Risques sanitaires lis la prsence de cyanobactries dans leau

valuation des risques lis la prsence de cyanobactries et de leurs toxines dans les eaux destines lalimentation, la baignade et autres activits rcratives

Rapport commun de lAfssa et de lAfsset

agence franaise de scurit sanitaire de lenvironnement et du travail

Juillet 2006

Rapport sur lvaluation des risques lis la prsence de cyanobactries et de leurs toxines dans les eaux destines lalimentation, la baignade et autres activits rcratives

- Juillet 2006 -

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I Coordination scientifique et rdactionnelle Yves Levi (Universit Paris Sud 11) Mathilde Harvey (Afssa) Paulina Cervants (Afsset) I Secrtariat Marie-Claude Deschamps (Afssa) Anne-Laure Riquier (Afsset)

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Composition du groupe de travail Cyanobactries et cyanotoxines de lAfssa

Prsident LEVI Yves - Universit Paris Sud 11 Coordination scientifique - Afssa HARVEY Mathilde Secrtariat administratif Afssa DESCHAMPS Marie-Claude Membres du comit dexperts spcialis Eaux de lAfssa BALEUX Bernard - Retrait du CNRS BEAUDEAU Pascal - Institut National de Veille Sanitaire CABILLIC Pierre-Jean - DDASS Morbihan DELATTRE Jean-Marie - Institut Pasteur de Lille DUBROU Sylvie - Laboratoire dhygine de la ville de Paris DUCHEMIN Jean - Agence de leau Seine-Normandie HARTEMANN Philippe - Facult de mdecine de Nancy JOYEUX Michel - Eau de Paris LEROY Pierre - Centre de Recherche et de Contrle des Eaux de la Ville de Paris MONTIEL Antoine - Eau de Paris SEUX Ren - Ecole Nationale de la Sant Publique Membres du comit dexperts spcialis Rsidus et Contaminants physiques et chimiques de lAfssa BAERT Alain - Centre antipoison de Rennes KECK Grard - Ecole Nationale Vtrinaire de Lyon LE BIZEC Bruno - Ecole Nationale Vtrinaire de Nantes Experts auprs de lAfssa BERNARD Ccile - Musum National dHistoire Naturelle de Paris BOUACHA Noureddine - Universit Paris Sud 11 BRIENT Luc - Universit Rennes 1 CODD Geoffrey - Universit de Dundee (Royaume Uni) CROUZET Philippe - Agence Europenne pour lEnvironnement CUN Christine - DDASS Essonne FESSARD Valrie - Afssa HUMBERT Jean-Franois - Institut National de la Recherche Agronomique de Thonon (UMR 42) ITEMAN Isabelle - Institut Pasteur de Paris KRYS Sophie - Afssa LEITAO Maria - Bi-Eau MANSOTTE Franois - DSDS Guyane MOULY Damien - Institut National de Veille Sanitaire PEIGNER Patrick - DDASS Maine et Loire PEIRERA Paulo - Institut national de la sant (Portugal) QUIBLIER Catherine - Universit Paris 7 Musum National dHistoire Naturelle TANDEAU de MARSAC Nicole - Institut Pasteur de Paris WELTE Bndicte - Eau de Paris Participation scientifique - Afssa CAAMAO Delphine DANAN Corinne GALLOTTI Sophie LOZACH Jrme GRIMAULT Laurent THEBAULT Anne

Composition du groupe de travail de lAfsset Cyanobactries et cyanotoxines dans les eaux de loisirs
Experts auprs de lAfsset ALLIX Sylvie - DDASS Manche BOUACHA Noureddine - Universit Paris Sud 11 BAAN Robert - Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC)

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DUCHEMIN Jean - Agence de leau Seine-Normandie HARVEY Mathilde - Afssa HUMBERT Jean-Franois - INRA de Thonon LEGEAS Michle - Ecole Nationale de la Sant Publique LEVI Yves - Universit Paris Sud 11 MONFORT Patrick - CNRS Montpellier (UMR 5119) PRAT Maryannick - DRASS Pays de la Loire RIOU Jeanine - DDASS Gard Participation scientifique Afsset CATASTINI Carole DUBOUDIN Cdric LOZACH Jrme MAHE Bruno

Personnalits auditionnes par le groupe de travail Afssa

ARAUJO Filomena - Ministre de la sant (Portugal) MORIN Jean-Pierre - Service des barrages dpartementaux et des ressources en eau du Conseil gnral des Ctes dArmor NICOLAS Rmy - Service des barrages dpartementaux et des ressources en eau du Conseil gnral des Ctes dArmor Intervenants du Syndicat des producteurs et distributeurs deau (SPDE) Monsieur HELMER - SAUR Monsieur JORET - Compagnie Gnrale des Eaux Madame LENES - Compagnie Gnrale des Eaux Madame RACAUD - SAUR Monsieur TAUDOU - Lyonnaise des Eaux Monsieur VILLESSOT - Lyonnaise des Eaux

Bases de donnes exploites

SISE-Eaux Les bases de donnes SISE-Eaux (Ministre de la sant, DDASS, DRASS SISE-Eaux) et SISE-Baignades (Ministre de la sant, DDASS, DRASS SISE-Baignades) colligeant les rsultats du contrle sanitaire des eaux destines la consommation humaine et des eaux de baignade sur le territoire franais ont t exploites dans le cadre du prsent rapport. Par la suite, les termes SISE-Eaux ou SISE-Baignades ont t utiliss. Base de donnes Afssa-Afsset Les deux agences ont collabor pour la cration et lexploitation dune base de donnes relatives aux cyanobactries et cyanotoxines. Elle a pu tre cre grce aux contributeurs suivants : Direction gnrale de la Sant, DRASS et DDASS (notamment des donnes extraites de la base SISE-Eaux)/ Agences de leau Adour Garonne, Artois Picardie, Rhin-Meuse, Seine-Normandie, Rhne Mditerrane Corse/Institut interdpartemental des barrages et rservoirs du bassin de la Seine/DIREN Bretagne/EDF/ Syndicat des producteurs et distributeurs deau (SPDE) / Universit de Rennes 1. Elle est rfrence base Afssa / Afsset dans la suite du prsent rapport. Toute rfrence par des tiers doit comporter la mention suivante : Source Afssa Afsset / Direction gnrale de la Sant-DRASS DDASS / Agences de leau Adour Garonne, Artois Picardie, Rhin-Meuse, Seine-Normandie, Rhne Mditerrane Corse / lInstitution interdpartementale des barrages et rservoirs du bassin de la Seine / DIREN Bretagne / EDF / Syndicat des producteurs et distributeurs deau (SPDE) / Universit de Rennes 1. Base CIBLEX La base CIBLEX [(Beaugelin-Seiller et al. 2004) ; http://www.ademe.fr/htdocs/publications/cataloguedeseditions/cat013.htm ou www.irsn.org/scripts/net-science/publigen/content/templates/show.asp?L=FR&P=2144] a t dveloppe par lADEME et lIRSN sur la base dune tude de suivi mdical de 4769 enfants de moins de 4 ans et 13700 individus de 4 20 ans. Cette base est considre comme reprsentative de lvolution du poids corporel et de la taille des individus en fonction de lge pour la totalit du territoire franais. Ce sont ces relations qui ont t utiliss par les experts de lAfsset pour estimer la concentration maximale tolrable de microcystines dans les eaux de baignade.

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Prambule

Le programme EFFLOCYA initi en 1998 par le ministre charg de la sant et le ministre charg de lenvironnement a permis de mettre en vidence quen France, la prolifration des cyanobactries, capables de produire et de librer des toxines, dans les eaux de baignade ou dans les eaux brutes utilises pour la production deau potable constituait un risque sanitaire mergent en raison de la prsence potentielle de cyanotoxines. Le 22 janvier 2001, le ministre charg de la sant faisant suite aux donnes issues du programme EFFLOCYA, a saisi lAgence franaise de scurit sanitaire des aliments (Afssa) afin deffectuer une valuation des risques lis la prsence de cyanobactries dans les eaux destines la consommation humaine (annexe 1). La mme anne, le Conseil suprieur dhygine publique de France (CSHPF) tait saisi afin dlaborer des recommandations de gestion du risque li la prsence de cyanobactries dans les eaux de baignade. Le 6 mai 2003, le CSHPF a publi des recommandations de gestion des risques sanitaires lis aux prolifrations de ces microorganismes dans les eaux (annexe 2). Le 30 mars 2004, le ministre charg de lenvironnement et le ministre charg de la sant ont saisi lAgence franaise de scurit sanitaire de lenvironnement et du travail (Afsset) afin de procder lvaluation des risques sanitaires encourus par les baigneurs et les autres usagers des plans et cours deau, notamment aprs analyse des donnes recueillies par les services dconcentrs du ministre de la sant, et de proposer des valeurs limites de qualit relatives la concentration de cellules et/ou de toxines dans les eaux de baignade (annexe 3). Les agences ont cr chacune un groupe de travail compos dexperts rassemblant des comptences dans les domaines scientifiques concerns (toxicologues, cotoxicologues, ingnieurs sanitaires, limnologues, analystes, vtrinaires, pidmiologistes, ). Linstallation du groupe de travail de lAfssa a eu lieu le 3 octobre 2003 et celui de lAfsset le 6 octobre 2004. Les dcisions successives dcrivant la composition de ces groupes figurent lannexe 4. Les deux agences ont identifi plusieurs sujets dtude communs aux deux saisines (en particulier lidentification et la caractrisation du danger, la toxicit des cyanotoxines pour lhomme et les valeurs toxicologiques de rfrence, les mthodes de dosage des cyanotoxines et celles permettant le suivi direct ou indirect des dangers, la collecte et le traitement des donnes danalyses des eaux continentales, tous usages confondus, (baignade, pratique de sports nautiques et production deau de boisson), et les questions qui, du fait de la dfinition du champ de comptence respectif de lAfssa et de lAfsset, ont fait lobjet dune valuation spcifique au sein de chaque agence. Il a t convenu, sur proposition et en accord avec les experts, de rpondre aux deux saisines sous la forme dun rapport commun. Ainsi, lAfssa a assur la coordination scientifique des parties ci-dessous : chapitre I Identification des dangers lis aux cyanobactries ; chapitre II Dtection et quantification des cyanobactries et de leurs toxines ; chapitre V Matrise de la contamination de leau destine la consommation humaine par les cyanotoxines ; chapitre VI tat des lieux de recommandations et des rglementations - 2. ; chapitre VII Exposition des populations et apprciation des risques - 1. et 2. ; chapitre VIII Synthse et recommandations - 1, 2.1 et 2.2 . LAfsset a assur la coordination scientifique des parties ci-dessous : chapitre III Caractrisation des dangers ; chapitre IV tat des lieux de la situation franaise ; chapitre VI tat des lieux de recommandations et des rglementations 1. ; chapitre VII Exposition des populations et apprciation des risques - 3. ; chapitre VIII Synthse et recommandations - 2.3 . LAfssa et lAfsset ont conjointement construit une base de donnes partir dun recueil actif des donnes relatives la prsence de cyanobactries et de cyanotoxines sur les cours et plans deau en France et ralis son exploitation dans le cadre du prsent travail.

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La dmarche retenue pour cette valuation est la suivante : examen critique des tudes et rapports dvaluation disponibles et identification des points ncessitant une analyse approfondie ; collecte et traitement statistique des donnes franaises disponibles concernant la contamination des eaux destines aux diffrents usages ; mise en place par lAfssa dauditions de professionnels du traitement de leau et de scientifiques pouvant apporter des lments dclairage. Les groupes de travail de lAfssa et de lAfsset se sont runis respectivement 13 et 4 fois en sances plnires consacres, notamment, la discussion des points du domaine spcifique dexpertise de chacun des groupe. Deux sances plnires communes aux deux groupes de travail, le 4 juillet et le 4 novembre 2005, ont t ddies lexamen du rapport final. Les parties communes du rapport et spcifiques aux eaux dalimentation ont fait lobjet dune validation : par le CES Rsidus et contaminants chimiques et physico-chimiques de lAfssa dans sa sance du 21 septembre 2005 pour le chapitre III Caractrisation des dangers , par le CES Eaux de lAfssa dans sa sance du 15 mai 2006. Dans lattente de linstallation du CES-Eaux au sein de lAfsset et du rattachement du groupe de travail cyanobactries-Eaux de baignade , les parties du rapport relatives aux baignades et autres loisirs ont t valides par le groupe ad-hoc de lagence.

1. Contexte rglementaire en France

1.1. Les cyanobactries et cyanotoxines
Les cyanotoxines sont des toxines pouvant tre libres dans les eaux par les cyanobactries, connues aussi sous le nom dalgues bleues-vertes. Ces microorganismes trouvent un terrain de prolifration particulirement favorable dans les eaux continentales moyennement ou fortement eutrophises. La prolifration massive et rapide de ces bactries est, dans certains cas, facilement observable par un changement de couleur de leau et la formation dcume ou mousse. Cependant, labsence dcume ne constitue pas un critre permettant dcarter la prsence ventuelle des cyanobactries et/ou de cyanotoxines. Leur prsence est signale sur tous les continents et la proccupation internationale est croissante vis--vis des risques sanitaires associs. Laugmentation du nombre de barrages rservoirs dans les zones en manque deau et celle des apports nutritifs lis la pollution des eaux de surface contribuent amplifier cette problmatique.

1.2. Contexte rglementaire des eaux de baignade ou de loisirs nautiques

La qualit de leau de zones de baignade et sports nautiques est rgie par la directive europenne 76160/CEE adopt en 1976. Celle-ci a t transpose en droit franais par le Code de la sant publique (Loi n 2001-398 du 9 mai 2001, Livre III Titre III, chapitre II : Piscines et eaux de baignade (art. L1332-1 L1332-4)). On entend par eaux de baignade les cours et plans deau amnags pour la baignade et/ou la pratique de loisirs aquatiques frquents de manire rptitive par au moins 10 baigneurs au mme instant. Les normes auxquelles les eaux de baignade doivent obir ont t fixes par dcret pris en Conseil dtat. Ces dcrets ne fixent pas de cadre rglementaire pour la surveillance sanitaire des prolifrations de cyanobactries ou de la contamination des eaux par les cyanotoxines. Larticle 8 de la nouvelle directive eaux de baignade, directive 2006-7 CE du Parlement et du Conseil europen du 15 fvrier 2006, insiste sur le risque potentiel li la prsence de cyanobactries et demande ce que des mesures de gestion immdiates soient prises afin de rduire lexposition de la population (Journal Officiel de lunion europenne L 64 du 4 mars 2006). Depuis 2003, la Direction gnrale de la sant publie chaque anne des recommandations de surveillance et de gestion de phnomnes de prolifration de cyanobactries dans les eaux de baignade (circulaire DGS/SD7A 2003-270, 2004/364, 2005/304) sur la base dun avis du Conseil suprieur dhygine publique de France (avis du 6 mai 2003). Ces circulaires prconisent le suivi rgulier des zones de baignades amnages avec plusieurs niveaux dintervention et dinformation au public. Linterdiction de la baignade avec restriction de certaines activits nautiques est prconise lorsque la concentration en microcystine LR dpasse 25 g.L-1. Linterdiction de la baignade et de la pratique des activits nautiques est prconise en cas de prsence dcume ou mousse.

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1.3. Contexte rglementaire des eaux destines la consommation humaine

Le paramtre microcystine-LR a t introduit dans le Code de sant publique (CSP) au titre de larticle R.1321-2 lors de la codification du dcret 2001/1220 pris pour la transposition de la Directive 98/83/CE du Conseil du 3 novembre 1998 relative la qualit des eaux destines la consommation humaine. Ainsi la limite de qualit aux points de conformit, base sur les recommandations de lOMS, inscrite lannexe 13.1 du CSP a t fixe 1 g.L-1. Il est prcis en observation pour ce paramtre rechercher en cas de prolifration algale dans les eaux brutes . Ceci entrane des difficults dapplication lies la dfinition dune prolifration algale .

2. Rponse aux saisines

Un tat des lieux actualis des connaissances et les rponses qui peuvent actuellement tre apportes aux questions poses par les saisines font lobjet de ce rapport. Il est constitu de 8 chapitres, dont 4 sont ddis la prsentation de ltat de connaissances, un est consacr la prsentation et lanalyse de donnes recueillies en France pendant la priode 2002 2004, un rsume la rglementation franaise et internationale dans le domaine, un est ddi lestimation de lexposition et du risque, enfin un chapitre rcapitule les recommandations communes et spcifiques aux eaux de baignade et autres loisirs nautiques et aux eaux dalimentation.

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Remerciements

LAfssa et lAfsset remercient le Pr Yves Lvi davoir exerc la prsidence du groupe de travail de lAfssa, et lensemble des experts ayant contribu ce travail et la rdaction du prsent rapport.

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Sommaire

I.

Identification des dangers lis aux cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. Les cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1. Position taxonomique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2. Diversit morphologique et cologique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. Multiplication . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.4. Les cyanobactries toxiques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2. Les prolifrations de cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.1. Dfinition des prolifrations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2. Hydrosystmes concerns par des prolifrations de cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3. Effets indsirables des prolifrations de cyanobactries. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.4. Facteurs favorisant les prolifrations de cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.5. Caractristiques des cyanobactries leur confrant une forte valeur slective . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3. Les toxines de cyanobactries ou cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.1. Structures, caractristiques physico-chimiques et persistance dans le milieu des cyanotoxines. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.2. Fonction mtabolique et dterminisme de la production des cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3. Distribution des cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

21 21 21 22 22 22 25 25 25 26 26 27 28 28 32 32 37 37 37 37 39 39 40 40 43 47 47 48 50 53 59 59 59 66 70 73 73 76 83 83 83 84 86 86 88 90 90 101 105 105 105 106

II. Dtection et quantification des cyanobactries et de leurs toxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. Objectifs et mise en uvre des mthodes de prlvement . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1. Objectifs des analyses et dfinition des prlvements . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2. Nature et modalits du prlvement . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. Lieu et profondeur de prlvement . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.4. Conservation et transport . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2. Dtection des prolifrations, analyse des cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.1. Dtection des prolifrations dalgues et de cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2. Identification et quantification des cyanobactries dans les eaux . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3. Dtection et analyse des cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.1. Prparation de lchantillon . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.2. Extraction et purification des toxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3. Identification et dosage des toxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.4. Dtection de la toxicit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III. Caractrisation des dangers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. Toxicologie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1. Les hpatotoxines. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2. Les neurotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. Les molcules effets irritants . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2. Epidmiologie des intoxications par les cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.1. Intoxications animales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2. Intoxications humaines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV. tat des lieux de la situation franaise . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. Contexte et mise en place dune base de donnes cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1. Prlvement . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2. Dnombrement et identification des cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. Dosage des microcystines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2. La base en quelques chiffres . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3. Mthode danalyse statistique des donnes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4. Rsultats en eaux brutes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.1. Dnombrement cellulaire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.2. Dosage des microcystines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5. Rsultats en eaux traites . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5.1. Dnombrement cellulaire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5.2. Dosage des microcystines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6. Conclusions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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V. Modalits de matrise des dangers. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 111 1. Prvention et matrise de la croissance des cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 111 1.1. Actions sur le statut trophique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 111 1.2. Actions sur le rgime hydrologique. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115 1.3. Traitements algicides des plans deau . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 116 2. Matrise de la contamination de leau destine la consommation humaine par les cyanotoxines. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 120 2.1. Actions au niveau des bassins de stockage deau brute (de 1 3 jours de temps de sjour). . . . . . . . . . . 120 2.2. Actions au sein des filires de traitement. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121 VI. tat des lieux des recommandations et des rglementations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. Eau de baignade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1. Pays et instances lorigine de recommandations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2. Synthse descriptive des recommandations disponibles . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. Synthse . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2. Eau dalimentation et autres aliments . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.1. Recommandations de lOMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2. Dclinaisons nationales des recommandations de lOMS pour leau dalimentation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3. Autres recommandations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.4. Synthse . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . VII. Exposition des populations et apprciation des risques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. Les cyanotoxines dans les eaux continentales franaises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2. Eau et alimentation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.1. Sources dexposition aux cyanotoxines par voie alimentaire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2. Estimation de lexposition alimentaire aux microcystines et lments dvaluation du risque . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3. Apprciation des situations de dpassement de la limite de qualit rglementaire. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.4. Relation entre concentrations en microcystines et prsence des cyanobactries dans les eaux brutes destines la production deau dalimentation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.5. Synthse . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3. Eaux de baignade et autres activits aquatiques de type rcratives . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.1. Modalits de surveillance des eaux de baignade et de loisirs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.2. Sources et qualit des donnes utilises pour lestimation des valeurs limites de concentration de cyanotoxines et cyanobactries dans les eaux de baignade et autres loisirs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3. Elments de base considrs pour lestimation des valeurs limites de concentration de cyanotoxines et cyanobactries dans les eaux de baignade et autres activits rcratives . . . . . 3.4. Estimation dune concentration maximale tolrable de cyanotoxines dans les eaux usage de baignade et autres activits rcratives. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.5. Principaux enseignements de lvaluation de risques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.6. Limites de qualit relatives la concentration en cellules de cyanobactries dfinies par une approche probabiliste . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.7. Conclusions et recommandations. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . VIII. Synthse et recommandations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1. Synthse . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1. Que sait-on de la prsence des cyanobactries toxinognes et des cyanotoxines en France ? . . . . . . . 1.2. Que sait-on des effets toxiques de ces composs ? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. De quelle faon peut-on tre expos ces toxines ? Des intoxications par les cyanotoxines ont-elles t recenses en France ? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.4. Que peut-on dire concernant les risques lis aux cyanotoxines en France ? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.5. Quelles sont les possibilits de matrise de lexposition aux cyanotoxines ? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.6. Quels sont les moyens disponibles pour la surveillance des risques lis aux cyanotoxines ? . . . . . . . . 2. Recommandations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.1. Permettre lvaluation des risques lis aux cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2. Renforcer la prvention et la matrise des risques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3 Recommandations spcifiques aux eaux de baignade et autres activits aquatiques rcratives. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 129 129 129 129 142 145 145 148 153 154 157 157 158 158 161 163 165 167 168 169 169 170 175 177 218 179 183 183 183 184 184 185 185 186 187 188 190 192

IX. Annexes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 195 X. References bibliographiques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 205

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Table des figures

Figure I-1 Figure I-2 Figure I-3

: Structure des microcystines (A) et des nodularines (B). X et Z sont des acides amins variables, R = H ou CH3.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 : Structure de la cylindrospermopsine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 : Structure des molcules danatoxine-a, homoanatoxine-a, anatoxine-a(s), de gauche droite. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 : Structure gnrale de la -N-mthylamino-L-alanine ou BMAA (A), agoniste du rcepteur du glutamate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Figure I-4 : Structure gnrale des saxitoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 Figure I-5 31 31 41 47

Figure I-6 : Structure gnrale de toxines effets irritants dtectes dans les eaux marines : A lyngbyatoxines-a, B aplysiatoxines, C dbromoaplysiatoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Figure II 1 : Schma de principe illustrant une variation jour-nuit de la saturation en oxygne et du pH en prsence dune prolifration phytoplanctonique (J. Duchemin, AESN) . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Figure II 2 : Stratgie analytique suivie pour lanalyse des cyanotoxines dans leau et les denres alimentaires, de la collecte de lchantillon au rapport dessai . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Figure II 3 : Spcificit et sensibilit compares des principales techniques utilises pour la mesure des cyanotoxines. Lchelle des sensibilits sur laxe des abscisses place son extrmit haute la spectromtrie de masse en particulier en tandem (SM/SM) ou haute rsolution (HRSM). Lchelle des spcificits sur laxe des ordonnes spare nettement la spectromtrie de masse ou la RMN, et les techniques non spcifiques telles que le bio-essai souris ou encore la CCM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Figure IV 1 : Proportions des rsultats de dnombrement dans chaque classe dabondance en fonction du mois sur les trois annes 2002-2004 [rsultats bruts sans modlisation] . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

53 91

Figure IV 2 : Relation entre nombre de cellules de cyanobactries par mL et concentration en chlorophylle a en g.L-1, estime sur 1 585 rsultats de prlvements [rsultats bruts sans modlisation]. Les donnes sur les eaux brutes des trois annes 2002 2004 et des diffrents usages ont t agrges . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 98 Figure IV 3 : Risque (probabilit) de dpassement de la valeur de 20 000 CC.mL-1 en fonction de la teneur en chlorophylle a et du pourcentage reprsent par les CC par rapport au total algal . . . . . . . . . . . . . . 99 Figure IV 4 : Risque (probabilit) de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 en fonction de la teneur en chlorophylle a et du pourcentage reprsent par les CC par rapport au total algal. . . . . . . . . . . . . . 100 Figure IV 5 : Relation entre le nombre de cellules de cyanobactries et la concentration en microcystines sur 946 rsultats de prlvements [rsultats bruts] . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103 Figure IV 6 : Relation entre le nombre de cellules de cyanobactries et la probabilit de dpassement dun seuil sur la concentration en microcystines, labore partir de 946 rsultats de prlvements par rgression logistique (IC95 % = intervalle de confiance 95 %). . . . . . . . . . . . . . . 103 Figure VI 1 : Arbre de dcision pour la classification des sites risques (daprs NHMRC 2004) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 132 Figure VI 2 : Arbre de dcision en Finlande (daprs Rapala et al. 2005) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 137 Figure VI 3 : Arbre dcisionnel aux Pays-Bas (Ibelings 2005) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 138 Figure VI 4 : Arbre dcisionnel en Allemagne (daprs Chorus 2005) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139 Figure VI 5 : Arbre dcisionnel en France (daprs lavis du CSHPF, 6 mai 2003). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 140 Figure VI 6 : Croissance potentielle dune population de cyanobactries partir dune concentration initiale de 100 ou 1000 cellules des taux de croissance () de 0,1 ou 0,3.j-1 (OMS 1999) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 147 Figure VIII 1 : Proposition de stratgie de surveillance des eaux destines la consommation humaine vis--vis des risques lis aux cyanotoxines. Les frquences proposes sont maintenues tant que deux rsultats conscutifs situs au niveau infrieur nont pas t obtenus . . . . . . . . . . . . . . 191

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Table des illustrations couleurs

Figure A : Exemple de cyanobactrie unicellulaire coloniale. Genre Woronichinia. (Photo Luc Brient, Universit Rennes I). Figure B : Exemple de cyanobactrie organise en trichomes. Genre Aphanizomenon. (Photo Luc Brient, Universit Rennes I). Figure C : Exemple de cyanobactrie organise en filament : gaine visible lextrmit. Genre Phormidium. (Photo Cline Berger, MNHN). Figure D : Trichome de cyanobactrie (genre Anabaena) prsentant un htrocyste (H) et un akinte (A) bien distincts. (Photo Luc Brient, Universit Rennes I). Figure E : Filaments de la cyanobactrie Cylindrospermopsis raciborskii prsentant des akintes A et des htrocystes H (Photo A. Caruana INRA). Figure F : Prolifration de la cyanobactrie Planktothrix rubescens dans le lac du Bourget. La couleur lie de vin de leau est due la phycorythrine prsente en quantit importante chez cette espce. (Photo M. Roux, CSP). Figure G : Prolifration sous la forme dcume de la cyanobactrie Planktothrix agardhii dans un lac de la rgion parisienne. (Photo C. Bernard, MNHN). Figure H : Accumulation de cyanobactries sur la berge dun plan deau. (Photo L. Brient, Universit Rennes). Figure I : Dispositifs de prlvement utiliss depuis la berge (de gauche droite ci-dessus, filet plancton et tube chantillonneur) ou depuis un bateau (ci-contre, bouteille de prlvement de Van Dorn). (Photos M. Leitao, Bi-Eau). Figure J : Immersion du disque de Secchi. (Photo L. Brient, Universit Rennes 1). Figure K : Nombre de prlvements recenss dans la base par dpartement (cumul des annes 2002-2004). Figure L : volution saisonnire des genres de cyanobactries les plus frquemment rencontrs dans la base de donnes (moyenne gomtrique du nombre de CC par mL en fonction du mois de lanne). Les donnes des trois annes 2002 2004 et des diffrents usages ont t agrges [rsultats bruts non modliss].

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Table des tableaux

Tableau I-I Tableau I-II

: Correspondance entre la classification botanique et la classification bactriologique des cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

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: Liste non exhaustive des espces de cyanobactries potentiellement toxiques et des toxines ayant dj t associes ces espces en France ou hors de France (N.I.= toxine prsente mais non identifie). Les espces ayant dj t observes en France apparaissent en caractres gras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23-24 : Synthse des toxines identifies en France et distribution dans les autres pays. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

Tableau I-III Tableau II-I Tableau II-II Tableau II-III

: Modalits et dispositifs de prlvements (daprs Leito & Cout 2005) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38 : Caractristiques des fixateurs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 : Aptitude des mthodes disponibles fournir diffrentes informations. +/- signifie : imparfaitement adapt, +: parfaitement adapt, : inadapt . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46

Tableau II-IV : Exemples de solvants utiliss pour lextraction des diffrentes cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48 Tableau II-V : Limites de dtection par diffrentes techniques (OMS 2004) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51 52 57

Tableau II-VI : Comparaison des mthodes de dtection des microcystines et des nodularines. . . . . . . . . . . . . . . . . . Tableau II-VII : Aptitudes des diffrentes mthodes utilisables en routine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Tableau II-VIII : Mthodes danalyses normalises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58 Tableau III-I Tableau III-II : Valeurs toxicologiques pour les microcystines pour diffrentes voies dadministration (orale, IP : intrapritonale, IN : intranasale, IT : intratrachale). MC : Microcystine . . . . . . . . . . . . . . . 63 : Toxicit (DL50 en g.kg-1) chez la souris pour diffrentes voies dadministration des toxines de type anatoxine (Mahmood & Carmichael 1986, Matsunaga et al. 1989, Fitzgeorge et al. 1994) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

Tableau III-III : Toxicit spcifique des analogues de saxitoxine, exprime en unit souris (M.U. : Mouse Unit) par mole de toxine (Oshima 1995, Batoru et al. 2005). (* Aprs r-examen, ** Estim par la mesure de GTX1, GTX4 forms par hydrolyse acide) . . . . . 68 Tableau III-IV : Toxicit aigu de la STX chez la souris, par diffrentes voies dadministration (Wiberg & Stephenson 1960) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69 Tableau III-V : Toxicits orales (DL50 en g.kg-1) de la STX chez diverses espces (McFarren et al. 1960, Mons et al. 1998). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69 Tableau III-VI : Tableau rcapitulatif des valeurs toxicologiques rpertories. Les valeurs toxicologiques retenues comme valeurs repres sont en gras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Tableau III-VII : Intoxications animales en Europe (hors France) documentes dans la littrature scientifique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71 75

Tableau III-VIII : Cas rapports ou suspects dintoxications par cyanotoxines dans leau de distribution . . . . . 76 Tableau IV-I : Genres et espces retrouvs dans la base de donnes constitue. 24 taxons sont suivis de sp, tmoignant du fait quune espce du genre considr a t trouve, mais pas identifie. Les genres et espces potentiellement toxiques figurent en gras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85

Tableau IV-II : Distribution des probabilits de prsence des cellules de cyanobactries prdits pour chaque site de prlvement AEP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92 Tableau IV-III : Distribution des probabilits de prsence des cellules de cyanobactries prdits pour chaque site de prlvement BLAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92

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Tableau IV-IV : Distribution des probabilits de prsence des cellules de cyanobactries prdits pour chaque site de prlvement BLB . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92 Tableau IV-V : Distribution des abondances moyennes de cellules de cyanobactries prdites (cellules.mL-1) pour chaque site de prlvement lorsquelles sont prsentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 93 Tableau IV-VI : Distribution des valeurs de risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 prdites pour chaque site de prlvement AEP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94 Tableau IV-VII : Distribution des valeurs de risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 prdites pour chaque site de prlvement BLAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94 Tableau IV-VIII : Distribution des valeurs de risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 prdites pour chaque site de prlvement BLB . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94 Tableau IV-IX : Relation entre abondance et dominance des cellules de cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96 Tableau IV-X : Caractristiques statistiques de labondance des genres de cyanobactries prpondrants . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97 Tableau IV-XI : Relation entre concentration en chlorophylle a et probabilit de dpassement dun seuil (20 000 et 100 000) sur le nombre de cellules de cyanobactries par mL, estime partir de 1 444 rsultats de prlvements. Les donnes sur les eaux brutes des trois annes 2002 2004 et des diffrents usages ont t agrges. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 98 Tableau IV-XII : Distribution des valeurs de concentration en microcystines dans les eaux traites. . . . . . . . . . . . . . 106 Tableau V-I Tableau V-II Tableau VI-I : Modalits dactions sur les prolifrations de cyanobactries . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 119 : Efficacit des diffrentes tapes de traitement des eaux sur les cyanobactries et leurs toxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127 : Dtermination des catgories de susceptibilit des plans deau usage rcratif (daprs NHRMC 2004) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 132

Tableau VI-II : Dtermination de la classe de qualit des plans deau usage rcratif (daprs NHMRC 2004) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 133 Tableau VI-III : Valeurs guides et principales recommandations retenues pour diffrents pays (MC-LR : Microcystine LR ; MCs somme des microcystines) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 144 Tableau VI-IV : Description des niveaux de biomasse (Chorus & Bartram 1999). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 146 Tableau VI-V : Limites de qualit pour les eaux dalimentation au Brsil. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 148 Tableau VI-VI : Mthodes de dtection des cyanotoxines prconises au Portugal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 152 Tableau VI-VII : Hypothses utilises pour la construction des seuils relatifs aux microcystines. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154 Tableau VI-VIII : Seuils rglementaires ou valeurs maximales admissibles provisoires recommands pour leau dalimentation proposes pour certaines cyanotoxines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154 Tableau VII-I : Genres potentiellement toxiques de cyanobactries ayant dj t observs en France et toxines associes. En gras, les toxines dj identifies en France (daprs les chapitres I et IV) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 157 Tableau VII-II : Consommation deau totale (froide et chauffe) par classes dges en mL.kg-1.j-1 . . . . . . . . . . . . . . . . . 162 Tableau VII-III : Distribution des quotients de danger simuls pour diffrentes classes dge, concernant lexposition aux microcystines par leau dalimentation de distribution publique . . . . . . . . . . . . . . . . 163 Tableau VII-IV : Scnarios dexposition aux microcystines par leau dalimentation et quotients de danger associs. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 164 Tableau VII-V : Distribution du quotient de danger (QD) pour une population ingrant une eau prsentant diffrentes teneurs en microcystine-LR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 165 Tableau VII-VI : Probabilits de dpassement des concentrations de 1 et 2 g.L-1 en eau brute en fonction du nombre de cellules de cyanobactries dnombres. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 166

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Tableau VII-VII : Valeurs paramtriques de volume deau et masse corporelle retenus. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171 Tableau VII-VIII : Valeurs paramtriques prises en compte par diverses institutions pour lestimation des risques lis une exposition la MC-LR par lingestion des eaux de baignade et valeurs retenues pour la prsente valuation de risques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 174 Tableau VII-IX : Scnario dexposition aigu : Concentrations maximales tolrables (CMTs) de MC-LR pour leau usage rcratif lors dune ingestion unique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 175 Tableau VII-X : Scnario dexposition aigu : Concentrations maximales tolrables (CMTs) de saxitoxines pour leau usage rcratif lors dune ingestion unique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 175

Tableau VII-XI : Scnario dexposition sub-chronique : Concentrations maximales tolrables (CMTs) de MC-LR pour leau usage rcratif lors dune ingestion deau rpte annuellement . . . 176 Tableau VII-XII : Scnario dexposition chronique : Concentrations maximales tolrables de MC-LR pour leaux usage rcratif lors dune ingestion quotidienne dun adulte de 60 kg . . . . . . . . . 176 Tableau VII-XIII : Scnario dexposition chronique : rpartition arbitraire de la DJT entre leau alimentaire et leau de baignade et dduction des concentrations maximales tolrables dans leau de baignade pour un adulte de 60 kg . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 176 Tableau VII-XIV : Concentrations maximales tolrables calcules pour les diffrentes toxines en fonction du type dexposition . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 177 Tableau VII-XV : Probabilit de dpassement des limites de qualit relatives aux MCs dans les eaux rcratives prconises dans cette tude en fonction de labondance des cyanobactries . . . 178

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Abrviations

AchE : actylcholine-estrase ADN : acide dsoxyribonuclique AEP : alimentation en eau potable AESN : Agence de leau Seine-Normandie AJMT : Apport journalier maximum thorique AJT : Apport journalier tolrable AOAC : American Organisation of Analytical Chemists (Organisation amricaine de chimie analytique) ASE : accelerated solvent extraction (extraction acclre par solvant) ATX-a : anatoxine-a B1 : toxine B1 BLB : eau de baignade contrle BLAN : eau associe diffrentes activits nautiques BMAA : -N-mthylamino-L-alanine C1 : toxine C1 C2 : toxine C2 CAG : charbon actif en grain CAP : charbon actif en poudre CC : cellules de cyanobactries CEE : Communaut conomique europenne CEN : Comit europen de normalisation CG ou CPG : chromatographie phase gazeuse CCM : chromatographie sur couche mince CLHP : chromatographie liquide haute performance COT : carbone organique total CREDOC : Centre de recherche pour ltude et lobservation des conditions de vie CSHPF : Conseil suprieur dhygine publique de France CYN : cylindrospermopsine Da : Dalton DAD : diode array detector (dtecteur barrette de diodes) DBO : demande biologique en oxygne DL50 : dose ltale 50 % DcSTX : dcarbamoylsaxitoxine DGS : Direction gnrale de la sant DHS : Department of Human Services DIPNR : Department of Infrastructure, Planning and Natural Resources DPIWE : Department of Primary Industries, Water & Environment

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DJT : Dose journalire tolrable DLM : dose ltale minimale DMENO : dose minimale avec effets nocifs observs DoCYN : dsoxycylindrospermopsine DSENO : dose minimale sans effet nocif observ DSEIO : dose sans effet indsirable observ DSV : Direction des services vtrinaires ELISA : enzyme-linked immuno-sorbent assay (Test immuno-enzymatique) FAO : Food and Agriculture Organisation GTX : gonyautoxine HILIC : chromatogrpahie liquide par interaction hydrophile HR-SDM : spectromtrie de masse haute rsolution i.p. : intrapritonale i.v. : intraveineuse i.t. : intratrachale ICBN : International code of botanical nomenclature (Code international de nomenclature bontanique) ICNB : International code of nomenclature of bacteria (Nomenclature Internationale des bactries) INSPQ : Institut National de Sant Publique du Qubec INCA : Enqute individuelle et nationale sur les consommations alimentaires IPFM : intoxication paralysante par les fruits de mer J.O. : Journal officiel KOW : coefficient de partage octanol eau LLE : extraction liquide / liquide LPS : lipopolysaccharides MC(s) : microcystine(s) MC-LR : microcystine-LR MU : mouse unit (unit souris) NEO ou No STX : nosaxitoxine NFU : Nephelometric Formazine Unit (unite nphlomtrique) NHMRC : National Health and Medical Research Council NOD : nodularine OMS : Organisation mondiale de la sant pc : poids corporel PCC : Pasteur culture collection of Cyanobacteria PCR : polymerase chain reaction (raction de polymrisation en chane) PMPOA : programme de matrise des pollutions dorigine agricole PP1 : protines phosphatase de type 1 PP2A : protines phosphatase de type 2 PSP : paralytic shellfish poisoning (intoxication paralysante par les fruits de mer) QD : quotient de danger

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RMN : rsonance magntique nuclaire SEHD : Scottish Executive Health Department (Ministre de la sant ecossais) SDM : spectromtrie de masse SFE : extraction par fluide supercritique SISE : systme dinformation sant environnement SM : spectromtrie de masse SNC : Systme nerveux central SPE : extraction sur phase solide STX : saxitoxine UE : Union europenne UV : Ultra-violet US-EPA : United States Environmental Protection Agency (Agence amricaine pour la protection de lenvironnement) VTR : valeur toxicologique de rfrence WHO : World Health Organisation (Organisation Mondiale de la Sant - OMS)

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Lexique

Analyte Dinophyces Eutrophe

Compos ou mlange de compos soumis lanalyse. Phytoflagells trs importants dans le phytoplancton des milieux marins, mais galement bien reprsent en eau douce. Un plan deau eutrophe se caractrise par une charge leve en lments nutritifs (en particulier en composs dazote et de phosphore) et par une forte production primaire. Ce terme soppose oligotrophe qui caractrise des plans deau pauvres en nutriments et faible production primaire. La msotrophie constitue un tat intermdiaire entre loligotrophie et leutrophie. Membrane enveloppant chez certaines espces de cyanobactries les trichomes de cellules. Ainsi, on parle de trichome quand les cellules sont runies en colonies linaires dpourvues de gaine (ex : genre Planktothrix) et on utilise le terme de filament quand lassociation linaire de cellules est enveloppe dune gaine (ex : genre Lyngbya). Couche deau intermdiaire entre la couche chaude de surface et la couche froide en profondeur dans les lacs stratifis. Dsigne, dans un plan deau, un niveau trophique intermdiaire entre loligotrophie et la mesotrophie. Pigments accessoires la photosynthse, de couleur bleu-vert comme la phycocyanine ou rouge comme la phycorythrine. Organisme unicellulaire dpourvu de vrai noyau et dorganites intracytoplasmiques. Le matriel nuclaire est diffus dans le cytoplasme et non dlimit par une membrane. Les bactries et les cyanobactries sont les principaux groupes de procaryotes existant dans la biosphre. Membranes o se ralisent les ractions de photosynthse. La zone euphotique est dfinie par la profondeur maximale jusqu laquelle la lumire solaire peut pntrer dans leau pour permettre la photosynthse chez les organismes et microorganismes autotrophes.

Gaine

Mtalimnion Oligo-msotrophe Phycobiliprotines Procaryote

Thylacodes Zone euphotique

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I. Identification des dangers lis aux cyanobactries

1. Les cyanobactries
Le terme cyanobactries dsigne des micro-organismes procaryotes Gram ngatif dont la pigmentation peut varier du bleu-vert au rouge. Les cyanobactries sont des procaryotes photosynthtiques, classs du point de vue systmatique dans le rgne des Eubactries. Ces microorganismes ont longtemps t rangs dans le rgne vgtal car ils prsentent, outre des proprits spcifiques des bactries, des caractristiques propres aux algues : la structure cellulaire est similaire celle des bactries et caractrise en particulier par labsence de noyau et dorganites intracellulaires ; comme les algues, la plupart des cyanobactries des eaux continentales possdent de la chlorophylle a, et non de la bactriochlorophylle comme certaines bactries. Elles renferment gnralement, comme autres pigments photosynthtiques, des phycobiliprotines et ralisent une photosynthse productrice doxygne en utilisant leau comme donneur dlectrons. Le terme cyanobactries est actuellement le plus usit, et cest celui qui sera adopt dans ce rapport, mais ces micro-organismes sont galement dnomms, selon des termes plus anciens, algues bleues (blue-green algae des anglo-saxons), cyanophytes ou cyanophyces.

1.1. Position taxonomique

La correspondance entre la classification de ces organismes dans le code international de nomenclature botanique ICBN(1) (Greuter et al. 1994) et celle du code international de nomenclature des bactries ICNB (Sneath 1992), est reprsente dans le tableau I-I.

Tableau I-I : Correspondance entre la classification botanique et la classification bactriologique des cyanobactries.
Classification botanique Cryptogames Thallophytes Algues Procaryotes Division Classe Cyanophytes Cyanophyces Classification bactriologique

Procaryotes Eubactries Gracilicutes Cyanobactries

lintrieur de la classe des cyanophyces, la classification botanique distingue diffrents ordres (ex : ordre des Nostocales, ordre des Oscillatoriales) et diffrentes familles (ex : lordre des Nostocales comprend les familles des Nostocaces, des Scytonemataces et des Rivulariaces). Environ 150 genres se distinguent, dans lesquels sont rparties plus de 2000 espces. Cette nomenclature correspond globalement la classification en soussections des souches pures de la collection de lInstitut Pasteur (PCC(2)) publie par Castenholz (2001). Dans tous les cas, les noms de genres et despces actuellement utiliss pour lidentification et la systmatique sont ceux emprunts la botanique. La classification suivant le code de nomenclature botanique repose sur des critres morphologiques, qui permettent une identification relativement aise des genres les plus frquemment rencontrs. En revanche, la dtermination de lespce, dlicate et entache dincertitude, reste lapanage de spcialistes.

(1) http://www.bgbm.org/iapt/nomenclature/code/tokyo-e/Contents.htm (2) http://www.pasteur.fr/recherche/banques/PCC

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Selon la nomenclature bactriologique, la classification en espce requiert, en complment, la prise en compte de caractristiques physiologiques, biochimiques et gntiques dtermines sur des souches pures en culture. Les apports de la biologie molculaire la systmatique et la phylognie devraient permettre terme la dfinition dune taxonomie des cyanobactries stable et universelle.

1.2. Diversit morphologique et cologique

Les cyanobactries peuvent tre : soit unicellulaires, vivant solitaires ou en colonies (figure A livret couleur), soit organises en trichomes, quand le thalle est compos dune srie de cellules sans gaine (figure B livret couleur), soit organises en filaments, quand le thalle est compos dune srie de cellules enveloppes dune gaine (figure C livret couleur). Dans certains genres (ex : Microcystis, Planktothrix), la prsence dans les cellules vgtatives de vacuoles gaz permet ces microorganismes de se positionner diffrents niveaux dans la colonne deau, voire de saccumuler la surface des plans deau, selon leurs besoins en lumire et en nutriments. Deux types de cellules diffrencies prsentant des fonctions particulires sont aussi parfois observes : les akintes (figure D et E livret couleur) sont des cellules de grande taille, paroi paisse, riches en rserves. Ce sont des formes de rsistance qui permettent la survie des cyanobactries sur les sdiments, lorsque les conditions environnementales sont dfavorables leur maintien dans la colonne deau ; les htrocystes (figure D et E livret couleur) sont des cellules paroi paisse, qui sont spcialises dans la fixation de lazote atmosphrique. Les espces qui possdent ces structures sont capables dune autotrophie vis--vis de lazote. Les cyanobactries prsentent des caractristiques cologiques trs varies qui leur ont permis de coloniser la plupart des habitats, aquatiques ou terrestres. Elles sont libres ou vivent en symbiose avec dautres organismes. Un grand nombre dentre elles sont adaptes des environnements extrmes (glaciers, sources chaudes, cendres volcaniques), grce des capacits qui leur permettent de supporter des tempratures leves (genre Synechococcus observ dans des sources thermales plus de 70C), des pH faibles (certaines picocyanobactries sont observes des pH de lordre de 4) ou encore une large gamme dclairements (genre Prochlorococcus pouvant faire de la photosynthse sous des clairements de moins de 1 mol photons.m-2.s-1 et jusqu environ 2000 mol photons.m-2.s-1). En milieu aquatique, les cyanobactries sont planctoniques, cest--dire en suspension dans la colonne deau, ou benthiques quand elles se dveloppent fixes sur les sdiments.

1.3. Multiplication
La multiplication des cyanobactries est vgtative, cest--dire asexue, et seffectue par division binaire dune cellule mre en deux cellules filles,par bourgeonnement ou par divisions multiples.Selon les espces et les conditions environnementales, les temps de doublement des populations varient de quelques heures plusieurs jours. Les genres unicellulaires peuvent produire des baeocytes (minicellulles) lintrieur de la cellule maternelle. Les individus coloniaux se multiplient galement par fragmentation. Ainsi, les formes filamenteuses produisent des hormogonies (minifilaments mobiles) qui, aprs dtachement du filament, participent la colonisation.

1.4. Les cyanobactries toxiques

Les cyanobactries peuvent produire plusieurs types de toxines agissant sur diffrents organes cibles (foie, systme nerveux). Ces toxines sont intracellulaires et synthtises par les cellules en croissance et sont le plus souvent libres dans le milieu loccasion de la snescence, de la mort ou de la lyse cellulaire. En phase de croissance, les toxines sont essentiellement intracellulaires, moins de 10 20 % de la teneur totale en toxine est extracellulaire (Jones & Orr 1994). Cependant dans certains cas, comme celui de la cylindrospermopsine, une proportion importante de la toxine peut tre libre dans le milieu par les cellules en croissance (Chiswell et al. 1999). Une liste non exhaustive des espces observes en France et susceptibles de produire des toxines est prsente dans le tableau I-II. Une mme toxine peut tre produite par des espces diffrentes. Ainsi, les microcystines ont dj t observes chez des espces du genre Microcystis, mais galement chez des espces des genres Anabaena, Planktothrix ou encore Nostoc. Une mme espce peut produire diffrentes toxines. Cest ainsi quAnabaena spirodes peut produire de lanatoxine-a mais galement des microcystines. Enfin, la quantit de toxine produite par unit de biomasse est trs variable au sein mme dune espce, en fonction des conditions environnementales, de la phase de croissance ou du clone considr.

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Tableau I-II : Liste non exhaustive des espces de cyanobactries potentiellement toxiques et des toxines ayant dj t associes ces espces en France ou hors de France (N.I.= toxine prsente mais non identifie). Les espces ayant dj t observes en France apparaissent en caractres gras.
Cyanobactries toxiques Anabaena affinis Anabaena circinalis Anabaena flos-aquae Anabaena hassallii Anabaena lemmerman Anabaena planctonica Anabaena spiroides Anabaena torulosa Anabaena variabilis Anabaena sp. Anabaenopsis milleri Aphanizomenon flos-aquae Aphanizomenon ovalisporum Aphanizomenon sp. Coelosphaerium naegelianum Cylindrospermopsis raciborskii Cylindrospermum sp. Fischerella epiphytica Gloeotrichia echinulata Gloeotrichia pisum Hapalosiphon hibernicus Lyngbya birgei Lyngbya gracilis Lyngbya major Lyngbya majuscula Lyngbya wollei Microcoleus lyngbyaceus Microcystis aeruginosa Microcystis botrys Microcystis farlowian Microcystis flos-aquae Microcystis panniformis Microcystis toxica Microcystis viridis Microcystis wesenbergii Microcystis sp. Nodularia spumigena Nostoc paludosum Nostoc rivulare Nostoc sp. N.I. Anatoxine-a, Saxitoxines, Microcystines Anatoxines (-a, -a(s), -b, -b(s), -c, -d), Microcystines N.I. Microcystines, Anatoxine-a(s) Anatoxine-a Anatoxine-a, Microcystines N.I. N.I. Anatoxine-a Microcystines Anatoxine-a, Saxitoxines Cylindrospermopsine Anatoxine-a Hpatotoxine Cylindrospermopsine, Saxitoxines Anatoxine-a N.I. N.I. N.I. Microcystines N.I. Debromoaplysiatoxine N.I. Lyngbyatoxine-a Saxitoxines N.I. Microcystines Microcystines Ichtyotoxine Microcystines Microcystines N.I. Microcystines, Microviridine Microcystines Anatoxine-a Nodularines N.I. N.I. Microcystines Toxines

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Tableau I-II (suite) : Liste non exhaustive des espces de cyanobactries potentiellement toxiques et des toxines ayant dj t associes ces espces en France ou hors de France (N.I.= toxine prsente mais non identifie). Les espces ayant dj t observes en France apparaissent en caractres gras.
Cyanobactries toxiques Oscillatoria formosa Oscillatoria lacustris Oscillatoria limosa Oscillatoria tenuis Oscillatoria nigroviridis Oscillatoria sp. Phormidium favosum Planktothrix agardhii Planktothrix mougeotii Planktothrix rubescens Planktothrix sp. Pseudanabaena sp. Raphidiopsis sp. Schizothrix calcicola Scytonema hofmanni Scytonema pseudohofmanni Spirulina subsalsa Symploca hydnoides Symploca muscorum Synechococcus sp. Trichodesmium erythraeum Umezakia natans Woronichinia naegeliana anciennement Gomphosphaeria naegelianum Homoanatoxine-a N.I. Microcystines Microcystines Oscillatoxine-a Anatoxine-a Anatoxine-a Microcystines Microcystines Microcystines Anatoxine-a Neurotoxine Cylindrospermopsine Aplysiatoxines Scytophycines a et b Scytophycines a et b N.I. N.I. Aplysiatoxine N.I. Neurotoxine Cylindrospermopsine Anatoxine-a Toxines

Points retenir Les cyanobactries sont des microorganismes procaryotes photosynthtiques possdant, entre autres pigments, de la chlorophylle a, comme les vgtaux. Elles sont prsentes dans la plupart des cosystmes. Dans les milieux aquatiques, elles sont benthiques ou planctoniques. Bien que rfrences dans la classification bactriologique, elles sont toujours intgres dans le code de nomenclature de botanique et leur identification au niveau de lespce est difficile. Elles prsentent une grande varit de formes et dorganisations et sont capables de diffrencier des cellules spcialises. Certains genres produisent des toxines, qui sont intracellulaires. Certains genres produisent des mtabolites trs odorants.

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2. Les prolifrations de cyanobactries

2.1. Dfinition des prolifrations
Dans les conditions environnementales qui leur sont favorables, les cyanobactries connaissent des phases de prolifration massive, aussi qualifie defflorescence ou de bloom. Ces prolifrations se traduisent par la production, sur une courte priode de temps (quelques jours), dune biomasse importante et par une forte diminution de la diversit spcifique dans le compartiment phytoplanctonique puisquune ou deux espces deviennent alors trs largement dominantes. Elles peuvent provoquer une coloration de leau qui dpendra des pigments majoritairement prsents dans lespce dominante (figure F livret couleur). Les espces planctoniques se dveloppent dans lensemble de la colonne deau ou un niveau bien prcis. Dans ce dernier cas, les prolifrations sont le plus souvent observes la surface o elles forment des agrgats flottants appels fleurs deau , cumes ou mousses (figures G livret couleur et H livret couleur). De faon moins frquente, ces phnomnes surviennent en profondeur (entre 10 et 15 mtres) en fonction des disponibilits en nutriments et en nergie lumineuse. Il est trs difficile de dfinir un seuil de biomasse caractrisant lapparition dune prolifration. En effet, celui-ci devrait dpendre du statut trophique de lcosystme aquatique concern. Ainsi, dans les milieux oligomsotrophes comme les grands lacs alpins, des concentrations en chlorophylle-a de 30 50 g.L-1 reprsentent des valeurs trs leves de biomasse. En revanche ces mmes valeurs sont considres comme faibles ou moyennes dans les milieux eutrophes. Il faudrait donc prendre galement en compte lvolution temporelle de la biomasse pour dfinir une situation de prolifration. titre dexemple un doublement du nombre de cellules se produisant en une semaine est considr par certains observateurs comme une situation dalerte ncessitant le dmarrage dune surveillance confirmant ou infirmant la poursuite du phnomne. De plus, la disparition des prolifrations peut se produire trs rapidement. Bien que ce terme soit indiqu dans la rglementation, il nexiste pas de dfinition internationale de la prolifration de cyanobactries . Les prolifrations de cyanobactries apparaissent comme des phnomnes de nature dynamique quil nest pas possible, en ltat des connaissances scientifiques, de caractriser avec prcision par des valeurs seuils de nombre de cellules ou de temps de doublement. Les phnomnes tant gnralement trs rapides, lobservation de la dynamique des populations se fait par la mise en uvre dun programme dchantillonnage et de dnombrements dont la frquence permet de constater le dbut de la cintique de croissance. La meilleure connaissance possible de lhistorique et de lvolution de la qualit et du comportement de la ressource permet de mieux dfinir les priodes critiques.

2.2. Hydrosystmes concerns par des prolifrations de cyanobactries

Des prolifrations de cyanobactries ont t rpertories dans le monde entier, sous toutes les latitudes et jusquen moyenne altitude. Des prolifrations despces benthiques sont observes dans des rivires lentes et dans des lacs. Dans ce cas, elles ne surviennent que dans la zone euphotique, cest--dire en gnral le long des berges. Les eaux souterraines non influences par des eaux de surface ne sont pas concernes en raison de labsence de lumire. Il en est de mme pour les rservoirs deau potable totalement obscurs. Dans le cas o ils seraient clairs, un risque ponctuel de prolifration ne peut pas tre exclu si du phosphore biodisponible est prsent. Les bassins de traitement des stations dpuration des eaux uses par lagunage sont parfois lobjet de prolifrations et peuvent contribuer lensemencement des hydrosystmes rcepteurs en cyanobactries ainsi quen toxines. Vasconcelos et Peirera (2001) ont observ au Portugal la dynamique dune telle prolifration et mesur dans le bassin des concentrations en hpatotoxines de lordre de 50 g quiv. MC-LR.L-1.

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2.3. Effets indsirables des prolifrations de cyanobactries

Les effets de ces prolifrations, quand elles sont particulirement massives, sont multiples : Sur lenvironnement et le cadre de vie : modification de laspect de la ressource par une coloration inhabituelle (bleue, rouge ou verte), des irisations en surface et/ou des masses dcume se dplaant au gr des vents ; nuisance olfactive lors de la dcomposition de la prolifration. Sur les organismes du milieu : perturbation de la biodiversit de lcosystme aquatique ; perturbation des rseaux trophiques aquatiques car les cyanobactries sont peu ou pas consommes par le zooplancton et leur prolifration seffectue le plus souvent au dtriment du dveloppement des autres microorganismes photosynthtiques (comptition pour les nutriments et la lumire) ; mortalits de poissons, par intoxication ou diminution de la teneur en oxygne de leau, mortalits doiseaux, par intoxication directe ou via leur alimentation (mollusques, poissons,), intoxication danimaux domestiques ou sauvages par abreuvement proximit dcumes toxiques (Briand et al. 2003). Sur les usages anthropiques de leau : coloration, odeur et texture de leau pouvant dcourager la baignade ; troubles cutans ou des muqueuses suite des baignades dans des eaux affectes par des efflorescences ; perturbation du fonctionnement des procds de traitement des eaux dalimentation, notamment mcaniquement par colmatage des filtres ou des membranes, ou par consommation accrue en ractifs de traitement et gnration de sous-produits de dsinfection et par drglement des ractions de floculation par suite des changements rapides de pH des eaux entrant dans la filire ; dgradation, par la prsence de mtabolites odorants, de la qualit organoleptique des eaux dalimentation mal traites ; induction de risques sanitaires par ingestion, inhalation ou exposition par dialyse si les toxines sont mal limines ; perturbation des appareillages de dialyse par colmatage acclr, si le traitement en amont est insuffisant.

2.4. Facteurs favorisant les prolifrations de cyanobactries

Les prolifrations de cyanobactries sont le plus souvent associes, selon la communaut scientifique, trois facteurs principaux : des concentrations leves en nutriments dont le phosphore et/ou lazote qui sont souvent les lments nutritifs limitants dans les plans deau (Chorus & Mur 1999, Deppe et al. 1999) ; une stabilit leve de la colonne deau au moment du dveloppement de lefflorescence et dans la priode prcdant cet vnement ; ainsi que les conditions mtorologiques favorables : luminosit, temprature. Concernant le premier facteur, la thorie dveloppe par Tilman (1982) puis reprise par beaucoup dautres auteurs (Interlandi & Kilham 2001), prdit que la diversit dune communaut est positivement corrle au nombre de nutriments niveaux limitants dans le systme o se trouve cette communaut. Huisman et al. (2001) ont montr que la comptition pour les nutriments mais aussi pour la lumire pouvait gnrer des oscillations et des fluctuations chaotiques dans labondance, qui permettent la coexistence de nombreuses espces. En revanche, en situation de ressources non limitantes, la slection de lespce la plus adapte aux conditions du milieu se traduira par sa dominance au sein de la communaut. Concernant la stabilit de la colonne deau, le mme type de mcanisme peut tre voqu et une forte stabilit permet la slection des espces les plus comptitives. En revanche, des perturbations intermdiaires gnrent des changements dans la dominance des espces et favorisent ainsi la richesse et la diversit spcifique (Barbiero et al. 1999, Flder & Sommer 1999). Concernant les concentrations en nutriments, la plupart des prolifrations de cyanobactries surviennent dans des milieux eutrophes dont les charges en phosphore, principalement sous forme orthophosphates sont leves (> 50 g.L-1 en P). Cest pourquoi la rduction des charges en nutriments, et surtout des apports en phosphore,

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est considre comme une priorit pour prvenir le dveloppement de prolifrations de cyanobactries (Chorus & Mur 1999, Deppe et al. 1999). Cependant un tat oligotrophe ne met pas systmatiquement labri de prolifrations de cyanobactries, comme le montrent les travaux de Mez et al. (1997) en Suisse. De mme, malgr une forte diminution amenant les concentrations en phosphore dans le lac du Bourget de 120 30 g.L-1, celuici connat depuis quelques annes des perturbations importantes lies une cyanobactrie toxique,Planktothrix rubescens. Celle-ci se dveloppe chaque anne dans le mtalimnion o elle bnficie de suffisamment de lumire et dapports en nutriments depuis les couches plus profondes (Humbert et al. 2001b, Jacquet et al. 2005). Concernant la stabilit de la colonne deau, de nombreux travaux dcologie comparative ont soulign le rle fondamental de ce facteur dans le dveloppement des prolifrations de cyanobactries (Jacoby et al. 2000). Visser et al. (1996) ont montr que le brassage artificiel des plans deau peut permettre de prvenir la prolifration de certaines espces de cyanobactries et daugmenter la diversit spcifique des communauts phytoplanctoniques dans la colonne deau. Elle peut aussi tout simplement homogniser la composition de leau, rduisant ainsi une partie des problmes rencontrs dans la prparation deau de distribution. Nanmoins, la dstratification peut aussi, dans certaines conditions, favoriser certaines espces de cyanobactries comme Planktothrix agardhii qui semble peu sensible ce facteur.

2.5. Caractristiques des cyanobactries leur confrant une forte valeur slective
Certaines conditions environnementales conduisent des situations de fortes comptitions entre microorganismes autotrophes. Ces situations provoquent, par exclusion comptitive, la slection de lespce la plus performante dans les conditions du milieu. Concernant les comptitions pour lutilisation des nutriments et de la lumire, trois aptitudes semblent plus particulirement confrer un avantage slectif important aux cyanobactries : la rgulation de la flottaison permet certaines espces dajuster leur position dans la colonne deau grce des mcanismes physiologiques particuliers tels que la prsence de vsicules gaz et la prsence de rserves qui servent de ballast. Ainsi, les cellules peuvent se dplacer de la surface, o elles profitent au mieux de lnergie lumineuse, vers des couches deau plus profondes, jusquau niveau des sdiments si les concentrations en nutriments y sont plus leves du fait de relargages en conditions rductrices voire anoxiques. Elles peuvent aussi occuper, pendant plusieurs mois, une couche bien prcise dans la colonne deau, lexemple de P. rubescens qui occupe prfrentiellement le mtalimnion. Dans certains cas, elles saccumulent en surface pour former une cume. Cette stratgie permet alors ces espces dliminer leurs comptitrices en leur interdisant laccs la lumire (exemple de Microcystis). Enfin, ce contrle de la flottaison limite les processus de sdimentation ; la diffrenciation des htrocystes (figure D et E livret couleur) confre certaines cyanobactries filamenteuses (par exemple Aphanizomenon, Anabaena ou Cylindrospermopsis) la possibilit de se dvelopper dans des milieux trs appauvris en azote inorganique (Mur et al. 1999). Cest pourquoi la diminution des concentrations en nitrates, contrairement la matrise des apports de phosphates, nest pas ncessairement la bonne stratgie de prvention des prolifrations de cyanobactries. Il a mme t montr que la rduction des concentrations en nitrates pouvait favoriser la slection dans une communaut phytoplanctonique de cyanobactries htrocystes (Tilman et al. 1982) ; la possession de certains pigments accessoires (phycocyanine, allophycocyanine et phycorythrine) localiss la surface des thylacodes permet certaines espces dutiliser comme source dnergie lumineuse pour la photosynthse, les longueurs donde encore prsentes en profondeur. Dautres espces sont capables dexploiter les faibles niveaux dnergie lumineuse des eaux trs turbides. Lintrt de pouvoir coloniser cette zone profonde (suprieure 15 mtres dans les lacs alpins par exemple) est que les concentrations en nutriments y sont en gnral plus leves quen surface. Certaines espces de cyanobactries ont des capacits importantes de stockage du phosphore (rserves de polyphosphate) et de lazote (sous forme de cyanophycine et de phycocyanine) dans les cellules. Dautres sont capables dutiliser des formes trs varies du carbone (Oliver & Gant 2000). Ces aptitudes ne sont pas dveloppes de faon gale chez toutes les espces de cyanobactries, les stratgies que peuvent slectionner ces organismes pour sadapter sont multiples. Ainsi la facult des cyanobactries mieux chapper la prdation que les microalgues semble lie lorganisation cellulaire particulire de ces organismes et leur capacit synthtiser des toxines : de nombreux genres de cyanobactries sont organiss sous forme de filaments ou de trichomes (exemple : Anabaena, Planktothrix, Oscillatoria...) qui peuvent tre assembls en faisceaux (exemple : Aphanizomenon), ou sous forme de colonies (exemple : Microcystis, Aphanothece...) (Cout & Bernard 2001). Cette organisation les rend plus difficiles consommer par la plupart des organismes brouteurs du zooplancton. Cependant, si ces derniers sont prsents avant que les filaments ou les colonies aient atteint une taille qui les protge de la prdation, ils peuvent quand mme exercer un contrle sur ces populations (Oliver & Gant 2000) ;

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 la capacit synthtiser des toxines pourrait confrer un avantage slectif aux cyanobactries par rapport aux autres microorganismes autotrophes. Bien que le rle exact de ces toxines ne soit pas encore clairement tabli, il a t montr que ces mtabolites, notamment les microcystines, peuvent avoir un impact direct (mortalit, baisse de fcondit...) sur le zooplancton (Humbert et al. 2001a). Dautres mtabolites secondaires peuvent aussi inhiber la croissance des microalgues (Smith & Doan 1999) et lactivit de certains consommateurs (Sellner 1997). De plus, certaines espces de cyanobactries sont dotes dune bonne capacit de rsistance aux infections virales par les cyanophages. Chez Synechococcus, Waterbury et Valois (1993) ont montr que les populations de cyanobactries taient domines par des cellules rsistantes aux phages capables de les infecter alors que les populations de microalgues sont trs sensibles aux infections virales (Tarutani et al. 2000). Dans le lac du Bourget, Dorigo et al. (2004) ont constat que la dynamique des cyanophages ntait pas corrle la dynamique de P. rubescens ce qui suggre un faible contrle de cette communaut par les virus. Cette question fait lobjet dune attention croissante de la part de la communaut scientifique, notamment par rapport aux perspectives offertes dans la lutte contre les prolifrations de cyanobactries. Les akintes gnrs par certaines cyanobactries (par exemple Anabaena et Aphanizomenon) en conditions environnementales particulirement dfavorables, leur permettent de rsister, par exemple, au gel ou la scheresse. Lorsque les conditions environnementales redeviennent propices au dveloppement du phytoplancton, des filaments cyanobactriens sont trs rapidement gnrs partir de ces cellules, ce qui peut tre considr comme un avantage slectif pour la recolonisation dun milieu. Une autre stratgie permettant la survie consiste sinstaller dans les sdiments pendant lhiver. Plusieurs tudes ont montr que Microcystis, par exemple, avait un cycle de vie comportant une phase benthique de la fin de lautomne au printemps, puis une phase plagique de lt jusqu lautomne (Brunberg & Blomqvist 2002, 2003). En rsum, dans ltat actuel des connaissances, il est encore extrmement difficile de prdire le dveloppement dune prolifration de cyanobactries dans un plan deau ou dans certains cours deau. Le dveloppement des outils de modlisation devrait permettre, terme, de mieux cerner les paramtres environnementaux essentiels dterminant le dclenchement dune prolifration de cyanobactries. Cependant, dans certains cas, une bonne connaissance des sites, reposant sur de longues sries chronologiques, peut permettre danticiper les problmes lis aux prolifrations de cyanobactries.

Points retenir Une prolifration est un phnomne caractris par sa dynamique, la production dune forte biomasse et la dominance de la communaut phytoplanctonique par un ou deux genres. Il nexiste pas de dfinition prcise ni de consensus sur un niveau seuil caractrisant une prolifration. Les prolifrations de cyanobactries peuvent perturber le fonctionnement des cosystmes aquatiques et les usages de leau. Labondance des nutriments (phosphore et secondairement azote, voire manque dazote) et la stabilit de la colonne deau sont des facteurs favorisant les prolifrations essentiellement en priode estivale et dbut dautomne. Selon les sites et les conditions, les prolifrations peuvent tre quasiment permanentes ou ponctuelles, rares ou frquentes, cest--dire largement imprvisibles dans ltat actuel des connaissances. Les cyanobactries prsentent de grandes capacits dadaptation aux variations des caractristiques environnementales.

3. Les toxines de cyanobactries ou cyanotoxines

3.1. Structures, caractristiques physico-chimiques et persistance dans le milieu des cyanotoxines
Les toxines de cyanobactries ou cyanotoxines recouvrent une grande varit de structures chimiques et de mcanismes de toxicit (Sivonen & Jones 1999). En fonction de leur mode daction, les cyanotoxines sont classes en hpatotoxines (organe cible principal : le foie), en neurotoxines (organe cible : le systme nerveux) ou en dermatotoxines (organe cible : la peau). Elles sont galement classes suivant leur structure chimique. Ce sont en majorit des peptides cycliques ou des alcalodes.

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3.1.1. Les hpatotoxines

Ce sont les toxines de cyanobactries qui sont le plus frquemment rencontres lors de prolifrations. Elles sont impliques dans de nombreux pisodes dintoxication. Chez les vertbrs, lorgane cible est essentiellement le foie. Dautres organes tels que les reins ou les intestins peuvent tre galement altrs.

