MICROBIOLOGIA DEFINICIONES GENERALES PATOGENO (del griego pats= dolencia).

Dcese de los elementos y medios que originan y desarrollan las enfermedades. PARASITISMO: Hbito de los que viven a expensas de otros a manera de parsito. Beneficio de uno de los organismos con perjuicio del otro. PARASITOLOGIA: Parte de la Biologa que trata de los seres parsitos. HONGO: Cualquiera de las plantas talofitas sin clorofila, de tamao muy variado y reproduccin perfectamente asexual por esporas, que son parsitos que viven sobre materia orgnica en descomposicin, su talo ordinariamente filamentoso y ramificado que absorbe los principios orgnicos nutritivos que existen en el medio. SAPROFITO: Dcese de las plantas que viven a expensas de materia orgnica en descomposicin. COMENSALISMO: Con este trmino nos referimos a la asociacin mutua pero casi indiferente entre bacterias y organismos superiores. PATOGENICIDAD: Grado de producir enfermedad. PARASITO: Es aquel microorganismo que vive a expensas de su husped. BACTERIA: Organismo unicelular, microscpico, sin clorofila y sin ncleo pero con grnulos de cromatina dispersos en el protoplasma, a veces con flagelos o cilios mediante los cuales se mueven en un medio lquido y muchas de sus especies vive en aguas dulces o marinas, abundantes en las sustancias orgnicas en putrefaccin. HUESPED: Organismo de mayor tamao en el cual otro de menor tamao puede desarrollarse sobre la superficie o en los tejidos de los primeros. SIMBIOSIS: Describe la ntima asociacin entre dos clases de organismos; si se benefician ambas partes de las relaciones establecidas, el tipo de simbiosis as creada recibe el nombre de MUTUALISMO. VIRULENCIA: Es el trmino que se usa para designar el poder patgeno de un microorganismo en particular y especialmente de una cepa especfica. ANTIGENO: Es aquel que induce al organismo a producir la formacin de un anticuerpo.

BACTERIOLOGIA: Rama de la Biologa que estudia las bacterias, su forma, estructura antignica, reproduccin, fisiologa, metabolismo e identificacin, como estn distribuidos en la naturaleza, sus relaciones con otros seres, los efectos benficos y perjudiciales que ejercen sobre el humano y las alteraciones fsicas y qumicas que provocan en su medio. ENDEMICO: Enfermedad o agente etiolgico que se presenta de manera constante o prevalece en una poblacin o zona geogrfica. EPIDEMICO: Enfermedad de morbilidad alta que solo se presenta de cuando en cuando en una comunidad humana o estacin en que predomina ampliamente cualquier enfermedad en particular. PANDEMIA: Endemia de amplia distribucin geogrfica. HISTORIA DE LA MICROBIOLOGIA La historia de la Microbiologa se remonta a muchos siglos atrs, como lo demuestra el hallazgo de restos fsiles de bacterias en estratos rocosos con antigedad de 33 millones de aos. La civilizacin GRIEGA se remonta al ao 3,400 AC. El estudio del periodo cnosiano o minoico (1850 1400 A.C.) descubre prueba de la existencia de dispositivos sanitarios, de ventilacin, desages y letrinas, incluyendo algunos mtodos que superan a cualquiera de los construidos hasta el siglo XIX. Los templos situados cerca de los manantiales y de colinas boscosas se utilizaban como sanatorios y casas de salud. Con la entrada de Hipcrates (460 377 A.C.) en la escena de la medicina, empez una nueva era del pensamiento cientfico y se introdujo el mtodo experimental en la ciencia mdica. Hipcrates atribuy la enfermedad a trastornos de los fluidos vitales del cuerpo; dividi las enfermedades en cuatro clases: agudas, crnicas, endmicas y epidmicas; seal la importancia del agua hervida para las heridas infectadas, de la limpieza de las manos y las uas del mdico y de la aplicacin de apsitos medicinales alrededor de las heridas. Universalmente Hipcrates es considerado El padre de la medicina y el Fundador de la tica mdica. Empdocles (450 A.C.) desec pantanos y reprimi el paludismo en Sicilia. Aristfanes (422 A.C.) describi el paludismo. El periodo EGIPCIO. La medicina egipcia fue muy progresista y quienes las practicaban saban mucho acerca de la sanidad. En el ao 4000 A.C. se practicaba ya en gran medida la circuncisin. Una momia que data de 1000 aos A.C. descubierta por Elliott Smith presenta signos de tuberculosis vertebral (con apfisis prominentes y vrtebras distorsionadas).

Los antiguos HEBREOS probablemente en poca tan remota como el ao 1500 A.C. fueron los fundadores de la jurisprudencia mdica (aplicacin cientfica de los conocimientos de las leyes mdicas) y de la profilaxis. El libro levtico contiene las ms estrictas disposiciones con respecto a la purificacin de las mujeres despus del parto, la higiene de la menstruacin, la prevencin de las enfermedades contagiosas, el contacto con los objetos sucios, la necesidad de aislamiento y la desinfeccin para el control de enfermedades como la peste, la sarna, el carbunco, el tracoma, la tsis y la sfilis. La difteria, la lepra, la gonorrea y la leucorrea eran conocidas. Los antiguos HINDES. En el sanscrito primitivo, en 1500 A.C., se hace referencia a exorcismos contra los demonios, las brujas y los hechiceros de las enfermedades. En el ao 368 de la era cristiana existan hospitales en la India y Ceiln. El susrata (siglo V) describe 1120 enfermedades tanto naturales como sobrenaturales. El paludismo era atribuido a los mosquitos, y se aconsejaba a las personas que abandonaran sus hogares cuando las ratas cayeran del techo probablemente por la peste. En el captulo del susrata sobre obstetricia hay una seccin sobre higiene y nutricin infantil. Periodo GRECOROMANO (146 A.C. a 476 D.C.) Despus de la destruccin de Corinto (146 A.C.) la medicina griega emigra a roma, donde 10,000 personas haban muerto diariamente de peste durante una epidemia. Claudio Galeno (201 130 A.C.) hizo referencia a las falsas membranas encontrados en los casos de difteria. Virgilio (70 19 A.C.) escribi sobre medicina veterinaria y describi el carbunco de las ovejas y su transmisibilidad. La antigua medicina CHINA fue puramente legendaria hasta el advenimiento de la dinasta Han, cuando se escribieron los primeros libros de medicina. Durante el siglo III A.C. se registraron casos clnicos. En la poca de Confucio se conoci la rabia en china y los antiguos chinos tenan conocimiento acerca de la prevencin de la viruela, los cuales les llegaron probablemente de la India. Es sabido que las referencias a la sfilis y a la gonorrea se remonta a la dinasta ming (1368 D.C.). La medicina en LA EDAD MEDIA. Durante este periodo la medicina sufri un tremendo retroceso, ya que la progresista medicina romana y griega fue remplazada, alrededor del ao 400 de la era cristiana, por la supersticin. Se quemaban las brujas en lugar de hervir el agua. En consecuencia, la suciedad, la pestilencia y la peste volvieron a imperar hasta el siglo XVIII. EL PERIODO MEDIEVAL. Durante la edad media, la humanidad fue azotada por enfermedades epidmicas. La lepra se hizo endmica hacia el ao 1300, haciendo pensar en la necesidad de hospitalizacin. La muerte negra (peste bubnica) caus entre 1348 y 1350 la muerte de una cuarta parte de la poblacin mundial, matando a 60 millones de personas. Otras pandemias entre las que se encontraba la lepra, el fuego de san Antonio (Erisipela), el mal del sudor (probablemente la influenza) y la sfilis sugirieron que algunas enfermedades deban ser contagiosas. En 1348 la repblica veneciana tuvo los primeros empleados en salud pblica para

apartar a los barcos infectados y despus estableci la cuarentena en las zonas infectadas. El vinagre se us como antisptico. EL RENACIMIENTO (1453 1600) combati la medicina espiritualista con el sistema mdico griego y con un mayor conocimiento de la qumica. Paracelso (1493 1541) registr 5 causas de enfermedad: csmica, predisposicin, psquica, venenos e intervencin divina. La viruela, el tifo y el sarampin aparecieron desde 1493 a 1570. La fiebre tifoidea o fiebre de la crcel, como era llamada, caus una mortalidad aterradora que barri con millones, destruyendo con frecuencia comunidades enteras. La evolucin del Microscopio. Se atribuye a Roger Bacon (1212 1294) haber hecho las primeras lentes simples. En holanda, en 1590, Zacaras Janssen fue tal vez el primero en producir un sistema compuesto de lentes. Atanasio Kircher (1601- 1680), sacerdote jesuita, ide un implemento primitivo de ampliacin, en el cual pudo haber visto bacterias. Las primeras observaciones notables sobre las bacterias fueron registradas en 1675 por Antn Van Leeuwenhoek (1632 1723). Con un instrumento ptico hecha con una lente biconvexa, Leeuwenhoek descubri bacterias en diversos lquidos del cuerpo, en el agua y en las infusiones de pimienta, as como las levaduras de cerveza. El descubrimiento del microscopio abri un nuevo y amplsimo campo para el estudio de la causa de la fermentacin y de las enfermedades. LA DOCTRINA DE LA GENERACION ESPONTANEA. Durante mucho tiempo se crey que las cosas vivas eran generadas espontneamente y se transcurri casi un siglo antes que el mundo quedara convencido de que todos los seres vivos deben tener progenitores vivos. Francesco Redi (1623 1697) cubri un trozo de carne con gasa para evitar que las moscas pusieran en ella sus huevos. La observacin de que la carne protegida no se descompona, en tanto que la no cubierta sufra descomposicin y en ella pululaban las larvas, demostr de una manera concluyente que las larvas se desarrollaban a partir de los huevos de las moscas, pero fueron necesarias muchas investigaciones ms del mismo orden para hacer tambalearse la teora de la generacin espontnea. Lazaro Spallanzani (1729 1799) tap hermticamente unos matraces con infusiones de material orgnico, hirvindolas despus; observ que quedaban libres de organismos vivos y sin seales de descomposicin. Al argumento de sus oponentes de que la ebullicin produca cambios qumicos que haca imposible la generacin espontnea, replic demostrando que los microorganismos se desarrollaban si las infusiones calentadas eran expuestas de nuevo al aire. Experimentos posteriores de Schulze en 1836 y de Schroeder y Von Dusch en 1854 aportaron nuevas pruebas pero muchos siguieron dudando. Schulze hirvi infusiones e hizo pasar despus aire a travs de cido sulfrico concentrado y no encontr organismo vivo alguno. Schawnn hizo pasar aire calentado a una temperatura suficientemente alta para destruir a los grmenes y no hubo descomposicin. Schroeder y Von Dusch colocaron tapones de algodn en los frascos de soluciones hervidas y observaron el mismo resultado.

El golpe ms duro a los defensores de la generacin espontnea la dio Louis Pasteur en 1860. Con matraces a los que haba estirado en forma de U, logr demostrar que la contaminacin solo tiene lugar por el acceso de aire cargado de organismos vivos. Con este dispositivo, las bacterias del polvo contenido en el aire entraban por el extremo abierto del tubo en U, pero no podan pasar a la seccin ascendente y al lquido del matraz y as los matraces quedaban sin contaminar. LA TEORIA DEL GERMEN DE LA ENFERMEDAD. La diseminacin de las enfermedades haba sido atribuida por algunos a vapores desprendidos de las personas infectadas (teora miasmtica) y por otras causas divinas. Fracastorius de Verona en 1546 estableci el concepto de contagium vivum, como causa de la enfermedad. Enuncia claramente la teora germinal de la enfermedad, que la enfermedad era causada por criaturas vivas invisibles. En 1792, Marco Antonio Van Plenciz, mdico de Viena, public la teora del germen de la enfermedad, sin apoyarla en datos experimentales; en ella expresaba su creencia en los puntos de vista de Fracastorius y avanz un poco ms al afirmar que cada enfermedad infecciosa tena su causa viva invisible. LA EDAD DE ORO DE LA BACTERIOLOGIA. El descubrimiento del microscopio, la liquidacin de la polmica sobre la generacin espontnea de las cosas vivas y el planteamiento de la teora del germen de la enfermedad prepararon el camino para fundacin de la nueva ciencia de la Bacteriologa. EDWARD JENNER (1749 1823) Mdico Britnico, fue llamado el Padre de la Inmunologa por ser el primero en instituir la vacunacin sistemtica contra una enfermedad infecciosa. Introdujo la vacunacin contra la viruela (poxvirus) con virus de pstulas de vaca al observar que las personas de las zonas rurales que haban tenido viruela bovina eran inmunes a la viruela humana. TEODORO SCHWANN (1810 1882) botnico, formul el concepto de fermentum vivum con base a estudios sobre levaduras y descubri la levadura Saccharomyces cerevisiae, que es la causa de la fermentacin alcohlica. LORD JOSEPH LISTER (1827 1912), cirujano britnico, aplic los principios de la fermentacin a las infecciones quirrgicas y enunci la teora de que la infeccin se deba al paso de cuerpos diminutos capaces de reproducirse del infectante al infectado. En 1852 asent las bases de la ciruga asptica, de la cual se le considera el padre. SCHOENLEIN en 1839 descubri la causa de dos enfermedades microbianas, la tia y la aftosa, males cutneos causados por un hongo (microsporon, epidermofitn y tricofitn) y una levadura (Candida albicans). DAVAINE en 1863, comprob que Bacillus anthracis era la causa del carbunco (enfermedad mortal caracterizada por septicemia, convulsiones, escalofros y

fiebre) inyectando animales con estos bacilos e infectndolos. Fue el primero en observar las bacterias en los tejidos. SEMMELWEIS, en 1846, contribuy a nuestro conocimiento en la fiebre puerperal demostrando que los mdicos, las parteras y enfermeras transmitan la infeccin a los pacientes. SNOW en 1849, demostr que la transmisin del clera era por las aguas residuales del ro Tmesis en Londres, mucho antes que se descubriera al agente causal de esta enfermedad. LOUIS PASTEUR (1822 1895) destaca principalmente por su brillante labor relativa a la fermentacin y a la prevencin del carbunco y de la rabia. Entre 1857 y 1862 encontr que las levaduras causan la fermentacin normal del vino y de la cerveza. Descubri que el calentamiento destruye a las levaduras naturales que causa el sabor desagradable y esto dio origen al proceso denominado pasteurizacin que se utiliza en las industrias del vino, la cerveza y la leche. Su trabajo sobre el clera de las gallinas sent las bases de la inmunidad al identificar a Pasteurella avicida como causa de la enfermedad y al encontrar que las aves se hacan inmunes a los cultivos virulentos despus de la inyeccin de cultivos atenuados. Durante los aos de 1879 y 1880, Pasteur demostr que las ovejas podan ser inmunizadas contra el carbunco. En 1885 fue introducido el tratamiento de Pasteur para la prevencin de la rabia en aquellos que haban sido mordidos por animales rbidos. Se le reconoce como el Padre de la Bacteriologa por haber servido a la humanidad en toda su capacidad. ROBERT KCH (1843 1910) es considerado El padre de la tcnica bacteriolgica por el descubrimiento y desarrollo de los cultivos slidos y por haber obtenido cultivos puros de microorganismos de cultivos mixtos. Kch estableci cuatro criterios para establecer la etiologa de las enfermedades infecciosas, conocidos como los postulados de Kch; estos son: 1. un microorganismo especfico debe estar siempre asociado con una enfermedad. 2. se le debe aislar en cultivo puro. 3. cuando se inocula a un animal sano susceptible producir la misma enfermedad. 4. habr de obtenerse nuevamente en cultivo puro. Ide los mtodos de teido por medio de los colorantes de anilina. Descubri el ciclo de esporulacin de Bacillus anthracis y demostr que este germen es el causante del carbunco y el modo de transmisin de la enfermedad (cutnea, respiratoria o intestinal). En 1882 estableci que Mycobacterium tuberculosis era la causa de la tuberculosis y posteriormente descubri la tuberculina (protena derivada de los cultivos de este bacilo), encontr al agente etiolgico del clera asitico y fue el primero en transmitir la enfermedad con organismos cultivados artificialmente.

FRIEDRICK LOFFLER (1852 1915), trabaj con Koch en el cultivo del microorganismo de la difteria conocido como bacilo de Klebs-Loeffler y en 1884 lo obtuvo en cultivo puro. En 1882 descubri al agente causal de la erisipela porcina (Erysipelothryx rusiopathiae). EDWIN KLEBS (1834 1913) trabajando con Loeffler descubri el bacilo de la difteria y fue el primero en producir lesiones tuberculosas en animales. EMILE ROUX Y ALEXANDRE YERSIN descubrieron la toxina diftrica y EMILE VON BEHRING descubri la antitoxina diftrica. ELIE METCHNIKOFF (1845 1916), en 1901 public su principal trabajo La inmunidad en las enfermedades infecciosas que contiene la teora de la fagocitosis en la inmunidad. KARL JOSEPH EBERTH (1835 1926) descubri la causa de la fiebre tifoidea a la que por l se llam Eberthella typhosa. En 1884, GAFKY desarroll Eberthella typhosa en cultivo puro y confirm su papel etiolgico en la fiebre tifoidea. FEHLEISEN, ayudante de Koch, demostr en 1883 que la causa especfica del fuego de san Antonio, la erisipela, era un estreptococo. ALBERT NEISSER (1855 1916) descubri el gonococo, causa de la gonorrea en 1879. WILLIAM WELCH (1850 1934), en 1892 encontr al organismo responsable de la gangrena gaseosa, Clostridium perfringens. KARL WEIGERT (1845 1904) fue el primero en usar los colorantes de la anilina para teir bacterias. DAVID BRUCE (1855 1931) encontr la causa de la fiebre de malta, los tripanosomas de la nagana y de la enfermedad del sueo y demostr que la mosca ts-ts es la portadora del tripanosoma de la enfermedad del sueo. En 1880, LAVERAN descubri el microorganismo del paludismo (plasmodio) y RONALD ROSS descubri en 1896 el ciclo de vida de plasmodium malarie. AUGUST VON WASSERMANN (1866 1925) alcanz fama internacional por la aplicacin del fenmeno de Bordet Gengou al serodiagnstico de la sfilis, con la llamada reaccin de Wassermann. En 1911, HIDEYO NOGUCHI (1876 1928) obtuvo cultivos puros de Treponema pallidum y en 1913 descubri el treponema en el tejido cerebral de un caso de parlisis.

En 1898, K. Shiga descubri el tipo de bacilo disentrico que despus llev su nombre. Tambin inform haber logrado el cultivo de Mycobacterium leprae. S. KITAZATO (1852 1931), en 1894 junto con YERSIN, descubri la causa de la peste bubnica, Pasteurella pestis. En 1929, el DR. ALEXANDER FLEMING, cientfico britnico, descubre la penicilina, producido por el moho penicillium notatum. DOMAGK inform en 1935 que el prontosil tena un efecto espectacular sobre las infecciones estreptoccicas ya que es convertido por el organismo en sulfanilamida, que era el agente qumico activo. En 1939, el DR. RENE DUBOS descubri el antibitico tirotricina. SELMAN WAKSMAN anunci en 1943 el descubrimiento de la estreptomicina y en 1949 de la neomicina. En 1949 el DR. DUGGAR produjo la aureomicina, antibitico til en las infecciones por ricketssias y en algunas por virus. El DR. PAUL BURKHOLDER, de la Universidad de Yale, aisl la cloromicetina del Streptomyces venezuelae que se encuentra en el suelo, til en el tratamiento de la brucelosis y fiebre tifoidea. En 1945, El DR. FRANK MELENEY descubri la bacitracina de la cepa de Bacillus subtilis, la cual es efectiva contra el estafilococo, los cocos anaerobios y Streptococcus agalactiae. EL DR. EDWARD JONAS SALK director del laboratorio de investigacin de la universidad de Pittsburg, anunci en marzo de 1953 su descubrimiento de la vacuna viral trivalente que ahora es de uso amplio mundial en la profilaxis contra la poliomielitis paralizante. Durante las ltimas dos dcadas, los progresos en fisiologa celular, bioqumica y gentica han llevado de un modo preciso a investigar la estructura y funcin de los cidos nucleicos y protenas que se conocen como Biologa molecular. Por ejemplo, la demostracin del papel central del DNA como depsito de la informacin gentica fue como resultado de los estudios de Griffith, en la dcada de 1920, en aislar DNA de neumococos y que ste era en realidad el factor de transformacin de un tipo capsular en otro. La prueba final, ms all de toda duda, fue suministrada por la demostracin de Hershey y Chase, en 1952, de que el propio cido nucleico viral contena toda la informacin necesaria para la multiplicacin de los virus. Al mismo tiempo Watsson y Crick desarrollaron el modelo de la doble hlice de DNA que los llev a sugerir que una de las cadenas complementarias de DNA podra servir como matriz para la sntesis de la otra, proveyendo as una descripcin de la replicacin y continuidad autoperpetuante de los genes. Utilizando tambin un sistema bacteriano sigui inmediatamente la demostracin de la transcripcin del ADN en forma de ARN mensajero, sintetizado como secuencia complementaria del ADN. Se hall adems que el ARN mensajero se traduca en polipptidos en los ribosomas. A mediado de la dcada de 1960, Niremberg y Ochoa haban resuelto la naturaleza del triplete de secuencias de bases de ARN al que corresponde la seal del codon de cada aminocido.

