- Guio da Apresentao: Criopreservao de Ocitos INTRODUO

Actualmente, existem vrios mtodos com a finalidade de se preservar a fertilidade feminina: como por exemplo, a criopreservao de embries, uma tcnica bastante conhecida actualmente, e a criopreservao de tecidos do ovrio, uma tcnica mais recente e relativamente menos conhecida, desenvolvida nos ltimos meses por um grupo de cientistas japoneses, entre outras. A criopreservao de ocitos surgiu cerca de 30 anos, como uma nova alternativa s mulheres que desejavam preservar a sua fertilidade, sendo portanto uma tcnica ainda muito recente. Contudo, desde do primeiro relato do nascimento duma criana a partir de criopreservao dum ocito humano, em 1983, at aos dias de hoje, j se realizaram mais de 5000 nascimentos atravs desta tcnica. Actualmente, a criopreservao de ocitos tem sido considerada uma tcnica experimental bastante atractiva, devido ao facto de no necessitar de qualquer cirurgia. Alm disto, este mtodo no possui as implicaes ticas, religiosas e legais referentes ao congelamento de embries. As suas grandes desvantagens so ainda o seu elevado custo, e o facto do seu nvel de sucesso ainda no ser muito elevado.

CRIOPRESERVAO LENTA DE OCITOS

So actualmente utilizadas duas tcnicas de criopreservao de ocitos: a criopreservao lenta e a vitrificao. Trounson e Mohr foram os primeiros cientistas a procederem congelao lenta de ocitos humanos, em 1983. Contudo, ao longo dos anos, este mtodo sofreu vrios avanos no seu manuseio, tendo ganho nos ltimos anos alguma aprovao pela comunidade mdico-cientfica. Esta tcnica baseia-se na exposio de ocitos II a baixas concentraes de crioprotectores (substncias que substituem a gua presente no ocito), num perodo de tempo varivel entre 120 a 180 minutos. uma tcnica em que necessrio manter o equilbrio de vrias concentraes, utilizando para isso baixas concentraes de crioprotectores, e controlando a formao de gelo intracelular.

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Neste processo, o ocito II, aps um perodo de equilbrio que dura cerca de 5 minutos, resfriado lentamente a uma velocidade de 2C por minuto, at 4C a 9C, mantendo-se nesta temperatura por um curto perodo de tempo (10 a 15 minutos) para a estabilizao trmica e realizao do seeding (uma induo artificial da cristalizao do gelo), o que previne o superresfriamento e a rpida desidratao celular. Em seguida, a amostra continua a ser arrefecida lentamente, a uma velocidade de 0,3C/min. Ocorre um aumento dos cristais de gelo na parte extracelular e o aumento da concentrao de soluto dentro da clula, o que causa uma lenta desidratao osmtica das clulas. Uma vez atingida a desidratao celular ideal (entre 30C a 80C), os ocitos so colocados em azoto no estado lquido, a uma temperatura de - 196C. No entanto, quando os ocitos so retirados do corpo das mulheres para serem criopreservados, encontram-se, como sabem, na metafase da segunda diviso meitica. Assim, devido ao grande volume da clula, elevada concentrao de gua no seu interior e disposio dos cromossomas (que se encontram alinhados pelo fuso acromtico no plano equatorial da clula), esta torna-se mais susceptvel formao de cristais de gelo no seu interior, durante o processo de congelamento. O efeito de chilling assim o maior obstculo para o sucesso da criopreservao de ocitos, e ocorre quando a membrana do ocito II se submete transio do estado lquido para o estado slido, no momento em que a temperatura varia entre os +5C e os -15C. Este efeito pode levar ocorrncia de alteraes na camada fosfolipdica da membrana da clula, assim como dos microtbulos do fuso acromtico e da organizao do citoesqueleto, e originar o endurecimento da zona pelcida que envolve o ocito. De modo a evitar este efeito possvel realizar-se algumas alteraes na tcnica de criopreservao lenta, como alterar-se as concentraes de sacarose, ou a temperatura inicial da criopreservao. Pode-se tambm utilizar meios de cultura com baixa concentrao de sdio, bem como uma injeco intracelular crioprotectora. Por fim, o uso da tcnica de ICSI (uma microinjeco dum espermatozide directamente no citoplasma do ocito) contribuiu tambm para o aumento da taxa de fertilizao, uma vez que soluciona a questo do endurecimento da zona pelcida, causado pelo congelamento. Contudo, esta tcnica contm ainda baixas taxas de sucesso, devido perda de muito material citoplasmtico e consequente reduo do tamanho das clulas. Alm disso, a exposio aos crioprotectores e a possvel formao de cristais de gelo costumam levar morte celular (lise celular).