3.1.1.2. Les microcystines et les nodularines

Ce sont des peptides cycliques sept acides amins pour les microcystines (formule gnrale : cyclo-[D-alanine1X2-D-MeAsp3-Z4-Adda5-D-glutamate6-Mdha7]) et cinq acides amins pour les nodularines (formule gnrale : cyclo-[D-MeAsp1-L-arginine2-Adda3-D-glutamate4-Mdhb5], figure I-1). Leur masse molculaire est comprise entre 800 et 1100 daltons (Da). Il existe de nombreux variants structuraux de ces molcules et lon compte lheure actuelle neuf variants de la nodularine (Codd et al. 2005) et plus de 70 variants de microcystines (Sivonen & Jones 1999). Leur toxicit sur souris exprime en DL50 24 h en i.p. est de 50 plus de 1200 g.kg-1. Ces toxines sont solubles dans leau et trs stables : 90 % de dgradation en 2 6 semaines la lumire. Les toxines de ces deux familles restent stables et rsistantes lhydrolyse chimique ou loxydation pH neutre ( 7). Les microcystines et les nodularines restent actives aprs bullition. Dans les chantillons naturels et lobscurit, les microcystines peuvent persister plusieurs mois voir des annes (Sivonen & Jones 1999). Les microcystines peuvent tre oxydes par ozonation ou par des agents oxydants forts, ou dgrades par dintenses radiations ultraviolettes (UV) (Sivonen & Jones 1999).

Figure I-1 : Structure des microcystines (A) et des nodularines (B). X et Z sont des acides amins variables, R = H ou CH3.

3.1.1.3. La cylindrospermopsine et ses analogues

La cylindrospermopsine est un alcalode de 415 Da possdant une unit guanidine tricyclique (figure I-2). Cest une molcule avec une structure de zwitterion, trs polaire et trs soluble dans leau (Chiswell et al. 1999), dont la toxicit exprime en DL50 24 h en injection intrapritonale sur souris est de 2,1 mg.kg-1 (Ohtani et al. 1992). Cette molcule est peu stable dans un extrait algal (90 % de dgradation en 2-3 jours la lumire du soleil), mais seule en solution sa demi-vie est suprieure 10 jours (Chiswell et al. 1999). ce jour, deux variants de la cylindrospermopsine sont rpertoris, un toxique, la 7 picylindrospermopsine et un non toxique, la dsoxycylindrospermopsine (Briand et al. 2003).

Figure I-2 : Structure de la cylindrospermopsine.

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3.1.2. Les neurotoxines

Les neurotoxines produites par les cyanobactries sont regroupes en deux familles : les anatoxines ; la saxitoxine et ses drivs. Leur cible est la jonction neuro-musculaire avec un mode daction spcifique chacune des familles de neurotoxines.

3.1.2.1. Les anatoxines

Les anatoxines sont des alcalodes synthtiss uniquement par des cyanobactries (figure I-3). Lanatoxine-a est une amine secondaire de 165 Da, soluble dans leau. Son homologue, lhomoanatoxine-a (179 Da), possde des proprits physico-chimiques et toxicologiques trs voisines. Leur toxicit sur souris exprime en DL50 i.p. est de 200 250 g.kg-1 (Sivonen & Jones 1999). Ces molcules sont peu stables et se dgradent rapidement en milieu naturel (Duy et al. 2000). Lanatoxine-a(s) est un ester phosphate dune N-hydroxyguanine cyclique de 252 Da. Sa toxicit sur souris exprime en DL50 24 h en i.p. est de 20 g.kg-1 (Sivonen & Jones 1999). Cette molcule est instable aux pH alcalins et la chaleur (Carmichael et al. 1997).

Figure I-3 : Structure des molcules danatoxine-a, homoanatoxine-a, anatoxine-a(s), de gauche droite.

3.1.2.2. La saxitoxine et ses drivs

Elles sont galement produites, outre par les cyanobactries, par certaines espces de dinoflagells marins (Robillot & Hennion 2001) et sont responsables, en milieu marin, dintoxications neurologiques parfois mortelles connues sous le nom dintoxication paralysante par les fruits de mer (IPFM) ou de paralytic shellfish poisoning (PSP) des anglo-saxons. Ce sont des alcalodes un noyau ttrahydropurique (figure I-4). Vingt-cinq variants molculaires de 241 491 Da sont connus ce jour. Certains de ces variants sont non sulfats tels que la saxitoxine, mono-sulfats tels que les gonyautoxines (GTXs) ou doublement sulfats tels que les C-toxines. Des tudes en laboratoire ont montr une grande stabilit de ces molcules, elles peuvent persister plusieurs mois dans leau. Des mtabolites plus toxiques peuvent se former. Par exemple, lvolution de C-toxines en GTXs par bullition peut conduire une augmentation transitoire de la toxicit dun extrait, avant que ces dernires ne se dgradent (Negri & Jones 1995, Jones & Negri 1997, Negri et al. 1997, Sivonen & Jones 1999).

Figure I-4 : Structure gnrale des saxitoxines.

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3.1.2.4. La -N-mthylamino-L-alanine ou BMAA

La -N-mthylamino-L-alanine (BMAA) est une molcule de type acide amin non implique dans la synthse ribosomale de protine (figure I-5). La BMAA est une neurotoxine qui provoque une excitation des neurones. Elle agit comme un agoniste du rcepteur glutamate en mimant les effets de ce neurotransmetteur naturellement prsent dans le cerveau.

Figure I-5 : Structure gnrale de la -N-mthylamino-L-alanine ou BMAA (A), agoniste du rcepteur du glutamate.

3.1.3. Les molcules effets irritants

Des molcules effets irritants, secrtes ou libres par les cyanobactries ont t identifies dans les eaux de mer. Il sagit de laplysiatoxine, la debromoaplysiatoxine (Mynderse et al. 1977) et la lyngbyatoxine-a (Cardellina et al. 1979). La structure gnrale de ces alcalodes dermatotoxiques est prsente en figure I-6. En revanche, dans les eaux douces, leur prsence na pas t dmontre : la lyngbyatoxine ce jour na pas t dtecte et laplysiatoxine et la dbromoaplysiatoxine nont pas fait lobjet de recherche ni dune quantification. Par ailleurs, les lipopolysaccharides (LPS) constitutifs de la paroi cellulaire de cyanobactries ou dautres bactries Gram ngatives sont suspects dtre lorigine deffets irritants. Dans leur structure molculaire on discerne un noyau polysaccharidique, une partie lipidique (lipide A) et une protine antignique de type antigne O.

Figure I-6 : Structure gnrale de toxines effets irritants dtectes dans les eaux marines : A lyngbyatoxines-a, B aplysiatoxines, C dbromoaplysiatoxines.

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3.2. Fonction mtabolique et dterminisme de la production des cyanotoxines

La fonction mtabolique des cyanotoxines reste lucider. Cette problmatique de recherche se structure autour des questions suivantes : Pourquoi les cyanobactries synthtisent-elles des cyanotoxines ? Quel(s) bnfice(s) en retirent-elles ? Ce phnomne est-il la rsultante dune slection clonale ? Deux hypothses peuvent tre considres : dans la premire, les toxines sont des mtabolites secondaires des cyanobactries, dont la production, rgule au niveau cellulaire, est une rponse au stress. Lune des approches pour tester cette hypothse est dtudier le contrle de la production des toxines en relation avec les variations des facteurs de lenvironnement. Des tudes prliminaires en laboratoire et in situ ont montr une rgulation de la production de toxines par certains facteurs tels que la temprature, la lumire, les concentrations en nutriments, la salinit et le pH. Une revue dtaille des travaux raliss jusquen 1998 a t publie par Sivonen et Jones (1999) ; la seconde hypothse mergente est que les toxines sont des mtabolites primaires, dont lexpression est constitutive. Le taux de production de microcystines par cellule dpendrait du taux de croissance des cellules et serait donc indirectement influence par les facteurs environnementaux (Briand et al. 2005). La proportion relative de clones possdant ou non les gnes de synthse des toxines dterminerait le niveau global de toxicit de la population qui prolifre. Si lon considre lensemble des derniers travaux recenss par Chorus (2001), il est de plus en plus admis que la production de microcystines est lie au mtabolisme primaire et, par consquent, directement corrle la croissance cellulaire des souches productrices de toxines. Toutefois dautres tudes montrent que ce processus nest pas exclusif (Araoz et al. 2005). Au vu des donnes actuelles, les questions cites prcdemment restent non lucides. Le niveau de toxicit dune population de cyanobactries semble donc dtermin par : lquilibre entre les souches toxiques et non toxiques ; ltat physiologique des clones toxiques contrlant le niveau de synthse des toxines. Ces deux processus seraient influencs directement ou indirectement par les facteurs environnementaux (biotiques et abiotiques).

3.3. Distribution des cyanotoxines

3.3.1. Les hpatotoxines 3.3.1.1. Les microcystines
Parmi les hpatotoxines de structure cyclique, les microcystines sont les cyanotoxines le plus frquemment rpertories dans les phnomnes dintoxications animales et humaines. Elles sont principalement produites par des espces appartenant aux genres Microcystis et Planktothrix. On les retrouve galement synthtises par certaines espces des genres Anabaena, Anabaenopsis, Nostoc, Oscillatoria et Hapalosiphon (Sivonen & Jones 1999, Cout & Bernard 2001, Gugger 2001). Ainsi, elles ont t dtectes, entre autres, dans des plans deau des pays suivants : Afrique du Sud, Australie, Chine, Japon, Canada, tats-Unis dAmrique, Allemagne, Danemark, Finlande, France, Portugal, Rpubliques Tchque et Slovaque et Royaume-Uni. La large distribution gographique des microcystines tient en partie au fait que les espces appartenant au genre Microcystis prolifrent dans les conditions les plus varies. Elles sont retrouves sous les latitudes les plus septentrionales jusquaux rgions les plus chaudes, dans des plans deau dont les caractristiques physicochimiques sont variables. La liste des pays prcits est non exhaustive. En effet, de nombreuses efflorescences Microcystis ont t observes dans dautres pays, sans quil y ait eu systmatiquement recherche de toxicit ou de toxines. Lespce Planktothrix agardhii, connue comme tant la plus toxique du genre, a une rpartition gographique plus septentrionale. Elle produit dans la plupart des cas des microcystines. Les premiers travaux rapportent une hpatotoxicit provoque chez la souris par des efflorescences P. agardhii provenant des Pays-Bas (Leeuwangh

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et al. 1983) et de Scandinavie (Berg et al. 1986). Les microcystines ont ensuite t identifies comme responsables de cette toxicit (Meriluoto et al. 1989). En Allemagne, les travaux de Fastner et al. (1999) ont montr que de trs nombreuses efflorescences P. agardhii synthtisent des microcystines. De plus, il savre que cette espce en produit des quantits aussi importantes que les espces des genres Microcystis ou Anabaena (Henriksen 1996, Fastner et al. 1999, Chorus 2001). Les variants de microcystines produits par les cyanobactries sont extrmement divers selon la souche implique, le site, les paramtres environnementaux (composition physico-chimique de leau, intensit lumineuse, temprature), la priode de lanne ou tout autre facteur influant sur la croissance cellulaire. Lidentification de la ou des espces de cyanobactries principalement impliques dans la prolifration ne permet pas de prdire avec prcision le niveau de toxicit.

3.3.1.2. Les nodularines

La nodularine et ses variants sont produits par la cyanobactrie Nodularia spumigena. Les efflorescences de cette espce ont t localises en mer Baltique, ou dans les eaux saumtres destuaires et de lacs ctiers en Australie, ainsi quen Nouvelle-Zlande (Francis 1878, Sivonen et al. 1989, Sivonen & Jones 1999).

3.3.1.3. La cylindrospermopsine
La cylindrospermopsine est principalement synthtise par Cylindrospermopsis raciborskii (Ohtani et al. 1992). Un isomre de toxicit quivalente sur souris, la 7-picylindrospermopsine, a t mis en vidence chez Aphanizomenon ovalisporum (Banker et al. 2000). De plus, un analogue moins toxique de la cylindrospermopsine, la dsoxycylindrospermopsine, a t identifie dans une souche de C. raciborskii (Norris et al. 1999). La prsence de cylindrospermopsine a t principalement rpertorie en Australie o de nombreux cas dintoxication lis la prsence de C. raciborskii ont t observs. Rcemment des souches de C. raciborskii produisant de la cylindrospermopsine ont galement t signales en Floride (tats-unis) (Burns et al. 2000), en Thalande (Li et al. 2001), en Nouvelle-Zlande (Stirling & Quilliam 2001). Des prolifrations de C. raciborskii se sont galement rvles produire de la cylindrospermopsine en Allemagne (Fastner et al. 2003) et en Italie (Manti et al. 2005). Au Japon, cette toxine est produite par une souche dUmezakia natans (Harada et al. 1994) et en Isral, par Aphanizomenon ovalisporum (Banker et al. 1997). Plusieurs souches de C. raciborskii toxiques ont galement t dcrites en Europe (Underdal et al. 1999, Bernard et al. 2003, Fastner et al. 2003). La recherche de la cylindrospermopsine sur des souches isoles sest avre ngative, bien quun effet toxique chez la souris, localis au niveau du foie et/ou des poumons, ait t observ un certain temps aprs lexposition. Les localisations hongroise et allemande de lespce C. raciborskii sont les plus septentrionales. En effet, cette espce a t longtemps considre comme tropicale ou sub-tropicale. Elle est actuellement signale sur tous les continents et dans de nombreux pays (Sivonen & Jones 1999). La toxicit de C. raciborskii est variable et pas toujours corrle la prsence de la cylindrospermopsine.

3.3.2. Les neurotoxines 3.3.2.1. Les anatoxines

Les anatoxines sont majoritairement produites par des cyanobactries planctoniques appartenant aux genres Anabaena, Oscillatoria, Planktothrix, Cylindrospermum et Aphanizomenon. Lanatoxine-a a t dcrite pour la premire fois chez lespce Anabaena flos-aquae, au Canada. Depuis, elle a t identifie dans plusieurs souches dAnabaena provenant de lacs finlandais, dans des souches isoles dOscillatoria dorigine cossaise, dAnabaena et dOscillatoria provenant dIrlande. Lanatoxine-a a galement t identifie dans des prlvements en Allemagne et au Japon (Sivonen & Jones 1999, Araoz et al. 2005). Elle a t signale en France, pour la premire fois, en 2003, produite par lespce benthique Phormidium favosum. La synthse danatoxine-a par une souche isole a t confirme (Gugger et al. 2005). Lhomoanatoxine-a a t caractrise chez une souche dOscillatoria formosa isole en Sude (Sivonen & Jones 1999). Elle a galement t isole en France, la souche productrice tant probablement du genre Lyngbya (A. Mjean et I. Iteman, Institut Pasteur, non publi). Enfin, ce jour, lanatoxine-a(s) a t dtecte dans des souches dAnabaena flos-aquae isoles aux tats-Unis et en cosse, et dans une souche dAnabaena lemmermanii du Danemark (Sivonen & Jones 1999).

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3.3.2.2. La saxitoxine et ses drivs

Quatre espces de cyanobactries sont connues comme productrices de saxitoxine ou de ses drivs : Aphanizomenon flos-aquae, Anabaena circinalis, Cylindrospermopsis raciborskii, Lyngbya wollei et une espce du genre Planktothrix (Sivonen & Jones 1999). Ces espces sont rencontres dans de nombreux pays des deux hmisphres. Elles produisent aussi des cyanotoxines autres que les saxitoxines. La saxitoxine et ses drivs sont principalement retrouvs en Australie, aux tats-Unis et au Brsil. Comme pour la majorit des toxines de cyanobactries, labsence dtalons commercialiss de la plupart des saxitoxines rduit les possibilits de leur dtection, ce qui constitue un lment restrictif lacquisition dune vision globale de leur distribution. Lespce Anabaena circinalis est largement distribue dans les rivires, ainsi que dans les rservoirs deau en Australie. Seules les souches australiennes sont ce jour rpertories comme productrices de saxitoxines. Contrairement au profil toxique des espces produisant des microcystines, celui des espces produisant des saxitoxines est relativement constant. Pour les souches dA. circinalis, il est domin par les C-toxines (Sivonen & Jones 1999). Deux espces de cyanobactries, Aphanizomenon flos-aquae sur le continent nord amricain et Cylindrospermopsis raciborskii au Brsil, sont connues pour produire des saxitoxines. La production de saxitoxines par les cyanobactries semble donc localise principalement dans les rgions tropicales et sub-tropicales, majoritairement dans lhmisphre sud et au niveau de lquateur. Cependant, elles ont t rcemment signales en Europe : au Portugal, produites par lespce Aphanizomenon flos-aquae (Pereira et al. 2000), et en Italie. Dans ce pays elles sont produites par une espce appartenant au genre Planktothrix (Pomati et al. 2000) et seraient responsables de la mort de poissons et de coquillages (Giovannardi et al. 1999, Pomati et al. 2000).

3.3.2.3. La BMAA
Cox et al. (2005) ont dtect la BMAA chez 95 % des genres (20/21) et 97 % des souches (29/30) de cyanobactries tudies provenant des tats-unis dAmrique, dEurope, dInde, dIsral ou de diffrents ocans ou mers. La synthse de la BMAA et son stockage dpendent des conditions de culture. Selon ces auteurs, cette molcule serait produite par toutes les cyanobactries symbiotiques, planctoniques ou benthiques, quelles soient terrestres ou aquatiques (eau douce, eau saumtre ou milieu marin). La BMAA est retrouve non seulement sous forme libre, mais galement sous forme complexe, intgre des protines, dont elle peut altrer le fonctionnement ; elle peut alors tre libre par hydrolyse acide. La BMAA peut tre bioaccumule diffrents niveaux du rseau trophique aprs ingestion et incorporation dans des protines qui fonctionnent comme un rservoir endogne de neurotoxine.

3.3.3. Les molcules effets irritants

Des toxines irritantes, produites par des cyanobactries benthiques, ont t identifies en milieu marin, dans des rgions tropicales et subtropicales. Elles ont t mises en vidence chez les genres Lyngbya (lyngbyatoxine, aplysiatoxine et dbromoaplysiatoxine), Schizothrix (dbromoaplysiatoxine et aplysiatoxine), Oscillatoria (dbromoaplysiatoxine) et Symploca (aplysiatoxine). En revanche aucune de ces toxines na t identifie en eau douce. Des lipopolysaccharides (LPS) des parois des cyanobactries sont suspects dtre lorigine deffets dirritation ou allergisants. Ces effets seraient donc susceptibles dtre observs lors de toute prolifration de cyanobactries dans les eaux douces.

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Tableau I-III : Synthse des toxines identifies en France et distribution dans les autres pays.
Toxines Hpatotoxines Microcystines MC-LR, MC-YR, MC-RR, MC-AR, MC-LF, MC-LW, MC-FR, MC-deLR, MC-deRR, MC-deLW, MC-deLF, MC-(O)Y, MC-m[Glu(OCH3)]-LR, MC-1030, 8 variants non identifis. non non Allemagne, Danemark, Finlande, Portugal, Rpublique Tchque, Rpublique Slovne, Royaume-Uni, Grce Mer baltique Allemagne, Italie Identification en France Autres pays europens

Nodularines Cylindrospermopsine Neurotoxines Anatoxine-a Homoanatoxine-a Anatoxine-a(s) Saxitoxines BMAA Molcules effets irritants Aplysiatoxines Debromoaplysiatoxines Lyngbyatoxines-a

oui oui non non Non recherche

Allemagne, Finlande, Irlande Norvge Danemark, cosse Italie, Portugal Pays-Bas, Royaume-Uni, mer baltique

Non recherche Non recherche Non recherche

Non publie Non publie Non publie

Points retenir Les toxines de cyanobactries ou cyanotoxines recouvrent une grande varit de structures chimiques et de mcanismes de toxicit. Leur(s) fonction(s) mtabolique(s) reste(nt) lucider. La prsence des cyanotoxines est signale sur tous les continents. La difficult analytique inhrente lidentification de certaines toxines masque probablement leur incidence sur le territoire franais, comme par exemple pour lanatoxine-a. Leur distribution au sein des espces et des souches est variable et non prdictible. Les effets toxiques majeurs sont la neurotoxicit et lhpatotoxicit.

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II. Dtection et quantification des cyanobactries et de leurs toxines

1. Objectifs et mise en uvre des mthodes de prlvement

1.1. Objectifs des analyses et dfinition des prlvements
Un travail didentification par des analyses qualitatives est parfaitement adquat pour obtenir des informations sur : la prsence des cyanobactries dans lchantillon ; la proportion relative de cellules quelles reprsentent dans le peuplement ; lidentification des genres prsents ; la toxicit potentielle de certains dentre eux ; la prsence de toxines. En revanche un dnombrement cellulaire ou un dosage de toxines par des analyses quantitatives est ncessaire pour connatre : le nombre dindividus ou de cellules par unit de volume deau ; la concentration en toxines par unit de volume deau. Les rsultats analytiques sont le plus souvent rapports un volume deau. Plus rarement, ils peuvent tre relis une biomasse, exprime en matire frache ou en matire sche. Il est important de se souvenir que linterprtation des rsultats dpend totalement de la nature de lchantillon (eau, cume, biomasse), de ses modalits de prlvement (dispositif fermant ou pompe pour leau, ramassage au filet, dcrochage de biofilm) du choix de la position et de la profondeur de prlvement (Leito & Cout 2005).

1.2. Nature et modalits du prlvement

Les quatre premiers instruments de prlvement prsents dans le tableau II-I (robinet sur une installation de traitement de leau, tube chantillonneur, bouteille de prlvement, pompe) procurent des chantillons deau sur lesquels il est possible de raliser des analyses qualitatives et/ou quantitatives portant sur lidentification, les numrations des microorganismes et le dosage des toxines intra et extracellulaires. Le prlvement au filet plancton (figure I Livret couleur, tableau II-I) produit un chantillon de biomasse qui peut suffire pour des analyses qualitatives. Ce type de prlvement, sil est complt par un prlvement deau permettant de rapporter les rsultats obtenus sur la biomasse un volume deau par la mesure de la masse de matire sche ou le dosage de la chlorophylle, est parfois employ pour raliser des analyses quantitatives estimatives. Cependant cette mthode introduit des erreurs et des biais : refoulement lors de la remonte du filet, colmatage, slection des genres de grande taille Avec cette mthode de prlvement, seule la concentration intracellulaire en toxines peut tre dtermine. Un prlvement deau en parallle est indispensable pour dterminer la concentration en toxines extracellulaires. Cette dernire information est importante car, en fonction de ltat physiologique des cellules de lefflorescence, en phase de croissance ou de snescence, les toxines, qui sont initialement intracellulaires, peuvent tre libres dans leau. Le prlvement devra tre ralis en perturbant le moins possible le milieu. Les genres benthiques peuvent galement faire lobjet de prlvements selon les protocoles dvelopps par les quipes de recherche travaillant sur ces organismes.

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Tableau II-I : Modalits et dispositifs de prlvements (daprs Leito & Cout 2005).
Couche deau prospecte Avantages Inconvnients Volume deau prleve Usages suivis

Source

Schma

Robinet usine Au niveau Zp correspondant la profondeur du captage 1 litre Facile et rapide chantillon identique ce qui rentre dans lusine mme point dchantillonnage que pour le contrle.

(eau brute au captage ou eau traite)

Une seule profondeur chantillonne, pas de prlvement en surface (cume). Insuffisant si distribution verticale htrogne.

Alimentation en eau potable (AEP)

Baignade Peu reprsentatif si forte htrognit verticale. Suivis cologiques (avec rserves

Tube chantillonneur Z=01m 1 litre

Assez facile si accs au bord ou barque bien reprsentatif du risque baignade adapt aux lacs peu profonds ou cours deau.

- 38 Zone euphotique (entre la surface et Zeu) 1 litre x nb de mtres de la Zeu Zone euphotique (entre la surface et Zeu) 1 litre x nb de mtres de la Zeu Zone euphotique (entre la surface et Zeu) quelques dizaines quelques centaines de litres prospects

AEP Cot de la bouteille lev chantillonnage long. Suivis cologiques

Bouteille de prlvement

Bonne reprsentation de la couche de production algale matriel robuste adapt pour les lacs profonds.

Pompe (pristaltique ou turbine)

AEP Prcision de la profondeur dchantillonnage accs aux efflorescences en profondeur. Alimentation lectrique ncessaire entretien important prcautions dusage (espace mort de tuyau). Suivis cologiques

AEP Bonne reprsentation qualitative de la zone de production algale. Baignade Suivis cologiques Entretien du filet volume deau filtre inconnu chantillonnage slectif (colmatage et refoulement) inadapt pour analyses quantitatives.

Filet phytoplancton

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1.3. Lieu et profondeur de prlvement

La principale difficult inhrente lchantillonnage des cyanobactries en milieu naturel est lie lhtrognit de leur distribution dans lespace et dans le temps. Des prolifrations semblent parfois se former subitement, tandis que dautres, trs visibles un moment donn, disparaissent brutalement. Ceci est d aussi bien aux migrations circadiennes (chapitre I, 1.2), quau cycle de vie des populations, la prdation, aux conditions climatiques, etc. Lorientation et la force des vents peuvent aussi dplacer significativement les biomasses sur un mme site. Le lieu et la profondeur dchantillonnage sont idalement dtermins en fonction des informations souhaites : valuation du danger en un point donn (au point o le danger semble maximal) ou obtention dune valeur moyenne.Les usages de leau entrent souvent en ligne de compte pour dterminer ces paramtres :baignade partir de la rive, activits nautiques sur lensemble du plan deau, prise deau en profondeur pour la production deau dalimentation, eau destine la consommation humaine distribue par rseau. Des considrations pratiques peuvent contraindre le choix du lieu et de la profondeur de prlvement en milieu naturel : accessibilit du point de prlvement souhait, disponibilit du matriel de prlvement (tableau II-1). Les prlvements effectus au robinet dune usine de potabilisation ou laide de la bouteille de prlvement sont des chantillons reprsentatifs de la qualit de leau produite ou de leau capte une certaine profondeur. En revanche les prlvements raliss au moyen dun tube chantillonneur, dune pompe pristaltique, voire dun filet plancton, peuvent fournir une information agrge sur une hauteur deau, par exemple sur la zone euphotique o se dveloppe le phytoplancton (cf. illustration tableau II-1). Avant de procder au prlvement, une reconnaissance visuelle peut tre recommande pour arrter dfinitivement le lieu de prlvement en fonction de la stratgie choisie. Une fiche de terrain permet de consigner, outre les identifiants de la station et de lchantillon proprement dit, la couleur de leau, la direction et lintensit du vent, la prsence ou non de dpts colors sur la berge, dagglomrats en suspension ou en surface, ou toute observation pertinente (prsence de poissons morts, mauvaises odeurs, ). Ceci requiert une formation adquate du prleveur. Lorsque lhtrognit de la distribution des cyanobactries devient trop vidente, il est indispensable dtablir une stratgie de prlvement statistiquement reprsentative pour obtenir une information la plus proche possible de la ralit. Ceci ncessite une bonne connaissance du site et un nombre dchantillons qui devra tre pris en compte dans les budgets prvisionnels.

1.4. Conservation et transport

Les prlvements sont placs dans des flacons de capacit 0,5 L ou 1 L prfrentiellement en verre, ce dernier matriau, bien que fragile, tant particulirement indiqu pour les dosages de toxines qui peuvent sadsorber sur les matriaux plastiques (Hyenstrand et al. 2001a, b). Pour des prlvements destins uniquement aux dnombrements cellulaires le matriau est indifferent. Les chantillons doivent tre transports dans une glacire au frais et lobscurit. Sils ne sont pas analyss immdiatement, les chantillons peuvent tre conservs au rfrigrateur jusqu 24-48 h aprs le prlvement. Il est prfrable danalyser immdiatement la fraction extracellulaire. Les chantillons destins des analyses portant sur lidentification des cyanobactries ou sur leur reprsentation dans la communaut phytoplanctonique peuvent galement tre fixs au lugol ou au formaldhyde lors du prlvement et tre conservs temprature ambiante labri de la lumire. Le formaldehyde est souvent le fixateur de choix (tableau II-II). En revanche laddition de tout fixateur est proscrire pour les chantillons destins la quantification de toxines. Si ces deux types danalyses sont souhaits, il est ncessaire de dupliquer les chantillons.

Tableau II-II : Caractristiques des fixateurs.

Conservateur Lugol 1 2 gouttes pour 100 mL dchantillon Formol (Formaldehyde) 5% dans lchantillon Avantages Faibles volumes utiliss. Trs peu onreux. Non toxique. Facilite la sdimentation. Incolore. Conservation longue dure. Peu onreux. Inconvnients Colore toutes les algues et peut rendre les observations difficiles. Ne permet pas le stockage long terme. Doit tre maintenu lobscurit. Toxique par inhalation et par contact.

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Pour les prlvements deau de distribution publique gnralement chlore, il convient de neutraliser le chlore rsiduel au moment du prlvement par un ajout de thiosulfate de sodium afin de limiter la lyse cellulaire et ne pas influencer la rpartition entre la fraction particulaire des toxines et la fraction dissoute. Il conviendra ensuite de tenir compte de cet ajout lors du choix du protocole danalyse. La conglation peut permettre de diffrer les analyses de toxines. Cependant, en raison de la rupture des cellules lors de la dconglation, le rsultat correspond la concentration totale de toxines par unit de volume prlev, sauf si les fractions intracellulaires et extracellulaires ont pralablement t spares par filtration.

2. Dtection des prolifrations, analyse des cyanobactries

2.1. Dtection des prolifrations dalgues et de cyanobactries
Lobservation directe dun hydrosystme est le moyen le plus simple de dtecter une prolifration de cyanobactries. La couleur de leau (coloration anormale ou variation de la coloration sur une priode courte, de lordre de quelques jours) et laspect de la surface (accumulation de biomasse sous forme damas ou de film en surface) peuvent signaler une prolifration phytoplanctonique, ventuellement due des cyanobactries. Une coloration rouge ou vert-bleue est souvent assez spcifique du dveloppement de cyanobactries. Cependant, des prolifrations en profondeur peuvent avoir lieu en labsence de tout changement visible dans lhydrosystme et la modification significative de couleur ne peut apparatre que trs tardivement par rapport la dynamique des prolifrations.

2.1.1. Surveillance de paramtres indirects in situ

La significativit de ces paramtres par rapport aux prolifrations phytoplanctoniques repose principalement sur lobservation dune variation du signal mesur sur une priode courte, de lordre de quelques jours, ou au cours de la journe, en lien avec la physiologie de ces organismes. Ils impliquent donc, pour tre utilisables, des mesures quotidiennes voire pluriquotidiennes. Cette contrainte est compense, pour certains paramtres, par la disponibilit de capteurs en continu. Aucun des paramtres dcrits ci-dessous ne permet une dtection spcifique des cyanobactries.

2.1.1.1. Paramtres physiques

Ce sont des outils indicateurs de modifications des cosystmes pouvant tre en relation, entre autres, avec des volutions des biomasses dalgues et de cyanobactries. Transparence Les prolifrations algales ou de cyanobactries peuvent limiter la transparence de leau, ce qui constitue un signal dalerte, en particulier sur un site ayant dj t lobjet dune prolifration de cyanobactries. La transparence de la colonne deau est mesure laide dun dispositif intitul disque de Secchi divis en secteurs blancs et noirs que lon immerge (figure J Livret couleur). La transparence est exprime par la profondeur laquelle il nest plus possible de discerner les secteurs blancs des secteurs noirs du disque. On peut parler de variation de la transparence si une diffrence de 20 30 cm est observe entre deux mesures. Cette mthode nest pas normalise, mme si loutil est largement utilis en limnologie. Demploi ais et trs conomique, cette mthode est adapte une surveillance de routine quotidienne de la transparence. Cette mesure de la transparence permet aussi dvaluer la zone euphotique dans laquelle se dveloppe le phytoplancton en multipliant la valeur mesure par 2 et constitue, de ce fait, un bon indicateur de la zone dchantillonnage. Turbidit La turbidit est base sur la mesure de la lumire rflchie par des particules en suspension dans la colonne deau et sa valeur augmente globalement en relation avec le nombre de ces particules. Celles ci peuvent tre minrales ou organiques, et constitues par des microorganismes, dont le phytoplancton. La mesure de la turbidit est ralise laide de turbidimtres selon la norme NF EN ISO 7027 et exprime en NFU (Nephelometric Formazine Unit). Il existe des turbidimtres de terrain, de paillasse ou destins la mesure en continu qui ncessitent un entretien et un nettoyage rgulier de la cellule de mesure. En raison de la forte absorption de la lumire par le phytoplancton, le signal obtenu pourrait tre faible par rapport la densit quivalente en particules solides inertes. Laugmentation de la turbidit en prsence de

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cyanobactries pourrait donc tre limite. A contrario, les phnomnes lis aux variations de lhydrologie (crue, lessivage des sols, remise en suspension des sdiments) peuvent produire, par apports de particules minrales ou organiques, un signal important de turbidit comme une diminution de la transparence sans lien avec des prolifrations de cyanobactries. Cependant, ces phnomnes sont gnralement bien identifis par les gestionnaires, par corrlation avec dautres paramtres (dbit, pluviomtrie). Compte tenu de ces interfrences possibles, et en cas de prolifration avre, cette mthode permet daider lapprciation de la rpartition en profondeur du phnomne.

2.1.1.2. Paramtres chimiques

Pour ces paramtres lis au mtabolisme basal du phytoplancton, les variations informatives sont celles qui sont observes entre le jour, o la photosynthse est active, et la nuit, o la respiration est prpondrante (figure II-1). En pratique, la mesure de la situation nocturne peut tre ralise en dbut de matine, celle de la priode photosynthtique tant ralise entre 12 h et 18 h. Ces paramtres sont indicatifs de la prsence dune prolifration, dont les effets dpassent le bruit de fond du milieu. Ils ne sont pas ncessairement assez sensibles pour identifier le dbut dune dynamique de prolifration. Oxygne Loxygne produit par les organismes photosynthtiques est un bon indicateur de lactivit mtabolique et de la quantit de biomasse prsente. Il est produit en quantit importante pendant la journe avant dtre consomm par la respiration des microorganismes, des vgtaux et des animaux aquatiques pendant la nuit. Par consquent, lamplitude des variations circadiennes de la concentration en oxygne peut donner une indication sur la prsence et limportance dune prolifration. La variable mesure est soit la concentration en oxygne exprime en mg.L-1, soit le pourcentage de la saturation en oxygne. La solubilit de loxygne dpend principalement de la temprature de leau et doit donc tre mesure sur site laide des oxymtres de terrain manuel ou en continu. Plus les oscillations journalires deviennent amples et plus la production phytoplanctonique est leve. Toutefois, elle peut tre induite par dautres organismes phytoplanctoniques que les cyanobactries. pH Dans les eaux faiblement minralises, le pH peut voluer de une parfois plus de 2 units dans la journe, en relation avec la photosynthse et la respiration de la biomasse. La grandeur informative de la prsence dune prolifration est lamplitude de sa variation circadienne. Elle dpend de lactivit photosynthtique, du pouvoir tampon de leau et de son pH naturel. Une rgle simple suggre que les variations sont significatives, dans un milieu peu tamponn, partir de 0,5 units pH pour des analyses ralises sur le terrain.

Figure II-1 : Schma de principe illustrant une variation jour-nuit de la saturation en oxygne et du pH en prsence dune prolifration phytoplanctonique (J. Duchemin, AESN).

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2.1.2. Surveillance des populations phytoplanctoniques

Il est aussi possible de surveiller des paramtres plus spcifiquement lis aux communauts des organismes photosynthtiques, voire aux cyanobactries.

2.1.2.1. Dosage de la chlorophylle a

La quantit de chlorophylle a est corrle la biomasse vivante des organismes photosynthtiques (algues et cyanobactries). Comme pour dautres paramtres, la stratgie dchantillonnage joue un rle trs important pour linterprtation et lanalyse de la situation dun site. Il existe deux mthodes normalises pour le dosage de la chlorophylle a : la spectrophotomtrie aprs extraction lactone 90 % (Afnor T90-117) et la chromatographie liquide haute performance ou CLHP (Afnor T90-116). La mesure par spectrophotomtrie peut tre pratique sur site condition de disposer dun appareillage spcifique, mais les analyses de rfrence par CLHP sont menes en laboratoire. Compte tenu de la sensibilit de ces mthodes, il est possible de les utiliser pour dtecter des prolifrations phytoplanctoniques un stade prcoce et pour suivre la dynamique de la prolifration. En revanche, la chlorophylle a nest pas spcifique des cyanobactries et leur teneur cellulaire moyenne est souvent infrieure celles des microalgues. Une diminution de la concentration de leau en chlorophylle a peut donc masquer le remplacement dune communaut algale par une prolifration de cyanobactries. Ce phnomne cologique de succession saisonnire de communauts est frquent. Il convient donc de mettre en uvre des moyens spcifiques aux cyanobactries pour complter linformation fournie par la mesure de la chlorophylle a.

2.1.2.2. Analyse de la fluorescence pigmentaire

Grce aux diffrences existant dans la composition pigmentaire des diffrents microorganismes photosynthtiques, il est possible de qualifier et de quantifier les cyanobactries par analyse de la fluorescence mise par les cellules excites par stimulation lumineuse. Deux types de sondes submersibles bases sur ce principe sont actuellement commercialises : la premire, mise sur le march en 2002, permet de distinguer les diffrentes classes de microorganismes photosynthtiques (chlorophyces, diatomes, cyanobactries, cryptophyces) par la mesure de lmission de fluorescence 680 nm, caractristique de la chlorophylle a, aprs excitation des longueurs donde spcifiques des diffrents types de pigments accessoires (Beutler et al. 2002). Linformation recueillie est traite par un logiciel qui fournit une estimation de la quantit (exprime en g.L-1 dquivalent chlorophylle a) des diffrentes classes de microorganismes photosynthtiques prsents.Ces estimations sont prsentes sous la forme dun profil vertical de distribution dans la colonne deau puisque la sonde est aussi quipe dun capteur de pression (et galement dun capteur de temprature). Les avantages, mais aussi les limites de cette sonde, ont fait lobjet de deux publications rcentes (Leboulanger et al. 2002, Gregor & Marsalek 2004) ; la seconde, mise sur le march en 2004, est ddie aux cyanobactries puisquelle repose uniquement sur lexcitation de la phycocyanine qui est le pigment bleu des cyanobactries. Ses rsultats sont exprims en g.L-1 de phycocyanine. lheure actuelle, aucune tude publie ne permet de connatre les avantages et les limites de cet outil. Ces mthodes, qui sont encore en cours de validation, sont prometteuses car elles pourraient permettre terme de saffranchir des difficults actuelles rencontres pour le suivi des cyanobactries. En effet, la diffrence des comptages au microscope, lestimation de la quantit et de la distribution dans la colonne deau des cyanobactries est trs rapide (quelques minutes) ce qui autorise un suivi en plusieurs points dun plan deau lorsque cela est ncessaire (distribution non homogne des cyanobactries). Enfin ces mthodologies peuvent tre utilises pour le suivi des cyanobactries benthiques dont lchantillonnage tait jusquici trs difficile raliser. Des dispositifs similaires bass sur lanalyse pigmentaire sont aussi actuellement dvelopps sous la forme de stations fixes plus adaptes au suivi de la qualit des eaux en entre dusine de traitement des eaux dalimentation (Beutler et al. 2002, Paresys et al. 2005).

2.1.3. Dtection distance

Les cellules algales absorbent certaines longueurs dondes en rponse lexcitation par la lumire solaire. Certains satellites dobservation (SeaWIFS, Envisat) sont quips de dispositifs denregistrement des ondes mises la surface de la terre et restituent des images dont des processus de traitement adapts extraient des

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informations quantitatives sur les formations vgtales ariennes ou aquatiques. Lanalyse de sries temporelles dimages peut permettre la dtection des prolifrations superficielles. Le problme principal est la rsolution (1,1 4,5 km pour SeaWIFS) qui fait que ces dispositifs sont destins valuer des aires tendues : milieu marin ou grands lacs. Avec lvolution des technologies, les images pourraient servir la quantification prcoce des prolifrations, mais sous rserve dune organisation de lachat des images et de leur traitement, inenvisageable au niveau dun site particulier.

2.2. Identification et quantification des cyanobactries dans les eaux

Toutes les prolifrations phytoplanctoniques ne constituent pas un danger pour la sant, ce qui implique une analyse dtaille du risque sanitaire pour chaque situation. quelques exceptions prs, qui sont signales, les mthodes prsentes ci-dessous sont pratiques en laboratoire et imposent donc de recourir des prlvements.

2.2.1. Identification des cyanobactries 2.2.1.1. Observation microscopique sans quantification

Lobservation au microscope optique dun chantillon deau conduit lidentification taxonomique des diffrentes classes de microalgues prsentes ainsi que des cyanobactries. Comme pour les mthodes suivantes, les performances sont conditionnes notamment par le type et la qualit de lchantillonnage et par la conservation du prlvement. Un grossissement de 200 x 1000 x permet de distinguer la plupart des cyanobactries des autres constituants du phytoplancton. Il nexiste pas de mthode normalise. Cette dtermination taxonomique est ralise par des phycologues ou des techniciens forms cette analyse. Si la dtermination au niveau du genre est relativement aise et peut tre mise en oeuvre en routine aprs formation, celle au niveau de lespce, base sur des critres morphologiques, reste lapanage de spcialistes. De plus, la dtermination au niveau de lespce est actuellement remise en cause par les approches molculaires qui vont sans doute profondment modifier la taxonomie des cyanobactries dans les prochaines annes. La dtermination du genre est essentielle pour identifier une toxicit potentielle tout en sachant que celle-ci pourra varier de faon trs importante en fonction du gnotype et donc des souches. La formation initiale du personnel charg de lidentification doit tre ralise par des experts.

2.2.1.2. Mthodes en dveloppement

Les progrs accomplis en biologie molculaire ont permis le dveloppement de mthodes bases sur des sondes oligonuclotidiques spcifiques dun genre ou dun gne et permettant de dtecter au sein dun mlange de populations la cible recherche. Ces mthodes sont en dveloppement et doivent mettre en uvre des protocoles permettant dviter les interfrences sur les signaux comme par exemple lauto-fluorescence des cellules ou les effets inhibiteurs des matrices aqueuses. Les mises en uvre se font : par hybridation in situ directement dans la cellule bactrienne. La spcificit des sondes permet didentifier, dans un chantillon naturel ou un tapis bactrien, des cyanobactries appartenant aux genres viss par les sondes. Cet outil peut donc permettre de dtecter la prsence de genres potentiellement toxiques dans une efflorescence (Schnhuber et al. 1999) ; par amplification par la mthode PCR afin de dtecter dans un chantillon deau des cellules de genres potentiellement toxiques. En association lidentification du genre, la prsence des gnes responsables de la synthse des microcystines peut aussi tre recherche et ainsi donner une indication sur le potentiel toxique des cyanobactries prsentes. Des travaux portant sur lutilisation de la mthode PCR en temps rel ont montr que cette technique permet une approche semi-quantitative en valuant le nombre de gnomes pour un genre donn de cyanobactries. La proportion du gnotype toxique au sein de la population peut galement tre value grce cette approche (Kurmayer & Kutzenberger 2003, Vaitomaa et al. 2003) ; par lusage de puces ADN. Le greffage sur supports solides doligonuclotides spcifiques des principales espces ou principaux genres de cyanobactries a permis le dveloppement rcent de puces ADN qui permettent de dtecter les espces ou genres prsents et de procder une semi-quantification (Castiglioni et al. 2004).

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2.2.2. Dnombrement cellulaire et quantification de la biomasse

Une fois la prsence de cyanobactries potentiellement toxiques avre, la quantification de la biomasse de cyanobactries peut permettre dvaluer limportance de la prolifration et de sa toxicit potentielle. Elle se situe en amont ou en complment la recherche de toxines. Si la quantification porte sur tout le phytoplancton, elle informe galement sur la dynamique de la prolifration des cyanobactries (minoritaire, dominante). La quantification de la biomasse de cyanobactries peut tre exprime par diffrentes units selon la mthode retenue.

2.2.2.1. Dnombrement de cellules, de colonies ou de filaments

Le dnombrement est ralis par observation en microscopie optique dun chantillon deau de volume connu, qui peut avoir fait lobjet dune pr-concentration ou dune dilution. Le nombre de cellules, colonies, filaments ou trichomes de chaque genre ou espce est dtermin. Pour les cyanobactries filamenteuses, le comptage peut se faire en nombre de filaments, et pour les coloniales, en nombre de colonies par millilitre. Les recommandations sanitaires internationales font rfrence des concentrations exprimes en cellules par millilitre. Lincertitude de la numration dpend du nombre dobjets compts (cellules ou colonies). Elle est, pour des spcialistes forms et entrans, de lordre de 20 % pour une centaine dunits dnombres et de respectivement 10 % et 5 % pour 400 et 1600 units dnombres. Dans une premire approximation, lerreur relative est considre comme inversement proportionnelle la racine carre du nombre dobjets compts. Les protocoles opratoires peuvent varier selon les laboratoires et il existe plusieurs mthodes de dnombrement. En cours de normalisation par le CEN (CEN TC 230/WG 2/TG 3/N73 Water quality Guidance standard for the routine analysis of phytoplankton abundance and composition using inverted microscopy (Utermhl technique) ), le comptage par la technique de Utermhl (1958) est ralis avec un microscope invers et des cuves de sdimentation fond transparent de volume variable (Sournia 1978). La sdimentation peut prendre quelques heures une journe. Le comptage par microscopie directe sur des cellules de numration de Malassez (1 L), Nageotte (50 L) ou Neubauer (60 L). Ces dernires sont prfrables la premire en raison de leur plus grand volume. Cette mthode est rapide car elle ne ncessite pas dattendre la sdimentation des cellules. Ces deux mthodes considres comme pouvant tre employes en routine sont trs chronophages en fonction de la prcision requise et du nombre despces diffrencier. Il leur est souvent reproch de ne pas prendre en compte la variabilit de la taille des cellules entre espces. Des procdures de comptage rapide sont souvent dveloppes rgionalement dans le cadre de programmes de surveillance. Elles sont adaptes en fonction des caractristiques des efflorescences locales (prvalence dun taxon ou grande diversit spcifique, espce filamenteuse ou coccode, formant colonies ou compose de filaments ou de cellules distinctes). Le dnombrement permet dvaluer la part des cyanobactries dans le peuplement phytoplanctonique, tout en identifiant la prsence de genres potentiellement producteurs de cyanotoxines.

2.2.2.2. Comptage par utilisation de la cytomtrie en flux

Le cytomtre en flux est un appareil qui permet de compter des cellules individuelles entranes dans un flux liquide. Ces cellules traites par un colorant fluorescent et alignes les unes derrire les autres dans ce flux sont excites par une source lumineuse, un laser en gnral. Elles mettent alors des signaux de fluorescence qui sont capts par un dtecteur, permettant ainsi lobtention dinformations sur leur nombre (que lon peut rapporter un volume) mais aussi sur certains paramtres physiologiques (contenu en ADN par exemple). Cette technique est dj couramment utilise pour le dnombrement des picocyanobactries en milieu marin. Elle est en cours de dveloppement pour lensemble des cyanobactries des eaux douces. Son avantage principal rside dans lobtention, en quelques secondes et avec une trs grande prcision, dun dnombrement cellulaire. Cependant cette technique nest pas actuellement adapte aux cyanobactries organises en trichomes, en filaments ou en colonies.

2.2.2.3. Dosage de la chlorophylle a

Le principe et les caractristiques de la mthode sont identiques celles prsentes au 2.1.2.1 et ne prsente pas de spcificit vis--vis des cyanobactries sauf si lobservation microscopique pralable a rvl que la communaut phytoplanctonique tait domine significativement par des cyanobactries.

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Cette mthode rapide et simple, lorsque la mesure est ralise par spectrophotomtrie, entrane une surestimation de la biomasse de cyanobactries, si dautres populations phytoplanctoniques sont prsentes en proportion notable. Certains travaux ont essay de proposer des correspondances entre la concentration en chlorophylle a et le nombre cellules pour diffrentes espces dintrt, afin de faciliter lapplication des seuils de gestion proposs par lOMS (SEHD 2002). Lquivalence de 10 g.L-1 de chlorophylle a pour 20 000 cellules de cyanobactries par mL est souvent avance mais pour lOuest de la France aprs suivi de 26 sites et de plus de 300 chantillons durant presque six mois en 2002, la relation semble davantage tre de 30-40 g.L-1 de chlorophylle a pour 20 000 cyanobactries par mL (DGS et al. 2004). Le rapport entre chlorophylle a et phaeophytine a donne des indications sur ltat physiologique des algues de lefflorescence ou de la qualit de la conservation de lchantillon : un taux important de phaeophytine a traduit une snescence, donc un relargage potentiel de toxines ou une mauvaise conservation de lchantillon.

2.2.2.4. Mesure de la masse de matire sche

La grandeur mesure est la masse de lchantillon aprs lyophilisation, rapporte au volume initial de lchantillon. Cette mthode est assez sensible mais elle ne permet pas destimer le peuplement de cyanobactries si dautres classes de phytoplancton sont reprsentes dans la prolifration ou si lchantillon comprend beaucoup de matires minrales en suspension. Sur culture pure en laboratoire, la concentration en toxines est mieux corrle avec la masse de matire sche dun chantillon quavec le nombre de cellules. Outre le biais li la composition spcifique de lchantillon, lincertitude lie aux particules minrales ou organiques prsentes dans lchantillon deau attnue encore lintrt de cette mthode globale par rapport au dosage de la chlorophylle a par exemple. Cette mthode est plutt utilise dans le domaine de la recherche. Deux mthodes normalises peuvent tre utilises pour procder ces mesures.

2.2.2.5. Calcul du biovolume

Le biovolume est calcul par estimation du volume cellulaire moyen pour chaque espce de lchantillon et multiplication par le nombre de cellules par unit de volume. Chaque cellule est assimile une forme gomtrique simple, cylindre, sphre (Lund & Talling 1957, Lund et al. 1958, Osmera 1966, Rott 1981). Cette mthode nest pas normalise. Elle exige beaucoup de temps et de prcision dans les mesures, et reste plutt voue au domaine de la recherche. Il sagit destimer pour chaque espce de lchantillon le volume cellulaire associ, afin de saffranchir du biais de la concentration cellulaire qui nintgre pas la diffrence de taille des cellules selon les espces. Le biovolume est assimil une masse de matire frache, en considrant que ces organismes ont la mme densit que leau.

2.2.3. tude de lintgrit des cellules

Cette mthode, qui nest pas normalise et dont les applications sont plutt du domaine de la recherche, peut permettre dvaluer leffet dun traitement sur ltat physiologique des cellules et ainsi dvaluer le potentiel de relargage de toxines intracellulaires. Lintgrit de la paroi des cyanobactries peut tre value par des techniques de fluorescence. Les cellules dont les membranes cellulaires sont intactes sont colores par le diactate de fluorescine, tandis que les cellules dont les membranes sont endommages prennent la coloration de liodure de propidium (Drikas et al. 2001a). La capacit de ces mthodes fournir diffrentes informations est rsume dans le tableau II-III.

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Tableau II-III : Aptitude des mthodes disponibles fournir diffrentes informations. +/ signifie : imparfaitement adapt, +: parfaitement adapt, : inadapt.
Mthodes Observation visuelle Transparence Turbidit Dosage O2 (variation jour/nuit) Dosage pH (variation jour/nuit) Sonde fluorimtrique Observation microscopique Dosage de Chl a Dtection des prolifrations +/ +/ +/ +/ + + + Dtection des cyanobactries +/ (avec exprience) + + Identification des genres Quantification des Mthode normalise cyanobactries toxinognes + + +/ +/ (si classe dominante) non non oui oui oui non en cours oui

Points retenir La grande variabilit temporelle et spatiale des efflorescences de cyanobactries ncessite que les stratgies et les techniques de prlvement soient dtermines avec rigueur pour que les rsultats soient interprtables. En routine, seule lobservation microscopique par un personnel entran permet la dtermination spcifique et la numration des cyanobactries. Les mthodes sont en cours de normalisation par le CEN. Les mthodes non spcifiques peuvent tre des indicateurs utilisables pour le dpistage et pour laide la surveillance des prolifrations de cyanobactries. Lhistorique des suivis phytoplanctoniques sur plusieurs annes permet de hirarchiser les sites risques.

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3. Dtection et analyse des cyanotoxines

3.1. Prparation de lchantillon
Il existe une gamme tendue de mthodes utilises en laboratoire pour dtecter, identifier et quantifier les cyanotoxines dans leau, dans la biomasse algale ou dans les denres alimentaires. Avant toute mesure de lanalyte, il faut procder la prparation de lchantillon pour obtenir un dosage fiable. Cest au niveau des tapes de prparation mais surtout dextraction et de purification que les diffrences de protocole entre lanalyse des diverses matont les plus importantes.

Figure II-2 : Stratgie analytique suivie pour lanalyse des cyanotoxines dans leau et les denres alimentaires, de la collecte de lchantillon au rapport dessai.

PRLVEMENT CHANTILLON Eau Biomasse algale Denres ou cume alimentaires PRPARATION

EXTRACTION

PURIFICATION Bio-essais Mthodes immunologiques Mthodes fonctionnelles Mthodes physico-chimiques PRPARATION

criblage confirmation

MESURE

RAPPORT DESSAI

La prparation dun chantillon deau brute comprend en particulier la sparation des fractions solide et liquide. Cette sparation est indispensable pour distinguer les toxines intracellulaires, lies la fraction solide, des toxines extracellulaires, en solution dans le milieu (fraction liquide). La concentration totale de toxines par unit de volume peut tre obtenue par la somme de ces rsultats, si lchantillon permet des analyses quantitatives. Dans le cas dun chantillon prlev au filet ou dun chantillon dcume, la concentration en toxines doit tre rapporte la biomasse sche.

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3.2. Extraction et purification des toxines

Les chantillons doivent tre prpars de faon optimiser lextraction des toxines tout en limitant lextraction concomitante de matires organiques susceptibles dinterfrer avec les toxines.

3.2.1. Toxines dissoutes dans les eaux

Lextraction et la concentration, partir dchantillons deau filtre, des toxines dont la polarit est nulle (hydrophobes) importante (hydrophile) repose le plus souvent sur une technique liquide-solide sur cartouche avec diffrents supports dadsorption selon la nature des toxines. Ainsi, la silice greffe n-octadcyle (C18) est ladsorbant le plus utilis pour les cyanotoxines hydrophobes modrment hydrophiles. Elle convient parfaitement pour lextraction des microcystines. En revanche, elle est inutilisable pour les toxines les plus polaires (anatoxine-a, cylindrospermopsine, saxitoxines). Lextraction de lanatoxine-a repose sur lemploi de cartouches remplies de copolymres de styrne divinylbenzne apolaires et de N-vinylpyrrolidone qui prsentent un spectre dextraction beaucoup plus large et qui sont galement adaptes lextraction des toxines polaires, cylindrospermopsine et saxitoxines.

3.2.1. Biomasse de cyanobactries 3.2.1.1. Extraction

Lextraction est pratique sur la fraction solide de lchantillon pralablement spare par filtration sur un support de maille de 1 2 m. Elle est ralise par un solvant ou un mlange de solvants directement sur le matriel ainsi isol, conformment la dernire version du projet de norme ISO/FDIS 20179, ou aprs lyophilisation. Le choix dun solvant acidifi permet de limiter la co-extraction de protines cellulaires (Harada et al. 1994). Lefficacit de ces approches dpend bien videmment de la matrice concerne et du type de cyanotoxine vis. Ainsi, lacide actique savre plus efficace pour les microcystines les plus polaires, mais trs mdiocre pour les plus hydrophobes dentre elles (Lawton et al. 1994b). Le mthanol savre tre un solvant bien adapt, car il prsente lavantage de combiner un bon rendement dextraction et une moindre difficult dvaporation. Cependant, utilis seul, il ne permet quun mdiocre recouvrement des microcystines trs polaires. Les connaissances acquises pour les microcystines soulignent quil est indispensable de recourir des extractions successives avec des solvants de polarits diffrentes pour toute famille de toxines dont les diffrents analogues sont de polarit variable. Il a aussi t montr que lextraction partir dun lyophilisat ncessite la prsence deau dans le solvant dextraction (Fastner et al. 1998). titre dexemple, pour les microcystines, lextraction est ralise trois fois par un volume de mlange mthanoleau (75-25 V/V). Les trois extraits sont rassembls dans un mme rcipient qui est soumis sonication sur de la glace. Lextrait sera ensuite purifi sur cartouche.

Tableau II-IV : Exemples de solvants utiliss pour lextraction des diffrentes cyanotoxines.
Toxines Solvants dextraction Rfrences ou expertise des membres du groupe Projet de norme ISO/FDIS 20179 (Harada et al. 1994, Eaglesham et al. 1999) (Hawkins et al. 1997) Robillot & Hennion, 2001

Microcystines Mthanol - eau Cylindrospermopsine Mthanol pur Solution dacide actique 5% Milieux aqueux, acidifis ou non Anatoxine-a (0,05 M acide actique par exemple) Mlange eau - mthanol Acide actique Saxitoxines Solution acide (pH 3) avec 25% de mthanol

(Carmichael et al. 1997)

Il est important de noter quen dehors des microcystines les solvants indiqus sont issus de travaux de recherche qui nont pas t mis lpreuve de validations.

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3.2.1.2. Purification des extraits

Les procdures de purification des extraits sappuient couramment sur lextraction sur phase solide (SPE) gnralement en phase inverse sur support C18. titre dexemple, pour les microcystines, lextrait est dpos sur une cartouche de rsine C18 pralablement conditionne, le flacon contenant lextrait est rinc par du mlange mthanol-eau ensuite dpos sur la cartouche. Pour liminer les matires organiques non retenues, la cartouche est lave par quelques ml de mlange mthanol-eau (20-80 V/V). Les microcystines retenues sont alors lues par un mlange mthanol/eau (90-10 V/V) acidifi par 0,1 % dacide formique. Lluat est vapor sous azote puis dissout dans 50 l dun mlange mthanol/eau (20/80 V/V) avant dtre mis en flacons danalyse. Lextrait est prt pour lanalyse par chromatographie.

3.2.3. Cas des matrices complexes : poissons, lgumes et complments alimentaires 3.2.3.1. Extraction
Dans les matrices complexes comme le poisson, le problme est de raliser une extraction complte des toxines tout en minimisant la co-extraction dinterfrences comme des protines cellulaires, de la matire grasse, et plus particulirement les phospholipides, qui pourraient perturber ultrieurement lanalyse par chromatographie. Dans le cas des microcystines, diffrents solvants dextraction similaires ceux utiliss pour la biomasse des cyanobactries ont t tests. Comme pour lextraction de la biomasse des cyanobactries, les mlanges mthanol-eau peuvent varier majoritairement du solvant pur (Zurawell et al. 1999, Magalhaes et al. 2003) au mthanol 75 % dans leau (Lawrence & Menard 2001). Le mlange mthanol-eau (75-25 V/V) retenu par le projet de norme ISO/FDIS 20179 prsente lavantage dextraire la fois les microcystines hydrophobes et les microcystines les plus polaires. Quel que soit le solvant, lextraction des toxines reste cependant incomplte. En effet, les microcystines sont majoritairement lies de faon covalente aux protines phosphatases de la matrice. Seule la fraction libre des microcystines peut donc tre extraite. Cette fraction est estime 24 % de la teneur totale dans le cas du foie de poisson et peut mme descendre jusqu 0,1 % lors dessais sur des larves de crabes (Williams et al. 1997). ce jour, seule loxydation de Lemieux, qui rompt les molcules de microcystines et dgage le groupement ADDA qui est ensuite dos par CG-SM, permet dextraire totalement les microcystines. Cependant cette mthode est fastidieuse et ne peut raisonnablement pas tre envisage comme une mthode de routine (Williams et al. 1997). Une autre technique est dcrite par Robinson et al. (1991) pour rompre la liaison covalente des microcystines. Il sagit dune dnaturation thermique suivie dune digestion par de la pronase, une protase hydrolysant pratiquement nimporte quelle liaison peptidique liant deux acides amins en configuration L. ce stade les microcystines sont quasiment les seules cyanotoxines avoir fait lobjet dtudes dans les poissons et les mthodes actuelles ne permettent pas dobtenir un dosage fiable.

3.2.3.2. Purification
Si une tape de purification sur SPE C18 peut savrer suffisante sur des chantillons deau, elle est insuffisante sur la plupart des matrices biologiques solides. Cest pourquoi une seconde SPE doit tre applique avec une sparation complmentaire, soit par change dions, soit en phase normale ou autre. Pour cela des phases stationnaires de silice pure sont souvent utilises (Tsuji et al. 1994, Tsuji et al. 1996). Mais ces cartouches SPE usage unique, de cot modr, restent de spcificit modeste, tout particulirement lorsquelles sont compares des techniques dimmunoaffinit. Des exemples de production danticorps monoclonaux dirigs contre la microcystine-LR (Kondo et al. 1996) ont t rapports. La purification rsultante des microcystines et de leurs mtabolites, mme sur des matrices trs complexes (foie de souris et de rat), est dune efficacit remarquable (Kondo et al. 2002, Aranda-Rodriguez et al. 2003). Le principal inconvnient de la purification par immunoaffinit reste la spcificit de ces colonnes, labsence de disponibilit commerciale, leur cot lorsquelles existent et le risque de contamination croise inter-chantillons, la cartouche tant utilise plusieurs dizaines de fois.

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3.3. Identification et dosage des toxines

3.3.1. Mthodes physico-chimiques
Microcystines En raison de leurs masses molaires et de leurs structures chimiques, la sparation des microcystines se fait par chromatographie liquide sur des colonnes en phase inverse de type C18. Llution est ralise au moyen dune phase mobile actonitrile-eau acidifie 0,5 % en TFA ou acide formique. La dtection peut tre ralise par spectrophotomtrie UV. Lidentification des diffrentes microcystines sappuie essentiellement sur le temps de rtention de ces analytes dans la colonne chromatographique, leurs spectres UV tant presque parfaitement superposables. Cette identification nest possible que lorsque des talons de rfrence sont accessibles. La dtermination prcise de la composition et de la nature de ces toxines dans les chantillons analyss nest donc pas toujours possible avec ce type de dtecteur. Afin de se soustraire aux interfrences de dtection toujours possibles dans les matrices complexes, il est recommand dutiliser une dtection par la spectromtrie de masse qui offre une garantie didentification et qui permet de mettre en vidence la prsence des diffrentes toxines partir de leurs ions caractristiques. Dans leau, les appareils danalyse actuellement disponibles permettent datteindre des seuils de quantification de lordre 0,1 0,2 g.L-1 en MC-LR lorsque lextraction porte sur un chantillon de 0,5 L au minimum. Cylindrospermopsine (CYN) Ce compos polaire est faiblement retenu sur la silice greffe nC18 mais peut tout de mme tre spar par chromatographie de partage polarit de phase inverse, avec dtection UV. Le spectre dabsorption est maximum 262 nm. Codd et al. (2001) ont pu mettre en vidence la prsence de CYN, dans des cours deau o du btail stait intoxiqu, par couplage CLHP/SM-SM. La limite de dtection pour une eau brute est approximativement de 3 g de CYN.L-1. Anatoxines La sparation est ralise par CLHP en phase inverse sur une colonne de silice greffe C18 et une phase mobile isocratique contenant une faible proportion dactonitrile ou de mthanol, avec une dtection UV 227 nm. Les dtections par fluorescence ou spectromtrie de masse aprs drivation de lanatoxine-a permettent daugmenter la sensibilit. La drivation peut tre ralise par diffrents ractifs (Codd et al. 2001, Robillot & Hennion 2001). Araoz et al. (2005) proposent une mthode couplant CPG et SM sans drivation. Il nexiste pas dtalon commercial. Saxitoxines (Frmy et al. 2001) La sparation des variants de cette famille de toxines est ralise par CLHP avec appariement dions et la dtection est principalement ralise par fluorescence. La dtection par spectromtrie de masse pose des difficults techniques de dsolvatation et ne sest pas rvle trs efficace jusqu prsent. Une drivation pr ou post-colonne est ralise pour rendre les saxitoxines fluorescentes car ces molcules ne fluorescent pas naturellement. Sur la vingtaine danalogues identifis, un peu moins dune dizaine dtalons sont disponibles commercialement. Plusieurs mthodes de drivation pr-colonne ont t mises au point dont celle de Lawrence & Niedzwiadek (2001). Cette mthode permet une bonne sparation des diffrents variants, lexception des pimres, sur une colonne de type silice greffe C18 associe un gradient dlution. Cette mthode est en cours de validation par lAOAC. Elle permet lobtention de profils trs dtaills mais est trs chronophage. Diffrentes mthodes trs couramment employes font appel au principe de drivation en ligne post-colonne : la mthode de Sullivan & Wekell (1987) utilise une colonne base de polystyrne divinyl-benzne et un gradient dlution binaire. La mthode dOshima (1995) fait appel une colonne de polarit de phase inverse greffe C8 et trois solutions isocratiques de caractristiques physico-chimiques (composition, pH, temprature du racteur post-colonne) diffrentes pour une sparation complte. Cette dernire mthode est la plus utilise car cest elle qui apporte le meilleur compromis entre apport dinformation et temps danalyse.

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 BMAA Les principales mthodes danalyse de la BMAA (-N-methyl-amino-L-alanine) ayant permis dobtenir des donnes de contamination dans diffrentes matrices sont les suivantes : celle de lquipe de Cox et Murch (2003, 2004, 2005) a t utilise pour lanalyse de la BMAA sous sa forme libre et sous sa forme lie aux protines dans des cyanobactries, des cycades (parties vgtales et farine), des roussettes (chauve-souris de lle de Guam) et des cerveaux humains. La quantification de la BMAA totale ncessite une premire tape pour extraire la BMAA libre laide dune solution acide. La BMAA lie est extraite par hydrolyse acide chaud puis purifie sur SPE. Les BMAA (libre et lie) sont ensuite drives pour tre dtectables par fluorescence aprs une sparation CLHP en phase inverse. Lidentification du pic de BMAA peut tre ralise par comparaison avec un talon commercial ou par couplage chromatographie liquide/ spectromtrie de masse. Il conviendrait nanmoins de vrifier que cette mthode donne des rsultats satisfaisants pour lensemble des matrices pour lesquelles elle a t utilise (vgtaux bruts, prlvements humains, aliments et animaux). Afin de garantir les rsultats, il serait notamment ncessaire de dterminer des taux de rcupration de la BMAA qui ne sont pas indiqus dans les travaux publis ; celle de lquipe de Duncan (Duncan et al. 1989, Duncan et al. 1990, Duncan et al. 1992) pour lanalyse des aliments (dont graines et farines de cycades), des tissus et des fluides biologiques (dont lurine) est base sur une analyse par chromatographie gazeuse couple la spectromtrie de masse (CG-SM). La BMAA est extraite de la matrice par une solution acide, puis trans-esterifie et r-extraite par du dichloromthane. La BMAA est ensuite quantifie par CG-SM aprs drivation de lextrait. Cette mthode utilise une extraction plus douce que lextraction de la mthode de Cox. Il est raisonnable de penser que, dans ce cas, seule la fraction libre de la BMAA est extraite. Il serait ncessaire de le confirmer ; dautres mthodes sont disponibles dans la littrature mais nont pas donn lieu des tudes rptes. Comme celle de lquipe de Duncan, elles sont bases sur une analyse CG-SM (Wang et al. 1989, Charlton et al. 1992). Molcules effets irritants Il nexiste pas de cible analytique prcise. Dans la troisime dition des Guidelines for drinking-water quality , LOMS apporte des lments sur les limites de dtection attendues par diffrentes techniques (tableau II-V).

Tableau II-V : Limites de dtection par diffrentes techniques (OMS 2004)

Technique CLHP Limite de dtection 0,1-1 g.L-1 Mthode associe Extraction des cellules par mthanol aqueux 75 % ou concentration des microcystines dissoutes sur cartouches C18 Microcystines dissoutes ou extraites des cellules par extraction aqueuse Microcystines dissoutes ou extraites des cellules par extraction aqueuse Commentaire Possibilit de distinguer les variants quand les talons sont disponibles

Immuno-essais (ELISA)

0,1-0,5 g.L-1

Utile pour le criblage mais la quantification est moins prcise que la CLHP Utile pour le criblage mais la quantification est moins prcise que la CLHP

PP2a

0,5-1,5 g.L-1

Le tableau II-VI propose une comparaison des mthodes de dtection des microcystines et des nodularines base sur les revues analytiques de Botana (2000) et de Robillot et Hennion (2001). La combinaison de la chromatographie liquide (HILIC : Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography) avec la spectromtrie de masse permet la dtection et le dosage dun ensemble particulirement intressant de toxines dont les saxitoxines, lanatoxine-a (ATX-a), la cylindrospermopsine (CYN), la dsoxycylindrospermopsine (doCYN) et les microcystines -LR et -RR (DellAversano et al. 2004).

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Tableau II-VI : Comparaison des mthodes de dtection des microcystines et des nodularines.
Mthodes et techniques Bioessai sur souris Avantages Dtection de toutes les substances actives. Effet physiologique Dtermination DL50 Slectivit Profil toxinique normalisation en cours pour UV et SM Grande slectivit Identification des toxines Inconvnients Manque de sensibilit et de slectivit Limite de dtection indicative non prcis Application En labsence dinformation disponible et si risque pour la sant publique

Mthodes CLHP

Pr-concentration, purification ncessaires, cot des quipements 10-100 ng.L-1 Routine Confirmation Routine possible sur les matrices valides Routine possible sur les matrices valides Recherche

CLHP/SM

CLHP/Fluorimtrie CLHP / UV-DAD Identification partielle des toxines grce aux spectres Slectivit, mthode la plus sensible

Identification moins sre 50-100 ng.L-1 que par la SM Identification moins sre 20-50 ng.L-1 que par la SM Cot lev, mthode laborieuse, pas didentification des toxines Manque de slectivit, pas didentification des toxines 20 ng.L-1

Test phosphatase radiomtrique

Tests phosphatase colorimtrique fluorimtrique Oxydation de Lemieux/CG/ SM

Sensibilit adapte

100-200 ng.L-1

Routine si kit commercial valid Recherche

Spcifique des microcystines et des nodularines

Prconcentration requise 10 g.g-1 de foie de poisson Fastidieuse, cot des quipements Dtection des variantes non ou peu toxiques Dtection des variantes non ou peu toxiques Dtection de 1 quelques variants : ractivit croise connatre 50-150 ng.L-1

Immuno-essai

Spcifique des microcystines et des nodularines

Routine si kit commercial valid et ractivit croise connue

3.3.2. Mthodes immunologiques ou immunoessais

Ces mthodes sont bases sur le principe de la reconnaissance de motifs structuraux spcifiques de certaines toxines ou familles de toxines par des anticorps. Elles sont en gnral dveloppes sous la forme dessai ELISA, mettant en uvre des anticorps poly- ou monoclonaux dirigs contre une toxine. Hpatotoxines Pour les microcystines et pour un dosage dans leau, plusieurs kits ELISA sont commercialiss et leur domaine de linarit est compris entre 0,5 et 5 g quivalents MC-LR.L-1 selon les kits. La ractivit croise avec dautres microcystines ou la nodularine varie selon les tests, sans relation systmatique avec la toxicit relle des variants. La limite de quantification dans les eaux de surface et les eaux potables se situe 0,2 g q. MC-LR L-1 (Robillot & Hennion 2001). Ces kits utilisent des anticorps polyclonaux dont la spcificit nest pas dfinie et les rsultats sont sensibles aux interfrences rsultant deffets de matrice : concentration en mthanol, salinit, pH des chantillons (Metcalf et al. 2000b). Ils sont destins la dtection de toxines dissoutes dans leau et des prcautions doivent tre prises en cas dutilisation sur des extraits cellulaires et des matrices complexes pour viter les faux positifs. Leur utilisation pour la surveillance ou la pralerte est envisageable, condition que leurs performances fassent lobjet dune validation pralable. Leur extension la surveillance de sites suppose de connatre le profil toxinique des efflorescences locales et la ractivit croise des diffrents variants.