CLASIFICACION E IDENTIFICACION DE LAS BACTERIAS Alos seres vivos se les clasificaron en Reino Vegetal y Reino Animal. Como hay organismos que no se pueden clasificar en el reino vegetal y animal se han establecidos nuevos reinos para clasificarlos. Una de las ms antiguas proposiciones las hizo en 1886 el zologo alemn E.H. Haeckel quien sugiri un tercer reino que comprendiera los microorganismos unicelulares que no son tpicamente vegetales ni animales y los catalog en este nuevo reino, EL PROTISTA. Aqu se incluyen las bacterias, algas, hongos y protozoos. Los microorganismos protistas a su vez se dividen en dos categoras de acuerdo a su ultraestructura celular: PROTISTAS SUPERIORES EUCARIOTICOS (ncleo verdadero) y LOS PROTISTAS INFERIORES PROCARIOTAS (ncleo primitivo) que se conocen como Eubacterias y que incluyen a las bacterias y a las cianobacterias algas verde-azules. Whittaker en 1969, propuso otro sistema de clasificacin en 5 reinos, el cual es ahora ampliamente aceptado por considerar las relaciones evolutivas y es compatible con los estudios recientes de bioqumica y gentica. Este sistema se basa en tres niveles de organizacin evolucionados en relacin con los 3 modos principales de nutricin: fotosntesis, absorcin y digestin respectivamente. Los procariotes pertenecen al reino MONERA, porque carecen del modo ingestivo de nutricin. Los microorganismos se encuentran en 3 de los 5 reinos: MONERA (Bacterias y algas verde-azules), PROTISTAS, que son organismos eucariticos unicelulares monocelulares (Microalgas:nutricin por fotosntesis y Protozoos por ingestin) y HONGOS: LEVADURAS Y MOHOS (que son hongos superiores multinucleados). Los otros 2 son el REINO VEGETAL (plantas verdes multinucleadas y algas superiores) y el REINO ANIMAL (animales multicelulares). El concepto de 2 patrones de organizacin, procariotas y eucariotas, llev a la teora endosimbitica (vivir juntos uno dentro de otro) de la evolucin. Es decir, las clulas eucariticas caractersticamente engloban partculas de alimento incluyendo las bacterias (endocitosis) en su citoplasma. Estas observaciones llevaron al concepto de que las primitivas clulas eucariotas pueden haber evolucionado de clulas procariotas por endosimbiosis. Actualmente hay suficientes datos que indican fuertemente que las mitocondrias y cloroplastos de las eucariotas se originan por sucesos endosimbiticos separados hace algunos miles de millones de aos. Derivan de un antecesor procaritico comn. GRUPOS DE MICROORGANISMOS Las algas son organismos relativamente simples. Los tipos ms primitivos son unicelulares, pero otros son conjunto de clulas iguales con poca o ninguna diferenciacin en su estructura o en su funcin. Otras algas, como las marinas pardas, tienen una estructura corporal compleja con tipos de clulas especializadas para funciones especficas. Independientemente de su tamao o complejidad todas las algas contienen clorofila y son capaces de efectuar la fotosntesis. Las algas se encuentran generalmente en medio acutico hmedo.

Las bacterias son organismos procariticos unicelulares simples grupos de clulas similares. Por lo comn se multiplican por fisin binaria. Los Hongos estn desprovistos de clorofila, por lo regular son multicelulares, no paseen races ni tallo, ni hojas y su tamao y forma vara desde una levadura microscpica de una sola clula hasta un champin o una seta multinucleada gigante. Los hongos verdaderos se componen de filamentos y masas de clulas que constituyen el cuerpo del organismo conocido como micelio. Los hongos se reproducen por fisin, gemacin o por medio de esporas. Los Protozoos, que son protistas eucariticos monocelulares, se diferencan sobre la base de sus caractersticas morfolgicas, nutritivas y fisiolgicas.

DIFERENCIAS ENTRE PROCARIOTES Y EUCARIOTES Se diferencian los procariotes por su ncleo ms rudimentario inserto en el protoplasma, sin membrana nuclear que los separen, sin retculo endoplsmico (RE) y sin mitocondrias. En cambio los eucariotes tienen un ncleo verdadero, con cromosomas capaces de meiosis y mitosis rodeado por una membrana nuclear, con RE y mitocondrias. ASPECTO Grupos Tamao Sist. Gentico Localizacin: Estructura del Ncleo: PROCARIOTAS Bacterias, cianobacterias 1 2 por 1 4 micras nucloide, cuerpo cromatnico material nuclear No delimitado por membrana Nuclear Un cromosoma circular Cromosoma sin histonas Divisin no por mitosis No hay nucleolo Los genes relacionados funcional lmente suelen estar arracimados NO NO Puede haber SI NO NO NO NO NO No contiene esteroles Contienen en parte la maquinaria respiratoria y en algunos la fotosin Contiene peptidoglicano Fibrillas simples NO EUCARIOTAS algas, hongos, protozoos, Plantas y animales. mayores de 5 de dimetro ncleo, mitocondrias, cloro plastos. delimitado por M. nuclear 1 ms cromosomas lineales cromosomas con histonas divisin nuclear por mitosis Si hay nucleolo Los genes relacionados funcio nal/ no estn arracimados. SI SI NO NO SI Suele haber SI SI SI contienen esteroles no realiza funciones respirato ria ni de fotosntesis. carece de peptidoglicano Multifibrillas con microtbulos En algunos.

Naturaleza del Citoplasma: Citopl. Fluyente Pinocitosis Vacuolas: Mesosoma: Mitocondrias: Cloroplastos: Ap. Golgi: RE Vacuolas limitadas Por membranas: Memb. Citoplas. Pared celular: Locomocin: Seudpodos: Mecanismo Metablico:

amplia variedad, algunos fijan el N2 la gluclisis Gaseoso, algunos acumulan polibeta Hidroxibutirato como material de reserva. Relacin DNA(como Moles de % de G+C) 28 a 73 alrededor de 40

TAXONOMIA BACTERIANA De acuerdo con el sistema de clasificacin de Linneo usado para plantas y animales, las bacterias pueden clasificarse como Reino, Clase (-eaceae), Orden (ales), Familia (-aceae), Tribu (-ieae) y nombre binomial especfico para genero y especie. El nombre especfico incluye un nombre genrico latinizado iniciado con mayscula y un nombre de especie tribal con minscula. Todos los nombres latinizados se escriben en cursiva o se subrayan para indicar que se tratan de otro idioma. Las denominaciones comunes o coloquiales, que no se escriben en cursiva, pueden derivar o incluso coincidir con la denominacin oficial (por ejemplo neumococo = Diplococcus pneumoniae). Sin embargo, algunos organismos pueden ser denominados de diversas formas como por ejemplo, Bacillus typhosus, Bacterium typhosum, Eberthella typhosa y Salmonella Typha. La clasificacin y nomenclatura que se seguir en este curso, es en general la establecida en los manuales de Bergey y de Bacteriologa Sistemtica y Bacteriologa Determinativa. Este ltimo con un criterio utilitario basado en caractersticas fenotpicas divide a las bacterias en 4 grandes categoras: Gramnegativas, Grampositivas, bacterias sin pared celular y arqueobacterias. Las categoras se subdividen en grupos de acuerdo a su forma, Gram, acidoresistencia, esporas, atmsfera de crecimiento, movilidad, oxidasa, catalasa, etc. En bacteriologa mdica sobresalen los grupos 4, 5, 17, 18 y 21 que corresponden respectivamente a COCOS Y BACILOS GRAMNEGATIVOS AEROBICOS O MICROAEROFILICOS (Bordetella, Brucella, Francisella, Legionella, Neisseria, Moraxella y Pseudomonas); BACILOS GRAMNEGATIVOS ANEROBICOS FACULTATIVOS (Escherichia coli, Shigella, Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Proteus y Yersinia); COCOS GRAMPOSITIVOS (Staphylococcus y Streptococcus), BACILOS Y COCOS GRAMPOSITIVOS ESPORULADOS (Bacillus y Clostridium) y MICOBACTERIAS. La identificacin y/o tipificacin de las bacterias de inters mdico, sus constituyentes o sus productos se pueden realizar en el laboratorio mediante las siguientes pruebas mtodos: Mtodos pticos o tinciones, Pruebas convencionales, Pruebas rpidas, Pruebas miniaturizadas, mtodos no tradicionales como aglutinacin con partculas de ltex, coaglutinacin, liposomas, lectinas, ELISA, sustratos fluorognicos, contrainmunoelectroforesis, radioinmunoensayo (RIA), Western-Blot, Anlisis de cidos nucleicos, estos incluyen la relacin G + C, hibridacin, perfil de plsmidos, reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). El estudio qumico de DNA permite en la actualidad determinar de forma directa el grado de relacin existente entre dos especies, a travs del estudio de la composicin de bases de los cidos nucleicos. As pues, aunque la composicin de bases de DNA son bsicamente las mismas en todos los vertebrados (alrededor del 40% moles de guanina + citosina y 60% de adenina + timina) en las

bacterias vara considerablemente oscilando entre 30 y 70% moles de guanina + citosina. En un linaje determinado los pequeos fragmentos de DNA producidos varan muy poco con respecto a su contenido de GC. Las pruebas mtodos empleados en un laboratorio depender de los recursos humanos y materiales, del tipo y nmero de muestras a procesar y de la finalidad del estudio. IDENTIFICACION Constituye el lado prctico de la taxonoma, el proceso de determinar que un aislamiento en particular pertenece a un taxn reconocido. SISTEMATICA Se define como el estudio cientfico de los organismos cuyo objetivo final es caracterizarlos y agruparlos de forma ordenado incluyendo disciplinas como la morfologa, ecologa, epidemiologa, bioqumica, biologa molecular y fisiologa. De la 8. Clasificacin del Manual de Bacteriologa Determinativa de Bergey, sistema de clasificacin y nomenclatura ms ampliamente seguido en los Estados Unidos, de 1974, el reino procariotae lo reconoce como abarcando dos divisiones mayores: las cianobacterias y las bacterias. La ltima divisin incluye 19 grupos bacterianos. Unos 15 de estos grupos contienen las 3 clases mayores de bacterias no fotosintticas que son de inters mdico: 1) una diversidad de cocos, bastones y bacterias espiriladas. 2) Rickettssias (parsitos intracelulares obligados de las eucariotas) y 3) los micoplasmas que no presentan pared celular. Familia: Micrococcaceas, Gnero: Staphylococcus, especie: aureus. El Manual de Bergey de Bacteriologa Sistemtica 1. Edicin (sustituye la 8. Edicin) es principalmente fentico, 33 secciones en volmenes. Volumen 1: Gramnegativas. Volumen 2: Grampositivas distintos de los actinomycetos. Volumen 3: Gramnegativas, cianobacterias y arquebacterias. Volumen 4: Actinomycetos. En el Manual de Bergey, 2. Edicin hay ms de 170 nuevos gneros descritos que se publicarn en 5 volmenes. MICROSCOPIA El ojo humano no permite la resolucin de objetos menores de 0.1 a 0.2 mm. Ni detectar un objeto de menos de alrededor de 30 micras de dimetro. Por lo tanto debe utilizarse el microscopio ptico para ver las bacterias, que a menudo varan de 0.5 a 2 micrmetros de dimetro. La deteccin de tales objetos pequeos depende del Poder de Resolucin (R), que es la capacidad de distinguir entre dos puntos adyacentes. Los microscopios modernos son todos compuestos. Es decir, la imagen aumentada que forma la lente del objetivo es ampliada por una o ms lentes adicionales.

El poder de resolucin del microscopio ptico compuesto est determinado por la longitud de onda de la luz (lambda) que se usa y una caracterstica del objetivo (sistema de lentes) conocido como apertura numrica (AN). Esta relacin expresada como R = lambda/AN se transforma en R= lambda/2AN cuando el microscopio esta equipado con condensador. La apertura numrica est determinada por el producto del ndice de refraccin (n) del medio (el ndice de refraccin es una medida de la intensidad con que una sustancia disminuye la velocidad de la luz), generalmente aire (n=1) aceite (n=1.5), entre la lente y el objeto examinado y el seno de la mitad del ngulo del cono de luz (teta = ) formado por los rayos que penetran en la lente desde un punto del objeto examinado, cuando est enfocado. La apertura numrica se calcula entonces como AN= n sen /2. Cuando la luz pasa del aire al vidrio, un medio con un ndice de refraccin superior, disminuye su velocidad y se desva hacia la normal. Debido a que el espectro de la luz visible es fijo ( 0.4 a 0.7 micras, los lmites de la luz visible estn entre 400 y 700 nm., recordar que 1 nm= 0.001 micras) la resolucin con el objetivo de inmersin en aceite (AN generalmente 1.25) en el mejor de los casos se transforma en 0.4 micras/2 X 1.25 0.16 micras. Sin embargo, dado que el ojo humano detecta mejor la luz verde, aproximadamente en 0.55 micras, el espectro visual de resolucin para la microscopa ptica es de 0.3 micras. Cuando el microscopio no dispone de un condensador (el condensador enfoca un cono de luz sobre el portaobjetos) la AN = n sen = 1.5 X sen de 58 = 1.5 X 0.848 = 1.27. El grado en que pueden alterarse los objetivos del microscopio para aumentar la AN, es limitado; la mxima apertura numrica para un objetivo seco es menos de 1.0 y, en los objetivos de inmersin, es algo ms de 1.0 (1.2 a 1.4). El microscopio normalmente tiene 3 objetivos y cada uno proporciona una resolucin diferente. El objetivo de bajo poder amplifica el objeto 10 veces (seco dbil), el de alto poder amplifica el objeto aproximadamente 45 veces (seco fuerte) y el objetivo de aceite de inmersin amplifica el objeto 97 veces. Como el ocular aumenta 10 veces, la resolucin total combinada que se logra con cada objetivo es de 100, 450 y 970 veces respectivamente. Resulta evidente que el poder de resolucin de un microscopio ptico est restringido por los valores limitados de AN y la longitud de onda de la luz visible. El lmite de resolucin, es decir, el objeto ms pequeo que puede verse distintamente, se consigue con la longitud de onda ms corta de luz visible y un objetivo que tenga el mximo de AN. El trmino RESOLUCION se refiere al aumento del dimetro lineal del objeto. Sin embargo, la resolucin pura no es el nico factor importante. El factor terico ms importante es el poder de resolucin. El poder de resolucin de un microscopio es una expresin matemtica que denota la capacidad de los lentes para distinguir claridad de detalle. Un microscopio debe ser parafocal, es decir, que mantenga la imagen enfocada aunque se cambie de objetivo.

El poder de resolucin tambin se puede calcular de la manera siguiente: longitud de onda de la luz (lambda )/ AN objetivo + AN del condensador. Para explicar mejor esto supongamos que se utiliza un filtro verde con una longitud de onda luminosa de 0.55 micras, el objetivo de inmersin con una AN= 1.25 y el condensador con una AN= 0.9. Sustituyendo los trminos de la ecuacin anterior tendremos = 0.55/1.25 + 0.9 = 0.255 micras. Para propsitos prcticos, de los clculos anteriores se concluye que el objeto resolvible ms pequeo que puede verse con un microscopio tpico de luz es de aproximadamente 0.2 micras. Puede decirse que un sistema de lentes pierde resolucin de un objeto dado cuando ya no pueda separar dos puntos muy cercanos entre s, es decir, cuando los dos puntos estn tan cerca que aparecen como uno solo. Por lo tanto, si un microscopio no resuelve un objeto, de nada sirve aumentar la amplificacin puesto que solo se obtendra el efecto de aumentar el tamao de la mancha borroso sin aadir definicin. Debido a que el ndice de refraccin de las bacterias es similar a la mayora de los medios de suspensin acuosos, las clulas bacterianas no se ven con facilidad, a menos que estn suspendidas en glicerol o en soluciones no acuosas que aumenten las diferencias del ndice de refraccin, a menos que las clulas estn teidas, lo que se hace casi siempre con el objeto de determinar su morfologa grosera. Las cpsulas pueden teirse o visualizarse en el microscopio ptico como halos entorno a las clulas suspendidas en tinta china. Los flagelos y pelos estn por debajo del lmite de resolucin del microscopio ptico y deben ser teidos especialmente con colorantes que se adhieran a la protena flagelar y aumenten su tamao. AUMENTOS 4X 10X 40X 100X APERTURA NUMERICA 0.10 0.25 0.60 1.30 DISTANCIA FOCAL (mm) 28.6 16.1 4.3 1.30 PODER DE RESOLUCION () 2.3 0.9 0.35 0.18

ENTRE MAS CORTA ES LA DISTANCIA FOCAL AUMENTARA MAS UN OBJETO.

OCULAR PORTAOBJETIVOS OBJETIVOS BRAZO PLATINA

TORNILLO MACROMETRICO TORNILLO MICROMETRICO FUENTE LUMINOSA BASE CONDENSADOR

MORFOLOGIA BACTERIANA

La mayora de las bacterias producen una envoltura celular en capas que incluyen la membrana plasmtica, la pared celular y las proteinas y los polisacridos asociados. Algunas bacterias producen tambin adherentes superficiales externos conocidos como cpsulas. Tambin pueden presentar apndices filamentosos, flagelos y cilios. La pared es una estructura semi-rgida que incluye y protege el protoplasto del dao fsico, y condiciones de baja presin osmtica externa. El protoplasto esta formado por la membrana citoplsmica desnuda y su contenido. Las estructuras citoplmicas principales incluyen una red de cromatina fibrilar central o un cuerpo nuclear rodeado por un citoplasma amorfo que contiene ribosomas. Contiene tambin cuerpos de inclusin citoplsmica o grnulos de almacenamiento de energa. Algunas estructuras citoplsmicas como las endosporas estn limitadas a solo unas pocas bacterias. TAMAO Y FORMAS DE LAS BACTERIAS Las bacterias presentan una amplia diversidad de tamaos y aparecen vistos al microscopio como esferas (cocos), cilindros (bacilos) y espirales (espiroquetas). Los cocos libres aparecen como clulas esfricas aisladas, en pares como diplococos, en cadena como estreptococos o dependiendo de los planos de divisin en tetradas o en grupos arracimados. Los bacilos pueden variar en longitud desde los que son muy cortos (cocobacilos) hasta los bacilos largos. Los extremos de los bacilos pueden ser suavemente redondeados como en la Salmonella Typhi o cuadrados como Bacillus anthracis. Las largas hileras de bacilos que no se han separados en clulas aisladas reciben el nombre de filamentos. Los bacilos fusiformes que aparecen en la cavidad bucal e intestinal son aguzados en ambos extremos. Los bastones bacterianos curvos o espirilos varan desde microorganismos pequeos en forma de coma como el Vibrio cholerae o formas de espiroquetas ms largas tales como Borrelia, Treponema y Leptospira que tiene de 4 a 20 espiras. MORFOLOGIA MICROSCOPICA Y REACCIONES TINTORIALES Coloraciones Microbiolgicas. Para teir los microorganismos se dispone de un gran nmero de compuestos orgnicos coloreados (colorantes). En general, de estos compuestos son un tanto complejos en cuanto a su estructura molecular. Una de las clasificaciones ms prcticas para clasificar a los colorantes se basa en el comportamiento qumico de los colorantes, es decir cido, bsico y neutro. Un colorante cido ( aninico) es aquel donde la balanza de la cargas sobre el in colorante es negativa; un colorante bsico ( catinico) es aquel donde la carga llevada por el in colorante es positiva. Un colorante neutro es una sal compuesta de un colorante cido y un colorante bsico, como el eosinato de azul de metileno. En general, los colorantes cidos tien a los componentes celulares bsicos y los colorantes bsicos a los componentes celulares cidos.

