PRACTICA DE LABORATORIO # 3.

ACCION HIDROLITICA DE LAS AMILASAS DE SEMILLAS DE GRAMINEAS INTRODUCCION Las fuentes ms importantes como materia prima para la obtencin de energa son los polisacridos, el almidn y el glucgeno. En los vegetales el almidn constituye el polisacrido de reserva ms abundante, sintetizndose en los cloroplastos de las clulas fotosintticas y en los amiloplastos de las clulas del parnquima de almacenamiento. El camino tpico para la movilizacin del almidn de reserva es a travs de la actividad hidroltica de las alfa y beta amilasas, cuya accin conduce a la formacin de maltosa. El desdoblamiento de la maltosa hasta glucosa est a cargo de la maltasa, que se encuentra junto con las amilasas. Las amilasas pueden extraerse de los granos de cereales en germinacin mediante maceracin con agua. Su accin hidroltica puede seguirse mediante los reactivos de Lugol y de Fehling. BIBLIOGRAFIA PARA LA AUTO PREPARACIN: LEHNINGER. ALBERT. BIOQUIMICA. Captulos 8 Y 10 Pginas 189, 270 - 272. PARTE EXPERIMENTAL REACTIVOS: - Semillas de gramneas en germinacin - Mortero. - Cristalera. - Termostato. - Reactivos de Lugol, Fehling, Tollens y Benedict. - Mechero. PROCEDIMIENTO: 1. Prepare 30 mL de un macerado acuoso con 10 g de semillas de gramneas germinadas teniendo en cuenta que el agua debe estar caliente (50 grados). Aada 5 gotas de glicerina para extraer lo ms posible los enzimas. 2. Deje reposar de 15 - 20 minutos de 30 - 45 grados Celsius y filtre el extracto.

3. En un tubo de ensayo, introduzca 5 ml de disolucin de almidn y de 1 - 2 ml del extracto. A intervalos de 5 minutos, comprobar la degradacin del almidn por las amilasas ensayando una muestra del sistema de reaccin en una placa con excavaduras con el reactivo de Lugol. Para reconocer la presencia de azcares reductores (maltosa y glucosa), realizar la reaccin con los reactivos de Fehling, Tollens o Benedict de una muestra de 1 - 2 ml del sistema de reaccin.

PRACTICA 4.- EFECTO DE LA TEMPERATURA Y DE LA INTENSIDAD LUMINOSA SOBRE LA VELOCIDAD DE LA FOTOSNTESIS INTRODUCCIN Con la presente prctica se pretende observar el efecto que la intensidad luminosa y la temperatura tienen sobre la velocidad de la fotosntesis. Como material vegetal utilizar una planta acutica, Elodea canadensis. El parmetro que se utilizar para medir la intensidad de la fotosntesis ser el desprendimiento de oxgeno Las medidas se realizarn con la planta sumergida en una disolucin de bicarbonato sdico, que acta como fuente de CO2. La concentracin de bicarbonato est seleccionada de modo que resulta saturante. De este modo, las variaciones que se observen en la velocidad de fotosntesis dependern de la intensidad luminosa utilizada o de la temperatura y no de la concentracin de CO2. MATERIAL 6 tubos de ensayo de 16 x150 1 lmpara 1Bao mara 1Termmetro de inmersin 1 Vaso de precipitados de 1000 ml 1 Probeta de 100 ml Pinzas Bicarbonato de Sodio al 0.5% p/v MUESTRA VEGETAL: Plantas de elodea METODOLOGA Cortar una seccin de la planta y colocarla dentro del tubo de ensayo, llenar l tubo con la solucin de bicarbonato de sodio, colocar el tubo de manera invertida en un vaso de precipitados que contenga tambin la solucin de bicarbonato de sodio. Colocar la lmpara a 15 cm de distancia, 30 cm y 60 cm. Anotar las observaciones realizadas. PRACTICA DE LABORATORIO # 5. ACCION HIDROLITICA DE LAS LIPASAS DE SEMILLAS DE OLEAGINOSAS INTRODUCCION Las grasas, al igual que el almidn son sustancias de reserva de las plantas y se almacenan principalmente en las semillas. Cerca del 20 % de las plantas contienen grasas en las semillas como principal sustancia de reserva. Entre estas se encuentran el girasol, man, palmiche, soja, en las cuales puede acumularse del 20 al 60 % del peso seco. Para su utilizacin como fuente de energa, los mismos deben experimentar hidrlisis por accin de las lipasas presentes en las semillas por cuya accin se convierten en cidos grasos y glicerol, siendo su pH ptimo entre 4,7 y 5,0. La actividad de las lipasas se puede determinar por la valoracin con alcohol de los cidos grasos producidos.

BIBLIOGRAFIA PARA LA AUTO PREPARACIN: LEHNINGER. ALBERT A. BIOQUIMICA. PARTE EXPERIMENTAL Represente mediante una ecuacin qumica la hidrlisis de los triacilglicridos. REACTIVOS: Semillas de higuereta, man o soja. HAc 0,1 mol/L. Etanol. NaOH 0,1 mol/L. Fenolftalena. Cristalera.

PROCEDIMIENTO: 1. Disponga de tres frascos Erlenmeyer numerados e introduzca en cada uno 3 g de semillas oleaginosas desprovistas de sus cubiertas y trituradas. Aada a cada uno 10 ml de agua destilada. 2. En el frasco 1 aada 2 ml de HAc 0,1 mol/L. En el frasco 2 hierva su contenido durante 5 minutos y luego agregue 2 ml de HAc. 3. Para eliminar los procesos de putrefaccin aada 2 gotas de tolueno en los tres frascos, tape y coloque en un termostato a 35 - 37 grados hasta el da siguiente. 4. Al da siguiente aada a cada frasco 10 ml de etanol para eliminar la disociacin hidroltica del jabn que se forma durante la valoracin y en el frasco 3 agregue 2 ml de HAc 0,1 mol/L para igualar las condiciones del ensayo. 5. Valore con NaOH 0,1 mol/L los cidos grasos producidos en los tres frascos por accin de las lipasas. Anote el volumen gastado en cada caso y analice lo ocurrido.