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 Neurotoxines Des anticorps poly- et monoclonaux anti-saxitoxine ont t dvelopps et un kit Elisa a t commercialis pour doser les toxines paralysantes dans les coquillages. Ce kit ne permet pas de doser la nosaxitoxine en raison dune faible ractivit croise avec cette toxine, comme avec dautres variants. En effet, la famille des saxitoxines compte plus de 20 variants et il est difficile den avoir une bonne reconnaissance immunologique complte. Dans le cas des coquillages, les problmes de spcificit rajoutent lincertitude de la mesure conduisant des risques de faux positifs. Sous conditions de connatre le profil des toxines prsentes localement, cela pourrait constituer un outil de dpistage efficace. Un nouveau kit saxitoxines existe sur le march mais na pas encore t caractris par un organisme indpendant.

3.4. Dtection de la toxicit

Dans un hydrosystme affect de faon apparemment continue par un dveloppement de phytoplancton peuvent en ralit se succder des efflorescences domines par diffrentes cyanobactries, susceptibles de produire au cours du temps une grande varit de profils toxiniques. Les connaissances acquises sur lefflorescence (espce, historique du site) sont importantes et orientent le choix des tests mettre en uvre pour valuer lactivit toxique de lchantillon extrait. Plusieurs mthodes biologiques de dtection ont t dveloppes pour les cyanotoxines qui sappuient sur le caractre toxique et la (les) cible(s) de ces toxines, tels leurs caractres hpatotoxique, neurotoxique, ou encore cytotoxique. Les tests de toxicit aigu par nature ne rpondent que pour des valeurs critiques et ne sont pas trs spcifiques.

Figure II-3 : Spcificit et sensibilit compares des principales techniques utilises pour la mesure des cyanotoxines. Lchelle des sensibilits sur laxe des abscisses place son extrmit haute la spectromtrie de masse en particulier en tandem (SM/SM) ou haute rsolution (HRSM). Lchelle des spcificits sur laxe des ordonnes spare nettement la spectromtrie de masse ou la RMN, et les techniques non spcifiques telles que le bio-essai souris ou encore la CCM.

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3.4.1. Essais in vivo (Chorus & Bartram 1999)

En recherche, les bioessais sur vertbrs sont utiliss pour identifier les organes cibles de la toxine en vue de la comprhension de son mcanisme daction. En surveillance ils pourraient tre utiliss pour identifier le caractre toxique dun chantillon et prciser le type de toxicit, hpatotoxicit ou neurotoxicit. Les bioessais sur animaux, non spcifiques dun type de toxine, sont utiliss pour objectiver la toxicit globale dune efflorescence. Ils reposent tous sur linjection ou le contact direct dun animal avec un extrait obtenu partir de biomasse de cyanobactries, dun chantillon deau concentr ou dune matrice complexe. Cependant, lextraction conditionne le spectre de toxines qui pourra tre dtect. Un minimum de deux sries de tests, associ une extraction des hpatotoxines dune part et des neurotoxines dautre part, est recommand. Linjection dun extrait des vertbrs (souris, poisson) permet de reproduire, au moins partiellement, les processus de distribution et de mtabolisation des toxines susceptibles dapparatre chez lhomme. Les toxines ncessitant une bio-activation ou dont le mode daction implique un compos spcifique des vertbrs suprieurs peuvent ainsi rvler leur activit. Cependant les toxines daction rapide comme les neurotoxines peuvent masquer la prsence concomitante de toxines daction plus lente comme les hpatotoxines.

3.4.1.1. Essai sur souris

Essai le plus couramment utilis, il peut tre ralis partir dextrait, dun lysat de cellules ou dune solution de lyophilisat filtre. Dans tous ces cas, dautres composs cellulaires peuvent interfrer dans lexpression de la toxicit, qui peut aussi tre associe dautres toxiques. Ce bioessai peut tre utilis en tant que mthode qualitative (prsence/absence) ou semi-quantitative par rfrence une cyanotoxine considre comme reprsentative dune famille de cyanotoxines. Lessai se fait par injection intrapritonale un minimum de trois souris pour au moins deux dilutions de lextrait tester. Les souris restent en observation 24 h puis sont sacrifies (Falconer 1993). La priode dobservation doit tre prolonge 7 jours lorsque la prsence des cylindrospermopsines est suspecte. Les symptmes observs et les rsultats de lexamen post-mortem permettent de diagnostiquer la famille de cyanotoxine (hpatotoxine, neurotoxine) lorigine de lintoxication. Les rsultats sont exprims en Dose Ltale Minimale (DLM) par mg de poids sec de cellule et par kg de poids corporel. Dans le cadre de lvaluation de la salubrit des coquillages, le bioessai sur souris, mthode qualitative et quivalent quantitative, est la mthode de rfrence rglementaire au niveau communautaire. Le bioessai sur souris reste la seule approche capable de rallier fiabilit, rapidit, quantification globale de la toxicit et orientation vers lidentit de la (ou des) toxine(s) prsente(s) dans un chantillon. Nanmoins, il prsente les inconvnients suivants : manque de spcificit, en particulier en prsence des substances interfrentes et problmes dthique face lutilisation des animaux pour les tests de laboratoire.

3.4.1.2. Bioessais sur invertbrs

ce jour, les bioessais sur invertbrs ne sont ni valids, ni intercalibrs pour la recherche et la quantification dune ou plusieurs cyanotoxines. Parmi les bioessais sur invertbrs permettant de mettre en vidence une toxicit globale, le bioessai sur Artemia salina est le plus utilis ce jour car il ne ncessite pas de haute technicit, ni humaine ni matrielle. Des kits commerciaux standardiss sont aujourdhui disponibles. Toutefois, la dtection de faibles concentrations de cyanotoxines ncessite la purification pralable de lchantillon. La comparaison des rsultats obtenus pour la microcystine avec ces kits, le bioessai sur souris et la chromatographie liquide haute performance sest avre satisfaisante (Lawton et al. 1994a). Le bioessai sur daphnie permet galement de mettre en vidence la toxicit des microcystines (Baird et al. 1989). titre exprimental, divers bioessais ont t publis, utilisant les moustiques adultes ou leurs larves (Turell & Middlebrook 1988, Kiviranta et al. 1993), la mouche (Drosophila melanogaster) (Ross et al. 1985, Swoboda et al. 1994), des locustes (criquet, sauterelle) pour la dtection des saxitoxines, (McElhiney et al. 1998), ces organismes ntant pas sensibles la microcystine-LR ou lanatoxine-a. En conclusion, les bioessais sur invertbrs pchent par leur incapacit distinguer les diffrents types de toxicit. Pour certains, la lourdeur des manipulations ou du maintien des populations limite leur emploi.

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3.4.2. Essais in vitro 3.4.2.1. Essais sur lignes cellulaires

Bass sur le mode daction des toxines lchelle cellulaire, ils prsentent les avantages des mthodes quantitatives miniaturises, tout en vitant les essais sur animaux. Ils ne peuvent cependant simuler quen partie les effets du mtabolisme dun animal sur les xnobiotiques absorbs. Ils prsentent donc un spectre de dtection troit et sont spcifiques dune activit toxique caractristique dune classe de cyanotoxines. Ils ne permettent pas didentifier formellement la (ou les) toxine(s) lorigine de leffet observ. Les rsultats sont exprims en quivalent de la toxine qui sert la calibration du test. Pour les microcystines, diffrents essais fonds sur des cultures dhpatocytes ont t rapports par Chorus et Bartram (1999), mais aucun nest utilis en routine. Les tests de cytotoxicit ou dagglutination sur des cellules non-cibles (fibroblastes, hmaties) ne se sont pas rvls suffisamment fiables. Pour les saxitoxines, des essais ont t dvelopps pour la surveillance des fruits de mer (Chorus & Bartram 1999). Un test sur neuroblastomes permet de dtecter les substances modulatrices de lactivit des canaux sodiques dpendant du potentiel de membrane, ce qui correspond au mode daction in vivo des saxitoxines. Il faut toutefois signaler que la comparaison inter-laboratoire pour validation dun kit commercial a chou il y a quelques annes pour une application sur coquillages, en partie en raison de la complexit de la matrice et du manque de robustesse du test. Des modles de peau reconstitue utiliss pour la recherche cosmtique pourraient tre employs pour apprcier les effets irritants des cyanotoxines ou des extraits de cyanobactries.

3.4.2.2. Les mthodes enzymatiques et molculaires

En dehors du cas des saxitoxines et de la cylindrospermopsine, ces mthodes sont toutes enzymatiques. Elles mettent en vidence des proprits communes un groupe de toxines ou plus spcifiques dune toxine. Il sagit de la mise en vidence du pouvoir inhibiteur de lextrait sur lactivit dune enzyme, le plus souvent implique dans le mode daction de la toxine in vivo. Elles ne constituent cependant pas une identification des toxines en cause, qui doit tre ralise par les techniques chromatographiques. Ces mthodes ont t dveloppes avec le souci daboutir une quantification de lactivit toxique, par ltude de dilutions successives. Microcystines, nodularines et inhibition des protines phosphatases Linhibition de la protine phosphatase est un test de dpistage sensible pour les microcystines et les nodularines. Lessai dtecte les microcystines et les nodularines, le rsultat est exprim en quivalent de la toxine talon, souvent la MC-LR. Les microcystines et la nodularine, tout comme lacide okadaque (une phycotoxine marine), inhibent les protines phosphatases de type 1 et 2A (PP1 et PP2A) in vitro et in vivo des concentrations de lordre de 0,1 g MC-LR L-1. Cette proprit a t mise profit pour dvelopper des tests enzymatiques dans lesquels la transformation dun substrat par la protine phosphatase est inhibe par la prsence de microcystines. Une version est base sur le dosage du 32P libr par un substrat radioactif suite laction enzymatique de la phosphatase (PP1 et PP2A) (Ortea et al. 2004, Robillot & Hennion 2004). La sensibilit est excellente puisque la dtection de quelques centaines de picogrammes est assure ; de plus, ce test est rapide, de lordre de quelques heures, et utilisable sur de larges sries dchantillons. La mthode a t utilise pour doser des microcystines dans lenvironnement marin, des extraits de foie de saumons (Andersen et al. 1993), des microcystines hydrophobes extraites de cyanobactries deau douce (Craig et al. 1993) ou encore dans leau de boisson (Lambert et al. 1994). Bien que cette mthode ait t largement utilise en recherche, son application en routine a t freine pour des raisons lies lutilisation de la radioactivit, qui ncessite lacquisition de matriels spcifiques, la sensibilisation des personnels et lagrment du laboratoire. Cest lune des raisons pour lesquelles des variantes vitant lutilisation de matriels radioactifs furent galement dveloppes. Linhibition de la phosphatase peut tre galement assure par colorimtrie (An & Carmichael 1994) ou bioluminescence (Isobe et al. 1995). Un test utilisant une enzyme PP2A commerciale a t tudi sur des chantillons de cultures et des prlvements environnementaux (Robillot & Hennion 2001). Sur les eaux de surface, des effets de matrice entranent quelques faux positifs pour de trs faibles concentrations en toxines. Pour les matrices cellulaires, lextraction au mthanol permet dviter la co-extraction dune activit phosphatase endogne qui tend sous estimer le contenu en microcystines (Codd et al. 2001). La limite de dtection de ce test est de 0,1 g quivalent MC-LR.L-1, lorsque ce variant est utilis pour ltalonnage du test.

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Ce test est un bon candidat pour la surveillance de la toxicit de sites historiquement sujets la production de microcystines. Nanmoins, en raison de la toxicit trs diverse des variants de microcystines produites par une efflorescence, la prsence de microcystines devra tre confirme par des mthodes chromatographiques lors de rsultats positifs. Anatoxine-a(s) et inhibition de lactylcholine-estrase Linhibition in vitro et in vivo de lactylcholine-estrase (AchE) par lanatoxine-a(s) a permis le dveloppement dun test enzymatique qualitatif et quantitatif (Mahmood & Carmichael 1987). Cet essai nest pas spcifique de lanatoxine-a(s) et dtecte toute activit anticholinestrasique, notamment celle des pesticides organophosphors et des carbamates. Cest un essai alternatif au bioessai sur souris pour cette toxine et les rsultats quantitatifs sont exprims en quivalents de la toxine talon. La toxicit relle de lchantillon peut tre diffrente en fonction de lactivit biologique des variants prsents dans lchantillon. Cylindrospermopsine Des essais dinhibition de la synthse protique laide dun test utilisant un lysat commercial de rticulocytes de lapin ont t raliss. Cette technique permet de visualiser lincorporation de leucine tritie par la synthse des protines. Les premiers rsultats ont montr une bonne corrlation avec les quantifications par CLHP (Froscio et al. 2001). Saxitoxines Un test de comptition de la liaison au rcepteur est en cours de mise au point (Llewellyn & Doyle 2001).

Points retenir Il existe de nombreuses techniques de dtection quantitative, semi-quantitative ou qualitative des diffrentes cyanotoxines, mais lidentification univoque et le dosage individuel des diffrentes molcules dune famille de toxines ncessite le recours aux mthodes chromatographiques. la date de rdaction, aucune des mthodes didentification et de dosage de ces toxines nest normalise, mme si lidentification et le dosage des microcystines -RR, -YR et -LR par extraction sur phase solide et CLHP est en voie de normalisation lISO. Il existe des problmes pour ltalonnage des dosages en raison de difficults dapprovisionnement et/ou de labsence de certains talons de toxines. Des essais in vivo peuvent permettre une valuation globale dun effet toxique. Des mesures enzymatiques rapides et sensibles sont intressantes pour assurer un suivi de routine. Il nexiste pas de mthodes de dosage fiable des microcystines dans les denres alimentaire dorigine animale ou les tissus animaux.

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Tableau II-VII : Aptitudes des diffrentes mthodes utilisables en routine .

Effets toxiques / toxicit Rponse observe Quantification des toxines Identification des toxines Temps de rponse Remarque 1-8 jours + (saxitoxines) - (autres toxines) 1-2 jours 1-15 jours - Utilis en cotoxicologie - Non spcifique des cyanotoxines - Non recommand - Non spcifique - Non recommand - Sensible et spcifique - Sensible mais spcificit controverse 1-3 jours + (si talon) 1 jour - Sensible et spcifique de familles de toxines

Mthodes

Essais sur animaux Souris

Toxicit globale (hpatotoxines, neurotoxines)

- Sensibilit et spcificit limite - A remplacer dans le cadre de la lgislation europenne limitant les tests sur animaux

Poissons (Danio renio, Oryzia latipes, )

Toxicit globale (hpatotoxines)

Micro-crustacs (Artmia, Daphnie, )

Toxicit globale

Essais sur bactries Microtox + (saxitoxines) + (microcystines et nodularines) quelques heures Toxicit cellulaire neuroblastomes hpatocytes Microcystines, Nodularines, Saxitoxines Cible molculaire + (microcystines et nodularines) + anatoxine a(s) + (si talon)

Toxicit globale

Essais cellulaires

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Essais immunologiques Monoclonal Polyclonal

Essais enzymatiques Phosphatases (PPA)

1-2 jours - Sensible et spcifique de familles de toxines 1-2 jours 1-2 jours - Spcificit et sensibilit variables - Seules mthodes de quantification de toxines normalises

Actylcholinestrase

Cible molculaire

Analyses chromatographiques CLHP/fluorescence CG/SM CLHP/UV CLHP/SM

Isolement des molcules

PP2A : protine phosphatase de type 2A ; CLHP : chromatographie en phase liquide haute performance ; CG : chromatographie en phase gazeuse ; SM : spectromtrie de masse ; UV : ultraviolets.

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Tableau II-VIII : Mthodes danalyses normalises.

Paramtre recherch Turbidit Oxygne dissous Norme NF EN ISO 7027 (2000). Qualit de leau - Dtermination de la turbidit. 24 p. ISO 5813, 1983. Qualit de leau. Dosage de loxygne dissous. Mthode iodomtrique. 8 p. ISO 5814, 1990. Qualit de leau. Dosage de loxygne dissous. Mthode lectrochimique la sonde. 12 p. NF T90-008, 2001. Qualit de leau - Dtermination du pH. 6 p. ISO 10260, 1992. Qualit de leau - Mesurage des paramtres biochimiques Dosage spectromtrique de la chlorophylle a. 12 p. NF T90-117, 1999. Qualit de leau - Dosage de la chlorophylle a et dun indice phopigments - Mthode par spectromtrie dabsorption molculaire. 12 p. NF EN 872, 1996. Qualit de leau - Dosage des matires en suspension Mthode par filtration sur filtre en fibres de verre. 12 p. NF T90-105-2, 1997. Qualit de leau - Dosage des matires en suspension Mthode par centrifugation. 8 p. Projet norme ISO/FDIS 20179, 2005. Water quality - Determination of microcystins Method using solid phase extraction (SPE) and high performance liquid chromatography (HPLC) with ultraviolet (UV) detection.

pH Chlorophylle a

Dtermination de la masse de matire sche

Microcystines

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III. Caractrisation des dangers

1. Toxicologie
Les donnes toxicologiques concernant les cyanotoxines sont souvent parcellaires lexception des donnes de toxicit aigu. De plus, les expriences sont ralises soit avec des toxines purifies soit avec des extraits de cyanobactries, ce qui peut conduire des diffrences de toxicit car les composs prsents dans ces extraits peuvent avoir des effets synergiques ou antagonistes. Il faut donc prendre avec prcaution les rsultats publis obtenus avec des extraits bruts. Par ailleurs, les tudes toxicologiques suivent des protocoles parfois difficilement comparables en terme de modle animal, de temps dexposition, de voie dadministration, deffets observs et de validit statistique des rsultats.

1.1. Les hpatotoxines

1.1.1 Les microcystines (MCs)
ce jour, plus de 70 variants de microcystine (MC) ont t identifis. Il est important de signaler que leur structure chimique variable prsente des diffrences de solubilit dans leau ce qui peut conduire des variations dans les organes cibles, le mtabolisme et la bioaccumulation (Craig et al. 1993, Gupta et al. 2003). La MC-LR, qui prsente une toxicit leve sur souris, est la toxine la plus frquemment dtecte dans les cosystmes. Elle est de ce fait la plus tudie et la mieux connue. Peu de donnes sont disponibles sur les autres variants de la microcystine.

1.1.1.1. Mcanismes de la toxicit

Les MCs se lient des protines phosphatases srine/thronine, essentiellement les PP1 et PP2A, en tablissant des liaisons covalentes dans le cytoplasme entre leur rsidu Mdha (N-methyldihydroalanine) et les cystines 273 et 226 des sous-units catalytiques de ces enzymes (McKintosh et al. 1990, Runnegar et al. 1995a, Bagu et al. 1997). Linhibition de ces enzymes entrane une modification de ltat de phosphorylation de nombreuses protines. Il en rsulte des effets divers et en particulier : une perte de lintgrit du cytosquelette (altration des micro filaments, des filaments intermdiaires et des microtubules), et en consquence une ncrose ; une apoptose des hpatocytes mais aussi des cellules glomrulaires et tubulaires proximales (Eriksson et al. 1990, Eriksson et al. 1992, Khan et al. 1996, McDermott et al. 1998, Fischer & Dietrich 2000, Fischer et al. 2000, Hooser 2000, Lankoff et al. 2003). Cette atteinte des hpatocytes conduit une hmorragie hpatique importante pouvant entraner la mort (Dawson 1998). Diffrents travaux ont montr que la MC-LR peut galement induire des dommages oxydants sur les macromolcules (ex: protines, acides nucliques, lipides) (Gehringer et al. 2003, Lankoff et al. 2003, Zegura et al. 2003, Botha et al. 2004, Bouacha & Maatouk 2004).

1.1.1.2. Absorption, distribution, mtabolisme et excrtion

Il nexiste pas dtude publie sur la toxicocintique par voie orale des microcystines. Les MCs sont des composs plutt hydrosolubles. Mis part peut-tre certains variants plus hydrophobes, elles ne franchissent pas facilement les membranes cellulaires (Vesterkvist & Meriluoto 2003). Un systme de transport des ions organiques utilis par les acides biliaires leur permet de traverser les membranes limitant lorganotropisme aux quelques organes (en particulier le foie, lintestin et le cerveau) exprimant ces transporteurs (Runnegar et al. 1991, Falconer et al. 1992, Runnegar et al. 1995b, Fischer et al. 2005).

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Aprs administration orale, elles sont transportes travers lilon dans la circulation sanguine grce ces transporteurs. De mme les MCs sont activement transportes dans les hpatocytes par ce mme mcanisme, les acides biliaires y tant des substrats naturels (Runnegar et al. 1991, Falconer et al. 1992, Runnegar et al. 1995b, Fischer et al. 2005). Chez les mammifres et les poissons, la MC-LR saccumule ensuite rapidement dans le foie (Runnegar et al. 1981, Fischer & Dietrich 2000, Fischer et al. 2000). Il a par ailleurs t montr que ladministration intratrachale de MC-LR saccompagne dune absorption rapide partir du poumon et induit une atteinte hpatique (Ito et al. 2001). Linjection intrapritonale ou intraveineuse de doses subltales de MCs chez la souris ou le rat montre quenviron 70 % de la dose est rapidement localise au niveau du foie (Falconer et al. 1986, Runnegar et al. 1986, Brooks & Codd 1987, Robinson et al. 1989, Meriluoto et al. 1990, Robinson et al. 1991, Lin & Chu 1994, Nishiwaki et al. 1994). La mtabolisation de la MC-LR se fait principalement dans le foie par conjugaison avec le glutathion (GSH). Elle est ralise par les glutathion S-transfrases. Cette conversion en un compos plus polaire (MC-GSH) est corrle une dpltion en glutathion. Ce compos est retrouv pour diffrents types dorganismes : chez des vgtaux (Ceratophyllum demersum), des invertbrs (Daphnia magna, Dreissena polymorpha, Artemia salina), des poissons (Danio rerio) et des mammifres (rat et souris) (Kondo et al. 1996, Pflugmacher et al. 1998,Takenaka 2001, Beattie et al. 2003). Des acides mercapturiques ont t galement identifis dans lurine. De plus, un conjugu la cystine a t identifi in vitro (Kondo et al. 1992) et in vivo (Pflugmacher et al. 2001). Ces conjugus se sont rvls considrablement moins toxiques chez la souris que le compos parent. De plus, ils ninduisent pas dinhibition des protines phosphatases srine/thronine (Kondo et al. 1992, Kondo et al. 1996, Metcalf et al. 2000a, Ito et al. 2002). Llimination fcale reste faible mais constante (environ 1 % par jour) tandis que lexcrtion urinaire, plus prcoce, prend en charge 9 % de la dose. Cette dernire est limite en raison de la fixation hpatique qui diminue la quantit de toxine disponible dans le plasma (Robinson et al. 1991).

1.1.1.3. Toxicit aigu (3)

Chez les mammifres, lintoxication aigu par les MCs se caractrise par la destruction de larchitecture hpatique, menant une hmorragie massive et une mort en quelques heures (Lakshmana Rao & Bhattacharya 1996). Des altrations de lpithlium bronchique sont observes par voie dadministration intratrachale. Des signes de nphrotoxicit au niveau vasculaire, glomrulaire et tubulaire ont t galement rapports (Siegelman et al. 1984, Bruno et al. 1994, Khan et al. 1996, Nobre et al. 1999, Nobre et al. 2001, Gupta et al. 2003). Linstillation intranasale de microcystine-LR la souris entrane une ncrose extensive de lpithlium de la muqueuse nasale, avec de larges destructions des tissus jusquaux vaisseaux sanguins (Fitzgeorge et al. 1994). Les variants de microcystines sont, pour la plupart, trs toxiques en administration intrapritonale chez la souris des doses comprises entre 50 et 300 g.kg-1 (Sivonen & Jones 1999). Pour la MC-LR, les toxicits aigus par voies intrapritonale (ip), intranasale (in) et intratrachale (it) sont similaires : les DL50 sont respectivement de 25 150 g.kg-1, 36 122 g.kg-1 et 50 100 g.kg-1 (Lovell et al. 1989, Miura et al. 1991, Fitzgeorge et al. 1994, Kuiper-Goodman et al. 1999, Sivonen & Jones 1999, Ito et al. 2001). Les DL50 par voie intrapritonale de plusieurs microcystines communes (-LA, -YR, -YM) sont du mme ordre de grandeur que celles de la MC-LR alors que celle de la MC-RR est 10 fois plus leve. Par voie orale (en gavage) et selon la souche de souris, la DL50 de la MC-LR, 24 h, varie entre 5 mg.kg-1 et 10,9 mg.kg-1 (Yoshida et al. 1997, Fawell et al. 1999a). Elle est plus leve chez le rat (Fawell et al. 1994, Fawell et al. 1999a). La toxicit aigu des MCs apparat variable selon que les animaux sont jeun ou non, y compris lors de linjection intrapritonale (Miura et al. 1991).

(3) La toxicit aigu est gnralement exprime par la dose ltale 50 % (DL 50).

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1.1.1.4. Toxicit sub-chronique (4)

Fawell et al. (1994) ont men une tude de 13 semaines avec administration par gavage des groupes de 15 souris mles et femelles de microcystine-LR pure. Les doses taient de 0, 40, 200 ou 1000 g.kg-1.j-1. Dans le groupe le plus expos, tous les mles et la plupart des femelles montrent des altrations hpatiques incluant une inflammation chronique, une dgnrescence focalise dhpatocytes et des dpts dhmosidrine. Chez les souris mles, la dose de 1000 g.kg-1.j-1, les transaminases sriques sont leves, la gamma glutamyl transfrase diminue, les taux des protines totales sriques et des albumines sriques lgrement diminus. Dans le groupe des femelles exposes 1000 g.kg-1.j-1, seules les transaminases sont leves. La dose de 40 g.kg-1.j-1 est considre comme la dose sans effet nocif observe (DSENO). Dans le groupe expos 200 g.kg-1.j-1 on note une lgre atteinte hpatique chez un mle et deux femelles (Fawell et al. 1994). Ladministration dextraits dA. flos-aquae via lalimentation chez la souris, pendant 43 jours, a permis dtablir une DSENO, pour la MC-LR, de 333 g.kg-1.j-1 pour tous les aspects toxicologiques (Schaeffer et al. 1999). Heinze et al. (1999) ont mis en vidence des dommages hpatiques permettant de dterminer une DMENO de 50 g.kg-1.j-1 chez le rat, par voie orale (eau de boisson, 28 jours, MC-LR pure). Chez le porc, lexposition orale des extraits de Microcystis aeruginosa, pendant 44 jours, a mis en vidence des dommages dose dpendants, limits au foie, permettant de dterminer une dose minimale avec un effet nocif observable (DMENO) de 100 g.kg-1.j-1 (Falconer 1994). Ladministration en i.p. chez le lapin, dextraits contenant de la MC-LR et de la MC-RR, pendant trois semaines, provoque une dgnrescence parenchymateuse et une fibrose priportale du foie. Une diminution dosedpendante de lactivit ALAT hpatique a t observe chez le rat trait par voie i.p. avec 16, 32 et 48 g.kg-1.j-1 pendant 28 jours (Solter et al. 2000). Par voie intranasale des lsions hpatiques dose-dpendantes et un effet cumulatif ont t obtenus chez la souris. Lapplication dune seule dose de MC-LR de 31,3 g.kg-1 nentrane pas daugmentation de poids du foie. Administre pendant 7 jours, cette dose entrane une augmentation du poids de lorgane de 75 %. Il faut une dose de 500 g.kg-1 pour obtenir cet effet en une seule administration (Fitzgeorge et al. 1994).

1.1.1.5. Toxicit chronique (5)

Ladministration orale, par leau de boisson pendant un an, dextraits de Microcystis (quivalent 750-12000 g.kg-1.j-1 de MC-YM) des souris, provoque des altrations hpatiques ainsi quune augmentation des bronchopneumonies (Falconer 1991, 1998). Des atteintes rnales aprs 8 mois de traitement tous les deux jours,par voie intrapritonale, avec de la MC-LR ou de la MC-YR (10 g.kg-1) ont t observes chez le rat (Milutinovic et al. 2003). Les effets sont en gnral plus importants avec la MC-LR quavec la MC-YR. Les altrations de la physiologie rnale semblent impliquer les voies de la phospholipase A2 et de lacide arachidonique (Nobre et al. 2003). Des souris femelles BALB/c ges de six semaines ont reu pendant 18 mois 20 g.L-1 de microcystine-LR dans leau de boisson. La quantit moyenne ingre a t estime 35,5 g par souris. Aucun signe de toxicit ou daccumulation de la toxine nont t observs (Ueno et al. 1999).

1.1.1.6. Gnotoxicit
Chez les procaryotes, les rsultats obtenus par les essais de mutation gnique (test dAmes sur Salmonella typhimurium et test sur Bacillus subtilis) sont ngatifs avec la MC-LR pure alors quavec des extraits, les rsultats se sont rvls contradictoires (Grabow et al. 1982, Runnegar & Falconer 1982, Repavich et al. 1990, Ding et al. 1999). In vitro et in vivo, diverses tudes rapportent des altrations de lADN (mutations ponctuelles, cassures et rarrangements chromosomiques, formation de micronoyaux, mitose aberrantes, adduits doxydation) sans que le potentiel gnotoxique puisse tre dfini de faon claire (Repavich et al. 1990, Rao & Bhattacharya 1996, Suzuki et al. 1998, Ding et al. 1999, Lankoff et al. 2003, Maatouk et al. 2004, Zegura et al. 2004, Zhan et al. 2004).

(4) Les tudes de toxicit sub-chronique consistent en ladministration de doses rptes, pendant une dure dau moins 13 semaines (90 jours). Dans certaines tudes, les temps dexposition sont cependant infrieurs. Ces expriences permettent de dfinir des doses sans effet nocif observ (DSENO) et/ou des doses minimales avec un effet nocif observable (DMENO). Ces valeurs sont dfinies pour un modle animal et une voie dexposition donne. Les paramtres observs peuvent tre : le poids corporel des animaux ou des organes, les modifications histologiques (notamment du foie) et biologiques (Alanine Amino-Transfrase : ALAT, Aspartate Amino-Transfrase : ASAT, -glutamyl transpeptidase, -glutamyl transfrases et protines sriques). (5) La toxicit chronique est value par une exposition rpte durant une grande partie de la vie de lanimal (18 mois pour la souris, 2 ans pour le rat).

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1.1.1.7. Cancrognse
In vitro Sur des hpatocytes de rat, la MC-LR sest montre capable dinduire des proto-oncognes (6) tels que c-jun et cfos, impliqus dans la promotion tumorale (Sueoka et al. 1997). In vivo (7) Les tudes de promotion moyen terme, comportant une tape dinitiation pralable, ont montr un effet promoteur de tumeur : au niveau hpatique avec linduction de foyers prnoplasiques aprs administration i.p. de MC-LR (10 g.kg-1) (Nishiwaki-Matsushima et al. 1992) ; sur la peau et sur le colon de souris avec des extraits de Microcystis administrs via leau de boisson (Falconer 1991, Humpage et al. 2000). Chez la souris, ladministration subchronique par voie i.p. de MC-LR (20 g.kg-1) provoque lapparition de nodules hpatiques contrairement ladministration orale de 80 g.kg-1 de MC-LR (Ito et al. 1997). Ladministration chronique chez la souris via leau de boisson, pendant un an, dextraits de M. aeruginosa (doses de 750 12 000 g.kg-1.j-1 en quivalent MC-YM), provoque des dommages hpatiques ainsi quune augmentation des bronchopneumonies et de la mortalit dans les groupes recevant les plus fortes concentrations. Si aucun cancer du foie na t induit, une promotion tumorale a t signale (Falconer et al. 1988).

1.1.1.8. Reprotoxicit
Ltude de Fawell et al. (1999) rapporte des retards de poids et dossification du squelette sur la descendance des souris traites par gavage du 6e au 15e jour de la gestation avec une dose de MC-LR pure de 2000 g. kg-1.j-1. Nanmoins, ces effets sont associs une toxicit maternelle. la dose de 600 g.kg-1. j-1, aucun signe de toxicit nest observ chez les prognitures et les mres (DSENO = 600 g.kg-1.j-1). Ces rsultats sont en accord avec ceux de Falconer et al. (1988) qui, hormis des cas de microcphalie chez les nouveaux ns, ne rapportent aucun signe de tratogense, de mortalit embryonnaire ou de diminution de la fertilit chez des souris recevant un extrait de Microcystis aeruginosa de concentration en toxine non dfinie, par leau de boisson. Une autre DSENO de 333 g.kg-1.j-1 de MC-LR, par consommation dextraits dA. flos-aquae (pendant 21 43 jours) a t obtenue. cette dose aucun effet nfaste nest apparu sur la croissance et la reproduction des souris traites, ni sur le dveloppement ftal, la survie ou le poids des organes des nouveaux ns (Schaeffer et al. 1999). Aucun effet tratogne na t mis en vidence chez la souris et le crapaud par Chernoff et al. (2002). Chez le poisson, lembryotoxicit de la MC-LR est avre : elle affecte le taux dclosion et de survie et augmente la frquence dembryons anormaux (Liu et al. 2002).

1.1.1.9. Immunotoxicit
Diffrentes tudes in vitro suggrent un effet immunosuppresseur des MCs. Il a t observ que ces toxines pouvaient moduler ladhsion des leucocytes polynuclaires humains, altrer la phagocytose et lactivit de certaines cellules (cellules NK (8)). Linhibition dose dpendante de la prolifration des lymphocytes B et T a galement t observe, ds 1 M dans certains cas (Hernandez et al. 2000, Yea et al. 2001, Zhang et al. 2001b, Shen et al. 2003). La production dinterleukine IL-2 (9), du TNF-(10) et la synthse doxyde nitrique dans les macrophages sont galement affectes (Nakano et al. 1989, Nakano et al. 1991, Pahan et al. 1998, Rocha et al. 2000, Yea et al. 2001, Nobre et al. 2003).

(6) Gne impliqu dans le contrle de la division cellulaire et dont la mutation peut tre lorigine de tumeurs. (7) La cancrogense chimique seffectue en trois tapes : - une tape dinitiation par application dune substance mutagne rendant certaines cellules aptes dvelopper un cancer (cellules inities) ; - une tape de promotion par application dune substance conduisant la multiplication des cellules inities et lapparition de cellules cancreuses. Il y a promotion lorsque le temps coul entre linitiation et lapparition des tumeurs est rduit par la substance applique ; - une tape de progression caractrise par lacquisition de la malignit. Une mme substance peut tre initiatrice et promotrice. (8) Les cellules NK (Natural Killer) sont des cellules tueuses naturelles charges de dtruire des cellules infectes par des virus ou des cellules tumorales. (9) (10) LIL-2 (interleukine-2) et le TNF- (facteur ncrosant des tumeurs) sont des cytokines, mdiateurs solubles de limmunit, qui permettent la communication entre diffrents acteurs du systme immunitaire.

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1.1.1.10. Tableau des valeurs toxicologiques (tous aspects) Tableau III-I : Valeurs toxicologiques pour les microcystines pour diffrentes voies dadministration (orale, IP : intrapritonale, IN : intranasale, IT : intratrachale). MC : Microcystine.
Toxicit Voie administration Orale DL50 = 10,9 mg.kg-1 (souris, gavage) Aigu IP IN IT 25 g.kg
-1 < DL50 < 150 g.kg-1

Valeurs repres DL50 = 5 mg.kg-1 (souris, gavage)

Toxine MC-LR MC-LR MC-LR MC-LR MC-LR MC-LR MC-LR Extrait de M. aeruginosa

Source (Fawell et al. 1994, Fawell et al. 1999a) (Yoshida et al. 1997) (Kuiper-Goodman et al. 1999) (Fitzgeorge et al. 1994) (Ito et al. 2001) (Fawell et al. 1994, Fawell et al. 1999a) (Heinze 1999) (Falconer 1994)

36 g.kg-1 < DL50 < 122 g.kg-1 50 g kg-1 < DL50 < 100 g.kg-1 DSENO = 40 g.kg (souris, gavage, 13 semaines) DMENO = 50 g.kg-1.j-1 (rat, eau de boisson, 28 jours)
-1.j-1

Subchronique

Orale

DMENO = 100 g/kg p.c. j-1 (porc, eau de boisson, 44 jours) DSENO = 333 g.kg-1.j-1 (souris, alimentation, 43 jours) DSENO = 600 g.kg-1.j-1 (souris, gavage, 10 jours)

Extrait (Schaeffer et al. 1999) dA. flos-aquae MC-LR (Fawell et al. 1994, Fawell et al. 1999a) Extrait (Schaeffer et al. 1999) dA. flos-aquae Extrait (Schaeffer et al. 1999) dA. flos-aquae

Embryotoxicit

Orale

DSENO = 333 g.kg-1.j-1 (souris, alimentation, pendant la gestation et la lactation) DSENO = 333 g.kg-1.j-1 (souris, alimentation, pendant la gestation et la lactation)

Tratognse

Orale

1.1.1.11. Conclusions
Par voie orale (en gavage) et selon la souche de souris, la DL50 de la MC-LR, 24 h, varie entre 5 mg.kg-1 et 10,9 mg.kg-1. Les toxicits par voies intranasale et intratrachale sont aussi leves que par voie intrapritonale. Des effets cumulatifs, mesurs par laugmentation de poids du foie, ont t rapports par exposition intranasale avec une dose de 31,3 g.kg-1.j-1 (pendant 7 jours). La MC-LR est un promoteur tumoral avr mais il nest pas clairement tabli que cette substance soit gnotoxique. Concernant les effets subchroniques, les conditions exprimentales de ltude de Fawell et al. (1994) avec de la MC-LR pure administre par gavage des souris pendant 13 semaines et observation deffets prcoces, permettent de considrer la DSENO de 40 g.kg-1.j-1 comme pertinente pour rendre compte dune exposition subchronique. Cette valeur a t retenue par lOMS pour tablir une dose journalire tolrable (DJT) par voie orale de 0,04 g.kg-1.j-1 avec application dun facteur de scurit de 1000 : 10 pour la transposition lhomme, 10 pour la variabilit de la sensibilit au sein de lespce humaine, 10 pour tenir compte de la dure de ltude, de la promotion tumorale, des connaissances rduites dans le domaine de la toxicit de la repoduction (chapitres VI et VII). En retenant une consommation de 2 L deau par jour pour un adulte de 60 kg, si leau reprsente 80 % des apports quotidiens en microcystine, la concentration maximale de microcystine-LR admissible dans leau de boisson est de 1 g.L-1.

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Compte tenu de la toxicit aigu de cette toxine, Dietrich et Hoeger (2005) ont cherch identifier une valeur de rfrence aigu. Ils proposent de sappuyer sur la plus basse valeur sans effet hpatotoxique de microcystineLR injecte par voie intra-pritonale gale 25 g.kg-1 (Kotak et al. 1993) laquelle ils appliquent un facteur de 10 considrant que la toxicit par voie i.p. est 10 fois plus forte que la toxicit par voie orale (soit 250 g.kg-1) puis un facteur de scurit de 100 dextrapolation de lanimal lhomme et de variabilit intra espce, soit une valeur toxicologique de rfrence aigu de 2,5 g.kg-1. La dose unique sans effet est donc pour un adulte de 60 kg gale 150 g ; pour un enfant de 20 kg de 50 g et un nourrisson de 12,5 g.

1.1.2. Les nodularines (Nod)

Neuf nodularines ont t isoles ce jour (Codd et al. 2005) et la plus tudie est la nodularine R. La molcule qui contient une valine la place de larginine est connue sous le nom de motuporine et a t isole dune ponge de Papouasie-Nouvelle-Guine (De Silva et al. 1992). La toxicit de la nodularine prsente des similitudes avec celle des MCs.

1.1.2.1. Mcanismes de la toxicit

Les tudes de toxicit ont t menes principalement sur la nodularine-R. Comme les MCs, la nodularine agit en inhibant des phosphatases srine/thronine (PP1 et PP2A essentiellement), mme si les potentialits dinhibition sont diffrentes (Yoshizawa et al. 1990). la diffrence des MCs, la toxine ntablit pas de liaison covalente avec les phosphatases (Goldberg et al. 1995, Bagu et al. 1997).

1.1.2.2. Absorption, distribution, mtabolisme et excrtion

Suite une administration i.p., le transport de la nodularine jusquau foie seffectue via la veine porte et les structures du cycle entro-hpatique (Towner et al. 2002). Il est possible que cette toxine soit moins efficacement absorbe que la MC, car le temps de survie aprs administration dune dose ltale minimale est plus long (2 3 h) que celui obtenu avec la MC-LR (1 1,5 h) (Carmichael et al. 1988). Un conjugu au glutathion a t dtect dans les moules (Sipi et al. 2001).

1.1.2.3. Toxicit aigu

Pour la nodularine-R il nexiste que des donnes de toxicologie aigu. Comme les MCs, lintoxication aigu par cette toxine provoque une ncrose du tissu hpatique avec hmorragie (Runnegar et al. 1988). Les DL50 i.p. varient, chez la souris, entre 50 et 150 g.kg-1 et entre 50 et 60 g.kg-1 chez le rat. Une valeur de DL50 i.p. de 60 g.kg-1 est gnralement mentionne pour cette toxine (Carmichael 1988, Eriksson et al. 1988, Kiviranta et al. 1990). Ces valeurs sont proches de celles obtenues avec la MC-LR pour la mme voie dadministration, mais le temps de survie est suprieur avec la nodularine. La toxicit par voie orale (boisson), chez la souris, est beaucoup moins importante que par voie i.p., au moins dun facteur 200 (Kiviranta et al. 1990). Aucun effet toxique, par administration orale dune efflorescence de Nodularia, des souris et des rats, na t mis en vidence, alors quune toxicit tait obtenue par voie i.p. (Kalbe 1984).

1.1.2.4. Gnotoxicit et cancrogense

La formation dadduits doxydation sur la guanine (8-oxo dG) a t observe aprs traitement par la nodularineR, in vitro sur des hpatocytes primaires de rat ( 2 et 10 ng.ml-1) et in vivo sur le foie de rat, en i.p., 50 g.kg-1 (Maatouk et al. 2004). Le potentiel cancrogne de la nodularine a t mis en vidence par des tudes in vitro et in vivo. Cette toxine est un promoteur tumoral plus puissant que la MC-LR (Sueoka et al. 1997). Linduction de foyers prnoplasiques a t obtenue mme en labsence dun traitement pralable avec un initiateur. En accord avec ces observations, la nodularine sest montre capable dactiver plusieurs proto-oncognes des familles fos et jun (en i.p., 50 g.kg-1) ainsi que le TNF- (Ohta et al. 1994). Cette induction, mesure in vitro sur hpatocytes de rat, sest rvle lgrement plus importante que celle engendre par la MC LR. Dans ltat actuel des connaissances, la nodularine peut-tre considre comme une substance cancrigne. La gnotoxicit doit faire lobjet dtudes complmentaires.

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1.1.2.5. Autres toxicits

Il nexiste pas dinformation publie concernant la tratogense ou lembryotoxicit pour la nodularine. Une tude rapporte linhibition de la biosynthse de la testostrone par un phnomne dapoptose affectant les cellules de Leydig (Park et al. 2002). Une immunotoxicit affectant la lymphoprolifration de faon dose dpendante, a t mise en vidence in vitro et in vivo (Yea et al. 2001).

1.1.2.6. Conclusions
Il nexiste pas de donnes publies de toxicit aigu concernant la voie orale, pour la nodularine. Elle serait, chez la souris, du mme ordre de grandeur (de lordre du mg.kg-1) que celle obtenue avec la MC-LR. Les donnes de toxicit chronique et subchronique font galement dfaut. La nodularine est un promoteur tumoral puissant. Il existe de fortes prsomptions quant son potentiel gnotoxique. Aussi, en ltat actuel des donnes disponibles, il nest pas possible de dterminer une valeur toxicologique repre qui permette de driver une valeur toxicologique de rfrence aigu ou chronique. Compte tenu des prsomptions qui psent sur son caractre gnotoxique et cancrogne, des tudes sont ncessaires pour pouvoir mieux cerner le risque de cette famille de toxines.

1.1.3. La cylindrospermopsine (CYN) 1.1.3.1. Mcanismes de la toxicit

La cylindrospermopsine provoque une inhibition irrversible de la synthse protique en interagissant avec les ARN de transfert. La partie uracile de la toxine serait en partie responsable de sa toxicit, par inhibition comptitive au niveau dun site catalytique.

1.1.3.2. Absorption, distribution, mtabolisme et excrtion

Des travaux montrent que la cylindrospermopsine pntre dans les cellules par simple diffusion, du fait de son faible poids molculaire. Une faible fraction pourrait tre prise en charge par les transporteurs des acides biliaires (Chong et al. 2002). Lexcrtion seffectue comme suit : 50 % de la dose sont limins en 6 h dans lurine, environ 10 % sont limins dans les fces et 20 % se retrouvent dans le foie. La mtabolisation de la cylindrospermopsine requiert lintervention des cytochromes P450 (11) (Runnegar et al. 1995c). Linhibition de ces cytochromes, par diffrents composs, offre un certain niveau de protection des souris vis--vis dune dose ltale en i.p. (Runnegar et al. 1995c, Banker et al. 2001, Froscio et al. 2001, Norris et al. 2002).

1.1.3.3. Toxicit aigu

Les symptmes rapports lors dune intoxication humaine survenue en Australie sont : des malaises, des vomissements, des maux de tte, une perte dapptit, des troubles du transit intestinal (diarrhe ou constipation), une dshydratation et une augmentation de la taille du foie. En i.p. chez la souris, les altrations majeures sont rapportes sur le foie, mais le rein, le poumon, le thymus, la rate, le cur et lintestin peuvent galement subir des dommages (Hawkins et al. 1985, Harada et al. 1994,Terao et al. 1994, Bernard et al. 2003). Les mmes genres de lsions sont observs lors dune administration orale par gavage (Seawright et al. 1999). Par voie i.p., la mortalit chez la souris est observe au-del de 50 g.kg-1. La DL50 24 h est estime 2100 g.kg1. Elle est de 200 et 170 g.kg-1 5 et 7 jours respectivement (Ohtani et al. 1992). Par voie orale chez la souris, la DL50, obtenue avec des extraits de cultures de C. raciborskii, est comprise entre 4,4 mg.kg-1 et 6,9 mg.kg-1 en quivalent CYN (Seawright et al. 1999, Shaw et al. 2000).

(11) Les cytochromes P450 constituent une famille denzymes impliques dans le mtabolisme des strodes et la dtoxication des xnobiotiques (drogues, mdicaments, polluants). Ils sont particulirement abondant dans le foie.

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1.1.3.4. Toxicits chronique et sub-chronique

Lingestion par gavage chez la souris, pendant 10 et 11 semaines, donne des valeurs de DSENO de 30 g.kg-1.j-1 et de 60 g.kg-1.j-1 selon les effets observs (Humpage & Falconer 2003). Dans une autre tude, lexposition des extraits, par gavage (14 jours) et via leau de boisson (90 jours), a permis de dfinir des DSENO de 10 g.kg-1.j-1 et de 150 g.kg-1.j-1 respectivement. La diffrence de toxicit obtenue, pourrait sexpliquer par des dommages au niveau du tractus gastro-intestinal, provoqus par les gavages successifs, qui accrotraient labsorption de la toxine (Shaw et al. 2000). Aucune tude de toxicit long terme nest disponible actuellement pour cette toxine.

1.1.3.5. Gnotoxicit et cancrogense

Concernant la gnotoxicit, des adduits lADN ont t obtenus in vivo, dans le foie de souris aprs injection ip. In vitro la formation de micronoyaux est rapporte et des cassures de lADN ont t obtenues (Humpage & Falconer 1999, Shaw et al. 2000). Les seuls cas dintoxication humaine par de la CYN ont t signals Palm Island (Australie) en 1979. Le suivi de la population aborigne de cette zone expose cette toxine sur plusieurs annes tend montrer des taux de cancers hpatiques et gastro-intestinaux des niveaux environ 5 fois plus levs mais cette tude nest pas juge suffisante pour affirmer lexistence dune relation causale (Falconer 2004).

1.1.3.6. Conclusions
En toxicit aigu, par voie orale, la DL50 chez la souris se situe entre 4,4 et 6,9 mg.kg-1. Une tude ralise sur 11 semaines, par administration orale des souris de cylindrospermopsine purifie, permet de retenir une DSENO de 30 g.kg-1.j-1 (Humpage & Falconer 2003). Il est possible de retenir cette DSENO pour driver une valeur toxicologique de rfrence chronique titre provisoire, en lattente de donnes plus robustes pour une telle estimation de risque. En appliquant un facteur de scurit de 3000 (10 pour la variabilit interspcifique, 10 pour la variabilit intraspcifique, 10 pour le passage dune tude subchronique un risque chronique et 3 pour tenir compte du fait que des effets gnotoxiques sont suspects), on obtient une dose journalire tolrable de 0,01 g.kg-1.j-1. En retenant lhypothse dune consommation de 2 litres deau par jour pour un adulte de 60 kg, si leau reprsente 80 % des apports quotidiens en cylindrospermopsine, la concentration maximale de cylindrospermopsine admissible dans leau de boisson est de 0,24 g.L-1 arrondie 0,3 g.L-1. Les donnes concernant la cancrogense sont encore insuffisantes.

1.2. Les neurotoxines

1.2.1. Les anatoxines
Les trois anatoxines les plus tudies sont lanatoxine-a, lanatoxine-a(s) et lhomoanatoxine.

1.2.1.1. Mcanismes de la toxicit

Les anatoxines, dont la cible est la jonction neuromusculaire, provoquent la paralysie des muscles stris squelettiques dont les muscles respiratoires. La mort survient par arrt respiratoire en quelques minutes quelques heures. Lanatoxine-a, lanatoxine-a(s) et lhomoanatoxine ont cependant des modes daction diffrents. Lanatoxine-a est un agoniste nicotinique actylcholine des jonctions nerveuses et neuro-musculaires. Cette liaison provoque une dpolarisation locale qui ouvre les canaux Ca2+ et Na+ voltage dpendant. Suite une dpolarisation extrme, la transmission lectrique est bloque. Lanatoxine-a(s) est un inhibiteur irrversible de lactylcholinestrase. Elle prsente un mcanisme daction similaire celui des insecticides organophosphors. Lhypersalivation est lun des nombreux symptmes rapports lors dintoxications animales. Cette salivation est lorigine du (s) ajout au nom de la toxine.

1.2.1.2. Toxicit aigu

Pour lanatoxine-a, les diffrentes voies dadministration ont t explores. Les valeurs de DL50 obtenues chez la souris sont consignes dans le tableau III-II. Les doses toxiques par voies orale et intranasale sont beaucoup plus faibles que par voie intrapritonale.

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Tableau III-II :Toxicit (DL50 en g.kg-1) chez la souris pour diffrentes voies dadministration des toxines de type anatoxine (Mahmood & Carmichael 1986, Matsunaga et al. 1989, Fitzgeorge et al. 1994).
Toxine Anatoxine-a Homoanatoxine Anatoxine-a(s) Voie dadministration (dose en g.kg-1)) Intrapritonale 375 250 20 Intraveineuse < 100 Orale > 5 000 Intranasale 2 000

1.2.1.3. Toxicits chronique et sub-chronique

Les donnes existantes ne concernent que lanatoxine-a, en toxicit sub-chronique. Par voie i.p. chez le rat aucune toxicit nest rapporte 80 g.kg-1.j-1 pendant 21 jours (Astrachan et al. 1980). Par voie orale, aucune toxicit nest obtenue 510 g.kg-1.j-1 pendant 49 jours, chez le rat en ajoutant cette toxine partiellement purifie leau de boisson (Astrachan et al. 1980) tandis quune DSENO de 8 g.kg-1.j-1 (toxine purifie) est dtermine, chez la souris, par gavage pendant 4 semaines (Fawell et al. 1999b). Ces tudes apparaissent nanmoins insuffisantes pour driver une valeur toxicologique de rfrence.

1.2.1.4. Gnotoxicit et cancrogense

Les seuls rsultats concernant cet aspect proviennent de ltude de Repavich et al. (1990), dans laquelle des cassures chromosomiques ont t mises en vidence partir de 0,8 g.mL-1 danatoxine-a(s), sur lymphocytes humains in vitro.

1.2.1.5. Reprotoxicit
Des malformations et des retards de croissance ont t observes, chez le ftus, aprs administration i.p. de 125 g.kg-1 trois fois par jour danatoxine-a partiellement purifie des hamsters femelles gestantes (Astrachan et al. 1980). Aucun signe de tratogense ni de toxicit maternelle na t rapport, chez la souris, par gavage (2,46 mg. kg-1.j1) avec cette toxine (Fawell et al. 1999b).

1.2.1.6. Conclusion
Les valeurs toxicologiques concernent, pour lessentiel, lanatoxine-a. La DL50 en intoxication aigu par voie orale, pour cette toxine, est comprise entre 5 et 15 mg.kg-1. Concernant les effets subchroniques ou chroniques, aucune valeur toxicologique napparat comme pertinente pour tablir une dose journalire tolrable. Les donnes de gnotoxicit et de cancrogense sont insuffisantes.

1.2.2. Les saxitoxines et leurs drivs

Les saxitoxines et leurs drivs ont t plus largement tudis dans le domaine marin o elles sont responsables de lIPFM (Intoxication Paralysante par les Fruits de Mer). Elles sont connues sous lacronyme PSP pour paralytic shellfish poisons . Les donnes toxicologiques disponibles proviennent donc majoritairement des tudes menes dans ce cadre. De nombreux variants, classs en trois groupes, ont t identifis : les carbamates (STX, neoSTX, GTX1, GTX2, GTX3, GTX4), les dcarbamoyles (dcSTX, dcGTX2, dcGTX3) et les sulfocarbamoyles (B1, B2, C1, C2, C3, C4). Parmi ces variants, la saxitoxine, qui est la plus toxique, est la mieux connue (tableau III-III).

1.2.2.1. Mcanismes de la toxicit

Les saxitoxines (STX) et leurs drivs ont une action pharmacologique similaire la ttrodotoxine (TTX) en agissant par bloquage de la transmission nerveuse par liaison avec le site 1 des canaux Na+ voltage dpendant, qui traversent la membrane plasmique de nombreuses cellules excitables (nerfs, fibres de muscles squelettiques et la plupart des fibres musculaires cardiaques). Lorsquune dpolarisation approprie de la membrane cellulaire a lieu, le canal change de conformation et permet ainsi le passage du sodium du milieu extracellulaire vers lintrieur de la cellule. La repolarisation seffectue par transport inverse des ions K+. Les saxitoxines et leurs drivs bloquent les canaux sodium sans affecter les canaux potassium, provoquant un ralentissement ou labolition de la propagation du potentiel daction. Tous les analogues sont considrs occuper le mme site du rcepteur mais les affinits diffrent largement selon les structures des toxines et les isoformes des canaux (Shimizu 2000). La fonction 7,8,9-guanidine de la toxine est implique dans le blocage du canal.

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1.2.2.2. Absorption, distribution, mtabolisme et excrtion

En injection i.v., la STX, comme les substances acides, se distribue instantanment dans le compartiment vasculaire puis rapidement dans lensemble du corps (demi-vie srique de 22 minutes). Elle est de plus capable de franchir la barrire hmato-encphalique. Elle est squestre, dans diffrents tissus, par fixation des rcepteurs membranaires localiss. La demi-vie dans le corps est comprise entre 12 et 18 h. Des tudes in vitro signalent le rle dun systme de transport actif, impliqu dans labsorption intestinale des saxitoxines et de leurs drivs (Andrinolo et al. 2002). Llimination de la toxine, par excrtion urinaire, nest possible que lorsquelle est libre dans le compartiment intravasculaire. Laffinit des diffrents variants, avec les rcepteurs cits ci-dessus, va donc dterminer lefficacit de cette excrtion qui peut varier entre 10 et 25 % de la dose totale. Aucune limination fcale na t mise en vidence (Hines et al. 1993, Stafford & Hines 1995, Andrinolo et al. 1999, Lagos & Andrinolo 2000). Les expriences ralises par Hines et al. (1993) et Andrinolo et al. (1999) concluent labsence de mtabolisation de la STX. Pourtant, la biotransformation de cette toxine dans les coquillages, et son inactivation par fixation des protines dans les fluides circulatoires de diffrents animaux (amphibiens, poissons, reptiles et arthropodes) ont t mises en vidence (Negri & Jones 1995, Llewellyn 1997). Les patients qui survivent 24 h une intoxication par la saxitoxine et ses drivs ont une excellente chance dun rtablissement rapide (Long et al. 1990, Montebruno 1993). Ces observations suggrent bien que ces toxines sont rapidement excrtes et/ou sont mtabolises. Si aucune donne sur le mtabolisme chez lhomme nest disponible, en revanche, ces toxines ont t retrouves dans le srum et lurine de patients intoxiqus en Alaska en 1994. Llimination de la toxine prsente dans le srum est ralise dans les 24 h et lurine a t identifie comme une route majeure dexcrtion (Gessner et al. 1997). Lhydrolyse des toxines N-sulfocarbamoyles en carbamates plus toxiques ne semble pas tre significative pour la sant humaine.

1.2.2.3. Toxicits aigu et subltale

En affectant la propagation du potentiel daction, les saxitoxines et leurs drivs conduisent une paralysie, notamment des muscles respiratoires, ce qui provoque la mort en quelques minutes. Les carbamates (STX, neoSTX, GTX1 GTX4) et les dcarbamoyles (dcSTX, dcGTX2 et dcGTX3) sont les plus toxiques. La saxitoxine est le compos le plus puissant chez la souris. La toxicit relative des diffrentes toxines apparentes la saxitoxine est prsente dans le tableau III-III.

Tableau III-III : Toxicit spcifique des analogues de saxitoxine, exprime en unit souris (M.U. : Mouse Unit) par mole de toxine (Oshima 1995, Batoru et al. 2005)
(* Aprs r-examen, ** Estim par la mesure de GTX1, GTX4 forms par hydrolyse acide)

Toxine Carbamates STX neoSTX GTX1 GTX2 GTX3 GTX4 Dcarbamoyl dcSTX dcGTX2 dcGTX3 Sulfocarbamoyl B1 (GTX5) B2 (GTX 6) C1 C2 C3** C4**

Toxicit spcifique (MU(12).mole-1) 2 483 2 295 2 468 892 1 584 1 803 1 274 382* 935*0,38 160 180 15 239 33 143

Toxicit relative 1 0,92 0,99 0,36 0,64 0,73 0,51 0,15

0,064 0,072 0,006 0,096 0,013 0,057

(12) Mouse unit : il sagit de la quantit de saxitoxine qui fait mourrir une souris de 20 g en 15 minutes aprs administration par voie intrapritonale.

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Chez la souris, les DL50 pour la saxitoxine sont denviron 10 g.kg-1, 3 g.kg-1 et 260 g.kg-1 pour les voies i.p., i.v. et orale, respectivement (tableau III-IV).

Tableau III-IV : Toxicit aigu de la STX chez la souris, par diffrentes voies dadministration (Wiberg & Stephenson 1960).
Voie dadministration Orale Intraveineuse Intrapritonale DL50 en g.kg-1 260-263 2,4-3,4 9,0-11,6

La comparaison de susceptibilit entre diffrents animaux (tableau III-V) montre que la toxicit orale varie peu selon les espces (McFarren et al. 1960).

Tableau III-V : Toxicits orales (DL50 en g.kg-1) de la STX chez diverses espces (McFarren et al. 1960, Mons et al. 1998).
Toxicit orale de la STX (DL50 en g.kg-1) Animal Souris Rat Singe Chat Lapin Chien Cochon dInde Pigeon Mons et al. (1998) 260-263 192-212 277-800 254-280 181-200 180-200 128-135 91-100 McFarren et al. (1960) 420 212 400-800 280 200 200 128 100

Lexposition pralable des doses de saxitoxine subltales diminue la sensibilit des rats une exposition ultrieure. Si lon compare la DL50 de rats prtraits et la DL50 de rats non prtraits, celles des premiers est environ 50 % suprieure celle des seconds (McFarren et al. 1960). Selon Price et al. (1991), 200 500 g quivalent-STX provoque chez lhomme des symptmes PSP lgers (e.g. paralysie), 500 2000 g des symptmes modrs et des doses suprieures 2000 g sont ltales. Une dose minimale de 2 g.kg-1, pour laquelle on observe des effets non nocifs (DMENO), a t identifie partir dun ensemble de donnes de la littrature recensant les cas dintoxications chez lhomme couvrant un large spectre de personnes (ge, sexe, ), et partir dune intoxication niveau moyen rversible (FAO/IOC/WHO 2004).

1.2.2.4. Autres toxicits

Les donnes de toxicits chronique, sub-chronique, de reprotoxicit et de cancrognse font dfaut. Ltude de Repavich et al. (1990) signale un effet gnotoxique (cassure de chromatides) avec de la nosaxitoxine sur des lymphocytes humains. Cependant la concentration en toxine utilise nest pas connue.

1.2.2.5. Conclusions
Une dose minimale, pour laquelle on observe des effets non nocifs, de 2 g.kg-1 a t identifie partir dun ensemble de donnes de la littrature recensant les cas dintoxications chez lhomme. Suite la rcente consultation dexperts FAO/IOC/WHO en septembre 2004 sur les phycotoxines retrouves dans les mollusques bivalves, une dose de rfrence aigu de 0,7 g.kg-1 dquivalent-STX a t dtermine pour ce type de composs en appliquant un facteur de scurit de 3 la dose de 2 g.kg-1. Tous les autres aspects toxicologiques sont insuffisamment documents, pour ces toxines, notamment les effets chroniques et aucune valeur de rfrence chronique na pu tre tablie.

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1.3. Les molcules effets irritants

Les effets irritants des molcules provenant de cyanobactries sont peu documents. Des cyanotoxines effets irritants ou allergiques ont t identifies en milieux marin et saumtre : il sagit de laplysiatoxine, de la dbromoaplysiatoxine et de la lyngbyatoxine (Mynderse et al. 1977, Cardellina et al. 1979). La prsence de ces toxines en eau de mer provoque, chez le baigneur, des allergies et des irritations svres, connues sous le nom de dmangeaison du baigneur . Ces toxines se sont galement rvles tre de puissants promoteurs de tumeurs (Fujiki et al. 1990). En revanche, en eau douce, aucune de ces toxines na t identifie jusqu nos jours. Nanmoins, des phnomnes dirritations lis la baignade dans des plans deau douce contamins par des cyanobactries ont t rapports et confirms par une approche pidmiologique. En effet, ltude de Pilotto et al. (1997) a montr que la frquence des symptmes dirritation de la peau et des oreilles survenus chez les individus ayant pratiqu des activits aquatiques dans une eau contamine par des cyanobactries (> 5 000 cellules.mL-1) tait corrle la quantit de cyanobactries et au temps pass dans leau. Plusieurs tudes ont cherch identifier lagent causal. Ainsi, Trkn et al. (2001) ont mis en vidence, en utilisant des tests toxicologiques de rfrence, des effets allergiques et dirritation plus ou moins importants avec des chantillons naturels defflorescences monospcifiques (Anabaena, Aphanizomenon, Microcystis et Cylindrospermopsis). En revanche, des souches axniques galement testes dans cette tude (Anabaena, Oscillatoria et Microcystis), ntaient pas allergnes. Dans une tude plus rcente, Pilotto et al. (2004) nont pas pu tablir de relation dose dpendante, en appliquant des patchs contenant des cyanobactries des volontaires. De plus, ni les tudes de Pilotto et al. (1997, 2004), ni ltude de Trkn et al. (2001) nont permis didentifier avec certitude lagent causal. lheure actuelle, trois hypothses sont avances pour expliquer les effets irritants ou allergiques observs aprs la baignade ou la pratique de sports nautiques dans les plans deau douce. Il pourrait sagir : de cyanotoxines non identifies ; de LPS de cyanobactries ; dautres molcules irritantes ou allergniques associes aux cyanobactries. En conclusion, des phnomnes dirritation et dallergie ont t observs chez des individus ayant pratiqu la baignade ou des sports aquatiques dans des eaux contamines par des cyanobactries. Cependant, en eau douce, le ou les agents responsables de ces phnomnes nont pas t identifis. La mise en place dun programme de recherche destin identifier lagent causal est donc ncessaire.

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Tableau III-VI : Tableau rcapitulatif des valeurs toxicologiques rpertories. Les valeurs toxicologiques retenues comme valeurs repres sont en gras.
Valeurs Repres DSENO = 40 g.kg-1.j-1 (souris, gavage, 13 semaines) MC-LR Extrait de Microcystis aeruginosa MC-LR Extrait dA. flos-aquae MC-LR Extrait dA. flos-aquae Culture (C. raciborskii) Extrait acellulaire (C. raciborskii) CYN Anatoxine-a Anatoxine-a partiellement purifie Anatoxine-a quivalent-STX DMENO = 100 g.kg-1.j-1 (porc, eau de boisson, 44 jours) DMENO = 50 g.kg-1.j-1 (rat, eau de boisson, 28 jours) DSENO = 333 g.kg-1.j-1 (souris, alimentation, 43 jours) DSENO = 600 g.kg-1.j-1 (souris, gavage, 10 jours) DSENO = 333 g.kg-1.j-1 (souris, alimentation, pendant la gestation et la lactation) DSENO = 10 g.kg-1.j-1 (souris, gavage, 14 jours) DSENO = 150 g.kg-1.j-1 (souris, eau de boisson, 90 jours) DSENO = 30 g.kg-1.j-1 (souris, gavage 1 fois/J, 11 semaines) DSENO = 98 g.kg-1.j-1 (souris, gavage, 28 jours) DSENO = 510 g.kg-1.j-1 (rat, eau de boisson, 49 jours) DSENO = 2,46 mg.kg-1.j-1 (souris, gavage, 10 jours) DSNEO = 2 g.kg-1 (cas dintoxications chez lhomme) Toxines Sources Fawell et al. (1994, 1999) Falconer et al. (1994) Heinze (1999) Schaeffer et al. (1999) Fawell et al. (1994, 1999) Schaeffer et al. (1999) Shaw et al. (2000) Shaw et al. (2000) Humpage et Falconer (2003) Fawell et al. (1999) Astrakan et al. (1980) Fawell et al. (1999) FAO/IOC/WHO (2004)

Toxines

Toxicit

Subchronique

Microcystines

Embryotoxicit Tratogense

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Cylindrospermopsine

Subchronique

Subchronique

Anatoxine-a

Embryotoxicict Tratognse

Saxitoxine

Aigu

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Points retenir Trois principaux types de toxicit sont associs aux cyanotoxines : lhpatotoxicit, la neurotoxicit et, de manire moins tablie, la dermatotoxicit. Des diffrences de toxicit existent entre les variants dune mme famille de toxines. Dune faon gnrale, la toxicit des cyanotoxines par voie orale est plus faible que par voie intrapritonale. Pour la microcystine-LR, la DL50 est comprise entre 5 mg.kg-1 et 10,9 mg.kg-1 par voie orale alors quelle est comprise entre 25 g.kg-1 et 150 g.kg-1 par voie intrapritonale. La toxicit aigu a t value pour les hpatotoxines (microcystines, nodularine-R et cylindrospermopsine) ainsi que pour les neurotoxines (anatoxines, saxitoxines). Quelques tudes chez lanimal ont permis didentifier des effets subchroniques et chroniques de la microcystine-LR. Pour les nodularines, la cylindrospermopsine et les neurotoxines (anatoxines, saxitoxines), ces effets restent tudier. Pour la microcystine-LR, la dose sans effet nocif observ de 40 g.kg-1.j-1 en exposition subchronique peut tre retenue comme valeur toxicologique repre. LOMS a dfini une DJT pour une exposition chronique de 0,04 g.kg-1.j-1 partir de cette valeur. La dose sans effet nocif observ de 30 g.kg-1.j-1 pour la cylindrospermopsine, obtenue en exposition subchronique, peut tre retenue comme valeur toxicologique repre. Pour les anatoxines, seule lanatoxine-a a fait lobjet de quelques tudes de toxicit subchronique. Cependant, compte tenu de la qualit de ces tudes, aucune valeur toxicologique repre na pu tre identifie. Pour les saxitoxines, une valeur toxicologique repre de 2 g.kg-1 a t identifie partir dun ensemble de donnes de la littrature recensant les cas dintoxications chez lhomme. Cette valeur a t retenue par un groupe dexperts de la FAO pour driver une valeur de rfrence aigu de 0,7 g.kg-1 (facteur de scurit de 3 applique la valeur toxicologique repre). La cancrogense a t insuffisamment tudie pour les cyanotoxines. Les tudes disponibles montrent que la microcystine-LR et la nodularine sont des substances potentiellement cancrognes par effet de promotion tumorale. Il existe de fortes prsomptions quant la gnotoxicit de la nodularine. Pour la microcystine-LR, le potentiel gnotoxique nest pas clairement tabli. Les composs responsables des effets irritants restent identifier. En conclusion, les connaissances sur le devenir des cyanotoxines dans lorganisme humain et animal (absorption, distribution, mtabolisme et excrtion) et leurs proprits toxiques sont trs parcellaires et de nombreuses tudes seront ncessaires pour caractriser le risque que peuvent prsenter ces substances. Lacquisition de donnes toxicologiques est limite par labsence ou le cot lev des toxines purifies.