El proceso de tincin supone una reaccin de intercambio de iones entre el colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de la clula. Los iones teidos del colorante reemplazan a otros iones en los componentes celulares. Algunos agrupamientos qumicos de protenas y cidos nucleicos celulares pueden participar en la formacin de sales con iones cargados positivamente con Na+ K+ y de esta manera es posible ver estas reas perifricas de la clula que llevan una carga negativa en combinacin de iones cargados positivamente, por ejemplo, (clula bacteriana -) (Na+) En un colorante como el azul de metileno, que es bsico, el in coloreado est cargado positivamente (catin); si representamos este in por el smbolo AM, el colorante que en realidad es cloruro de azul de metileno, se puede representar as: AM+ ClEl intercambio inico que tiene lugar durante la tincin se representa mediante la ecuacin siguiente en la cual el catin AM+ reemplaza al catin Na+ (clula bacteriana-) (Na+) + (AM+) (Cl-)= (clula bacteriana-) (AM+) + (Na+Cl-) COLORACION SIMPLE La coloracin de las bacterias por la aplicacin de una solucin colorante simple en preparaciones fijas y teidas se conoce como coloracin simple. El frote fijo se inunda con la solucin colorante durante un periodo establecido, despus de lo cual el colorante se arrastra con agua y la lmina se seca con papel secante. Por lo regular, las clulas se tien uniformemente. COLORACION DIFERENCIAL Los procedimientos de coloracin que ponen de manifiesto diferencias entre las clulas bacterianas o en partes de una clula bacteriana se conocen como tcnicas de coloracin diferenciales, son algo ms elaboradas que la tincin simple en la que la clula se someten a una sola solucin colorante o reactivo colorante. COLORACION GRAM El examen con microscopio ptico de preparacin con tincin de GRAM (tcnica diferencial) se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos, bastones y formas espiriladas. La tincin de Gram tambin permitir controlar la contaminacin. Un extendido bacteriano fijado al calor sobre un portaobjetos se trata con el colorante bsico, cristal violeta. Todos los microorganismos toman este colorante. Luego se cubre el extendido con la solucin yodada de Gram. Despus de un enjuague con agua y una decoloracin con acetona, se lava el preparado minuciosamente con agua y se contratie con un colorante rojo, generalmente safranina. El preparado teido se lava entonces con agua, se seca, y se examina bajo microscopio ptico. Las bacterias pueden diferenciarse con esta tincin en dos grupos, segn lo implementara al comienzo del siglo XVIII el bacterilogo dans Christian Gram.

Los microorganismos Grampositivos se tien de azul, mientras que aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los organismos espirilados se tien de rojo y se dice que son Gramnegativos. El mecanismo de la tincin de Gram generalmente parece relacionarse con el espesor de la pared celular, el tamao de los poros, y las propiedades de permeabilidad de la envoltura celular intacta. Las bacterias Grampositivas se tien como Gramnegativas cuando pierden su integridad osmtica por ruptura de la membrana plasmtica. Las clulas Grampositivas autolisadas (neumococos), viejas o muertas se tien como Gramnegativas. No existe una composicin qumica de la pared celular bacteriana nica, que pudiera explicar la tincin de Gram, dado que las clulas de las levaduras de paredes gruesas, que tambin se tien como Grampositivas, tienen una composicin qumica y una estructura distinta de las bacterias Grampositivas. Durante aos se ha expuesto numerosas teoras al mecanismo de la reaccin de Gram. Las explicaciones ms plausibles de este fenmeno son las que se refieren a la estructura y composicin de la pared celular. Las bacterias Gramnegativas contienen un porcentaje ms alto de lpidos que las bacterias Grampositivas. Las paredes celulares de las bacterias Gramnegativas son tambin ms delgadas que de las Grampositivas. Hay pruebas experimentales en el sentido de que con el tratamiento con alcohol extrae lpidos con lo cual se aumenta la porosidad o permeabilidad de la pared celular Gramnegativa. As el complejo cristal violetayodo puede extraerse en los organismos Gramnegativos y de esta manera se destien. Las paredes celulares de las bacterias Grampositivas, por su composicin diferente (bajo contenido de lpidos) se deshidratan durante el tratamiento con alcohol, los poros disminuyen, la permeabilidad se reduce y no logra extraer el complejo cristal violeta- yodo. Otra explicacin un tanto similar, se basa tambin en diferencias de permeabilidad entre los dos grupos de bacterias. En las bacterias Grampositivas, el complejo CVI queda retenida en la pared despus del tratamiento con etanol, lo cual segn se supone que causa una disminucin en el dimetro de los poros del glucopptido o peptidoglucano de la pared celular. Las paredes de las bacterias Gramnegativas tienen una cantidad mucho menor de peptidoglucano con ligaduras cruzadas menos extensas que en las paredes de las bacterias Grampositivas. Los poros en el peptidoglucano de las bacterias Gramnegativas despus del tratamiento del etanol quedan lo suficientemente grandes para permitir que se extraiga el complejo CV-I. Estas dos explicaciones no se excluyen mutuamente y es probable que ambas contribuyan a explicar el mecanismo de la coloracin de Gram.

COLORACION DE GRAM

SOLN. APLICADA

GRAMPOSITIVAS

GRAMNEGATIVAS

1. Cristal violeta 2. Lugol 3. Alcohol

4. Safranina

Las bacterias se tien de violeta complejo CV-I se forma dentro de las bacterias; permanece violeta. Las paredes cel. Se deshidratan. Hay retraccin de poros. La permeabilidad disminuye. El complejo CV-I no puede salir de la bacteria, permanece violeta. Las bacterias no afectadas perma necen violeta.

las bacterias se tien de violeta. complejo CV-I se forma dentro de las bacterias; permanece violeta. Extraccin de lpidos de las paredes Aumento de porosidad. Complejo CV-I sale de la bacteria. las bacterias toman este colorante y se tien de rojo.

DIFERENCIAS ENTRE CELULAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS GRAMPOSITIVAS Contienen ribonucleato magnsico. Son muy sensibles a los colorantes del Trifenilmetano. Son sensibles a la penicilina. Son resistentes a los lcalis (KOH 1%). Pueden ser acidoresitentes. Bacilos y cocos que forman esporas. Pared celular baja en lpidos (1 4%) GRAMNEGATIVAS No contienen ribonucleato magnsico. Son menos sensibles a los colorantes del Trifenilmetano. Son sensibles a la estreptomicina. Sensibles a los lcalis (KOH 1%). Probablemente ninguno resiste a cidos. La mayor parte de los bacilos, espirilos y cocos que no forman esporas. Alta en lpidos (11 22%).

METODO DE TINCION ACIDORESISTENTE Otro procedimiento de tincin diferencial de amplio uso, sobre todo para el gnero Mycobacterium es la tincin de cido-resistencia. La preparacin fijada se somete a las soluciones siguientes en el orden que se seala. Fucsina fenicada calentada por 5 minutos, decolorar con alcohol- cido y azul de metileno por 1 minuto. Las bacterias teidas por este mtodo se clasifican como acidorresistentes si retienen la fucsina y aparecen rojas y no acidorresistentes si el alcohol cido las decolora y se tornan de color azul por el azul de metileno de contraste.

TINCION NEGATIVA

Una tcnica por lo cual las clulas sin teir se hacen visibles en una pelcula oscura se llama tincin negativa. En cierto modo, una preparacin as es comparable en su apariencia a una preparacin en fondo oscuro, por cuanto los organismos aparecen iluminados en un campo microscpico oscuro. En la prctica, la suspensin bacteriana se mezcla con tinta china o nigrosina y despus se extienda como una pelcula delgada a lo largo de la lmina portaobjetos y se deja secar. Al examinarse los microorganismos aparecen transparentes y delimitados por el fondo oscuro. La ventaja de este procedimiento para el estudio de la morfologa es que las clulas no reciben una agresin fsica o qumica violenta. Tiene especial ventaja para organismos capsulados. La fijacin del frote antes de la coloracin y exposicin subsecuente a una serie de reactivos como sucede con otros mtodos de distorsin de las clulas, no suele ocurrir en la tincin negativa. ULTRAESTRUCTURA BACTERIANA FLAGELOS Los flagelos son filamentos protecos largos, delgados, helicoidales, de longitud y dimetro uniforme los cuales son los responsables de la rpida motilidad de las bacterias. Son estructuras delgadas, rgidas, de casi 20 nm de ancho y hasta 1520 nm de largo. El flagelo est compuesto de tres partes: El filamento. El gancho. Cuerpo basal. El filamento es externo con respecto a la clula y se une al gancho en la superficie celular. El filamento es un cilindro rgido y hueco constituido por ua protena sencilla denominada flagelina. El gancho ligeramente ms ancho que el filamento est formado por diferentes subunidades de protenas, est fijado al cuerpo basal, que a su vez est anclado en la membrana plasmtica. El cuerpo basal, es la parte ms compleja del flagelo, est compuesto de un cilindro y dos ms juegos de anillos contiguos a la membrana plasmtica, el glicopptido y en el caso de las bacterias Gramnegativas la membrana externa de la envoltura celular. Los anillos externos L y P se asocian con las capas de LPS y peptidoglucano respectivamente. El anillo interno M contacta con la membrana plasmtica. La motilidad libre en lquidos medios es una caracterstica de los vibriones, espirilos y algunos bacilos flagelados. Las pseudomonas pueden tener un flagelo polar (monotricos) (trichous significa pelos), un penacho de varios flagelos polares (loftricas, lopho significa mechn) en uno o ambos extremos un nico flagelo en ambos polos (anftricas, amphi significa en ambos lados). En contraste, las enterobacterias con motilidad (por ejemplo, salmonella) o especies de bacillus pueden tener flagelos distribuidos sobre toda la superficie celular y se dice que son pertricas (peri significa alrededor). Los flagelos pueden variar en nmero desde unos pocos, como en Escherichia coli, hasta varios cientos por clula como se observa en especies de Proteus. Las especies de Proteus a veces crecen como una delgada capa que hormiguea sobre la superficie de los medios con

agar. Este fenmeno dio lugar a la expresin antgeno H (antgeno flagelar que deriva de la palabra alemana Hauch que indica una pelcula de crecimiento en expansin. En constraste, el trmino O o antgeno somtico O de las formas no flageladas, deriv de la expresin alemana ohne hauch (sin pelcula), lo que indica un tipo de crecimiento no expansivo.

Las bacterias que tienen movilidad pueden detectarse de varias maneras. El movimiento puede observarse microscpicamente en suspensin lquida (en una gota pendiente o debajo del cubreobjeto), por la extensin del crecimiento bacteriano como una pelcula sobre el agar, o por extensin de la turbidez en agar blando al 0.5% (semislido). Los flagelos impelen a la clula en una forma muy semejante a la de una hlice, es decir, los flagelos giran en torno de su eje mayor. En las bacterias montricas el flagelo polar gira en direccin contraria a las manecillas del reloj durante el movimiento normal de avance, mientras que la clula rota lentamente cuando el flagelo gira en la direccin de las agujas del reloj. Las bacteria montricas se paran y giran alternado la direccin de la rotacin flagelar. La energa para la rotacin flagelar es originada por corriente protnica. El anillo M y el anillo C est formada de protenas como Gli G en el anillo C y mot A y mot B en el anillo M. Mot A y mot B forman un canal de protones a travs de la membrana citoplsmica. En el caso de clulas con flagelos mltiples, stos rotan en sentido anti-horario doblndose por sus ganchos para formar un haz coordinado y efectan movimiento celulares, generalmente en direccin de un nutriente (quimiotaxis

positiva), en contraste, en presencia de un repelente, los flagelos pierden la coordinacin, al girar en el sentido de las agujas del reloj, y la clula d un giro, por lo que el haz flagelar se desorganiza, y las clulas tienden a moverse alejndose del repelente. La coordinacin de la funcin flagelar involucra quimiorreceptores conocidos como protenas de unin periplsmica, que se sabe interactan en el transporte a travs de membranas y en el nivel de mutilacin de una protena especfica de la membrana plasmtica. Es decir, en presencia de quimioatractores el nivel de mutilacin de esta protena aumente mientras que en presencia de repelentes el nivel de mutilacin disminuya es nula.

FILAMENTOS AXIALES Las espiroquetas, es decir, las treponemas, las leptospiras y las borrelias, son clulas con motilidad que se mueven desplazndose por una onda helicoidal, tipo de movimiento que les permite la penetracin en medios viscosos. Estas bacterias producen filamentos axiales semejantes a flagelos, en torno de los cuales se arroya la clula. Estos filamentos estn ubicados en el espacio periplsmico entre las membranas interna y externa de la clula. Los filamentos no van de un polo de clula a otro, en cambio se originan en polos opuestos de la clula y se superponen en el centro. Se sugiere que los filamentos axiales rotan en un sentido generando el movimiento del cuerpo bacteriano en rotacin opuesta (como destornillador) a la del filamento axial. MICROFIBRILLAS, FIMBRIAS Y PELOS SEXUALES

Las fimbrias, tambin llamados pelos, son microfibrillas similares a vellos de 0.004 a 0.008 micras, observables con microscopio electrnico en la superficie de diversas bacterias. Son ms rectas, ms delgadas y ms cortas que los flagelos. Como los flagelos, las fimbrias estn compuestas por monmeros de autoensamblados, que son cadenas polipeptdicas que se originan en la membrana plasmtica. Las vas urinarias infectadas son una de las mejores fuentes de bacterias ricas en pillis. Las fimbrias estn muy diseminadas entre las bacterias Gramnegativas. Tambin se observan en algunas bacterias Grampositivas, estas incluyen al Corynebacterium renale halladas en las vas urinarias del ganado vacuno; Actinomyces viscosus un microorganismo presente en la orofaringe humana; Streptococcus pyogenes, Streptococcus mutans y otros. Las clulas con fimbrias se adhieren a interfases, superficies hidrfobas y receptores especficos. Por ende, se piensa que las fimbrias confieren a las bacterias ventajas de sobrevida. Pueden categorizarse de acuerdo con actividades funcionales o componentes como adhesinas, lectinas, evasivas y pelos sexuales. La formacin de pelculas sobre medios lquidos permite a las bacterias fimbriadas acceder al oxgeno en suspensiones densas en crecimiento. Sin embargo, ms importante es el hecho de que las enfermedades infecciosas en la ecologa de las interacciones husped-parsito las fimbrias y otros componentes de la superficie celular actan como factores de adherencia especficos, adhesinas. Es decir, que la especificidad de la adherencia condicionada por las fimbrias puede, en parte, determinar la capacidad de una bacteria de adherirse y colonizar tejidos especficos, por ejemplo las fimbrias 987P, K88 y K99 de cepas enteropatgenas de Escherichia coli son importantes en la colonizacin del intestino de cochinillos y terneros y solo los microorganismos fimbriados de Neisseria gonorrhoeae (tipo kellogg 1 y 2) son infecciosos. La ubicacin externa de las macromolculas de la superficie bacteriana es de importancia en las interacciones husped-parsito. Por ejemplo, la protena estreptoccica M, un factor de virulencia conocido, sirve como factor de adherencia (adhesina) en la colonizacin de la faringe y a menos que sea neutralizada con el antisuero especfico, impide la fagocitosis (acta como una evasiva) y es leucocida (acta como una agresiva o toxina). Las fimbrias caen en la categora de protenas como lectinas (ver cap.3 zinsser). Las microfibrillas de las bacterias Gramnegativas a menudo corresponden a pelos comunes o pelos sexuales, de acuerdo con la funcin que cumplen. Ambos pueden aparecer en forma independiente o simultnea en la misma clula. Aproximadamente 100 a 200 fimbrias comunes pueden verse regularmente distribuidas en la superficie celular de una Escherichia coli, en comparacin con solo 1 a 4 pelos sexuales observados en sitios al azar. Los pelos sexuales actan

en la adherencia clula a clula en la conjugacin bacteriana (cap.8 zinsser). Los pelos sexuales se detectan por la capacidad de las clulas de donar genes a receptores, por la presencia de antgenos especficos para pelos sexuales o por la capacidad de las bacterias aparentemente pilosas de inactivar ciertos bacterifagos que se adhieren especficamente a los pelos sexuales. MESOSOMAS Estas organelas asociadas con la membrana se observan como sacos citoplsmicos que contienen estructuras verticuladas, laminares, tubulares o vesiculares y a menudo se asocian con tabiques de septacin. Los mesosomas se fijan tanto a la cromatina de DNA como a la membrana. Se ha informado que los mesosomas son artificios de fijacin. CUERPO NUCLEAR El DNA bacteriano puede ser detectado como nucleoides o cuerpos de cromatina (stos contienen altas concentraciones de cido nucleico), el material nuclear se observa como una red irregular, delgada fibrilar de DNA. A menudo el mesosoma parece servir como sitio de unin del DNA. El DNA bacteriano representa solo un 2% al 3% del peso celular pero ocupa el 10% o ms de volumen de la clula por su forma laxa. RIBOSOMAS Son pequeas partculas citoplsmicas compuestas aproximadamente de 30% de protenas y 70% RNA y corresponde hasta un 40% de las protenas y el 90% del cido ribonucleco de la clula. Los ribosomas aparecen como agregados de polirribosomas y membrana por efecto de lisis. Los poliribosomas son cadenas de ribosomas 70S (manmeros) adheridas o fijadas al RNA mensajeros. La estabilidad de los ribosomas depende de la presencia del Mg++. Con bajas concentraciones de Mg++ (menos de 10-4 M) los manmeros ribosmicos 70S se disocian en unidades 50S y 30S. Recientemente se han hallado PROTEINAS SIMILHISTONAS en pequeas cantidades en asociacin con el DNA de E. coli as como la presencia de poliaminas. Las POLIAMINAS se hallan asociadas con ribosomas y membranas. Las principales son: Putrescina: H2N (CH2)4 NH2. Espermidina: H2N (CH2)4 NH (CH2)3 NH2. Las poliaminas ejercen un efecto anti-mutagnico, impiden la disociacin de los ribosomas 70S en componentes 30S y 50S y aumentan la resistencia del protoplasto a la lisis osmtica. La cantidad de espermidina vara inversamente con la cantidad de Mg++ en los ribosomas y las subunidades ribosmicas 30S y 50S se mantienen asociadas en ausencia de Mg++ si la espermidina est presente. GRANULOS CITOPLASMICOS

Los grnulos indican acumulacin de reserva de alimentos, incluyendo polisacridos, lpidos o polifosfatos. Los grnulos varan con el tipo de medio y el estado funcional de las clulas. El glucgeno es el principal material de almacenamiento de las bacterias entricas y puede ser el responsable de hasta el 40% del peso de algunas especies. Del mismo modo, algunos bacilos y pseudomonas acumulan el 30% o ms de su peso como poli--hidroxibutiratos. Finalmente, los polifosfatos se conocen tambin como grnulos metacromticos teidos de Babes-Ernst grnulos de volutita que se encuentran en abundancia en el Corynebacterium diphtheriae, el bacilo de la peste (Yersinia pestis), las micobacterias (Mycobacterium tuberculosis) y en algunas otras bacterias. Los grnulos de volutita se tien con azul de toluidina y azul de metileno. ENDOSPORAS BACTERIANAS La formacin de endosporas es un rasgo distintivo de los microorganismos de la familia Bacillaceae, que incluyen miembros del gnero aerobio Bacillus y el gnero anaerobio Clostridium. Las endosporas resisten las condiciones ambientales adversas de desecacin, calor y mal suministro de nutrientes. Si estn presentes en alimentos enlatados esterilizados por calor en forma inadecuada, las esporas de las formas anaerobias de Clostridium germinan, crecen y provocan su descomposicin. En el caso de C. botulinum esto es especialmente peligroso porque la descomposicin puede no ser evidente aunque se acompae la mortfera exotoxina. Otros formadores de esporas como el bacilo de la gangrena gaseosa, Clostridium perfringens el bacilo del ttanos, Clostridium tetani producen su efecto txico solo cuando un medio de tejidos muertos o daados brinda a las esporas un nicho para el crecimiento del cuerpo animal. La verdadera endospora es cuerpo altamente refractario, formado dentro de la clula bacteriana vegetativo en cierto estadio del crecimiento. El tamao, la forma y la posicin de la espora son caractersticas relativamente constantes de una especie dada, y, son por lo tanto, de cierto valor para distinguir un tipo de bacilo de otro. La posicin de la espora dentro de la clula puede ser central, subterminal o Terminal. Puede ser del mismo dimetro de la clula, ms pequea o ms grande provocando una tumefaccin de la clula. La clula madre que rodea a las esporas recibe el nombre de esporangio, stas esporas son criptobiticas (es decir, no poseen actividad metablica alguna) y son mucho ms resistentes que sus clulas progenitoras, de tipo vegetativo, frente a los efectos letales del calor, la desecacin, la congelacin, los productos qumicos txicos y las radiaciones. Las esporas son clulas muy refractarias y extraordinariamente deshidratadas. No se tien con los colorantes corrientes (Gram, azul de metileno). Al microscopio ptico, la primera fase del proceso de esporulacin consiste en la formacin de

una zona de mayor refringencia, llamada preespora y situada en un extremo de la clulas. La refrigencia aumenta progresivamente, hasta que al cabo de unas 6 horas se ha formado la espora madura. Posteriormente, las esporas se liberan total o parcialmente de la pared del esporangio, que es digerida por una enzima ltica.

