50, 2463–2477. doi: 10.1016/j.ejca.2014.06.015 Барроу, С.Дж., Касера, С., Роуленд,
М.Дж., Баррио, Дж.Д., и Шерман, О.А. (2015).
Молекулярное распознавание на основе кукурбитурила. хим. Откр. 115, 12320–12406.
дои: 10.17863/CAM.10541
Базилио, Н., Гарсия-Рио, Л., и Мартин-Пастор, М. (2012). ПАВ на основе каликсарена:
свидетельство структурной реорганизации при мицеллообразовании. Ленгмюр САУ J.Surf.
Столкновения 28, 2404–2414. doi: 10.1021/la204004h Бхуния С., Кумар С. и Пуркаястха П.
(2018). Супраструктуры циклодекстрина с привитым нанокластером золота: формирование
наносфер в нанокубы с интригующей фотофизикой. САУ Омега 3, 1492–1497 гг. doi: 10.1021/
acsomega.7b01914 Каллари , М., Де Соуза, П.Л., Равал, А., и Стензел, М.Х. (2017). Влияние
загрузки лекарственным средством на свойства мицелл: твердотельный ЯМР как
инструмент для понимания структуры. Энгью Чем. Междунар. Эд. 56, 8441–8445. doi: 10.1002/
ange.201701471 Cao, J., Su, T., Zhang, L., Liu, R., Wang, G., He, B., et al. (2014). Полимерные
мицеллы с цитраконамидом в качестве ph-чувствительной связи в основной цепи для
доставки противоопухолевых препаратов. Междунар. Дж. Фарм. 471, 28–36. doi: 10.1016/
j.ijpharm.2014.05.010 Чен М.Х., Ли Т., Пэн С. и Тао Д. (2016). Супрамолекулярная нанокапсула
из самосборки амфифильного каликсарена в качестве носителя паклитаксела. Новый J.
Chem. 40, 9923–9929. дои: 10.1039/C6NJ01986B
Чен Ю., Хуанг З., Чжао Х., Сюй Дж. Ф., Сунь З. и Чжан Х. (2017).
Супрамолекулярная химиотерапия: совместное усиление противоопухолевой активности
путем комбинирования контролируемого высвобождения оксалиплатина и потребления
спермина кукурбитом [7]урилом. Приложение ACS Матер. Интерфейсы 9, 8602–8608. дои:
10.1021/acsami.7b01157
Ченг, К., Тенг, К.С., Дин, Ю., Юэ, Л., Ян, К.З., и Ван, Р. (2019).
Наночастицы на основе биспиллар[5]аренов, реагирующие на двойные стимулы, для
точной селективной доставки лекарств в раковые клетки. хим. коммун. 55, 2340–2343. дои:
10.1039/C8CC09432B
Коулман, В. А., Баггетто, Л. Г., Лазар, А. Н., Мишо, М. Х., и Магнар, С. (2007). Производные
каликсарена как противораковые агенты. Патент CA № 20072649836. Gatineau, QC:
Ведомство интеллектуальной собственности.
Коулман, В. А., Баггетто, Л. Г., Лазар, А. Н., Мишо, М. Х., и Магнар, С. (2010). Производные
каликсарена как противораковые агенты. Патент США № 20100056482A1. Вашингтон,
округ Колумбия: Ведомство США по патентам и товарным знакам.
Конте К., Скала А., Сиракузано Г., Сортино Г., Пенниси Р., Пиперно А. и др.
(2016). Наносборки на основе неионного амфифильного циклодекстрина, содержащего
Zn(II)-фталоцианин и доцетаксел: конструкция, физико-химические свойства и
внутриклеточные эффекты. Коллоидный прибой. Б Биоинтерфейсы. 146, 590–597. doi:
10.1016/j.colsurfb.2016.06.047 Коро, К., Роберт, П., Иди, Дж. М., и Порт, М. (2006). Последние
достижения в технологии нанокристаллов оксида железа для медицинской визуализации.