Dans un souci daide la dcision pour le gestionnaire, au regard des donnes disponibles et en lattente de nouvelles tudes de toxicologie, des valeurs toxicologiques de rfrence peuvent tre retenues titre provisoire, en plus de la DJT de 0,040 g.kg-1.j-1 et de la concentration maximale rglementaire dans leau de boisson de 1 g.L-1, dj fixe par lOMS pour la microcystine-LR : Microcystine-LR Valeur toxicologique de rfrence aigu : 2,5 g.kg-1 (soit 150 g pour un adulte de 60 kg, 50 g pour un enfant de 20 kg et 12,5 g pour un nourrissons de 5 kg). Cas des mlanges de microcystines : il est conseill dadditionner les rsultats obtenus pour les diffrentes microcystines et de comparer la valeur de rfrence aigu ou la DJT. Cylindrospermopsine Valeur toxicologique de rfrence chronique : 0,01 g.kg-1.j-1. Concentration maximale tolrable dans leau de boisson : 0,3 g.L-1 calcule sur la base dun adulte de 60 kg, consommant 2 litres deau par jour et en considrant que lapport de leau reprsente 80 % des apports totaux en toxine. Saxitoxines Valeur toxicologique de rfrence aigu : 0,7 g.kg-1. Concentration maximale tolrable dans leau de boisson : 3 g.L-1 en quivalent saxitoxine.

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2. pidmiologie des intoxications par les cyanotoxines

2.1. Intoxications animales
Le premier cas publi dintoxication animale par les cyanotoxines remonte au XIXe sicle. Francis (1878) rapporte lintoxication mortelle danimaux domestiques (bovins, ovins, chevaux, porcs et chiens) par ingestion dune cume de Nodularia spumigena en Australie. Depuis, de nombreux cas dintoxications aigus affectant des animaux domestiques ou sauvages (poissons, canards, foulques et autres oiseaux deau, rats musqus, visons, moufettes et rhinocros) ont t dcrits sur tous les continents (Chorus & Bartram 1999, Briand et al. 2003). Lapparition de cas dintoxication par les cyanotoxines en conditions naturelles de production et dexposition alimente la problmatique des risques pour la sant humaine. Ces intoxications signifient que des concentrations environnementales ralistes de cyanotoxines sont susceptibles de produire des effets aigus sur la sant des animaux voire des humains.

2.1.1. Intoxications hpatiques

Les signes de toxicit hpatique sont les plus frquemment dcrits lors des autopsies. Dans les cas les plus rcents, lingestion de cyanobactries et les lsions caractristiques du foie ont pu tre mises en vidence. Les cyanobactries qui ont t impliques le plus frquemment dans ces pisodes sont les suivantes (Chorus & Bartram 1999) : Microcystis aeruginosa ; Nodularia spumigena ; Planktothrix agardhii (ex-Oscillatoria agardhii) ; Cylindrospermopsis raciborskii. Les toxines impliques de faon certaine dans des cas dintoxication hpatique sont les suivantes : nodularine ; microcystines ; cylindrospermopsines. Il serait intressant daccorder une importance plus grande aux lsions observes en parallle du syndrome prdominant lors de telles intoxications. Elles peuvent tre indicatives dactivits secondaires des toxines. En particulier, la cylindrospermopsine (Thomas et al. 1998, Saker & Eaglesham 1999) prsente lors dintoxication naturelle une activit sur le systme cardiovasculaire (hmorragies picardiques et myocardiques), confirme lors dtudes toxicologiques sur des modles animaux (Seawright et al. 1999).

Mortalit de bovins en estive sur les alpages suisses (Mez et al. 1997) Trois principaux types de toxicit sont associs aux cyanotoxines : lhpatotoxicit, la neurotoxicit et, de Au cours des deux dernires dcades, plus de 100 bovins ont t trouvs morts au pturage sur un nombre limit dalpages du comt des Grisons en Suisse. Les mortalits dues une ncrose aigu du foie apparaissaient de mi-aot mi-septembre, en gnral suite des priodes de temps sec et chaud. La clinique des animaux trouvs en vie comprenait parfois des signes neurologiques. Les autopsies montraient, outre les lsions hpatiques, des atteintes du systme cardiovasculaire. Les petits lacs glaciaires oligotrophes relis par des ruisseaux constituent la seule source dabreuvement des troupeaux. Des tapis cyanobactriens se forment dans ces points deau et tendent saccumuler sur la grve. Les auteurs ont mis en vidence la production de microcystines par les souches dOscillatoria limosa et O. tenuis constitutives de ces tapis. Sur des donnes convergentes, ils concluent lintoxication du btail par ces cyanotoxines, sans carter la prsence concomitante dune neurotoxine.

2.1.2. Intoxications neurologiques

Daprs Chorus et Bartram (1999), les autres mortalits danimaux frquemment attribues des cyanobactries correspondent des intoxications neurologiques aigus menant la mort par paralysie respiratoire. Elles ont concern des animaux domestiques (bovins, ovins, chiens) ou sauvages (oiseaux deau). Les toxines impliques sont : anatoxine-a et -a(s) ; saxitoxines.

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Les cyanobactries associes comprenaient les espces suivantes : Anabaena flos-aquae ; Anabaena circinalis ; Aphanizomenon flos-aquae ; Cylindrospermopsis raciborskii ; Oscillatoria sp. ; Phormidium favosum.

Intoxications de chiens par lanatoxine-a en cosse (Edwards et al. 1992) En juillet 1990 et 1991 plusieurs chiens sont morts aprs stre baigns ou avoir bu prs de la berge du Loch Insch. La mort se produisit dans les 30 minutes suivant lapparition des symptmes, qui voquaient une neuro-intoxication. Le lac ne prsentait pas defflorescence flagrante cette priode, mais les abords de la berge taient recouverts par des tapis de cyanobactries benthiques du genre Oscillatoria. Les extraits obtenus partir des tapis bactriens et des contenus stomacaux des chiens morts se sont rvls trs neurotoxiques lors du test souris et contenaient de lanatoxine-a. La souche de cyanobactries isole du lac et mise en culture produisait galement cette toxine. Les auteurs nont pas trouv de microcystines dans ces extraits mais ncartent cependant pas la prsence possible dautres cyanotoxines masques par leffet trs rapide de lanatoxine-a.

2.1.3. Autres intoxications

Si les cas dintoxications aigus sont les plus frquemment rapports, au moins un pisode de mortalit diffre a t signal. Il concerne des moutons intoxiqus par Microcystis aeruginosa. Les signes cliniques sont ceux dune insuffisance hpatique associe une photosensibilisation secondaire, qui se manifeste par des ractions semblables de trs svres coups de soleil (Carbis et al. 1995). Il est remarquable que les ruminants soient victimes de ces intoxications au mme titre que les animaux monogastriques. Ceci suggre que labsorption des cyanotoxines est particulirement rapide par rapport leur transformation par les microorganismes du rumen ou que cette transformation na pas lieu. Les mortalits de poissons lors defflorescences de cyanobactries peuvent tre dues la dpltion nocturne en oxygne dissous et ne doivent pas tre systmatiquement imputes la prsence de toxines. Labsence dobservations concernant des effets long terme sur la sant des animaux est souligner. Cependant ceci ne permet pas de conclure labsence deffets sur la sant lors dexpositions chroniques de faibles concentrations de toxines. En effet, aucune tude pidmiologique ne semble avoir t conduite sur des populations soumises une telle exposition. Codd (1983) rapporte quun sondage non publi ralis par plusieurs scientifiques sur 26 pays dEurope indique que la moiti dentre eux ont connu des cas dintoxications animales avres ou probables par les cyanotoxines.

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Tableau III-VII : Intoxications animales en Europe (hors France) documentes dans la littrature scientifique.
Lieu, anne (rfrence) Royaume-Uni, 1989 (Done & Bain 1993) Cyanobactrie et/ou toxine implique ou suspecte M. aeruginosa Cas rapports Contexte de lintoxication

Mortalits de 15 chiens et 20 moutons. Abreuvement dans le lac affect Ncrose hpatique accompagne par une efflorescence et mort dhmorragies, nphrose tubulaire dans les prs proximit. chez deux moutons autopsis. 3 chiens morts en 1990. Promenade le long de la rive, 1 chien mort en 1991, 1 chien avec signes abreuvement ou baignade selon neurologiques, hypersalivation guri les cas. aprs traitement vomitif Neuro-intoxications avec 2 chiens Consommation sur la rive de vase morts, 2 chiens guris Identification et de matelas dalgues dcolls des cyanobactries et des toxines dans du fond. les chantillons environnementaux et lestomac des chiens. Mortalits de veaux et de gnisses en alpage (plus de 100 sur la priode). Clinique mixte incluant des symptmes neurologiques et des signes dhpatotoxicit aprs autopsie. Abreuvement dans des mares ou des petits torrents, caractriss par la prsence de matelas sur le fond ou flottant la surface. Contamination par lalimentation ou par immersion.

Ecosse, 1990 et 1991 (Gunn et al. 1992), Edwards et al., 1992) Ecosse, 1992 (Codd et al. 1992)

Oscillatoria benthique Anatoxine-a, hpatotoxine ?

Oscillatoria benthique Anatoxine-a

Suisse, annes 70 95 (Mez et al. 1994), Mez et al., 1997, (Naegeli et al. 1997) Italie, 1997 (Giovannardiet al. 1999)

Oscillatoria benthique

Oscillatoria et Aphanizomenon Mortalits de poissons et de mollusques. Contamination dominants, Anabaena de la chair de ces deux classes Saxitoxine. danimaux par la saxitoxine.

2.1.4. Intoxications animales dcrites en France

En France, de rares pisodes de mortalits danimaux en relation avec une exposition aux cyanobactries ont t recenss dans le cadre du Rapport final de la Direction des Services vtrinaires (DSV) de Lozre sur les risques induits par les cyanobactries deau douce (Sarazin et al. 2000) command par le Ministre en charge de lenvironnement et la Direction Gnrale de la Sant (DGS). Selon lenqute EFFLOCYA, des mortalits de poissons et doiseaux sont apparues sur 22 % des sites affects par une efflorescence. Il na pas pu tre dmontr que ces mortalits taient spcifiquement dues des toxines de cyanobactries. Lvaluation de la toxicit de lefflorescence na pas systmatiquement t ralise et les examens vtrinaires raliss sur certains sites nont pas permis de dterminer la cause des mortalits. Aucune mortalit de bovins ou dovins na t recense. Par ailleurs, le rapport regroupe dautres travaux de suivis defflorescences. Au lac de Villerest, affect en 1992 par une efflorescence Microcystis aeruginosa, un chien est mort dune ncrose hpatique la suite dune baignade. En 1998, les concentrations en microcystine-LR ont atteint 40 g.L-1 dans les cellules et 2 g.L-1 pour la fraction dissoute. Pendant les ts 2002 et 2003 des mortalits suspectes de chiens et de chevreuils ont t observes en Lozre. Ainsi en 2002, des 26 chiens qui ont prsent les signes dune intoxication neurologique, 20 sont morts. En 2003, ce sont 11 chiens qui ont montr des symptmes dintoxication et 6 animaux en sont morts. Lhypothse dune intoxication par malveillance ou par exposition accidentelle des produits usage agricole a t carte aprs lenqute de gendarmerie et la recherche dans lestomac des animaux des produits toxiques pouvant tre incrimins, notamment les organophosphors et les carbamates. En effet des inhibiteurs des cholinestrases qui nont pu tre identifis ont t dtects dans lestomac de plusieurs chiens. Par ailleurs, des cyanobactries potentiellement neurotoxiques sont identifies parfois en trs grande quantit sur les sites o les chiens se sont baigns. Lanatoxine-a est identifie dans un chantillon prlev plusieurs semaines aprs les mortalits. Un faisceau de prsomptions permet dincriminer ces organismes, mme si lidentification formelle de toxines dans lestomac des animaux a chou (Bertrand et al. 2004). Pendant lt 2003, trois chiens ont prsent des troubles nerveux aprs stre baigns dans une rivire du Jura et deux sont morts. Les contenus stomacaux de deux chiens contenaient du phytoplancton dont des genres de cyanobactries potentiellement toxiques. Les chantillons environnementaux ont rvl la prsence majoritaire de cyanobactries benthiques et priphytiques. La recherche des toxines a montr labsence de microcystine ou de saxitoxine, mais la prsence danatoxine-a. Lanatoxine-a a galement t identifie dans le foie dun des chiens. Une souche de Phormidium favosum, isole des prlvements environnementaux, a t identifie comme produisant de lanatoxine-a (Gugger et al. 2005).

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Lobservation de mortalits danimaux est parfois propose comme critre dalerte pour la surveillance de la toxicit des efflorescences de cyanobactries. Lexamen des donnes recueillies au cours de lenqute EFFLOCYA montre que des problmes ont t signals chez lhomme (dermatoses, conjonctivites, problmes respiratoires) en labsence de mortalits danimaux. Ce critre ne semble donc pas assez sensible pour assurer la protection des populations. Lobservation de mortalits animales reste cependant un indicateur de lurgence des mesures prendre et surtout un indicateur de lexistence ou de la persistance de problmes de toxicit.

2.2. Intoxications humaines

2.2.1. Effets sur la sant court terme
Les gastro-entrites et les affections hpatiques constituent la pathologie la plus cite parmi les cas dintoxications humaines par les cyanotoxines (tableau III-VIII).

Tableau III-VIII : Cas rapports ou suspects dintoxications par cyanotoxines dans leau de distribution.
Lieu, anne (rfrence) Ohio River, USA, 1931 (Tisdale 1931) Cyanobactrie et/ou toxine implique ou suspecte Cas rapports Contexte de la contamination Traitement apport leau (au moment de lpidmie sauf si prcis pour la combattre) Dveloppement dune prolifration sur un bras du fleuve, lors dune scheresse exceptionnelle. Prchloration, sdimentation, filtration, chloration, sulfate de cuivre, aration, charbon activ, permanganate, ammonium, dchloration : tous inefficaces pour rduire le got, lodeur, ou la teneur en toxines. Dveloppement saisonnier dune prolifration. Cas survenus dans les 5 jours suivant le traitement de la ressource au CuSO4. Traitement : filtration, chloration. Cas survenus dans la semaine ayant suivi le traitement de la ressource au CuSO4. Traitement : prchloration, clarification au sulfate de cuivre, filtration, chloration. Modification des paramtres biologiques aprs le traitement de la ressource au CuSO4 (1 ppm). Dveloppement dune immense prolifration dans le rservoir. Evnement survenu aprs une priode de scheresse. Traitement municipal de leau : dcantation, filtration sur sable, chloration. A lunit de dialyse : filtration sur sable, charbon, rsine changeuse dions et filtration micropore .

Prolifration de cyanobactries Gastro-entrites.

Harare, Zimbabwe, 1960-1965 (Zilberg 1966) USA (Lippy & Erb 1976)

Microcystis aeruginosa Plus de 100 000 cell.L-1 des genres Schizotrix, Plectonema, Phormidium, Lyngbya Cylindrospermopsis raciborskii cylindrospermopsine

Gastro-entrites saisonnires chez lenfant. Gastro-entrites touchant 62% de la population raccorde sur 5 jours.

Palm Island, Australie, 1979 (Bourke et al. 1983)

Hpato-entrites, 148 hospitalisations (enfants surtout).

Armidale, Australie, 1981 (Falconer et al. 1983a) Itaparica Dam, Brsil, 1988 (Teixeira et al. 1993) Caruaru, Brsil, 1996 (Jochimsen et al. 1998, Pouria et al. 1998)

Microcystis

Plusieurs gastro-entrites. Affections du foie. 2 000 gastro-entrites sur 42 jours, dont 88 mortelles (surtout des enfants). Unit dhmodialyse : 166 cas de symptmes neurologiques et des signes dhpatotoxicit, 60 morts.

Anabaena et Microcystis (eau brute : 1104 9755 colonies.mL-1)a Aphanizomenon spp. Oscillatoria spp. Microcystines

la conversion en cellules.mL-1 dpend de la taille des colonies. Dans une telle prolifration, un minimum de 100 cellules par colonie peut tre attendu (Chorus & Bartram 1999).

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Les intoxications aigus rpertories dans la littrature scientifique concident toutes soit avec la snescence naturelle dune efflorescence, soit avec la destruction dune efflorescence par application dun traitement algicide. Ces deux mcanismes ont pour effet la libration des toxines intracellulaires. Ceci peut conduire des intoxications caractre pidmique si les dispositifs de traitement de leau ne permettent pas dliminer les toxines dissoutes. Il est noter que la littrature ne rapporte pas de cas dintoxication individuelle, ceux-ci passent probablement inaperus dans lensemble des gastro-entrites idiopathiques. Les comptes-rendus de certains pisodes dintoxication contiennent des informations pidmiologiques prcieuses, ils sont dvelopps ci-dessous.

2.2.1.1. Troubles intestinaux suite une exposition orale

Tisdale (1931) relate le dveloppement dune pidmie de troubles intestinaux dans la ville de Charleston, USA. Cette pidmie, qui na pu tre attribue aucun agent infectieux, a concid avec lenvahissement de la ressource en eau par des cyanobactries lorigine dun got et dune odeur trs dsagrables. Les autorits sanitaires ont press les habitants de boire cette eau, dont les paramtres microbiologiques taient conformes aux critres dfinis pour leau potable, plutt que dutiliser des sources ou des puits de qualit douteuse. Lpidmie a touch plusieurs milliers de personnes, soit 10 15 % de la population des quartiers aliments par cette ressource, pendant la semaine o lodeur et le got de leau potable taient les plus prononcs. La clinique est celle dune gastro-entrite dapparition soudaine et afbrile, touchant plutt les personnes ges de plus de 10 ans. Au Brsil,Teixera et al. (1993) attribuent une pidmie de gastro-entrite la consommation de leau du barrage dItaparica dans la rgion de Bahia. Environ 2000 cas, dont 88 se rvlrent mortels et touchrent principalement des enfants, ont t enregistrs sur une priode de 42 jours dans les seuls quartiers aliments par cette ressource. Ni agent infectieux, ni mtaux lourds nont pu tre mis en vidence dans leau, mais des cyanobactries appartenant aux genres Anabaena et Microcystis taient prsentes dans leau des concentrations de lordre de 100 plus de 900 000 cellules par mL. En Australie, Falconer et al. (1983a) ont montr lapparition de troubles hpatiques suite au traitement algicide appliqu sur une prolifration de Microcystis produisant de la microcystine-YM dans le rservoir dArmidale. Ltude pidmiologique rtrospective souligne laugmentation significative des gamma-glutamyl transfrases sanguines dans le groupe consommant leau du rservoir par rapport au groupe utilisant dautres ressources en eau potable. Cette enzyme srique constitue un indicateur sensible des lsions hpatiques. Il est noter que laugmentation moyenne de cette enzyme traduisait une atteinte hpatique mineure, mais quelques individus dans la population tudie ont prsent des augmentations trs importantes, indiquant des lsions hpatiques substantielles. Toujours en Australie, une pidmie plus grave, le Palm Island Mystery Disease , est apparue en 1979 aprs le traitement dun rservoir avec du sulfate de cuivre. Les plaintes des consommateurs pour mauvais got et odeur dsagrable de leau ont motiv lintervention des autorits. Dans la semaine suivant le traitement, de nombreux enfants ont dvelopp une gastro-entrite svre. Au total 140 enfants et 10 adultes ont d tre hospitaliss. La clinique, outre une atteinte hpatique, indiquait des lsions rnales tendues. La surveillance de ce site a permis dattribuer cette intoxication la production de cylindrospermopsine (CYN) par Cylindrospermopsis raciborskii (Hawkins et al. 1985). Ces deux derniers incidents soulignent limportance des suivis environnementaux fins dans le cas de traitements systmatiques de retenues eutrophes par des algicides. Le caractre pidmique de cette srie dintoxication souligne les limites des systmes de traitement de leau concerns pour liminer les cyanotoxines. La sensibilit individuelle, associe peut-tre une exposition plus importante, semble prdisposer certains individus dvelopper des formes aggraves dintoxication. Cependant lobservation dune incidence des troubles de lordre de 10 60 % selon les pisodes indique une insuffisance gnrale des procds de traitement courants, assurant par ailleurs une bonne conformit aux critres sanitaires alors en vigueur. La spcificit de ces pidmies rside dans lintoxication par des toxines libres, rsultant de la snescence naturelle ou de la destruction brutale des efflorescences. Lanalyse de ces vnements justifie daccorder une attention particulire aux procds de traitement capables dliminer les cyanotoxines libres ou les cyanobactries sans provoquer leur lyse.

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2.2.1.2. Troubles de sant suite une exposition parentrale par dialyse

En fvrier 1996, le centre de dialyse rnal de Caruaru au Brsil a t aliment avec de leau brute uniquement chlore. Ceci a conduit lintoxication par voie parentrale de 126 personnes en traitement.Tous les patients ont prsent des symptmes neurologiques dapparition prcoce. Par la suite 108 patients, soit 85 %, ont dvelopp des lsions hpatiques manifestes et 60 personnes sont dcdes des suites de cette intoxication. Outre latteinte hpatique caractristique, les patients ont manifest prcocement des symptmes neurologiques graves : malaises, troubles auditifs et visuels, convulsions, ainsi que des dsordres hmatologiques, biochimiques et cardiovasculaires distincts des complications rsultant de linsuffisance hpatique (Jochimsen et al. 1998, Pouria et al. 1998). Les toxines en cause, qui ont t identifies dans les prlvements de foie et de sang, sont les microcystines -YR, -LR et -AR. La concentration moyenne en microcystine des foies des personnes dcdes est de 223 ng.g-1. Lutilisation de donnes de toxidynamie exprimentale produit une concentration estime de leau utilise de 19,5 g.L-1, soit une valeur 20 fois suprieure au seuil retenu pour leau de boisson. Une telle concentration dans le milieu est par ailleurs tout fait vraisemblable (Carmichael et al. 2001). Considrant le potentiel de promotion tumorale des microcystines, les auteurs concluent en outre que les survivants cette exposition prsentent un risque suprieur de dvelopper des cancers du foie. Cet accident souligne la vulnrabilit particulire des dialyss vis--vis de lexposition aux cyanotoxines par rapport aux consommateurs deau dalimentation. Par ailleurs davantage dimportance devrait tre accorde aux symptmes neurologiques et cardiovasculaires observs chez ces patients exposs aux microcystines. Les activits hpatotoxiques et promotrices de cancer de ces molcules ont jusqu aujourdhui focalis lattention des chercheurs au dtriment de ces autres modes daction.

2.2.1.3. Troubles de sant lis la baignade ou des activits nautiques

Des problmes de sant lis la baignade ont t rapports et sont consigns dans lencadr suivant.

1959 : Canada - En dpit des avertissements et de la mort de btail, treize personnes qui staient baignes dans une eau infeste par des cyanobactries ont t malades (nause, douleurs musculaires, maux de tte, diarrhe). Les selles des malades contenaient des cellules de Microcystis spp. et dAnabaena circinalis (Dillinger & Dehnel 1960). 1989 : Angleterre - Dix soldats prsentrent des symptmes dintoxication (vomissements, diarrhe, douleurs abdominales, maux de gorge, cloques aux lvres) aprs avoir nag ou fait du cano dans une eau affecte par une importante efflorescence Microcystis spp. Deux prsentrent une pneumonie svre et ncessitrent des soins intensifs (Turner et al. 1990). 1991 : Australie - Deux cas de conjonctivite et un cas druption cutane attribus la baignade dans une efflorescence dAnabaena circinalis (Christopher et al. 1991). 1991 : Australie - Deux adolescentes sont victimes de gastroentrite et de myalgie aprs stre baignes dans une eau contamine par Anabaena (Williamson & Corbet 1993). 1995 : Australie - Ltude pidmiologique de Pilotto et al. (1997) montre que des problmes sanitaires tels que des irritations des yeux, de la peau et des oreilles, de la fivre, des ulcres buccaux, des diarrhes, des vomissements et des tats grippaux, sont survenus aprs des activits aquatiques.

Voie cutane La principale voie dexposition au cours dactivits aquatiques est le contact cutan. Il a t dcrit dans la littrature, ou rapport, des cas dirritations cutanes, oculaires ou nasales accompagnes ou non de signes digestifs, voire de fivre, chez des personnes stant baignes ou ayant pratiqu certaines activits nautiques dans des tendues deau avec une prolifration algale (Billings 1981, Turner et al. 1990, Pilotto et al. 1997). La publication de Trkn et al. (2001) qui prsente des tests dirritation cutane et oculaire raliss avec des mthodes de rfrence en toxicologie, sur le cobaye et le lapin, montre un effet irritant et allergne de certaines cyanobactries, sans que lon puisse relier ces effets la quantit de toxine produite. Leffet allergne le plus important a t obtenu avec un chantillon naturel dAphanizomenon non toxique, alors que les chantillons toxiques de Microcystis, taient moins allergnes. Lapplication dune concentration leve de MC-LR pure (1,5 g.mL-1), ne provoque que des effets allergnes lgers sur 22 % des animaux (Trkn et al., 2001). Chez lhomme, les travaux de Pilotto et al. (2004), bass sur lapplication de patch des volontaires, ont montr quune faible proportion dindividus (de 20 24 %) exposs des monocultures non axniques de cyanobactries

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(Microcystis aeruginosa, Anabaena circinalis, Nodularia spumigena, Aphanocapsa incerta et Cylindrospermopsis raciborskii), prsentait des irritations de la peau des concentrations couramment rencontres dans les eaux douces, de lordre de 5 000 300 000 cellules.mL-1 (Pilotto et al. 1997). Il sagit de manifestations modres qui se rsolvent rapidement sans aucun traitement. Cette tude na pas permis dtablir lexistence dune rponse dose dpendante. De plus, les souches productrices de toxines ntaient pas plus irritantes que celle qui nen produisait pas. Les individus allergiques ntaient pas significativement plus sujets aux irritations de la peau que les autres. Ceci semble en contradiction avec les travaux antrieurs de Heise (1951), Mc Elhenney et al. (1962), Mittal et al., (1979), travaux toutefois raliss avec des tests intradermiques, ce qui correspond moins lexposition occasionne par la baignade. Ces rsultats suggrent quil existe chez certaines cyanobactries des molcules action irritative, voire allergique, sans relation avec les cyanotoxines. Les lipopolysaccharides (LPS), constitutifs de la paroi cellulaire des bactries Gram ngatif, sont suspects dtre lorigine de phnomnes dirritation ou dallergie (Sivonen & Jones 1999). Les LPS des cyanobactries semblent cependant moins toxiques que ceux dautres bactries Gram ngatif (Keleti & Sykora 1982, Raziuddin et al. 1983). Ingestion et inhalation Les deux autres voies dexposition lors dactivits aquatiques sont lingestion accidentelle deau et linhalation darosols (par exemple lors dactivits comme le ski nautique). Malgr ce risque dintoxication, aucun cas de dcs humain associ la baignade na t rapport. Des symptmes de diarrhe, de vomissements, de fivre, de maux de tte et de gorge, de toux sche ont t rapports (Carmichael 1995, Rapala et al. 2005b). Ces signes sont souvent plus tardifs que les irritations cutanes. Des cas de pneumonie ont t attribus la pratique du cano dans une eau contamine par une efflorescence domine par Microcystis aeruginosa productrice de MCLR (Turner et al. 1990). En conclusion, sil est vrai que des effets irritants plus ou moins svres ont t recenss chez lhomme, en eau douce, lagent responsable na pas pu tre mis en vidence. En revanche, de vritables molcules irritantes (aplysiatoxine, dbromoaplysiatoxine et lyngbyatoxine) responsables de la dmangeaison du baigneur ont t identifies en milieu marin (voir chapitre I). lheure actuelle, concernant lagent causal des effets irritants, trois hypothses sont considres comme possibles : il sagirait de cyanotoxines non-identifies, de LPS de cyanobactries ou dautres molcules irritantes ou allergniques associes aux cyanobactries. La mise en place dun programme de recherche destin confirmer ou infirmer ces hypothses serait souhaitable.

2.2.2. Effets sur la sant long terme

Il sagit ici dvaluer les effets long terme : risque chronique ou subchronique. Concernant lexposition ponctuelle une dose subltale de cyanotoxines, il nexiste actuellement aucune donne sur les consquences pour la sant humaine. Carmichael et al. (2001) prconisent le suivi attentif des survivants de lintoxication par dialyse de Caruaru. Ils considrent que cet accident malheureux pourrait ainsi fournir des informations prcieuses sur les effets long terme dune exposition ponctuelle dose subltale aux microcystines, actuellement suspectes dtre des promoteurs tumoraux.

2.2.2.1. Risque chronique et cancer

Quatre tudes cologiques spatiales qui traitent du sujet ont t analyses : deux tudes chinoises publies (Yu et al. 1989, Ueno et al. 1996), dont lobjectif est dtablir une corrlation entre lincidence des cancers primitifs du foie (trs leve dans certaines rgions de Chine) et les diffrentes ressources en eau utilises pour la production deau potable ; galement de clarifier le rle possible des microcystines dans cette maladie tiologie multiple ; une tude amricaine (Fleming et al. 2002) qui cherche associer grce un Systme dInformation Gographique, la localisation des cas de cancers primitifs du foie et la nature des ressources en eau ; une tude chinoise (Zhou et al 2002) qui tudie lassociation entre les cancers colorectaux et le niveau de contamination par les MCs des diffrentes ressources utilises pour leau de boisson. La quantification du rle de leau et en particulier des cyanotoxines dans les cancers primitifs du foie est difficilement dissociable dautres facteurs de risques telles que les aflatoxines.

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 Ltude de Yu et al. (1989) tablit une relation entre la nature des aliments ingrs, les aflatoxines, leau de boisson et le cancer primitif du foie. Le rle des aflatoxines sappuie sur un protocole danalyse et dexposition dtaill (concentration en aflatoxines B1 et M1 mesures dans les aliments et les urines des consommateurs) et les rsultats permettent dtablir une relation dose-rponse linaire entre aflatoxines et cancer du foie. Le rle de leau est estim en comparant qualitativement la nature de la ressource en eau et lincidence des cancers primitifs du foie. Les taux de mortalit de cancers primitifs du foie sont de lordre de 100, 91 et 4 cas pour 100 000 personnes dont leau dalimentation provient respectivement de mares / fosss, de rivires ou de puits profonds. Devant ce mme constat de lincidence leve des cancers du foie en Chine, Ueno et al. (1996) recherchent quantifier le rle de leau, facteur de risque supplmentaire prsum (en complments des facteurs de risques dj identifis : aflatoxines et virus de lhpatite B). Une importante campagne danalyses visant estimer la contamination de leau en microcystine met en vidence 3 chantillons positifs sur 14 eaux de fosss analyses. Les concentrations en MCs variant de 0,09 0,46 g L-1. Les conclusions de cette tude voquent une synergie potentielle entre aflatoxines et MCs. Ltude amricaine (Fleming et al. 2002) conclut une corrlation statistique non significative entre le risque davoir un cancer primitif du foie et le fait dhabiter dans une zone alimente par une eau de surface (versus eau profonde pour le groupe tmoin). Les mesures des MCs ont t ralises la ressource en eau. Ces trois tudes, dont les rsultats aboutissent sur plusieurs points des conclusions diffrentes, comportent plusieurs sources dincertitudes. Lexposition des populations aux facteurs de risques est le plus souvent difficile reconstituer : dans les tudes chinoises, le protocole est peu dtaill. Il est mentionn que les habitudes de consommation (% eau de surface versus % eau profonde) voluent au cours des 15 annes qui prcdent ces tudes, sans que les consquences naient t envisages sur lestimation de lexposition ; pour ltude amricaine, la mobilit des populations, la consommation de leau du robinet ainsi que les effets des filires de traitement deau potable sur les microcystines nont pas t renseigns, ce qui engendre un risque important derreurs de classement. Concernant les cancers colorectaux, Zhou et al. (2002) mettent en vidence, par une tude pidmiologique sur 408 cas, que lincidence des cancers colorectaux est significativement plus leve chez les sujets buvant de leau provenant de rivires et de mares (RR respectivement de 7,94 et 7,70) par rapport ceux approvisionns par des puits. Ils tablissent de plus une corrlation entre lincidence de ces cancers et la contamination de leau de boisson par la microcystine, les rivires et mares tant les plus contamines. Les auteurs concluent la ncessit de confirmer ltiologie par des tudes complmentaires. lheure actuelle, seules les donnes issues dexprimentations animales constituent une source fiable pour conduire une valuation de risque sanitaire. La parution des rsultats dune tude canadienne dvaluation des risques prsents par la microcystine-LR dans leau dalimentation est surveiller de prs. Le protocole repose sur ltude de loncogense du foie chez le rat, considrant la voie dingestion, le pouvoir promoteur de tumeur ayant dj t prouv chez lanimal par voie parentrale. Labsence de donnes pidmiologiques ou de toxicologie chronique spcifiques de lhomme ne permet pas dcarter lexistence dun risque chronique li lingestion de microcystine. Le cancer primitif du foie est une pathologie pour laquelle la certification des causes de dcs pose des problmes particuliers de validit pour plusieurs raisons (Remontet et al. 2003). Un certain nombre de cancers secondaires du foie (volution mtastasique hpatique de cancers initiaux localiss dans dautres tissus) sont certifis en cancers primitifs du foie, Un sous-enregistrement des cancers du foie est observ dans certaines rgions par manque dargument histologiques. En effet, seuls 10 dpartements nationaux disposent de registres du cancer du foie. Devant le manque dexhaustivit et de prcision dans le recensement des cancers primitifs du foie, consquence dun diagnostic difficile (distinction cancer primitif versus cancer secondaire) et dune mortalit leve de cette pathologie, lutilisation des registres du cancer primitif du foie ne parait pas adapte la mise en place dun programme de surveillance des effets long terme de la microcystine-LR. En conclusion, cette analyse ne fournit pas de donnes suffisantes pour conclure lexistence dun risque long terme pidmiologiquement fond.

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2.2.2.2. Risque chronique et maladies neuro-dgnratives

Dans lIle de Guam, la BMAA a t retrouve concentre jusqu 10 000 fois le long de la chane trophique, des cyanobactries aux chauves-souris (Cox et al. 2003, Murch et al. 2004). Un taux de maladies neurodgnratives (sclrose amyotrophique latrale, Alzheimer, Parkinson) beaucoup plus lev que dans dautres populations et corrl la prsence de la BMAA dans le cerveau des malades a t observ chez les habitants de cette le. Le rservoir protique endogne de neurotoxine permet une libration lente de la BMAA, qui pourrait avoir des effets neurologiques chroniques et rcurrents lchelle de plusieurs annes ou dizaines dannes. Cette toxicit chronique pourrait expliquer la priode de latence observe pour les maladies neurodgnratives de certaines populations vivant Guam (e.g. la population Chamorro). Comme les cyanobactries sont des producteurs primaires la base dun certain nombre de chanes alimentaires, dautres populations humaines que celles de Guam pourraient tre exposes cette neurotoxine. La prsence de BMAA a t observe dans les tissus de cerveau de patients Canadiens atteints de la maladie dAlzheimer (Murch et al. 2004). Selon ces auteurs, la BMAA jouerait un rle chez les patients atteints de maladies neurodgnratives. Un plus grand nombre dtude de patients atteints de ces maladies est raliser pour confirmer cette hypothse.

Points retenir Les intoxications animales par les cyanotoxines sont connues depuis la fin du XIX e sicle. Elles doivent alerter les autorits sanitaires du dveloppement de prolifrations toxiques, mais ne sont pas assez sensibles pour servir dindicateur de la toxicit des prolifrations de cyanobactries. Des intoxications humaines se traduisant par des pidmies de gastro-entrites afbriles dapparition soudaine ont t attribues la prsence de cyanotoxines dans leau de boisson. Les intoxications humaines, via les loisirs nautiques, suspectes tre dorigine cyanobactrienne, se traduisent galement par des cas groups de troubles digestifs et/ou dirritation cutano-muqueuse. Lors des loisirs nautiques, elles surviennent suite lingestion de cyanobactries et/ou de toxines prsentes dans les eaux brutes. Lors dintoxications par leau de boisson, elles sont associes la consommation deau contenant des cyanotoxines libres, qui nont pas t retenues par le traitement ou qui ont t libres au cours du traitement par la lyse des cellules. ce jour, aucune intoxication humaine associe aux cyanotoxines na t documente en France. En revanche, des mortalits de chiens ont t attribues des cyanotoxines. Daprs les donnes pidmiologiques, leau serait le vecteur prpondrant dintoxication de lhomme par les cyanotoxines. Nanmoins dautres sources dexposition doivent tre investigues.

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IV. tat des lieux de la situation franaise

1. Contexte et mise en place dune base de donnes cyanobactries

Afin dalimenter le volet exposition de lvaluation des risques et de fournir aux gestionnaires une image de la situation franaise concernant les prolifrations de cyanobactries, une base de donnes numrique rassemblant des rsultats de prlvements effectus dans diffrentes zones aquatiques en France mtropolitaine et en Corse a t mise en place lAfssa, puis finalise et valide lors de lanalyse des donnes lAfsset. Du fait de labsence dun systme de recueil systmatique de ces donnes, diffrents organismes susceptibles de suivre les cyanobactries ont t sollicits. Parmi les organismes sollicits, la Direction gnrale de la sant, les Agences de leau Adour-Garonne, Artois-Picardie et Rhin-Meuse, Electricit de France (EDF), le Syndicat des producteurs et distributeurs deau (SPDE), la DIREN Bretagne, lUniversit de Rennes 1 et lInstitut interdpartemental des barrages et rservoirs de la Seine (IIBRS) ont accept de fournir les donnes dont ils disposaient. Les informations recueillies se prsentaient sous forme de rapports de synthse ou de rsultats bruts sous format papier ou excel. Cette compilation de donnes ne peut tre considre comme exhaustive, que ce soit sur le plan gographique, chronologique ou des paramtres viss. Qui plus est, en raison de la varit des producteurs de donnes, des objectifs poursuivis, des laboratoires impliqus et des mthodes danalyses mises en ?uvre dont aucune nest normalise la date de rdaction du rapport, une grande prudence est de mise pour linterprtation et la gnralisation des rsultats des analyses statistiques. La base regroupe les informations ayant trait : la localisation gographique et temporelle du prlvement : date, dpartement, commune, zone aquatique et parfois lieu de prlvement ; lusage de leau : adduction deau publique [AEP], eau de baignade contrle [BLB], eau associe diffrentes activits nautiques [BLAN] ou autres : pche, irrigation, barrages ; le type de leau : eau brute ou eau traite dans le cas des prlvements en eaux AEP ; les rsultats du dnombrement des cellules de cyanobactries ; le pourcentage de cyanobactries par rapport au total des algues (phytoplancton) calcul partir du nombre de cellules ; les rsultats de dosage des microcystines ; le genre ou lespce des cyanobactries observes ; les rsultats de dosage de chlorophylle a (en g.L-1). Malheureusement, toutes ces informations ne sont pas disponibles pour chaque prlvement et peuvent, de plus, tre dfinies de manire diffrente dun rapport lautre. Lanalyse effectue na pas pour objectif didentifier les dterminants physiques, biologiques ou cologiques associs au phnomne de prolifration des cyanobactries ou de production de cyanotoxines, mais dvaluer le phnomne cyanobactries en France mtropolitaine compte tenu des donnes et des paramtres recueillis.

1.1. Prlvement
Lusage de leau dans laquelle le prlvement a t effectu tait dans la plupart des cas renseign dans les rapports recueillis. Une vrification de lusage baignade et de lusage pour lalimentation en eau potable (AEP) a t ralise au travers des noms des communes, grce aux bases de donnes SISE-Eaux pour les sites AEP et SISE-Baignades. Certaines zones aquatiques usage mixte ont alors pu tre identifies et renseignes comme tel dans la base de donnes. Nanmoins, dans la plupart des analyses statistiques effectues, chaque rsultat de prlvement est associ un unique usage de leau : celui indiqu dans les rapports. Le type de zone aquatique (rivire, lac, tang, ) tait parfois renseign et a pu tre complt pour les sites de baignade grce SISEBaignades. Ce paramtre a t introduit a posteriori et na pas t lobjet dune analyse exhaustive.

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Lindication lieu de prlvement mentionne dans les rapports dpend de lusage de leau. Dans le cas dune baignade par exemple, il sagit soit du nom du lieu-dit, soit du nom usuel de la baignade considre. Au niveau de lusage AEP, le nom indiqu peut tre celui de la station de traitement deau, le nom du lieu de captage ou encore le nom du point de surveillance dans le rfrentiel SISE-Eaux. Une information sur la zone dchantillonnage (amont, aval, prise deau) est parfois disponible ainsi que la profondeur laquelle le prlvement a t effectu. Les prlvements dans les eaux de loisirs (baignades et/ou activits nautiques) sont raliss dans la majorit des cas proximit de la berge dans la couche deau de 0 1 m, alors que les prlvements associs aux usines de traitement deau ont lieu, pour ce qui est des eaux brutes, au point de captage ou au robinet darrive dans lusine, directement reli au point de captage, qui est la plupart du temps situ en profondeur. Les prlvements en eaux traites sont effectus la fin de la filire de traitement (eau refoule). Linformation lieu de prlvement en tant que telle est parfois diffrente dun rapport lautre et nest pas toujours prsente ; elle na pu tre complte et valide dans le temps imparti. Les rsultats de prlvements ont donc t agrgs au niveau de la commune en distinguant les diffrents usages de leau. La commune associe linformation usage de leau est ainsi lunit de lieu minimale avec laquelle les analyses statistiques ont t effectues. Par abus de langage et par simplicit, lappellation site de prlvement dsignera dsormais cette variable commune usage de leau. Nanmoins, ce paramtre agrge dans certains cas des donnes provenant de diffrentes zones aquatiques ou provenant de diffrents points de prlvement au sein dune mme zone aquatique. Il a effectivement t constat a posteriori que neuf sites de prlvement AEP regroupaient en fait les donnes provenant de diffrentes zones aquatiques ; il en est de mme pour sept sites de prlvement en eaux destines aux loisirs de baignades (BLB) et 13 en eaux classes en diverses activits de loisirs nautiques (BLAN). Dans quelques autres cas, la zone aquatique considre est la mme, mais le point de prlvement diffre. En tout, ce sont plus de 80 % des prlvements qui sont nanmoins bien rfrencs.

1.2. Dnombrement et identification des cyanobactries

Les rsultats numriques du dnombrement des cellules de cyanobactries (CC) ont tous t exprims en nombre de cellules par mL. Certains rapports nindiquent pas le rsultat du dnombrement, mais simplement la dtection ou labsence de dtection de cellules de cyanobactries. Ces informations ont t prises en compte dans la base : labsence de dtection de CC a t code 0 alors que la prsence de CC sans rsultat numrique a t code NC (non communiqu). Rappelons que labsence de dtection de cellules de cyanobactries dans lchantillon ne signifie pas leur absence certaine dans la zone aquatique considre. Trois variables ont t cres partir du rsultat du dnombrement : 1. PCC (Prsence des CC) qui prend la valeur 1 lorsque des CC ont t dtectes dans le prlvement et 0 dans le cas contraire ; 2. labondance correspondant la quantit de cellules de cyanobactries dnombres lorsque celles-ci sont prsentes dans le prlvement ; 3. la classe dabondance : cinq classes ont t dfinies, en partie fondes sur les classes proposes par lOMS : 02 000 CC.mL-1 ; >2 00020 000 CC.mL-1 ; >20 000100 000 CC.mL-1 ; >100 0001 million de CC.mL-1 et la classe plus de 1 million de CC.mL-1. Le pourcentage des cellules de cyanobactries par rapport au total algal (phytoplanctonique) tait parfois prcis et calcul partir du nombre de cellules. partir de ce paramtre une variable dominance a t cre : elle vaut 1 lorsque ce pourcentage dpasse 50 % et 0 dans le cas contraire. Lidentification des cyanobactries dans les donnes recueillies sarrte la plupart du temps au niveau du genre et cest donc ce niveau de classification que les analyses statistiques ont t effectues. Qui plus est, la systmatique des cyanobactries subit actuellement des modifications en particulier au niveau de lespce. Lidentification des cyanobactries suit la mme logique que le dnombrement : ce nest pas parce quun genre na pas t identifi dans un prlvement, quil est absent du site de manire certaine. partir des genres et/ou espces de cyanobactries identifis dans les prlvements, il est ncessaire dvaluer la prsence ou labsence de genres potentiellement toxiques. Pour cela, la liste des espces et des genres potentiellement toxiques labore par le groupe de travail Afssa (chapitre I tableau I-II) partir de la littrature a t utilise : un genre de cyanobactries est considr comme potentiellement toxique ds quune espce appartenant ce genre est considre comme potentiellement toxique. Cette manire de procder conduit a priori survaluer la prsence de cyanobactries potentiellement toxiques dans un prlvement. Les genres et espces de cyanobactries retrouvs dans la base de donnes sont prsents dans le tableau IV-I.

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Tableau IV-I : Genres et espces retrouvs dans la base de donnes constitue. 24 taxons sont suivis de sp, tmoignant du fait quune espce du genre considr a t trouve, mais pas identifie. Les genres et espces potentiellement toxiques figurent en gras.
Espces Aphanizomenon flos-aquae Aphanizomenon issatschenkoi Aphanizomenon sp. Aphanothece sp Aphanocapsa sp. Anabaenopsis sp. Anabaena sp. Anabaena affinis Anabaena crassa Anabaena spiroides Anabaena flos-aquae Anabaena heterospora Anabaena solitaria Anabaena smithii Anabaena planctonica Anabaena circinalis Calothrix sp. Cylindrospermopsis raciborskii Coelomoron sp. Coelomoron pusillum Coelosphaerium sp. Chroococcus sp. Woronichinia sp. Woronichinia naegeliana Limnothrix sp. Limnotrix planctonica Limnotrix redekei Merismopedia sp. Merismopedia tenuissima Lemmermanniella pallida Lyngbya sp. Microcystis sp. Microcystis flos aquae Microcystis aeruginosa Microcystis viridis Microcystis wesenbergii Nostoc sp. Planktolyngbya subtilis Planktothrix sp. Planktothrix mougeotii Planktothrix agardhii Phormidium sp. Rhaphidiopsis sp. Synechococcus sp. Snowella sp. Pseudanabaena mucicola Pseudanabaena limnetica Pseudanabaena galeata Pseudanabaena sp. Gomphospheria sp. Oscillatoria sp. Rhabdoderma sp. Genres Aphanizomenon Aphanothece Aphanocapsa Anabaenopsis

Anabaena

Calothrix Cylindrospermopsis Coelomoron Coelosphaerium Chroococcus Woronichinia Limnothrix Merismopedia Lemmermanniella Lyngbya

Microcystis

Nostoc Planktolyngbya Planktothrix Phormidium Rhaphidiopsis Synechococcus Snowella Pseudanabaena

Gomphospheria Oscillatoria Rhabdoderma

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1.3. Dosage des microcystines

Les donnes recueillies relatives aux cyanotoxines concernent exclusivement les divers variants de microcystines (MC), la microcystine-LR (MC-LR) tant bien souvent prise comme rfrence. Les mthodes danalyse des microcystines recenses dans la base sont au nombre de quatre : mthode enzymatique PP2A (protine phosphatase 2A), mthode immunologique ELISA (Enzyme linked Immuno Sorbent Assay), chromatographie liquide haute performance ultra-violet CLHP-UV et spectromtrie de masse CLHP-SM. Les mthodes PP2A et ELISA produisent une rponse molculaire globale, qui ne permet pas de distinguer les quantits des diffrents variants de MC. Les rsultats sont exprims en microgramme (g) dquivalent MC-LR talon par litre. Cependant, cette rponse peut tre entache dun biais rsultant de laffinit variable des diffrents variants de MC avec les enzymes ou les anticorps utiliss. Les mthodes CLHP-UV et CLHP-SM sont des mthodes sparatives qui permettent de dterminer le profil toxinique du mlange, cest--dire la nature et les quantits des diffrents variants prsents. La mthode CLHPUV, contrairement la mthode CLHP-SM, ne permet de dtecter et de quantifier que les variants pour lesquels les talons sont disponibles. Les rsultats de ces deux mthodes sont exprims soit en g de chaque variant par litre, soit en g.L-1 dquivalent MC-LR (correspondant la somme des diffrents variants), soit en g.L-1 de MCLR mesurant uniquement la quantit de MC-LR. Compte tenu des diffrentes mthodes danalyses rencontres et de la diversit dexpression des rsultats de dosage, il est apparu ncessaire de convertir les rsultats dans une seule unit : la quantit totale de microcystines. Les donnes ainsi harmonises ont donc tendance a priori maximiser le danger vis--vis de la MC, puisque la MC-LR fait partie des variants de microcystines les plus toxiques. Si pour un mme prlvement, deux rsultats de dosage des microcystines provenant de deux mthodes diffrentes taient disponibles, la mthode CLHP a t privilgie et au sein de cette technique analytique, le rsultat en spectromtrie de masse (SM) a t retenu. Nanmoins, cette mthode ayant un taux de prsence trs faible dans la base (de lordre de 3 % des donnes), les rsultats des deux approches CLHP-UV et CLHP-SM ont t agrgs sous lappellation CLHP. Dans tous les cas, un unique rsultat de dosage des microcystines exprim en g de MC totales par litre a t retenu pour chaque prlvement. Par ailleurs, les limites de dtection et de quantification tant diffrentes dune mthode analytique une autre et dun laboratoire un autre, la limite de quantification la plus leve (0,16 g.L-1) identifie dans les rapports a t prise comme rfrence ; tous les rsultats infrieurs cette limite ont t remplacs par lindication ND (pour non-dtect). Cela concerne au plus une cinquantaine de valeurs. Dans la base ainsi constitue, la limite de dtection est gale la limite de quantification des MC et vaut 0,16 g.L-1.

2. La base en quelques chiffres

La base de donnes cyanobactries ainsi constitue comprend 4 273 lignes, cest--dire 4 273 rsultats de prlvements effectus dans des zones aquatiques continentales pendant la priode 2002-2004 (13). Ces rsultats concernent 442 communes et 59 dpartements. Un rsultat de dnombrement (prsence/absence et bien souvent comptage) des cellules de cyanobactries est disponible pour 3 897 de ces prlvements, mais linformation taxonomique des genres de cyanobactries observes nest prsente que pour 1 709 seulement(14) de ces prlvements. Le rsultat de dosage des microcystines est disponible pour 1 492 prlvements et pour 1 116 de ces prlvements le rsultat du dnombrement cellulaire conjoint est galement disponible. Environ 61 % des rsultats de dosage des MC ont t obtenus par la mthode CLHP(15), 31 % par la mthode ELISA, 3 % par la mthode PP2A et 5 % par une mthode non renseigne dans les rapports. Les mthodes CLHP et ELISA reprsentent donc la majorit des donnes (92 %). Lutilisation de la mthode CLHP apparat en nette dcroissance entre lanne 2002 et lanne 2004, au profit de la mthode ELISA. Seuls 299 des 4 273 prlvements (i.e. 7 %) ont t effectus en eaux traites(16) : un rsultat de dnombrement des CC est disponible pour 102 de ces prlvements 12 dpartements et 23 communes sont concerns et un rsultat de dosage des microcystines pour 226 prlvements soit 13 dpartements et 45 communes. Une trs

(13) Lensemble des donnes recueillies initialement concernait les annes 2000 2004, mais le nombre de donnes disponibles pour les annes 2000 et 2001 tait trs faible devant celui des annes 2002 2004 (moins de 3 %). Par souci dhomognit, il a t dcid de nexploiter que les donnes des annes 2002 2004. (14) Ceci provient certainement du fait que lon a eu accs dans un grand nombre de cas quaux rapports de synthse et non aux rsultats bruts complets du dnombrement cellulaire. (15) Il sagit dans la quasi-totalit des cas de la mthode CLHP-UV, la mthode CLHP-SM ayant t trs peu utilise. (16) Quelques donnes recueillies (10 en tout) concernaient des eaux prleves des tapes intermdiaires de traitement ; du fait de leur trop faible nombre, ces donnes nont pas t prises en compte dans la base telle que dcrite ici.

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nette progression du nombre de prlvements en eaux traites est constate de 2002 2004 : 18 prlvements ont t effectus en 2002, 37 en 2003 et 169 en 2004. Les donnes sur les eaux traites proviennent donc trs majoritairement de lanne 2004 (74 %) que ce soit pour les dnombrements de CC ou les dosages des MC. Les prlvements effectus en eaux brutes (3 974 donnes) proviennent peu prs part gale deaux AEP (1 249 donnes, soit 31 % du total), deaux de baignade (1 607, i.e. 40 %) et deaux lies des activits nautiques (1 073, i.e. 27 %). Restent 45 prlvements effectus dans des zones aquatiques associes uniquement un usage autre tel que la pche, lirrigation, etc. ; du fait de leur faible nombre, ceux-ci nont pas t exploits lors des analyses statistiques. De mme, les donnes proviennent peu prs part gale des trois annes prises en compte, avec nanmoins une lgre progression de 2002 2004 : 1 184 donnes pour lanne 2002 (i.e. 30 % du total), 1 246 pour lanne 2003 (i.e. 31 %) et 1 538 pour lanne 2004 (i.e. 39 %). Un rsultat de dnombrement cellulaire est disponible pour 95 % des prlvements en eau brute. En revanche, les dosages de microcystines en eaux brutes ont t effectus avec une frquence plus importante dans les prlvements effectus en eaux AEP (639) que dans ceux effectus en eaux BLAN (293) ou en eaux BLB (330). Ils ont t effectus majoritairement lanne 2002 (42 % du total), puis lanne 2004 (37 %) et enfin lanne 2003 (20 %). De manire gnrale, la rpartition croise des donnes par annes et usages ne conduit pas des effectifs de prlvements homognes. Ont t constats par exemple : une progression trs nette du nombre de prlvements effectus en eaux de baignade de 2002 (7 % du total des prlvements) 2004 (22 %) ; un nombre de prlvements effectus en eaux AEP deux fois plus faible en 2003 quen 2002 et 2004 ; et une proportion de prlvements effectus en eaux BLAN 3 5 fois plus faible lanne 2004 que durant les deux annes prcdentes. Environ 92 % des donnes de la base proviennent de prlvements effectus pendant les mois de juin octobre compris, et 74 % pendant les mois de juillet septembre uniquement. Cette disproportion dans la rpartition mensuelle des donnes est plus marque encore pour les rsultats de dosage des microcystines et pour les eaux traites, plus marque galement pour les sites de baignade que pour les eaux AEP ou celles lies aux activits nautiques. En revanche, cette rpartition saisonnire des donnes est peu diffrente dune anne sur lautre (2002 2004). Du mois davril septembre, cest--dire lorsque le nombre de donnes est important, les trois annes 2002 2004 reprsentent donc peu prs le mme pourcentage de donnes, de mme que les trois principaux usages que sont AEP, BLB et BLAN. En revanche, les donnes du mois de dcembre proviennent essentiellement de lanne 2002 ; les donnes du mois de mars proviennent presque entirement de lanne 2004 ; les donnes du mois de fvrier proviennent majoritairement des eaux BLAN et les donnes du mois de novembre des eaux AEP La rpartition gographique des prlvements est galement trs contraste (figure K livret couleur). Le nombre de dpartements pour lesquels il existe au moins un rsultat de dnombrement des CC est de 57, mais il varie entre 28 et 36 suivant lanne considre (de 2002 2004) et lusage : il est de 28 pour lAEP, de 37 pour BLB et de 19 pour BLAN. Le nombre de prlvements par dpartement ceux pour lesquels des donnes ont t fournies est trs variable dun dpartement lautre : il est compris entre 2 et 738 pour les trois annes 2002-2004 agrges ; sa valeur mdiane(17) est de 20. Autrement dit, 50 % des dpartements considrs admettent moins de 20 donnes sur les trois annes cumules tout usage confondu. Sont constates une absence de donnes pour tout lest de la France (zone en bleu clair sur la figure K livret couleur) et une concentration des donnes disponibles essentiellement dans les rgions Bretagne, Pays de la Loire, Basse Normandie et dans une moindre mesure Limousin. Le nombre de communes pour lesquelles il existe au moins une donne de dnombrement cellulaire est de 430 sur les trois annes 2002-2004, ce qui reprsente au sein de chaque dpartement concern entre 1 et 36 communes suivant le dpartement et lanne, soit 5 en valeur mdiane. Le nombre de donnes par commune et par anne est compris entre 1 et 93 suivant la commune et lanne considres ; il est de 5 en valeur mdiane. Pour 70 % des communes concernes, il ny a quune anne de donnes, pour 25 % des communes deux annes de rsultats et pour 5 % trois annes de rsultats. Autrement dit, il ne peut tre voqu de suivi pluriannuel des dnombrements de cyanobactries au niveau des communes pour les annes 2002 2004. Pour les dosages des microcystines, les nombres de dpartements, de communes et de prlvements sont encore plus faibles, mais la rpartition gographique concernant la provenance des donnes est identique. En eaux brutes, ils concernent respectivement 24 dpartements et 80 communes pour lusage AEP, 26 dpartements et 78 communes pour lusage BLB, 10 dpartements et 50 communes pour lusage BLAN.

(17) La mdiane dun chantillon est la valeur qui spare les 50 % plus faibles valeurs de lchantillon des 50 % plus fortes.

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Un rsultat sur la teneur en chlorophylle a de leau est disponible pour 1 705 prlvements, dont 10 en eau traite. Ces rsultats concernent 218 communes et 38 dpartements. La rpartition temporelle des rsultats de chlorophylle a est identique celle des rsultats de dnombrement cellulaire. La rpartition gographique est un peu diffrente : il y a moins de donnes en provenance du centre de la France.

3. Mthode danalyse statistique des donnes

Diffrents biais lis lchantillon des donnes disponibles sont craindre : 1. des biais lis au recueil des donnes : tous les organismes possdant des donnes de cette nature nont pas forcment t contacts et les organismes contacts ntaient soumis aucune obligation quant la communication de leurs donnes en totalit ou en partie. Il est par consquent difficile de dire si cet chantillon est ou non reprsentatif des prlvements effectus en France pour dnombrement des cellules de cyanobactries et/ou dosage des microcystines. Il convient de noter que les zones fort relief en tte de bassin versant sont en gnral beaucoup moins favorables aux prolifrations phytoplanctoniques que celles en aval, o les coulements sont plus lents et les temps de sjour plus longs. Labsence de donnes dans certaines rgions, en particulier dans lest de la France, pourrait tre li au fait quil y a moins de problme de prolifration de cyanobactries dans ces rgions. Par ailleurs, lutilisation plus ou moins importante pour la production deau de consommation humaine des eaux souterraines, indemnes de cyanobactries, peut diminuer la vigilance sur les eaux de surface dans certaines rgions ; 2. des biais lis aux prlvements : sur quels sites ont-ils t effectus, pourquoi et quand ? Ces sites font-ils lobjet de traitements par des algicides ? quel emplacement sur le site ? La rpartition des donnes au sein de lchantillon apparat en effet comme trs dsquilibre temporellement (surtout au niveau mensuel) et gographiquement : la majorit des donnes recenses proviennent de prlvements effectus dans louest et le centre de la France, sur les mois de juin octobre. Ceci a-t-il une influence sur les rsultats de dnombrement des CC et de dosage des MCs ? 3. des biais lis aux usages (ou rglementations) sur les dosages des microcystines, qui ne sont manifestement pas effectus de manire systmatique avec le dnombrement cellulaire. Sont-ils effectus uniquement lorsque le rsultat du dnombrement cellulaire est important ? Ces problmes dchantillon sont lorigine potentiellement de biais dans lestimation des caractristiques statistiques du phnomne cyanobactries . Des mthodes danalyses statistiques multivaries ont donc t employes afin destimer les influences respectives des paramtres mois, anne, usage de leau et sites de prlvement sur le rsultat du dnombrement cellulaire et celui du dosage des microcystines et ce de manire fournir une image du phnomne cyanobactries indpendamment des disproportions de donnes prsentes au sein de lchantillon. Lextrapolation des rsultats de cette base lensemble du territoire franais mtropolitain restera nanmoins dlicate du fait de labsence de donnes pour lest de la France en particulier. Les variations de la prsence et de labondance des cellules de cyanobactries ont donc t analyses, au travers des rsultats de prlvements sur eaux brutes, en fonction des paramtres cofacteurs : usage de leau, mois et anne, en prenant en compte un potentiel effet li au site(18) ou au dpartement(19) de prlvement. Lobjectif de cette analyse est double : 1. dterminer linfluence respective de chacun de ces paramtres ; 2. prdire une probabilit de prsence, une abondance ou un risque de dpassement dune valeur seuil sur chaque site de prlvement lchelle mensuelle, indpendamment du nombre de donnes disponibles. La mthode danalyse statistique employe appartient la classe des rgressions linaires gnralises avec effets mixtes. Cette approche permet de distinguer linfluence des paramtres globaux : saison, usage et anne, estime grce lensemble des donnes, dun effet li au site de prlvement. Elle permet par consquent de saffranchir en partie des disproportions de donnes provenant des diffrents sites de prlvement pour estimer linfluence des paramtres globaux. Les fonctions linaires utilises sont du premier ordre, cest--dire sans interaction entre les paramtres considrs et sans effet quadratique. On fait donc lhypothse quil ny a pas dinteraction majeure entre les effets des paramtres mois, usage, anne et localisation gographique, hypothse discute par la suite.

(18) Rappel : il sagit du paramtre combin commune X usage. (19) Dans ce cas, les donnes sont agrges au niveau dpartement.

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Suivant les analyses, les donnes des mois de novembre avril ont t regroupes du fait de leur faible nombre. Un nouveau paramtre mois a donc t dfini : il prend les valeurs hiver (agrgeant les donnes de novembre avril), mai, juin, juillet, aot, septembre et octobre. Les rsultats de dnombrement cellulaire ont t analyss sparment des rsultats de dosage des microcystines et les rsultats en eaux traites sparment des rsultats en eaux brutes. Le nombre de donnes eaux traites na pas permis lutilisation dune telle approche ; ces donnes ont uniquement fait lobjet dune analyse descriptive simple. Description des modles utiliss Rgression linaire gnralise logistique avec prise en compte deffets mixtes Soit Pijkl la probabilit de prsence des cellules de cyanobactries le mois i, dans une eau ayant un usage j, lanne k sur le site de prlvement l ; celle-ci est exprime au travers du modle suivant : logit(Pijkl) = const + mois i + usage j + anne k + lieu l o : logit(P) = log(P/(1 P)) ; const est la constante gnrale ; mois i, usage j, anne k correspondent respectivement aux effets fixes du mois i, de lusage j et de lanne k, estims sur lensemble des donnes ; lieu l est un effet alatoire li au site de prlvement. Les coefficients de ce modle sont estims par ajustement sur les rsultats des prlvements au travers de la variable PCC qui prend pour chaque prlvement la valeur 1 lorsque le rsultat du dnombrement est positif (prsence de CC) et 0 dans le cas contraire. Les coefficients du modle tant estims, la probabilit de prsence des CC peut tre prdite chaque mois, pour chaque usage, chaque anne et chaque site, quel que soit le nombre de donnes prsentes dans chaque cas, grce la formule suivante : Pijkl = exp(const + mois i + usage j + anne k + lieu l) 1 + exp(const + mois i + usage j + anne k + lieu l)

Un modle dans lequel leffet site est remplac par un effet dpartement de prlvement a galement t test. Cette approche a de plus t utilise pour modliser le risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1, partir dune variable PCC100m qui vaut 1 pour un prlvement sur lequel le nombre de CC observes dpasse 100 000 CC.mL-1 et 0 dans le cas contraire. Rgression linaire gnralise lognormale avec prise en compte deffets mixtes Soit NbCCijkl le nombre de cellules de cyanobactries dnombres le mois i, dans une eau ayant un usage j, lanne k sur le site de prlvement l, le modle ci-dessous est alors ajust sur les rsultats de dnombrement : log10(NnCCijkl) = const + mois i + usage j + anne k + lieu l o : mois i, usage j, anne k sont respectivement les effets du mois i, de lusage j et de lanne k ; lieu l est un effet alatoire li au site de prlvement. Les coefficients des diffrents paramtres tant estims partir des rsultats de prlvements, il est ensuite possible de prdire le nombre moyen de cellules de cyanobactries attendu dans chaque cas partir de la formule suivante : + NnCCijkl = 10 const + + +
mois i usage j anne k lieu l

Un modle remplaant leffet site de prlvement par un effet dpartement a galement t test. Des dmarches similaires ont t employes pour lanalyse des rsultats de dosage des microcystines. Afin de garantir une certaine robustesse dans lanalyse des rsultats, le ou les modles ont t ajusts sur : (1) lensemble des donnes disponibles et exploitables pour chaque analyse et (2) les sites de prlvement pour lesquels il y a au moins quatre rsultats de prlvements. Ce faisant, environ 90 % des rsultats de prlvements disponibles et exploitables ont t utiliss pour cette deuxime analyse, mais moins de 60 % des sites de prlvement potentiels sont concerns.

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4. Rsultats en eaux brutes

4.1. Dnombrement cellulaire
4.1.1. Influence des paramtres sites, mois, anne et usage
Ont t analyss de manire spare : (1) la probabilit de prsence des cellules de cyanobactries dans un prlvement effectu sur un site, (2) labondance moyenne des CC lorsquelles sont prsentes et (3) la probabilit (appele risque 100 000 ) que labondance dpasse 100 000 cellules par mL. Ces analyses statistiques reposent suivant les cas sur 2 400 3 700 donnes. Dans chaque cas, linfluence des variables cofacteurs mois, usage, anne et sites de prlvement a t tudie. Les rsultats sont prsents ci-dessous de manire synthtique. Lordre dinfluence des variables prcdemment cites apparat identique sur la probabilit de prsence des CC, labondance et le risque 100 000 ; il sagit dans lordre dcroissant : du site de prlvement, du mois (saison), de lusage et de lanne, dont linfluence, contrairement aux autres paramtres, napparat pas systmatiquement statistiquement significative. Linfluence prpondrante du paramtre site de prlvement (commune X usage) montre que la prolifration de cyanobactries est dabord lie la nature et aux caractristiques propres chaque zone aquatique. Nanmoins, le type de zone aquatique (rivire, lac, tang, ), tel que rfrenc dans la base, semble navoir aucune influence sur la prsence et labondance des cellules de cyanobactries. Si la prsence de cyanobactries apparat comme un phnomne trs largement observ sur les sites de prlvement pour lesquels des donnes sont disponibles (tableau IV-II), les trs fortes valeurs dabondance et les forts risques de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 sont le fait dun nombre de sites rduit. La vulnrabilit ou non-vulnrabilit dun site vis--vis des prolifrations de cyanobactries semble, qui plus est, se reproduire dannes en annes. Une analyse portant sur 82 sites pour lesquels au moins deux annes de donnes et au moins trois donnes par an taient disponibles a fait apparatre une corrlation interannuelle moyenne de 0,63 sur labondance moyenne des CC et de 0,53 sur labondance maximale de chaque site (valeurs estimes sur 1 632 rsultats de dnombrement cellulaire). Lagrgation des donnes au niveau dpartement, la place du site de prlvement , modifie peu les rsultats : bien quinfrieur leffet site, leffet du dpartement est encore suprieur ceux des paramtres mois et usage. Autrement dit les sites qui admettent les plus fortes prolifrations de cyanobactries sont regroups dans certains dpartements sans que les donnes disponibles dans la base ne permettent dexpliquer ou dinterprter ce phnomne. Le risque 100 000 est plus important dans les rgions Pays de la Loire et Bretagne, ainsi que dans les dpartements Vienne, Indre, Cher et Creuse. noter quil sagit galement des zones gographiques pour lesquelles le nombre de donnes est le plus lev. Les mois plus forte probabilit de prsence des CC sont les mois de septembre et doctobre, mais labondance et le risque 100 000 sont suprieurs aux mois daot et septembre. Les mois plus faible probabilit de prsence et plus faible abondance sont les mois de novembre avril(20). La saisonnalit de la prolifration des cyanobactries est particulirement bien mise en vidence par la figure IV-1 (volution saisonnire et pluriannuelle des classes dabondance(21)).

(20) Rappel : les donnes de novembre avril sont agrges. (21) Rappel : cinq classes dabondance ont t dfinies, en partie fondes sur les classes proposes par lOMS : 02 000 CC.mL-1 ; > 2 00020 000 CC.mL-1 ; >20 000100 000 CC.mL-1 ; >100 0001 million de CC.mL-1 et la classe plus de 1 million de CC.mL-1.

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Figure IV-1 : Proportions des rsultats de dnombrement dans chaque classe dabondance en fonction du mois sur les trois annes 2002-2004 [rsultats bruts sans modlisation].

100% 90%
Pourcentages cumuls

80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% Mois et anne 0-2000 CC/mL 2000-20000 20000-100000 100000-1M >1M

Indpendamment de leffet mois, la probabilit de prsence des CC dans les prlvements associs aux eaux BLB est suprieur celui des prlvements en eaux AEP, celui des prlvements en eaux BLAN tant intermdiaire. De mme, le risque 100 000 est significativement plus faible dans les prlvements en eaux AEP que dans ceux effectus dans les eaux BLB et BLAN. Il sagit probablement bien plus dun effet li au prlvement, cest-dire son emplacement et sa profondeur (effet de bordure et de surface), que dun effet li la nature de la zone aquatique considre : dans les eaux BLB et BLAN, les prlvements sont effectus en surface (0-1 m) et au bord (i.e. o se dveloppent principalement les cyanobactries), alors que les prlvements en zone AEP correspondent des eaux plus profondes plus loignes des bords. Connatre la typologie et les caractristiques de chaque site de prlvement serait indispensable afin dexpliquer cette prpondrance du paramtre site et de confirmer linfluence du paramtre usage de leau. Le modle utilis ne prend pas en compte dventuelles interactions entre les effets des paramtres mois, anne, usage et localisation gographique du site de prlvement : leffet de chaque mois est considr peu prs le mme chaque anne et sensiblement identique galement du nord au sud de la mtropole. La faible interaction entre la saison et la localisation gographique (dpartement) a pu tre confirme sur labondance. Ceci pourrait tre expliqu par le fait que la majorit des donnes proviennent peu prs de la mme latitude. Le nombre de donnes na pas permis de le vrifier sur la probabilit de prsence des CC et le risque 100 000 .