Al microscopio electrnico demuestra que en los bacilos la formacin de esporas se inicia con la migracin de un nucleoide condensado hacia uno de los extremos de la clula. A continuacin se produce el crecimiento hacia adentro de un mesosoma, acompaado por una doble capa de membrana para formar el diafragma de la espora o septo que separa al nucleoide y al citoplasma que le rodea del esporangio. El diafragma inicia su crecimiento (a partir de su periferia), dirigindose hacia el extremo de la clula, hasta que la totalidad de la preespora se halla rodeada por una doble membrana, la cual esta unida a la parte anterior de la clula, y rodeada por el citoplasma del esporangio. Durante el proceso de formacin de la preespora la sntesis de DNA se detiene, al igual que la sntesis de RNA y la sntesis proteica, pero en cambio se produce una activa sntesis de fosfolpidos y una rpida reposicin de proteinas. Durante el proceso de maduracin de la espora se deposita una gran cantidad de material entre sus dos capas. La gruesa cubierta formada (tegumento interno) llega a ocupar ms de la mitad del volumen celular. En el pueden distinguirse diversas capas (Fig. 6.32). 1) La capa mas interna corresponde a la delgada pared de la espora o membrana. 2) A continuacin se encuentra la capa ms gruesa, la corteza, formada por una estructura laminar concntrica, que presenta zonas claras entre las distintas capas. 3) Por fuera del crtex o corteza se encuentra la cubierta que es la estructura que aparece ms densamente teida en las preparaciones para el microscopio electrnico. 4) Las esporas de ciertas especies se encuentran rodeadas por una fina capa que recibe el nombre de exosporium. Tanto la pared de la espora como la corteza contienen peptidoglicn, aunque su composicin sea distinta en la una y la otra. La cubierta est formada por una protena del tipo de las queratinas y forma ms de un 80% de la protena total de la espora. Esta protena es insoluble, a menos que se reduzcan sus numerosos enlaces S-S. Se ha demostrado que la resistente cubierta proteica de las esporas es la que les confiere su resistencia frente a las sustancias qumicas. Una de las caractersticas que llaman su atencin en el caso de las esporas es su enorme contenido en Ca++ para el transporte activo del cual aparecen unidades especiales en las membranas de la clula madre al iniciarse la esporulacin. Normalmente el Ca++ se acompaa de una cantidad equivalente de cido dipicolnico, sustancia que es capaz de quelar al calcio. Las clulas que presentan bloque a nivel de formacin de dipicolinato son incapaces de formar esporas a menos que reciban este compuesto de una fuente externa.

ENVOLTURA CELULAR La envoltura de la clula bacteriana incluye la membrana plasmtica, la pared celular que la recubre, las protenas o los polisacridos especializados y cualquier otro material adherente exterior. Estas organelas multi-laminadas de las clulas procariotas representan alrededor del 20% ms del peso seco de la clula. La envoltura de la clula sirve para varias funciones: contiene sitio de transporte para nutrientes y sitios receptores para virus bacterianos. Interactan con el ambiente, y por lo tanto, influye sobre las interacciones husped-parsito. La cubierta es el sitio de reaccin de anticuerpos y complemento y a menudo contiene componentes txicos para el husped.

Estructura de la pared celular en una bacteria Gramnegativa

ESTRUCTURA DE LAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Como se observa en la Figura 1.1 la estructura ms externa de la clula gramnegativa tiene muchos componentes:

Pared Celular La membrana externa sirve como la principal barrera de permeabilidad de la clula y ayuda a retener protenas en el espacio periplsmico. (Algunos autores no consideran a esta membrana como parte de la pared celular.) Porinas son canales llenos de agua en la membrana externa que facilitan el transporte de nutrientes y sustancias de bajo peso molecular dentro de la clula, incluyendo agentes antimicrobianos. Las bacterias varan en el nmero y tipo de porinas que contienen. Lipopolisacridos se encuentran en la superficie de la clula y son el componente esencial de las endotoxinas. Ellos contribuyen a la capacidad de la bacteria para causar enfermedad y dan a las bacterias gram-negativas su carga negativa neta. Lipoprotenas adhieren la membrana externa a la capa de mureina. La capa de pptidoglicano de las bacterias gram-negativas es un polmero relativamente delgado que consiste de cido N-acetil murmico y N-acetil glucosamina entrelazados. Esta se conoce con frecuencia como la capa de murena o pared celular y es responsable de mantener la forma del organismo. Est localizado dentro del espacio periplsmico. El espacio periplsmico se encuentra entre la membrana externa y la membrana citoplasmtica. Las protenas periplsmicas incluyen protenas de enlace para sustratos especficos, enzimas hidrolticas y enzimas detoxificantes. Membrana Citoplsmica La membrana citoplsmica rodea el citoplasma de la clula y contiene protenas y fosfolpidos. Muchas de las protenas contenidas en la membrana celular son enzimas responsables del metabolismo celular. La membrana citoplsmica tambin sirve como una barrera de permeabilidad y un enlace de permeabilidad para las substancias que entran en la clula. Citoplasma y Otros Componentes Internos El citoplasma celular contiene los cromosomas, ribosomas y otras estructuras internas. La gran mayora de bacterias tiene un solo cromosoma pero unas pocas, como el Vibrio cholerae , tiene dos cromosomas.

Figura 1.2Estructura de la pared celular de gram-positiva ESTRUCTURA DE LAS BACTERIAS GRAM POSITIVAS Puesto que la pared celular de las bacterias gram-positivas contiene solo dos componentes principales es mucho menos complicada que la pared celular de las gramnegativas. cidos teicoicos son polmeros que estn entrelazados en la capa de pptidoglicano y se extiende en forma de cilios ms all de la superficie de las clulas gram-positivas. Estos son tambin importantes antgenos de superficie en aquellos organismos que los poseen. La capa de pptidoglicano, o capa de murena, de las bacterias gram-positivas es mucho ms gruesa que la de las bacterias gram-negativas. Es responsable de mantener la forma del organismo y por lo general se conoce como la pared celular. La Membrana Citoplsmica, Citoplasma, y Otros Componentes Internos Estas estructuras son muy similares tanto en bacterias gram-positivas como en gram-negativas. CAPSULA La virulencia de los patgenos a menudo se co-relacionan con la produccin de la cpsula. Por ejemplo, las cepas virulentas de neumococos y klebsiellas producen abundantes polmeros capsulares que protegen a la bacteria de la fagocitosis. Estas bacterias forman colonias mucoides (M) o lisas (S) en medios slidos, en contraste con las cepas rugosas (R), no formadoras de cpsula. La prdida de la

capacidad de producir cpsula por mutacin de S a R se correlaciona con la prdida de la virulencia y el aumento de la facilidad de destruccin por los fagocitos, pero no afecta la viabilidad, es decir, que las cpsulas son prescindibles. Las cpsulas tienden a formar geles que se adhieren a la clula, mientras que el mucus y los polmeros extracelulares se eliminan por lavado ms fcilmente. Las cpsulas se visualizan fcilmente con tincin negativa, con la cual aparecen con un halo bordeado de luz que rodea las clulas suspendidas en tinta china. PARED CELULAR La pared celular encontrada en todas las clulas patognicas protege a las clulas de explotar en medios de baja presin osmtica y mantiene la forma. Esto puede demostrarse por plasmlisis, por aislamiento de la cubierta particulado despus de la disrupcin mecnica de la clula bacteriana o por digestin por lisozima. La pared celular aislada mantiene la identidad morfolgica de la clula. Qumicamente, la pared celular est compuesta por un glucopptido nico para las bacterias. Las envolturas celulares de los distintos microorganismos oscilan generalmente entre 0.150 milimicras y 0.500 milimicras de espesor; la membrana plasmtica subyacente se mantiene ms o menos constante en espesor, aproximadamente 0.0075 milimicras, tanto en las bacterias grampositivas como en las gramnegativas. Puede demostrarse la presencia de poros de 0.001 a 0.01 micras de dimetro en paredes aisladas; los poros de la membrana parecen tener aproximadamente 1 nanmetro de dimetro. DIFERENCIAS ENTRE ENVOLTURAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS. ENVOLTURA CELULAR GRAMPOSITIVA. Las bacterias grampositivas producen una diversidad caracterstica de polisacridos y protenas superficiales caractersticas que se asocian con el glicopptido. Los polisacridos mejor conocidos incluyen los cidos teicoicos, muchas de las sustancias capsulares de los neumococos, y los polisacridos del grupo estreptoccico (protena M de los estreptococos del grupo A, factor de virulencia). La ubicacin exacta de sus sustancias an no se conoce con exactitud. Los cortes transversales delgados de las clulas grampositivas revelan una capa de la pared celular relativamente gruesa, contigua y que recubre a la membrana plasmtica. Esta capa puede ser disuelta con lisozima. Tanto las protenas como los polisacridos contribuyen en la subestructura en capas de la pared. ENVOLTURA CELULAR GRAMNEGATIVA. Las bacterias gramnegativas presentan tres capas de envoltura distintas dispuestas de manera laxa. Estas incluyen la membrana externa (ME), convoluta, arrugada, con surcos u ondulante, que contiene al antgeno O somtico, una capa densa intermedia y la membrana plasmtica interna. Tanto la membrana plasmtica como la membrana externa tienen aproximadamente 0.0075milimicras (75A) de espesor. Ambas presentan la

estructura tpica en 3 capas observada en microscopio electrnico en cortes transversales; es decir, dos capas externas hidrfilas de 25A compuesta por cadenas alqulicas de cidos grasos. Una lipoprotena, un tercio de la cual est unida covalentemente en un extremo a la superficie externa del glicopptido, inserta su extremo lipdico en la membrana externa. As la lipoprotena sirve para anclar la membrana externa a la clula. MEMBRANA EXTERNA (ME) La membrana externa contiene al lipopolisacrido (LPS), tambin conocido como antgeno somtico O endotoxina fosfolipdica, y protenas nicas que difieren de la membrana plasmtica. La membrana externa tiene a su vez dos capas que son asimtricas y esta estructura es nica. La fosfatidiletanolamina aparece casi totalmente en la capa interna (lmina interna) mientras que el lipopolisacrido se encuentra solo en la capa externa. As la membrana externa sirve como membrana de permeabilidad selectiva que mantiene afuera a sustancias hidrfobas y sustancias hidrfilas por encima de cierto tamao y retiene a las protenas periplasmticas. LIPOPOLISACARIDO. Es el responsable de muchas de las actividades biolgicas asociadas con las bacterias gramnegativas. El LPS es termoestable, es letalmente txico, pirognico (causa fiebre), mitgeno en linfocitos de ratn pero no en humanos, estimula la proliferacin de la mdula sea, activa el factor de coagulacin de Hageman en plaquetas y activa el complemento. PORINAS Estas son protenas mayores halladas nicamente en la membrana externa y con un peso molecular aproximado de 35,000. Forman los poros transmembrana o canales de difusin que permiten el pasaje de pequeas molculas hidrfilas a travs de la membrana externa. Las porinas tambien sirven como sitio de unin especfica de fagos, vitamina B12 y otros nutrientes. PROTOPLASTOS Y ESFEROPLASTOS Las bacterias corrientemente se lisan cuando la capa de gucopptidos de la pared celular rgida de la envoltura celular es disuelta con lisozima u otros agentes. Sin embargo si se estabiliza con soluciones hipertnicas de sacarosa o sales (por ejemplo 0.2 a 0.5 moles) se libera un cuerpo esfrico sin pared denominado protoplasto osmticamente sensible. Las bacterias grampositivas tratadas de este modo generalmente producen protopastos mientras que los organismos gramnegativos producen esferoplastos, dado que inevitablemente retienen algunos componentes de la membrana externa.

MEMBRANA PLASMATICA Por debajo de la capa rgida de la pared celular y en ntima asociacin con ella est la delicada MEMBRANA CITOPLASMICA. Esta muestra una estructura tpica de emparedado o trilaminar de capas oscura-clara-oscura. Aunque las bacterias se consideran normalmente como extremadamente tolerantes a los cambios osmticos en su medio ambiente externo sufren fcilmente plasmlisis o plasmoptisis cuando se les coloca en medios con concentracin salina variables. Coloca a la clula en soluciones hipertnicas trae como resultado plasmlisis, es decir la contraccin de la membrana y del citoplasma perdiendo su contacto ntimo con la pared celular. En las clulas gramnegativas se induce plasmlisis ms fcilmente que en las grampositivas, lo que se correlaciona con sus presiones osmticas internas realtivas: grampositivas (de 8 a 20 atmsferas) y las gramnegativas (de 3 a 5 atm). La presencia de una barrera osmtica en las bacterias tambin est indicada por su capacidad para concentrar ciertos aminocidos contra los gradientes de concentracin. Sustancias tales como fosfatos, steres de fosfatos, purinas y pirimidinas pueden estar presentes dentro de la clula en un estado altamente concentrado y contribuir a la presin osmtica interna. La actividad osmtica tambin est indicada por la permeabilidad selectiva de la clula por distintos compuestos especialmente los cidos orgnicos. COMPONENTES DE LA MEMBRANA Las membranas estn compuestas por aproximadamente 60-70% de protenas, 30-40% de lpidos y pequeas cantidades de hidratos de carbono. Los constituyentes principales son las fosfatidiletanolaminas (75%), fosfatidilglicerol (20%) y glucolpidos. La colina, esfingolpidos, cidos grasos poliinsaturados y esteroides son raros. Los micoplasmas patgenos que no elaboran una pared celular rgida incorporan esteroides del ambiente en sus membranas plasmticas. Los glucolpidos hallados en la mayora de las membranas bacterianas incluyen diglucosildiglicridos que se encuentran principalmente en las grampositivas y que tambin contienen cido lipoteicoico. Una molcula de alcohol poli-isoprenoide de 55 tomos de carbono conocido como decaprenol o bactoprenol se le encuentra en pequeas cantidades. PARED DE LOS GRAMPOSITIVOS Funcin de la pared: Fija la forma de las bacterias y evita o dificulta su desintegracin. Rigidez resistente a la lisis osmtica. La pared de los grampositivos tiene entre 15 a 50 micrones (200 800 A) de espesor y es la murena el componente constante en un 50%. El segundo componente en cuanto a su frecuencia es el cido teicoico (polmero del ribitol-5fosfato). Contiene muy pocos lpidos. 1 micra = 10 A.

PARED DE LOS GRAMNEGATIVOS Es ms compleja. Contiene una capa interna de murena de 2 micras que representa del 5 al 20%. Son ricas en lpidos. En los grampositivos y gramnegativos el entramado estructural est constituido por cadenas polisacridas paralelas unidas covalentemente por medio de cadenas peptdicas transversales. Toda esta estructura se llama peptidoglucano o murena (glucopptido mucopptido). La unidad bsica que se repite en la estructura del peptidoglucano es el muropptido que es un disacrido constituido por N-acetil-D-glucosamina y cido N-acetilmurmico con enlaces -1-4. El grupo carboxilo de los restos de cido N-acetilmurmico del esqueleto se unen a cadenas laterales o tetrapeptdicas cada una de las cuales contiene L-lisina, segn la especie bacteriana que se trate. Las cadenas polisacridas paralelas de la pared celular se hallan unidas transversalmente mediante sus cadenas laterales peptdicas. El resto de alanina Terminal de la cadena lateral de una cadena polisacrida se une covalentemente con la cadena lateral de una cadena polisacrida adyacente bien directamente como Escherichia coli a travs de un pptido sencillo como la pentaglicina en Staphylococcus aureus. Existen importantes diferencias entre la composicin qumica de las paredes de los organismos grampositivos y gramnegativos. La pared celular de las bacterias grampositivas es gruesa y qumicamente ms compleja que la pared celular de las gramnegativas. Las paredes celulares de las bacterias grampositivas contienen ms aminocidos que las gramnegativas. Los cidos teicoicos son propios de las paredes de las grampositivas. El contenido lpidico de las bacterias gramnegativas es considerablemente mayor que el de los organismos grampositivos. Uno de los constituyentes de la pared celular de los gramnegativos, el lipopolisacrido determina la antigenicidad, toxigenicidad y sensibilidad a la infeccin por fagos. El lipopolisacrido se conoce tambin como la endotoxina. El componente que en gran medida determina la forma de la pared celular es el peptidoglucano, glucopptido, mucopptido o murena, un polmero insoluble que es un constituyente de todas las paredes celulares bacterianas. Los peptidoglucanos son polmeros muy grandes compuestos de tres clases de bloques constructivos: a) Acetilglucosamina (AGA). b) Acido acetilmurmico (AMA). c) Un pptido de 5 aminocidos de variedad limitada. Se cree que la funcin de la pared celular es proporcionar un armazn rgido que d apoyo y proteger de la presin osmtica a las partes protoplsmicas ms susceptibles. En ambos organismos grampositivos y gramnegativos se encuentra la cpsula murena o mucoptida que la da rigidez a la pared celular y mantiene la forma caracterstica de cada organismo. Adems de la capa mucopptida, las especies gramnegativas contienen tambin grandes cantidades de lpidos, polisacridos y complejos protenicos.

Las bacterias grampositivas contienen una corta variedad de aminocidos, aminoazcares y componentes azucarados polimerizados para formar molculas ms complejas. La red de la pared celular que forma la capa mucopptida resulta de los enlaces covalentes de 3 componentes: cadena de polisacridos, subunidades peptdicas y los puentes de unin transversal de las subunidades pptidas. El pptido de las bacterias grampositivas se compone de 3 o 4 aminocidos como la alanina, cido glutmico, L-Lisina y cido , diaminopimlico. La ramnosa es el azcar distintivo de los estreptococos, La arabinosa de las paredes de Mycobacterium y Corynebacterium. Tambin de las paredes de las especies grampositivas es el cido teicoico, los cuales son polmeros fosfolcticos con residuos de ribitol como de glicerina con enlaces fosfodister. Los cidos teicoicos son importantes antgenos de superficie. Las bacterias gramnegativas miden 100 A de dimetro. Tienen una capa mucopptida rgida similar a la grampositiva. Se han encontrado en la pared celular de ellos compuestos de protenas, lpidos y polisacridos como complejos macromoleculares. Los componentes macromoleculares de la pared celular de los organismos gramnegativos se han representado en 3 capas: Mucopptida que le da rigidez interna. Lipopolisacrido: Rigidez media. Lipoprotena: Rigidez externa.