Доп. Доставка наркотиков, Rev. 58, 1471–1504. doi: 10.1016/j.addr.2006.09.013
Дингс, Р.П.М., Левин, Дж.И., Браун, С.Г., Асторг-Ксерри, Л., Макдональд, Дж.Р., Хойе, Т.Р., и
другие. (2013). Поликатионный каликсарен ptx013, мощный цитотоксический агент против
опухолей и лекарственно-устойчивого рака. Инвестировать. Новые наркотики. 31, 1142–
1150. дои: 10.1007/s10637-013-9932-0
Дингс Р.П.М., Миллер М.С., Несмелова И., Асторг-Ксерри Л., Кумар Н., Серова М. и др. (2012).
Противоопухолевый агент каликсарен 0118 нацелен на человеческий галектин-1 как на
аллостерический ингибитор связывания углеводов. Дж. Мед. хим. 55, 5121–5129. doi:
10.1021/jm300014q Duan, Q., Cao, Y., Li, Y., Hu, X., Xiao, T., Lin, C., et al. (2013). рН-
чувствительные надмолекулярные везикулы на основе водорастворимого пиллар[6]арена и
Границы в химии | www.frontiersin.org
Противораковый эффект мицелл каликсарена
производное ферроцена для доставки лекарств. Варенье. хим. соц. 135, 10542–10549.
doi: 10.1021/ja405014r Фахми, С.А., Понте, Ф., Абд Эль-Рахман, М.К., Руссо, Н., Сицилия,
Э., и Шойб, Т. (2017). Исследование комплексообразования «хозяин-гость» между 4-
сульфокаликс[4]ареном и недаплатином для потенциального использования в
доставке лекарств.
Спектрохим. Акта А 193, 528–536. doi: 10.1016/j.saa.2017.12.070 Gallego-
Yerga, L., Lomazzi, M., Franceschi, V., Sansone, F., Mellet, CO, Donofrio, G., et al. (2015).
Поликатионные амфифилы на основе циклодекстрина и каликсарена как системы
доставки генов: исследование взаимосвязи структура-активность.
Орг. биомол. хим. 13, 1708–1723 гг. дои: 10.1039/c4ob02204a
Гальски, М.Д., Стенсланд, К.Д., Мошир, Э., Сфакианос, Дж.П., Макбрайд, Р.Б., Цао, К.К., и
соавт. (2016). Эффективность адъювантной химиотерапии при местнораспространенном
раке мочевого пузыря. Дж. Клин. Онкол. 34, 825–832. doi: 10.1200/JCO.2015.64.1076
Goddard, ED, Turro, NJ, Kuo, PL, and Ananthapadmanabhan, KP (1985).
Флуоресцентные зонды для определения критической концентрации мицеллообразования.
Ленгмюр 1, 352–355. doi: 10.1021/la00063a015 Гомеш-да-Силва, Л.С., Фонсека, Н.А., Моура,
В., де Лима, МКП, Симоес, С., и Морейра, Дж. Н. (2012). Наночастицы на основе липидов для
доставки миРНК в терапии рака: парадигмы и проблемы. Акк. хим. Рез. 45, 1163–1171. doi:
10.1021/ar300048p Го, Д.С., и Лю, Ю. (2014). Супрамолекулярная химия п-
сульфонатокаликс[n]аренов и ее биологические приложения. Акк. хим. Рез. 47, 1925–1934.
doi: 10.1021/ar500009g Guo, ST, Wang, YH, Miao, L., Xu, ZH, Lin, CM, Zhang, Y., et al. (2013).
Наночастицы цисплатина, покрытые липидами, вызывают соседний эффект и проявляют
повышенную противораковую эффективность. АСУ Нано 7, 9896–9904. дои: 10.1021/
nn403606m
Гупта С., Махешвари А., Параб П., Маханшетти У., Хавалдар Р., Шастри С. и др. (2018).