4.1.2. Prdiction de valeurs 4.1.2.1. Probabilit de prsence des cellules de cyanobactries

Le modle considr pour lestimation de la probabilit de prsence des CC dans un prlvement prend en compte les effets des paramtres mois, usage (AEP, BLB et BLAN) et site de prlvement. Sont concerns 3 743 donnes et 427 sites de prlvement. Il sagit dune rgression logistique de la variable PCC, qui prend la valeur 1 en prsence de CC dans un prlvement et 0 dans le cas contraire. Le coefficient de dtermination(22) de lajustement est de 0,47, tmoignant de lexistence dune certaine variabilit non explique par le modle, en particulier au sein de chaque site de prlvement. Une fois ajust, le modle permet la prdiction des probabilits de prsence des CC pour chaque site de prlvement, chaque mois, en distinguant les diffrents usages. La distribution des valeurs prdites pour chaque site de prlvement associ un usage AEP est dcrite dans le tableau IV-II.

(22) Le coefficient de dtermination dun modle est gal 1 moins la variance des rsidus sur la variance des valeurs exprimentales. Attention, le coefficient de dtermination calcul sur un modle logistique ne peut tre compar celui obtenu dans une rgression avec la loi normale (moindres carrs) car dans le cas de la rgression logistique, sont compares des valeurs relles ncessairement gales 0 ou 1 (prsence ou absence des CC) des valeurs prdites intermdiaires entre 0 et 1 (probabilit de prsence des CC).

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Tableau IV-II : Distribution des probabilits de prsence des cellules de cyanobactries prdits pour chaque site de prlvement AEP.
AEP (93 sites de prlvement) moyenne min quantile 5 % quantile 25 % mdiane quantile 75 % quantile 95 % max hiver* 0,47 0,03 0,04 0,15 0,56 0,72 0,89 0,97 mai 0,53 0,04 0,06 0,20 0,65 0,79 0,93 0,98 juin 0,61 0,06 0,10 0,30 0,76 0,86 0,95 0,99 juillet 0,63 0,07 0,11 0,33 0,78 0,88 0,96 0,99 aot 0,67 0,09 0,15 0,40 0,83 0,91 0,97 0,99 sept. 0,76 0,16 0,25 0,55 0,90 0,95 0,98 1,00 oct. 0,75 0,16 0,24 0,54 0,90 0,95 0,98 1,00

* La modalit hiver regroupe les mois de novembre avril.

Le tableau IV-II se lit de la manire suivante : au mois daot, par exemple, sur les 93 sites de prlvement associs lusage AEP, la moiti admettrait une probabilit de prsence des CC suprieur 83 % (mdiane) ; 25 % admettent une probabilit de prsence des CC infrieur 40 % (quantile(23) 25 %) et 25 % suprieur 91 % (quantile 75 %). La moyenne de la probabilit de prsence des CC est de 67 % pour ce mme mois sur les 93 sites de prlvement AEP. Dans cette moyenne, chaque site de prlvement a le mme poids quel que soit le nombre de donnes disponibles pour chacun.

Tableau IV-III : Distribution des probabilits de prsence des cellules de cyanobactries prdits pour chaque site de prlvement BLAN.
BLAN (102 sites) moyenne min quantile 5 % quantile 25 % mdiane quantile 75 % quantile 95 % max hiver* 0,53 0,05 0,08 0,31 0,56 0,78 0,92 0,95 mai 0,59 0,07 0,11 0,39 0,65 0,83 0,95 0,97 juin 0,68 0,12 0,18 0,52 0,76 0,90 0,97 0,98 juillet 0,69 0,13 0,20 0,55 0,78 0,91 0,97 0,98 aot 0,74 0,17 0,25 0,63 0,83 0,93 0,98 0,99 sept. 0,81 0,27 0,38 0,75 0,90 0,96 0,99 0,99 oct. 0,81 0,26 0,38 0,75 0,90 0,96 0,99 0,99

* La modalit hiver regroupe les mois de novembre avril.

Tableau IV-IV : Distribution des probabilits de prsence des cellules de cyanobactries prdits pour chaque site de prlvement BLB.
BLB (232 sites) moyenne min quantile 5 % quantile 25 % mdiane quantile 75 % quantile 95 % max hiver* 0,63 0,03 0,16 0,34 0,75 0,86 0,93 0,96 mai 0,68 0,04 0,22 0,43 0,81 0,90 0,95 0,97 juin 0,75 0,06 0,32 0,56 0,88 0,94 0,97 0,98 juillet 0,76 0,07 0,34 0,58 0,89 0,94 0,97 0,98 aot 0,80 0,09 0,42 0,66 0,92 0,96 0,98 0,99 sept. 0,86 0,16 0,57 0,78 0,95 0,98 0,99 0,99 oct. 0,86 0,16 0,56 0,77 0,95 0,98 0,99 0,99

* La modalit hiver regroupe les mois de novembre avril.

(23) Le quantile 5 % dun chantillon est la valeur qui spare les 5 % plus faibles valeurs de cet chantillon des 95 % plus fortes. Entre le quantile 5 % et le quantile 95 %, par exemple, se trouvent 90 % des valeurs.

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La prsence de cellules de cyanobactries apparat comme un phnomne largement rpandu quels que soient lusage de leau et la priode de lanne : la probabilit de prsence moyenne des CC dans un prlvement est compris entre 47 % en hiver pour lusage AEP et 86 % au mois de septembre pour lusage BLB. Nanmoins, les plus fortes probabilits de prsence des CC sont observes au mois de septembre et doctobre (entre 75 et 86 % en moyenne) ; elles sont plus importantes pour les prlvements en eaux BLB et BLAN que pour ceux en eaux AEP.

4.1.2.2. Abondance moyenne des cellules de cyanobactries

Pour labondance, un modle avec effet mois et effet site de prlvement est ajust sur lensemble des donnes disponibles correspondant aux usages AEP, BLAN et BLB agrges(24). Ce faisant 2 629 rsultats dabondance non nulle et 327 sites de prlvement sont pris en compte. Le nombre de CC, lorsquil est non nul, est cens suivre une loi lognormale, ce qui a pu tre vrifi. Le coefficient de dtermination du modle est de 0,62. Les valeurs prdites partir de ce modle sont les moyennes gomtriques(25) de labondance des CC lorsquelles sont prsentes associes chaque site de prlvement pour chaque mois. La distribution de ces valeurs associes aux 327 sites de prlvement concerns est dcrite dans le tableau IV-V.

Tableau IV-V : Distribution des abondances moyennes de cellules de cyanobactries prdites (cellules.mL-1) pour chaque site de prlvement lorsquelles sont prsentes.
Sur 327 sites de prlvement (tous usages confondus) min quantile 5 % quantile 25 % mdiane quantile 75 % quantile 95 % max

hiver*

mai

juin

juillet

aot

sept.

oct.

1 21 190 900 2 900 18 000 110 000

4 98 840 3 900 13 000 80 000 510 000

3 86 740 3 400 11 400 71 000 450 000

8 210 1 810 8 400 27 800 172 000 1 090 000

11 280 2 410 11 200 37 100 229 000 1 450 000

15 380 3 300 15 300 50 800 313 000 2 000 000

6 150 1 290 6 000 19 900 123 000 780 000

* La modalit hiver regroupe les mois de novembre avril.

Le tableau IV-V se lit de la manire suivante : 75 % des sites de prlvement, sur lesquels il y a apparition de CC, admettraient, lorsquelles apparaissent, une abondance moyenne (gomtrique) infrieure 3 000 cellules par mL en hiver et infrieure 50 000 cellules par mL en septembre. Nanmoins 5 % des sites de prlvement admettent des valeurs dabondance moyenne bien suprieures (entre 300 000 et 2 millions de cellules par mL) pour ce mme mois. Ces sites admettent galement de trs fortes valeurs dabondance le reste de lanne. Il ne sagit en aucun cas des valeurs maximales qui peuvent apparatre chaque mois sur chaque site de prlvement ; celles-ci sont naturellement bien suprieures, mais elles nont pas t modlises.

4.1.2.3. Risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1

Pour le risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1, un modle avec prise en compte des effets mois, usage et site de prlvement est ajust sur lensemble des donnes disponibles. Ce faisant, 3 544 donnes et 417 sites de prlvement sont concerns. Le coefficient de dtermination de lajustement est de 0,46. Une fois ajust, le modle permet de prdire les probabilits de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 associes chaque site de prlvement pour chaque mois et chaque usage. La distribution de ces valeurs pour les 89 sites de prlvement associs lusage AEP est dcrite dans le tableau IV-VI.
(24) Lusage de leau ne semble pas avoir une influence trs significative sur labondance moyenne des cellules de cyanobactries (lorsquelles sont prsentent) au sein de notre chantillon ; cest pourquoi les rsultats provenant des diffrents usages ont t agrgs pour cette analyse. (25) La moyenne gomtrique dun chantillon de taille n est la racine nime du produit des n valeurs de lchantillon. Elle peut galement se calculer partir de lexponentielle de la moyenne arithmtique (moyenne usuelle) des valeurs de lchantillon transformes en log. Cette moyenne est employe quand les donnes traites suivent une loi de probabilit lognormale (distribution dissymtrique qui se caractrise par une grande quantit de faibles valeurs et une faible quantit de fortes valeurs, parfois distantes de plusieurs ordres de grandeur). Elle correspond dans ce cas la mdiane des donnes, cest--dire la valeur qui spare les 50 % plus faibles valeurs des 50 % plus fortes.

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Tableau IV-VI : Distribution des valeurs de risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 prdites pour chaque site de prlvement AEP.
AEP (89 sites de prlvement) moyenne min quantile 5 % quantile 25 % mdiane quantile 75 % quantile 95 % max hiver* 0,01 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,06 0,11 mai 0,04 0,00 0,00 0,01 0,01 0,01 0,24 0,40 juin 0,04 0,00 0,00 0,01 0,01 0,01 0,22 0,37 juillet 0,07 0,01 0,01 0,01 0,02 0,03 0,38 0,56 aot 0,07 0,01 0,01 0,02 0,03 0,03 0,41 0,59 sept. 0,12 0,02 0,02 0,03 0,05 0,07 0,59 0,76 oct. 0,06 0,01 0,01 0,01 0,02 0,02 0,32 0,50

* La modalit hiver regroupe les mois de novembre avril.

Au mois de septembre, par exemple, sur les 89 sites de prlvement associs lusage AEP, la moiti aurait un risque 100 000 suprieur 5 %. La moyenne du risque 100 000 est de 12 % pour ce mme mois sur les 89 sites AEP. Pour cet usage de leau, les fortes valeurs de risques 100 000 sont vraiment le fait dune minorit de sites.

Tableau IV-VII : Distribution des valeurs de risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 prdites pour chaque site de prlvement BLAN.
BLAN (97 sites) moyenne min Q5 % Q25 % mdiane Q75 % Q95 % max hiver* 0,03 0,00 0,00 0,00 0,01 0,02 0,16 0,37 mai 0,12 0,00 0,01 0,02 0,04 0,11 0,50 0,76 juin 0,11 0,00 0,01 0,02 0,03 0,10 0,48 0,74 juillet 0,17 0,01 0,02 0,05 0,07 0,19 0,66 0,86 aot 0,19 0,01 0,02 0,05 0,08 0,21 0,69 0,87 sept. 0,27 0,02 0,04 0,11 0,15 0,37 0,83 0,94 oct. 0,15 0,01 0,01 0,04 0,05 0,16 0,61 0,83

* La modalit hiver regroupe les mois de novembre avril.

Tableau IV-VIII : Distribution des valeurs de risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 prdites pour chaque site de prlvement BLB.
BLB (231 sites) moyenne min Q5 Q25 mdiane Q75 Q95 max hiver* 0,03 0,00 0,00 0,00 0,01 0,02 0,14 0,65 mai 0,09 0,01 0,01 0,02 0,03 0,09 0,45 0,91 juin 0,09 0,01 0,01 0,02 0,03 0,09 0,43 0,90 juillet 0,15 0,02 0,03 0,04 0,06 0,17 0,62 0,95 aot 0,16 0,02 0,03 0,05 0,07 0,19 0,65 0,96 sept. 0,24 0,04 0,06 0,09 0,13 0,33 0,80 0,98 oct. 0,12 0,01 0,02 0,03 0,05 0,14 0,56 0,94

* La modalit hiver regroupe les mois de novembre avril.

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La moyenne du risque de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 de mai octobre est donc comprise entre 11 et 27 % pour les eaux activits nautiques, entre 9 et 24 % pour les eaux de baignade et entre 4 et 12 % pour les eaux AEP. Nanmoins, il est trs diffrent dun site lautre et apparat comme trs important sur 5 10 % sites, en particulier pour les eaux BLB et BLAN, quelle que soit dailleurs la priode de lanne. Les plus fortes valeurs de risques 100 000 sont le fait dune minorit de sites. En dehors de ceux-ci, le risque 100 000 est pratiquement nul pendant les mois de novembre avril, quel que soit lusage de leau considr.

4.1.3. Discussion quant la reprsentativit de lchantillon

Comme cela a dj t soulign, la reprsentativit spatiale et temporelle des prlvements avec dnombrement des CC nest pas assure : tous les dpartements ne sont pas reprsents ; le nombre de prlvements est trs diffrent dun dpartement lautre, dun site lautre, dun mois lautre ; la proportion de donnes en fonction des usages de leau nest pas la mme dune anne sur lautre Les effets de la saison et de lusage ont t prcdemment analyss. Trois questions peuvent se poser vis--vis du nombre de prlvements effectus sur chaque site : 1. le nombre de prlvements est-il plus important dans les zones aquatiques o la prolifration des cyanobactries est plus importante ? 2. Les sites pour lesquels il existe plusieurs annes de donnes ont-ils une abondance de CC plus importante ? 3. Dans une zone aquatique donne, les prlvements sont-ils effectus de manire privilgie lorsque la prsence de cyanobactries est souponne ? Les rponses ces questions sont prsentes ci-dessous. Dans la modlisation, la probabilit de prsence et labondance des cyanobactries sont apparues positivement et significativement corrles au nombre de donnes disponibles pour chaque site de prlvement. Les sites sur lesquels plus de prlvements sont effectus sont galement ceux sur lesquels la prsence des CC est plus frquente et labondance plus importante. Des sites apparemment identifis comme vulnrables vis--vis de la prolifration de cyanobactries sont donc lobjet dune surveillance accrue. Les prlvements effectus dans les communes pour lesquelles une seule anne de donnes est disponible ont t compars ceux des communes pour lesquelles au moins deux annes de donnes sont disponibles, au travers du pourcentage de prsence et de labondance des CC. Le premier groupe concerne 299 communes et comprend 1 676 rsultats (dnombrements des CC) de prlvements sur eaux brutes ; le deuxime groupe concerne 129 communes et comprend 2 110 rsultats toujours sur eaux brutes. Les diffrences observes entre ces groupes des communes sont faibles. Qui plus est, les deux paramtres analyss (pourcentage de prsence et abondance des CC) voluent en sens inverse : le pourcentage de prsence des CC est suprieur sur les prlvements associs aux communes du premier groupe par rapport au second (83 vs 76 %), mais labondance moyenne y est infrieure (moyenne gomtrique de 10 000 vs 13 500 CC.mL-1) [rsultats bruts sans modlisation]. Autrement dit, il ny a pas vraiment de diffrence entre les prlvements effectus dans ces deux groupes de communes. Aprs analyse, il apparat que 67 % des prlvements ont lieu le lundi ou le mardi. A contrario, seuls 4,6 % des prlvements ont lieu le vendredi, samedi et dimanche. De manire gnrale, au niveau dune zone aquatique, les prlvements ne semblent donc pas tre effectus prfrentiellement lorsque lapparition de cyanobactries est souponne. Ces valeurs sont quivalentes quel que soit lusage de leau considr. Le pourcentage de prsence des cellules de cyanobactries dans les prlvements est compris entre 70 et 84 % [rsultats bruts] suivant le jour de la semaine considr. Les prlvements correspondant aux jours les moins reprsents au niveau du nombre de prlvements (du vendredi au dimanche) nadmettent pas un pourcentage de prsence des CC suprieur ceux des jours les plus reprsents (lundi et mardi). Il en est de mme pour labondance moyenne. Les prlvements effectus en dehors du lundi et du mardi, ne sont pas faits spcifiquement parce quune prolifration de cyanobactries est souponne. Lchantillon des rsultats de dnombrements est biais du fait des disproportions de donnes mensuelles dune part et du nombre de donnes disponibles pour chaque site de prlvement dautre part : un plus grand nombre de prlvements est effectu pendant les mois et sur les sites o la prsence et labondance des cellules de cyanobactries sont plus importantes. Lapproche de rgression employe permet de corriger en bonne partie ces biais. La reprsentativit des rsultats statistiques obtenus dpend alors de la reprsentativit de lchantillon des sites pour lesquels des rsultats de prlvements sont disponibles (biais potentiel li au recueil des donnes).

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4.1.4. Relation entre abondance et dominance des cyanobactries

Le pourcentage reprsent par les cyanobactries par rapport au total algal est fourni pour 2 143 prlvements avec abondance non nulle. La moyenne (gomtrique) de labondance de ce sous-chantillon est de 11 000 CC.mL-1 et lcart type (gomtrique) de 18. Ces valeurs sont trs proches de celles de lchantillon complet (2 653 valeurs) des rsultats de dnombrement avec abondance non nulle (12 400 CC.mL-1 et 16 respectivement pour la moyenne et lcart type gomtriques). Le sous-chantillon des prlvements pour lesquels linformation sur le pourcentage des CC est disponible est donc reprsentatif en terme dabondance de lchantillon complet des prlvements avec rsultats de dnombrements cellulaires non nuls. La relation entre pourcentage reprsent par les cyanobactries (par rapport au total algal) et abondance des cellules de cyanobactries a alors t analyse. Bien que significative, la relation croissante entre abondance des CC et le pourcentage quelles reprsentent par rapport au total algal est peu prdictive du fait dune trs grande dispersion des valeurs. La relation (moins exigeante) entre abondance et dominance des CC, variable qui vaut 1 si le pourcentage reprsent par les CC est suprieur 50 % et 0 dans le cas contraire, a alors t analyse. La probabilit que les cyanobactries soient dominantes apparat effectivement comme une fonction significative et prdictive de labondance (rgression logistique). Le tableau IV-IX fournit la probabilit que les cellules de cyanobactries soient dominantes en fonction du nombre de cellules de cyanobactries.

Tableau IV-IX : Relation entre abondance et dominance des cellules de cyanobactries.

Abondance en nombre de CC par mL 100 1 000 2 500 10 000 100 000
* Intervalle de confiance 95 % autour de la valeur moyenne.

Probabilit que les CC soient dominantes (IC* 95 %) 10 % 3 35 % 4 50 % 4 70 % 3 90 % 2

partir de 2 500 CC.mL-1, il y a plus de 50 % de chance que les cyanobactries soient dominantes (i.e. quelles reprsentent plus de 50 % du total algal) ; partir de 10 000 CC.mL-1, la probabilit quelles soient dominantes est de 70 % environ.

4.1.5. Taxonomie
Les prlvements avec information taxonomique (1 699 donnes en eaux brutes) admettent des niveaux dabondance en CC identiques ceux de lensemble des prlvements avec rsultats de dnombrement non nuls (moyenne gomtrique de 15 700 versus 12 400 CC.mL-1 ; cart type gomtrique de 14 vs 16). Ce souschantillon de valeurs est donc reprsentatif de lensemble des donnes disponibles dans la base en terme dabondance en CC. En tout, 27 genres diffrents de cyanobactries ont t recenss dans la base (tableau IV-I). Le nombre de genres identifis par prlvement est compris entre 1 et 12 ; sa valeur mdiane est de 2 sur les trois annes considres, tous usages confondus. Environ 97 % des 1 699 prlvements avec dtermination taxonomique (soit 1 648 prlvements) prsentent au moins un genre potentiellement toxique [rsultat brut]. Ce pourcentage de prsence de genres potentiellement toxiques dans les prlvements est pratiquement identique suivant les annes et les usages de leau. Entre 1 et 3 genres potentiellement toxiques sont retrouvs dans 83 % des prlvements avec dtermination taxonomique. Les diffrences inter-dpartements du pourcentage de prsence de genres potentiellement toxiques sont faibles. Une prdominance de la prsence de certains genres est constate : Planktothrix identifi dans 46 % des prlvements et sur 65 % des sites (sur 214), Microcystis dans 43 % des prlvements et 75 % des sites, Aphanizomenon respectivement dans 40 % et 64 %, Anabaena dans 34 % et 54 %, et Woronichinia dans 23 % et 32 %, les autres genres ayant un pourcentage de prsence infrieur 10 %. Il sagit l de rsultats bruts et non de valeurs prdites par modlisation.

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Ces genres, considrs comme potentiellement toxiques, sont les plus frquemment rencontrs dans les prlvements et, qui plus est, lorsquils sont prsents dans un prlvement, ils ont entre 70 et 80 % de chance dtre le genre dominant. De manire gnrale les diffrents genres de cyanobactries ne semblent pas avoir les mmes distributions dabondance (tableau IV-X).

Tableau IV-X : Caractristiques statistiques de labondance des genres de cyanobactries prpondrants.

Genres de cyanobactries Aphanizomenon Anabaena Woronichinia Microcystis Plankthotrix Moyenne gomtrique en nombre de CC.mL-1 6 400 1 900 1 350 1 950 16 200 Ecart type gomtrique 12 21 8 10 15

Plankthotrix admet des niveaux dabondance nettement suprieurs aux genres Anabaena, Woronichinia, Microcystis, et suprieurs galement au genre Aphanizomenon. En revanche, cest chez Anabaena que la plus grande variabilit dabondance est observe. Lvolution saisonnire des genres de cyanobactries les plus frquemment rencontrs dans la base de donnes est prsente sur la figure L livret couleur. Le genre Planktothrix apparat comme le plus reprsent (en nombre de cellules) tout au long de lanne. Deux pics dabondance apparaissent : un au mois de juillet et le deuxime au mois de septembre, pour les genres Planktothrix, Aphanizomenon et Anabaena. Ceci semble en contradiction avec les rsultats de lanalyse de rgression sur labondance totale des CC. En revanche, un phnomne similaire apparat lanne 2002 et dans une moindre mesure en 2003 dans de lanalyse pluriannuelle des pourcentages de chaque classe dabondance [rsultats bruts] prsente figure IV-1. Effectivement, la majorit des donnes avec information taxonomique proviennent des annes 2002 et 2003, part gale. Ce phnomne de double pic, trs marqu lanne 2002, mais pas du tout lanne 2004, pourrait tre li des diffrences mtorologiques interannuelles et ne peut tre considr a priori comme une gnralit.

4.1.6. Relation entre abondance des cyanobactries et teneur en chlorophylle a

Lchantillon des rsultats de chlorophylle a comprend 1 695 valeurs, issues de prlvements en eaux brutes, comprises entre 0,05 et 1 656 g.L-1. La moyenne gomtrique de cet chantillon de valeurs est de 23 g.L-1 (carttype gomtrique de 3,3) ; 90 % des rsultats de chlorophylle a sont compris entre 4 et 128 g.L-1.Valeurs extrmes mises part, la distribution des rsultats de chlorophylle a se rapproche de la distribution lognormale. Le sous-chantillon des prlvements pour lesquels un rsultat de chlorophylle a est disponible nest pas tout fait reprsentatif de lensemble des prlvements quant aux rsultats de dnombrement des CC. Le pourcentage de prsence des CC dans les prlvements avec teneur en chlorophylle a est significativement suprieur celui des prlvements sans rsultat de chlorophylle a (83 versus 72 %). Il est de mme pour labondance des CC (16 000 versus 8 500 CC.mL-1 en moyenne gomtrique). La relation entre nombres de cellules de cyanobactries et niveaux de chlorophylle a est prsente figure IV-2.

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Figure IV-2 : Relation entre nombre de cellules de cyanobactries par mL et concentration en chlorophylle a en g.L-1, estime sur 1 585 rsultats de prlvements [rsultats bruts sans modlisation]. Les donnes sur les eaux brutes des trois annes 2002 2004 et des diffrents usages ont t agrges.

log10(Nombre de CC/mL+1)

0.1

1.0

10.0

100.0

1000.0

Teneur en chlorophylle a en g/L (chelle log)

En dehors des valeurs extrmes autrement dit, entre 5 et 130 g.L-1 de chlorophylle a, ce qui reprsente plus de 90 % des valeurs, aucune relation exploitable nest observe entre rsultats de dnombrement des CC et teneur en chlorophylle a telle que mesure par le protocole en vigueur. partir de 5 g.L-1 de chlorophylle a, des rsultats de dnombrement suprieurs 10 000 CC.mL-1 peuvent apparatre et, inversement, 100 g.L-1 de chlorophylle a, les cellules de cyanobactries ne sont pas ncessairement prsentes. Le fait de ne travailler que sur les cas o les cyanobactries sont dominantes o trs dominantes (i.e. o elles reprsentent plus de 50 % ou plus de 75 % du total algal) modifie peu ce qui vient dtre dit. En revanche, une relation entre concentration en chlorophylle a et probabilit de dpassement de valeurs seuils sur le nombre de CC peut tre tablie. La probabilit que le nombre de CC dun prlvement dpasse 20 000 par mL (respectivement 100 000 CC.mL-1) apparat comme une fonction significative et prdictive de la teneur en chlorophylle a entre 5 et 130 g.L-1 (rgression logistique). Le tableau IV-XI fournit les probabilits de dpassement de la valeur de 20 000 CC.mL-1 (resp. 100 000 CC.mL-1) en fonction de la concentration en chlorophylle a.

Tableau IV-XI : Relation entre concentration en chlorophylle a et probabilit de dpassement dun seuil (20 000 et 100 000) sur le nombre de cellules de cyanobactries par mL, estime partir de 1 444 rsultats de prlvements. Les donnes sur les eaux brutes des trois annes 2002 2004 et des diffrents usages ont t agrges.
Concentration en chlorophylle a en g.L-1 10 25 50 75 100 125
* Intervalle de confiance 95 %.

Probabilit que le nombre de CC dpasse 20 000 par mL (IC* 95 %) 20 % 3 38 % 3 55 % 4 66 % 5 72 % 5 77 % 5

Probabilit que le nombre de CC dpasse 100 000 par mL (IC* 95 %) 6%3 15 % 3 29 % 4 40 % 5 47 % 5 54 % 5

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Il se confirme bien que mme pour de faibles teneurs en chlorophylle a, une abondance de CC importante peut tre observe : partir de 10 g.L-1 de chlorophylle a, il y a 20 % de chance que le nombre de CC dpasse 20 000 par mL et 6 % de chance quil dpasse 100 000 par mL La prise en compte du pourcentage que les cyanobactries reprsentent par rapport au total algal dans la relation entre chlorophylle a et risque de dpassement des valeurs de 20 000 et 100 000 CC.mL-1 amliore de manire significative le caractre prdictif de cette relation (rgression logistique). Autrement dit, si le niveau de chlorophylle a et le pourcentage que les cyanobactries reprsentent par rapport au total algal sont connus, la probabilit de dpasser 20 000 CC.mL-1 (resp. 100 000 CC.mL-1) peut tre prdite avec une relative bonne prcision, 3,5 % pour lintervalle de confiance 95 % (figures IV-3 et IV-4). Nanmoins, cette relation ne fournit pas le nombre de CC, mais seulement le risque de dpassement dune valeur ; cette information est pertinente en terme de gestion si ce risque est faible ou fort, mais pas sil est entre les deux.

Figure IV-3 : Risque (probabilit) de dpassement de la valeur de 20 000 CC.mL-1 en fonction de la teneur en chlorophylle a et du pourcentage reprsent par les CC par rapport au total algal.
1 0 0

9 0

8 0

7 0

6 0

Pourcentage reprsent par les CC par rapport

0 . 8 -1 .0
au total algal

5 0

0 . 6 -0 .8 0 . 4 -0 .6 0 . 2 -0 .4 0 . 0 -0 .2

4 0

3 0

2 0

1 0

0 5 15 25 35 45 55 65 75 85 95 105 115 125

T e n e u r e n c h lo r o p h y lle a e n g / L

La figure IV-3 se lit de la manire suivante : le risque de dpassement de la valeur de 20 000 CC.mL-1 est une fonction croissante la fois de la teneur en chlorophylle a et du pourcentage relatif des CC par rapport au total algal. Pour une teneur en chlorophylle a de 50 g.L-1, le risque de dpasser 20 000 CC.mL-1 est infrieur 0,2 si les CC reprsentent mois de 30 % du total algal ; il est suprieur suprieur 0,8 si les CC reprsentent plus de 80 % du total algal.

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Figure IV-4 : Risque (probabilit) de dpassement de la valeur de 100 000 CC.mL-1 en fonction de la teneur en chlorophylle a et du pourcentage reprsent par les CC par rapport au total algal.
1 0 0

9 0

8 0
Pourcentage reprsent par les CC par rapport

7 0

6 0

0 . 8 -1 . 0
au total algal

5 0

0 . 6 -0 . 8 0 . 4 -0 . 6 0 . 2 -0 . 4 0 . 0 -0 . 2

4 0

3 0

2 0

1 0

0 5 15 25 35 45 55 65 75 85 95 105 115 125

T e n e u r e n c h lo r o p h y lle a e n g / L

LOMS a tabli une relation entre teneur en chlorophylle a et nombre de CC partir de mesures en laboratoire sur des cyanobactries. Elle est a priori exploitable sur le terrain, si les cyanobactries sont les seules algues prsentes ou si elles sont trs majoritaires. Dans notre analyse, aucune relation prdictive entre chlorophylle a et nombre de CC nest observe ; seule une relation probabiliste a pu tre estime. Cinq facteurs intervenant sur la relation entre nombre de CC et teneur en chlorophylle a dun prlvement peuvent expliquer ce phnomne : 1. la proportion plus ou moins importante que les cyanobactries reprsentent par rapport aux autres algues phytoplanctoniques ; 2. la taille des cellules de cyanobactries qui peut tre trs diffrente dun genre ou dune espce lautre ; 3. la quantit de pigment chlorophyllien par unit de volume cellulaire qui diffre galement dune espce de cyanobactries lautre mais galement entre les diffrents types dalgues ; 4. la plus ou moins grande facilit dextraction de la chlorophylle a partir des cellules de cyanobactries et sa dgradation rapide dans le temps ; 5. les erreurs dues aux difficults de dnombrement cellulaire chez certains genres de cyanobactries. Ltude Grand Ouest (DGS et al. 2004) avait tabli une relation significative et positive entre nombre moyen de cellules de cyanobactries et teneur moyenne en chlorophylle a partir de rsultats de prlvements sur le terrain. Par comparaison avec la prsente analyse, il est noter que dans ltude Grand Ouest : 1. le nombre de sites de prlvement est beaucoup plus faible (26 vs 200) et ceux-ci avaient t choisis pour leur forte abondance en CC ; 2. la priode dtude est plus courte et ne concerne quune seule anne de prlvements ; 3. les mthodes de prlvement, de dnombrement des CC et de mesure de la chlorophylle a sont beaucoup plus homognes. La diversit des sites de prlvement et par consquent des peuplements phytoplanctoniques, les volutions saisonnires et cologiques, font quaucune relation prdictive napparat entre chlorophylle a et dnombrement des cellules de cyanobactries dans notre tude. Au vu de notre analyse et tous sites confondus, la mesure de la teneur en chlorophylle a ne peut pas tre un indicateur exploitable en terme de gestion de la prsence ou de labondance des cellules de cyanobactries et se substituer au dnombrement de ces dernires. Elle reste pour autant un indicateur du peuplement phytoplanctonique total.

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4.2. Dosage des microcystines

Le sous-chantillon des prlvements avec un rsultat de dosage des microcystines apparat clairement biais par rapport lchantillon total des prlvements en ce qui concerne labondance des cellules de cyanobactries. Les prlvements avec dnombrement cellulaire et dosage des microcystines admettent un pourcentage de prsence des CC et une abondance trs significativement (p <<10-3) suprieurs aux prlvements avec uniquement un dnombrement cellulaire (95 % vs 71 % pour le pourcentage de prsence des CC et 70 000 vs 5 000 CC.mL-1 pour ce qui est de labondance en moyenne gomtrique). La probabilit, par exemple, davoir plus de 20 000 CC.mL-1 est de 36 % sur le total des prlvements avec dnombrement des CC ; elle est de 72 % sur les prlvements avec un rsultat de dnombrement des CC et dosage des MCs [rsultats bruts]. Les dosages de microcystines sont effectus lorsque labondance est importante, sans quapparaisse pour autant de valeur seuil en-dessous de laquelle aucun dosage de MC ne soit effectu. Fournir, comme pour le dnombrement des CC, le rsultat du dosage des microcystines sur chaque site de prlvement nest donc pas possible. Comme pour les dnombrements cellulaires, les prlvements effectus pour dosage des MCs ont lieu majoritairement le lundi et le mardi. Les caractristiques des prlvements le reste de la semaine ne sont pas diffrentes de celles de ces deux jours. Prs de 63 % des rsultats de dosage des microcystines en eaux brutes sont en-dessous du seuil de dtection et de quantification (fix 0,16 g.L-1 dans notre base(26)), et ce quel que soit lusage de leau dans laquelle le prlvement a t effectu. La distribution des rsultats est extrmement dissymtrique : 88 % des valeurs sont infrieures 3 g.L-1, 8 % sont incluses entre 3 et 15 g.L-1 et les 4 % restants des valeurs sont tales entre 15 et 1 600 g.L-1. Les 17 valeurs suprieures 100 g.L-1 ont t analyses sparment en reprenant chaque rapport. Il ressort de cette analyse que : trois valeurs correspondent des erreurs dunit ; neuf concernent le mme site de prlvement : elles sont associes de trs fortes abondances de cyanobactries (suprieures 1 million de CC.mL-1 dans 4 cas et 300 000 CC.mL-1 dans les 5 cas restants) et sont issues de prlvements en surface au sein defflorescences ; deux ont t catalogues comme provenant galement defflorescences sur un autre site ; la plus leve (1 600 g.L-1) provient dun prlvement effectu au filet plancton ; les deux dernires restent sans explication particulire. Autrement dit, ces plus fortes valeurs, mises part deux, trouvent une explication : elles sont issues de prlvements effectus au sein defflorescences. La proportion de rsultats dpassant 1 g.L-1 est plus faible dans les eaux AEP (13 %) que dans les eaux BLB (25 %) et BLAN (33 %). Environ 95 % des rsultats sont infrieurs 2,5 g.L-1 dans les eaux AEP, mais infrieurs 16 g.L-1 dans les eaux BLB et BLAN [rsultats bruts]. Ceci provient probablement en bonne partie des seuils sur le nombre de cellules de cyanobactries partir desquels les dosages de microcystines sont effectus, seuils qui sont diffrents dans les eaux AEP et dans les eaux BLB ou BLAN. Labondance moyenne (gomtrique) des prlvements AEP avec dosage des MCs est de 23 000 CC.mL-1 environ ; elle est respectivement de 135 000 et 150 000 CC.mL-1 pour les eaux BLB et BLAN [rsultats bruts]. Trois analyses ont alors t menes propos des microcystines ; elles concernent : 1. linfluence du genre des cyanobactries prsentes sur la concentration en microcystines ; 2. la relation entre abondance cellulaire et concentration en MC ; 3. linfluence de cofacteurs (usage, mois, anne, mthode analytique) sur cette relation. Les rsultats de ces analyses sont prsents ci-dessous.

(26) Rappel : afin dhomogniser les seuils de dtection et de quantification lis aux diffrentes mthodes analytiques et aux diffrents laboratoires, toute valeur infrieure 0,16 g.L-1 a t considre comme non-dtecte (ND). La limite de dtection et de quantification des microcystines pour la base de donnes est donc gale 0,16 g.L-1.

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4.2.1. Influence du genre des cyanobactries identifies sur la concentration en microcystines

Les prlvements avec dosage des microcystines et dtermination taxonomique sont au nombre de 715. La probabilit de dpassement du seuil de quantification des microcystines (0,16 g.L-1) ainsi que celle de dpassement de la valeur de 1 g.L-1 ont t expliques en fonction de la prsence(27) puis de labondance des genres les plus frquemment retrouvs, autrement dit : Planktothrix (identifi dans 46 % des prlvements), Microcystis (43 %), Aphanizomenon (40 %), Anabaena (34 %), Woronichinia (23 %), Aphanocapsa (10 %), Coelosphaerium (9 %), Oscillatoria (9 %), Limnothrix (8 %) et Merismopedia (8 %). Les genres en gras sont considrs comme potentiellement toxiques et producteurs de microcystines. Lapproche employe est la mme que pour lanalyse des rsultats de dnombrement des CC : il sagit de la rgression logistique sans interaction, avec prise en compte deffets mixtes (chapitre IV-3). Il ressort de cette analyse que le genre Microcystis a une influence systmatiquement significative positive sur les concentrations en MC, que ce soit sur la probabilit de dtection ou sur la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1, au travers de sa prsence et de son abondance. Planktothrix, Anabaena et Aphanocapsa ont une influence galement significative positive par leur abondance sur la probabilit de dtection ou sur la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1. Enfin, les genres Woronichinia, Aphanizomenon, et dans une moindre mesure Coelosphaerium, ont une influence significative ngative sur les concentrations en MC, mais celle-ci dpend de lanalyse statistique considre. Ceci pourrait tre li des aspects cologiques. Labondance des Microcystis apparat comme plus explicative que le simple paramtre prsence, la fois sur la probabilit de dtection des MCs et sur la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1. Le paramtre prsence des Microcystis est plus explicatif que labondance totale (tous genres confondus) des cyanobactries ; cest a fortiori vrai pour labondance des Microcystis. Nanmoins le niveau dexplication de labondance totale des CC sur les concentrations en MC reste proche de celui du paramtre Microcystis. Linformation concernant la taxonomie des cyanobactries ntant pas prsente chaque dnombrement, la relation entre concentration en MC et abondance totale des cyanobactries sera utilise dans la suite de ltude. Par ailleurs, le nombre de genres diffrents observs au sein dun prlvement pourrait avoir un effet ngatif sur les concentrations en MC : plus le nombre de genres observs est faible, plus les concentrations en MC seraient fortes et inversement. Bien que significative, linfluence de ce paramtre reste limite. Elle pourrait tre lie leffet ngatif, prcdemment constat, des genres Woronichinia, Aphanizomenon et Coelosphaerium sur la concentration en MC.

4.2.2. Relation entre abondance des cyanobactries et concentration en microcystines

La figure IV-5 a t construite partir de 946 rsultats de prlvement comportant un rsultat sur labondance des CC et un rsultat de dosage des MC. Aucune relation bijective et par consquent prdictive entre labondance des CC et la concentration en MC nest observable : un niveau dabondance des CC nengendre pas un niveau dfini de concentration en MC, mais une borne suprieure (ligne continue) de concentration en MC peut nanmoins tre dfinie (mise part deux points outliers). Des bornes suprieures correspondant diffrents niveaux de confiance peuvent galement tre estimes : la ligne en pointill correspond au quantile 95 % (pour une abondance cellulaire donne, on a 95 % de chance que la concentration en MC soit infrieure cette valeur) ; la ligne en tiret-point correspond au quantile 90 %.

(27) Variable qui vaut 1 lorsque le genre est identifi dans un prlvement et 0 dans le cas contraire.

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Figure IV-5 : Relation entre le nombre de cellules de cyanobactries et la concentration en microcystines sur 946 rsultats de prlvements [rsultats bruts].
3

Log10 de la Concentration en MC g/L

-1 0 2 4 Log10 du Nombre de CC par mL 6

Sil nexiste pas de relation bijective entre abondance en CC et concentration en MC, il existe nanmoins une relation en terme de probabilit (figure IV-6) : plus le nombre de cellules de cyanobactries augmente, plus la probabilit de dtecter des microcystines et de mesurer de fortes concentrations est importante.

Figure IV-6 : Relation entre le nombre de cellules de cyanobactries et la probabilit de dpassement dun seuil sur la concentration en microcystines, labore partir de 946 rsultats de prlvements par rgression logistique (IC95 % = intervalle de confiance 95 %).
Probabilit de dpassement de seuils sur la concentration en MC
0.7 0.16 g/L 1 g/L 5 g/L IC95%

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0.0 2*10^2 6*10^2 2*10^3 6*10^3 2*10^4 6*10^4 2*10^5 6*10^5 2*10^6

Nombre de cellules de Cyanobactries par mL (chelle log)

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Sur la figure IV-6, 1 000 CC par mL, la probabilit de dtecter des MC (i.e. davoir une valeur suprieure 0,16 g.L-1) est suprieure 20 % ; la probabilit que la concentration en MC dpasse 1 g.L-1 est infrieure 4 % et celle que la concentration en MC dpasse 5 g.L-1 est pratiquement nulle. En revanche, partir de 10 000 CC par mL, les probabilits de dpassement des valeurs de 0,16 g.L-1, 1 g.L-1 et 5 g.L-1 sont respectivement de lordre de 33 %, 10 % et 2 %... partir de 100 000 CC.mL-1, elles sont respectivement de lordre de 45 %, 25 % et 8 %. Il faut noter quaucun cofacteur na t pris en compte dans la relation entre nombre de cellules de cyanobactries et concentration en microcystines tablie prcdemment (voir discussion ci-dessous).

4.2.3. Discussion propos de la relation entre abondance des CC et concentration en MC

La relation prcdemment prsente entre abondance cellulaire et probabilit dobserver un certain niveau de concentration en MC doit tre relativise. Une analyse fonde sur 938 rsultats de prlvement, prenant en compte les cofacteurs tels que lusage de leau, la saison, lanne de prlvement, la mthode analytique de mesure des microcystines ainsi que le site de prlvement, a t mene. La mthodologie employe est la mme que celle prcdemment utilise pour le nombre de cellules de cyanobactries (chapitre IV.3). Il ressort de cette analyse que les paramtres : mois, anne, mthode analytique et dans une moindre mesure usage ont une influence significative sur la relation entre abondance cellulaire et concentration en microcystines, que ce soit au travers de la probabilit de dtection des MC (probabilit de dpassement de la valeur de 0,16 g.L-1) ou de la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1. Linfluence de ces paramtres reste identique, quun effet li aux sites de prlvement soit pris en compte ou non. La rgression est plus explicative sur la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1 de MC (coefficient de dtermination de 0,48) que sur la probabilit de dtection des MC (coefficient de 0,38). Lchantillon nest pas correctement quilibr suivant les diffrents paramtres utiliss : en particulier, la mthode ELISA a t trs peu utilise pour les prlvements BLB et BLAN. Nanmoins, si seuls les rsultats issus de la mthode analytique CLHP sont exploits, des rsultats similaires sont observs quant linfluence des paramtres mois, anne et usage. Leffet site de prlvement reste prpondrant comme dans toutes les analyses effectues sur les rsultats de dnombrement cellulaire. La mthode analytique a une influence suprieure celle des paramtres mois, anne et usage sur la probabilit de dtection des MC. En revanche, sur la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1, les trois paramtres mthode analytique, mois et anne ont une influence similaire, et suprieure celle du paramtre usage. La mthode danalyse ELISA conduit des niveaux de concentration en MC suprieurs ceux de la mthode CLHP : nombre de CC identique, lcart entre les deux mthodes est de 36 units de pourcent en moyenne sur la probabilit de dtection des microcystines (probabilit de dpassement de la valeur de 0,16 g.L-1) et de 25 units de pourcent sur la probabilit de dpassement du seuil de 1 g.L-1. Bien que thoriquement corrig au sein de la base, ceci pourrait provenir de diffrences de seuil de dtection entre les deux mthodes. abondance en cellules de cyanobactries quivalente, lanne 2002 a conduit des niveaux de concentration en MC suprieurs lanne 2004, lanne 2003 ayant atteint des niveaux intermdiaires. Lcart entre les deux annes 2002 et 2004 est en moyenne de 17 units de pourcent sur la probabilit de dtection des microcystines et de 23 units de pourcent sur la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1. nombre de CC identique, les prlvements effectus en eaux AEP et BLB admettraient des niveaux en MC infrieurs ceux des prlvements effectus en eau BLAN. Les carts estims sont en moyenne de 12 units de pourcent sur la probabilit de dtection des MC comme sur la probabilit de dpasser la valeur de 1 g.L-1. Indpendamment du nombre de CC, le paramtre saison a galement une influence significative sur la concentration en MC. Il ressort systmatiquement des analyses qu nombre de CC quivalent, la concentration en MC est significativement plus leve en juillet et plus basse au mois de juin. Lcart moyen entre ces deux mois est de 16 units de pourcent sur la probabilit de dtection des microcystines et de 20 units de pourcent sur la probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1. Le mois de juillet apparat alors comme le mois avec le plus fort risque de dtection de MC et de dpassement de la valeur de 1 g.L-1, alors mme que ce nest pas le mois de plus forte abondance cellulaire. Le mois de septembre ressort galement comme ayant, abondance quivalente, une probabilit de dpassement de la valeur de 1 g.L-1 significativement plus leve. Les donnes du mois de juillet pour les MC proviennent majoritairement de lanne 2002, anne pour laquelle est galement observ un pic sur le nombre de cellules de cyanobactries au mois de juillet avec des valeurs dabondance trs leves (figure IV-1). Les rsultats prcdents ne peuvent probablement pas tre gnraliss pour toutes les annes. Le risque dapparition de fortes concentrations en MC sera considr comme plus important de juillet septembre inclus.

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5. Rsultats en eaux traites

5.1. Dnombrement cellulaire
Le nombre de prlvements en eaux traites avec rsultat de dnombrement algal est trs faible (102) ; qui plus est, sa rpartition suivant les annes est trs dsquilibre : une donne pour lanne 2002, 38 pour 2003 et 63 pour 2004. Le pourcentage de prsence des CC dans les prlvements eaux traites est de 36 % sur les 102 rsultats ; il est donc significativement infrieur celui des eaux brutes qui est de 76 %. Quand la prsence de cellules est releve, labondance en moyenne gomtrique est de 100 CC.mL-1 et 75 % des rsultats positifs sont infrieurs 500. Malheureusement, rien ne permet pour linstant dvaluer la reprsentativit de ces statistiques. Pour 88 des 102 prlvements effectus en eaux traites, un rsultat de prlvement sur eau brute correspondant (mme lieu de prlvement, mme date) est disponible, rendant possible lanalyse de la relation entre les rsultats de dnombrement en eau brute et ceux en eau traite correspondant. Signalons nanmoins que le dlai de transit de leau au sein de lusine de traitement (avec prise en compte ou non de la bche de stockage) peut tre plus ou moins long et diffrent dune usine lautre(28) ; de ce fait, leau du prlvement eau brute nest pas directement celle du prlvement eau traite correspondant. Le pourcentage de prsence des cellules de cyanobactries ainsi que labondance des CC sont plus faibles sur les prlvements eaux brutes conjoints aux prlvements eaux traites que sur lensemble des prlvements effectus sur les eaux brutes AEP disponibles dans la base de donnes. Les prlvements eaux traites disponibles nont donc pas t effectus a priori lorsquune prolifration de cyanobactries tait souponne dans les eaux brutes. Sur 26 des 88 prlvements doubles (eau brute/eau traite), le rsultat de dnombrement est nul sur leau brute ; pour 6 de ces 26 cas, la prsence de cellules de cyanobactries est nanmoins observe dans le prlvement en eau traite correspondant, sans que le rsultat du dnombrement ne soit dailleurs fourni. Sur les 88-26 = 62 cas associs une prsence de cellules de cyanobactries en eau brute, seuls 23 admettent un rsultat en eau traite positif. Autrement dit, dans 37 % des cas, les cyanobactries prsentes dans les eaux brutes le sont galement dans les eaux traites. La moyenne gomtrique de labondance en eau brute est de 3 000 CC.mL-1 environ lorsquil ny a pas eu de dtection dans leau traite, et de 8 000 CC.mL-1 environ dans le cas contraire. Cette diffrence est statistiquement significative(29). Autrement dit, le niveau dabondance dans leau brute pourrait dterminer la probabilit de dtecter des cyanobactries dans les eaux traites : plus il y a de cyanobactries dans leau brute, plus il y a de chance den retrouver dans leau traite. Le ratio entre nombre de CC en eau brute et en eau traite est en moyenne important : le niveau dabondance moyenne passe de 8 000 CC.mL-1 en eau brute 40 CC.mL-1 en eau traite, ce qui correspond un ratio moyen (moyenne gomtrique) de 200 environ entre le nombre de cellules en eau brute et celui en eau traite. Nanmoins, ce ratio est trs variable dun prlvement lautre : il est compris entre 4 et 20 000 sur 23 valeurs. Son interprtation par rapport lefficacit du traitement est dlicate du fait du temps de transit de leau au sein de lusine.

5.2. Dosage des microcystines

Dans la base de donnes, 226 rsultats de dosage des microcystines en eau traite sont disponibles. La distribution de ces rsultats se trouve dans le tableau IV-XII. Malheureusement, aucune information ne permet dvaluer la reprsentativit de cet chantillon de mesures de microcystines en eau traite.

(28) Des problmes de discontinuit dans le pompage de leau brute peuvent galement apparatre. (29) p<0,05 par un student t test avec lhypothse dquivariance ou non.

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Tableau IV-XII : Distribution des valeurs de concentration en microcystines dans les eaux traites.
AEP Eaux traites Valeurs de microcystines ND (ou <0,16 g.L-1) 0,16=< <0,2 0,2=< <0,3 0,3 1,9 Total dtect Total Nombre de Donnes 200 15 9 1 1 26 226 Pourcentage du total 88 % 7,0 % 4,0 % 0,4 % 0,4 % 12 % 100 %

Sur les 226 prlvements effectus sur eaux traites avec dosage des microcystines, 150 sont associs un prlvement sur eau brute correspondant avec galement un dosage des microcystines (mme lieu, mme date). Dans un cas, des microcystines ont t dtectes dans leau traite, alors quelles ne lont pas t dans leau brute correspondante (erreur ? diffrence dans les seuils de dtection ? influence du dcanteur boue ? temps de transit ?). Sur 74 cas o des microcystines sont dtectes dans leau brute, seuls 20 (27 %) sont associs une dtection positive dans leau traite. Paradoxalement, le niveau de microcystines dans les eaux brutes qui conduit une dtection de MC dans les eaux traites serait infrieur au cas o il ny a pas de dtection en eau traite. Le ratio entre concentration en microcystines eau brute/eau traite est compris entre 0,56 (dans ce cas, la concentration en eau traite est a priori suprieure celle de leau brute) et 14,6 ; il est de 1,6 en moyenne gomtrique et de 2,6 en moyenne arithmtique, sur 20 valeurs au-dessus du seuil de quantification. Il apparat donc relativement faible par rapport celui constat prcdemment sur le nombre de cellules de cyanobactries.

6. Conclusions
Les donnes recueillies soit 4 273 rsultats de dnombrement des cellules de cyanobactries [CC] et/ou de dosage des microcystines [MC] sur les annes 2002-2004, provenant de 442 communes sont issues majoritairement de plans de surveillance sanitaire des eaux de surface en France mtropolitaine concernant des sites dadduction deau publique [AEP], des baignades surveilles [BLB] ou dautres sites associs diffrentes activits nautiques [BLAN]. La base de donnes mise en place partir de ces donnes ne rsulte donc pas comme dans ltude Grand Ouest (DGS et al. 2004), par exemple, dun plan dexprience labor de manire prospective et homogne. En revanche : 1. le nombre de donnes dans cette base est bien suprieur celui de ltude Grand Ouest (DGS et al. 2004)(30), qui portait sur 350 rsultats de prlvements environ et 26 sites ; 2. la couverture gographique est plus importante, mme si la majorit des donnes proviennent des rgions Bretagne, Pays de la Loire, Basse Normandie, Limousin et Poitou-Charentes et quil ny a pas de donnes pour tout lest de la France. La base de donnes mise en place prsente des dsquilibres et des biais certains : le nombre de donnes disponibles est plus important sur la priode de lanne et sur les sites o la prolifration des CC est plus importante, tmoignant de lorigine des donnes prsentes dans la base (plans de surveillance). En revanche les prlvements sont effectus essentiellement le lundi et le mardi et ce de manire plus ou moins rgulire suivant les sites et la saison. Ils ne sont donc pas effectus spcifiquement au moment o un dveloppement de CC est souponn. Par ailleurs, il ny a pas de suivi pluriannuel des prlvements sur les sites pour la priode considre. Une approche de modlisation fonde sur la rgression linaire gnralise avec prise en compte deffets lis aux sites de prlvement a t employe afin de pallier ces inconvnients autrement dit, pour tenter de donner le mme poids chaque site et chaque mois et de prsenter une image la plus reprsentative possible

(30) La base de donnes mise en place comprend les donnes de ltude Grand Ouest.

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du phnomne de prolifration des cyanobactries et de production des microcystines. Les principaux rsultats prdits partir de ces analyses sont prsents ci-dessous. Les sites de prlvement pour lesquels des donnes sont disponibles tant localiss essentiellement dans louest et le centre de la France, ils ne sont pas ncessairement reprsentatifs de lensemble des milieux aquatiques continentaux mtropolitains. Lextrapolation des rsultats statistiques lensemble du territoire mtropolitain reste dlicate : faut-il considrer que l o il ny a pas de donnes, il ny a pas de problme de prolifration de cyanobactries ou bien au contraire gnraliser les rsultats statistiques obtenus lensemble des rgions ? La prsence de CC est atteste dans la majorit (329/427=77 %) des sites de prlvement pour lesquels des donnes en eaux brutes sont disponibles au sein de la base. La probabilit de prsence des cyanobactries est maximale en septembre-octobre et minimale pendant les mois dhiver ; elle est en moyenne, sur lensemble des sites de prlvement, estime entre 50 % en hiver et 85 % aux mois de septembre-octobre. Elle est plus faible pour les prlvements effectus en eaux brutes AEP que pour les prlvements en eaux BLB ou BLAN. Ceci semble indpendant du type de zone aquatique considr (rivire, tang, lac) et doit tre principalement li la zone et la profondeur du prlvement, qui diffrent entre AEP, et BLB ou BLAN : les CC sont plus prsentes en bordure et en surface des zones aquatiques. Lorsque les cyanobactries sont prsentes, leur abondance moyenne(31) mensuelle est infrieure 3 000 CC.mL-1 en hiver et 50 000 CC.mL-1 au mois de septembre (mois de plus forte abondance) pour 75 % des sites (245 sur 327). Prs de 5 % des sites (une vingtaine sur 327) admettent par contre de trs fortes valeurs dabondance moyenne (entre 300 000 et 2 millions de CC par mL). Le risque de dpassement de 100 000 CC.mL-1 est plus faible dans les prlvements en eaux brutes AEP que dans les prlvements en eaux BLB et BLAN ; il est dans tous les cas maximal au mois de septembre et minimal pendant les mois dhiver. Le risque moyen de dpasser 100 000 CC.mL-1 est compris entre 1 % et 12 % suivant la saison pour les sites AEP (89 sites), et entre 3 % et 25 % environ pour les sites BLB (231) et BLAN (97). Ces valeurs moyennes masquent une variabilit en fait trs importante dun site lautre : ce risque apparat assez limit sur la grande majorit de sites AEP, mais important pour un quart des sites BLB ou BLAN, regroups en partie dans certains dpartements en Bretagne et Pays de la Loire, dans le Cher, lIndre, la Vienne et la Creuse. Connatre la typologie des zones aquatiques serait particulirement important afin de comprendre ce phnomne. La prsence despces de cyanobactries potentiellement toxiques est difficile valuer car lidentification taxonomique sarrte au genre pour la plupart des prlvements. Ont donc t considrs comme potentiellement toxiques tous genres comprenant au moins une espce potentiellement toxique. Sous cette hypothse, la quasi-totalit des rsultats de prlvements comporterait au moins un genre potentiellement toxique. Nanmoins, cette hypothse survalue a priori le danger, car toutes les espces dun genre considr comme potentiellement toxique ne le sont pas ncessairement. Les genres majoritairement retrouvs dans les prlvements sont : Planktothrix identifi dans 46 % des prlvements et sur 65 % des sites (sur 214), Microcystis dans 43 % des prlvements et 75 % des sites, Aphanizomenon respectivement dans 40 % et 64 %, Anabaena dans 34 % et 54 %, et Woronichinia dans 23 % et 32 %, les autres genres ayant un pourcentage de prsence infrieur 10 %. Ces genres, tous considrs comme potentiellement toxiques, sont galement ceux qui ont majoritairement t observs dans ltude Grand Ouest. Planktothrix admet un niveau dabondance trs suprieur aux autres genres quelle que soit la priode de lanne. Le sous-chantillon des prlvements avec dosage des microcystines apparat clairement biais par rapport lchantillon total des prlvements vis--vis de labondance des cellules de cyanobactries : les dosages de microcystines sont effectus lorsque labondance est importante en particulier dans les eaux BLB et BLAN. La dtection(32) et la concentration en microcystines ont pu tre relies de manire positive et significative la prsence et/ou labondance des genres Microcystis, Planktothrix, Anabaena et Aphanocapsa (dans lordre dinfluence), et de manire gnrale au nombre total de cellules de cyanobactries. Cette relation dpend de la mthode analytique de dosage des microcystines (CLHP ou ELISA), de lusage de leau dans laquelle le prlvement a t effectu (AEP, BLB et BLAN), du mois de lanne et mme du site de prlvement. La probabilit de dtecter des microcystines et davoir des concentrations importantes est maximale du mois de juillet au mois de septembre inclus.

(31) Il sagit de la moyenne gomtrique, qui est utilise lorsquun chantillon prsente une loi de probabilit de type lognormale (distribution dissymtrique caractrise par la prsence importante de faibles valeurs et lexistence de fortes valeurs en faible effectif). Elle est quivalente dans ce cas la mdiane de lchantillon, autrement dit la valeur qui spare les 50 % plus faibles valeurs des 50 % plus fortes. (32) Afin dhomogniser les seuils de dtection et de quantification lis aux diffrentes mthodes analytiques et aux diffrents laboratoires, toute valeur indique comme telle dans le rapport danalyse ou infrieure 0,16 g.L-1 a t considre comme non-dtecte (ND). La limite de dtection et de quantification des microcystines pour la base de donnes est donc gale 0,16 g.L-1.

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Aucune relation exploitable en gestion entre teneur en chlorophylle a et nombre de CC nest ressortie dune analyse effectue sur 1 585 rsultats de prlvements avec dnombrement cellulaire et mesure de la chlorophylle a. La probabilit dobserver une forte valeur dabondance de CC augmente bien de manire significative avec la teneur en chlorophylle a, mais il sagit bien dune relation probabiliste et non dterministe. Qui plus est, il ny a pas de seuil exploitable sur les teneurs en chlorophylle a en dessous duquel le nombre de CC observ reste faible : ds 10 g.L-1 de chlorophylle a ce qui est une faible valeur , la probabilit dobserver plus de 20 000 CC.mL-1 est dj de 20 % et celle dobserver plus de 100 000 CC.mL-1 de 6 %. partir de 25 g.L-1 de chlorophylle a, les probabilits dobserver plus de 20 000 et plus de 100 000 CC.mL-1 sont respectivement de 38 % et 15 %. La prise en compte du pourcentage que les cyanobactries reprsentent par rapport au total algal dans les relations entre chlorophylle a et risques de dpassement des valeurs de 20 000 et 100 000 CC.mL-1 amliore de manire significative le caractre prdictif de ces relations probabilistes. Environ 300 prlvements parmi les 4 273 de lchantillon total ont t effectus en eaux traites (sortie dusine). Lanalyse des rsultats de ces prlvements a montr : la prsence de CC dans 36 % (37/102) des rsultats de prlvements, avec un niveau dabondance infrieur 500 CC.mL-1 la plupart du temps ; la dtection (valeurs suprieures 0,16 g.L-1) de MC dans 12 % (26/226) des prlvements, avec des concentrations infrieures 0,3 g.L-1 sauf dans un cas ; un ratio moyen entre leau brute et leau traite important sur le nombre de cellules de cyanobactries (200 en moyenne), mais faible sur les concentrations en MC (entre 1 et 2). le fait que les prlvements en eaux traites ne semblent pas avoir t effectus spcialement lorsquune prolifration de cyanobactries tait souponne en eau brute. Rien ne permet dvaluer pour linstant la reprsentativit de ces rsultats. Cette tude avait pour objectif deffectuer un tat des lieux sur la contamination des zones aquatiques continentales par les cyanobactries et les microcystines, tat des lieux le plus reprsentatif possible compte tenu des biais importants que comporte lchantillon de donnes mis en place. Elle na pas eu pour objectif dexpliquer la prsence ou labondance des cellules de cyanobactries en fonction de dterminants physiques, chimiques, biologiques ou mtorologiques, en particulier parce que ces informations ntaient pas disponibles. Ltude Grand Ouest en revanche avait montr linfluence : 1. de certaines caractristiques lies la zone aquatique sur la contamination en cyanobactries (profondeur et anciennet par exemple) ; 2. de la mtorologie sur le phnomne de prolifration court terme. Une tude plus grande chelle : (1) sur les typologies des zones aquatiques et (2) sur linfluence de la mtorologie serait particulirement pertinente.

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Points retenir Une absence de donnes pour tout lest de la France est dplorer dans la base constitue et analyse. La majorit des donnes provient de louest et du centre de la France. La prsence de cellules de cyanobactries est atteste dans la majorit des sites pour lesquels des rsultats de prlvements sont disponibles. Sur certains sites, la prsence de cyanobactries est atteste toute lanne. Les prlvements effectus sur des sites de baignade ou sur des sites lis des activits nautiques admettent des probabilits de prsence de cyanobactries et des risques de dpassement de la valeur de 100 000 cellules de cyanobactries par mL suprieures ceux effectus dans des eaux destines la production deau potable. Ce phnomne indpendant du type de la zone aquatique considre : rivire, lac, tang, est probablement li la profondeur et la zone de prlvement au sein du milieu aquatique, deux paramtres qui diffrent suivant lusage de leau (effets de surface et de bord dans la prolifration des cyanobactries). Les trs fortes valeurs dabondance sont le fait dune minorit de sites regroups dans certains dpartements, ceux dailleurs pour lesquels il y a le plus de donnes. Une analyse fine de la typologie de ces sites serait particulirement intressante. Aucune relation prdictive dterministe entre nombre de cellules de cyanobactries et concentration en microcystines na pu tre observe ; seule une relation probabiliste a pu tre tablie et quantifie : plus le nombre de cellules est important, plus la probabilit dobserver de fortes valeurs de microcystines est leve. Cette relation dpend malheureusement de nombreux cofacteurs : genre des cyanobactries prsentes, mthode de dosage des microcystines, priode de lanne, anne, voire site de prlvement. La probabilit de prsence des cyanobactries est maximale en septembre-octobre ; les plus fortes valeurs dabondance apparaissent en aot-septembre et les plus fortes concentrations en microcystines entre juillet et septembre, mais des variations interannuelles significatives sont observes. Ltude Grand Ouest avait montr court terme une influence significative de la mtorologie sur le phnomne de prolifration des cyanobactries. Aucune relation prdictive dterministe, exploitable en gestion des risques, entre nombre de cellules de cyanobactries et teneur en chlorophylle a na pu tre observe ; seule une relation probabiliste a pu tre tablie et quantifie. La prise en compte du pourcentage que les cellules de cyanobactries reprsentent par rapport au total algal amliore la relation prcdente : la probabilit dobserver de grandes quantits de cyanobactries peut tre exprime comme une fonction croissante de la teneur en chlorophylle a et de la part relative des cyanobactries par rapport au total algal. Des cellules de cyanobactries et des microcystines ont t retrouves dans des prlvements effectus en eaux traites. Labattement eau brute/eau traite est plus important sur le nombre de cellules de cyanobactries que sur les concentrations en microcystines.

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V. Modalits de matrise des dangers

1. Prvention et matrise de la croissance des cyanobactries

Les prolifrations de cyanobactries sont souvent lies ltat deutrophisation des plans et des cours deau ce qui implique dagir sur le statut trophique et le rgime hydrologique. La connaissance de ltat et de lvolution des paramtres caractristiques de ltat trophique des ressources et de leurs bassins versants est un pralable indispensable toute action. Il ne saurait se concevoir daction curative sans mise en uvre, si ncessaire, dune rduction des apports en azote et phosphore au sein des ressources.

1.1. Actions sur le statut trophique

Les nutriments importants pour la croissance des cyanobactries sont lazote, le phosphore et le carbone. Le phosphore minral joue un rle majeur car les cellules possdent une comptence de stockage de ce nutriment qui peut tre utilis pour 3 4 divisions. Dans les cosystmes naturels, 1 g de phosphore peut permettre le dveloppement dune biomasse atteignant 100 g de matire organique correspondant approximativement 1 g de chlorophylle a. Le ratio molculaire N/P est optimal 16 mole.mole-1 pour la croissance de presque tous les taxons phytoplanctoniques. Dans des conditions de saturation des nutriments, les populations de Microcystis ont des ratios N/P plus levs proches de 24 (Chorus 2001). Dautre part, les cyanobactries formant des colonies contiennent plus de phosphore ( 0,13 mole.mm-3) que les cellules isoles ( 0,07 mole.mm-3). Le rapport N/P ne semble donc pas tre le bon, ou le seul, critre pour dfinir le risque de prolifration de cyanobactries. La concentration en phosphore pourrait, pour certains genres, tre un paramtre prdictif. Xie et al. (2003) ont montr que le faible rapport N/P ntait pas la cause du dveloppement de Microcystis mais en tait le rsultat et que la concentration en phosphore tait la cl de rgulation des cyanobactries ne fixant pas lazote, tel Microcystis aeruginosa. Chorus & Bartram (1999) citent lexemple dune ressource avec une concentration en phosphore total de 600 g.L-1 et des densits de cyanobactries leves correspondant 200 g.L-1 de chlorophylle a. Dans les lacs, la limitation des prolifrations de cyanobactries passe par la rduction drastique des concentrations en phosphore, la valeur seuil atteindre dpendant de la profondeur. Kennedy & Cook (1982) ont montr quil fallait atteindre des concentrations de 30 50 g.L-1 de phosphore biodisponible (orthophosphate, polyphosphate et phosphore organique dans leau). Ces concentrations sont gnralement cites pour les lacs msotrophes de plaines mais dans les lacs msotrophes alpins et nordiques, sujets stratification, le seuil ne pas dpasser est plus faible de lordre de 10 20 g.L-1 (Chorus & Bartram 1999). Leutrophisation est le plus souvent augmente par les apports de phosphore provenant des activits anthropiques (eaux uses : mtabolisme humain et animal, lessives, ruissellement, rosion et lessivage des sols, dforestation).

1.1.1. Limitation des apports de nutriments et en particulier du phosphore 1.1.1.1. Apport diffus
Les codes de bonnes pratiques et les programmes daction initis par la Directive nitrates (91/CEE/271) apportent certaines protections vis--vis des fuites de phosphore (limitation des pandages de djections animales, couverture hivernale des sols, bandes enherbes). Le phosphore tant retenu dans les sols par le complexe argilo-humique, contrairement lazote, cest dans les zones o des pandages rpts damendements phosphors ou de djections animales et humaines ont satur les sols quil conviendrait, en application de la directive 76/464/CEE (substances dangereuses) et de la directive 2000/80/UE (directive cadre sur leau), de mettre en uvre des programmes de lutte contre lrosion et dactions spcifiques axes sur le phosphore. Ces mesures sajouteraient efficacement celles relatives aux rejets ponctuels deaux uses (interdiction des lessives avec phosphates, dphosphatation sur stations dpuration importantes, amlioration de lassainissement non collectif) ou aux effluents dlevage (PMPOA), pour une ncessaire diminution des flux de phosphore vers les plans deau et rivires lentes sensibles aux prolifrations de cyanobactries.

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Des techniques de pigeage du phosphore par des pr-retenues en amont des plans deau permettent de protger le plan deau final. Un exemple donn par Chorus & Bartram (1999) est celui du lac Kis Balaton en Hongrie qui est un rservoir dune surface denviron 60 km2 qui retient les apports de phosphore et protge le lac Balaton 10 fois plus grand. Il est montr que limpact de la rduction de la charge en phosphate sur le dveloppement des algues nest pas directement visible en raison dun quilibre chimique qui tend recharger la colonne deau en phosphore par celui contenu dans les sdiments. Sy trouvant pig sous certaines formes de phosphore biognique ou li aux lments minraux tels que Fe, Mn, Ca, il redevient disponible pour la biomasse en raison des conditions anoxiques du milieu. Ce nouvel quilibre est fonction dans le temps de la profondeur du plan deau. Le phosphore peut tre ainsi recycl plusieurs fois dans lanne. Lactivit des vers de vase, les remises en suspension par la navigation ou le vent, pour les rivires ou plans deau peu profonds, peuvent aussi favoriser ces relargages. Dans tous les cas, aprs rduction et/ou suppression des apports polluants, le retour un tat dquilibre peut prendre beaucoup de temps (Lafforgue 1998). Il a t estim que, dans les eaux superficielles, la dure ncessaire pour atteindre 90 % de diminution thorique de la concentration est gale 3 fois le temps de sjour moyen de leau. Une diminution importante des apports de N et P dans des lacs de Norvge a induit une priode de transition de 10 ans pendant laquelle leutrophisation et les dveloppements dalgues vertes ont fortement chuts alors quen parallle un genre de cyanobactrie avait colonis ces ressources en utilisant la charge interne en P (Solheim 2002). Le mme phnomne a t observ dans le lac du Bourget o une cyanobactrie toxique, Planktothrix rubescens, prolifre depuis quelques annes alors que les concentrations en phosphore ont diminu de 120 30 g.L-1 dans le lac depuis les annes 1980 (Jacquet et al. 2005).