DIFERENCIALES La identificacin bacteriana viene facilitada con frecuencia por el uso de medios diferenciales que revelan caractersticas especiales. El agar sangre contiene 5% de sangre de carnero o de caballo y se usa para poner de relieve la formacin de una hemolisina. La fermentacin de un determinado azcar en las placas de fermentacin se demuestra mediante colorantes tales como la mezcla de eosina y azul de metileno. Esta mezcla, en presencia de cido, no solo cambia de color sino que tambin precipita y de esta manera se tie toda la colonia. La precipitacin es lo suficientemente localizada como para destacar los sectores teidos en una colonia que contenga una subclona mutante (una clona es definido como un grupo de clulas derivadas mediante la reproduccin vegetativa de una nica clula progenitora). De aqu que todo cultivo puro de bacterias sea una clona y que la progenie de una mutante se denomine subclona. Las placas de fermentacin se usan con mucha frecuencia para los organismos facultativos. Estas placas son muy eficaces incluso cuando se produce una incubacin en presencia de aire, debido a que estos organismos convierten los azcares en cidos orgnicos ms rpidamente de los que estos pueden ser degradados a dixido de carbono. Una placa de fermentacin debe contener desde luego otras sustancias nutritivas, aparte del azcar, para permitir un crecimiento de los organismos no fermentadores. Un medio diferencial es aquel medio que es formulado de tal modo que sea posible distinguir a simple vista cuando una colonia est determinando cambios qumicos especficos. Comnmente estos cambios qumicos se hacen evidentes por medio del empleo de indicadores coloreados. Si un indicador con un color dado (es decir, pH especfico) es agregado al medio y el cultivo de las especies deseadas cambia el pH alrededor de las colonias en desarrollo aparecer un color diferente. CRECIMIENTO EN MASA Es muy importante para el diagnstico bacteriolgico conseguir que las colonias crezcan aisladas. Las colonias apelotonadas son demasiadamente pequeas para revelar las caractersticas morfolgicas. Adems no puede producir la suficiente acidez localizada para detectar un proceso fermentativo y la produccin dispersa de cido puede causar una hemlisis difusa inespecfica. Desde luego es muy importante inspeccionar las placas tras un periodo estandarizado de incubacin (generalmente de 18 a 24 horas a 37C). MEDIOS SELECTIVOS Los tipos celulares que predominan en una poblacin determinada pueden ser fcilmente aislados (clonados) en una placa. Sin embargo, para aislar los

componentes menores de un cultivo es necesario emplear medios selectivos. Los medios selectivos lquidos proporcionan un enriquecimiento de la poblacin en lo que se refiere a los organismos que se desea aislar, mientras que los medios slidos permiten su aislamiento directo. El enriquecimiento del medio se basa en varios principios. Los organismos capaces de utilizar un determinado azcar son aislados y dicho azcar se convierte en la nica fuente de carbono para el cultivo. En cambio la seleccin de organismos que no lo utilizan (no fermentadores) resulta ms difcil. De forma parecida, el empleo de medios mnimos o de medios que contienen escasos factores de crecimiento excluir a los organismos muy exigentes; la seleccin de estos organismos resulta muy difcil y en general hay que recurrir a la inhibicin selectiva de especies ms simples desde el punto de vista nutritivo (por ejemplo empleando sales o pHs desfavorables, inhibidores especficos). Dentro de estos inhibidores especficos se encuentra el telurito para el crecimiento selectivo del bacilo diftrico, el bismuto y diversos colorantes como el verde malaquita para el crecimiento selectivo de salmonella y shigella (agar sulfito de bismuto y caldo tetrationato) en los cultivos de heces as como el tratamiento previo con cidos o lcalis fuertes para permitir la recuperacin de los organismos de crecimiento lento pero resistentes tal como el bacilo de la tuberculosis. Un medio selectivo es aquel que ha sido qumicamente formulado de tal forma que permita el crecimiento de la especie que se desea aislar al mismo tiempo que suprima el crecimiento de cualquier otra especie competidora. MEDIOS ENRIQUECIDOS La adicin de componentes como sangre, suero o extracto de tejidos de animales y plantas al caldo nutritivo o agar, le proporciona sustancias nutritivas complementarias para que medio pueda soportar el crecimiento de los hetertrofos exigentes (organismos que necesitan de compuestos orgnicos de carbono tales como los azcares o carbohidratos). PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA INFECCION: Se deriva del latn inficere que significa poner o penetrar en, esto implica accin competitiva entre dos seres vivos, husped y parsito por la superioridad. En el sentido ms exacto, la infeccin indica presencia de microorganismos sobre o dentro del cuerpo del husped. INFESTACION: Difiere de la infeccin en que la primera indica la presencia de parsitos animales sobre o dentro del cuerpo del husped. Se incluyen formas macroscpicas como piojos, pulgas, gusanos planos y tremtodos. Infestare del latn, significa inquietante u hostil. Un organismo infestante puede transmitir una infeccin, como las pulgas transmiten la peste o los piojos el tifo (Rickettssia prowazeki).

PARASITISMO: Deriva de la palabra griega parasits que significa comerse unos a otros. Organismo que vive a expensas de otro llamado husped. La infeccin es un tipo de parasitismo. AGENTE PATOGENO: Es el que es capaz de producir una enfermedad. PATOGENICIDAD: Se refiere a la capacidad que tienen los parsitos para penetrar al husped y producirle cambios fisiolgicos y anatmicos como la enfermedad. El grado de patogenicidad o facultad de un organismo para producir enfermedad se denomina virulencia. Factores de virulencia: como la capacidad de producir toxinas o venenos potentes. Debemos saber que todos los microorganismos, parsitos patgenos o no patgenos, virulentos o avirulentos son potencialmente productores de enfermedad, dependiendo solo del estado que guarde las defensas del husped. Un agente patgeno que es virulento para un husped es avirulento para otro. Los gonococos son virulentos para el hombre pero no lo son para la mayora de los animales inferiores. As un microorganismo patgeno tiene un potencial para producir enfermedad pero lo hace solo si es suficientemente virulento para penetrar al cuerpo y vencer los mecanismos de defensa del husped. Ahora se reconoce que los microbios no patgenos tienen la capacidad de producir infeccin y enfermedad. Esta capacidad no solo depende de los factores de virulencia sino que dependen ms de los mecanismos de defensa del husped (oportunistas). REQUISITOS DE LOS PARASITOS PARA PRODUCIR ENFERMEDAD. 1. Deben ser capaces de metabolizar y multiplicarse dentro o sobre los tejidos del husped. 2. Debern de resistir los mecanismos de defensa del husped durante el tiempo necesario que les permita desarrollarse y reproducirse en nmero suficiente para causar enfermedad aparente. DINAMICA DEL PROCESO INFECCIOSO A) Iniciacin de la infeccin: Para que los microbios patgenos puedan iniciar la infeccin, primero deben sobrevivir en las superficies mucosas compitiendo con otros microorganismos comensales y despus penetrar en los tejidos. B) Produccin del Sndrome de la Enfermedad: Una vez dentro de los tejidos, los microorganismos invasores deben ser capaces de desarrollarse y multiplicarse de manera que produzcan la enfermedad ya sea por crecer en una lesin local o por diseminarse dentro del husped por las vas linftica o sangunea. Adems estos microorganismos debern competir contra los

mecanismos de defensa del husped que los matan o los eliminan. En general no se conoce que tan rpido se desarrollan o se dividen los microorganismos patgenos en el husped (Salmonella typhimurium en ratn es de 8 a 10 horas comparada con medio hora que tarda in Vitro). La mayora de las especies bacterianas que son incapaces de penetrar las defensas naturales del husped se llama bacteria no patgena. ALGUNOS FACTORES DE VIRULENCIA 1. FACTORES TOXICOS: Algunos microorganismos producen sustancias venenosas de peso molecular elevado conocidas como toxinas. La capacidad de los microorganismos de producir toxinas es un factor importante en su capacidad para producir enfermedad. Las toxinas producidas por los microorganismos pueden ser excretadas al medio que los rodea (exotoxinas) o retenidas dentro de la clula (endotoxinas). Exotoxinas: Las exotoxinas son difusibles y eliminadas por la clula productora al medio que la rodea al sistema circulatorio y tejido del husped. Por ejemplo, el medio puede ser una lata de vegetales contaminada por Clostridium botulinum (en ausencia de aire ya que es una anaerobio estricto) mal esterilizada, la red sangunea como cuando el bacilo de la difteria (Corynebacterium diphtheriae) se desarrolla en la garganta del hombre o cuando Clostridium tetani crece en los tejidos muertos que rodea una herida (1 miligramo de toxina tetnica basta para matar un milln de cobayos). CARACTERISTICAS DE LAS EXOTOXINAS A) Pierden su toxicidad cuando se les calienta o trata con cidos. B) Hay datos de que su toxicidad se debe a la configuracin espacial de los aminocidos en la molcula, cuando este arreglo se altera se pierde la toxicidad y las sustancias resultantes se conocen como toxoides. C) Las toxinas y los toxoides tienen la capacidad de estimular la produccin de antitoxinas las cuales neutralizan las toxinas en el cuerpo del husped. D) Los microorganismos patgenos a los cuales no se les ha demostrado que produzcan toxinas generalmente tienen alto poder de invasin (Streptococcus pneumoniae), algunas bacterias tienen muy limitada la capacidad de invasin pero producen toxinas extremadamente potentes (Clostridium tetani, Clostridium botulinum), muchas a la vez son invasores y toxignicas (Streptococcus pyogenes). ENDOTOXINAS Las bacterias gramnegativas no elaboran toxinas solubles en las clulas vivas o intactas pero producen endotoxinas que se liberan cuando las clulas se desintegran. La presencia de sustancias txicas de tales bacterias se debe a la lisis de algunas bacterias que ocurre durante el ltimo periodo de desarrollo. Las endotoxinas de las bacterias gramnegativas que se localizan en la pared celular son sustancias complejas que contienen fsforo, lpidos, carbohidratos

y protenas. Comparadas con las exotoxinas, las endotoxinas son: 1) relativamente rermoestables. 2) No forman toxoides. 3) Son menos txicas. Las endotoxinas son altamente pirgenas, algunas inhiben la fagocitosis (ingestin de microorganismos u otras partculas extraas por leucocitos), pero otras la estimulan. Son macromolculas complejas que contienen fosfolpidos y lipopolisacridos. Solo son liberadas si se altera la integridad de la pared celular. Algunas caractersticas de las Exotoxinas y Endotoxinas Caractersticas Fuente bacteriana Exotoxina Endotoxina

Excretada por bacterias G+ Desprendidas de las paredes Celulares de las bacterias Glisadas. Protenas Se inactivan fcilmente a 61 80C. Se tranforman en toxoides y rpidamente se neutrali zan por las antitoxinas. Pequea Lipopolisacridos Pueden resistir el autoclave. No forman toxoides.

Naturaleza Qumica Resistencia al Calor Inmunologa

Dosis Letal

Muy grande.

FACTORES ENZIMATICOS La virulencia y poder de invasin de algunos microorganismos se debe en parte a las enzimas u otras sustancias metablicas. Hialuronidasa. Llamada tambin factor de diseminacin o difusin que influye en la capacidad de los microorganismos patgenos para penetrar los tejidos del husped hidrolizando el cido hialurnico que es un cemento tisular esencial de las clulas vivas. La hialuronidasa que se elabora solo en presencia del sustrato especfico (cido hialurnico) es producido por varios de los cocos y clostridas. Lecitinasa. La toxina del Clostridium perfringens es una lecitinasa (toxina ), la cual es activa frente a diversos tipos de clulas corporales entre ellas los eritrocitos produciendo hemlisis (reacciones hemolticas) in vitro (lisis de la

membrana de los eritrocitos) se debe a la degradacin de la lecitina presente en la membrana celular. Es necrozante y letal. Colagenasa. Sustancia que tambin influye en la virulencia de Clostridium perfringens, destruye la colgena, sustancia albuminoide que se encuentra en el msculo, huesos y cartlago en donde se construyen los tejidos celulares facilitando la extensin de la gangrena gaseosa. Coagulasa. Es producida por los estafilococos patgenos que acta en el plasma coagulando el fibringeno de ciertos animales. Est demostrado que la coagulasa participa en el proceso de prdida de la pared en los furnculos producidos por los estafilococos. La coagulasa tambin est relacionada con la produccin de cogulos en la sangre circulante ( la fibrina cubre las paredes celulares de las bacterias y as las protege de la fagocitosis). Fibrinolisinas o Estreptocinasas. Es producida por los estreptococos hemolticos de los grupos A, C y G que disuelve la fibrina humana, pero no la animal (produce coagulacin). Se cree que promueven la curacin de las lesiones locales disolviendo cogulos y exudados. Facilita la difusin por falta de fibrina. Conversin Plasmingeno Plasmina Protrombina Tromboquinasa Trombina Fibrongeno Fibrina

Leucocidina. Son producidas por algunos estafilococos y estreptococos que actan matando leucocitos in Vitro. Hemolisinas. Son sustancias que liberan hemoglobina de los glbulos rojos. Las hemolisinas son de dos tipos: Extracelulares y se pueden separar por filtracin. Las cepas hemolticas de bacterias patgenas son ms virulentas que las cepas no hemolticas de la misma especie. (aumentan la virulencia e invasividad). Las hemolisinas filtrables producidas por los estreptococos del grupo A se denominan estreptolisinas O y estreptolisinas S. Las que produce el Clostridium tetani se llama tetanolisina, la del Clostridium perfringens se denomina thetatoxinas y las producidas por neumococos, neumolisinas. El segundo tipo de hemolisinas bacterianas incluyen las que producen cambios visibles en las placas de agar sangre. Es hemlisis cuando las colonias de bacterias hemolticas se produce

una zona clara sin color que es donde los glbulos rojos han sido lisados y la hemoglobina destruida hasta perder su color. Otros tipos de bacterias reducen la hemoglobina a meta-hemoglobina que produce una zona verde alrededor de las colonias y se denomina hemlisis. MATERIAL CAPSULAR La virulencia de las bacterias se ve influida en muchos casos por la presencia o ausencia de cpsula (material polisacrido no txico) que rodean las clulas. Esto se demuestra por los neumococos que son virulentos cuando tienen cpsula pero en algunos casos son avirulentos cuando no estn capsulados. Los neumococos capsulados son resistentes a la fagocitosis mientras que los no capsulados son ingeridos rpidamente por los fagocitos. Otras bacterias que producen cpsula en conexin directa con la virulencia son Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae y Pasteurella multocida o avicida (clera de las gallinas, diarrea con sangre). VIRULENCIA La virulencia y toxigenicidad de una cepa bacteriana se valora en funcin de la dosis media que puede matar al 50% de los animales inoculados en un determinado periodo de tiempo. El nmero de bacterias necesarias para obtener este resultado se denomina DL50 (dosis letal). CONCEPTOS BASICOS El trmino Inmunidad se refiere a la resistencia relativa del husped frente a un determinado microbio. Inmunidad Natural: Depende de las propiedades innatas del husped que lo hacen resistente frente a un microorganismo. Inmunidad Adquirida: Se debe a la forma activa de los anticuerpos especficos o a la adquisicin pasiva de estos anticuerpos a partir de otro husped. Inmunidad Activa: Es producida por la exposicin a los propios agentes infecciosos o a sus antgenos. En general como resultado de las infecciones naturales o de la vacunacin (durante meses o aos). Inmunidad Pasiva: Resulta de la inyeccin de anticuerpos y es transitoria (unas pocas semanas dura). En recin nacidos, de los anticuerpos adquiridos en el tero a partir de la circulacin materna o en el post-parto del calostro materno. HIPERSENSIBILIDAD Los mecanismos que protegen al cuerpo contra las clulas invasoras tambin pueden producir efectos indeseables colectivamente llamados alergia o hipersensibilidad.

LATENCIA Infeccin que aunque existe no es lo suficientemente activa para ser reconocida. Las infecciones de este tipo se denominan latentes o inaparentes (infecciones crnicas como sfilis o tuberculosis). TRANSMISIBILIDAD Esta propiedad indica la facilidad con la que una infeccin se transmite de un individuo a otro. RESISTENCIA E INMUNIDAD La capacidad del cuerpo del husped para prevenir o impedir la invasin de microorganismos patgenos se conoce como Resistencia e Inmunidad (son sinnimos). En trminos generales la resistencia se refiere tanto a los factores inherentes al cuerpo, lo mismo que a los que se adquieren durante la vida. Estos factores se conocen respectivamente como resistencia natural o inmunidad adquirida. La resistencia natural proporciona defensa contra las infecciones por medio de barreras mecnicas o qumicas. La piel y las membranas mucosas, secreciones mucosas, enzimas y los componentes de la sangre y otros lquidos corporales son ejemplos de este tipo de barreras. La prdida de la resistencia natural se llama susceptibilidad. El tipo de resistencia adquirida, La inmunidad, es un factor muy importante para protegernos de las infecciones. Generalmente se debe al antagonismo entre los microbios patgenos y las sustancias especficas conocidas como anticuerpos los cuales son elaborados por el cuerpo en respuesta al estmulo de sustancias ajenas llamados antgenos. RESISTENCIA NATURAL La resistencia natural depende de muchos factores: la salud general del husped, su estado de nutricin, sus condiciones sociales y econmicas, y otros. Se manejarn los ms importantes: Resistencia de Especie: La resistencia a las infecciones vara segn la especie animal o vegetal. Por ejemplo las enfermedades infecciosas de los animales de sangre fra muy rara vez se presentan en los de sangre caliente. Pasteur encontr que las gallinas que son de sangre caliente resisten las infecciones por carbunco a menos que se les enfre ponindolas en agua fra. La ranas que son de sangre fra, son resistentes al carbunco a menos que se les caliente a 37C. La mayora de los mamferos son resistentes al Mycobacterium avium. Los mamferos son resistentes a enfermedades infecciosas las cuales son sensibles las aves, anfibios y peces. Los animales herbvoros con frecuencia resisten las enfermedades de los carnvoros y

viceversa as los perros son resistentes al carbunco que es una enfermedad muy grave del ganado, ovejas y personas. Resistencia Racial: Varias razas de animales y plantas tienen marcadas diferencias de resistencia a ciertas enfermedades infecciosas. El ganado Brahman resiste los protozoos parsitos que causan la fiebre de las garrapatas (togavirus) y ataca a otras razas vacunas. En el hombre la resistencia racial se explica en la mayora de los casos sobre las bases de selectividad y supervivencia. Los indios americanos son menos resistentes al bacilo tuberculoso que las personas con antecedentes europeos cuyos antepasados estuvieron expuestos a la tuberculosis durante muchos siglos antes que los indios. La alta resistencia de los negros a la fiebre amarilla se explica basndose en que estuvieron expuestos a esa enfermedad durante muchos aos antes de que los blancos lo hicieran. La sfilis es menos grave en las civilizaciones antiguas como la china que las nuevas culturas del hemisferio occidental. Resistencia Individual: Va a depender de la susceptibilidad aparente a las infecciones, estado de nutricin, higiene personal y oportunidades de exposicin a los microorganismos infecciosos. Tambin intervienen las tendencias alrgicas y disturbios endcrinos y hormonas sexuales. Tambin a la carencia o no formacin de anticuerpos (ancianos neumona). Mecanismos de Defensa Externos El cuerpo del husped tiene 2 lneas de defensa que deben ser vencidas por los microorganismos patgenos antes de que se establezca una infeccin. Mecanismos de defensa externos y los internos. En los primeros entran los factores mecnicos y qumicos. Las barreras mecnicas incluyen la piel y las mucosas intactas. Las bacterias son inhibidas por el cido lctico y los cidos grasos del sudor y glndulas sebceas y el pH cido que estas sustancias qumicas producen. Las secreciones mucosas del aparato respiratorio, digestivo, urogenital forman una cubierta protectora de las mucosas que colectan y detienen a muchos microorganismos hasta eliminarlos o hacerlos perder su efectividad. El peristaltismo expulsa los microorganismos atrapados en el moco y otros materiales, la tos, el estornudo, las lagrimas (lisozima:lisis de los grampositivos), la sudoracin y la salivacin son flujos mecnicos que arrastran a los microorganismos. Mecanismos Internos de Defensa: La segunda lnea de defensa se refiere a los mecanismos internos de defensa, stos son especficos o inespecficos. Ejemplos de inmunidad no especfica incluyen la fagocitosis, interfern, complemento y properdina. Y de inmunidad especfica adquirida son: 1.Activa: los anticuerpos se producen en el cuerpo como resultado del estmulo producido por microorganismos vivos, atenuados o muertos. 1.1 Natural: Formacin de anticuerpos estimulada por microorganismos vivos.

1.2 Artificial: Los anticuerpos se componen de microorganismos atenuados o muertos o productos txicos o detoxificados administrados al husped para estimular la produccin de anticuerpos. 2.Pasiva: Los anticuerpos que se producen por inmunizacin activa en un individuo se transfiere a otro, producen proteccin inmediata pero temporal. 2.1 Natural: Transferida a los recin nacidos de las madres inmunes va placenta o calostro. 2.2 Artificial: Se confiere por inyeccin de suero de animales inmunes o de humanos a individuos susceptibles, se usa para proporcionar proteccin inmediata en los casos de exposicin conocida a la infeccin o durante epidemias. ANTIGENOS Cualquier sustancia que cuando se introduce en el cuerpo origina la produccin de anticuerpos es un antgeno. As un antgeno tiene dos propiedades: La inmunogenicidad o capacidad de estimular la formacin de anticuerpos especficos y la reactividad o propiedad de reaccionar especficamente con esos anticuerpos. Los antgenos son protenas, nucleoprotenas, lipoprotenas, muchos polisacridos, numerosos polipptidos sintticos. En general son sustancias ajenas al cuerpo en el cual actan para producir la respuesta de los anticuerpos. Muchas sustancias actan como antgenos: bacterias, virus, protenas ajenas como plenes, albmina de huevo. VACUNAS Son suspensiones de cultivos de microorganismos muertos o vivos atenuados (con virulencia atenuada), se utilizan como antgenos para producir inmunidad contra infeccin producida por el microorganismo en particular. La vacuna contra la fiebre tifoidea la forman clulas muertas de salmonella Typha, la de Sabin (poliomielitis) contienen virus vivos atenuados. La vacuna de la rabia es hecha con virus inactivados que no producen infeccin pero que permiten estimular al organismo a producir anticuerpos. La vacuna contra la viruela es diferente ya que utilizan cultivos vivos del gnero Vaccinia muy relacionada al de la viruela pero que no es muy infecciosa a los humanos y produce anticuerpos. TOXOIDES Los toxoides se hacen destruyendo la porcin venenosa de las toxinas sin alterar la porcin antignica: los toxoides se usan antignicamente para proteger a los individuos contra la difteria, ttanos, y otras enfermedades causadas por toxinas o microorganismos productores de toxinas.