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VITRIFICAO DE OCITOS

A tcnica da vitrificao de ocitos uma tcnica muito semelhante criopreservao lenta, mas com a principal vantagem da durao da congelao, uma vez que com este mtodo, a congelao dos ocitos pode atingir a temperatura de cerca de 196C, em menos de um segundo. Isto evita a formao dos cristais de gelo, que podem danificar o ocito e diminuir ou at mesmo eliminar a sua capacidade reprodutiva. assim, actualmente a tcnica de criopreservao mais recente. Para a realizao deste tratamento, necessria uma estimulao hormonal, de forma a que o ovrio possa desenvolver mais ocitos, a fim de estes serem armazenados numa maior quantidade, e assim poder ser alcanado um maior grau de sucesso. Depois da extraco dos ocitos, passa-se ao processo de vitrificao, em que os ocitos ficam armazenados em azoto lquido, com uma elevada concentrao de crioprotectores. Estes crioprotectores so tambm utilizados na tcnica de criopreservao lenta, mas neste caso a sua concentrao mais elevada. Este facto, juntamente com a elevada velocidade do congelamento, evita a formao dos cristais de gelo que danificam as estruturas internas dos ocitos. Depois de congelados e armazenados, os ocitos podem manter-se assim durante o perodo de tempo que a paciente desejar ou necessitar, no existindo ainda nenhum conhecimento sobre o limite temporal mximo deste tipo de vitrificao. Por fim, quando a paciente desejar ser me, d-se o processo de desvitrificao dos ocitos armazenados. A desvitrificao o processo contrrio ao congelamento, numa tcnica que os ocitos voltam rapidamente atingir os 37C. A principal desvantagem do processo de vitrificao a existncia de grandes concentraes de crioprotectores, que podem tornar-se txicos. Por isso, actualmente diminui-se essa concentrao, uma vez que a velocidade do congelamento, juntamente com os crioprotectores, mesmo em concentraes mais baixas, j evita a criao dos cristais de gelo no ocito.
QUEM RECORRE E QUEM PODE RECORRER A ESTAS TCNICAS?

Nas ltimas dcadas tem-se observado um grande avano no tratamento das doenas oncolgicas com o auxlio da quimioterapia, da radioterapia e do transplante de medula ssea. Graas a estes tratamentos, as taxas de cura de algumas doenas oncolgicas tm ultrapassado os 90%. Contudo, tanto a quimioterapia como a radioterapia possuem como possvel efeito secundrio a perda irreversvel da fertilidade nas mulheres. No entanto, grande parte das
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mulheres em idade frtil com cancro desconhece as alternativas existentes preservao da sua fertilidade, antes de se submeterem a estes tratamentos. Apenas as pacientes com cancro da mama no se devm candidatar ao congelamento de ocitos ou de embries, devido necessidade de se submeterem a um estmulo ovariano, o que iria aumentar a quantidade de estrognios no organismo, com o consequente aumento do tumor primrio. Para alm disso, tem-se tambm observado uma tendncia natural e progressiva do adiamento da maternidade por parte das mulheres, quer seja por no terem ainda companheiro, quer por razes profissionais (de quererem subir primeiro na carreira, antes de se dedicarem em pleno famlia).

ESTUDOS CLNICOS Nmero de gestaes concludas 54.7% 34.0% 45.5%

Idade da Me % Por criopreservao de ocitos 52.5 <35 N 122 % 42.0 35-37 N 100 % 33.3

< 35 anos > 35 anos Mdia de todas as pacientes

38-39 N 69 % 30.8 40-42 N 52 % 18.2 43-44 N 11 % 0.0 >44 N 6

Idade da Me Por criopreservao de ocitos

Mdia dos valores % 40.8 N 360

<35 Idade da Me % nico beb Gmeos Trigmeos 53.1 42.2 4.7 N 34 27 3 %

35-37 N 27 14 1 %

38-39 N 16 7 0 %

40-42 N 10 6 0 %

42-44 N 2 0 0 % 0 0 0

>44 N 0 0 0

64.3 33.3 2.4

69.6 30.4 0.0

62.5 37.5 0.0

100.0 0.0 0.0

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Idade da Me nico beb Gmeos Trigmeos

Mdia dos valores % 60.5 36.7 2.7 N 89 54 4

Taxa de gestaes completas

60 52,5 50 40,8 40 30 20 10 0 Mdia dos Valores <35 35-37 38-39 40-42 43-44 0 >44 18,2 42 33,3 30,8

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120 100 80 60 100 40 60,5 20 0 Mdia das idades <35 35-37 38-39 40-42 43-44 0 >44 53,1 64,3 69,6 62,5 0 30,4 0 37,5 0

2,7 36,7

4,7

2,4 33,3

42,2 Trigmeos Gmeos nico beb

PREOS DOS TRATAMENTOS

Ferticentro Centro de Estudos de Fertilidade Portugal - 220,00, fora o custo das consultas e da medicao

Bridge The London Bridge Fertility, Gynaecology and Genetics Centre Inglaterra - 2.050, com consultas e medicao includa, assim como uma criopreservao por 10 anos.
CONCLUSO

Inicialmente, a tcnica de criopreservao de ocitos foi posta de lado, devido grande superioridade da preservao de embries por meio de congelao. Segundo o Comit de tica da Sociedade Americana de Medicina Reprodutiva de 2008, o nico mtodo bem estabelecido como seguro e eficaz para a preservao da fertilidade a criopreservao de embries. Contudo, com o desenvolvimento de novas tecnologias no congelamento, como a vitrificao de ocitos, alm da melhoria das tcnicas, foi dada novamente ateno ao estudo dos ocitos para esta finalidade. Assim, recentemente, entre 2008 e 2010, vrios estudos tm demonstrado taxas cada vez maiores de sobrevivncia oocitria ps-descongelamento, fertilizao e gravidez. Contudo, existe ainda um longo caminho a ser percorrido at este mtodo ser plenamente incorporado na prtica clnica corrente.

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