1.1.1.2. Apports directs

Dans lensemble, les apports directs par les eaux uses reprsentent la majeure partie des charges en phosphore. Selon les habitudes alimentaires et lutilisation de produits mnagers, lapport journalier par personne se situe dans une fourchette de 1,8 4 g.j-1 de P, dont 1 g au moins est en relation avec le mtabolisme humain et donc incompressible. La part matrisable la source est reprsente par les polyphosphates des dtergents mnagers pour le lavage du linge et de la vaisselle. Les rglementations, lvolution du march et dans certains pays linterdiction pure et simple des polyphosphates dans les lessives ont permis de diminuer de manire sensible lapport journalier individuel. Par exemple, en France, en labsence de rglementation contraignante, la part des lessives dans les apports mnagers de phosphore chut de 30 % entre 1990 et 1996, portant son pourcentage de contribution 27 % de la charge urbaine totale (Lavoux & Rechatin 1998). Les produits de remplacement employs dans les lessives ne doivent pas leur tour poser dautres types de problmes. Malgr la diminution des apports la source, le phosphore est le moins bien limin des polluants urbains. Llimination moyenne au plan national du P dans les stations dpuration publiques de plus de 10 000 quivalents habitants est estim 42 %, contre 46 % pour lazote rduit et 88 % pour la DBO (Juin 2002). Il nexiste pas de source complte donnant la quantit de phosphore, toutes origines confondues, effectivement mise dans lenvironnement aquatique en France. Concernant les eaux uses urbaines, pour une ressource annuelle coule de 191 km3 en France et un objectif de 50 g.L-1, il faut au moins 83 % dabattement du P en moyenne en comptant des apports de 2,5 g.habitant-1.j-1 de P et une population de 60 millions dhabitants. Cette valeur correspond environ la suppression totale des phosphates des lessives pour le linge. Ce rsultat indicatif bas sur des hypothses trs simplificatrices donne videmment une sous-estimation importante du taux dabattement atteindre localement puisquil ne tient pas compte des apports industriels ni agricoles ni des stocks internes aux cours deau et encore moins des ressources hydrologiques locales qui peuvent tre infrieures la moyenne. Un objectif plus svre de 10 g.L-1 demande alors 96,5 % dabattement. Des tels rendements moyens sur un grand pays sont en pratique inatteignables par les seuls moyens de lpuration en dehors de toute considration conomique, sauf dans des bassins versants petits et trs bien contrls.

1.1.2. Prcipitation in situ du phosphore 1.1.2.1. Utilisation de sels de fer ou daluminium

Les produits les plus cits sont les sels de fer ou daluminium qui permettent de prcipiter les phosphates sous forme de phosphate de fer ou daluminium insolubles Cook (1993). Une exprience cite par Lafforgue (1998) dans lOuest de la France ltang du Moulin Neuf a montr un abattement trs net en phosphore aprs linjection de sulfate daluminium sur le cours de la rivire de Pont lAbb en aval dune pisciculture.

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 Kennedy & Cook (1982) ont utilis ce traitement avec succs mais insistent sur la quantit daluminium (Al) ajouter : la prcipitation/adsorption de P diminue quand le rapport molaire Al/P diminue. Si ce rapport est de 2 4, elle disparat. Dans la pratique, 1 mg daluminium peut potentiellement liminer 0,3 0,6 mg de P par litre. Ils concluent que lutilisation de sulfate daluminium est plus approprie pour limiter le relargage de phosphore des sdiments que pour traiter la colonne deau. Le traitement par ces sels provoque une prcipitation stable du phosphore dans les sdiments. Lajout daluminium dans des eaux faible pouvoir tampon peut provoquer une diminution du pH. Lam et al. (1995b) ont montr que le traitement laluminium provoquait dans leau une augmentation de microcystine. Prepas et al. (1997) ont utilis des sels de fer et montr quils pouvaient tre utiliss comme nutriments. Dans certains cas, le fer peut stimuler la croissance des cyanobactries et des algues. De plus, contrairement laluminium, le fer ne bloque pas de manire durable le phosphore et dans des conditions anoxiques qui se produisent souvent en fond de retenue, le fer ferrique est rduit en ion ferreux ce qui saccompagne alors dun relargage de phosphore dans la colonne deau. Lutilisation de sel de fer au sein mme dune retenue doit donc tre accompagne dun suivi rgulier des concentrations en oxygne dans le profil de la masse deau et une aration rgulire de la colonne deau doit tre pratique afin dviter la redissolution du phosphore pig dans les sdiments.

1.1.2.2. Utilisation de chaux ou calcite

Ces composs ont t utiliss pour prcipiter le phosphore prsent dans la colonne deau mais ce phnomne est rversible, en particulier quand les couches profondes sont trs pauvres en oxygne, un relargage du phosphore peut alors se produire. Ces traitements prcipitent galement certaines cellules phytoplanctoniques. Lusage de chaux et de carbonate de calcium a montr son efficacit sur la matrise des prolifrations phytoplanctoniques (Prepas et al. 1990, Babin et al. 1994, Zhang & Prepas 1996a, b, Chambers et al. 2001, Prepas et al. 2001b, Zhang et al. 2001a), notamment en limitant le phosphore disponible. Des rsultats tout fait opposs ont t cependant constats par dautres auteurs (Reedyk et al. 2001). Daprs Prepas et al. (2001b) la chaux provoque une saturation de la colonne deau en Ca++ qui produit alors une prcipitation de phosphore sous forme dhydroxy-apatite qui, une fois dans les sdiments, continue adsorber le phosphore. En t, temprature leve, il se produit une prcipitation naturelle de CaCO3 et un pigeage naturel de phosphore. La chaux provoque galement une floculation du phytoplancton (Zhang et al. 2001a). Ces mmes auteurs ont constat un changement important immdiatement (< 20 jours) aprs une seule application de la chaux dans un lac (eau dure) avec une augmentation de la biomasse des cyanobactries et un changement dans la composition de la communaut phytoplanctonique. Prepas et al. (2001b) ont observ quaprs un seul traitement la chaux (dose de 74 107 mg.L-1), le phosphore de la colonne deau ntait pas considrablement rduit mais un abattement important de la chlorophylle a tait observ ainsi quun changement dans la composition des communauts microbiennes photosynthtiques. Par contre, pour des applications rptes annuelles de chaux durant 4 ans des concentrations comprises entre 5 et 78 mg.L-1, une diminution importante (90 %) de la concentration en phosphore est observe. Prepas et al. (2001a) ont montr une efficacit de rduction du phosphore mais avec une rponse limite dans le temps : le traitement la chaux doit tre rpt rgulirement. Prepas et al. (2001a, 2001b) et Zhang et al. (2001a) concluent que des traitements multiples sont ncessaires pour le contrle de la biomasse. Ainsi la croissance des cyanobactries parat mieux limite par ces traitements que celle dautres microalgues telles que les chlorophyces. Kenefick et al. (1993) ont montr que le traitement la chaux rduisait les concentrations en chlorophylle a pendant les deux annes qui suivaient le traitement. La dure de linactivation du phosphore contenu dans les sdiments diminue avec le pH et avec la concentration en phosphore de la colonne deau. Les expriences faites par Reedyk et al. (2001) sur diffrents lacs canadiens ont montr que la chaux tait plus efficace que le carbonate de calcium. Un traitement la chaux de 107 mg.L-1 conduisait une rduction du phosphore de 85 92 % qui ntait apparente que le premier hiver. Pour Prepas et al. (1990) et Babin et al. (1994) des traitements multiples sont ncessaires pour la gestion long terme de la concentration en phosphore. Ces traitements permettent galement la floculation des cellules algales et la prcipitation de calcium qui rduit les concentrations de nutriments tels que le fer ncessaire la croissance du phytoplancton. Le traitement la chaux contrle la disponibilit de nutriments et nagirait pas directement par effet toxique sur les cellules et Kennedy & Cook (1982) nobservent pas de relargage de microcystine lors de ce type de traitement.

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1.1.3. Actions physiques

Le relargage du phosphore contenu dans les sdiments peut tre limit par diffrents moyens.

1.1.3.1. Dragage des sdiments

Cette opration a plusieurs objectifs : supprimer les apports polluants gnrs par les sdiments anoxiques ; rduire la consommation doxygne linterface eau-sdiment afin de limiter les risques danoxie hypolimnique ; augmenter la colonne deau et agir sur le dveloppement des macrophytes (de 3 10 m). Le dragage peut savrer intressant pour des lacs peu profonds et envass dont la charge interne en phosphore est prpondrante.Toutefois, les consquences sont temporairement importantes en raison de la suppression de la faune et de la flore benthiques et des frayres poissons, pour les plans deau infrieurs 3 m (Lafforgue 1998).

1.1.3.2. Oxygnation des eaux en profondeur

Cette mthode daration par oxygne ou par air est trs critique et les rsultats apparaissent trs controverss. Elle est souvent utilise et commercialise avec des objectifs contradictoires (Chorus & Bartram 1999) : dstratifier la colonne deau pour empcher la multiplication des cyanobactries ; oxyder la surface des sdiments pour diminuer les teneurs en fer, manganse et ammonium dans leau. La perturbation de la colonne deau peut modifier la composition du peuplement phytoplanctonique en slectionnant des genres plus adapts ces conditions hydrodynamiques. Elle peut galement gnrer une distribution du phytoplancton sur toute la colonne deau ce qui empche le producteur deau de prlever une profondeur non colonise. La dstratification peut entraner une augmentation de la temprature la surface des sdiments, conduisant une augmentation du relargage du phosphore. Cest pourquoi le brassage artificiel pour limiter le relargage de phosphore est jug peu efficace (Hart et al. 2002).

1.1.4. Lutte biologique

Trois techniques ont t dcrites pour agir sur la chane trophique : ajout de poissons consommateurs du phytoplancton ; rduction des prdateurs du zooplancton ; modification des communauts vgtales. Le faible nombre de rsultats publis et les retours dexpriences ne permettent pas de se prononcer sur la validit de ces procds.

1.1.4.1. Apport de poissons consommateurs du phytoplancton

Il sagit, en gnral, des carpes argentes Hypophthalmychthys molitrix qui consomment les cyanobactries. Cette mthode est utilise depuis longtemps au Maroc (Echihabi et al. 2001). Un exemple rcent est dcrit par Xie et al. (2003) qui ont constat une disparition des prolifrations de cyanobactries suite lintroduction de carpes argentes durant trois ans dans un lac sur lequel des efflorescences avaient t observes durant les quinze ans prcdant lintroduction des poissons. Les effets lis lintroduction despces non-indignes sur lquilibre cologique et la sant animale devraient faire lobjet dune valuation avant tout recours ce moyen de contrle. Par ailleurs, lattention doit tre porte sur les risques sanitaires pouvant rsulter de la consommation des poissons servant la lutte biologique et pouvant accumuler des toxines.

1.1.4.2. Rduction des prdateurs du zooplancton

Le principal moyen est la rduction ou la suppression des prdateurs du zooplancton par des pches spcifiques ou par lemploi de poissons ichtyophages comme le brochet. Ceci a t utilis dans des petites retenues et tangs pour des courtes priodes de temps (Hrbacek et al. 1998). Quand ce procd est utilis, leau devient plus claire en raison dune diminution du phytoplancton, la population de zooplancton augmente et les macrophytes se dveloppent, rtablissant une comptition pour les phosphates avec le phytoplancton. Ces exprimentations ncessitent de contrler le dveloppement des poissons en rptant rgulirement llimination des poissons zooplanctonophages.

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Ces techniques sont cependant onreuses et peu fiables en raison de la difficult du maintien de la qualit du zooplancton qui est trs htrogne dans un plan deau. Par ces manipulations des prdateurs, certaines cyanobactries peuvent tre privilgies notamment les formes coloniales de type Microcystis ou Aphanizomenon (Demelo et al. 1992).

1.1.4.3. Modification des communauts vgtales

Lintroduction de macrophytes a pour objectif dinduire une comptition vis--vis du phosphore. Cette technique peut tre efficace pour des eaux peu profondes quand la concentration en phosphore nest pas trop leve et surtout quand les apports ne sont pas rcurrents. Cette technique semble plus efficace pour lutter contre les cyanobactries que contre les microalgues et elle a t utilise avec succs par Carpenter (1989) et Shapiro & Wright (1984). Il faut toutefois noter que les vgtaux puisent le phosphore par les racines ce qui peut rduire les concentrations dans les sdiments plutt que dans la colonne deau. Reynolds (1997) considre que la comptition macrophyte/microphyte est trs faible si la concentration en phosphore est suprieure 0,15 mg.L-1.

1.2. Actions sur le rgime hydrologique

Laccumulation des cyanobactries est le rsultat de leur flottabilit et des conditions hydrodynamiques. Elle reflte aussi partiellement ltat physiologique des cyanobactries. Quand les cellules sont viables, certains genres sont capables de migrer verticalement ; les cellules saccumulent la surface des plans deau gnralement lors de la nuit et sont visibles trs tt le matin pour disparatre pendant la journe. Lorsquelles se trouvent en situation de flotter en surface, il est possible de les vacuer dune retenue en ralisant des surverses quand le rgime hydrologique le permet, avec linconvnient de renvoyer la biomasse dans le cours deau et dventuelles autres retenues aval.

1.2.1. Procds de dstratification en aration diffuse et daration hypolimnique

Ces procds ont pour objectifs de crer des courants ascendants dstratifiants ou de rinjecter en profondeur de leau ayant t roxygne en surface. Ces techniques sont prsentes pour limiter la croissance des cyanobactries mais leur effet long terme est souvent contest et elles ne peuvent, en tout tat de cause, ntre envisages que comme mesures accessoires la rduction de nutriments. Steinberg & Zimmermann (1998) ont montr quune technique de brassage intermittente qui permet de modifier rgulirement les conditions de dveloppement du phytoplancton tait efficace la premire anne de mise en place mais qu long terme leffet tait plus mitig. Ils concluent que cette technique est utilisable pour les lacs peu profonds (11 12 m de profondeur) et que la destratification permanente ncessite une profondeur minimum. Si celle-ci est faite dans un lac peu profond, une augmentation importante de la biomasse est observe la premire anne. Cette mthode de brassage intermittente a galement t mise en application dans le lac dHanningfield et a permis dviter le dveloppement de prolifration spcifique de cyanobactries (Simmons 1997). Gchter & Wehrli (1998) ont observ une amlioration de la concentration en oxygne de la colonne deau mais aucune efficacit sur le cycle du phosphore dans deux lacs suisses profonds (66 et 87 m de profondeur respectivement). Antenucci et al. (2002) ont test diffrents systmes de diffusion de leau et estiment que limpact sur la population algale est limit. Dans le barrage de Nieuwe Meer en Hollande, Visser et al. (1996) ont montr quune profondeur de plus de 20 mtres tait ncessaire mais que le brassage intermittent favorise le dveloppement de Microcystis. Visser et al. (1996) ont montr que la croissance de M. aeruginosa tait plus leve dans les zones de brassage inefficace. Ceci est confirm par Khler (1992) dans le lac Bautzen o un maintien de la biomasse de Microcystis est observ malgr le mlange. Latour-Duris et al. (2002) ont constat une faible efficacit de cette mthode sur la retenue de Grangent (Loire) avec un systme daration mis en place en trois endroits diffrents et trois profondeurs. Avec une bonne homognit de la temprature et de loxygne dans la colonne deau, ils observent une faible efficacit sur les dveloppements de cyanobactries. Laration hypolimnique nest applicable que si le lac est trs profond mais na t utilise avec succs que dans le lac Hodgson aux USA (Lafforgue 1998).

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1.3. Traitements algicides des plans deau

1.3.1. Sulfate de cuivre
Parmi les traitements algicides expriments seul lusage du sulfate de cuivre a t utilis sur des ressources un niveau significatif. Le sulfate de cuivre est utilis depuis trs longtemps sur les plans deau. Son usage est signal pour la premire fois en 1880 (Sawyer 1962) en Europe, en 1904 aux USA (Moore & Kellerman 1905) et en 1940 en Australie (Burch et al. 1998). La toxicit du cuivre vis--vis du phytoplancton est dtermine par lactivit de lion Cu2+. Elle varie entre 0,06 et 6.10-7 mg.L-1 de Cu2+ (Mc Knight et al. 1983). Son effet est rduit si le pH est lev ainsi que dans les eaux dures. Pour favoriser sa dispersion, des chlates de cuivre ont donc t utiliss et en particulier le citrate de cuivre dans les eaux dures. Aux tats-Unis, Raman (1995) recommande lutilisation dun mlange de sulfate de cuivre : acide citrique dans le rapport 2:1. Les concentrations en cuivre dans leau traite sont comprises entre 0,05 et 0,125 mg.L-1 de Cu. Brient et al. (2001) prconisent une utilisation prcoce de CuSO4 des doses de 50 80 mg.m-3 ds que le seuil de vigilance de 10 filaments par mL pour Planktothrix agardhii ou de 10 colonies par mL pour M. aeruginosa est atteint. Brient et al. (2001) ont tudi lapplication de sulfate de cuivre et dacide citrique 20 % sur trois retenues bretonnes sur des suivis long terme avec jusqu 3 applications annuelles. Les cyanobactries sont limines dans les 48 heures et les milieux sont nouveau coloniss par les diatomes. Aprs 3 4 semaines, en fonction de la ressource nutritive et des conditions mtorologiques, les cyanobactries rapparaissent ncessitant un nouveau traitement au sulfate de cuivre. Cette technique est galement utilise par Van Hullebush et al. (2001). Les problmes lis lusage du cuivre sont nombreux et consquents mais les donnes ne portent que sur la microcystine-LR : Problmes de sant publique : lutilisation dalgicides provoque la lyse des cyanobactries, ce qui libre les mtabolites et composs intra-cellulaires parmi lesquels se rencontrent des toxines et des composs trs odorants (methy-isobornol, gosmine) (James & Fawell 1991). Ce relargage se produit trs rapidement, dans les 3 jours qui suivent le traitement (Gupta et al. 2001). Des accidents graves ont montr leffet potentiel de tels relargages, comme celui de Palm Island en Australie o de nombreuses personnes ont t victimes dune hpatoentrite suite au traitement dune retenue avec du sulfate de cuivre (Bourke et al. 1983). Jones & Orr (1994) ont mis en vidence des concentrations en toxines suprieures 1800 g.L-1 sur des lacs traits avec des algicides base de cuivre. Ces auteurs font tat dune fluctuation des concentrations en microcystine sur le lac Centenary aprs un traitement au sulfate de cuivre : 990 g.L-1 trois heures aprs le traitement de leau du lac, 1230 g.L-1 quatre jours aprs et 110 g.L-1 aprs douze jours. Gupta et al. (2001) ont montr quune rduction de 99 % de la concentration en toxines prend environ 3 semaines avec, en gnral, une phase de latence de 2 3 jours voire 2 3 semaines en fonction des conditions climatiques. Pour Lam et al. (1995b), le sulfate de cuivre ne peut tre utilis, comme une solution court terme, que si leau nest pas utilise pour la production deau potable pendant 5 7 jours. Concernant la cintique de dcroissance des toxines en milieu naturel, la DDASS de la Manche (2003) a observ dans un barrage lamont de la Slune que la concentration en microcystine passait de 100 g.L-1 2 g.L-1 en 8 10 jours. - Rsistance : le cuivre peut induire la slection de souches rsistantes : Hanson & Stefan (1984) ont valu limpact de lutilisation pendant 58 ans de sulfate de cuivre sur des lacs du Minnesota et constat une rsistance importante de certaines espces au cuivre, un changement des espces dominantes avec volution dune prdominance dalgues vertes vers une prdominance dalgues bleues-vertes et une rduction des macro-invertbrs benthiques. Les algues et les cyanobactries en particulier peuvent dvelopper des mcanismes de rsistance intracellulaires et extracellulaires. Le mcanisme de rsistance extracellulaire des algues est principalement li la prsence de 4 types de groupement fonctionnel situs sur la membrane cellulaire (R-NH2, R-COOH, R-OH et Si-OH) et les ligands secrts ont des constantes de stabilits leves avec le cuivre, ce qui permet de rduire la concentration en cuivre libre Cu2+ (Kiefer et al. 1997). Knauer et al. (1998) ont montr que Scenedesmus subspicatus pouvait synthtiser des ligands intracellulaires peptidiques qui complexent le cuivre et rduisent sa toxicit. Cette synthse est induite par une exposition chronique au cuivre. La tolrance au cuivre est fonction des souches. Un traitement rpt au sulfate de cuivre conduit une prolifration despces diffrentes plus rsistantes (Izaguirre 1992, Prepas & Murphy 1998, Soldo & Behra 2000).La rsistance a ainsi conduit augmenter les doses de cuivre dans le lac Matthews o Izaguirre (1992) observe que des traitements rpts au sulfate de cuivre ont conduit au remplacement dOscillatoria par Phormidium lorigine de mauvais gots. Les cyanobactries Nostoc calcicola sont capables de se dtoxifier

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en transportant le cuivre intracellulaire vers le milieu extrieur sous forme de phosphate de cuivre (Verma & Singh 1991, Verma et al. 1993). Impact sur la qualit globale des plans deau : laction du sulfate de cuivre nest pas spcifique et peut conduire la mort dautres algues mais aussi de micro et macro-organismes (poissons, ), entranant une consommation trs importante doxygne par laugmentation de la matire organique en dcomposition. - Accumulation dans les sdiments : Brient et al. (2001) observent des concentrations en cuivre de 45 300 mg.kg-1 dans les sdiments de certaines retenues selon les modalits de traitement au CuSO4 ce qui est galement observ par Schrader et al. (2002) et Prepas & Murphy (1998). Prepas et al. (1990) montrent que le cuivre peut tre relargu des sdiments par anoxie. Dans les rserves deaux riches en acides humiques, le cuivre peut tre complex, ce qui ncessite dapporter des quantits plus importantes (Bourke et al. 1983). Ces phnomnes de complexation sont amplifis en milieu alcalin lorsque le pH de leau est lev (Mc Knight et al. 1983). Il convient de ne pas oublier les risques lis laccumulation du cuivre dans la chane trophique, suite la consommation dorganismes aquatiques ou de vgtaux cultivs sur les parcelles utilises pour lpandage du produit des curages. LOMS rappelle que la lyse dune prolifration constitue peut exacerber les problmes lis aux toxines. Elle considre que les traitements algicides au dbut du dveloppement dune prolifration devraient rester une mesure durgence qui comporte des risques cologiques et quil est prfrable de retenir des solutions qui prviennent la croissance des cyanobactries la source (Chorus & Bartram 1999 p. 267-268). Concernant les conditions dutilisation de ces traitements, lOMS recommande de ne les utiliser que lorsque les dnombrements cellulaires sont faibles , pour viter des excdents de toxines. Ceci devrait tre vrifi par des mesures de toxines. Lapplication de ce traitement en prsence de dnombrements cellulaires levs ne devrait tre envisag que si la ressource peut tre exclue de lalimentation des filires de production deau potable ou quun traitement dlimination des toxines fiable est disponible. Dans ce dernier cas, il est rappel que llimination des cellules entires offre une meilleure scurit. Enfin lOMS rappelle que lutilisation dalgicides ne devrait concerner que des eaux pour lesquelles limpact environnemental est acceptable, aprs vrification auprs de lagence de lenvironnement local (Chorus & Bartram 1999 p. 282-283). Lutilisation de sulfate de cuivre, pour lutter contre le dveloppement de cyanobactries, est pratique en France en dehors de tout cadre rglementaire, notamment sur des ressources destines la production deau dalimentation. Les utilisateurs sont souvent satisfaits des rsultats de ces traitements curatifs du point de vue de la diminution de la biomasse mais suivent rarement le devenir des toxines. Lefficacit prventive souvent invoque nest pas prouve scientifiquement. Laccumulation du cuivre dans les sdiments est avre sur les sites ayant fait lobjet, en parallle des traitements rguliers au sulfate de cuivre, dtudes adaptes. Daprs les quantits appliques et les concentrations observes dans les sdiments, une partie du flux serait transfre vers laval de lhydrosystme concern (Morin & Nicolas 2004). Le classement toxicologique rglementaire du sulfate de cuivre autoris comme fongicide en agriculture est R50/53 (Agritox(33), mise jour du 16/06/1999), cest--dire trs toxique pour les organismes aquatiques, peut entraner des effets nfastes long terme pour lenvironnement aquatique . Dans le cadre de la Directive Biocides 98/8/CE, le sulfate de cuivre a t notifi par un industriel et donc inscrit lannexe II du Rglement 2023/2003 de la Commission, du 4 novembre 2003. Ce rglement tablit le programme de travail sur les 10 prochaines annes pour lexamen systmatique de toutes les substances actives qui ont t identifies (Annexe I) et notifies (Annexe II). Cette inscription est notamment demande pour le type de produit 2 (dsinfectants utiliss dans le domaine priv et dans le domaine de la sant publique et autres produits biocides) : Produits utiliss pour dsinfecter lair, les surfaces, les matriaux, les quipements et le mobilier et qui ne sont pas utiliss en contact direct avec les denres alimentaires ou les aliments pour animaux dans les lieux privs, publics et industriels, y compris les hpitaux, ainsi que produits algicides. Sont notamment concerns les piscines, les aquariums, les eaux de bassin et les autres eaux ; les systmes de climatisation ; les murs et sols des tablissements sanitaires et autres ; les toilettes chimiques, les eaux uses, les dchets dhpitaux, le sol ou les autres substrats (terrains de jeu). Le sulfate de cuivre fera donc lobjet dun dpt de dossier, prpar par les industriels, entre le 1er fvrier 2007 et le 31 juillet 2007 pour une demande dinscription de la substance lannexe I de la Directive 98/8/CE. Linscription ne sera effective que si les experts en charge du dossier jugent que les preuves apportes sont recevables. Ainsi, les autorisations de mise sur le march au niveau europen pourront intervenir au plus tt en 2009.
(33) Agritox. Base de donnes sur les proprits physiques et chimiques, la toxicit, lcotoxicit, le devenir dans lenvironnement, les donnes rglementaires des substances actives phytopharmaceutiques, cre par le dpartement de Phytopharmacie et dEcotoxicologie de lINRA. http://www.inra.fr/agritox/

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Points retenir La prvention des prolifrations passe par une rduction des apports en azote et surtout en phosphore. Ce dernier joue en effet un rle majeur et son apport provient soit des sources domestiques ou agricoles, soit du relargage dans la colonne deau de la charge interne des sdiments. Les traitements prventifs efficaces sont ceux qui permettent de rduire les apports en lments minraux nutritifs. Une fois la prolifration installe, il est dconseill dutiliser des agents biocides au risque de librer les toxines ou les substances odorantes dans leau. Sils devaient tre utiliss, des recommandations de restriction dusage et de suivi de qualit de leau devraient tre associes.

Le tableau V-I rsume les diffrents procds cits.

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Tableau V-I : Modalits dactions sur les prolifrations de cyanobactries.

Inconvnients Plan deau concern Observations

Type de procd

Avantages

Actions sur le statut trophique Dlai avant obtention des effets souhaits. Possibilit de situation transitoirement aggrave. Risque de relargage de PO4 partir des sdiments si conditions anoxiques. Prcipitation non durable. Apport de micro-nutriments aux cyanobactries. Tous plans deau. Accumulation daluminium dans les sdiments. Augmentation de la concentration en aluminium dans les eaux douces destines la consommation humaine. Relargage possible de toxine. Traitements rpter. Effet dpendant dosage et frquence. Eaux dures. Tous plans deau. Rsultats controverss. Tous plans deau. Seule approche compatible avec Directive Cadre sur lEau.

Rduction des apports de Effet durable. nutriments (phosphore)

Sel de fer

Prcipitation de phosphore

Sel daluminium

Prcipitation de phosphore, si respect des proportions entre P et Al Durabilit

Rsultats controverss.

Chaux/Calcite

Prcipitation de phosphore Floculation du phytoplancton

Difficile mettre en application. Trs critique.

Oxygnation/aration en profondeur Plans deau peu profonds. Plans deau peu profonds.

Oxydation surface des sdiments Dispersion des algues sur toute la colonne deau. Homognisation colonne deau Slection dautres genres.

- 119 Surveillance importante des ressources ncessaire pour dterminer moment dintervention. Libration importante de toxines si utilisation sur des prolifrations dj importantes. Ncessit dapplications rptes. Risque de slection despces rsistantes au cuivre. Accumulation dans les sdiments. Restrictions dusages Suivi de la qualit et impact long terme ncessaires. Tous plans deau.

Dragage des sdiments

Exportation de la charge interne Perturbation ponctuelle de lcosystme. en phosphore

Intressant pour les ressources dont la charge interne en P est prpondrante. Effet complmentaire dactions de rhabilitation. valuation des effets cologiques et sanitaires ncessaire. Rsultats controverss

Bio manipulation

Rgulation des populations de Pas de recul sur les effets sur quilibre cologique. phytoplancton par comptition Risques pour la sant animale et la sant publique. cologique

Dstratification par aration diffuse

Perturbation de la stratification Difficults de mise en uvre. thermique Possibilit deffets opposs. Oxygnation colonne deau

Brassage intermittent pour lacs plaine. Aration permanente pour lacs profonds.

Traitements algicides Destruction des prolifrations effectives, aprs temps de latence variable selon genres impliqus. Approche incompatible avec la Directive Cadre sur lEau.

Sulfate de cuivre Libre ou chlat

Matrise des prolifrations dbutantes

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2. Matrise de la contamination de leau destine la consommation humaine par les cyanotoxines

Les traitements des eaux sont de 2 types seuls ou en complment : des traitements de rtention ; des traitements de transformation. Le problme des algues, et plus spcialement des cyanobactries, a dj t tudi dans les annes 70, notamment cause des produits sapides quelles peuvent mettre, principalement la gosmine et le 2mthylisobornol (Rebhun et al. 1971, Narayan & Nunez 1974, Glare & Hopson 1975). Comme pour les toxines, il est important de prendre en compte les molcules dissoutes dans leau et celles qui peuvent tre libres lors de la lyse des cellules. Sur la quantit totale de toxines mesure dans un chantillon non filtr, environ 70 % provient des cellules de cyanobactries, le reste tant dissous dans leau.(Donati et al. 1994). La recommandation de lOMS reprise dans le Code de la sant publique fixe 1 g.L-1 la limite de qualit pour la microcystine-LR sans que ne soit prcis si lanalyse doit porter sur les fractions dissoutes et particulaires isoles ou en addition. Il sera donc important, mme pour les traitements de rtention des algues, de sassurer quil ne peut se produire de libration de toxines. Les principaux effets dj identifis de la prsence de cyanobactries dans les filires de traitement destines la production deau de consommation humaine taient (Briley & Knappe 2002) : une mauvaise coagulation dautant plus importante que les cyanobactries comportaient pour certaines des vsicules gaz qui faisaient remonter le floc en surface (Bernhardt 1984, Bernhardt et al. 1985, Bernhardt 1987) ; une rduction des cycles de filtration (Baylis 1955, Poston & Garnet 1964, Bernhardt 1984, Jansenns et al. 1989, Prados & Belotte 2002) ; une demande en chlore leve (Hoehn & al. 1980, Wardlaw et al. 1991) ; des gots et des odeurs prononcs (Rashash 1996) ; une dgradation microbiologique de la qualit de leau dans le rseau de distribution (Schmidt et al. 1998). Ce nest que depuis le dbut des annes 1990 que les problmes de toxines ont t signals (Wardlaw et al. 1991, Chorus & Bartram 1999).

Dans ce chapitre, sauf dans les cas o la prcision serait spcifie, les procds et les rsultats de traitement dcrits concernent les microcystines, car le nombre de donnes sur dautres toxines que les microcystines est rare.

2.1 Actions au niveau des bassins de stockage deau brute (de 1 3 jours de temps de sjour)
2.1.1. Actions sur les cellules
La prvention des prolifrations est la meilleure mthode pour garantir labsence de toxines dans leau dalimentation (voir paragraphe 1.). Les sels de cuivre Ce type de traitement, bien quautoris dans les ouvrages de traitement de potabilisation, tait destin la limitation des dveloppements dalgues mais, ds lors que la prsence de cyanobactries est avre, il est dconseill, afin dviter tout relargage de toxines ou de mtabolites odorants par les cellules lyses. Lhydroxyde et le carbonate de calcium Si la prcipitation du carbonate de calcium en usine, ou dcarbonatation, ne donne pas de rsultats intressants pour llimination des algues, la dcarbonatation dans les bassins de rserve deau brute apparat efficace (Lam et al. 1995a). Les rayonnements UV Lirradiation par rayonnement UV a montr son efficacit lorsquelle est applique en entre du bassin de stockage deau brute, notamment lorsque les eaux contiennent des acides humiques et que le cuivre savre inefficace car complex (Hessen & Van Donk 1994, Lund & Hongve 1994, Zamir Bin Alam et al. 2001). Les effets rmanents observs ont dabord t attribus la production de H2O2 dont les quantits analyses ne permettent cependant

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pas dexpliquer le phnomne. Laction des UV sur lADN interdit toute multiplication des algues sans les tuer (Tortora et al. 1992). Avec une dose de 370 J.m-2, les algues restent en surface, par contre, avec une dose de 750 J.m-2, les algues meurent et tombent au fond en induisant les mmes problmes que le cuivre.

2.1.2. Action sur les toxines

La dgradation naturelle des toxines demande un temps suprieur aux temps de sjour pris en compte dans les filires traditionnelles (Bernhardt & Clasen 1991). Si les toxines sont rputes stables la lumire solaire, ces composs peuvent tre dgrads en prsence de catalyseur que lon peut ventuellement trouver dans les matires en suspension (Robertson et al. 1997, Shephard et al. 1998, Feitz et al. 1999a, Feitz et al. 1999b, Shephard et al. 2002). Ces effets sont trs dpendant de la qualit de leau et surtout de la prsence dacides humiques (Welker & Steinberg 2000). Cette dgradation est initie par les radicaux OH (hydroxyl) (Robertson et al. 1998, Shephard et al. 1998, Robertson et al. 1999). On a signal des temps de vie des toxines de 3 4 jours dans les rserves deaux brutes, lacs (Cousins et al. 1996). Il a t not que si certains composs pouvaient acclrer ces ractions, dautres peuvent les ralentir : matires organiques, phosphates, nitrates (Abdullah et al. 1990, Tsuji et al. 1995, Kano & Sano 1998).

2.2. Actions au sein des filires de traitement

Toutes les mthodes qui pigent la biomasse sans librer les toxines sont prfrer en raison de laction de libration de toxines intervenant aprs oxydation des cellules.

2.2.1. Prtraitements physiques

Dgrillage, dessablage, dbourbage, tamisage Ces traitements ne sont pas adapts llimination des algues puisque mme le tamisage ne concerne quune filtration travers des tamis de 1 2 mm de maille. Ces traitements sont donc sans effet sur la rtention des algues et nont bien entendu aucune action sur les toxines dissoutes. Microtamisage 35 micromtres Selon Mouchet et Bonnelye (1998), 40 70 % du phytoplancton peut tre retenu. Certaines cyanobactries, notamment Microcystis aeruginosa, ne sont retenues qu un niveau infrieur 10 % (Chorus & Bartram 1999). Aucune action nest possible sur les toxines dissoutes. Aration et aration force (stripping) Ces traitements sont sans effet sur la rtention des cyanobactries et sur les toxines (Chorus & Bartram 1999).

2.2.2. Prtraitements doxydation

Ces traitements doxydation sont effectus sur les eaux brutes. Ils concernent : le chlore, le bioxyde de chlore, lozone, le permanganate de potassium et ont en commun le fait de tuer les algues et de provoquer leur lyse (Sukenik et al. 1987, Lam et al. 1995a, Peterson et al. 1995, Hart et al. 1997, Hall et al. 2000). Le chlore et le bioxyde de chlore Ces deux traitements, et surtout le chlore, sont dconseiller en tte de traitement cause des ractions secondaires et des produits de raction quils gnrent, notamment les trihalomthanes (THM) pour le chlore et les chlorites pour le bioxyde de chlore. Les doses utilises varient de 0,25 2 mg.L-1 et sont gnralement fixes en fonction des teneurs en ammoniaque et non pas en fonction des dnombrements en cyanobactries. Aux faibles doses, le chlore na aucun effet significatif sur les toxines dissoutes tudies (Hoffmann 1976, Himberg et al. 1989, Lahti & Hiisvirta 1989, Fujiki 1992, Izaguirre 1992, Carlile 1994, Rositano et al. 1995). Il faut au moins 0,5 mg.L-1 de chlore libre aprs 30 minutes de contact pour observer une action sur les microcystines (Nicholson et al. 1993, Carlile 1994, Nicholson et al. 1994, Lahti et al. 1995, Nicholson & Rositano 1997, Maatouk et al. 2002). ces doses, la demande en chlore de leau doit tre totalement satisfaite ce qui conduit gnralement la formation de composs organochlors secondaires :THM, drivs halogns de lacide actique, de lactonitrile (Bonnlye et al. 1995, Graham et al. 1998). Pour le bioxyde de chlore, trs peu de donnes existent. Il a t signal cependant que laction sur les toxines ne se faisait que pour des concentrations suprieures ou gales 6 mg.L-1 (Sherman et al. 1995). Ces traitements (chlore, bioxyde de chlore) sont proscrire.

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 Le permanganate de potassium Ce ractif a t utilis comme algicide depuis 1935 mais les doses appliquer vont de 1 5 mg.L-1 pour dtruire les cellules (Holden 1970). Les ventuels effets sur les toxines dissoutes ne sont pas dcrits. Lozone En pr-ozonation, les doses utilises sont faibles, de lordre de 0,2 0,25 mg O3 par mg de carbone organique total (COT). ces doses, lozone nest pas algicide mais permet une meilleure clarification de leau par dstabilisation des collodes (Bonnlye et al. 1995, Maatouk et al. 2002). Mouchet et Bonnelye (1998) trouvent que la pr-chloration donne de meilleurs rsultats que la pr-ozonation pour la rtention des cellules sur la chane de traitement. ces doses habituelles, ces toxines ne sont pas dgrades ce qui ncessite des quantits dozone beaucoup plus importantes. De plus, de trs nombreux auteurs ont signal pour lozone linterfrence ngative des matires organiques prsentes dans les eaux brutes (Falconer et al. 1983a, Keijola et al. 1988, Lahti & Hiisvirta 1989, Hart & Stott 1993, Nicholson et al. 1993, Bernazeau et al. 1995, Rositano 1998, Shawwa & Smith 2001).

2.2.3. Groupes de traitements de clarification physico-chimique

Ces traitements associs en entre de filire englobent : coagulation floculation sparation (dcantation flottation) et la filtration. De nombreuses publications donnent des rsultats globaux sur ces ensembles au sein des chanes de traitement (Mouchet & Bonnlye 1998). Coagulation floculation dcantation filtration - Action sur les cellules Ce groupe de traitements est efficace pour llimination des algues (Mouchet & Bonnlye 1998, Chow et al. 1999) avec des rendements de 50 60 % (Keijola et al. 1988). Par contre, les traitements doivent tre optimiss laide de paramtres prcis et en particulier par la mesure du potentiel zta ou du courant lectro-cintique. Les algues produisent et librent des polysaccharides qui augmentent la demande en coagulant. De plus, lorsque le pH augmente, la coagulation est moins efficace. Il y a tout dintrt avoir un systme automatique doptimisation de la dose de coagulant qui vrifie en continu le potentiel zta des collodes (Tilton et al. 1972, Bernhardt & Clasen 1991, Bernhardt & Schell 1993, Clasen et al. 2000, Briley & Knappe 2002, Lai et al. 2002). Comme les flocs en priode de prolifration algale sont lgers, il est recommand dutiliser des adjuvants de floculation : polymres anioniques (Bernhardt & Clasen 1991, Knappe et al. 1998). Dans certains cas, lutilisation dun floculant base de polymre cationique permet une meilleure limination des cyanobactries (Leuschner 1984). Les doses ncessaires pour ce dernier polymre sont cependant suprieures celles actuellement autorises en France. Cette tape de traitement ne conduit normalement pas la lyse des cyanobactries (Montgomery 1985, Chow et al. 1998, Chow et al. 1999). Par contre, si les boues sont conserves plus de 1 2 jours, la lyse est possible et il a t observ jusqu 100 % de relarguage des toxines en 48 heures. Il est donc impratif de prvoir une limination permanente des boues (Chorus & Bartram 1999). Au niveau de la dcantation, les dcanteurs statiques horizontaux maintiennent les boues pendant des temps assez longs, alors quavec les dcanteurs statiques verticaux, llimination est trs rgulire. Pour les dcanteurs dynamiques lit de boues recycles, ce point devrait imprativement tre pris en compte. Dans ce groupe de traitement, cest la filtration qui joue le rle le plus important, en assurant 90 % de la rtention totale (Falconer et al. 1983b, Montgomery 1985, Lepisto et al. 1994, Steffensen & Nicholson 1994, Hoeger et al. 2002). Au niveau de la filtration, on peut constater des colmatages importants avec des pertes deau pour les lavages qui peuvent atteindre jusqu 20 % (Bernhardt 1984, Lam et al. 1995b, Hart et al. 1997, Hall et al. 2000, Prados & Belotte 2002). Comme dans les boues des dcanteurs, les cyanobactries retenues sur ou dans les filtres peuvent se lyser ds 24 48 heures de rtention ce qui implique galement une bonne gestion de lentretien des filtres (Lepisto et al. 1994, Chorus & Bartram 1999). Mouchet et Bonnelye (1998) signalent que la filtration directe sans traitement chimique pralable nest pas efficace pour la rtention des cyanobactries. Une attention particulire devra tre accorde au traitement des boues pendant lequel les toxines intracellulaires sont peu peu libres. Le recyclage des eaux issues de ces traitements sera donc proscrire en prsence de cyanobactries toxiques, mais il ne faudra pas pour autant sous estimer leur impact sur le milieu naturel (Chorus & Bartram 1999).

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- Action sur les toxines Ces traitements sont sans action sur les cyanotoxines dissoutes dans les eaux (Bernhardt & Clasen 1991, James & Fawell 1991, Izaguirre 1992, Nicholson et al. 1994, Hart et al. 1997, Mouchet & Bonnlye 1998). La biodgradation dans les filtres rapides est beaucoup trop faible pour tre prise en compte, les temps de traitement ne dpassant pas 10 minutes. Seul lajout de charbon actif en poudre permet leur limination (voir paragraphe 3.2.7.1). Coagulation floculation flottation filtration Dans cette tape de traitement, la flottation remplace la dcantation. Tous les auteurs saccordent pour dire que la flottation donne de meilleurs rsultats que la dcantation (Welt & Montiel 1995). De plus, llimination continue des boues vite toute lyse des cyanobactries. Suivant les genres, on obtient des rsultats diffrents : 40 80 % pour Microcystis aeruginosa, 90 100 % pour Anabaena et seulement 30 % pour Planktothrix (Orikas & Hrudey 1994, Mouchet & Bonnlye 1998). Lozoflottation est une variante de la flottation qui allie laction oxydante de lozone en pr-traitement laction physique de la flottation. Si les doses dozone sont faibles, il ny a pas de lyse des algues et donc de risque de libration de toxines (Faivre & Langlais 1991, Benoufella et al. 1995). La rtention des algues nest attribuable qu la flottation. Ces traitements sont sans action sur les cyanotoxines dissoutes dans les eaux.

2.2.4. Procds de filtration

Filtration lente Elle donne de bons rsultats pour la rtention des algues en gnral et des cyanobactries en particulier (Mouchet & Bonnlye 1998, Hitzfeld et al. 2000). Il ne faut cependant pas ngliger les risques de relargage de toxines. Il a t signal des rtentions de 80 % de Microcystis, 30 60 % de Planktothrix et 70 % dAnabaena (Sherman et al. 1995). Des tudes ont montr que ces traitements pouvaient avoir une certaine efficacit sur la rtention des cyanotoxines avec jusqu 80 % de rtention pour les toxines de Microcystis, 30 65 % pour celles de Planktothrix et 70 % pour celles dAnabaena (Keijola et al. 1988). Les phnomnes mis en jeu sont la bio-adsorption et la biodgradation pour laquelle il faut une priode dadaptation de plusieurs semaines. La biodgradation se fait ensuite aprs un dlai dune journe, ce qui peut expliquer les rsultats prsents plus haut (Bourne et al. 1996). Filtration sur berge - Action sur les cellules La filtration sur berge est un procd naturel de traitement des eaux de surface qui consiste crer un puits dans les nappes alluviales qui, par pompage, conduit un cne de dpression r-aliment en permanence par leau de la rivire ou du lac. La bonne efficacit de la filtration sur berge avait dj t mise en vidence pour la rduction des mtabolites odorants de cyanobactries responsables de gots indsirables dans les eaux potables (Chorus & Bartram 1999) et la rtention de la turbidit. - Action sur les toxines libres La filtration sur berge a t signale comme une bonne mthode de rtention des cyanotoxines (Chorus et al. 1993, Lahti et al. 1998, Chorus & Bartram 1999, Hrudey et al. 1999, Kuhn 1999, Miller et al. 2001, Miller & Fallowfield 2001, Dillon et al. 2002). Ce traitement avait dj t reconnu comme efficace pour la rtention des micropolluants organiques et minraux (Sontheimer 1980, Miettinen et al. 1994). Les temps de demi-vie varient de 4 7 jours (Lam et al. 1995a). Deux phases sont prendre en compte : une phase dadsorption sur les sdiments et une phase de dcomposition abiotique et/ou de biodgradation. Adsorption sur les sdiments La microcystine-LR possde un pKa de 3,3 0,3 (Rivasseau et al. 1998). Son KOW est faible (pKow environ 1), ce qui signifie que lorsque le pH augmente, la toxine devient de plus en plus hydrophile donc soluble (Carmichael 1994). Par contre, les sdiments riches en matires organiques sont acides, ce qui permet une bonne rtention de cette microcystine. Lahti et al. (1996) signalent des liminations allant de 97,5 99,5 % des toxines, en cumulant adsorption et biodgradation. Cest ladsorption sur les argiles qui joue un rle prpondrant (Dillon et al. 2002). Biodgradation Un temps dadaptation de la flore bactrienne est ncessaire mais ensuite les dgradations peuvent tre rapides. Les essais sur la phosphatase ont montr que les produits de dgradation ntaient pas toxiques (Jones et al. 1994).

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2.2.5. Traitements daffinage en extrmit de filires

Ces traitements nont pas pour but essentiel la rtention des cellules de cyanobactries mais sont tout spcialement mis en place pour llimination des micropolluants organiques. Ils comprennent essentiellement : ladsorption sur charbon actif et les couplages ozonation charbon actif.

2.2.5.1. Traitements membranaires

Les cellules de cyanobactries ayant des tailles de lordre du micron, les traitements de microfiltration et dultrafiltration sont des traitements de choix (Lai et al. 2002). Les abattements peuvent atteindre 6 log (Chevalier et al. 1995, Mouchet & Bonnlye 1998). Par contre, il a t signal des phnomnes de colmatage trs importants (Tsuji et al. 1995). Les risques de relargage de toxines ont t voqus (Drikas et al. 2001b). Concernant les toxines libres, les traitements dultra- et de micro-filtration nont aucun effet sur les composs solubles sauf sils sont utiliss conjointement avec du charbon actif en poudre (CAP) (Chorus & Bartram 1999). Par contre, la nanofiltration et losmose inverse ont la proprit de retenir des composs dissous, molculaires ou ioniques. Pour la nanofiltration, il est impratif que le point de coupure soit infrieur 200 daltons (Miller et al. 2001). Pour losmose inverse, Neumann & Weckesser (1998) observent des rtentions des toxines de 96,7 99,6 %.

2.2.5.2. Traitements de dsinfection physiques ou chimiques

Ces traitements ont pour but la rduction du risque microbiologique, donc llimination pousse des microorganismes. Si des cellules de cyanobactries sont arrives jusqu cette tape, elles seront tues et leur lyse se fera dans le rseau de distribution avec libration ventuelle de toxines. Concernant les toxines, aux doses normalement utilises pour la dsinfection de leau (0,5 mg.L-1 de chlore aprs 30 minutes de contact pour le chlore et 0,25 mg.L-1 de bioxyde de chlore aprs 30 minutes de contact), les actions sur les toxines sont faibles voir nulles (Hoffmann 1976, Himberg et al. 1989, Nicholson et al. 1993, Carlile 1994, Rositano & Nicholson 1994). Pour le chlore, Nicholson et al. (1994) ont signal qu des teneurs suprieures ou gales 0,5 ppm de rsiduel aprs 30 minutes, une action tait observable sur les microcystines. Pour le bioxyde de chlore, les premiers effets signals lont t pour des rsiduels de 6 mg.L-1 (Chorus & Bartram 1999). Ozone Lozone est une tape de traitement signale depuis trs longtemps comme pouvant avoir une efficacit sur les toxines (Keijola et al. 1988, Himberg et al. 1989, Chorus et al. 1993, Fawell et al. 1993, Rositano et al. 1998, Shawwa & Smith 2001). La dose dozone joue un rle important, il faut au moins 1 mg.L-1 dozone pour avoir une action rapide. Avec 0,5 mg.L-1, il faut 9 minutes pour dtruire la toxine (Geering 1999). la dose optimum de 1 mg.L-1 dozone, les ractions se font en moins dune minute (Rositano 1998). Il est impratif de satisfaire la demande en ozone de leau et davoir un rsiduel (Carlson 1993, Andrew & Huck 1994, Bose et al. 1994, Rositano 1996, Rositano et al. 1998). Ce type de traitement risque de conduire la formation de bromates. Si la demande de leau en ozone est leve, une dcomposition incomplte de la microcystine-LR a t observe (Shawwa & Smith 2001). Les produits de dcomposition nont pas t tudis. Certains auteurs en ont repr sur des chromatogrammes CLHP (Lawrence et al. 1980, Lahti & Hiisvirta 1989, James & Fawell 1991, Fawell et al. 1993). Les tudes sur la phosphatase ont mis en vidence des toxicits qui disparaissent aprs passage sur le charbon actif en grains (CAG). partir des molcules et des mcanismes mis en jeu, certains auteurs ont essay de prvoir les molcules susceptibles de se former (Rinehart et al. 1988, Harada et al. 1996). Aucune dentre elles na t rellement identifie ce jour. Le pH influence leffet de lozone. Si celui-ci augmente, lefficacit augmente ce qui laisse penser que les mcanismes daction sont plutt radicalaires (Shawwa & Smith 2001). La prsence de matires organiques interfre (Falconer et al. 1983a, Falconer et al. 1983b, Keijola et al. 1988, Lahti & Hiisvirta 1989, Fawell et al. 1993, Hart & Stott 1993, Nicholson et al. 1993, Rositano & Nicholson 1994, Rositano 1996, Hart et al. 1997, Rositano et al. 1998, Rositano et al. 2001). On compte par exemple 8 moles dozone par mole de toxines pour une eau ultra pure et respectivement 14, 25 et 41 moles si le COT est de 1, 3 et 5 mg.L-1 (Shawwa & Smith 2001). Oxydation avance Il sagit des ractions radicalaires induites par des couplages ozone/UV, ozone/eau oxygne ou UV/eau oxygne (Rositano et al. 1998). Ce type de traitement permet une bonne limination des toxines ; par contre, comme pour lozone, les produits de raction nont pas t identifis (Rositano 1998, Cornish et al. 2000, Hoeger et al. 2002). Les dgradations sont inities par les radicaux hydroxyles (Robertson et al. 1998, Shephard et al. 1998, Robertson et al. 1999).

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 Photolyse La photolyse et la photolyse catalyse ont t signales comme efficaces vis--vis des cyanotoxines. Comme pour loxydation avance, elles font appel des ractions radicalaires (Tsuji et al. 1995, Robertson et al. 1997, Feitz et al. 1999a, Feitz et al. 1999b, Welker & Steinberg 2000, Shephard et al. 2002). Des tudes ont t faites sur la fixation de catalyseurs, notamment TiO2, sur des particules : fibres de verre, verre, sable, gel de silice, tflon, CAG, acier inoxydable, fibres tisses, membranes cramiques (Bideau et al. 1995, Hoffmann et al. 1995). La prsence de matires organiques ralentit leffet des UV (Tsuji et al. 1995, Kano & Sano 1998) ainsi que la prsence de nitrates ou de phosphates (Abdullah et al. 1990). Pour les UV, le pH isolectrique des toxines donne les meilleurs rsultats (Robertson et al. 1999). Il faudrait donc effectuer les traitements des pH de lordre de 3 pour quil y ait un meilleur contact avec le catalyseur.

2.2.5.3. Adsorption des toxines sur charbon actif

Ladsorption sur charbon actif peut se faire : soit en tte de traitement en utilisant du charbon actif en poudre (CAP) dans la phase de coagulation ; soit en fin de traitement, par filtration sur charbon actif en grains (CAG) ou utilisation de racteurs charbon actif en poudre coupls des rtentions membranaires de micro ou dultra filtration. Le rle des membranes pour llimination des toxines se limite la rtention du charbon actif en poudre qui adsorbe les toxines. Charbons actifs en poudre Plusieurs auteurs ont signal la capacit des charbons actifs en poudre adsorber les cyanotoxines (Falconer et al. 1989, Himberg et al. 1989, Nicholson et al. 1994, Bernazeau et al. 1995, Maatouk et al. 2002). Les quantits ncessaires sont cependant assez leves, de lordre de 20 30 mg.L-1 pour liminer de 90 98 % des toxines prsentes au niveau de quelques microgrammes par litre (Keijola et al. 1988, Donati et al. 1993). Le pH de leau joue un rle important sur le rendement de cette tape. En priode de prolifration algale, le pH peut dpasser les conditions dessais des charbons. Charbons actifs en grains Dans bien des cas, ce sont des couplages ozone CAG qui sont mis en place dans les usines. Les CAG ayant pour but la rtention et/ou la biodgradation soit des molcules nayant pas ragi avec lozone (Falconer et al. 1989, Izaguirre 1992, Chorus & Bartram 1999, Rositano et al. 2001, Hoeger et al. 2002, Lai et al. 2002), soit des molcules formes par lozone. Cette tape est considre comme trs efficace pour la rtention des toxines : rtention suprieure 90 % pendant la premire anne dutilisation des charbons (Falconer et al. 1989, Lambert et al. 1996). La qualit de leau et notamment la quantit de matires organiques joue un rle trs important car la dure defficacit de rtention des charbons sera diminue si la charge organique de leau est trop forte (Hitzfeld et al. 2000). La biodgradation de toxines adsorbes a t signale (Fawell et al. 1993, Lambert et al. 1996, Drikas et al. 2001b). Peu dauteurs ont tudi les dures de vie des charbons actifs en grains pour ce paramtre spcifique (Bernazeau 1994, Bernazeau et al. 1995). Mais il faut signaler quen France, avec la prise en compte des mtabolites de pesticides dans le Code de la sant Publique articles R.1321-1 62, Annexe 13-1-B, les charbons doivent tre rgnrs des frquences de lordre de lanne, ce qui garantit contre toute utilisation de charbons saturs qui pourraient relarguer les toxines.

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Points retenir La problmatique des cyanotoxines impose de considrer dune part llimination des cellules et dautre part llimination des toxines. En ce qui concerne llimination des cyanobactries, il faut absolument prendre en compte les risques lis la lyse des cellules qui ntaient pas jusqu prsent pris en considration. Cela devrait conduire supprimer tous les traitements algicides dans les rservoirs ou les stockages deau brute, ainsi que les pr-traitements algicides (sulfate de cuivre, chlore, bioxyde de chlore) en prsence de cyanobactries. La pr-ozonation la dose de 0,20 0,25 mg O3 par mg de COT ne pose pas de problme et amliore la clarification de leau. Il est impratif que les boues ne restent pas plus de 24 voire 48 heures au niveau de ltape de clarification car la lyse des cyanobactries est possible. Cela concerne aussi les cycles de filtration. Pour le traitement des boues, le recyclage des eaux en tte de traitement est proscrire. Limpact du rejet des eaux dans le milieu naturel aprs sparation des boues sera prendre en considration en sachant que le chaulage conduit une lyse quasi immdiate. La flottation parat mieux correspondre cette nouvelle problmatique, puisque les cyanobactries sont limines au fur et mesure sans stockage et risque de lyse. En ce qui concerne les toxines elles-mmes, leur limination est du domaine des tapes daffinage : ozone et/ou adsorption. Si ces tapes sont efficaces, peu de donnes existent sur les produits secondaires de raction : hydrolyse, photolyse, biodgradation et oxydation. Il serait bon, comme pour les pesticides, de limiter lusage des traitements de transformation et de favoriser les tapes de rtention. Ceci impose, pour les charbons actifs en grains, de rduire les risques de biodgradation par des rgnrations frquentes annuelles ou tous les deux ans. La filtration sur berge est considre comme efficace tant pour la rtention des cyanobactries que pour la rtention des toxines, et la filtration lente dans une certaine mesure, mais rien na t publi sur les mtabolites ventuellement forms La micro- et lultra-filtration sont trs efficaces pour la rtention des cyanobactries et celle des toxines uniquement lorsquelles sont utilises avec du CAP. La nanofiltration et losmose inverse sont trs efficaces pour la rtention des toxines et, bien entendu, des cellules.

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Tableau V-II : Efficacit des diffrentes tapes de traitement des eaux sur les cyanobactries et leurs toxines.
Efficacit sur llimination des algues Efficacit sur llimination des toxines Observations Peut tre une zone de prolifration si mal gr. Nulle. Lyse des cyanobactries avec libration possible de toxines. Efficacit prouve selon certaines publications, conteste par une autre. Lyse des algues avec libration possible de toxines 750 J.m-2. Nulle. Nulle.

tapes de traitement

Principaux procds

Bassin de stockage

Sels de cuivre

Hydroxyde et carbonate de calcium Gypse

Rayonnements UV

Pr-traitements physiques Rtention de lordre de 30 40 % des cellules, parfois moins pour certains genres. 0,25 2 mg.L-1 : doses classiques.

Dgrillage Dessablage Dbourbage Tamisage Aration Stripping

Microtamisage 35 m

- 127 1 5 mg.L-1 pour obtenir la lyse avec libration possible de toxines. 0,2 0,25 mg O3 par mg de COT favorise la clarification sans lyser les cellules. 50 60 % dlimination, principalement li la filtration. Risque de lyse si conservation des boues plus de 24 48 h. 30 100 % dlimination selon les genres. Aucun risque de lyse car limination des boues en continu. Nulle. Nulle.

Pr-traitements doxydation

Chlore et bioxyde de chlore

Chlore : effet partir de 0,5 mg.L-1 pendant 30 minutes. Bioxyde de chlore : effet partir de 6 mg.L-1 . Absence dinformation disponible Pas deffet aux doses de traitement habituelles de 0,2 0,25 mg O3 par mg de COT.

dconseiller, en raison des risques de libration de toxines et de formation de composs indsirables.

Permanganate de potassium

Ozone

Traitements de clarification physico-chimique

Coagulation, floculation, dcantation, filtration

Coagulation, floculation, flottation, filtration

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Tableau V-II (suite) : Efficacit des diffrentes tapes de traitement des eaux sur les cyanobactries et leurs toxines.
Efficacit sur llimination des algues Observations 30 80 % dlimination selon les genres. Risque de relargage de toxines. Efficacit dmontre. limination de 97,5 99,5 % des toxines, notamment par adsorption sur les argiles. Produits de dgradation non toxiques. Efficacit nulle des ultra- et micro-filtrations seules (sans charbon). Nanofiltration avec seuil de coupure suprieur 200 Da efficace. Osmose inverse : rtention de 96,7 99,6 % des toxines. Chlore et bioxyde de chlore aux doses courantes demploi : effet faible nul. 20 30 mg.L-1 pour une limination de 90 98 % des toxines. 90 % de rtention la premire anne dutilisation. 1 mg.L-1 pendant une minute ou 0,5 mg.L-1 pendant 9 minutes sont efficaces si la demande en ozone est satisfaite. Bonne limination. Variable selon la qualit globale de leau 30 80 % de rtention selon les toxines. Efficacit sur llimination des toxines

tapes de traitement

Principaux procds

Filtration lente

Filtration sur berge

Affinage Micro- et ultra-filtration permettent datteindre 6 log dabattement. Risque de colmatage et de relargage de toxines.

Traitements membranaires

Traitements de dsinfection Nulle. Risque de relargage de toxines si des cellules sont parvenues jusqu cette tape.

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Adsorption sur charbon actif en poudre

Adsorption sur charbon actif en grain

Ozone

Oxydation avance

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VI. tat des lieux des recommandations et des rglementations

1. Eau de baignade
1.1. Pays et instances lorigine de recommandations
Pour de nombreux pays, la prise en considration du risque cyanobactrie li la baignade ou aux activits nautiques est rcente ou encore inexistante. Les problmes sanitaires sont parfois sous estims, car mal dfinis et peu connus. Ils sont de ce fait diversement pris en considration. Les pays les plus avancs en la matire sont ceux qui connaissent frquemment des pisodes de prolifration dans les eaux de baignade. Cest le cas par exemple de lAustralie. Les valeurs seuils dfinies (nombre de cellules, concentration en toxine, biovolume ) sont indicatives et provisoires et ne constituent pas des obligations lgales. Au niveau international, des recommandations manant de lOrganisation mondiale de la sant ont t publies en 2003 (OMS, 2003). Au niveau de lunion europenne la qualit de leau des zones de baignade et sports nautiques est rgie par la directive europenne 76/160/CEE adopte en 1976 et transpose en droit franais par le Code de la sant publique (livre III, articles L1332). Sous le terme eaux de baignade sont regroups les cours et plans deau amnags pour la baignade et/ou la pratique de loisirs aquatiques, frquents de manire rptitive par au moins 10 baigneurs au mme instant. Cette directive ne comporte pas de cadre rglementaire pour la surveillance sanitaire des cyanobactries ou cyanotoxines. En revanche, larticle 8 de la nouvelle directive eaux de baignade, directive 2006-7 CE du Parlement europen et du Conseil de lunion europenne du 15 fvrier 2006, insiste sur le risque potentiel li la prsence de cyanobactries et demande ce que des mesures de gestion immdiates soient prises afin de rduire lexposition de la population (Journal Officiel de lunion europenne L 64 du 4 mars 2006). En labsence de recommandations communautaires spcifiques la surveillance et gestion du risque li la prolifration de cyanobactries dans les eaux de baignade, certains tats membres, dont la France, lEcosse ou la Rpublique Tchque, ont adopt les recommandations de lOMS. Dautres comme lAllemagne, le Danemark, les Pays-Bas et la Finlande ont labor leurs propes recommandations.. En France, depuis 2003 des recommandations de surveillance et gestion de phnomnes de prolifration de cyanobactries dans des eaux de baignade ont t publies par la Direction gnrale de la sant (circulaire DGS/SD7A 2003/270(34), 2004/364(35), 2005/304(36)) sur la base dun avis du Conseil suprieur dhygine publique de France (avis du CSHPF du 6 mai 2003). Hors Union europenne, lAustralie a t le premier dvelopper lchelle nationale, par le biais du National Health and Medical Research Council (NHMRC 2004), ses propres lignes directrices. Au niveau rgional, ce pays a galement dvelopp des recommandations propres certaines provinces: cest le cas de la rgion Hunter (DIPNR 2004), de la Tasmanie (DPIWE 2001) et du Queensland (Queensland Health 2001). Ces lignes directrices rgionales tiennent compte des particularits locales telles que la priode de prolifration ou les espces cyanobactriennes prsentes.

1.2 . Synthse descriptive des recommandations disponibles

1.2.1. Recommandations de lOMS 1.2.1.1. Les bases
Aprs considration des ventuels risques par contact direct (irritations et allergies), inhalation et absorption (intoxication court et long termes), lOMS (2003) a estim que le risque le plus important tait li lingestion deau contamine par des cyanotoxines. Elle a retenu trois seuils partir desquels les risques sanitaires sont accrus et peuvent changer de nature. Ltude pidmiologique humaine de Pilotto et al. (1997), la DJT de 0,04 g.kg-1.j-1

(34) http://www.sante.gouv.fr/adm/dagpb/bo/2004/04-36/a0362536.htm (35) http://www.sante.gouv.fr/adm/dagpb/bo/2004/04-36/a0362536.htm (36) http://www.sante.gouv.fr/adm/dagpb/bo/2005/05-08/a0080029.htm

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pour la microcystine-LR et la limite provisoire de 1 g.L-1 admise pour cette toxine dans leau de boisson, ont t utilises pour dfinir les niveaux risque faible et modr. Le niveau haut risque a t dfini sur la base des empoisonnements danimaux et des problmes sanitaires rapports chez lhomme, aprs contact avec de lcume. LOMS prcise que les neurotoxines constituent un danger moins important que les microcystines ou la cylindrospermopsine, car elles sont moins frquentes et prsentes en plus faibles quantits.

1.2.1.2. Programme de surveillance et de mise en alerte

Seuil faible risque sanitaire partir de ltude pidmiologique de Pilotto et al. (1997), lOMS a dfini un premier seuil 20 000 cellules.mL-1 estim quivalent 10 g.L-1 de chlorophylle-a, quand les cyanobactries dominent pour prvenir les ventuels problmes dirritation et dallergie attribus des composs cyanobactriens autres que les cyanotoxines. Elle ajoute que des effets irritants ont t observs dans cette tude partir de 5000 cellules.mL-1, mais que cette valeur na pas t retenue car les effets sont lgers et concernent un faible nombre dindividus. Il est prcis qu cette densit cellulaire, la concentration potentielle en microcystine serait de lordre de 2 4 g.L-1 (voire 10 g.L-1) pour des prolifrations domines par des cyanobactries productrices de microcystine. LOMS considre qu ce stade, les risques sanitaires tels que des irritations cutanes, occulaires ou nasales et des dsordres gastraux-intestinaux sont faibles et les risques long terme sont considrs comme improbables. Seuil risque sanitaire modr Ce seuil de 100 000 cellules.mL-1 ou dune concentration en chlorophylle a de 50 g.L-1, si les cyanobactries sont dominantes, a t bas sur les considrations suivantes : - pour un adulte de 60 kg, ingrant 200 mL deau en une seule fois ou 100 mL en deux fois au cours de la baignade. Pour une prolifration de Microcystis aeruginosa la concentration en cette toxine serait de 20 g.L-1 (en prenant 2.10-7 g de microcystine par cellule) et de 40 g.L-1 lors dune prolifration de Plantothrix agardii. - partir de cette densit cellulaire, diffrentes espces (Microcystis spp. et Anabaena spp. par exemple) sont susceptibles de former trs rapidement de lcume, ce qui peut entraner localement des concentrations en toxine trs leves si ces espces sont toxinognes. ces seuils, lOMS considre que les risques court terme tels que les irritations cutanes sont levs et quil existe un risque modr long terme pour les nageurs et les pratiquants dactivits nautiques (ski nautique, planche voile) susceptibles dingrer de leau accidentellement. Seuil haut risque sanitaire La prsence dcume caractrise ce troisime seuil. De nombreux cas dempoisonnements mortels danimaux ont t rapports aprs ingestion dcume (Francis 1878, Edwards et al. 1992, Mez et al. 1997, Mez et al. 1998). LOMS signale que des problmes sanitaires chez lhomme ont t suspects aprs exposition de lcume et prcise qu court terme, des risques dempoisonnement svres, voir mortels, sont thoriquement possibles pour des enfants voluant dans de lcume pendant une priode prolonge et ingrant un volume deau important. Des maladies gastro-intestinales, des dommages hpatiques et des phnomnes dirritation cutane peuvent galement survenir par ingestion deau ou par contact, respectivement.

1.2.1.3. Mesures prendre

Actions court terme LOMS prcise que les actions mener devront tre dtermines en fonction de limportance de lutilisation de leau et de lvaluation des risques pour la sant publique. Seuil faible risque sanitaire. Il est recommand dune part dapposer sur site des panneaux davertissement et dautre part dinformer les autorits comptentes. Seuil risque sanitaire modr. La surveillance et les mesures de protection doivent tre renforces. Les deux principales actions sont : le contrle quotidien de la prsence dcume, qui peut se former trs rapidement (si des espces formant de lcume sont prsentes), et la prvention de lexposition dans les zones propices la formation dcume. Il est recommand galement de suivre si les conditions sont favorables la formation de lcume. Les autorits comptentes doivent tre averties. Des campagnes de sensibilisation du public aux dangers de lcume doivent tre mises en place et des panneaux davertissement rigs sur site. Enfin, des mesures de restriction de la baignade ou des activits nautiques peuvent tre prises. Seuil haut risque sanitaire. Il convient de prendre des mesures immdiates pour viter tout contact avec lcume. La baignade pourra tre interdite. Il est conseill de faire galement un suivi sanitaire. Les recommandations du seuil prcdent peuvent tre reprises ici.

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Linformation du public. En labsence de mesures de contrle des prolifrations effet immdiat, seules des dispositions visant informer le public peuvent tre efficaces. Ces informations sont les suivantes : - viter les zones o des concentrations dalgues ou de cyanobactries et/ou dcume sont visibles dans leau ou sur les rivages, le risque sanitaire le plus important tant le contact direct avec leau ou lingestion deau. - En labsence dcume mais avec une eau turbide et de coloration verdtre intense, viter les baignades et au moins ne pas immerger la tte si la transparence est infrieure la hauteur du genou. - Dans de telles circonstances, viter le ski nautique cause du risque li linhalation darosol. - Pour toute activit nautique susceptible de conduire une immersion accidentelle en prsence dune efflorescence dalgues ou de cyanobactries, porter des vtements parfaitement tanches. Leau qui sjourne longtemps entre la peau et les vtements de sport nautique constitue un risque important druption cutane. - Aprs les activits nautiques, se laver abondamment pour liminer tout rsidu dalgues ou de cyanobactries. - Laver soigneusement les affaires qui ont t en contact avec une efflorescence ou de lcume dalgues ou de cyanobactries. Actions immdiates effet long terme Il sagit de mesures destines rduire laptitude des milieux aquatiques promouvoir les prolifrations de cyanobactries. Cet objectif peut tre atteint en maintenant le phosphore total des concentrations de 0,010,03 mg.L-1. Il est noter que, dans le document de lOMS (2003), donne des valeurs de 0.01 0.03 g.L-1, probablement dues une erreur de frappe, il sagit de mg par litre et non de g. Afin de rduire la prolifration des cyanobactries, lOMS prconise une rduction cible des principales sources dapport en phosphore, en particulier lapport de fertilisants agricoles en utilisant, entre autres, des systmes simples de protection des plans deau, tels que la plantation de haies sur des bandes de 20 mtres de large le long des rives permettant de rduire lrosion et les transferts de phosphore par ruissellements.

1.2.2. Recommandations du National Health and Medical Research Council australien 1.2.2.1. Les bases
Le NHMRC (2004) considre, comme lOMS, que le risque sanitaire principal est li lingestion de toxines car les enfants et les adultes peuvent, au cours dactivits rcratives, ingrer des quantits deau susceptibles dengendrer des effets nocifs lis aux cyanotoxines (Chorus & Fastner 2001). Les recommandations australiennes concernent la gestion du risque li lingestion de microcystines. La gestion du risque se dcline en deux niveaux dactions : 1 - lidentification des cours et plans deau usage rcratif et leur classification en terme de vulnrabilit prsenter des prolifrations algales ; 2 - lapplication dactions spcifiques en fonction de seuils de gestion. Les seuils de gestion ont t drivs partir dune concentration limite de microcystines dans leau de baignade, elle-mme drive des donnes de ltude de Falconer et al. (1994). Pour la gestion du risque li aux efflorescences de M. aeruginosa, espce frquente en Australie, la concentration limite de microcystines a t convertie en une valeur guide exprime en nombre de cellules de M. aeruginosa. Pour grer les situations o dautres espces sont prsentes, des valeurs guides de biovolume, calcules en quivalent M. aeruginosa, sont utilises pour prendre en compte lensemble des cyanobactries.