Resistencia natural

Operacin en Armona

Mec. De Defensa Internos

Especie Racial

Individual

Mecanismos de Def. externos

Inmunidad Inespecfica

Especfica Adquirida

Piel Mucosas

Tos, estornudos Transpiracin

Interfern Fagocitosis Complemento Properdina

Produccin de Anticuerpos

FAGOCITOSIS Metchnikoff, en 1882, fue el primero en reconocer la importancia de la fagocitosis en la proteccin del cuerpo contra las infecciones y crey que la actividad celular era el mecanismo de defensa primario del cuerpo para destruir las bacterias y otros microorganismos. Las principales clulas involucradas en la fagocitosis o ingestin y muerte de las bacterias son los neutrfilos (leucocitos polimorfonucleares) y los macrfagos (clulas del sistema reticuloendotelial). Los neutrfilos constituyen la lnea frontal de defensa interna para el husped. Se producen en la mdula sea en grandes cantidades y circulan en la sangre durante 6 a 7 horas. Despus penetran las paredes de los vasos sanguneos y pasan entre las uniones de las clulas edoteliales. Los neutrfilos son clulas de vida corta que no se dividen despus de dejar la mdula sea y sobreviven en los tejidos solo por unos das. En el hombre adulto se estima que hay 6 X 1011 neutrfilos (alrededor de 6000 a 7000/mm3) circulando en todo momento; por lo menos hay el mismo nmero en el tejido y la mdula sea tiene en reserva alrededor de 30 X 1011 que se pueden movilizar rpidamente. El ndice de cambio (los nuevos remplazan a los viejos) de neutrfilos es de X 10 11 diariamente. Los neutrfilos estan provistos de numerosas enzimas y sustancias antimicrobianas para matar y degradar las bacterias. Estas sustancias se encuentran en los lisosomas que son organelos rodeados por membranas. Los macrfagos tambin se forman en la mdula sea a partir de una clula precursora, pero a diferencia de los neutrfilos, tienen vida prolongada y pueden permanecer en los tejidos durante semanas o meses. Casi todos los macrfagos que se encuentran en los tejidos, la cavidad peritoneal, o los alvelos pulmonares vienen de los monocitos sanguneos que migran de la sangre a estas reas. Bajo ciertas condiciones, los macrfagos pueden sintetizar DNA y multiplicarse. Debido a su capacidad de diferenciacin, en los tejidos se les denomina histiocitos tisulares, en el hgado celulas de Kupffer y en los pulmones macrfagos alveolares. En general se reconocen dos tipos de macrfagos maduros: a) los errantes en los tejidos y espacios del cuerpo (como macrfagos alveolares y peritoneales) y b) los fijos del endotelio vascular (como las clulas de Kupffer y los macrfagos fijos del bazo y ganglios linfticos). Los macrfagos tambin poseen lisosomas y sustancias bactericidas, pero la mayor parte de los lisosomas no se forman durante el periodo de maduracin en la mdula sea, sino cuando el macrfago maduro es activado por el contacto con microbios u otros materiales extraos.

Mecanismo de la fagocitosis Este proceso se divide en dos fases: a) unin o adherencia de las bacterias a la membrana de la clula, b) ingestin. Algunas bacterias se unen fcilmente a los fagocitos y son fagocitadas rpidamente. Entre otras estn M. tubereculosis y Listeria monocytogenes. Las hay que no son atacadas rpidamente y son ingeridas con gran dificultad. Muchas de stas tienen grandes cpsulas como S. pneumoniae y K. pneumoniae que solo son fagocitadas si el fagocito atrapa a las bacterias sobre una superficie rugosa donde no puedan resbalarse y puedan ser ingeridas sin contacto previo (llamada fagocitosis de superficie), o tambin si la superficie de la bacteria se recubre primero con anticuerpos que promuevan su adherencia a la membrana celular del fagocito, lo cual como se dijo, se llama opsonizacin. Despus de adherida la bacteria,. Los fagocitos emiten pequeos pseudpodos alrededor de la bacteria, los cuales se funden y forman una vacuola que contiene a la bacteria fagocitada por la membrana celular. Esta estructura se llama fagosoma. El proceso de ingestin requiere energa. En los neutrfilos y en la mayora de los macrfagos, la energa la obtienen de la gluclisis. Otros macrfagos como los alveolares utilizan mecanismos de oxidacin aerbicos para la produccin de energa. La ingestin va seguida por un proceso conocido como desgranulacin. Los lisosomas que contienen enzimas hidrolticas y sustancias bactericidas se funden con los fagosomas y descargan su contenido. A esta estructura se le denomina fagolisosoma. Dentro de los fagolisosomas la mayora de las bacterias mueren en unos cuantos minutos, aunque la degradacin completa de las bacterias toma varias horas. El mecanismo por el cual son muertas las bacterias no se conoce con precisin. Las enzimas que intervienen incluyen hidrolasas cidas y lisozimas; otras sustancias antimicrobianas son el cido lctico, polipptidos bsicos y lactoferrina. DEFENSAS CONSTITUTIVAS: INTRODUCCION La asepsia de los tejidos profundos depende fuertemente de complejos mecanismos anti-microbianos, algunos de los cuales son constitutivos y otros inducibles. El principal de los sistemas constitutivos se conoce colectivamente como la RESPUESTA INFLAMATORIA y los sistemas inducibles se conocen como LA RESPUESTA INMUNE. Cuando un microorganismo atraviesa la epidermis protectora de la piel o los epitelios de las mucosas se encuentra con mecanismos de defensa que son constitutivos en el sentido de que no requieren el contacto previo de los microorganismos invasores (cuadro 6-1). La ms poderosa de estas defensas no se manifiesta en todos los tejidos todo el tiempo, sino que debe ser evocada. Es la

inflamacin o la respuesta inflamatoria. Es provocada por un complejo conjunto de seales de alerta y mediadores farmacolgicos, alguno de los cuales forman parte de un intrincado grupo de protenas sricas interactuantes denominadas el sistema del complemento. Este sistema, que nunca est del todo inactivo, normalmente se encuentra en un estado ocioso. Su actividad aumenta mucho, en general en forma local, ante la presencia de microorganismos en los tejidos. Una consecuencia importante de estas actividades es el reclutamiento de fagocitos, leucocitos que son capaces de ingerir y a menudo destruir las bacterias invasoras y otros microorganismos. Los primeros investigadores crean que los mecanismos constitutivos carecan del potencial de la respuesta inmune indecible. Poco a poco se aprendi que las dos respuestas estn inter-relacionadas; la respuesta inducible no puede expresarse en ausencia de los mediadores constitutivos. Ahora est claro que estos mediadores hacen sonar la alarma para la respuesta inducible, y mientras tanto, mantienen a raya a los microorganismos invasores. Los dos sistemas actan de manera sinrgica para proporcionar un sistema de defensa enormemente incrementado. INFLAMACION La inflamacin es la suma de los cambios que ocurren en los tejidos como reaccin a la lesin. Es un primer momento es un suceso puramente local, que se manifiesta con dolor, tumefaccin, ambas cosas y una sensacin de calor y latidos en la parte lesionada. El sitio inflamado aparece rojo y brillante, est caliente y es doloroso al tacto como resultado de alteraciones de los vasos sanguneos y los linfticos locales. Estos cambios son dinmicos y experimentan una evolucin predecible y contnua. Los tejidos pueden normalizarse o cicatrizarse. El resultado depende de la extensin del dao producido por el traumatismo, por los microorganismos infecciosos o por la respuesta inflamatoria propiamente dicha. Estos cambios rpidos caracterizan a la inflamacin aguda. Si la inflamacin aguda no cura el problema, puede cambiar de carcter y convertirse en una inflamacin crnica. Ambos procesos son esenciales para la defensa, pero ambos pueden lesionar la estructura y la funcin de los tejidos.

Cales son los cambios subyacentes en la inflamacin aguda? Brevemente, la irrigacin hacia la parte afectada aumenta debido a la vasodilatacin y los capilares se vuelven ms permeables, lo que permite que el lquido y las molculas grandes atraviesen el endotelio. Esto es importante para que los anticuerpos y los componentes del complemento normalmente tiendan a permanecer dentro de los vasos. La inflamacin les permite ingresar en los tejidos. Se acumulan leucocitos, primero neutrfilos y luego monolitos, en el endotelio cada vez ms pegajoso de los capilares inflamados. Cada vez ms leucocitos atraviesan el endotelio capilar por diapdesis, migran hacia los tejidos circundantes y se movilizan por quimiotaxis hacia el sitio

lesionado (vase fig. 6-2). As el enrojecimiento y mayor calor se debe al flujo sanguneo muy aumentado en el rea. La tumefaccin es causada por el eflujo de lquido y leucocitos. En la inflamacin leve el lquido tiene un bajo contenido proteco, como el contenido de una ampolla de la piel. Esto se conoce como el exudado seroso. En la inflamacin severa el lquido se denomina exudado fibrinoso, es rico en fibringeno y otras proteinas y finalmente se coagula debido a la formacin de fibrina. El dolor causado por la liberacin de mediadores qumicos y por la compresin mecnica de los nervios. Una consecuencia importante de la inflamacin es que el pH de los tejidos inflamados disminuye. Esto se debe a la produccin de cido lctico por las clulas inflamatorias que ingresan en el rea. El pH bajo es anti-microbiano y d como resultado la destruccin de las bacterias. La tensin de oxgeno en el tejido inflamado tambin se modifica: en primer lugar aumenta cuando la circulacin se incrementa por la vasodilatacin y luego disminuye cuando la circulacin es alterada por el edema, la necrosis o el espasmo vascular. MEDIADORES MOLECULARES DE LA INFLAMACION Y LA RESPUESTA DE FASE AGUDA. La inflamacin debida a microorganismos a menudo comienza con la activacin del complemento o de la cascada de la coagulacin sangunea. Esto conduce a la produccin y liberacin de cierto nmero de mediadores qumicos de la inflamacin que son los responsables de la permeabilidad vascular, la vasodilatacin y el dolor. Los sistemas del complemento y la coagulacin son interactivos, ya que cada uno puede poner en marcha al otro. Entre los mediadores qumicos mejor conocidos se encuentra la histamina, que dilata los vasos sanguneos y aumenta su permeabilidad. Tres pequeos pptidos denominados anafilatoxinas C3a, C4a y C5a, producidos por la activacin del sistema del complemento (vase cuadro 6-3) estimula la liberacin de la histamina de los mastocitos. Otros mediadores inflamatorios incluyen las denominadas quininas (cuadro 6-2), pequeos pptidos bsicos que alteran el tono vascular, aumenta la permeabilidad, inician o potencian la liberacin de otros mediadores desde los leucocitos. La mejor conocido es la bradiquinina, cuya potencia en el aumento de la permeabilidad vascular rivaliza con la de la histamina. Las quininas son producidas por el clivaje de protenas ms grandes, los quiningenos, por activacin de enzimas producidas durante la cascada de la coagulacin o liberadas desde los granulocitos. Estas enzimas se denominan calicrenas. Un compuesto clave en estas interacciones complejas es el factor de Hageman, que induce la produccin de mediadores ya mencionados luego de ser activado durante la inflamacin. Uno de los compuestos que lleva la activacin del factor de Hageman es la endotoxina (lipopolisacrido) de las bacterias gramnegativas. El factor de Hageman tambin desempea un papel significativo en la coagulacin de la sangre, un aspecto importante de los cambios titulares observados durante la inflamacin.

Otra clase de mediadores acta sobre la motilidad y el metabolismo de los leucocitos. Se trata de leucotrienos y las protaglandinas. Los leucotrienos, las prostaglandinas y ciertos fosfolpidos tambin causan la agregacin de las plaquetas de la sangre, un paso importante en la deteccin de las hemorragias. Las prostaglandinas formadas en el hipotlamo, tambin actan en los centros termorreguladores del cerebro y causan fiebre. La aspirina y la indometacina impiden la sntesis y los efectos de estas sustancias por medio de la inhibicin de la va de la ciclooxigenasa por la cual son sintetizadas. Durante la inflamacin se liberan ciertas protenas, sobre todo desde el hgado, y su concentracin srica aumenta. Colectivamente su aumento se conoce como la respuesta de fase aguda. La concentracin de algunas de esas protenas, por ejemplo las denominadas protena C reactiva, protenas fijadoras de lipopolisacridos y protena A de amiloide srico, aumentan 1000 veces o ms. Otras como la -1-anti-tripsina y el factor B del complemento aumentan 2 o 3 veces. Estas protenas parecen desempear diferentes papeles en la respuesta inflamatoria. Por ejemplo, la protena C reactiva (denominada as porque reacciona con el polisacrido C de los neumococos y con antgenos de otras bacterias) puede aumentar o atenuar la respuesta inflamatoria por medio de la activacin del complemento. La -1-anti-tripsina inhibe la proteasas que actan en la inflamacin. Otra clase de protenas movilizadas durante la respuesta de fase aguda consiste en las que, como la transferan, se unen con avidez al hierro y otros metales. Esto reduce la disponibilidad de los iones necesarios para los microorganismos invasores y ayuda a inhibir su crecimiento. Las evidencias sugieren que en la respuesta de fase aguda es invocada sobre todo por las protenas formadas por los monolitos activados. Dos miembros de la familia de mediadores conocidos como citoquinas han sido implicados en la provocacin de esta respuesta. CITOQUINAS Estas protenas son secretadas por los propios macrfagos y linfocitos. El nmero de citoquinas es notable; ahora se describen por los menos 11 denominadas interleuquinas (IL ms un nmero). Las citoquinas estn muy involucradas en la induccin de la respuesta inmune as como en la inflamacin. Algunas citoquinas (literalmente movilizadores celulares) son tan importantes en la inflamacin como por ejemplo IL-1 participa en muchos fenmenos inflamatorios, incluyendo la produccin de fiebre (pirgeno endgeno), la induccin de las protenas de adherencia en las clulas endoteliales, el incremento de la permeabilidad vascular y la coagulacin. En muchos casos la IL-1 acta por estimulacin de sus clulas blanco para expresar protaglandinas que a su vez actan sobre otras clulas. La IL-8 es liberada por los fagocitos mononucleares y las clulas endoteliales en respuesta a la IL-1 y es una poderosa quimiotaxina y un activador de la produccin de radicales de oxgeno por los neutrfilos y los

macrfagos. Contribuye a la acumulacin de pus en la inflamacin. No es difcil de imaginar que estas acciones son beneficiosas para el husped y deletreas para el agente infeccioso. Como sera de esperar, sustancias poderosas como las citoquinas pueden contribuir, y lo hacen, al dao tisular local y general. An as el efecto global de las citoquinas consiste en orquestar los mecanismos protectores del husped. SISTEMA DEL COMPLEMENTO

Estafilococos Los estafilococos son responsables de ms del 80% de las enfermedades supurativas (bacterias pigenas o productoras de pus) que se encuentran en la prctica mdica. Provocan la mayora de las infecciones supurativas de la piel pero tambin pueden invadir y producir infecciones severas en cualquier otra parte del cuerpo. El hbitat natural primario del estafilococo es la piel de los mamferos. El Gnero Staphylococcus. Staphylococcus es el nico gnero de importancia mdica en la familia Micrococcaceae. Incluye cocos Grampositivos que son anaerobios facultativos y crecen en racimos irregulares. El nombre estafilococo deriva del griego staphyl (racimo) y kokkos (grano), fue introducido para describir los organismos observados por los primeros investigadores en pus de infecciones quirrgicas. Dado que muchas cepas recin aisladas de una enfermedad por estafilococo producan un pigmento amarillo dorado, el organismo se denomin Staphylococcus aureus para distinguir a estas cepas de los estafilococos no patgenos que habitualmente producen colonias blancas (albus). La produccin de coagulasa es el nico criterio ms til para el reconocimiento de S. aureus, independientemente de la pigmentacin de la colonia. El gnero Staphylococcus est clasificado en el Manual de Bergey de Bacteriologa Sistemtica, volumen 2 (1986) en la seccin 12 que corresponde a los cocos grampositivos, Familia Micrococcaceae en donde se describen 19 especies. Actualmente se reconocen 32 especies y 15 subespecies, los cuales son huspedes naturales del humano o de otros primates, animales domsticos, peces, delfines y aves. Las bacterias que forman el gnero staphylococcus se presentan como formas esfricas denominados cocos que miden de 0.5 a 1.5 de dimetro. En observaciones microscpicas provenientes de colonias bacterianas desarrolladas en medios de cultivo slidos se agrupan en forma parecido a un racimo de uva, debido a que se dividen en 3 planos. Cuando crecen en medios lquidos, se presentan en cadenas cortas o pueden aparecer aislados. En muestras clnicas se observan cocos aislados, en pares o en cadenas cortas. Son Grampositivos, no tienen flagelos y presentan una cpsula de polisacrido. Los estafilococos crecen en medios de cultivos simples y a las 24 de horas de incubacin a 37C se desarrollan colonias de 2 4 mm. de dimetro, blancas, lisas, convexas, y con bordes regulares. Algunas especies producen pigmentos, y se ponen de manifiesto cuando el medio de cultivo con el desarrollo bacteriano se deja a la temperatura ambiente. En medios de cultivo lquidos se observa una turbiedad uniforme.

Los estafilococos se pueden separar por su capacidad de coagular o no el plasma, los que los coagulan son: las especies: Staphylococcus lutrae, S. aureus, S. intermedius y S. delphini y tres subespecies: S. aureus ssp. aureus, S. aureus ssp. anaerobius y S. chleiferi ssp. coagulans. S. hyicus puede o no coagularlo; las especies restantes no lo coagulan y son llamados genricamente como estafilococos coagulasa negativos (SCN). De las 32 especies de estafilococos que se describen, 17 se encuentran como parte de la biota normal de la piel y de las mucosas del humano, siendo s. epidermidis el ms frecuentemente aislado, aunque tambin se menciona a S. aureus, S. capitis, S. warneri, S. haemolyticus y S. cohnii. En Mxico se han aislado 6 especies siendo el ms frecuente S. epidermidis. Durante mucho tiempo se consider que la nica especie patgena para el hombre era S. aureus. A partir de la dcada de los 80s se observ que en personas que presentaban algunas enfermedades como anemia, cncer, diabetes mellitus o factores predisponentes como alcoholismo, drogadiccin e inmunosupresin y desnutricin, los estafilococos coagulasa negativos se mencionan como responsables de algunos cuadros clnicos. Adems se ha reconocido como una de las causas principales de infeccin intrahospitalaria. Las infecciones causadas por estas bacterias involucran cuerpos extraos como catteres y dispositivos artificiales introducidos a travs de la pel o de las mucosas.Las especies de mayor importancia mdica son S. aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus. Otras especies como S. warneri, S. haemolyticus, S. xilosus y S. schleiferi se reconocen como patgenos oportunistas. La pared celular del S. aureus consiste de 3 componentes principales: peptidoglicano, cidos teicoicos y protena A. El peptidoglicano consiste de residuos de cido N-acetilmurmico y N-acetilglicosamina que alternan regularmente y estn unidos por uniones beta 1 4 glicosdicas. Adems contienen cadenas de tetrapptidos que estn unidas, en forma cruzada, por puentes de pentaglicina. Esto le proporciona a la pared estafiloccica una estructura firme que ayuda a la clula a sobrevivir en el hostil medio ambiente de los tejidos del husped. Los anticuerpos son producidos por el glucopptido. En el S. aureus el cido teicoico de la pared es del tipo ribitolfosfato. Protena A. El principal componente proteico de la pared celular del S. aureus es la protena A, aproximadamente un tercio de la cual es liberada hacia el medio durante el crecimiento celular. La protena A purificada contiene una preponderancia de aminocidos bsicos. En la clula la protena A est unida covalentemente a la estructura glucopptida y se distribuye uniformemente en toda la pared celular. Interacciona con los anticuerpos. Es anticomplementaria, antifagoctica e inmunognica. Fisiologa. A pesar de ser un anaerobio facultativo se obtiene un crecimiento ms abundante en condiciones aerobias. La temperatura ptima para S. aureus es de 30 37C. El pH ptimo es de 7.0 7.5. Para el crecimiento en medios definidos

los estafilococos requieren de aminocidos y de vitaminas. En condiciones anaerobias tambin requieren uracilo y una fuente de carbono fermentable. Pueden crecer bien en medios de laboratorio de rutina como agar soja tripticasa. Se aconseja el agar sangre de carnero para el aislamiento primario de materiales clnicos. En la preparacin de agar sangre no debe emplearse sangre humana debido a la presencia de inhibidores o anticuerpos no especificos. Metabolismo: La energa es obtenida tanto de la va respiratoria como de la fermentativa. Las vas de gliclisis, ciclo de pentosas-fosfato y cido ctrico funcionan en condiciones de crecimiento apropiadas. La catalasa es producida en medios aerobios. Utilizan un amplio espectro de azcares y otros hidratos de carbono. En condiciones aerobias el principal producto del catabolismo de la glucosa es el cido actico con pequeas cantidades de dixido de carbono. En condiciones anaerobias, el producto principal es el cido lctico y tambin se produce acetona. La fermentacin del manitol por muchas cepas de S. aureus es til en su diferenciacin de S. epidermidis. Caractersticas que distinguen las especies principales del gnero Staphylococcus. Coagulasa Crec. y fermentacin Anaerbica de glucosa Manitol Acido:Aerbico Acido anaerobio Alfa-toxina Endonucleasas resistente Al calor Biotina para el crec. Pared Celular: Ribitol Glicerol: Proteina A Sensibilidad a la Novobiocina S. aureus + + + + + + + + S S. epidermidis + + + + S S. saprophyticus V np + V R