Неоадъювантная химиотерапия с последующей радикальной операцией по сравнению с
сопутствующей химиотерапией и лучевой терапией у пациентов с плоскоклеточным
раком шейки матки стадии IB2, IIA или IIB: рандомизированное контролируемое
исследование. Дж. Клин Онкол. 36, 1548–1555. doi: 10.1200/Jco.2017.75.9985
Гутше, К.Д., Икбал, М., и Стюарт, Д. (1986). каликсарены. 19. Методы синтеза п-трет-
бутилкаликс[4]арена. Дж. Орг. хим. 51, 742–745. дои: 10.1021/jo00355a033
Хоссен, С., Хоссейн, М.К., Башер, М.К., Миа, М.Н.Х., Рахман, М.Т., и Уддин, М.Дж. (2019). Умные
системы доставки лекарств на основе наноносителей для лечения рака и исследований
токсичности: обзор. Дж. Адв. Рез. 15, 1–18. doi: 10.1016/j.jare.2018.06.005
Хуанг, X., Ву, С., Кэ, X., Ли, X., и Ду, X. (2017). Системы доставки лекарств из мезопористого
диоксида кремния с фосфонированным столбом[5]ареном. Приложение ACS Матер.
Интерфейсы 9, 19638–19645. дои: 10.1021/acsami.7b04015
Айзекс, Л. (2014). Системы, реагирующие на стимулы, сконструированы с использованием
молекулярных контейнеров типа кукурбит[n]урила. Акк. хим. Рез. 47, 2052–2062 гг.
doi: 10.1021/ar500075g Кумбхат, С., и Сингх, У. (2018). Калийселективный
электрохимический сенсор на основе самособирающегося монослоя,
функционализированного краун-эфиром. Дж. Электроанал.
хим. 809, 31–35. doi: 10.1016/j.jelechem.2017.12.051
Ли, Б., Мэн, З., Ли, К., Хуанг, X., Канг, З., Донг, Х., и соавт. (2017). Система доставки лекарственного
средства на основе комплексообразования, реагирующая на рН, для оксалиплатина. хим.
науч. 8, 4458–4464. дои: 10.1039/C7SC01438D
Li, XX, Chen, J., Shen, JM, Zhuang, R., Zhang, SQ, Zhu, ZY, et al. (2018). рН-чувствительные
наночастицы как умные носители для селективной внутриклеточной доставки лекарств в
опухоль. Int J Pharmaceut. 545, 274–285. doi: 10.1016/j.ijpharm. 2018. 05.012
Лян, К., Чанг, Дж. Э., Гао, С. Дж., Йонгвонгсонторн, Н., и Курисава, М. (2018). Сильно
увеличенная лекарственная нагрузка и стабильность мицеллярных нанокомплексов,
состоящих из доксорубицина и конъюгата поли(этиленгликоль)-катехин зеленого
чая, для лечения рака. Доп. Матер. 30:e1706963.
doi: 10.1002/adma.201706963
Лю Дж., Гонг Т., Ван К.Г., Чжун З.Р. и Чжан З.Р. (2007).
Твердые липидные наночастицы, нагруженные инсулином с помощью смешанных
мицелл на основе холата натрия и фосфатидилхолина: получение и характеристика.
Междунар.
Дж. Фармацевт. 340, 153–162. doi: 10.1016/j.ijpharm.2007. 03.009
Лившиц З., Рао Р.Б. и Смит С.В. (2014). Подход к токсичности, связанной с химиотерапией .
Эмердж. Мед. клин. Н. Ам. 32, 167–203. doi: 10.1016/j.emc.2013.09.002
13 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732
Machine Translated by Google
Ан и др.
Лу, Дж., Оуэн, С.К., и Шойхет, М.С. (2011). Стабильность самособирающихся полимерных
мицелл в сыворотке крови. Макромолекулы 44, 6002–6008. doi: 10.1021/ma200675w
Lu, Y., Hu, Q., Lin, Y., Pacardo, DB, Wang, C., Sun, W., et al. (2015).
Трансформируемая жидкометаллическая наномедицина. Нац. коммун. 6, 10066–
10075. дои: 10.1038/ncomms10066
Макин, Г. (2014). Принципы химиотерапии. J. Педиатрия Детское здоровье. 24,
161–165. doi: 10.1016/j.paed.2013.09.002
Моханрадж, В. Дж., и Чен, Ю. (2006). Наночастицы-обзор. Троп. Дж. фарм. Рез.