1.2.2.2. Arbre dcisionnel, vulnrabilit des eaux de baignade

Les plans et cours deau doivent tre classs comme tant ou non des zones de baignade ou dactivit aquatique . Dans laffirmative, leur caractrisation sensuit afin destimer si le site prsente des facteurs de risque de multiplication de cyanobactries. Si le site est vulnrable, celui-ci doit faire lobjet dune tude plus approfondie permettant de lui attribuer une classe de qualit laide dune grille prsentant 5 niveaux (figure VI.2). La classification du plan deau est ralise daprs sa capacit permettre un dveloppement de cyanobactries, par attribution dune catgorie de susceptibilit, et daprs un historique des prolifrations de cyanobactries, lorsque des donnes sont disponibles. Les catgories de susceptibilit sont dfinies daprs des donnes environnementales telles que : la temprature, la concentration en phosphore total, la stratification thermique et les antcdents de contamination par les cyanobactries (tableau VI-I). Cependant, le document guide ne prsente que quelques combinaisons.

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Figure VI-1 : Arbre de dcision pour la classification des sites risques (daprs NHMRC 2004).

L'eau est-elle utilise des fins rcratives ? Oui

Non Il n'y a pas lieu d'valuer le site. Faire une valuation si des usages rcratifs apparaissent

Liste de contrle de la qualit de l'eau. Y a-t-il des raisons de classer ce site ? Risque faible rvaluer tous les 5 ans ou si des changements interviennent

Des facteurs de risque sont-ils prsents ? Oui Ces risques ont-ils t valus ?

Non

Non

Oui Non Des donnes concernant les Non cyanobactries sont-elles disponibles ? Oui Oui Est-il possible de collecter des donnes sur les cyanobactries ? Non Classifier transitoirement en catgorie risque potentiel, jusqu' ce que la collecte de donnes soit possible

Oui

Classification en 5 classes de qualit d'aprs : - la catgorie de susceptibilit ; - la catgorie historique cyanobactries

Procder une rvaluation quantitative

Tableau VI-I : Dtermination des catgories de susceptibilit des plans deau usage rcratif (daprs NHRMC 2004).
Facteurs environnementaux Historique cyanobactrie Non Oui Oui Oui Oui Temprature de leau (C) < 15 15-20 20-25 > 25 > 25 Phosphore total (g.L-1) < 10 < 10 10-25 50-100 > 100 Stratification thermique Absente Peu frquente Occasionnelle Frquente et persistante Trs frquente et persistante Catgorie de susceptibilit Trs faible Faible Modre Haute Trs haute

Cinq classes de qualit ont t dfinies en combinant les donnes de susceptibilit et dhistorique de cyanobactries : trs bon, bon, passable, mauvais, trs mauvais (tableau VI-II). Pour les catgories bon, passable, mauvais , il est recommand de mettre en place un programme de surveillance et de mise en alerte, prsent en section 1.2.2.4. Lapplication de ce programme nest pas ncessaire pour la catgorie trs bon car la probabilit de dpassement des valeurs seuils est faible. Pour la catgorie trs mauvais , les activits rcratives sont dconseilles.

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Lorsquune discordance est constate entre la catgorie de susceptibilit et la catgorie historique cyanobactries , une rvaluation plus approfondie doit tre effectue (voir tableau VI-II).

Tableau VI-II : Dtermination de la classe de qualit des plans deau usage rcratif (daprs NHMRC 2004).
Catgorie Historique Cyanobactrie A < 500 cellules.mL-1 B [500 5000[ cellules.mL-1 de M. aeruginosa ou biovolume de [0,05 0,5[ mm3.L-1 Bon Passable rvaluer Mauvais Trs mauvais C [5000 40 000[ cellules.mL-1 de M. aeruginosa ou biovolume de [0,5 8[ mm3.L-1 Passable rvaluer Mauvais Trs mauvais Trs mauvais D 40 000 cellules.mL-1 de M. aeruginosa ou biovolume 8 mm3.L-1 rvaluer rvaluer Trs mauvais Trs mauvais Trs mauvais

Trs faible Catgorie de susceptibilit Faible Modre Haute Trs haute

Trs bon Bon Passable rvaluer rvaluer

1.2.2.4. Programme de surveillance et de mise en alerte

Niveau de surveillance (niveau vert) Ce niveau est dfini pour des concentrations en Microcystis aeruginosa comprises entre 500 et 5000 cellules mL-1 ou pour un biovolume compris entre 0,05 et 0,5 mm3.L-1 en prsence dautres cyanobactries. Le NHMRC reconnat que ces valeurs sont arbitraires mais indique que, dans certains cas, ce nombre de cellules peut constituer un stade prcoce dune prolifration. Niveau dalerte (niveau orange) Il est dfini par une concentration en Microcystis aeruginosa suprieure 5000 cellules.mL-1 et jusqu 40 000 cellules.mL-1, ou par un biovolume suprieur ou gal 0,5 et infrieur 8 mm3.L-1 en prsence dautres cyanobactries. Le NHMRC a retenu le seuil de 5 000 cellules.mL-1 daprs les tudes de Pilotto et al. (1997, 2004), qui montrent que des troubles tels quirritations, dsordres gastro-intestinaux, fivre, tat grippal sont possibles en prsence de ce nombre de cellules. Niveau daction (niveau rouge) Il est atteint au-del de 40 000 cellules.mL-1 de Microcystis aeruginosa ou lorsque le biovolume est gal ou suprieur 8 mm3.L-1, en prsence dautres cyanobactries avec dominance dune espce toxinogne. Le NHMRC indique que ce biovolume doit sappliquer aux cyanobactries toxiques mais aussi aux cyanobactries dont la toxicit na pas t teste. Le seuil de 40 000 cellules.mL-1 correspond, selon le calcul, au nombre de cellules pour le seuil de 8 g.L-1 de microcystines, considr par les australiens comme permettant de garantir labsence deffets nocifs chez les enfants, lors dune exposition subchronique lie aux eaux de baignade. Le seuil pour les microcystines de 8 g.L-1 a t obtenu selon la formule et les valeurs paramtriques suivantes : 100 x 10 x 10 0,25 x 5 000 =8

100 g.kg-1.j-1: DMENO 10 : pour passer de 100 mL (volume ingr accidentellement) 1 L. 10 kg : pour la masse corporelle moyenne dun enfant. 0,25 : le nombre de jours dexposition retenu (11 jours/an) est le quart du nombre de jours (44 jours) de ltude dont provient la DMENO. 5 000 : Facteur de scurit : 10 pour la variabilit interspcifique, 10 pour la variabilit intraspcifique, 10 pour lincertitude cancrogense et 5 pour lutilisation dune DMENO la place dune DSENO.

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1.2.2.5. Mesures prendre

Niveau vert. Ce seuil de mise en veil doit permettre dinitier un programme de surveillance du site si celui-ci nexiste pas dj. Le dnombrement et la caractrisation des espces doivent tre mis en ?uvre. Il est recommand dtre particulirement attentif la formation locale dcume. Lorsque des espces toxinognes sont prsentes (Microcystis aeruginosa, Anabaena circinalis, Cylindrospermopsis raciborskii, Aphanizomenon ovalisporum, Nodularia spumigena), le dnombrement sera au minimum dune fois par semaine. Pour les autres espces, le risque tant considr plus faible, un chantillonnage tous les 15 jours peut suffire. Le nombre de points de prlvement reprsentatifs du site, dpendra de la taille du plan deau. Niveau orange. Ce niveau doit faire, immdiatement, lobjet dune notification et dune consultation auprs des autorits sanitaires comptentes afin de statuer sur la nature de la prolifration. Lvaluation de la toxicit et lanalyse des toxines seront ralises aprs avis et discussion avec les autorits sanitaires. En particulier, on considrera les espces prsentes et lhistorique du site. Lchantillonnage aura lieu deux fois par semaine, si des cyanobactries toxinognes sont en forte proportion. Si le risque de toxicit est cart, une fois par semaine ou tous les 15 jours peut suffire. Il conviendra galement de suivre ltendue et la rpartition spatiale de la prolifration, en contrlant diffrents points reprsentatifs du site. Il est recommand de tester la toxicit de lcume ou den analyser les toxines. Niveau rouge. Ce niveau fait aussi lobjet dune notification immdiate auprs des autorits locales et des autorits sanitaires comptentes. Le public est inform par les autorits comptentes ( travers les mdias et par des indications sur site) que leau nest pas convenable pour les activits rcratives et quil existe un risque sanitaire. Le contrle de lefflorescence devra se poursuivre comme pour lalerte orange, en particulier pour constater le retour la normale. Ces actions sont mises en place lorsque la prsence des cyanobactries toxinognes ou de cyanobactries dont la toxicit na pas t value est confirme. Informations destines au public. Les recommandations destines au public sont les mmes que celles du guide de lOMS 2003 lexception du point supplmentaire suivant: en cas de problme sanitaire, prendre un avis mdical et informer les autorits responsables du site.

1.2.3. Recommandations de la rgion Hunter (Australie)

Quatre niveaux dalerte ont t dfinis par le State Algal Coordinating Commitee (SACC) sur la base des connaissances scientifiques rcentes. Lorsquun niveau dalerte est atteint, il est recommand de prendre en considration : les conditions mtorologiques, la saison, le lieu de lchantillonnage et le niveau deau. Comme dans les guides prcdents, la toxicit de la prolifration est considrer en mme temps que la densit de cellules (DIPNR 2004).

1.2.3.1. Programme de surveillance et de mise en alerte

Niveau dalerte zro Pour des concentrations de cyanobactries infrieures 500 cellules.mL-1, le guide indique quaucun problme de qualit de leau nest rapport. Niveau dalerte faible Pour des concentrations de 500 moins de 2000 cellules.mL-1, le guide indique quune prolifration rapide des cyanobactries est possible si les conditions sont favorables, et que le got et lodeur de leau peuvent tre affects. Niveau dalerte modre De 2 000 15 000 cellules.mL-1, une prolifration est en cours. Leau peut changer de couleur, dodeur et de got. De lcume peut galement se former au-del de 5 000 cellules.mL-1. Niveau dalerte leve Pour des concentrations en cyanobactries potentiellement toxinognes suprieures 15 000 cellules.mL-1. Dans le cas o des cyanobactries non toxinognes dominent, ce niveau est maintenu lorsque le biovolume est suprieur 2 mm3.L-1. Leau est considre comme impropre aux activits rcratives cause dune toxicit potentielle. Son got et son odeur peuvent tre trs affects et la formation dcume est probable.

1.2.3.2. Mesures prendre

Alerte faible. Un programme de surveillance doit tre tabli.

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Alerte modre. La surveillance doit se poursuivre et les autorits sanitaires doivent tre averties si la ressource est utilise pour leau de consommation. Le programme de suivi doit galement permettre de constater le retour en dessous du seuil de 2 000 cellules.mL-1. Alerte leve. ce stade, des informations doivent tre diffuses par les mdias et des avertissements pour le public seront placs judicieusement sur le site. Une valuation de la toxicit sera mise en place. Le dnombrement des cellules doit tre effectu de faon hebdomadaire, selon limportance de lcume. La surveillance et les actions entreprises se poursuivront jusqu ce que la concentration en cellules descende sous le seuil de 15 000 cellules.mL-1 dans deux chantillonnages hebdomadaires conscutifs.

1.2.4. Recommandations du Queensland (Australie)

Le guide rcapitulant les recommandations du Queensland (Queensland Health 2001) reprend celles de lOMS et les valeurs seuils publies en 2003 (OMS 2003).

1.2.5. Recommandations de la Tasmanie (Australie)

Les considrations portent sur leau de consommation et leau usage rcratif.Trois niveaux dalerte croissante, semblables ceux de la rgion Hunter, ont t dfinis partir des connaissances acquises sur les caractristiques des prolifrations de Microcystis. Il est indiqu que lingestion dcume reprsente le danger le plus important (DPIWE 2001).

1.2.5.1. Programme de surveillance et de mise en alerte

Niveau dalerte 1 Ce niveau est dfini pour des concentrations comprises entre 500 et 2 000 cellules.mL-1. Il correspond au stade prcoce dune prolifration au cours duquel le got et lodeur de leau peuvent changer. Niveau dalerte 2 Les concentrations en cellules varient de 2 000 15 000 cellules.mL-1, ce qui correspond une prolifration bien tablie. La prsence dcume est de ce fait probable, ce qui constitue un risque sanitaire suprieur. Niveau dalerte 3 Le niveau trois est atteint lorsque lon dpasse les 15 000 cellules.mL-1. ce stade, en prsence dune prolifration toxique, les quantits de toxines sont leves.

1.2.5.2. Mesures prendre

Niveau 1. Initier un programme de suivi en routine, sil nest pas encore en place. Il doit comprendre lidentification des espces en prsence et linspection rgulire de leau afin de dtecter un ventuel changement de couleur ou lapparition dcume. Si de lcume est prsente, le public doit en tre averti. Il sera galement inform des mesures entreprises pour identifier les dangers ventuels. Niveau 2. Les autorits sanitaires doivent tre averties et la toxicit de lefflorescence value. Il est galement ncessaire de prvenir le public par voie de presse et par une signalisation. La baignade devra tre vite dans de leau ayant chang de couleur ou dans des nappes dcume, cause des risques dirritation des yeux et de la peau. Niveau 3. Si lefflorescence est reconnue toxique, les mises en garde des dangers lis aux activits rcratives doivent tre renforces (par voie de presse et par distribution davis dans les botes aux lettres). Des analyses de toxicit seront conduites deux fois par semaine.

1.2.6. Recommandations aux tats-Unis

LUS-EPA (Environmental Protection Agency) na pas dit de recommandations sur le sujet. Il semble que tous les tats ne sont pas au mme stade de considration du risque cyanobactrie dans les eaux usage rcratif. Lorsque cette prise en compte existe, les recommandations varient. Le DHS (Department of Human Services) de lOrgon recommandait en 2004 (DHS 2004) le seuil dalerte de 15 000 cellules.mL-1 pour Anabaena flos aquae. Actuellement, ce seuil est plac 40 000 cellules.mL-1 pour les efflorescences Microcystis ou Planktothrix et 100 000 cellules.mL-1 quand dautres cyanobactries potentiellement toxiques sont prsentes. Lorsque ces seuils sont atteints, il est recommand de placer des avis sur site, destins prvenir le public (Dave Stone, Department of Human Service, communication personnelle).

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Le Department of Health and Family Services de ltat du Wisconsin fait,quant lui,rfrence aux recommandations de lOMS (DHFS 2004). Au sein dun mme tat, on peut observer des diffrences de traitement selon les sites. Dans le Montana le lac Hebgen, qui est un grand lac populaire de baignade, est soumis un programme de surveillance en t et en automne. Les sites stratgiques du lac sont rgulirement inspects. Si une efflorescence est suspecte, un chantillon est envoy pour une analyse microscopique. Si besoin, un test de toxicit est ralis (Michael Suplee, Montana Department of Environmental Quality, communication personnelle).

1.2.7. Le rseau de surveillance des cyanobactries et de leurs toxines en Finlande 1.2.7.1. Les bases
Les problmes de nuisance lis aux cyanobactries sont connus en Finlande depuis 1967 (Rapala et al. 2005a). La prise en considration de ces problmes repose sur un rseau national de surveillance et de collecte de donnes qui permet une bonne connaissance du terrain. Cette longue exprience de suivi des cyanobactries a mis en vidence que la majorit des prolifrations en Finlande sont toxiques. Elle a galement permis de rvler les sites risque. Le programme de surveillance propos pour les eaux de baignade est bas essentiellement sur lobservation. Les cyanobactries ne sont pas distingues des algues. Les raisons de ce choix sont fondes sur le fait que lobservation permet une ractivit immdiate compare lanalyse des toxines, la mise en garde rapide des usagers tant lobjectif prioritaire. Le suivi par observation est dun bon rapport cot/efficacit. Rapala et al. (2005a) soulignent que la surveillance de certains lacs et lanalyse des toxines ont permis de montrer une bonne corrlation entre la biomasse cyanobactrienne mesure et la quantit de microcystine. Ils considrent que lobservation ou lexamen microscopique permettent une bonne estimation du risque li aux cyanobactries.

1.2.7.2. Programme de surveillance et de mise en alerte

Labondance des cyanobactries est contrle, de juin aot, de faon hebdomadaire par les services de sant ou de lenvironnement locaux ou par des volontaires. Ces personnes ont t formes afin que les observations soient harmonises. Quatre niveaux de classement ont t dfinis : Niveau zro. Absence dalgues la surface de leau ou sur la plage. La transparence de leau mesure au disque de Secchi est normale. Niveau 1. Prsence dalgues : des flocons verdtres sont visibles la surface de leau, dans un chantillon plac dans un flacon transparent, ou sur le rivage. La transparence de leau est rduite par les algues. Niveau 2. Abondance dalgues : leau a pris une nette coloration. Des tches dcume sont visibles sur leau ou la plage. Niveau 3. Forte abondance dalgues : on observe des nappes dcume ou dpais agrgats sur le rivage.

1.2.7.3. Mesures prendre

Niveau 1. Une alerte est dclenche. Elle peut conduire dans certains cas (problme sanitaire, empoisonnement danimaux, persistance des cyanobactries, frquentation de la plage, etc.) un examen microscopique et lanalyse des toxines. Niveaux 2 et 3. Lexamen microscopique est conseill et la mise en garde du public est obligatoire.

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La figure VI-2 rsume les diffrentes situations envisages et les recommandations :

Figure VI-2 : Arbre de dcision en Finlande (daprs Rapala et al. 2005).

Examen microscopique

Analyse des toxines

Niveau 2 Alerte

Mise en garde du public

Niveau 1

Inspection visuelle du site

Niveau 3

Niveau 0 Dans certains cas Aucune action Recommand Obligatoire

Il est noter que depuis 1998, le public a t impliqu dans la dmarche de surveillance par le biais de numros dappel permettant de recueillir des tmoignages.

1.2.8. Recommandations aux Pays-Bas 1.2.8.1. Les bases

Les recommandations de ce pays sont bases sur la DJT de la microcystine-LR propose par lOMS et la valeur admissible pour leau de boisson (1g.L-1) qui en dcoule. La quantit deau susceptible dtre ingre au cours dune baignade est estime 100 mL et on a considr que la baignade avait lieu tous les jours (exposition chronique). Lhistorique des sites (antcdents de prolifrations de cyanobactries, dcolorations de leau et problmes sanitaires) est galement pris en considration de faon allger lensemble du travail de surveillance (Ibelings 2005).

1.2.8.2. Programme de surveillance et de mise en alerte

Trois niveaux daction ont t dfinis : mise en alerte : niveau dclench lorsque la concentration en MC-LR est suprieure 10 g.L-1, mise en alerte, suivi prolong et interdiction de la baignade : MC-LR > 20 g.L-1, mise en alerte, suivi prolong et quantification des toxines : prsence dcume.

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La figure VI-3 prsente les diffrentes situations envisages :

Figure VI-3 : Arbre dcisionnel aux Pays-Bas (Ibelings 2005).

Problme suspect - plaintes - observation directe

Historique du site Oui

Prsence d'cume

Dtermination de la quantit de MC Non < 10 g.L-1 < 20 g.L-1 10-20 g.L-1

Aucune action

Interdire la baignade

Mise en alerte

Dans le texte est prcis que le suivi des sites a permis de montrer que des valeurs suprieures 20 g.L-1 de microcystine pouvaient tre atteintes pour des valeurs modestes de chlorophylle a ( partir de 22 g.L-1) (Ibelings 2005).

1.2.9. Recommandations en Allemagne

Ces recommandations manent du ministre de lenvironnement. La surveillance dbute par un contrle dindices defflorescence, de la transparence de leau et du statut du phosphore total (Chorus 2005). Il ny a pas de seuil formel dinterdiction de la baignade. En effet, au seuil > 100 g.L-1 de MC-LR la baignade est dconseille et la fermeture du site est recommande. La figure VI-4 prsente les diffrentes situations envisages.

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Figure VI-4 : Arbre dcisionnel en Allemagne (daprs Chorus 2005).

Signes d'efflorescence, dpts de cyanobactries, bandes verdtres sur l'eau, cume

Transparence < 1m(3) et posphore total > 20-40 g.L-1 (4) Oui Dominance de cyanobactries (qualitatif) et Chlorophylle -a > 40 g.L-1 ? ou biovolume de cyanobactries > 1 mm3.L-1

Oui (1)

Oui (2)

Oui (2) Dosage de la microcystine

Publier des avertissements en prenant en compte les diffrents groupes d'intrt et dconseiller la baignade. valuer la ncessit de fermer le site temporairement.

< 10 100 < g.L-1 Oui (5)

> 100 g.L-1 Oui (5)

< 10 g.L-1 Oui Contrler le dveloppement des cyanobactries dans le cadre d'une surveillance rgulire (tous les 14 jours).

Publier des avertissements et dconseiller la baignade. La fermeture temporaire du site est recommande.

1 : lorsque lon a une bonne connaissance du plan deau et de sa susceptibilit aux efflorescences de cyanobactries ; 2 : selon estimation de la situation concrte, donner des avertissements provisoires et faire une surveillance renforce du site ; 3 : appliquer seulement quand la profondeur de leau est > 1 m. Les cyanobactries coloniales peuvent former des efflorescences des transparences denviron 2 m ; 4 : dans des eaux qui possdent des strates thermiques et particulirement dans de vastes plans deau, des cyanobactries peuvent dominer partir de 20 g.L-1 de phosphore total (et parfois moins). Dans de petits plans deau bien mlangs, la dominance commence plutt partir de 30-40 g.L-1 ; 5: intensifier la surveillance du dveloppement des cyanobactries).

1.2.10. Recommandations au Canada (INSPQ, 2005)

Le Groupe Scientifique sur lEau de lInstitut National de Sant Publique du Qubec (INSPQ) a labor des recommandations (2005b) qui nuancent lavis de Sant Canada qui considre que le dnombrement cellulaire nest pas un indicateur fiable ou reprsentatif des concentrations en toxines (Sant Canada, 2003). Labsence de donnes dmontrant que des effets irritants soient engendrs par les cyanobactries lors de la baignade a conduit lINSPQ rejeter le seuil faible risque sanitaire (risques passagers dirritations) dfini par lOMS 20 000 cellules.mL-1. En revanche, le seuil de 100 000 cellules.mL-1 est considr comme un lment dcisionnel complmentaire lors de lvaluation dune situation donne. Les recommandations mettent laccent sur le fait que les valeurs seuil ne sont pas des critres rglementaires ou des normes et quelles ne doivent pas se substituer au jugement professionnel et la prise en compte de lensemble de la situation. Elles constituent seulement un lment provisoire de dcision accompagnant la gestion. Seuil dalerte. Des seuils dalerte de 16 g.L-1 dquivalent microcystine-LR et de 40 g.L-1 danatoxine-a ont t dfinis daprs une valuation de la concentration limite dexposition qui permet de garantir labsence deffets nocifs chez les enfants. Le scnario retenu est celui dun enfant de 10 kg, ingrant un volume de 250 mL au cours dune session aquatique. Les valeurs toxicologiques retenues pour la microcystine et lanatoxine-a sont respectivement, les DSENO de 40 g.kg-1.j-1 (Fawell et al. 1994, Fawell et al. 1999a) et de 100 g.kg-1.j-1 (Fawell et al. 1999b). Un facteur dincertitude de 100 a t appliqu chacune de ces valeurs dans les calculs.

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 Mesures prendre En cas de prolifration, lINSPQ recommande dinformer la population dviter les activits aquatiques impliquant un contact avec leau. Si les seuils dalerte sont dpasss mme aprs disparition de lefflorescence, la recommandation prcite doit tre maintenue.

1.2.11. Recommandations en France 1.2.11.1. Les bases

Des recommandations de surveillance et gestion de phnomnes de prolifration de cyanobactries dans des eaux de baignade ont t publies par la Direction gnrale de la sant (circulaire DGS/SD7A 2003/270, 2004/364, 2005/304) sur la base dun avis du Conseil suprieur dhygine publique de France (avis du CSHPF du 6 mai 2003). La surveillance et le contrle sanitaire ne concernent que les sites de baignade ou activits aquatiques amnags et est effectue sous la responsabilit de la personne publique ou prive responsable de la gestion de la zone de baignade ou de loisirs nautiques. La surveillance sanitaire est organise sur la base de trois aspects : vulnrabilit des eaux (site faible risque ou risque), comptage cellulaire et dosage des microcystines en quivalent microcystine-LR.

1.2.11.2. Programme de surveillance et mesures prendre

Les gestionnaires de sites ou le maire concern doivent mettre en place un systme de surveillance renforc pour les sites risque (sensibles leutrophisation, ayant dj prsent des prolifrations de cyanobactries ou prsentant une forte frquentation) et un systme de surveillance visuelle pour les autres sites (circulaire DGS/SD7A 2003/270, 2004/364, 2005/304).

Figure VI-5: Arbre dcisionnel en France (daprs lavis du CSHPF, 6 mai 2003).
Surveillance visuelle de toutes les zones de baignade/loisirs nautiques. Surveillance renforce* des sites sensibles l'eutrophisation (Secchi, variations importantes de pH, couleur...). * Critres : historique de prolifrations, usages du site et niveau de frquentation Situation juge normale. Pas de recommandations particulires. Situation juge anormale. Observation d'une efflorescence, d'cumes, d'un changement de couleur. Prlvement pour observation microscopique. Mise en vidence de cyanobactries (population majoritaire) Dnombrement cellulaire, identification des genres < 20 000 cellules/ml 20 % Surveillance active journalire. Dnombrements au moins hebdomadaires. Maintien d'une activit normale sur le site. Entre 20 000 et 100 000 cellules/ml 20 % Surveillance active journalire. Dnombrements hebdomadaires. Information du public. < 100 000 cellules/ml 10 % Quantification exprime en quivalents microcystine LR si < 25 g/l 5% q. MC-LR. Limitation de la baignade. Information du public. Reprage des zones d'apparition d'cume > 100 000 cellules/ml 10 % Quantification exprime en quivalents microcystine LR si > 25 g/l 5% q. MC-LR. Interdiction de baignade et limitation de tous loisirs nautiques Information du public. Prsence d'cumes ou de mousse. Interdictions de tous les usages dans ces zones. Information du public. Suivi du dplacement des cumes.

Absence de cyanobactries.

Dnombrements hebdomadaires et suivi des concentrations en toxines au moins bimensuel jusqu' retour la normale mme aprs disparition des signes d'efflorescence et obtention de dnombrement < 200 000 cellules/ml 20 %
* Surveillance renforce : observation visuelle et mesure de la turbidit ou observation au disque de Secchi ou mesure du pH. Suivi ventuel de la chlorophylle-a (entre 10 et 50 g.L-1 : niveau dalerte, > 50 g.L-1 : niveau proccupant si la dominance des cyanobactries est tablie). La chlorophylle a ne doit pas tre considre comme un indicateur spcifique des cyanobactries.

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Dans lavis du 6 mai 2003 du CSHPF, la gestion des phnomnes de prolifration des cyanobactries est base sur les rsultats des observations microscopiques et du dnombrement cellulaire. En cas de prsence majoritaire des cyanobactries, des actions spcifiques sont mettre en place en fonction des deux niveaux seuils de cellules tels que recommand par lOMS et des recommandations spcifiques en cas dapparition dcume ou mousse. Niveau I - Comptage infrieur 20 000 cellules.mL-1 20% (cyanobactries en population majoritaire). Gestion : maintien dune activit normale sur le site mais information du public et des usagers du site par la pose de panneaux exclusivement au niveau des zones de dpts defflorescence ou dcume ( adapter en fonction des variabilits gographiques lies aux vents). Surveillance : poursuite de la surveillance visuelle renforce de manire journalire. Ralisation dun comptage cellulaire et dune identification des espces de cyanobactries au moins bi-mensuelle. - Comptage compris entre 20 000 et 100 000 cellules.mL-1 20% (cyanobactries en population majoritaire). Gestion : pas de restrictions dutilisation du site mais information du public et des usagers du site par la pose de panneaux, notamment au niveau des zones de plus forte prsence dalgues (variable en fonction du vent) et des zones dusages. Surveillance : poursuite de la surveillance visuelle renforce quotidienne du site, observation microscopique, dnombrement et identification despces une frquence dchantillonnage hebdomadaire. - Comptage suprieur 100 000 cellules.mL-1 10% (cyanobactries en population majoritaire). Gestion : passage au dispositif de gestion et suivi de niveau II. Niveau II Ralisation dune recherche et dune quantification de toxines. Pour ce faire, et en attente de mthodes normalises, il est recommand de procder une analyse selon la mthode dinhibition de lactivit enzymatique de la PP2A exprime en quivalent microcystine-LR. Si le laboratoire ne dispose pas de cette mthode, et bien que ne donnant pas une rponse de mme nature, il est galement possible de raliser des dosages de microcystines par essai immunologique (rsultat exprim en quivalent microcystine-LR) ou par couplage chromatographie en phase liquide-spectromtrie de masse. - Concentration en quivalent MCs infrieure 25 g.L-1 5 %. Gestion : limitation de la baignade selon la localisation journalire des zones de plus forte prsence de cyanobactries et des rsultats analytiques des zones deau chantillonnes; Information du public et des usagers du site par la pose de panneaux, notamment au niveau des zones de plus forte prsence dalgues (variable en fonction du vent) et des zones dusages. Surveillance : poursuite du suivi avec une frquence hebdomadaire (dnombrement cellulaire, si ce dernier est suprieur 100 000 cellules.mL-1, nouvelle mesure de concentration de toxines). - Concentration en quivalent MCs suprieure 25 g.L-1 5 %. Gestion : interdiction de la baignade et limitation dusages pour les loisirs nautiques individuels ou collectifs. Information du public et des usagers du site par la pose de panneaux, notamment au niveau des zones de plus forte prsence dalgues (variable en fonction du vent) et des zones dusages. Surveillance : poursuite du suivi avec une frquence hebdomadaire (dnombrement cellulaire, si ce dernier est suprieur 100 000 cellules.mL-1, nouvelle mesure de concentration de toxines). Niveau III La prsence de mousse ou dcume sur une aire de la zone, conduit au dclenchement du dispositif de suivi de niveau III. Gestion : interdiction de la baignade et de toutes les autres activits de loisirs nautiques dans les zones concernes. Prvenir tout contact de personnes ou danimaux avec les cumes. Information du public et des usagers du site par la pose de panneaux, notamment au niveau des zones de plus forte prsence dalgues (variable en fonction du vent) et des zones dusages. Surveillance : suivi de lvolution des mousses ou cumes et de leur localisation, poursuite du suivi du site avec une frquence hebdomadaire (dnombrement cellulaire et identification). Suivi des concentrations en toxines au moins bi-mensuel. En cas de doute sur les rsultats du suivi analytique et en fonction des conditions environnementales, des mesures plus contraignantes concernant la restriction de pratique des activits nautiques peuvent tre prises par les autorits locales ou les responsables et ducateurs sportifs qui travaillent sur les zones dactivits nautiques. Linformation du public (extrait de lavis du 6 mai 2003).

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Le CSHPF propose que dans le message dinformation au public et aux usagers des sites de baignade prsentant des phnomnes de prolifrations algales soient indiqus : les effets possibles lors dun contact avec de leau contamine par des cyanotoxines (irritations et rougeurs de la peau, du nez, de la gorge, des yeux, des muqueuses) et lors de son ingestion: maux de ventre, diarrhes, nauses, vomissements ; les rsultats de la surveillance ; des conseils aux usagers en rappelant dviter absolument de se trouver en contact avec des zones de dpts abondants et dirisations de couleur verte et de mousses.

1.3. Synthse
Un nombre restreint de pays disposent aujourdhui de recommandations pour la surveillance sanitaire de la contamination des eaux de zones de baignade et dactivits aquatiques et sa gestion en cas de prolifration de cyanobactries ou de contamination par des cyanotoxines. Les recommandations existantes sont gnralement bases sur celles de lOMS, des spcificits sont toutefois observes dans les plans de gestion de lAustralie, de lAllemagne et des Pays-Bas. Toutes les recommandations saccordent sur le fait que la prsence dcume est un indicateur dun risque sanitaire lev. Ainsi, lobservation visuelle rgulire des cours et plans deau constitue la base de la surveillance. En revanche, labsence dcume ne permet pas dexclure un risque compte tenu du fait que certaines cyanobactries comme Planktothrix agardhii produisent de grandes quantits de toxines sans former dcume. Globalement, la plupart des institutions considrent que : la prvention des risques lis aux cyanobactries pour les baignades, commence par une connaissance de la vulnrabilit dun site en utilisant les critres tels que lhistorique des prolifrations, les saisons risque, les types dactivit pratiqus, le niveau deutrophisation de leau ou encore la concentration en phosphore ; le risque le plus important est associ lingestion deau lors de la baignade et la pratique dactivits aquatiques, particulirement en prsence dcume. Au-del de la surveillance visuelle, des valeurs guides pour des paramtres de surveillance et de contrle sanitaire ont t drives partir de concentrations limites dexposition permettant de garantir labsence deffets nocifs. Ces concentrations limites dexposition ont t calcules daprs des scnarios thoriques prenant en compte des valeurs pour le volume ingr, la masse corporelle et les VTR qui varient selon les institutions. Ces divergences conduisent des valeurs guides diffrentes. Les valeurs guides labores pour le paramtre toxine concernent dans la plupart des cas la MC LR, compte tenu de leur toxicit, de leur abondance dans les cosystmes et des connaissances toxicologiques dont on dispose. En ce qui concerne les neurotoxines, seul lINSPQ a dvelopp une valeur dexposition maximale pour lanatoxine-a. Les paramtres de surveillance et de contrle sanitaire sont gnralement: le nombre de cellules par mL, la concentration en microcystines (g.L-1), la concentration en chlorophylle a (g.L-1). Les valeurs guides et les principales recommandations, retenues pour diffrents pays, sont rsumes dans le tableau VI-III. La gestion des cas de dpassement des valeurs seuils ou guides se fait en fonction de lamplitude du dpassement du seuil considr faible risque. Linterdiction daccs au plan deau tous les usages ou la baignade varie selon les institutions. En France, il apparat ncessaire de remdier labsence de surveillance et de contrle sanitaire des zones de baignades et des loisirs aquatiques faible frquentation par un public pratiqueant la baignade spontane et labsence de recommandation prcise sur la leve de linterdiction de la baignade et des activits aquatiques.

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Points retenir Moins de 10 pays dans le monde ont labor des recommandations de surveillance sanitaire et de gestion de la prolifration de cyanobactries dans les cours et plans deau amnags pour la baignade ou la pratique des activits aquatiques. La plupart de ces recommandations sont proches de celles de lOMS. Lhistorique et les caractristiques des sites (vulnrabilit la prolifration, antcdents de prolifrations et de problmes sanitaires, espces de cyanobactries prsentes) sont les lments cls de la gestion du risque prconiss dans la plupart des recommandations. Les paramtres de surveillance sanitaire en cas de prolifration algale sont gnralement la surveillance visuelle, le dnombrement de cyanobactries (avec ou sans identification despce), et la concentration en microcystines. La surveillance visuelle des sites est recommande afin de dtecter la prsence ventuelle dcume ou de zones daccumulation qui constituent le niveau plus haut risque sanitaire. Lorsque la gestion de phnomnes de prolifration de cyanobactries se base sur les concentrations cellulaires, les valeurs paramtriques pour un risque faible varient selon les pays entre 500 et < 20 000 cellules.mL-1. Pour un risque lev avec interdiction de la baignade celles-ci varient de > 15 000 > 100 000 cellules.mL-1. Lorsque la gestion de phnomnes de prolifration de cyanobactries est base sur la concentration en quivalent microcystine-LR , des valeurs comprises entre > 16 et 100 g.L-1 sont prconises pour viter ou interdire la baignade. Une seule institution a driv une VTR pour lanatoxine-a et propose un seuil dexposition maximale de 40 g.L-1 pour les eaux de baignade. En France, la surveillance et le contrle sanitaire ne concernent que les sites de baignade et autres activits aquatiques rcratives dits amnags , correspondant des sites frquentation rpte et simultane par au moins 10 personnes. La surveillance est effectue sous la responsabilit de la personne publique ou prive responsable de la gestion de la zone de baignade ou dactivit rcrative. La surveillance sanitaire est organise sur la base de quatre aspects : vulnrabilit des eaux (site faible risque ou risque), comptage cellulaire et dosage des microcystines en quivalent microcystine-LR et prsence ou non dcume.

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Tableau VI-III : Valeurs guides et principales recommandations retenues pour diffrents pays (MC-LR : Microcystine LR ; MCs somme des microcystines ).
OMS NHMRC* INSPQ < 20 000 20000 Allemagne Australie Hunter et Tasmanie 500 5000 Microcystis 500 2000 aeruginosa Canada Finlande France Pays Bas

Niveau

Actions

Paramtres

Nombre de cyanobactries (cellules.mL-1) 2 4 ( MC-LR) si cyanobactries toxinognes < 10 Transparence rduite 5000 40000 2000 15000 100000 Microcystis aeruginosa > 16 (MC- LR ou 10 < 100 8 40 g.L-1 anatoxine a < 25 (MC-LR) 20 000 10 000 10 g de chlorophylle a.L-1 100 000

MC-LR ou MCs Surveillance rgulire situation (g.L-1) normale

< 10 g.L-1

Indicateur

Renforcement de la surveillance 20 100 MC-LR selon souche de Microcystis aeruginosa 40 MC-LR si Plantohtrix agardhii 50 g de chlorophille a.L-1 cume (plusieurs centaines plusieurs millions de cyanobactries) > 100 > 40000 Microcystis aeruginosa > 15000 cellules toxinognes

Nombre de cyanobactries (cellules.mL-1)

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et

MC-LR ou MCs (g.L-1)

II

interdiction de la baignade avec maintien des activits nautiques

Indicateur

Eau colore et tches dcume > 100 000 (avec maintien limit des activits nautiques) > 25 (MC-LR) (avec interdiction des activits nautiques) Nappes dcume Prsence dcume

10 -20

Nombre de cyanobactries (cellules.mL-1)

III

Interdiction de la baignade

MC-LR ou MCs (g.L-1)

> 20 Prsence dcume

Indicateur

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2. Eau dalimentation et autres aliments

2.1. Recommandations de lOMS
2.1.1. Valeur guide pour la qualit de leau dalimentation
Les toxines de cyanobactries ont t considres ds 1998 dans la liste des constituants organiques valus des Directives de qualit pour leau de boisson de lOMS (OMS 1998). Les donnes toxicologiques disponibles ont t juges insuffisantes pour fixer des valeurs guides pour les toxines de cyanobactries, lexception de la microcystine-LR (MC-LR). Pour fixer la valeur guide pour ce variant de microcystine, lOMS a retenu une tude de 13 semaines chez la souris par voie orale. La DSENO a t value sur la base des troubles hpatiques observs 40 g.kg-1.j-1. Lapplication dun facteur dincertitude de 1000 (10 pour les variations intraspcifiques, 10 pour les variations interspcifiques, 10 pour les limites de la base de donnes, en particulier le manque de donnes sur la toxicit chronique et la cancrognicit) conduit une DJT de 0,04 g.kg-1.j-1. Leau de boisson est considre comme la principale source dintoxication par les toxines de cyanobactries, sa contribution relative lexposition a t estime 80 %. Pour un individu de 60 kg, la valeur guide pour leau de boisson, pour une consommation pendant la vie entire, est donc fixe pour la microcystine-LR totale (libre et intracellulaire) 1 g MC LR.L-1. Cette valeur guide, qui a t confirme par une tude de 44 jours par voie orale chez le porc, demeure provisoire, dans lattente de donnes complmentaires sur la toxicit des toxines de cyanobactries et notamment sur la toxicit chronique de la microcystine-LR. Dans son ouvrage de 1999 consacr aux cyanobactries toxiques, lOMS rappelle la mthode de fixation de cette valeur guide (Chorus & Bartram 1999). Pour la microcystine-LR, il est indiqu que le dpassement de la valeur guide de 1 g.L-1, dfinie pour une exposition vie entire, peut tre tolr pour de brves priodes si des mesures sont mise en ?uvre court terme pour interrompre lexposition par des traitements prventifs ou curatifs. Il peut savrer appropri, dans ces cas, dinformer la population en particulier les sous-populations sensibles : patients avec des affections hpatiques, parents des nourrissons et des enfants en bas-ge, centre de dialyse ou patients dialyss domicile. Les auteurs rappellent lexistence de plus de 60 variants de la microcystine-LR et la possibilit pour que cette dernire toxine ne soit pas prsente parmi les microcystines dtectes, ce qui entrane des difficults dinterprtation des rsultats au regard de la valeur guide. Les rsultats concernant des variants pour lesquels il nexiste pas dtalons peuvent tre exprims en concentration quivalente de microcystine-LR. La toxicit de la plupart des variants tant infrieure celle de la microcystine-LR voire nulle, cette concentration quivalente ne correspond pas un quivalent toxicit. Cette approche conduit une estimation dans le pire des cas de la concentration en microcystines toxiques. Les concentrations rsultant dessais sur souris peuvent tre exprimes en quivalents toxicit par rapport la microcystine-LR si lessai a t calibr avec cet talon. Il nest pas certain que les rsultats dessai sur protines phosphatases puissent bnficier du mme traitement. En effet la capacit des diffrents variants entrer dans les cellules et ragir sur ces enzymes est variable et influe sur la toxicit. Dans la troisime dition des Guidelines for drinking-water quality, lOMS note lactivit de promotion tumorale de cette toxine dmontre par diffrentes publications (OMS 2004). La valeur guide provisoire est maintenue la suite dune valuation de risque conduite en 2003. Plutt que de raliser un suivi purement analytique de la toxine, lOMS prconise de suivre dans les ressources laugmentation de la densit cellulaire des cyanobactries ou la capacit gnrer une prolifration. Dans ces situations, une vigilance accrue est recommande.

2.1 2. Autres recommandations de lOMS (Chorus & Bartram 1999) 2.1.2.1. Mesures prventives
Selon lOMS, on peut considrer comme fiable un systme de production et de distribution deau dont la ressource ne contient pas de cyanotoxines ou qui comprend une chane de traitement capable aussi bien dextraire les cellules sans les rompre que dliminer les cyanotoxines. LOMS estime que bien souvent il est possible de matriser efficacement ce danger sans faire appel des techniques de traitement pousses, par la gestion de la ressource et le retrait des cellules intactes. Cette organisation souligne que la plupart des pisodes dintoxication humaine par leau dalimentation ont eu lieu suite lutilisation de sulfate de cuivre sur une prolifration tablie de cyanobactries.

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Parmi les pratiques scuritaires, lOMS considre comme trs efficace le recours une ressource de substitution. Elle incite lenregistrement de la tendance de la ressource subir des prolifrations et la mise en place de schmas combinant la surveillance de la dynamique de ces organismes et des actions de gestion appropries en fonction de la vulnrabilit du systme de production deau dalimentation vis--vis de ces vnements.

2.1.2.2. valuation de la vulnrabilit des systmes de production-distribution

LOMS propose un arbre de dcision pour valuer le niveau de protection dun systme de production-distribution par rapport au risque reprsent par les cyanotoxines. Cet arbre de dcision fait appel diffrents critres pour dfinir 7 niveaux de protection : prsence dune tape dozonation ou de filtration sur charbon actif, garantie des performances de la filire en cas de charge organique importante ; existence dun systme de surveillance de la prsence des cyanobactries ; capacit de la filire liminer les cellules de leau ; prsence de conditions conduisant la rupture des cellules avant que leau ne soit capte ; prsence de genres potentiellement producteurs de saxitoxines ou danatoxines ; prsence dune tape de chloration de leau. Le rapprochement du niveau de protection du systme de production et de distribution deau ainsi dtermin et du niveau de biomasse prsente ou pouvant tre attendue (tableau VI.IV) permet dapprcier la vulnrabilit du systme. Les seuils de biomasse dcrits ci-dessous sont ceux utiliss par lOMS pour dfinir les niveaux dalerte 1 et 2 pour leau dalimentation.,2 mm3 biovolume.L-1,

Tableau VI-IV: Description des niveaux de biomasse (Chorus & Bartram 1999).
Niveau de biomasse Faible (long terme) Description Biomasse de cyanobactries < 2 000 cellules.mL-1 ou < 0,2 mm3 biovolume.L-1 , ou <1 g chlorophylle a.L-1 avec des donnes compiles sur une dure dau moins 2 mois. Mme expression des seuils mais donnes obtenues sur une priode infrieure 2 mois. Ceci couvre le recours aux rsultats dune seule analyse et prend en compte le risque li la persistance de toxines aprs la disparition dune prolifration. Biomasse de cyanobactries comprise entre : 2 000 et 100 000 cellules.mL-1 , ou 0,2 et 10 mm3 biovolume.L-1 , ou 1 et 50 g chlorophylle a.L-1 Biomasse de cyanobactries : > 100 000 cellules.mL-1 , ou > 10 mm3 biovolume.L-1 , ou > 50 g chlorophylle a.L-1

Faible (court terme)

Modr-lev Niveau dalerte 1

Trs lev Niveau dalerte 2

2.1.2.3. Mesures de gestion et seuils dalerte

LOMS incite les gestionnaires se doter dun cadre structur de gestion des alertes. Elle prsente un cadre ouvert, avec trois niveaux dalerte. Des actions gradues associer chaque seuil dalerte sont proposes, mais elles doivent tre adaptes chaque ressource et aux possibilits analytiques et de traitement de leau. Seuil de vigilance Ce niveau correspond, par exemple, la dtection dans 1 mL deau brute dune colonie ou de quelques filaments de cyanobactries. Quand le seuil de vigilance est atteint, il est conseill daugmenter la frquence dchantillonnage, qui doit atteindre une frquence au moins hebdomadaire, afin quun changement rapide de la biomasse de cyanobactries puisse tre observ. Seuil 1 dalerte (2 000 cellules par mL) Le seuil 1 dalerte dcoule de la valeur guide propose pour la microcystine-LR dans leau dalimentation et de la plus forte concentration de microcystine par cellule enregistre. Ce seuil indique la possibilit de dpasser la valeur

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guide de lOMS et ncessite dvaluer la possibilit de capter une eau moins charge ou lefficacit de la filire de traitement liminer les toxines. Un tel niveau de biomasse devrait entraner un change avec les autorits sanitaires, la poursuite de la surveillance des eaux brutes avec une frquence au moins hebdomadaire et une valuation de la qualit de leau distribue par des analyses de toxines. Si les cyanobactries prsentes sont susceptibles de produire dautres toxines que la microcystine cette ventualit doit tre investigue. Si les analyses de toxines, quelles quelles soient, restent ngatives, mais que la biomasse reste suprieure au niveau dalerte 1, la surveillance des cyanobactries dans leau brute doit tre maintenue. Seuil 2 dalerte (100 000 cellules par mL) Ce seuil dcrit, pour lOMS, une importante prolifration de cyanobactries, tablie et toxique. Ces conditions tmoignent dun risque accru deffets nfastes sur la sant court terme si aucun traitement nest en place ou si la filire de traitement nest pas assez efficace. Lefficacit de la filire de traitement et lvaluation continue de ses performances est dimportance primordiale dans ces conditions. Lapplication dalgicides dans un tel cas peut augmenter les difficults de traitement en gnrant des toxines dissoutes, plus susceptibles de percer travers la filire que les cellules. En labsence dtape de traitement comprenant du charbon activ ou une autre technologie avance, il convient denvisager la mise en place dun plan durgence pour garantir la distribution de leau dalimentation. Leau reste cependant utilisable pour les autres usages que sont la toilette, le lavage, lvacuation sanitaire, etc. Une surveillance de la prolifration simpose pour dterminer le retour une situation de fonctionnement normal. LOMS prsente graphiquement les niveaux de concentrations cellulaires prdits, partir dtudes de terrain, pour des populations de cyanobactries ayant des taux de croissance respectifs de 0,35 par jour ou 0,1 par jour (figure VI-6). Avec un taux de croissance de 0,35 par jour, il faut environ 12 jours une population pour passer du seuil 1 dalerte au seuil 2. LOMS signale que, sous des climats chauds, des populations naturelles peuvent doubler en moins de 2 jours.

Figure VI-6: Croissance potentielle dune population de cyanobactries partir dune concentration initiale de 100 ou 1 000 cellules des taux de croissance () de 0,1 ou 0,3.j-1 (OMS 1999).

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2.1.2.4. valuation de la vulnrabilit de la ressource aux phnomnes de prolifrations de cyanobactries

LOMS conseille didentifier les ressources superficielles les plus sensibles aux prolifrations de cyanobactries afin de cibler la surveillance. Les informations permettant de caractriser la vulnrabilit sont de 5 ordres : historiques, physiques, hydrauliques, chimiques et biologiques. Considrant ces 5 facteurs de risques, une ressource peut tre considre comme risque si : des informations historiques ou des connaissances locales font tat de prcdents pisodes de prolifrations ; la temprature de surface dpasse 18C et /ou la ressource est stratifie ; le temps de sjour dpasse 5 10 jours ; les concentrations annuelles moyennes en phosphore, voire en azote, permettent le dveloppement des cyanobactries prsentes sur le site, selon leur type dcostratgie (Chorus & Mur 1999) ; des informations issues de suivis biologiques font tat du niveau de prsence, des priodes dapparition et de la persistance des cyanobactries dans la ressource. LOMS prne galement une gestion de ces problmes par identification et actions sur les points critiques pour la matrise de la qualit finale de leau dalimentation. Ceci intgre aussi bien les actions sur le bassin versant que ladaptation de la filire de traitement.

2.2. Dclinaisons nationales des recommandations de lOMS pour leau dalimentation

2.2.1. Rglementations nationales relatives aux cyanotoxines dans les eaux dalimentation 2.2.1.1. Brsil
Suite au grave accident sanitaire li aux cyanotoxines de Caruaru en 1996 (chapitre IV, 2.1.2), le ministre de la sant brsilien a entam en 2000 une rvision de la rglementation relative aux eaux dalimentation. Au terme dune consultation de plusieurs mois, le ministre de la sant brsilien a publi une nouvelle rglementation relative aux cyanobactries et aux cyanotoxines le 29 dcembre 2001, intitule Portaria MS n 1.469/2000. Cette lgislation devait entrer en vigueur 12 mois aprs sa publication. Elle a t modifie en 2004 par la Portaria MS n 518/2004. Cette rglementation fixe une limite de qualit dans leau dalimentation pour la microcystine, ainsi que des rgles tablissant un programme de surveillance des cyanobactries et des cyanotoxines. Il est galement recommand de rechercher les autres cyanotoxines et de ne pas dpasser certaines valeurs dans leau dalimentation pour la cylindrospermopsine et les saxitoxines (tableau VI-V).

Tableau VI-V : Limites de qualit pour les eaux dalimentation au Brsil.

Microcystines* Saxitoxines Cylindrospermopsine 1 g quivalent MC-LR.L-1 3 g.L-1 15 g.L-1 Limite de qualit rglementaire Limite de qualit recommande

* Sur une priode de 1 an, une concentration de 10 g.L-1 peut tre accepte dans trois chantillons, conscutifs ou non.

Programme de surveillance des cyanobactries et des cyanotoxines Ce programme prvoit des actions et une adaptation de la surveillance en fonction de labondance des cyanobactries au point de captage dans la ressource. - Biomasse de cyanobactries < 10 000 cellules.mL-1 (ou 1 mm3 de biovolume.L-1) Surveillance rgulire par examen microscopique de leau brute avec une frquence dchantillonnage mensuelle. - Biomasse de cyanobactries comprise entre 10 000 et 20 000 cellules.mL-1 (ou entre 1 et 2 mm3 de biovolume.L-1). Surveillance rgulire par examen microscopique de leau brute avec une frquence dchantillonnage hebdomadaire. - Biomasse de cyanobactries 20 000 cellules.mL-1 (ou 2 mm3 de biovolume.L-1). Surveillance de la densit cellulaire avec une frquence hebdomadaire, Interdiction dutiliser des traitements algicides sur la ressource ou tout autre produit chimique susceptible dentraner la lyse des cellules de cyanobactries pendant le processus de production des eaux dalimentation.

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Ralisation de test de toxicit (tests sur souris) sur leau brute. Si le bioessai montre des effets toxiques, lanalyse des cyanotoxines dans leau dalimentation produite sera ncessaire. Si la concentration en toxines est assez leve pour menacer la sant publique, les autorits sanitaires doivent tre informes et leau ne doit pas tre considre comme conforme pour la distribution pour la consommation. Des actions prioritaires pour permettre la mise en place de cette rglementation ont dj t identifies. Elles comprennent : le dveloppement de matriels didactiques sur les cyanobactries, leurs toxines et les problmatiques associes, sous forme de livres, de guides destins aux autorits sanitaires des tats et des municipalits et aux personnels des units de production deaux dalimentation ; la promotion des formations sur lanalyse des cyanotoxines ; la constitution dun rseau national de laboratoires capables de raliser lanalyse des cyanotoxines selon des mthodes normalises.

2.2.1.2. France
Le paramtre microcystine-LR a t introduit dans le Code de sant publique (CSP) au titre de larticle R.1321-2 lors de la codification du dcret 2001/1220 pris pour la transposition de la Directive 98/83/CE du Conseil du 3 novembre 1998 relative la qualit des eaux destines la consommation humaine. Ainsi la limite de qualit aux points de conformit, base sur les recommandations de lOMS, inscrite lannexe 13.1 du CSP a t fixe 1 g.L-1. Il est prcis en observation pour ce paramtre rechercher en cas de prolifration algale dans les eaux brutes . Ceci entrane des difficults dapplication lies la dfinition dune prolifration algale . Dans son avis du 3 avril 2006, lAfssa a estim que, dans le cadre de la rvision des limites de qualit des eaux brutes pour la production deau destine la consommation humaine, lensemble des microcystines devaient tre analyses.

2.2.1.3. Espagne
La transcription de la directive 98/83/CE a donn lieu au dcret 140/2003 du 7 fvrier 2003 qui introduit une limite de qualit pour le paramtre microcystine . La valeur retenue est celle de lOMS, 1 g.L-1. Au printemps 2003, aucune mthode danalyse ntait prcise pour le contrle de cette exigence rglementaire. Cette analyse est requise seulement quand il existe une suspicion deutrophisation de leau faisant lobjet du captage. Elle a lieu la sortie de linstallation de production deau dalimentation ou du rservoir de tte.

2.2.1.4. Rpublique Tchque

La rpublique tchque a intgr la valeur guide de lOMS dans sa rglementation par lordonnance gouvernementale n 252/2004. Ce texte implique la surveillance des microcystines dans les eaux au niveau du robinet, la limite de qualit tant fixe 1 g.L-1 de microcystine-LR. Il pourrait voluer ds 2005, potentiellement vers une quantification de la biomasse de cyanobactries dans les eaux brutes, afin de cibler les analyses de microcystine (Marslek et al. 2005).

2.2.2. Autres modalits de gestion des risques lis aux cyanobactries

De nombreux pays sont sensibiliss la problmatique des cyanobactries. La plupart des tats affirment suivre les recommandations de lOMS, mais en pratique, diffrentes adaptations sont dveloppes.

2.2.2.1. Afrique du Sud

La valeur guide propose par lOMS pour la microcystine-LR a t incorpore dans les lignes directrices nationales pour la qualit de leau dalimentation. La plage de valeurs juges souhaitable stend de 0 0,8 g.L-1, les concentrations suprieures 1 g.L-1 tant considres comme posant un risque aigu dhpatotoxicose (Harding & Kempster 2005).

2.2.2.2. Allemagne
Lordonnance nationale pour leau dalimentation couvre la problmatique des cyanotoxines seulement de faon implicite en stipulant que leau dalimentation ne doit contenir aucune substance une concentration qui puisse se rvler dommageable pour la sant humaine. La valeur guide de lOMS pour la microcystine-LR sert de support lapprciation dune telle concentration. La plupart des producteurs deau dalimentation utilisant des eaux de surface ont mis en place depuis longtemps des programme de surveillance du phytoplancton afin dadapter les traitements la qualit de leau brute. Depuis que la sensibilisation aux cyanotoxines sest largement rpandue,

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nombre dinstallations ont pris lhabitude de complter ces programmes par des analyses de cyanotoxines lorsque les cyanobactries sont prsentes dans leau brute. Les zones de protection pour les ressources destines la production deau dalimentation sont mises en place de faon efficace. En consquence, peu de ces ressources sont fortement eutrophises et connaissent des prolifrations majeures de cyanobactries. Les installations correspondantes ces derniers sites sont gnralement quipes avec des traitements pousss tels que le charbon activ en grain et lozonation, compte tenu des autres dfis quelles ont relever, comme llimination de hauts niveaux de demande chimique en oxygne et/ou de pesticides. Des rglementations techniques dtailles prcisent comment concevoir et oprer de tels filires de traitement efficacement (Chorus 2005).

2.2.2.3. Australie
LAustralie ne dispose pas dune rglementation nationale en matire de cyanobactries mais elle a publi des lignes directrices qui incluent ds 2000 les toxines de cyanobactries. Les informations sanitaires pertinentes pour llaboration de valeurs guides sont rassembles dans des fiches techniques, rgulirement actualises (NHMRC & NRMMC 2004). Ces recommandations sont mises en ?uvre par les autorits sanitaires de chaque tat. Les fiches techniques reprennent les 4 familles de cyanotoxines identifies dans des efflorescences sur le territoires australien, soit : la cylindrospermopsine ; les microcystines ; la nodularine ; les saxitoxines. En raison dun manque de donnes appropries, seule une valeur guide est dfinie pour les microcystines totales, elle est exprime en quivalents toxicit microcystine-LR partir de mthodes base sur la CLHP : 1,3 g q.-MC-LR.L-1. Il est entendu que lexpression du rsultat par CLHP en quivalents MC-LR tend surestimer lgrement la toxicit relle de lchantillon si les autres variants analyss prsentent un seuil de toxicit plus faible que celui de la MC-LR. La valeur de 1,3 g.L-1 est drive de la mme DSEIO que celle utilise par lOMS avec le mme facteur de scurit de 1000, mais en considrant un individu de 70 kg avec une consommation de 2 L deau par jour et en attribuant leau une contribution de 90 % de la DJT. titre indicatif, les lignes directrices signalent quune telle concentration correspond pour une population de Microcystis aeruginosa trs toxique une densit cellulaire de lordre de 6 500 cellules par mL. Pour la cylindrospermopsine, aucune valeur guide ne peut tre labore en raison de linsuffisance des donnes sur la toxicit. Il est donc recommand dinformer les autorits en cas de prolifration des espces C. raciborskii et A. ovalipsorum. Pour la nodularine, bien quaucune valeur guide ne puisse tre labore en raison de linsuffisance des donnes sur la toxicit, la concentration de 1,3 g.L-1 de nodularine, quivalente celle des microcystines, est retenue pour dfinir une concentration dalerte de 40 000 cellules de Nodularia spumigena par millilitre. Lidentification dune efflorescence de cette espce doit entraner la notification des autorits sanitaires. La mme approche est applique aux saxitoxines. Les informations disponibles permettent de proposer un niveau dalerte vis--vis de la toxicit aigu des saxitoxines de 3 g q.-STX.L-1, correspondant une densit cellulaire de 20 000 cellules par mL. Lidentification de prolifrations Anabaena circinalis doit entraner la notification immdiate des autorits sanitaires. Les autorits sanitaires de chaque tat ont accs aux donnes des distributeurs deau dalimentation.

2.2.2.4. Canada
Sant Canada (2006) a fix ds 2002 une concentration maximale admissible pour le paramtre Toxines de cyanobactries sous la forme de microcystine-LR 1,5 g de microcystine-LR.L-1. Cette concentration maximale admissible repose sur la dose sans effets nfastes observs (DSENO) de 0,04 g kg -1 par voie orale (source identique celle de lOMS) laquelle est applique un facteur de scurit de 1000. La part relative attribue lexposition par leau est de 0,8. Le poids corporel moyen retenu pour le calcul est de 70 kg et la consommation quotidienne moyenne de 1,5 L-1.j-1. Sant Canada estime que cette recommandation, qui ne concerne que la microcystine-LR, protge la sant humaine contre lexposition dautres microcystines qui peuvent tre prsentes dans leau (Groupe scientifique sur leau 2005a).

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Ce Groupe scientifique sur leau de lInstitut national de sant publique du Qubec (INSPQ) considre appropri dutiliser la concentration maximale admissible labore par Sant Canada pour la microcystine-LR, en labsence de norme sur les cyanotoxines dans le Rglement sur la qualit de leau potable du Qubec. LINSPQ note cependant que dautres microcystines peuvent tre produites et recommande provisoirement de calculer une concentration en quivalent toxicit de microcystine-LR partir des lments apports par Wolf & Frank (2002). Un facteur de 1,0 (gal celui de la MC LR) est accord aux variants -LA, -YR, et -YM et un facteur de 0,1 est accord au variant MC RR. Par ailleurs le groupe scientifique sur leau propose une concentration balise pour lanatoxine-a de 3,7 g.L-1 dans leau dalimentation. Cette concentration drive de la DSENO de 98 g.kg-1 tablie chez la souris par Fawell et al. (1999b), avec un facteur dincertitude de 1000, un poids moyen de 70 kg, une consommation de 1,5 L et une proportion de lexposition attribuable leau de 0,8.

2.2.2.5. tats-Unis dAmrique

Il nexiste pas actuellement de rglementation fdrale, ni mme de recommandation nationale concernant cette problmatique. Cependant les toxines de cyanobactries sont inscrites depuis 1998 sur la Drinking Water Contaminant Candidate List (CCL) rvise tous les 5 ans par le Safe Water Act (USEPA 1998). Cette liste regroupe les contaminants encore non rglements mais susceptibles de le devenir. Ils sont rpartis entre trois listes : la liste 1 correspond aux contaminants dont la prsence dans leau dalimentation est connue. Linscription sur cette liste a pour effet dobtenir des donnes lchelle de la nation sur ces contaminants afin dvaluer le besoin de les rglementer et les limites de qualit envisager en cas de rglementation ; la liste 2 identifie les contaminants pour lesquels des mthodes analytiques viennent dtre dveloppes et dont le criblage est requis afin dvaluer leur prsence dans leau dalimentation. Cest ltape pralable linscription en liste 1 ; la liste 3 comprend des contaminants rcemment identifis comme pouvant poser un problme pour leau dalimentation mais pour lesquels le dveloppement des mthodes analytiques nest pas achev. Lobjectif est dvaluer les performances de ces mthodes et dentreprendre un pr-criblage sur un nombre restreint de systme de production-distribution, en vue dune ventuelle inclusion en liste 2. Le paramtre cyanobactries (algues bleues), autres algues deau douce, et leurs toxines (USEPA 2004) est inscrit dans cette liste. La priorit est donne au dveloppement de mthodes danalyse adaptes avant tout recueil de donnes doccurrence.

2.2.2.6. Finlande
La Finlande prconise, pour la surveillance des eaux brutes destine la consommation humaine et des eaux traites, lexamen microscopique des cyanobactries. Si des cellules de cyanobactries sont dtectes dans leau traite, il est recommand de rechercher les microcystines par des mthodes de dtection produisant un rsultat le plus rapidement possible. En fonction des espces observes, dautres toxines peuvent tre recherches. En particulier, en prsence dAnabaena spp. ou de Planktothrix spp., lintrt de rechercher des neurotoxines devrait tre envisag. La surveillance par microscopie est prfre lobservation visuelle du fait que certaines cyanobactries se situent en profondeur dans les eaux brutes et ne sont pas toujours visibles en surface. Elle est ralisable en routine au niveau des installations de traitement, mme si une identification spcifique ncessite une expertise plus importante (Rapala et al. 2005a).

2.2.2.7. Nouvelle-Zlande
La rvision des normes pour leau dalimentation de Nouvelle-Zlande est entre en vigueur le 1er janvier 2001 (Ministre de la sant de Nouvelle-Zlande 2000). Ce document spcifie des valeurs maximales admissibles pour diffrents paramtres, dont plusieurs cyanotoxines. Seuls les paramtres reprsentant le plus grand risque pour la sant et inscrits sur les listes de priorit 1 et 2 ncessitent un suivi analytique. Le suivi des paramtres inscrits sur les listes de priorit 3 et 4 est la discrtion du responsable de la distribution, sauf exigence particulire de lautorit sanitaire. Les toxines de cyanobactries pour lesquelles des valeurs maximales admissibles sont dfinies sont regroupes dans une table correspondant la liste de priorit 3. Cette liste rassemble les paramtres considrs comme ntant pas connus pour dpasser 50% de la valeur maximale admissible. Cependant ces mmes paramtres peuvent tre inscrits en liste 2 pour certains systmes de production et de distribution. Dans la rvision de ces normes en cours de validation, une nouvelle section spcifique aux cyanobactries est dveloppe et les valeurs maximales admissibles pour plusieurs cyanotoxines ont t rvises. Quand les cyanotoxines, inscrites sur la liste de priorit 3, sont prsentes des concentrations dpassant 50 % de la valeur maximale admissible dans un systme de distribution deau qui dessert plus de 500 personnes, elles deviennent des paramtres de priorit 2 et bnficient dun suivi analytique systmatique. Ce suivi, ralis selon les mthodes

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prconises par les Lignes directrices dites par le Ministre de la sant, comprend le dnombrement cellulaire des chantillons prlevs lendroit o les populations sont vraisemblablement les plus importantes et deux analyses de toxines par semaine en sortie dinstallation de traitement et au robinet dans la zone de distribution. La mthode de rfrence propose pour toutes les cyanotoxines est la CG-SM aprs extraction liquide/liquide. Des mthodes alternatives et des points de prlvement sont associs chacune des toxines. Ces paramtres redeviennent de priorit 3 si trois chantillons successifs prsentent des concentrations infrieures 50 % des valeurs maximales admissibles. En cas de dpassement de ces valeurs maximales admissibles, il est requis de fournir aux consommateurs de leau dune ressource alternative jusque 4 semaines aprs le retour des concentrations des niveaux infrieurs 50 % des valeurs maximales admissibles (Ministre de la sant de Nouvelle-Zlande 2005). La matrise des risques lis aux cyanobactries est aborde dans les Plans de gestion des risques pour la sant publique publis par le Ministre de la sant de Nouvelle-Zlande.

2.2.2.8. Portugal
La Direction Gnrale de la Sant a lanc depuis quelques annes, avec lInstitut National de la Sant et lUniversit de Porto, un programme de surveillance, de gestion des risques et de recherche cibl sur les ressources superficielles et sur les eaux dalimentation et de baignade. Les mesures de surveillance et de gestion sont bases sur les travaux de lOMS. Cependant la limite de qualit pour les eaux dalimentation prend en compte les diffrentes variantes de microcystines, elle est fixe : 1 g dquivalent MC-LR.L-1. En relation avec les autorits sanitaires locales ainsi que les gestionnaires de la production deau dalimentation, le programme de surveillance de la qualit gnrale des eaux brutes et des eaux dalimentation qui font appel des ressources superficielles prvoit un contrle mensuel, qui peut devenir bi-mensuel voire hebdomadaire selon les rsultats, sur la base du dnombrement des cyanobactries dans un chantillon reprsentatif de la colonne deau proche du captage. En cas de dpassement des seuils prconiss dans les recommandations de lOMS, le dosage des toxines est ralis selon les mthodes prsentes dans le tableau VI-VI (F. Araujo, communication personnelle au groupe de travail le 1er dcembre 2003).

Tableau VI-VI : Mthodes de dtection des cyanotoxines prconises au Portugal.

Toxines recherches Microcystines Saxitoxines Cylindrospermopsine Anatoxine-a Mthodes Bioessai et mthodes immunologiques Bioessai et CLHP CLHP

2.2.2.9. Royaume-Uni
Le Royaume-Uni a produit une rglementation pour les eaux brutes et des recommandations pour les eaux dalimentation aprs traitement. Elles sappuient sur les recommandations OMS et des lignes directrices dveloppes nationalement depuis une dizaine dannes. La mise en uvre est assure par lEnvironmental Agency (EA) pour lAngleterre et le Pays de Galles, par Scottish Environmental Protection Agency (SEPA) pour lcosse. Les limites de qualit des eaux brutes utilises pour structurer la gestion sont celles de lOMS. Elles reposent sur le dosage de la chlorophylle a et lexamen microscopique (valuation de labondance cellulaire et identification des espces). Si la teneur en chlorophylle a dpasse 10 g.L-1 et que les cyanobactries sont dominantes, le dosage des toxines est ralis. Pour les eaux dalimentation les agences environnementales recommandent la limite de qualit de 1 g dquivalent MC-LR.L-1. Sur le terrain, la surveillance repose sur un double systme dalerte : la surveillance proactive est ralise par les autorits sanitaires sur les sites historiquement connus pour leurs prolifrations de cyanobactries. La frquence de ralisation des analyses est variable pendant lanne, avec une surveillance au moins bimensuelle en t ;

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 la surveillance ractive est dclenche par un signalement manant du public. Un tel signalement par un particulier oblige les agences environnementales raliser des analyses sur le site, quels que soient les usages de leau. Lapproche dveloppe par le Royaume-Uni pour grer cette problmatique de sant publique est de type amont, la rglementation contraignante concernant uniquement les eaux brutes, et ce quel que soit lusage qui en est fait, pour les loisirs, lagriculture ou les eaux destines lalimentation humaine.

2.3. Autres recommandations

2.3.1. Complments alimentaires base dalgues bleues 2.3.1.1. Canada
Sant Canada (Dpartement fdral de la sant du Canada) met en garde la population contre ces produits dans un communiqu Internet. En effet un programme dchantillonnage men par cet organisme a montr la contamination par des microcystines de nombreux produits de ce type autres que ceux ne contenant que de la spiruline. Ce ministre estime que, en attendant la publication de normes de qualit par lAgence canadienne dinspection des aliments, les consommateurs de ces produits base dalgues bleues autres que spiruline devraient limiter leur consommation de courtes priodes et interdire lutilisation par les enfants de tels produits (Sant Canada 1999).