NP= NO PROBADAS, V=VARIABLE, S= SENSIBLE, R= RESISTENTE

El estafilococo fu descubierto Por Pasteur en 1880, en el pus de un furnculo pero se atribuye a Rosenbach (1884) por haberlo estudiado. PIGMENTOS Puede producir pigmentos carotenoides (naranja-oscuro-amarillo plido), de ah la denominacin de aureus y albus segn la produccin de tales pigmentos. En su mayora la formacin de pigmento la realizan mejor por crecimiento en placas de agar a 37C por 24 horas, luego se pasa de la incubacin a temperatura ambiente otras 24-48 horas, pero pueden perderla espontneamente por lo que no es un buen criterio de patogenicidad.. No se producen pigmentos en condiciones anaerobias en medios lquidos. Las variedades patgenas elaboran una hemolisina de tipo , otra de tipo y otra denominada Hot-Cold pues para hacerla visible se tiene que pasar el cultivo de la estufa a la nevera. La hemlisis al igual que la pigmentacin es una propiedad variable de los estafilococos. TOXINAS Se han definido tres tipos principales de toxinas estafiloccicas sobre la base de su actividad biolgica: toxinas citolticas (hemolisinas y leucocidinas), enterotoxinas y toxina epidermoltica. a) La -toxina es una exotoxina segregada por el germen que tiene un efecto hemoltico, dermonecrtico y letal. Tambin se conoce como hemolisina con un PM=28,000 que tambin causa efecto leucocida y de agregacin plaquetaria (lesiona plaquetas y macrfagos humanos). Lesiona el sistema circulatorio, tejido muscular y de la corteza renal. b) Leucocidina, descubierta por PANTON Y VALENTINE tiene un efecto sobre los leucocitos y provoca lesiones de degranulacin del citoplasma, daa principalmente PMN y macrfagos. Esta formada por 2 proteinas, los componentes F (fast) y S(slow); actan de forma sinrgica y cada una sola es inactiva. La interaccin membrana-leucocidina estimula la actividad acilfosfatasa sensible al K+ acompaada de un aumento de la permeabilidad a cationes y una acumulacin en el citoplasma de ortofosfato con gasto de ATP. En presencia de Ca++ secretan grandes cantidades de proteina derivada de grnulos citoplsmicos (degranulacin). c) Enterotoxina, es elaborada por ciertas cepas (1/3 de cepas coagulasa positiva las producen). La enterotoxina provoca la mayora de las toxiinfecciones alimentarias. Es de naturaleza proteica-globular de PM= 28,000 35,000. Son protenas terrmoestables inatacables por los jugos intestinales y se conocen variedades antignicas hasta de 6 tipos (A,B,C1,C2,D y E). A y D se asocian con ms frecuencia con intoxicacin de alimentos. Funcin: Pirgena e incrementa la letalidad de Gramnegativos. ENZIMAS Dentro de las ms importantes estn: 1) Coagulasa: es la prueba ms especfica para indicar la patogenicidad del estafilococo. Es una sustancia proteca, filtrable, termoestable. Hay una

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correlacin entre la cantidad de fosfolpidos y lpidos neutros con la produccin de estafilocoagulasa. Existe una coagulasa libre que segregan los estafilococos y otra coagulasa ligada a la superficie del germen (Clumping Factor) til para la prueba en porta. El test de la coagulasa libre se realiza en un tubo de hemlisis en el que se ponen 0.5 ml. de cultivo y 0.5 ml. de plasma de conejo o humano. La coagulacin del plasma indica reaccin positiva. Para lograr una actividad enzimtica total la coagulasa requiere la participacin de un componente plasmtico ya sea protrombina o una estructura protrombnica modificada denominada Factor de Reaccin de la Coagulasa (FRC). Estafiloquinasa. Acta sobre la fibrina a travs de una profibrinolisina (activacin del plasmingeno plasmtico en la enzima fibronoltica plasmina, la cual es una proteasa) destruyendo los cogulos de fibrina y siendo causa de la formacin de micro-mbolos (masas bacterianas) productoras de septicemias. Hialuronidasa: Factor de difusin de DURAND-REYNALDS capaz de hidrolizar el cido hialurnico presente en la sustancia intracelular del tejido conectivo facilitando la diseminacin de la infeccin. Dado que la inflamacin antagoniza la accin diseminadora de hialuronidasa, su importancia en las infecciones est limitada a los estados tempranos. Ms del 90% de las cepas de aureus producen esta enzima. Desoxirribonucleasas: se ponen de manifiesto sobre los medios de DNA. Proteina globular compacta constituida por una sola cadena polipeptdica. Es una fosfodiesterasa con propiedades endo y exo nucleolticas que pueden clivar DNA o RNA para producir 3 fosfomononucletidos. Rompe exudados. -lactamasas: son capaces de romper el anillo -lactmico de las PENICILINAS. Su produccin depende de factores extracromosmicos de tipo plasmdico.

PODER PATOGENO El estafilococo es un germen muy ubicuitario por lo que se puede encontrar en la piel, en las fosas nasales, garganta, etc. del hombre y de los animales. Hay ciertos factores predisponentes como el estado diabtico, factor terreno, avitaminosis, etc. Podemos distinguir infecciones localizadas y generalizadas (septicemias) y toxiinfecciones por su enterotoxina.

ESTREPTOCOCO
PERTENCEN A LA FAMILIA STREPTOCOCCACEAE DE ACUERDO A LA EDICION DE1984 DEL MANUAL DE BERGEY DE BACTERIOLOGIA SISTEMATICA Y SE DIVIDE EN 10 GENEROS: STREPTOCOCCUS, LEUCONOSTOC, AEROCOCCUS, PEDIOCOCCUS, PEPTOCOCCUS, PEPTOESTREPTOCOCCUS, GEMELLA, RUMINOCOCCUS, COPROCOCCUS Y SARCINA. EN 1991 CON TECNICAS GENETICAS COMO HIBRIDACION DNA-RNA RIBOSOMICA EL GENERO STREPTOCOCCUS PUEDE DIVIDIRSE OPERATIVAMENTE EN 7 GRUPOS, GRUPO I: GRUPO PIOGENICO, GRUPO II: GRUPO DEL S. BOVIS, GRUPO III: GRUPO DEL S. MITIS, GRUPO IV: GRUPO DEL S. MUTANS, GRUPO V: GRUPO DEL S. SALIVARIUS, GRUPO VI: GRUPO DEL S. MILLERI Y GRUPO VII: GRUPO DE LAS ESPECIES SIN FILIACION, COMO SE MUESTRA EN EL CUADRO 12.2 CARACTERISTICAS GENERALES LOS ESTREPTOCOCOS SON ANAEROBIOS FACULTATIVOS, ALGUNAS CEPAS DESARROLLAN MEJOR EN CONDICIONES DE ANAEROBIOSIS Y SON ESTIMULADOS POR EL AUMENTO DE CO2. LOS ESTREPTOCOCOS, ENTEROCOCOS Y AEROCOCOS DE IMPORTANCIAS MEDICA SON HOMOFERMENTADORES, LO QUE SIGNIFICA QUE EL UNICO PRODUCTO DE FERMENTACION DE LA GLUCOSA ES EL ACIDO LACTICO. SON OXIDASA NEGATIVOS PROPIEDAD QUE CONJUNTAMENTE CON LA COLORACION DE GRAM LOS DIFERENCIA DE LAS ESPECIES DE NEISSERIAS. CUANDO SE CULTIVAN EN MEDIOS LIQUIDOS LOS MIEMBROS DEL GENERO ESTREPTOCOCO SE PRESENTAN EN CADENAS (O EN CADENAS DE DIPLOCOCOS). LA PARED CELULAR ESTA COMPUESTA FUNDAMENTALMENTE DE PEPTIDOGLUCANO EN EL CUAL SE ENCUENTRAN EMBEBIDOS UNA VARIEDAD DE HIDRATOS DE CARBONO, ACIDOS TEICOICOS, LIPOPROTEINAS. EL TRABAJO DE REBECA LANCEFIELD ESTABLECIO EL SISTEMA DE AGRUPACION DE LANCEFIELD PARA LOS ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLITICOS. LOS ANTIGENOS DETECTADOS POR EL SISTEMA DE AGRUPACION DE LANCEFIELD SON POLISACARIDOS DE PARED CELULAR Y SE CLASIFICAN EN A, B, C, F, G, O SON ACIDOS LIPOTEICOICOS COMO LOS ESTREPTOCOCS DEL GRUPO D. FACTORES DE VIRULENCIA DE LOS ESTREPTOCOCOS EL PRINCIPAL ANTIGENO DE PARED CELULAR DEL GRUPO A ES UN POLISACARIDO COMPLEJO QUE CONSISTE EN L-RAMNOSA Y N-ACETIL-D-GLUCOSAMINA EN RELACION 2:1 EL CUAL SE ENCUENTRA UNIDO EN FORMA COVALENTE AL PEPTIDOGLUCANO. ALGUNAS CEPAS DEL GRUPO A POSEEN UNA CAPSULA COMPUESTA DE ACIDO HIALURONICO. ESTA CAPSULA PREVIENE LA OPSONIZACION DEL MICROORGANISMO Y POR CONSIGUIENTE ES UN DETERMINANTE DE VIRULENCIA. EL PRINCIPAL FACTOR DE VIRULENCIA DE LOS ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO A ES UN ANTIGENO DE SUPERFICIE DENOMINADO PROTEINA M. SON PROTEINAS ASOCIADAS A LA MEMBRANA EXTERNA DE LA PARED CELULAR, ESTABLES A LOS ACIDOS Y AL CALOR Y SENSIBLES A LA TRIPSINA. LA PROTEINA M SE ENCUENTRA FIJADA A LA MEMBRANA CELULAR, SE EXTIENDE A TRAVES DE LA CAPA DE PEPTIDOGLUCANO Y SE PROYECTA POR FUERA DE LA SUPERFICIE DE LA CELULA BACTERIANA (FIG 12.1). LAS CAPAS RICAS EN PROTEINA M SON RESISTENTES A LA FAGOCITOSIS Y MUERTE INTRACELULAR POR PARTE DE LAS CELULAS POLIMORFONUCLEARES. LAS CELULAS QUE CARECEN DE PROTEINA M DEMOSTRABLE SON FACILMENTE FAGOCITADAS Y MUERTAS. LA PROTEINA M ES ALTAMENTE INMUNOGENICA POR LO QUE SE BUSCA VACUNA CONTRA ESTA PROTEINA.

LOS ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO A TAMBIEN POSEEN ANTIGENOS T Y R. LOS PRIMEROS SON ESTABLES AL CALOR Y ACIDOS. NI EL ANTIGENO T NI R SE ASOCIAN CDON LAS VIRULENCIA. LOS ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO A PRODUCEN 2 HEMOLISINAS: LA ESTREPTOLISINA O Y LA S. LA ESTREPTOLISINA O ES LABIL AL OXIGENO, ANTIGENICA, INHIBIDA POR EL COLESTEROL Y TOXICA PARA UNA VARIEDAD DE CELULAS, EN LAS QUE SE INCLUYEN LOS LEUCOCITOS, MONOCITOS Y CELULAS EN CULTIVO. DEBIDO A SU LABILIDAD FRENTE AL OXIGENO, ES LA RESPONSABLE FUNDAMENTALMENTE DE LA BETA HEMOLISIS QUE SE OBSERVA ALREDEDOR DE LAS COLONIAS DE ESTREPTOCOCOS A QUE SE VEN POR DEBAJO DE LA SUPERFICIE DEL AGAR DE PLACAS O EN LAS ZONAS PUNZADAS DE AGAR SANGRE DE CARNERO DE LAS PLACAS INOCULADAS. LA ESTREPTOLISINA O TAMBIEN ES PRODUCIDA POR ALGUNOS ESTREPTOCOCOS GRUPO C Y GRUPO G. LA DETERMINACION DE ANTICUERPOS CONTRA LA ESTREPTOLISINA O (TITULO DE ANTIESTREPTOLISINA O, ASO) EN SUERO ES UTIL PARA EL DIAGNOSTICO RETROSPECTIVO DE INFECCIONES FARINGEAS PRODUCIDAS RECIENTEMENTE POR ESTREPTOCOCOS. LA RESPUESTA DE ASO DESPUES DE LAS INFECCIONES CUTANEAS ES POBRE, PRESUMIBLEMENTE DEBIDO A LA INACTIVACION DEL ANTIGENO POR EL COLESTEROL PRESENTE EN LA PIEL. LA ESTREPTOLISINA S (SLS) ES ESTABLE FRENTE AL OXIGENO, NO ES ANTIGENICA Y TAMBIEN ES TOXICA PARA UNA VARIEDAD DE TIPOS CELULARES. LA SLS SE ENCUENTRA EN SU MAYOR PARTE UNIDA A LA CELULA Y PUEDE SER LA RESPONSABLE DEL EFECTO LEUCOTOXICO DE LOS ESTREPTOCOCOS GRUPO A. LA SLS ES ACTIVA TANTO EN LA HEMOLISIS SUPERFICIAL COMO POR DEBAJO DE LA SUPERFICIE CUANDO LOS MICROORGANISMOS SE CULTIVAN EN AGAR SANGRE DE CARNERO. TOXINAS LAS EXOTOXINAS ESTREPTOCOCICAS PIROGENAS (SPE) SON LAS RESPONSABLES DEL RASH DE LA ESCARLATINA. SE HAN DESCRITOS 3 SPE INMUNOLOGICAMENTE DISTINTAS: A, B Y C. DESOXIRRIBONUCLEASAS: SE CONOCEN 4 DNAsas INMUNOLOGICAMENTE DIFERENTES DENOMINADAS DNAsas A, B, C Y D. LA HIALURONIDASA: PRODUCIDA POR LOS ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO A DESPOLIMERIZA LA SUSTANCIA FUNDAMENTAL DEL TEJIDO CONECTIVO LO QUE FACILITA LA DISEMINACION DEL MICROORGANISMO POR CONTIGUEDAD. LAS ESTREPTOQUINASAS: PRODUCIDAS POR LOS ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO A HIDROLIZAN LOS COAGULOS DE FIBRINA Y PUEDEN TENER UN PAPEL EN LA VIRULENCIA AL IMPEDIR LA FORMACION DE BARRERAS DE FIBRINA EN LA PERIFERIA DE LAS INFECCIONES ESTREPTOCOCICAS DISEMINADAS. STREPTOCOCCUS PYOGENES EL HOMBRE ES EL RESERVORIO NATURAL DE LOS ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLITICOS DEL GRUPO A Y ES TRANSMITIDO DE PERSONA A PERSONA POR VIA RESPIRATORIA. LA INFECCION MAS FRECUENTE QUE PRODUCEN ES LA FARINGITIS ESTREPTOCOCICA. LA MAYORIA DE LOS CASOS DE FARINGITIS SE VEN EN NIOS EN EDAD ESCOLAR (5 A 15 AOS DE EDAD) DURANTE EL INVIERNO O LA PRIMAVERA. DESPUES DE UN PERIODO DE INCUBACION DE 2 A 4 DIAS, EL COMIENZO ES EN GENERAL BRUSCO, CON FIEBRE, DOLOR DE GARGANTA, CEFALEA, MALESTAR GENERAL Y DOLOR

ABDOMINAL. HABITUALMENTE LA PARED POSTERIOR DE LA FARINGE SE ENCUENTRA EDEMATOSA E INFLAMADA Y PUEDE HABER UN EXUDADO BLANCO GRISACEO SOBRE LAS AMIGDALAS. POR LO GENERAL LOS GANGLIOS CERVICALES ESTAN AGRANDADOS Y DOLOROSOS AL TACTO. LA PRESENCIA DE RINORREA, AFONIA, TOS O DIARREA ES SIGNO DE PROBABLE ETIOLOGIA VIRAL. LAS INFECCIONES POR CEPAS QUE ELABORAN TOXINAS PIROGENICAS A, B O C TAMBIEN PUEDEN PRODUCIR UN RASH ESCARLATINIFORME (ES DECIR LA ESCARLATINA CLASICA). LAS COMPLICACIONES DE LA FARINGITIS PRODUCIDA POR LOS ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO A PUEDEN SER SUPURATIVAS (ABSCESOS PERIAMIGDALINOS, ABSCESOS RETROFARINGEOS, ADENITIS CERVICAL SUPURATIVA, OTITIS MEDIA, SINUSITIS, MASTOIDITIS, BACTEREMIA), NO SUPURATIVAS (FIEBRE REUMATICA AGUDA Y CRONICA Y GLOMERULONEFRITIS), O MEDIADA POR TOXINAS (SINDROME ESTREPTOCOCICO SIMILAR AL SHOCK CON HIPOTENSION, INSUFICIENCIAS RENAL Y RESPIRATORIA). EN AUSENCIA DE COMPLICACIONES LA FARINGITIS ESTREPTOCOCICA ES DE NATURALEZA AUTOLIMITADA. SIN EMBARGO, EN GENERAL SE INSTITUYE UN TRATAMIENTO (LO IDEAL ES EL CULTIVO Y TRATAMIENTO ANTIMICROBIANO). APROXIMADAMENTE EL 15% DE LOS INDIVIDUOS CON FARINGITIS ESTREPTOCOCICA PUEDEN TRANSFORMARSE EN PORTADORES ASINTOMATICOS DESPUES DEL TRATAMIENTO. EN LA ACTUALIDAD, LAS RECOMENDACIONES PARA EL TRATAMIENTO DE LA FARINGITIS ESTREPTOCOCICA INCLUYEN PENICILINA V POR VIA ORAL DURANTE 10 DIAS, PENICILINA G BENZATINICA POR VIA INTRAMUSCULAR (600,000 A 1200,000 UNIDADES), ESTOLATO DE ERITROMICINA POR VIA ORAL DURANTE 10 DIAS, AZITROMICINA POR VIA ORAL (PARA LOS MAYORES DE 15 AOS) DURANTE 4 DIAS O CEFADROXILO POR VIA ORAL DURANTE 10 DIAS. LOS ESTREPTOCOCOS BETAHEMOLITICOS DEL GRUPO A SIGUEN SIENDO BASTANTE SUSCEPTIBLES A LA PENICILINA G AUNQUE SE HA INFORMADO DE AUMENTO DE RESISTENCIA A ERITROMICINA.

PRUEBA DE CAMP (Chriestie,Atkins, y Munch-Peterson) La actividad hemoltica de la -lisina estafiloccica (esfingomielinasa C) se ve afectada por una protena extracelular producida por el estreptococo hemoltico.

Streptococcus pneumoniae Es la causa comn de neumona bacteriana y una causa importante de otitis media, meningitis y septicemia. El neumococo fue aislado de forma independiente en 1881 por Pasteur y por Sternberg, quienes recuperaron el germen de la saliva humana. Su asociacin con la neumona lobar aguda fue demostrada al ao siguiente por Friedlander, y dentro de los 10 aos siguientes se aclar con gran rapidez el alcance de la infeccin neumoccica. Morfologa Conocido en la literatura norteamericana desde 1920 como Diplococcus pneumoniae, el neumococo ha sido reclasificado como Streptococcus pneumoniae. Esta reclasificacin se llevo a cabo debido a su relacin gentica con los estreptococos. El neumococo es un coco capsulado, grampositivo, de forma oval o esfrica y de 0.5 a 1.25 um de dimetro. Caractersticamente, el organismo tiene forma de lanceta y, en extendidos directos de esputo y lquidos corporales, aparece solo, en pares y en cadenas cortas. El cultivo continuado en laboratorio, especialmente en medios no favorables, lleva a la formacin de cadenas mas largas. Los neumococos son muy sensibles a los productos de su metabolismo fermentativo, dando como resultado reaccin de tincin gramnegativa a medida que los cultivos envejecen. Las capsulas pueden demostrarse fcilmente por examen en preparados hmedos de los organismos en tinta china. Ultraestructura y composicin celular El lmite ms externo del neumococo es una pared celular tpica grampositiva compuesta por glucopptido y el polisacrido que contiene fsforo, cido teicoico. El cido teicoico de la pared celular contiene el determinante para la actividad antignica del polisacrido C. Por lo menos algunas de las unidades del acido teicoico se ubican en la superficie externa de la pared celular, ya que los neumococos vivos pueden ser aglutinados con antisueros contra el polisacrido C. Un componente estructural importante del cido teicoico es el aminoalcohol colina, que es nico para la pared neumoccica y se cree que acta como un ligando amortiguador. La membrana plasmtica es una bicapa tpica que puede dar origen a invaginaciones cuyo nmero complejidad vara de clula a clula. En la membrana plasmtica tambin se encuentra un cido teicoico que contiene colina, similar al presente a la pared pero covalentemente unido a cidos grasos. Este acido lipoteicoico es un potente inhibidor de la enzima auroltica homloga, una Nacetil-muramil-L-alanina amidasa.