5, 561–573. дои: 10.4314/tjpr.v5i1. 14634
Мюррей Дж., Ким К., Огоши Т., Яо В. и Гибб Британская Колумбия (2017). Водная
супрамолекулярная химия кукурбит[n]урилов, пиллар[n]аренов и глубокополостных
кавитандов. хим. соц. Откр. 46, 2479–2496. doi: 10.1039/C7 CS00095B Нархеде Н.,
Уттам Б., Канди Р. и Рао К.П. (2018). Гибридный композит диоксида кремния и каликса
аллилкаликс[4]арена, ковалентно связанный с наночастицами MCM-41, для
замедленного высвобождения доксорубицина в раковые клетки. АСУ Омега. 3, 229–
239. doi: 10.1021/acsomega.7b01852 Насир М.М., Ахмед М. и Хамид С. (2017).
Функционализированные каликс[4]арены как потенциальные терапевтические агенты[J].
хим. биол. Препарат Дез. 89, 243–256.
дои: 10.1111/cbdd.12818
Неагу, М., Ион, Р.М., Манда, Г., Константин, К., Раду, Э., и Кристу, З. (2010).
Противоопухолевый эффект каликсаренов при экспериментальной фотодинамической терапии
опухолевых клеток линии к562. ПЗУ. Дж. Биохим. 47, 17–35.
Оун, Р., Флориано, Р.С., Айзекс, Л., Роуэн, Э.Г., и Уит, Нью-Джерси.
(2014). Нейротоксическая, миотоксическая и кардиотоксическая активность ex vivo
макроциклических средств доставки лекарств на основе кукурбитурила. Токсикол. Рез. 3, 447–
455. doi: 10.1039/c4tx00082j Пальма, Р., Де Питерс, С., Ван Баел, М.Дж., Ван ден Рул, Х., Бонрой,
К., и Лорейн, В., и др. (2007). Замена силанового лиганда, чтобы сделать гидрофобные
суперпарамагнитные наночастицы диспергируемыми в воде. хим. Матер. 19, 1821–1831 гг. doi:
10.1021/cm0628000
Панджа С., Гош С. и Гош К. (2018). Пиридин/пиридиновые симметричные бисамиды как
функциональные материалы: агрегация, селективное восприятие и высвобождение лекарств.
Новый J. Chem. 42, 6488–6497. дои: 10.1039/C7NJ03931J
Паз, Х., Джу, Э.Дж., Чоу, Ч.Х., Фей, Ф., и Хейстеркамп, Н. (2018). Лечение острого
лимфобластного лейкоза предшественника В-клеток ингибитором галектина-1
ptx008. Дж. Эксп. клин. Канк. Рез. 37, 67–81. doi: 10.1186/s13046-018-0721-7 Пламб,
Дж.А., Венугопал, Б., Оун, Р., Гомес-Роман, Н., Кавазо, Ю., Венкатараманан, Н.С., и соавт.
(2012). Цисплатин, инкапсулированный кукурбит[7]урилом, преодолевает
резистентность к цисплатину за счет фармакокинетического эффекта. Металломика
4, 561–567. doi: 10.1039/c2mt20054f Pu, YJ, Chang, S., Yuan, H., Wang, G., He, B., and Gu,
ZW (2013).
Противоопухолевая эффективность дендримеров поли(L-глутаминовой кислоты) с
полиэдрическими олигомерными силсесквиоксановыми ядрами. Биоматериалы 34,
3658–3666. doi: 10.1016/j.biomaterials.2013.01.082 Pyrz, WD, and Buttrey, DJ (2008).
Определение размера частиц с помощью ПЭМ: обсуждение получения и анализа
изображений для начинающего микроскописта.
Ленгмюр 24, 11350–11360. doi: 10.1021/la801367j Qi, C.,
Zhu, YJ, Zhao, XY, Lu, BQ, Tang, QL, Zhao, J., et al. (2013).
Высокостабильные пористые наносферы из аморфного фосфата кальция: быстрый синтез с
помощью микроволнового излучения с использованием АТФ в качестве источника и
стабилизатора фосфора и их применение для доставки противоопухолевых препаратов. хим.
Евро. Ж. 19, 981–987. doi: 10.1002/chem.201202829
Границы в химии | www.frontiersin.org
Противораковый эффект мицелл каликсарена
Шах, Б.П., Паскуале, Н., Де, Г.Дж., Тан, Т., Ма, Дж.Дж., и Ли, К.Б.