Fisiologia El S. pneumoniae es un anaerobio facultativo que puede utilizar una amplia variedad de carbohidratos fermentables. Su metabolismo productor de energa es principalmente del tipo de acido lctico, pero la cantidad de cido que se acumula es poca. En condiciones aerobias, se forma una cantidad significativa de perxido de hidrogeno, junto con cido actico y frmico. Dado que el S. pneumoniae no produce catalasa ni peroxidasa, la acumulacin de perxido de hidrgeno destruye el organismo a menos que se proporcione catalasa con la adicin de eritrocitos al medio de cultivo. Caractersticas de los cultivos El neumococo tiene requerimientos nutricionales complejos y aunque se dispone de medios sintticos qumicamente definidos para el aislamiento elemental y cultivos de rutina, se emplean medios como infusin de cerebro corazn o agar soya tripticasa y caldo de enriquecimiento con sangre desfibrinada al 5%. El pH ptimo para el crecimiento es de 7.4 a 7.8. Dado que el 5 a 10% de las cepas neumoccicas requieren un aumento de concentracin de dixido de carbono para el crecimiento inicial en medios slidos, debe utilizarse incubador para estas cepas. En agar sangre los cultivos jvenes de neumococos encapsulados producen colonias circulares brillantes, con forma de cpula, de aproximadamente de 1 mm. de dimetro. A medida que las colonias de neumococos en agar sangre envejecen, los cambios autolticos dan como resultado el colapso del centro de la colonia, dando un aspecto umbilicado. Las cepas no encapsuladas producen pequeas colonias rugosas. Las colonias incubadas aerbicamente estn rodeadas por una zona de alfa hemlisis similar a la verdosa que producen los Streptococcus viridans. En condiciones anaerobias, sin embargo, las colonias estn rodeadas por una zona de beta hemlisis debido a la neumolisina O, oxgeno-lbil. Identificacin de laboratorio Sensibilidad a la optoquina. Los procedimientos de laboratorio para la identificacin del S. pneumoniae han sido ideados principalmente para distinguirlo de los estreptococos vridans, puesto que ambos producen alfa hemlisis en agar sangre. La prueba mas ampliamente usada en la actualidad para la identificacin presuntiva del neumococo es la prueba de la sensibilidad del disco con optoquina. La optoquina (hidrocloruro de etilhidrocuprena) es un derivado de la quinina que inhibe el crecimiento de los neumococos, pero no de los estreptococos viridans. Para la prueba, se aplica un disco de papel filtro impregnado con la droga sobre la superficie de una placa de agar sangre sembrada en estras con cultivo puro. Solubilidad en bilis. Otra prueba til para la identificacin de neumococos se basa en la presencia en los neumococos, pero no en los estreptococos viridans, de una

amidasa autoltica que cliva la unin entre alanina y cido murmico en el glucopptido. La amidasa es activada por agentes activos de superficie como bilis o sales biliares, provocando la disolucin de los organismos. Esta prueba debe llevarse a cabo a pH neutro, empleando desoxicolato de sodio al 10% y clulas viables jvenes. Antgenos capsulares La cpsula del neumococo consiste en polisacridos complejos que forman geles hidrfilos en la superficie del microorganismo. Estos polisacridos son antignicos y forman la base para la separacin de neumococos en 84 serotipos diferentes. La cpsula polisacrida es esencial para la patogenia del neumococo y estimula la produccin de anticuerpos que son protectores contra infeccin posterior con neumococos. Antgenos somticos. Polisacrido C. Este carbohidrato especfico de especie es un importante componente estructural de la pared celular de todos los neumococos. Es un polmero de cido teicoico que contiene fosfocolina como determinante antignico mayor. La protena C reactiva (PCR) que se encuentra en el suero, no es un anticuerpo sino una protena que esta presente en la sangre normal en bajas concentraciones pero esta elevada en pacientes con enfermedades inflamatorias agudas. La unin del PCR al polisacrido C puede activar al complemento y mediar la fagocitosis. Adems de la fosfocolina, el polisacrido C contiene galactosamina, glucosa, fosfato, ribitol. Proteina M. En los neumococos se constata la presencia de antgenos proteicos tipo especficos, anlogos a la protena M del S. pyogenes, pero inmunolgicamente diferentes. Los anticuerpos para la protena M neumoccica no inhibe la fagocitosis y, por ende, no son protectores. Toxinas Neumolisina O. Los neumococos producen una hemolisina, neumolisina O, con propiedades similares a la de la estreptolisina O. Es una toxina citoltica, sensible al colesterol, activada por SH, que rompe la membrana celular. Adems de su actividad hemoltica, es dermotxica y letal. Infeccin clnica Los neumococos son transportados en la nasofaringe de portadores sanos, quienes constituyen el principal reservorio de las infecciones neumoccicas. La tasa de portador es mayor en nios en edad preescolar (25 a 50%) y, con la edad,

tiende a disminuir a aproximadamente un 18% en adultos. En instituciones militares pueden llegar hasta un 60%. Tipos neumoccicos. Aunque se han identificado 84 serotipos capsulares neumoccicos, no todos los tipos neumoccicos son igualmente invasivos. Los tipos o grupos 8, 4, 3, 4, 7, 12, 9 1, 18, 19, 6 y 23, en ese orden, son los 12 mas comunes, siendo responsables aproximadamente del 80% de las infecciones. Entre el 50 y 60% de los aislamientos de lactantes y nios son de los tipos o grupos 6, 14, 19 y 23. Patogenia La neumona neumoccica rara vez es una infeccin primaria y se produce solo cuando estn alteradas las barreras normales de defensa de las vas areas. El enfriamiento, anestesia, morfina e intoxicacin alcohlica comnmente predisponen a una enfermedad neumoccica. Al retardar el efecto epigltico, estos factores facilitan las aspiraciones de secreciones infectadas desde las vas areas superiores. Las infecciones virales de las vas areas superiores son una importante causa que contribuyen a la neumona neumoccica, y a menudo preceden a su brusco comienzo. Los neumococos presentes en la nasofaringe proliferan en el medio modificado por los virus y son transportados hacia los alvelos por las delgadas secreciones bronquiales. Lesin neumoccica. La invasin del tejido alveolar por neumococos da por resultado la acumulacin de lquido de edema que facilita la rpida multiplicacin y desiminacin de los organismos hacia otros alvolos. Se acumulan leucocitos polimorfonucleares y glbulos rojos en los alvolos infectados, llevando una consolidacin completa del lbulo o segmento. El amontonamiento de los leucocitos en los alvolos promueve la fagocitosis y destruccin de los organismos invasores. Los macrfagos participan en los estadios finales de la resolucin, y en mucho de los casos, menos serios, la recuperacin es completa, retornando el parnquima pulmonar a su estado normal. Desde la lesin primaria en el pulmn, los neumococos pueden invadir la cavidad pleural y pericardio, con la formacin de extensos focos purulentos (empiema). En las infecciones fulminantes, tambin es comn la bacteriemia y puede llevar a infecciones de meninges, de vlvulas cardiacas o articulaciones. Defensa fagoctica. Las clulas fagocticas de los pulmones proporcionan la principal lnea de defensa contra las infecciones neumoccicas. Antes de que se inicie la fagocitosis, los neumococos encapsulados deben ser opsonizados por componentes del suero. El complemento desempea un papel crtico, especialmente durante el estadio temprano preantibitico de la infeccin.

Manifestaciones clnicas Neumona. La neumona clsica comienza sbitamente con un nico escalofro violento y fiebre entre 38.8 y 41.1 C. El paciente habitualmente refiere antecedentes de una infeccin previa leve de las vas areas superiores unos das antes. A menudo se constata severo dolor pleural y la tos que se desarrolla durante el curso de la enfermedad produce un esputo mucopurulento. La empiema, meningitis, pericarditis y endocarditis son serias complicaciones asociadas con un aumento del riesgo de muerte. Se produce bacteriemia en aproximadamente 25 a 30% de los pacientes con neumona neumoccica, lo cual conlleva a un aumento de dos veces en la mortalidad. Pronstico. La tasa de mortalidad de los casos no tratados es de aproximadamente 30%. Con tratamiento especifico, la tasa global de mortalidad es de aproximadamente 5%. Sin embargo, en adultos con enfermedad neumoccica bactermica, la tasa de mortalidad contina siendo elevada (aproximadamente 25%) a pesar del tratamiento antibitico. El pronstico se ve influido en la forma adversa por la edad avanzada, la presencia de cirrosis o diabetes mellitus, enfermedad inmunodeficiente e infeccin con ciertos tipos capsulares especialmente el tipo 3. La tasa de mortalidad de neumonas neumoccicas bactermicas por tipo 3 es de ms del 50%, incluso con tratamiento antibitico. Diagnstico de laboratorio Debe hacerse un examen directo de extendidos teidos con el mtodo de Gram para determinar la probable etiologa de la infeccin. Si es positivo para diplococos grampositivos lanceolados puede hacerse diagnstico presuntivo de neumona neumoccica. Sin embargo, se requiere la identificacin por cultivo para distinguir definitivamente el neumococo de ciertos otros cocos grampositivos. La muestra para cultivos debe sembrarse inmediatamente en un medio enriquecido como BHI o agar soya tripticasa con 5% de sangre. Para hemocultivo, debe extraerse sangre antes de la administracin de antibiticos y deben inocularse de 5 a 15 ml. de sangre en medios de hemocultivo. Los subcultivos deben hacerse por diseminacin en la superficie de una placa de agar sangre. La identificacin presuntiva de los neumococos se basa en la aparicin de colonias alfa hemolticas que contienen organismos solubles en bilis, sensibles a la optoquina, que fermentan inulina. Tratamiento La penicilina es la droga aconsejada para todos los tipos de infeccin neumoccica. La penicilina G, por va intramuscular, es la droga de eleccin en el tratamiento de la neumona neumoccica no complicada. Puede usarse efectivamente penicilina oral en pacientes ambulatorios con sntomas leves. En pacientes con shock o con neumona ms meningitis, endocarditis o artritis debe

darse penicilina cristalina acuosa por va endovenosa. Los pacientes alrgicos a la penicilina pueden recibir una cefalosporina o eritromicina en casos de neumona o cloramfenicol en caso de meningitis.

NEISSERIA Dos especies del gnero Neisseria son de principal importancia clnica: N. meningitidis y N. gonorrhoeae. Los organismos estn genticamente relacionados de modo muy estrecho, pero las manifestaciones clnicas de las enfermedades que producen son muy diferentes. Descubierta en 1885 por Neis ser, de quien deriva el nombre del gnero, La n: gonorrhoeae es el agente etiolgico de la gonorrea, la ms prevalerte de las enfermedades venreas clsicas. La N. meningitidis es el agente causal de la meningitis meningococica. La cual puede ocurrir de forma epidmica. El hombre es el nico reservorio conocido para los miembros del genero neisseria que incluyen organismos no patgenos que habitan en las vas areas superiores y otras superficies mucosas del cuerpo. El genero neisseria es uno de los cuatro gneros incluidos en la familia neisseriaceae. Los otros gneros de la familia son Bramhamella, Moraxella y Acinetobacter. Genero Neisseria Morfologa La neisseria son cocos gramnegativos, de 0.6 a 1 um de dimetro. Habitualmente se observan en pares con los lados adyacentes aplanados. Los organismos aislados frescos de muchos serogrupos de N. meningitidis son encapsulados, mientras que esto es menos constante para N. gonorrhoeae. En la N. gonorrhoeae se observan cilias y aunque frecuentemente presentes en N. meningitidis, no hay correlacin con la virulencia. Las neisseria no son mviles. Las neisseria son estructuralmente parecidas a otras bacterias gramnegativas. La ultraestructura del citoplasma y pared celular del meningococo y gonococo son similares. La envoltura celular esta compuesta de tres elementos mayores: la membrana citoplasmica, la rgida capa de glucopeptidos y la membrana externa que contiene lipopolisacaridos, fosfolpidos y protenas que son inmunolgicamente significativas. Fisiologa Las Neisseria son organismos aerobios o anaerobios facultativos. Muchas cepas de N. meningitidis y N. gonorrhoeae utilizan glucosa, pero el acido producido surge fundamentalmente de una va oxidativa mas que por fermentacin, lo cual explica la dbil reaccin que se observa habitualmente. Todas las neisserias producen catalasa y citocromooxidasa. Los miembros del gnero son muy susceptibles a condiciones ambientales adversas, como desecacin, enfriamiento, exposicin a un Ph desfavorable o a la luz del sol.

Caractersticas de los cultivos N. meningitidis y N. gonorrhoeae son organismos reacios, con complejos requerimientos nutricionales para el crecimiento. Requieren hierro libre y debe agregarse almidn, colesterol o albumina a los medios para neutralizar los efectos inhibidores de los cidos grasos. Los cultivos derivados de sitios normalmente estriles, como LCR, sangre o lquido sinovial, pueden ser inoculados en medios no selectivos, como agar chocolate. El crecimiento de los aislamientos primarios es incrementado por incubacin en presencia de 2 a 8% de dixido de carbono. El medio selectivo de Thayer-Martin permite el reconocimiento de N. meningitidis y N. gonorrhoeae de materiales contaminados con otra flora bacteriana. El medio contiene agar chocolate modificado por el agregado de vancomicina para inhibir bacterias grampositivas, colistina para inhibir flora entrica gramnegativo, nistatina para inhibir levaduras y trimetoprim sulfametoxazol para impedir el swarming. Identificacin de laboratorio Cierto numero de reacciones bioqumicas son tiles en la diferenciacin de N. meningitidis y N. gonorrhoeae de otras especies que estn presentes en material clnico. Las colonias de especies de neisseria pueden ser reconocidas por el empleo de la prueba de oxidasa que utiliza el colorante indicador dihidrocloruro de tetrametil-p-fenilendiamina. Cuando son expuestos a este colorante, las colonias se vuelven de color violeta oscuro en segundos. Sin embargo, dado que todas las neisseria son oxidasa positiva, el hallazgo de diplococos gramnegativos y oxidasa positivos en una muestra clnica requiere pruebas adicionales para la confirmacin e identificacin de la especie. La diferenciacin entre N. gonorrhoeae y meningitidis habitualmente se basa en la fermentacin de carbohidratos. N. meningitidis produce acido de glucosa y maltosa, mientras que N. gonorrhoeae produce acido solo de la glucosa. Estas pruebas diferenciales de cultivos puros pueden complicarse por alguna de las caractersticas de crecimiento de estos organismos. Por ejemplo, la produccin de acido de fuentes de carbohidratos pueden ser enmascarados por los productos alcalinos de la degradacin enzimtica de peptonas. En resumen, la identificacin de especies de Neisseria se basa en el crecimiento de diplococos gramnegativos, oxidasa positivos y catalasa positivos que producen colonias caractersticas en agar chocolate o sangre. La utilizacin diferencial de carbohidratos es la base para la especificacin inicial.

Masa perianal de lento crecimiento. Con aislamiento de N.gonorrhoeae

Vaginosis bacteriana

Neisseria meningitidis. Se han identificado 9 serotipos de N. meningitidis denominados A, B, C, D, X, Y, Z, W135 y 29E sobre la base de la especificidad inmunolgica de los polisacridos capsulares. Los organismos de los grupos A, B y C son responsables de la gran mayora de las enfermedades clnicamente reconocidas. El antgeno capsular del grupo A consiste en N-acetil-O-acetil monosamina fosfato, el polisacrido B es acido N-acetil-neuraminico 2 8 alfa-ligado y el polisacrido C es acido neuraminico O-acetilo-2 9 alfa acetilo ligado.

Determinantes de patogenicidad Los polisacridos capsulares contribuyen a las propiedades invasoras de los meningococos al inhibir la fagocitosis. En presencia de anticuerpos especficos, los organismos son fcilmente destruidos por leucocitos fagociticos. Las endotoxinas de los meningococos son bsicamente similares a las de otras bacterias gramnegativas. Estos microorganismos producen gran cantidad de membrana externa que contiene LPS. As se cree que a medida que los microorganismos invaden y se multiplican, liberan gran cantidad de LPS. Estos materiales liberados en clulas del endotelio vascular causan necrosis vascular e inducen una respuesta inflamatoria. As la endotoxina esta implicada en la lesin vascular, especialmente la visualizada en las lesiones cutneas caractersticas que son un componente variable de la enfermedad producida. La N. meningitidis es exclusivamente un patgeno humano y por ende debe ser capaz de multiplicarse en un husped que secuestre hierro, ya sea intracelularmente o en asociacin con protenas que se unan al hierro con gran afinidad. El hierro es esencial para el crecimiento del microorganismo y experimentos in Vitro han demostrado en forma concluyente que la N. meningitidis puede utilizar hierro unida a transferan como nica fuente de hierro. Las especies no patgenas de neisseria carecen de la capacidad para usar hierro a partir de transferan. Infeccin clnica La enfermedad causada por N. meninigitidis fue reconocida por primera vez en 1805 con la descripcin de una epidemia de meningitis en Ginebra, Suiza. Un ao mas tarde, un brote en Medfield, Massachussets, marco el primer brote reconocido en Estados Unidos. Sin embargo, el organismo causal no se reconoci hasta 1887 cuando Weichselbaum describi los diplococos gramnegativos en el LCR de los pacientes. Epidemiologia El portador nasofarngeo adulto es importante en la transmisin de meningococos y proporciona un reservorio de de infeccin desde el cual los organismos pasan a una familia. La duracin media del estado de portador en ausencia de epidemia es de 10 meses. El estado de portador es mayor en miembros de la familia de un paciente con enfermedad meningococica. En caso de epidemia, se ha observado tasas de portador de 15% en familias con enfermedad identificada en comparacin con un 3.6% en familias sin enfermedad. El pico de aparicin de la enfermedad se observa en nios de 6 a 24 meses de edad. La enfermedad Meningococica en poblaciones militares se asocia con tasas de portadores nasofarngeos de hasta 90%. Patogenia y manifestaciones clnicas

Los meningococos ingresan en el cuerpo a travs de las vas areas superiores y se establece en las membranas de la nasofaringe. La adquisicin nasofarngea del organismo precede a la diseminacin hematgena en un periodo indeterminado. El periodo de incubacin es de pocos das, habitualmente menos de una semana. La diseminacin de los meningococos a travs de la circulacin da por resultado lesiones metastsicas en diversas reas del cuerpo, como piel, meninges, articulaciones, ojos y pulmones. El espectro de la enfermedad incluye una enfermedad febril leve que puede acompaarse de faringitis pero sin ninguna otra manifestacin especifica de infeccin meningococica. La enfermedad sistmica caracterizada por fiebre postracin es ms fcil de identificar. Con poca frecuencia, se observa una erupcin eritematosa macular que habitualmente es remplazada por la aparicin de una erupcin petequial que rpidamente evoluciona a grandes reas de equimosis. Esta purpura vascular es iniciada por mbolos de meningococos y se considera como la marca de la enfermedad meningoccica. Es caracterstica de la enfermedad fulminante ms severa. La meningococemia puede acompaarse de meningitis, artritis, pericarditis y compromiso de virtualmente cualquier sistema. Puede constatarse coagulacin vascular diseminada y shock por gramnegativos. La hemorragia en el tejido adrenal con el consiguiente estado hipo adrenrgico se denomina sndrome de Waterhouse-Friderichsen. En el diagnstico de laboratorio, adems del cultivo es posible la deteccin del polisacrido meningococo en LCR, liquido sinovial y orina por medio de aglutinacin ltex o coaglutinacion empleando estafilococos con protena A. Los antisueros especficos son la clave para la deteccin de antgenos sensibles y especficos con cualquiera de estos mtodos. En la coaglutinacion se emplean estafilococos recubiertos con el anticuerpo que se adhiere va la porcin Fc de la molcula a la protena A. La porcin Fab de la molcula puede unirse al antgeno meningococico si esta presente, dando como resultado una coaglutinacion visible de los estafilococos. Tratamiento La penicilina continua siendo la droga de eleccin para el tratamiento de las infecciones meningococicas. N. meningitidis es exquisitamente sensible a la penicilina con MIC habitualmente de 0.3 ug/ml. El tratamiento consiste en altas dosis de penicilina G acuosa por va endovenosa. En individuos sensibles a la penicilina, el cloramfenicol es una alternativa efectiva.