(2014). Пептидная терапия на основе наночастиц ядро-оболочка и комбинированная
гипертермия для усиления апоптоза раковых клеток. АСУ Нано 8, 9379–9387.
doi: 10.1021/nn503431x
Стелла Б., Арпикко С., Пераккиа М.Т., Десмаэле Д., Хоебеке Дж., Ренуар М. и др. (2000).
Дизайн наночастиц, конъюгированных с фолиевой кислотой, для нацеливания
лекарств. Дж. Фарм. Наука. 89, 1452–1464. doi: 10.1002/1520-6017(200011)89:11<1452::AID-
JPS8>3.0.CO;2-P Таката К., Кавахара К., Ёсида Ю., Кудзуя А. и Ойя Ю. (2017). Анализ
поведения термочувствительных полимерных систем для инъекций при переходе от
золя к гелю с помощью резонансного переноса энергии флуоресценции. Полим. Ж.
49, 677–684. doi: 10.1038/pj.2017.33 Уит, Н.Дж., Диксон, К.А., Ким, Р.Р., Нематоллахи,
А., Маккарт, Р.Б., Кайзер, В., и соавт. (2016). Комплексы «хозяин-гость»
карбоксилированных пиллар[н]аренов с лекарственными средствами. Дж. Фарм. науч.
105, 3615–3625. doi: 10.1016/j.xphs.2016.09.008 Уайтхед, К.А., Лангер, Р., и Андерсон,
Д.Г. (2009). Сбивая барьеры: достижения в доставке миРНК. Нац. Преподобный Друг
Дисков. 8, 129–138. дои: 10.1038/nrd2742
Юсаф, А., Хамид, С.А., Буннори, Н.М., и Ишола, А.А. (2015). Применение каликсаренов в
химиотерапии рака: факты и перспективы. Разработчик дизайна лекарств.
тер. 9, 2831–2838. DOI: 10.2147/DDDT.S83213
Чжан, Л., Пэн, Г.Т., Ли, Дж.С., Лян, Л.Дж., Конг, З., Ван, Х.
Б. и др. (2018). Молекулярно-динамическое исследование конфигурации и
расположения доксорубицина в углеродных нанотрубках. Дж. Мол. жидкость 262,
295–301. doi: 10.1016/j.molliq.2018.04.097 Zhang, X., Zong, W., Wang, J., Dong, M., Cheng,
W., Sun, T., et al. (2019).
Мультикомпартментальные везосомы, содержащие липосомы, нагруженные dox, и
липосомы, нагруженные 5FU, для синергетического лечения опухолей. Новый J.
Chem. 43, 4895–4899. doi: 10.1039/c9nj00238c Чжан Ю., Саттерли А. и Хуанг Л. (2012).
Доставка генов in vivo невирусными векторами: преодоление препятствий? Мол. тер.
20, 1298–1304.
doi: 10.1038/mt.2012.79
Чжао З.М., Ван Ю., Хань Дж., Чжу Х.Д. и Ан Л. (2015). Получение и характеристика амфифильных
наночастиц каликсарена в качестве носителей для доставки паклитаксела. хим. фарм. Бык. 63,
180–186. doi: 10.1248/cpb.c14-00699 Чжоу Дж., Юй Г. и Хуанг Ф.Х. (2017). Супрамолекулярная
химиотерапия, основанная на молекулярном распознавании «хозяин-гость»: новая стратегия в
борьбе с раком со светлым будущим. хим.соц. Откр. 46, 7021–7053. doi: 10.1039/C6CS00898D
Чжоу Ю., Ли Х. и Ян Ю.В. (2015). Системы контролируемой доставки лекарств на основе
каликсаренов. Подбородок. хим. лат. 26, 825–828. doi: 10.1016/j.cclet.2015.01.038
Конфликт интересов: Авторы заявляют, что исследование проводилось в
отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как
потенциальный конфликт интересов.
Copyright © 2019 Ан, Ван, Лю, Чжао и Сун. Это статья с открытым доступом,
распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY).
Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии
указания оригинального автора(ов) и владельца(ей) авторских прав и при условии цитирования
оригинальной публикации в этом журнале в соответствии с общепринятой академической практикой.
Запрещается использование, распространение или воспроизведение, если это не соответствует этим
условия.
14 Ноябрь 2019 | Том 7 | Статья 732