2.3.1.2. tats-Unis dAmrique

Gilroy et al. (2000), ayant constat la ralit de la contamination de ces produits par les microcystines, ont propos une limite de qualit fonde sur la dose journalire tolrable retenue par lOMS pour la microcystineLR, qui est de 0,04 g.kg-1.j-1. Considrant une consommation de 2 g par jour par un adulte de 60 kg et une dose journalire tolrable de 2,4 g.j-1 pour un adulte de 60 kg, les auteurs ont recommand une limite de scurit de 1 g de microcystines par gramme de complment. Cette limite de scurit a t adopte comme norme rglementaire pour les produits base dalgues bleues par lOregon Department of Agriculture le 23 octobre 1997. LOMS estime que cette limite de scurit ne tient pas compte du fait que 80 % de la dose journalire tolrable sont affects lapport par leau dalimentation et quelle pourrait entraner une surexposition des enfants, qui sont une des cibles marketing de ces produits recommands pour lutter contre les dficits de lattention (Chorus & Bartram 1999). Dietrich & Hoeger (2005) estiment, la lumire de donnes nouvelles, que cette limite de scurit nest protectrice ni pour les enfants, ni pour les adultes.

2.3.1.3. France
En France, lAfssa a rendu un avis le 16 mai 2003 relatif lvaluation de lemploi dune micro-algue, Aphanizomenon flos-aquae var. flos-aquae, du Lac Klamath Suprieur (Oregon, tats-Unis) sous forme de complment alimentaire et de poudre saupoudrer sur les aliments. Dans cet avis, lAfssa estime que le produit ne prsente pas toutes les garanties dinnocuit et que sa consommation selon les recommandations du fabricant comporte un risque de dpassement de la DJT dfinie par lOMS pour la microcystine-LR.

2.3.2. Produits de la pche 2.3.2.1. Australie

Ltat de Victoria a dfini un niveau dalerte sanitaire pour les microcystines et la nodularine dans les poissons, les crevettes et les fruits de mer, partir dune DJT pour les adultes modifie pour tenir compte des expositions court terme. Ces niveaux sont de 250 g.kg-1 pour le poisson, de 1 100 g.kg-1 pour les crevettes et de 1 500 g.kg-1 pour les moules. Ces niveaux dalerte sanitaire sont utiliss pour mettre en place des restrictions la pche professionnelle ou de loisir, lors de prolifrations de cyanobactries, notamment en prsence de Nodularia spumigena (Burch & Humpage 2005).

2.3.2.2. Canada
La Direction gnrale de la sant environnementale et de la scurit des consommateurs met en ligne sur le site de Sant Canada une fiche dinformation relative aux cyanobactries et leurs toxines. la question Puis-je consommer du poisson provenant deau contamine ? il est rpondu quil faut faire preuve de prudence lorsquon envisage de consommer du poisson pch dans des plans deau o les fleurs deau sont abondantes ; il faut surtout viter des consommer les viscres du poisson (Sant Canada 2003).

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2.4. Synthse
Les valeurs guides ou les limites de qualit proposes concernent essentiellement leau dalimentation dlivre au consommateur. Ce parti pris permet de saffranchir du niveau de contamination de la ressource comme de lefficacit de la filire de traitement, qui peuvent varier dun site un autre. Certains pays recommandent cependant le suivi dans les eaux brutes de la prsence des cyanobactries afin de cibler les analyses portant sur les toxines avec plus de pertinence au cours de lanne et doptimiser la surveillance du risque moindre cot. La plupart des pays ayant adopt une rglementation ou des recommandations relatives aux risques lis aux toxines de cyanobactries sappuient sur les recommandations de lOMS et notamment sur la dose journalire tolrable de 0,04 g de microcystine-LR.kg-1.j-1. Les variations observes entre pays concernant ce danger rsultent des caractristiques de lindividu type et du choix du scnario dexposition (tableau VI-VII). Nombreux sont les pays qui signalent limportance des autres toxines, bien que des limites de qualit soient rarement proposes, les donnes toxicologiques tant souvent juges insuffisantes (tableau VI-VIII). Des mesures de prcaution en cas didentification des genres potentiellement producteurs de ces toxines sont proposes dans certains pays. Elles relvent essentiellement dune vigilance analytique, voire pidmiologique, accrue et cible la lumire des commmoratifs. Les recommandations relatives aux autres sources alimentaires sont rares, elles concernent les microcystines et la nodularine. Pour les complments alimentaires, la limite de scurit propose par ltat de lOregon fait compltement abstraction des autres sources alimentaires de microcystines, et en particulier de lapport par leau dalimentation.

Tableau VI-VII : Hypothses utilises pour la construction des seuils relatifs aux microcystines.
Dose toxique de rfrence MC-LR OMS Australie Canada 40 g/kg/j 1000 Facteurs de scurit Part attribuable leau 0,8 0,9 0,8 Poids moyen (kg) 60 70 70 Consommation deau (L.j-1) 2 2 1,5 Valeur guide (g.L-1) 0,96 1 1,26 1,3

1,49 1,5

Tableau VI-VIII : Seuils rglementaires ou valeurs maximales admissibles provisoires recommands pour leau dalimentation proposes pour certaines cyanotoxines.
Toxine Anatoxine-a Anatoxine-a(s) Homoanatoxine-a Saxitoxines Concentration 3,7 g.L-1 6 g quivalent STX.L-1 1 g.L-1 2 g.L-1 3 g quivalent 3 g.L-1 3 g.L-1 15 g.L-1 1 g.L-1 1 g MC-LR.L-1 1 g quivalent MC-LR.L-1 1 g MC(s).L-1 1,5 g MC-LR.L-1 1,3 g quivalent-MC-LR.L-1 Nodularine LPS endotoxines 1 g.L-1 3 g.L-1 STX.L-1 tat Province de Qubec (2005) Nouvelle-Zlande (2005) Nouvelle-Zlande (2005) Nouvelle-Zlande (2005) Australie (2004) Brsil (2000, 2004) Nouvelle-Zlande (2005) Brsil (2000, 2004) Nouvelle-Zlande (2005) OMS (1999, 2004), Afrique du sud (1999), France (2001), Rpublique Tchque (2004) Brsil (2000, 2004) 2, Portugal, Royaume-Uni Espagne (2003), Nouvelle-Zlande (2005) Canada (2004) Australie (2004) Nouvelle-Zlande (2005) Nouvelle-Zlande (2005)

Cylindrospermopsine Microcystines

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Points retenir La microcystine-LR est la seule cyanotoxine pour laquelle une valeur toxicologique de rfrence a t fixe par lOMS. Cette VTR a permis dlaborer une valeur guide provisoire pour leau dalimentation. Cette valeur guide est applique par de nombreux pays, de faon rglementaire ou sous forme de recommandation. Certains pays appliquent cette valeur guide exprime en quivalent microcystine-LR lensemble des microcystines prsentes. LAustralie, le Brsil et la Nouvelle-Zlande ont propos des concentrations seuils pour dautres cyanotoxines dans leau dalimentation. Ces seuils recommands nont pas de valeur rglementaire. Seuls deux tats ont propos des concentrations seuils dans dautres sources alimentaires (complments alimentaires et produits de la pche).

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VII. Exposition des populations et apprciation des risques

1. Les cyanotoxines dans les eaux continentales franaises

Dans certaines circonstances, les cyanobactries peuvent tre abondantes dans les eaux de surface susceptibles dtre utilises directement en agriculture, pour des activits nautiques ou aprs traitement comme eaux dalimentation. Cependant les effets sanitaires ne sont pas directement engendrs par ces microorganismes mais sont gnrs par les toxines quils peuvent produire et qui, sous laction de divers facteurs, sont libres dans le milieu. Lvaluation des risques sanitaires sappuie donc sur la nature et la concentration des toxines dans ces milieux et non sur la quantit de microorganismes prsents. On peut dailleurs rappeler quune mme toxine peut tre produite par des espces diffrentes et quune mme espce peut produire diffrentes toxines et cela de manire variable en fonction de facteurs voqus au chapitre I (paragraphes 1.4 et 3.2). Les familles de toxines ainsi que les genres potentiellement producteurs de toxines qui ont t dtects ce jour en France, sont rappels dans le tableau VII.I.

Tableau VII-I : Genres potentiellement toxiques de cyanobactries ayant dj t observs en France et toxines associes. En gras, les toxines dj identifies en France (daprs les chapitres I et IV).
Genres potentiellement toxiques Anabaena Anabaenopsis Aphanizomenon Cylindrospermopsis Coelosphaerium Lyngbya Microcystis Nostoc Oscillatoria Phormidium Planktothrix Pseudanabaena Rhaphidiopsis Synechococcus Woronichinia Toxines

Anatoxines Cylindrospermopsines Dbromoaplysiatoxine Lyngbyatoxine Microcystines Microviridines Saxitoxines

Dautres cyanotoxines (cylindrospermopsine, nodularines, BMAA) ont t identifies dans dautres pays europens ; en labsence de recherche cible, leur prsence en France ne peut tre exclue. En France,97 % des 1 492 rsultats(37) de dosage de microcystines disponibles pour les annes 2002 2004 (eau brute et eau traite) se situent entre juin et octobre. La prsence de microcystines une concentration suprieure 0,16 g.L-1 (limite de dtection et de quantification de la base Afssa-Afsset) est observe pour 37 % de ces rsultats. Pour les eaux brutes, tous usages confondus : 1 266 prlvements deau brute ont fait lobjet dune recherche de microcystines, correspondant 212 sites dans 43 dpartements ; 88 % des rsultats sont infrieurs 3 g.L-1, 8 % des valeurs sont comprises entre 3 et 15 g.L-1, les 4 % restants se distribuant entre 15 et 1 624 g.L-1. Si lon considre seulement les prlvements pour lesquels la concentration est suprieure la limite de dtection, leur mdiane se situe 1,17 g.L-1 et 75 % de ces rsultats sont infrieurs 3,75 g.L-1. Les concentrations des eaux brutes en microcystines varient selon les annes et en cours danne. Les valeurs les plus leves sont gnralement observes de juillet septembre. Peu de donnes sont cependant disponibles pour les priodes de novembre juin (3,6 % du total des analyses).
(37) Les rsultats dcrits dans le prsent chapitre sont issus de la base Afssa/Afsset.

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Il apparat que le sous-chantillon des prlvements pour lesquels on dispose dun rsultat de dosage des microcystines est biais par rapport lchantillon total des prlvements vis--vis de labondance des cellules de cyanobactries : les dosages de microcystines sont effectus lorsque labondance est importante (chapitre IV, 4.2). En effet labondance moyenne gomtrique pour les prlvements avec dnombrement algal et dosage de microcystines est de 70 000 cellules.mL-1 pour seulement 5 000 cellules.mL-1 quand le dosage des toxines nest pas ralis. La concentration en anatoxine-a mesure dans des chantillons prlevs la surface de sdiments, de pierres et de macrophytes de la rivire la Loue a t estime 8 mg.g-1 de biofilm lyophilis (Gugger et al. 2005).

2. Eau et alimentation
2.1. Sources dexposition aux cyanotoxines par voie alimentaire
Les sources potentielles dexposition aux cyanotoxines par lalimentation sont les suivantes : leau de distribution publique ; la chair des animaux exposs des cyanotoxines, poissons et crustacs deaux douces ou saumtres ; les lgumes, notamment les lgumes feuilles en cas dirrigation par aspersion avec une eau charge en cyanobactries ; les complments alimentaires base dalgues bleues, cest--dire base de cyanobactries. Les valeurs cites pour les denres dorigine animale ne reprsentent quune fraction de la quantit de toxines prsentes, en labsence de mthode valide fournissant la teneur totale de toxines. Les grandeurs numriques issues de travaux de recherche sont donnes titre indicatif. Il nexiste pas de donnes concernant lexposition de la population franaise par les denres dorigine animale.

2.1.1. Eau dalimentation

Les rsultats de dosages de microcystines dans les eaux brutes destines la production deau dalimentation sont au nombre de 639 pour les annes 2002 2004, rpartis dans 24 dpartements sur les 88 dpartements franais o au moins une usine de traitement utilise de leau de surface. Pour les eaux brutes destines la production deau de consommation, les microcystines sont dtectes une concentration suprieure 0,16 g.L-1 dans un peu plus de 34 % des cas. La moiti de ces rsultats positifs ont une concentration infrieure 0,58 g.L-1, le 75e percentile se situant 1,63 g.L-1. La concentration maximale pour les eaux brutes destines lalimentation en eau potable est de 665 g.L-1. Les 226 rsultats de dosage des microcystines disponibles pour les eaux traites entre 2002 et 2004 ne concernent que 13 dpartements (soit 45 sites). Sur ces 226 mesures, 82 % (201) prsentent un rsultat infrieur la limite de dtection retenue (0,16 g.L-1), 26 mesures sont comprises entre la LD et 0,3 g.L-1 et une seule valeur est suprieure la limite de qualit de 1 g.L-1 (1,9 g.L-1). Cette dernire valeur a t observe en sortie dune usine quipe avec une tape de charbon actif en poudre, sans filtration sur charbon actif en grain. Lozonation sest rvle dficiente cette priode. Lanalyse de la base de donnes indique un abattement de lordre de 200 , en moyenne, du nombre de cellules de cyanobactries entre leau brute et leau traite. Pour les microcystines, labattement entre les eaux brutes et les eaux traites apparat bien plus faible, il est de lordre de 2 en moyenne (chapitre IV, 5.2). Les dosages de microcystines relatifs lusage AEP,que ce soit en eau brute ou en eau traite,ne procdent pas dune campagne de prlvement systmatique ou alatoire. Il nest donc pas possible dvaluer la reprsentativit des donnes de dosage des microcystines en eau traite. Elles doivent tre considres avec la plus grande prudence.

2.1.2. Organismes aquatiques 2.1.2.1. Mollusques

Les mollusques sont susceptibles dtre contamins par des cyanotoxines, soit directement au contact de cellesci lorsquelles sont libres dans le milieu par les cyanobactries soit indirectement par la consommation de cyanobactries qui en contiennent (Frmy & Lassus 2001). Ce dernier mode de transfert est principalement lorigine de la contamination de la chane alimentaire. En effet, la concentration en microcystines dans les tissus de diffrentes espces de gastropodes est corrle la concentration en toxines prsentes dans les cyanobactries mais pas celle en toxines libres dans leau (Frmy & Lassus 2001). Dautres travaux ont mis en

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vidence laccumulation de microcystines chez les moules deau douce de type anodonte Anodonta cygnea (Eriksson et al. 1989), mais galement chez des espces de moules marines Mytilus edulis et Mytilus galloprovincialis. Les moules deau douce accumulent galement la cylindrospermopsine jusqu des concentrations de 2,5 g.g-1 de tissus (poids sec). Les mollusques tant peu sensibles leffet des toxines, ils peuvent ainsi les assimiler de manire active et les accumuler dans des proportions considrables (Frmy & Lassus 2001). Diffrentes tudes mettent en avant le rle prpondrant des mollusques dans la transmission des toxines travers le rseau trophique. Ces derniers en effet, et principalement les gastropodes deau douce, constituent une source importante de nourriture pour les poissons, les crustacs, les amphibiens et les oiseaux. La bioaccumulation tout au long de la chane trophique des principales toxines dcrites dans la littrature (nodularines, microcystines, cylindrospermopsine, saxitoxines, BMAA) est dsormais dmontre (Falconer 1992, Lindholm 1989, Negri 1995, Saker 1999). La rpartition des toxines dans le mollusque nest pas uniforme, lhpatopancras est lorgane le plus contamin. Les tissus locomoteurs (muscles, pieds) contribuent faiblement la contamination globale et les gonades montrent une contamination intermdiaire. Ainsi Saker et al. (2004) mentionnent une rpartition en cylindrospermopsine chez la moule deau douce ne faisant pas lobjet dun levage aquacole (lac Mira au Portugal) mais consomme de faon non contrle, de 68 % dans lhmolymphe, 23 % dans les viscres, 8 % dans le pied et les gonades et 1 % dans le manteau. Une priode de 15 jours de dtoxication permet de diminuer de 50 % la contamination des tissus. Ce phnomne de rpartition non homogne est important et doit tre pris en compte selon le type de mollusque considr et les parties habituellement consommes. Selon les auteurs, un transfert passif de toxines dun organe lautre nest pas exclure et doit tre envisag lorsque le mollusque est conserv ltat congel de manire prolonge. Saker et al. (2004) ont valu laccumulation de cylindrospermopsines par des moules (A. cygnea) exposes pendant 16 jours des cultures de C. raciborskii et leur dcontamination aprs 16 jours de maintien dans un milieu propre. Les concentrations maximales obtenues aprs 16 jours dexposition sont de 2,9 g.g-1 pour lanimal entier, avec des concentrations de 61,5 g.g-1 (poids sec) dans lhmolymphe et de 5,9 g.g-1 (poids sec) dans les viscres. Aprs 16 jours de dcontamination, 50 % des cylindrospermopsines ont t limins. Les concentrations en CYN varient pendant la priode dexposition. Les diffrentes donnes relatives la contamination des mollusques par des cyanotoxines montrent quelle peut survenir tant chez les espces deau douce que chez les espces marines. Le risque li leur consommation par lhomme est trs dpendant des pratiques locales de pche, daquaculture et de consommation.

2.1.2.2. Crustacs
Les crustacs prsentent un profil de contamination par les cyanotoxines similaire celui des mollusques, savoir : contamination par la consommation de cyanobactries ou de mollusques contamins, dans le cas des gros crustacs de type crabe, accumulation dans lhpatopancras, faible sensibilit aux toxines. La mortalit des crustacs nest observe que pour des concentrations leves en cyanotoxines. Aucune intoxication animale ou humaine par des toxines de cyanobactries et lie la consommation de crustaces nest rapporte dans la littrature. Les crustacs reprsentent nanmoins une source potentielle de contamination pour les chelons trophiques suprieurs (Briand et al. 2003). Une tude de Magalhaes et al. (2003) dans la baie de Rio de Janeiro, a mis en vidence des teneurs pouvant atteindre 100 ng de microcystines par gramme de muscle de crabe ainsi que des teneurs de 10 ng de microcystines par gramme de crevettes (poids frais). Les auteurs indiquent que, pour 19 % des chantillons analyss, les teneurs en microcystines taient telles quelles exposeraient le consommateur un dpassement de la DJT, dans le cas dune consommation quotidienne de 300 g de chair de crabe par un adulte de 60 kg, (0,52 g.kg pc-1.j-1 dapport par le crabe, soit 13 fois au-dessus de la DJT de 0,04 g.kg.j-1). Une tude rcente (Kankaanp et al. 2005b) sur des crevettes Black Tiger, objet dun levage intensif en Australie, fait tat de la prsence de cyanobactries dans le milieu dlevage. Plusieurs genres ont t identifis comme Oscillatoria sp. (4.106 cell.L-1), Pseudanabaena sp. (1,8.106 cell.L-1), Microcysitis sp. (3,5.104 cell.L-1), Aphanocapsa sp. (2.104 cell.L-1) ainsi quune espce rare Romeria sp. (2,2.106 cell.L-1). Un protocole ELISA a permis dobtenir des dosages en hpatotoxines totales (MC-LR, MC-LA, MC-RR, MC-YR et NOD). Les concentrations en hpatotoxines totales dans lhpatopancras de ces crevettes se sont avres croissantes au cours de ltude (de 6-20 g dhpatotoxines par kg dhpatopancras durant lhiver 20-80 g dhpatotoxines par kg dhpatopancras au cours du printemps) tout en restant des valeurs considres comme ne prsentant pas de risque toxique ni pour les crevettes ni pour le consommateur. Lhpatopancras et le c?ur ont t identifis comme les principaux organes daccumulation des toxines. Les concentrations retrouves dans le muscle sont en revanche relativement faibles. Enfin, la dcontamination des organes sest avre rapide, de quelques heures (microcystines) quelques jours (nodularines).

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Des crevisses australiennes pattes rouges (Cherax quadricarinatus) provenant dun bassin aquacole ont t capables daccumuler de la cylindrospermopsine produite par Cylindrospermopsis raciborskii (590 g.L-1 de CYN dans leau du bassin, dont 93 % intracellulaire et 7 % dissoute dans leau) des concentrations de lordre de 4 g.g-1 dhpatopancras et 0,9 g.g-1 (poids sec) de muscle lyophiliss (Saker & Eaglesham 1999). Ces rsultats ont t complts par une tude dexposition au laboratoire des crevisses des cylindrospermopsines pendant 14 jours, une concentration proche de celle observe dans le bassin (568 g CYN.L-1). La contamination des tissus de ces dernires sest avre infrieure celle des crevisses provenant du bassin. Il semble donc que le mcanisme daccumulation le plus vraisemblable est celui li lingestion des cellules de cyanobactries, plutt que celui li labsorption de toxines dissoutes. Ces crevisses font lobjet dun levage aquacole intensif aux tats-Unis et en Isral. Des contrles limportation pourraient tre opportuns.

2.1.2.3. Poissons
Contrairement aux invertbrs, les poissons sont sensibles aux cyanotoxines et les principaux organes touchs sont le foie et les reins. Ltude mene dans la baie de Rio de Janeiro par Magalhaes et al. (2003) indique des teneurs en microcystines pouvant atteindre 40 g par kg de muscle de poisson (poids frais), exposant potentiellement un consommateur une dose suprieure la DJT fixe par lOMS. Dans une tude mene par Xie et al. (2004) en parallle sur deux lots de carpes, les premires nourries tout au long de lexprimentation par des cellules de Microcystis viridis, les secondes nourries pendant 40 jours avec les cyanobactries puis par de la nourriture artificielle, le dosage des microcystines MC-LR et MC-RR par CLHP dans diffrents tissus et organes des poissons (intestin, foie, muscle, sang) a t ralis. Les teneurs en microcystines des cellules de cyanobactries utilises pour lalimentation taient comprises entre 268 et 580 g.g-1 (poids sec) pour la microcystine-LR et 110 et 292 g.g-1 (poids sec) pour la MC-RR. Chez les poissons nourris exclusivement avec des cyanobactries, des teneurs maximales en MC-RR de 49,7 ; 17,8 et 1,77 g.g-1 (poids sec) ont t respectivement mesures dans le sang, le foie et le muscle. Aucune trace de MC-LR na pu tre dtecte dans le muscle et le sang malgr une trs forte concentration dans les intestins. Ces donnes contrastent avec les rsultats dtudes menes sur des truites (Burry et al. 1997, Tencala & Dietrich 1997, Burry et al. 1998) et incitent penser que la carpe possderait un mcanisme de conversion/dgradation de ces toxines ou limitant le passage travers la paroi intestinale. La dtoxication observe chez les carpes soumises un rgime alimentaire classique aprs contamination par les microcystines est lente et sobserve dabord au niveau hpatique puis musculaire. Des flets ont t exposs des toxines de type nodularine par lintermdiaire de moules contamines (Kankaanp et al. 2005a). Les teneurs en toxines ont t dtermines dans le foie par ELISA et CLHP-SM. Les valeurs obtenues par spectromtrie de masse (0 et 390 g.kg-1 de poids frais) se sont avres jusqu 10 fois plus faibles que celles obtenues en ELISA (20 et 2 230 g.kg-1 de poids frais). Diffrentes hypothses ont t avances, les plus vraisemblables considrent des phnomnes de suppression dions en CLHP-SM et la prise en compte simultane des mtabolites en ELISA (reconnaissance par lanticorps). Les valeurs obtenues en CLHP-SM et en ELISA tant vraisemblablement respectivement sous-estimes et sur-estimes, il semble raliste destimer que ces valeurs sont comprises entre 500 et 1000 g.kg-1 de poids frais.

2.1.3. Btail et produits laitiers

Le btail est susceptible de se trouver en contact avec des cyanotoxines lorsquil sabreuve. De nombreux cas dempoisonnement sont rapports dans la littrature chez les ovins et surtout les bovins. Les premiers cas rapports lont t en Australie la fin du XIXe sicle ; depuis les tats-Unis, le Canada, la Suisse, lAfrique du Sud ont connu de tels vnements. En Suisse plus de 100 vaches sont ainsi mortes ces 20 dernires annes. Lintoxication la plus dramatique sest droule en Australie (1992) et a caus la mort de plus de 10 000 animaux aprs un pisode defflorescence massive dAnabaena circinalis sur plus de 1000 km de rivire (Falconer 1998, Briand et al. 2003). Les toxines les plus souvent identifies lors de ces pisodes sont des cylindrospermopsines et des microcystines. Dans une tude mene par Orr et al. (2003), des bovins ont t abreuvs pendant 28 jours avec de leau contamine par des cyanobactries du type Microcystis aeruginosa, des concentrations classiquement rencontres lors defflorescences. Les teneurs en microcystines retrouvs dans le foie et le sang ont t mesures par ELISA, CLHP et CG-SM. Aucune trace de toxine na pu tre mise en vidence dans les matrices testes au moyen des techniques chromatographiques. Seul le test ELISA a permis de doser des microcystines des concentrations de lordre de 0,92 g q. MC-LR.g-1 de foie frais, ce qui reprsenterait une quantit accumule dans le foie par individu comprise entre 0,74 et 2,62 mg selon les animaux tests. Cette valeur tant 1000 fois suprieure la limite de quantification des MC-LR par CLHP ou CG-SM, il parat vident que les rsultats obtenus par ELISA doivent tre attribus des ractions croises. Les calculs raliss dans cet article indiquent que les quantits retrouves dans le foie des animaux correspondent 10 40 % des MC-LR ingres par lanimal.

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Devant les intoxications rapportes chez les bovins, il est lgitime de sinterroger sur la possible contamination du lait par les cyanotoxines. Une seule tude sur le sujet a t mene par Orr et al. (2001), au cours de laquelle des vaches allaitantes ont t abreuves pendant 21 jours par de leau contamine par de la microcystine-LR. Les conclusions sont ambigus. En effet, des traces de microcystines (< 2 ng.L-1) ont t dtectes dans le lait par ELISA alors que lanalyse CLHP ne permettait pas de mettre en vidence le pic caractristique de cette toxine en raison des interfrences dues aux protines du lait. En se fondant sur la DJT de cette toxine dfinie par lOMS et sur les consommations moyennes de lait en Australie, les auteurs concluent que la consommation de lait de vaches exposes ces toxines ne prsente pas de risque sanitaire mais considrent quune concentration en microcystines suprieure 0,86 g.L-1 de lait serait problmatique en terme de sant humaine.

2.1.4. Lgumes
Seule une tude de Codd et al. (1999) a mis en vidence la prsence de microcystines sur des feuilles de laitues irrigues avec de leau contamine par des cyanobactries. Des colonies de Microcystis aeruginosa, visibles lil nu sur les feuilles de laitues, taient apparues lors de cette tude environ 10 jours aprs la dernire aspersion. Les concentrations en microorganismes et en toxines dans leau daspersion ne sont pas connues. Ces observations indiquent une possible contamination des fruits et lgumes irrigus par des eaux contenant des efflorescences de cyanobactries et soulvent certaines interrogations comme celle de lefficacit dun lavage de produits contamins en surface.

2.1.5. Complments alimentaires

Des complments alimentaires commercialiss en Amrique du Nord et en Europe, sous forme de poudre saupoudrer sur les aliments ou sous forme de glules, sont produites partir dune cyanobactrie, Aphanizomenon flos-aquae var. flos-aquae, rcolte partir defflorescences naturelles sur le lac Klamath Suprieur (Oregon, tats-Unis). Les allgations accompagnant ces produits concernent le bien-tre des individus en particulier lorsquil est perturb par des causes physiologiques. Les enfants sont une des populations cibles de ces produits, prsents comme capables de lutter contre les dficits de lattention. Selon une tude mene aux tats-Unis, les concentrations moyennes en microcystines rapportes pour ces complments alimentaires varient de 0,01 0,45 g.g-1 de produit. Cependant de fortes variations au sein dun mme lot ont t releves et des chantillons contenant jusqu 2,1 g de microcystines par gramme de produit ont t rapportes. La consommation journalire recommande sur ltiquetage est de 3 5 g.j-1 ce qui correspond une exposition aux microcystines comprise entre 0,03 et 2,25 g.j-1 (Gilroy et al. 2000). Ces auteurs ont recommand une limite de scurit de 1 g de microcystines par gramme de complment. Cette limite de scurit a t adopte comme norme rglementaire pour les produits base d algues bleues par lOregon Department of Agriculture le 23 octobre 1997. LOMS estime que cette limite de scurit ne tient pas compte du fait que 80 % de la dose journalire tolrable sont affects lapport par leau dalimentation et quelle pourrait entraner une surexposition des enfants (Chorus & Bartram 1999). Il apparat clairement quen fonction du lot considr, de la quantit consomme (certains consommateurs admettent consommer jusqu 20 g de complments par jour), les taux de contamination peuvent conduire un dpassement trs important de la DJT et ceci sans prendre en compte dautres sources alimentaires de microcystines. Il nexiste pas de donnes franaises sur le niveau de contamination de ce type de produits.

2.2. Estimation de lexposition alimentaire aux microcystines et lments dvaluation du risque

Lexposition est le rsultat dun calcul obtenu en croisant les donnes de consommation (rsultats de lenqute de consommation auprs dune population donne) avec les moyennes ou mdianes de contamination par les microcystines (mthode dterministe). Au regard des donnes disponibles, diffrents scnarios peuvent tre envisags (enfants, adultes, population particulire). Ces scnarios permettent destimer diffrentes situations dexposition possibles. Dans le cas de contaminants pouvant prsenter une toxicit court terme, il est possible de dterminer la quantit maximale daliments consomms ne pas dpasser pour ne pas atteindre une dose de rfrence aigu dtermine. Une autre approche consiste croiser des distributions statistiques de la consommation deau et des denres alimentaires avec les distributions des niveaux de contamination de leau ou des denres alimentaires par les microcystines (mthode probabiliste). Dans cette approche, on considre que les consommateurs sont exposs sur de longues priodes des produits alimentaires, dont leau, contamins des niveaux variables dans le temps selon une loi de probabilit estime par les distributions empiriques observes.

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Parmi les sources potentielles dexposition aux microcystines par lalimentation, seule lexposition due une contamination de leau de distribution publique sera considre ici. Les autres sources dexposition prcdemment cites sont en effet soit anecdotiques, soit soumises une trs forte incertitude concernant les teneurs susceptibles dtre retrouves dans les parties consommables des crustacs ou des poissons contamins, notamment en labsence dune mthode de dosage valide.

2.2.1. Donnes de contamination

Le tableau IV-XII (chapitre IV), relatif aux donnes de contamination de leau traite, a permis de dfinir une distribution des concentrations en microcystines pouvant tre rencontres dans leau dalimentation. Ces donnes proviennent de 45 sites rpartis dans 13 dpartements et sont comprises entre infrieur la limite de quantification (0,16 g.L-1) et 1,9 g.L-1. Du fait que les dosages de microcystines tendent tre raliss quand labondance des cellules de cyanobactries dans les eaux brutes est leve, ces donnes de contamination ne sont pas reprsentatives des niveaux de contamination auxquels la population gnrale est expose. Elles traduisent seulement lexistence dune situation de contamination une priode donne qui concerne une population desservie partir de ressources prsentant des prolifrations de cyanobactries identifies. Par ailleurs, il convient de rappeler que les performances des diffrentes mthodes utilises pour gnrer ces donnes ntant pas connues et compte tenu des difficults soulignes dans le chapitre IV, la qualit relative des donnes utilises pour ces valuations doit tre garde prsente lesprit lors de linterprtation des rsultats des estimations dexposition.

2.2.2. Niveaux de consommation retenus en eau de boisson

Les donnes de consommation de leau de boisson sont apportes par le rsultat de lenqute alimentaire INCA 99(38) ralise auprs de 3003 individus, enfants et adultes, reprsentatifs de la population franaise (Agence franaise de scurit sanitaire des aliments - Observatoire des consommations alimentaires 2003). Dans cette enqute, leau non chauffe est reprsente par leau du robinet telle que consomme, leau chauffe correspondant leau du robinet consomme sous forme de th ou de caf. Les donnes denqute ont permis dexprimer, selon une loi Gamma, la distribution de la consommation deau du robinet par jour, ramene au poids corporel des individus pour les 5 catgories dge (tableau VII-II).

Tableau VII-II : Consommation deau totale (froide et chauffe) par classes dges en mL.kg-1.j-1.
n 3-4 ans 5-8 ans 9-11 ans 12-14 ans 15 ans et + 178 334 238 268 1 474 Percentile 50 14,9 11,8 8,2 6,8 6,9 Percentile 95 41,1 33,7 22,9 19,1 21,5 Percentile 99 59,0 49,8 34,5 30,7 30,5

Le niveau de consommation maximale est fix 60 mL.kg-1.j-1, ce qui correspond environ deux fois la valeur du Percentile 99 de la consommation chez ladulte.

2.2.3. VTR retenue

La valeur toxicologique de rfrence laquelle sont compars les rsultats des simulations dexposition aux microcystines est la DJT de la microcystine-LR, fixe par lOMS 0,04 g.kg-1.j-1 (poids corporel). Cette approche tient compte de la position exprime sur les mlanges de microcystines en conclusion du chapitre III. Compte tenu des proprits toxicologiques des microcystines, une valeur toxicologique de rfrence aigu de 2,5 g.kg pc0 a t propose au chapitre III.

(38) Cette enqute a t ralise par le CREDOC-DGAL-Afssa en 1998-99. Elle recueille toutes les prises alimentaires des individus pendant une semaine entire. Les donnes de consommation alimentaire ont t obtenues partir de carnets de consommation, renseigns sur une priode de 7 jours conscutifs. Lenqute a t ralise auprs de 3 003 individus, enfants et adultes, reprsentatifs de la population franaise mtropolitaine. La reprsentativit nationale a t assure par stratification (ge, sexe, PCS individuelle et taille du mnage). Lchantillon des adultes comprend 1 985 individus de 15 ans et plus. Les calculs ne portent que sur les adultes normo-valuants soit 1 474 individus. Lchantillon des enfants regroupe 1018 individus gs de 3 14 ans. Ne disposant daucune formule permettant de slectionner les individus sous-valuants, cet chantillon na pas t redress.

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2.2.4 Estimation du risque de dpassement de la DJT de la MC-LR li une exposition par leau dalimentation, selon une approche probabiliste
En sappuyant sur les paramtres dentre prcdemment dcrits, la simulation de calcul a t ralise partir des 10 000 tirages de type Monte Carlo dans la distribution des concentrations et des consommations laide dun logiciel (Cristal Ball 2000Pro v.5, Decisioneering Inc.). Le rsultat de cette simulation est une distribution du quotient de danger, qui se dfinit comme le rapport entre la dose dexposition journalire et la DJT (QD = estimation de lexposition journalire/DJT). Un quotient de danger infrieur la valeur 1 pour un niveau dexposition donn permet de conclure que la population reste expose un niveau infrieur la dose journalire tolrable. Les rsultats de la distribution des quotients de danger sont prsents dans le tableau VII-III.

Tableau VII-III : Distribution des quotients de danger simuls pour diffrentes classes dge, concernant lexposition aux microcystines par leau dalimentation de distribution publique.
Percentiles 2,5% 5,0% 50,0% 95,0% 97,5% 99,0 % 3-4 ans 0,02 0,02 0,07 0,30 0,48 0,78 5-8 ans 0,01 0,02 0,06 0,26 0,40 0,68 9-11 ans 0,01 0,01 0,04 0,19 0,29 0,49 12-14 ans 0,01 0,01 0,03 0,16 0,26 0,41 adultes 0,01 0,01 0,04 0,17 0,27 0,45

La grille de lecture du tableau est la suivante : par exemple, pour 97,5 % de la population adulte, le quotient de danger est infrieur 0,27. Lensemble des quotients de danger obtenus partir des 226 donnes disponibles en eau traite est infrieur 1. Les plus fortes valeurs de quotient de danger sobservent chez les jeunes enfants en raison dune consommation rapporte au poids corporel plus importante que celles des autres classes dge. Cependant ce jour la bibliographie ne fait tat daucune sensibilit particulires aux microcystines pour ces classes dge.

2.3. Apprciation des situations de dpassement de la limite de qualit rglementaire

La dmarche propose a pour but de dcrire lexposition thorique dune personne expose une certaine concentration de microcystines via leau dalimentation et de comparer cette exposition soit la DJT selon une approche dterministe ou selon une approche probabiliste. Interrog par le groupe de travail, le Comit dExperts Spcialis Rsidus et contaminants chimiques et physicochimiques (CES RCCP ) de lAfssa sest estim conscient quune des difficults du gestionnaire des situations accidentelles o la contamination est limite dans le temps est de pouvoir se situer par rapport, non pas une valeur dexposition vie entire, mais une valeur acceptable pour une courte priode de temps. Cependant, du point de vue toxicologique et au regard des donnes disponibles, il na pas estim possible de dfinir une "courte priode de temps". Le CES RCCP de lAfssa a estim quil nest pas pertinent de fixer une concentration maximale tolrable dans leau pour une courte priode de temps, simplement en jouant sur un facteur de scurit, tel que celui du passage du chronique au subchronique, et sans pouvoir dfinir la priode de temps dexposition acceptable. Le CES RCCP de lAfssa estime quil serait plus appropri de sorienter vers la dfinition dune dose de rfrence aigu (ARfD) linstar du Codex Alimentarius qui, afin de protger le consommateur dune exposition aigu (ingestion en une journe), fixe des ARfD par exemple pour certains pesticides dont les effets peuvent se manifester rapidement (effets neurotoxiques). Une valeur toxicologique de rfrence aigu de 2,5 g.kg pc-1 est propos en conclusion du chapitre III par ce CES.

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2.3.1. valuation de lexposition thorique chronique (approche dterministe) 2.3.1.1. valuation du quotient de danger pour un individu de 60 kg, 100 % de la DJT tant attribue leau potable
Conformment la position exprime en conclusion du chapitre III sur les mlanges de microcystines, les scnarios dexposition proposs dans le tableau VII-IV prennent en compte toutes les microcystines, sommes de faon arithmtique, leau dalimentation tant considre comme la seule source de microcystines. Lexposition thorique aux microcystines par leau dalimentation est estime par le calcul dun apport journalier maximum thorique (AJMT) pour diffrentes concentrations en microcystines dans leau dalimentation, pour un individu de 60 kg consommant 2 L par jour. La DJT de lOMS de 0,04 g.kg-1.j-1 pour la microcystine-LR conduit, pour un individu de 60 kg consommant 2 L par jour, un apport journalier tolrable (AJT) de 2,4 g.j-1. Le quotient de danger est calcul pour les diffrentes valeurs de contamination par les microcystines. Les rsultats sont prsents dans le tableau VII-IV.

Tableau VII -IV: Scnarios dexposition aux microcystines par leau dalimentation et quotients de danger associs.
Concentration de leau (g MCs.L-1) 1 1,2 1,5 1,8 2 AJMT pour un individu de 60 kg consommant 2 L deau (g.j-1) 2 2,4 3 3,6 4 2,4 AJT pour un individu de 60 kg (g.j-1) QD 0,83 1 1,25 1,5 2,67

Lingestion quotidienne dune eau dont la concentration en microcystines est proche de 1,2 g.L-1 exposerait, selon ce scnario, un individu de 60 kg une dose quivalente la dose journalire tolrable de lOMS, sans prendre en compte les ventuels autres apports en microcystines.

La DJT nayant t fixe que pour la microcystine-LR, le fait de sommer lensemble des microcystines doses et de comparer cette exposition la DJT de la MC-LR est une hypothse plutt conservatrice, car les donnes toxicologiques indiquent que la MC-LR fait partie des variants de microcystines les plus toxiques, sur le critre DL50.

2.3.1.2. Prise en compte de la consommation journalire connue de la population franaise

Selon lhypothse dune sensibilit aux microcystines indpendante de lge (chapitre III), Ca, la concentration maximale tolrable dans leau dalimentation pour une consommation vie entire peut scrire en fonction de , la proportion de la DJT attribue leau dalimentation, et qa, la quantit journalire deau dalimentation ingre par kg de poids corporel :

La DJT dfinie par lOMS pour la microcystine-LR, utilise par dfaut pour la somme des microcystines, est de 0,04 g.kg-1.j-1. Au sein de la population franaise ge de 3 ans et plus, la classe dge la plus expose, de par sa consommation deau, est celle des enfants de 3 4 ans (tableau VII-II et VII-III). Cette classe dge prsente une distribution de consommation et de masse corporelle connue par le biais de ltude INCA. Selon le tableau VII-II, la valeur qa (quantit journalire deau dalimentation ingre par kg de poids corporel) au 95e percentile de cette classe dge est de 0,04 L.kg-1.j-1. Si lapport en microcystines est totalement attribu leau dalimentation = 1, la concentration maximale tolrable dans leau dalimentation, protectrice pour le 95e percentile de la classe dge des 3-4 ans de la population franaise serait de 1 g.L-1.

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Si la proportion de lapport en microcystines attribue leau est rduite 0,8 pour tenir compte des apports par dautres aliments ou dautres expositions, la concentration maximale tolrable pour que la DJT ne soit pas dpasse, au percentile 95 des donnes de consommation de la population franaise, pour des individus de 3 ans et plus, serait de 0,8 g.L-1.

2.3.2. valuation de lexposition thorique chronique et calcul du quotient de danger (approche probabiliste)
La dmarche propose a pour but destimer le quotient de danger pour une population expose diffrents niveaux de concentration en microcystine-LR, dans leau de boisson, suprieurs la limite de qualit fixe 1 g.L-1. Les donnes de consommation deau sont les mmes que celles dcrites au point 2.3.2 auxquelles on ajoute une valeur minimale de 170 mL.j-1 et une valeur maximale de 280 mL.j-1 pour tenir compte de lapport en eau lors de la cuisson des aliments (Meyer et al. 1999). Le rsultat de la simulation, obtenue partir de 10 000 itrations de type Monte-Carlo (Crystal Ball 2000Pro v.5, Decisioneering Inc.), est une distribution du quotient de danger pour la population franaise en considrant diffrents niveaux de concentration en microcystine-LR dans leau de boisson ingre par cette population. Les rsultats obtenus sont prsents dans le tableau VII-V.

Tableau VII-V : Distribution du quotient de danger (QD) pour une population ingrant une eau prsentant diffrentes teneurs en microcystine-LR.
Concentration en Microcystine-LR (g/L) 1 1,5 1,8 2 2,5 % population QD < 1 99,9 97,4 94,5 92,5 86,6 P95 QD 0,55 0,85 1,02 1,13 1,40 P97,5 QD 0,65 1,01 1,22 1,33 1,69 QD max 1,07 1,61 1,93 2,12 2,67

La grille de lecture du tableau est la suivante : par exemple, le quotient de danger est infrieur 1 (deuxime colonne) pour 94,5 % de la population utilisant une eau dont la concentration en MC-LR est proche de 1,8 g.L-1. Pour 97,5 % de la population, le quotient de danger est infrieur 1,22 (quatrime colonne) ; le QD de danger maximum estim pour cette situation est de 1,93. Ceci peut tre transpos la somme des microcystines, si on considre que la toxicit des diffrents variants est quivalente celle de la microcystine-LR (cf. chapitre III).

2.4. Relation entre concentrations en microcystines et prsence des cyanobactries dans les eaux brutes destines la production deau dalimentation
Le ratio entre les concentrations en microcystines en eau brute et en eau traite calcul pour 20 prlvements conjoints dont la concentration en eau traite est suprieur au seuil de quantification de la base Afssa-Afsset est compris entre 0,56 et 14,6, avec une moyenne de lordre de 2 (Chapitre IV, 5.2). Compte tenu de la limite de qualit rglementaire de 1 g.L-1, une analyse de la base a t conduite afin de calculer, pour les eaux brutes destines la production deau potable, les risques de dpassement des concentrations de 1 et 2 g de microcystines par litre, en fonction du nombre de cellules de cyanobactries dnombres dans un prlvement.

2.4.1. Mthode
Ont t utiliss pour cette analyse 386 rsultats de prlvements raliss en eau brute utilise pour la production deau dalimentation entre 2002 et 2004. 58 lieux de prlvements sont concerns, soit 53 communes et 21 dpartements. Les donnes proviennent pour 235 dentre elles de lanne 2002, pour 38 dentre elles de lanne 2003 et pour 113 dentre elles de lanne 2004. 80 % des donnes proviennent des mois de juillet septembre inclus.

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 chaque prlvement est associ : 1. un rsultat numrique de dnombrement cellulaire de cyanobactries non nul ; 2. un rsultat de dosage des microcystines au-dessus ou en-dessous du seuil de dtection-quantification qui est gal 0,16 g/L. Les mthodes analytiques employes pour le dosage des microcystines sont la mthode HPLC (essentiellement HPLC-UV) pour 293 rsultats et la mthode ELISA pour 93 rsultats. La probabilit de dpassement de diffrentes concentrations en microcystines est exprime en fonction log base 10 du nombre de cellules de cyanobactries grce une rgression logistique. Le modle employ sexprime donc sous la forme explicite dans lencadr ci-dessous. logit(PMC>S) = + x log(NbCC)

o :
logit(P) = log(P/(1 P)) est la fonction logit ; PMC>S est la probabilit que la concentration en microcystines dpasse la valeur seuil S ; NbCC est le nombre de cellules de cyanobactries ; et sont les coefficients de la rgression estims grce aux rsultats de prlvements. Un modle quadratique ( + x log(NbCC) + x [log(NbCC)]2) a galement t test titre de comparaison. Il nest pas apparu comme significativement diffrent du modle linaire. Ce modle est ajust sur les rsultats extraits de la base Afssa/Afsset au travers dune variable MCS qui vaut 1 lorsque la concentration en microcystines dpasse la valeur seuil S et 0 dans le cas contraire. Une fois le modle ajust et les coefficients de la rgression estims, ce modle permet la prdiction de valeurs de risques de dpassement de diffrents seuils sur la concentration en microcystines pour toute valeur dabondance et ce quel que soit le nombre de donnes prsentes dans lchantillon initial. Lintervalle de confiance de cette prdiction dpend nanmoins du nombre de donnes de lchantillon.

2.4.2. Rsultats
Les rsultats prsents dans le tableau VII-VI sinterprtent de la manire suivante : Pour 2 000 CC.mL-1, la probabilit de dpasser la valeur de 1 g.L-1 de microcystines dans leau brute est de 0,05 (i.e. 5 %). Cette valeur a 95 % de chance dtre infrieure 0,1 (i.e. infrieure 10 %) compte tenu des hypothses de modlisation. Autrement dit, on a moins de 5 % de chance que le risque de dpasser 1 g.L-1 soit suprieur 0,1 quand le nombre de cellules de cyanobactries est gal 2 000 CC.mL-1. De la mme faon, on a moins de 5 % de chance que le risque de dpasser 2 g.L-1 soit suprieur 0,05 quand le nombre de cellules de cyanobactries est gal 5 000 CC.mL-1.

Tableau VII-VI : Probabilits de dpassement des concentrations de 1 et 2 g.L-1 en eau brute en fonction du nombre de cellules de cyanobactries dnombres.
p(MC>1g.L-1) NbCC 500 1 000 2 000 5 000 10 000 20 000 50 000 100 000 200 000 500 000 ME* 0,03 0,04 0,05 0,07 0,09 0,12 0,17 0,22 0,28 0,37 IC** (5 % - 95 %) 0,01 - 0,07 0,02 - 0,08 0,02 - 0,1 0,04 - 0,12 0,06 - 0,14 0,09 - 0,17 0,13 - 0,22 0,17 - 0,28 0,21 - 0,36 0,26 - 0,49 ME* 0,01 0,01 0,01 0,02 0,03 0,05 0,08 0,11 0,15 0,23 p(MC>2g.L-1) IC** (5 % - 95 %) 0 - 0,03 0 - 0,03 0 - 0,04 0,01 - 0,05 0,02 - 0,07 0,03 - 0,08 0,05 - 0,12 0,08 - 0,16 0,1 - 0,22 0,14 - 0,35

* ME = Valeur de meilleure estimation dans la prdiction. ** IC = Intervalle de confiance de la prdiction ( 90 % entre les deux bornes).

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Ces rsultats ont t obtenus partir de prlvements effectus sur 58 sites avec une moyenne de 7 prlvements par site. Lanalyse mene sur la base de donnes cyanobactries (chapitre IV) a fait apparatre des diffrences inter-sites importantes. Ces rsultats ne peuvent en ltat tre appliqus un site en particulier. Ils correspondent une estimation moyenne pour un ensemble de sites dont, malheureusement, il est difficile dvaluer la reprsentativit. Ces rsultats concernent les mois de juillet septembre essentiellement et surestiment probablement le risque pour les autres mois de lanne. En revanche ils sont fonds sur le nombre total de cellules de cyanobactries, tous genres confondus. Il a t montr que seuls certains genres (dont Microcystis videmment) taient statistiquement relis la prsence de microcystines. De ce fait, les valeurs de risque affiches sont excessives lorsque les genres producteurs de microcystines sont absents et sous-estims lorsquils sont en proportion importante. Ces points sont garder en mmoire avant dutiliser les rsultats de cette modlisation pour proposer un schma de surveillance des eaux destines la production deau dalimentation.

2.5. Synthse
Diffrentes cyanotoxines peuvent saccumuler dans les tissus danimaux susceptibles dtre consomms par lhomme. Le transfert des cyanotoxines dans les chanes trophiques est encore insuffisamment connu pour que le risque toxique li la consommation de poissons ou de crustacs par lhomme puisse faire lobjet dune valuation, mais les produits de la pche doivent tre considrs comme une source possible dexposition. Laccumulation prfrentielle des toxines dans certains organes peut tre prise en compte pour apprcier le risque li la consommation de ces animaux et aux habitudes alimentaires associes. Pour pouvoir mener une valuation des risques lis la contamination de ces produits par les cyanotoxines, il conviendrait de pouvoir apprhender leur niveau de contamination, voire la biodisponibilit des toxines accumules dans ces matrices complexes. Actuellement, les protocoles dextraction et de purification des microcystines partir des matrices alimentaires complexes ne sont pas valids. Les rsultats de dosages sur ces matrices sont considrer avec prcaution, lincertitude associe pouvant tre importante. La contamination de complments alimentaires base de cyanobactries par des microcystines a t rapporte. En labsence de donnes sur la consommation de ces produits en France et sur leur niveau de contamination, lvaluation des risques lis ces produits nest pas possible. Il convient cependant de souligner que la limite de scurit de 1 g de microcystines par gramme adopte par le dpartement de lagriculture de lOregon ne tient pas compte du fait que lOMS affecte 80 % de la dose journalire tolrable de la microcystine-LR lapport par leau dalimentation. Des microcystines, ainsi que des cellules de cyanobactries, ont t dtectes, voire dnombres, dans leau dalimentation aprs traitement. Lanalyse de la base Afssa-Afsset montre une variabilit de llimination des microcystines et des cyanobactries par les filires. Pour les filires les moins efficaces dans la rtention de ces toxines, un risque ponctuel dexposition ne peut tre cart. La population potentiellement expose nest pas connue prcisment. Si le traitement de leau nest pas pris en compte, sont a priori concernes les populations desservies partir de ressources superficielles ou influences par les eaux de surface qui sont susceptibles dtre contamines par des cyanotoxines. La reprsentativit de la frquence et de lamplitude de ces contaminations dcrites partir de la base AfssaAfsset (226 mesures rparties sur 3 ans et 13 dpartements) ne peut tre value. Dans la limite des donnes disponibles dans la base Afssa-Afsset, la simulation conduite partir des consommations de la base de donnes INCA ne montre pas de dpassement de la dose journalire tolrable de la microcystine-LR. Compte tenu de lincertitude et de la variabilit associes au niveau de contamination des eaux traites et du facteur de scurit utilis dans la construction de la VTR ce rsultat de lvaluation de risque lie lexposition aux microcystines esquisse dans ce chapitre au vu des donnes actuellement disponibles est considrer avec prcaution. Une valuation quantitative du risque pourrait tre ralise lavenir, condition de disposer de donnes de contamination reprsentatives de lexposition de la population.

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Points retenir Seule la microcystine-LR a t prise en compte dans cette valuation. Parmi les diffrentes sources dexposition alimentaire, seule leau dalimentation a t considre. Les simulations ralises dans ces conditions montrent que le risque sanitaire chronique est nul pour la majorit de la population et faible pour les individus les plus exposs La base de donne utilise pour cette valuation de risque ne peut cependant tre considre comme reprsentative de la situation en France. Parmi la population expose, plus les enfants sont jeunes, plus le quotient de danger est lev. Labsence de donnes concernant les autres sources dexposition nexclut pas la possibilit dune sousvaluation de lexposition par voie alimentaire. Les filires de traitement des eaux de distribution liminent ingalement les microcystines. De ce fait, lexposition des consommateurs ne peut tre exclue.

3. Eaux de baignade et autres activits aquatiques de type rcratives

Pour rappel, la saisine de lAfsset en date du 30 mars 2004 vise principalement : 1. valuer les risques sanitaires encourus par les baigneurs et autres usagers des plans et cours deau ; 2. proposer des valeurs limites de qualit relatives la concentration de cellules et de toxines dans les eaux rcratives sur la base de lvaluation des risques sanitaires. Dans ce contexte, les concentrations maximales en cyanotoxines dans les eaux de baignade et autres loisirs auxquelles peuvent tre exposes les personnes sans provoquer des effets indsirables ont t estimes et mises en regard de la concentration limite en microcystines dans les eaux de baignade actuellement recommande en France. Dans lattente de donnes en nombre suffisant et reprsentatives de la pollution des cours et plans deau destins la baignade et autres activits aquatiques sur lensemble du territoire franais permettant de procder au calcul de lexposition de la population gnrale et des travailleurs de ce secteur, une approche thorique a t utilise par les experts de lAfsset pour proposer des valeurs limites de qualit provisoires portant sur les paramtres dabondance de cyanobactries et de concentration de toxines dans les eaux rcratives. Cette approche sappuie sur des considrations et hypothses maximalistes, fondes sur les deux arguments suivants : les experts de lAfsset ont estim, au regard de leurs connaissances et exprience du terrain, quen France mtropolitaine, les personnes se baignent dans un cours ou plan deau pendant lt (2 mois) et ventuellement quelques jours le reste de lanne lorsquun individu pratique une activit rcrative ou habite prs dun cours ou plan deau ; pour les experts, de ce fait, la baignade nest donc pas pratique de manire quotidienne. Le nombre exact de jours de baignade est inconnu, nayant jamais fait lobjet dtudes spcifiques.Toutefois, pour les cas estims comme les plus extrmes , le nombre de jours de baignade ne dpasserait pas les 7 ans sur une vie entire raison de 4 semaines par saison avec un bain tous les jours entre 1 an et 77 ans, ou bien, le cas dune personne habitant prs dun plan ou cours deau et pratiquant une activit sportive aquatique toute lanne raison dune fois par semaine, entre 8 ans et 77 ans ; les experts se sont appuys, notamment, sur les considrations et hypothses utilises par lOrganisation Mondiale de la Sant (OMS) et lInstitut National de Sant Publique du Qubec (INSPQ) et le National Health and Medical research council dAustralie (NHRMC) pour estimer les ordres de grandeur de valeurs guides de qualit pour les eaux de baignade. La dmarche employe est donc un peu diffrente de celle retenue pour les expositions dites alimentaires prsentes prcdemment. En effet, il sagit de prendre en compte ici des expositions, annuellement irrgulires et rptes tous les ans tout au long de la vie, impliquant lingestion de faibles volumes des eaux douces nontraites. Ce chapitre dcrit les hypothses et les valeurs paramtriques retenues afin destimer la concentration maximale de toxines dans les eaux rcratives et labondance maximale de cyanobactries permettant de garantir labsence deffets indsirables, en ltat des connaissances scientifiques disponibles.

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3.1. Modalits de surveillance des eaux de baignade et de loisirs

En France, les zones de cours et plans deau frquentes de manire rptitive (frquentation instantane suprieure 10 baigneurs) pour des loisirs aquatiques (baignade et/ou activits nautiques) sont classes comme des zones de baignade amnages et ce titre soumises une surveillance sanitaire tablie daprs les articles D1332, livre III du code de la sant publique et de la Directive 76/160/CEE du 8 dcembre 1975. En revanche, les sites frquents par du public pratiquant la baignade spontane , en labsence de tout amnagement destin favoriser cette activit, doivent, si leur frquentation le justifie et ds lors que la baignade ny a pas t interdite, faire lobjet dune surveillance sanitaire en application de larticle D 1332-16 du code de la sant. Leur importance relative par rapport aux baignades amnages est variable dun dpartement lautre mais peut tre prpondrante dans certains secteurs (cours deau de montagne ou de rgions mditerranennes). La mise en ?uvre dun contrle sanitaire de ces zones non amnages mais frquentes est la diligence de la D.D.A.S.S. (article 1332-17 du code de la sant publique), mais la prise en charge financire est une dcision qui incombe, dsormais, seulement la collectivit locale concerne. Ceci entrane des disparits dorganisation et conduit, dans certains cas, une quasi absence de donnes sur la prsence des cyanobactries dans ce type de milieux qui, gnralement ne sont pas rputs risque au regard de ces prolifrations, bien que cette apprciation ne repose pas sur une relle valuation. Pourraient galement tre associes aux sites non-amnags , dautres activits de loisirs que la baignade, mais entranant cependant des contacts rguliers, plus ou moins intenses, avec les eaux, telles que la pche et ventuellement la chasse au gibier deau. Labsence de donnes relatives aux conditions de lexposition et aux types de populations concernes par ces cas sortant du champ des activits rglementes ne permet pas daller plus loin dans la caractrisation des risques spcifiques encourus. La collecte de donnes sur la contamination des cours et plans deau entrant ou non dans le champ des zones de baignade rglementes reste donc une tape essentielle lestimation des risques de lensemble de la population de France mtropolitaine et dOutre-Mer pratiquant des activits rcratives dulaquicoles.

3.2. Sources et qualit des donnes utilises pour lestimation des valeurs limites de concentration de cyanotoxines et cyanobactries dans les eaux de baignade et autres loisirs.
Les donnes concernant les niveaux de contamination des eaux douces en cyanobactries et en cyanotoxines proviennent pour la quasi-totalit du systme de surveillance sanitaire. Lanalyse statistique de ces donnes (base Afssa-Afsset) a permis de montrer pour les eaux de baignade que : leur rpartition est htrogne sur le territoire de lhexagone avec une absence de donnes sur lest de lhexagone et des DOM-TOM et un grand nombre sur louest du territoire de lhexagone ; leur rpartition temporelle est galement htrogne et les rsultats concernent principalement les mois de juillet septembre ; parmi lensemble de ces donnes (2 680 prlvements), seuls 623 prlvements ont fait lobjet dun comptage de cellules et dun dosage de microcystines. Cinq cents analyses prsentent simultanment un rsultat numrique de dnombrement de cyanobactries non nul et un rsultat en concentration de MCs au dessus ou en dessous du seuil de dtection-quantification de la mthode CLHP-UV ou SM (0,16 g.L-1) (228 en eau de baignade et 272 en eaux destines aux activits aquatiques) ; ces 500 rsultats proviennent de 93 lieux de prlvements correspondant 92 communes et 20 dpartements ; le sous chantillon des prlvements pour lesquels on dispose dun rsultat de dosage des microcystines est biais par rapport lchantillon total vis--vis de labondance de cellules de cyanobactries car la recherche des toxines nest effectue que lorsque le nombre de cellules est suprieur ou gal 100 000 cellules.mL-1 ; les donnes saisies ce jour dans la base Afssa-Afsset sont insuffisantes pour estimer lexposition de la population franaise aux microcystines via leau de baignade, et la part quelle reprsente par rapport lapport total provenant de diffrentes sources (eau de boisson, alimentation).

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3.3. lments de base considrs pour lestimation des valeurs limites de concentration de cyanotoxines et cyanobactries dans les eaux de baignade et autres activits rcratives
3.3.1. lments de base des scnarios dexposition 3.3.1.1. Hypothses et donnes de rfrence
Au cours des activits aquatiques, lexposition des individus aux cyanotoxines prsentes sous forme intracellulaire ou dissoute, peut avoir lieu par absorption orale ou par inhalation, notamment lors de limmersion volontaire du visage ou lors des chutes accidentelles dans leau. Ces phnomnes sont particulirement frquents au cours de la baignade et lors de la pratique de sports aquatiques tels que la planche voile, ou le cano-kayak. Lexposition par voie orale peut aussi avoir lieu par la mise en bouche deau et par le contact main/bouche, notamment chez les jeunes enfants. Lingestion accidentelle dcume de cyanobactries, notamment par contact main/bouche constitue aussi une voie dexposition. Lexposition par contacts cutans et cutano-muqueux ntant pas particulirement documente (voir chapitre 3 : caractrisation du danger), elle ne sera pas aborde dans la suite de ce travail. Elle gagnerait cependant tre prise en compte, dans les cas, par exemple, o le port de combinaisons humides ou de bottes et chaussons, permet un contact prolong entre leau et la peau par macration pouvant favoriser la lyse de cyanobactries. (Chorus & Fastner 2001). Lexposition par inhalation ne sera pas considre dans ce rapport, faute de donnes toxicologiques et de donnes relatives limportance du phnomne lors des activits rcratives aquatiques, bien quelle soit possible, en particulier lors dimmersions brutales ou de fausses routes. Pour la suite de cette valuation des risques, seule la voie ingestion deau est considre. Toutes les tranches dge de la population gnrale peuvent tre exposes aux cyanotoxines lors de la baignade ou de la pratique de sports nautiques, de mme que les professionnels responsables de lencadrement dindividus ou de leur surveillance.Toutefois, ces professionnels seraient moins exposs que la population gnrale en raison de leur meilleure matrise du milieu aquatique et dun faible nombre de chutes accidentelles dans leau. En outre, une tude rcente sur lestimation de lexposition de plongeurs professionnels en eau douce et de mer, a permis destimer que le volume ingr tait denviron 4,8 12 mL par plonge et que ces volumes seraient plus faibles lorsque les individus plongent avec un tuba ou avec un casque de plongeur (Schijven and de Roda Husman, 2005). Parmi la population gnrale, les sujets les plus exposs a priori seraient les enfants de moins de 10 ans compte tenu du temps pass dans leau estim en moyenne 2 3 heures par aprs-midi, du nombre de baignades par jour et de leur manque de matrise des pratiques aquatiques (Vial 2004) ainsi que les sujets de 12 17 ans, en raison dune pratique rgulire dune activit nautique au cours de lanne (Stat INFO, 2005). En revanche, il na pas t trouve des donnes exprimentales publies permettant de dfinir avec prcision pour la population franaise les valeurs moyennes de dure de la baignade et la frquence par jour et par anne. Au sein de la population gnrale, les enfants ont, soit une dure dexposition plus longue lors de chaque contact avec les eaux (moins de 10 ans) ; soit une frquence dexposition plus importante au cours dune anne (12-17 ans). En labsence de donnes exprimentales publies sur la dure et la frquence de la baignade, le volume deau ingr pendant les activits aquatiques ne peut tre dfini quen utilisant des valeurs par dfaut. Cest la dmarche adopte par les institutions ayant effectu une estimation de risque en vue de fixer des valeurs guides ou seuils, savoir : lOMS, le NHMRC et INSPQ. Selon les institutions, les volumes deau thoriquement ingrs par les enfants sont de 100 ou 250 mL et sont dfinis en fonction de la masse corporelle laquelle on peut faire correspondre un intervalle dge. Ainsi, le volume deau assign par lOMS pour la masse corporelle de 15 kg est de 250 mL (Guidelines for safe recreational water environments. OMS, 2004). Cette masse corporelle est proche de celle des enfants de 2 7 ans en France, savoir de 12 22 kg (Base CIBLEX ; Beaugelin-Seiller, et al. 2004 ; ADEME-INRS, 2003). LINSPQ assigne aussi 250 mL mais aux enfants dune masse corporelle infrieure (10 kg). Le NHMRC assigne une masse corporelle de 10 kg correspondant au poids des enfants de 1 2 ans, un volume ingr de 100 mL. Ainsi, les valeurs paramtriques les plus pnalisantes sont celles prises en compte par lINSPQ.

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3.3.1.2. Valeurs paramtriques retenues par le groupe dexperts

Population Les scnarios dexposition sont labors pour toutes les tranches dge de la population : les enfants de 1 2 ans, > 2 7 ans, > 7 12 ans, > 12 17 ans et les adultes de plus de 17 ans. Masse corporelle La conversion en termes de masse corporelle correspondant ces tranches dge a t ralise selon la base CIBLEX (Beaugelin-Seiller et al., 2004 ; ADEME-INRS, 2003). Pour chaque tranche dge, les valeurs de masse corporelle minimum pour les femmes et maximum pour les hommes proposes par la base CIBLEX ont t retenues. Ces valeurs pour les diffrentes tranches dge sont rassembles dans le tableau VII. 1. Dans les calculs de risque rpt sur une vie entire, une masse corporelle moyenne de 60 kg a t retenue. Cette masse corporelle est couramment utilise par lOMS lors de la dclinaison des valeurs guides pour les micropolluants chimiques prsents dans leau de boisson. (Recommandations de la qualit de leau potable. Annexe 3, Default assumptions. OMS, 2004) Volumes deau ingrs Les volumes deau ingrs assigns par dfaut pour les risques aigus et sub-chroniques ou intermdiaires (rptes irrgulirement pendant une vie entire) par jour de baignade ont t fixs : - 100 mL pour les enfants de 1 2 ans (un dixime du volume assign pour leau de boisson) tel que propos par le NHMRC car les experts ont considr que ce volume tait plus pertinent, en particulier si lon considre que cette tranche dge est plus surveille par les parents que celle de 2 7 ans ; - 250 mL pour les tranches dge de > 2 17 ans (un quart du volume assign pour leau de boisson) et pour les adultes (un huitime du volume assign pour leau de boisson). Les valeurs tiennent compte des indications de lOMS (Directives pour la scurit des eaux de baignade. OMS 2004) et de lexprience du terrain des experts. Ceci est, de plus, une hypothse fortement conservatrice au regard dautres tudes indiquant des volumes trs infrieurs (S. Ratnapalan, et al., 2003). La notion de bain unique sur une journe nest probablement pas tout fait exacte aux priodes les plus longues et chaudes de lanne, pour lesquelles plusieurs bains par jour peuvent avoir lieu. Compte tenu de lincertitude associe au volume deau ingr pendant une journe de baignade, une analyse de sensibilit a t effectue en attribuant un facteur de plus ou moins 50 % la valeur choisie. Dans le cas dun risque chronique, le volume deau ingr pris en compte est celui utilis par lOMS, savoir, un adulte de 60 kg ingrant 200 mL deau en une seule fois ou en deux fois 100 mL (Guidelines for Safe Recreational Water Environments. OMS 2004).

Tableau VII-VII : Valeurs paramtriques de volume deau et masse corporelle retenus.

ge (ans) 12 >27 > 7 12 > 12 17 > 17 Adultes (exposition chronique) Masse corporelle (kg) 8 13 12 22 19 40 34 70 42 83 60 (valeur moyenne) Volume ingr par jour de baignade (L) 0,100 0,250 0,250 0,250 0,250 0,200 Ratio eau de boisson 0,1 0,25 0,25 0,25 0,125 0,1

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3.3.2. Doses-repres et Valeurs toxicologiques de rfrence 3.3.2.1. Donnes de la littrature

Les seules valeurs toxicologiques de rfrence (VTR) retrouves dans la littrature sont celles proposes par lOMS et le NHRMC pour la MC-LR, lINSPQ pour les MC-LR et lanatoxine, la FAO/IOC/OMS pour les saxitoxines : lOMS a driv une DJT pour une exposition chronique la MC-LR partir dune tude sub-chronique chez la souris ; le NHMRC drive une VTR pour une exposition sub-chronique la MC-LR partir dune tude subchronique chez le porc ; lINSPQ drive une VTR pour une exposition sub-chronique aux MC-LR et une pour lanatoxine a partir de deux tudes ralises chez la souris ; la FAO drive une VTR pour une exposition aigu aux saxitoxines, drive partir des tudes pidmiologiques chez lhomme. Pour la MC-LR, au del de la diffrence entre modles animaux et le type de risque considr, les VTRs dclines par ces institutions diffrent aussi parce quelles assignent des facteurs dincertitude diffrents. Ce facteur est de 100 pour lINSPQ ; il tient compte de la variabilit intra-espce (facteur de 10) et de la transposition de la DSENO de la souris lhomme (facteur de 10). LOMS utilise un facteur de 1000 pour tenir compte de la variabilit intraespce (facteur de 10), de la variabilit inter-espce (facteur de 10) et du faible nombre de donnes disponibles sur la toxicit chronique et la cancrogense (facteur de 10). Pour driver une VTR sub-chronique, le NHRMC utilise un facteur de 5000 incluant la variabilit inter-espce (facteur de 10), intra-espce (facteur de 10), lincertitude li la cancrogense (facteur de 10) et la transposition dune DMENO une DSENO (facteur de 5). Les rsultats de ces calculs sont les suivants pour la MC-LR : DJT drive par lOMS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,04 g.kg-1jour-1 ; VTR drive par lINSPQ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,4 g.kg-1jour-1 ; VTR drive par le NHRMC. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,02 g.kg-1jour-1. Pour les neurotoxines, lINSPQ a driv une valeur de rfrence de 1 g.kg-1j-1 pour lanatoxine-a pour une exposition rpte lie lingestion deau de baignade partir dune DSENO de 98 g.kg-1j-1 et dun facteur dincertitude de 100 (Fawell et al. 1999b) et la FAO/IOC/WHO (2004) ont driv une dose de 0,7 g.kg-1 pour une exposition aigu aux saxitoxines (cf. chapitre III de ce mme rapport). ce jour, aucune institution internationale na publie de VTR pour des effets aigus. Ainsi, les experts du CES Rsidus et contaminants chimiques et physico-chimiques (RCCP) ont dclin une VTR pour lexposition aigu (ingestion unique) associe la prsence de MC-LR. Cette valeur est indique dans le chapitre III toxicologie de ce mme rapport et rappele ci-aprs.

3.3.2.2. Valeurs toxicologiques de rfrence et valeurs repres retenues par le groupe dexperts
Exposition associe une ingestion unique Les experts du groupe de lAfsset ont considr quune exposition aigu existe ventuellement lors de lingestion accidentelle deau contamine par des cyanotoxines, lors dune chute dans leau par exemple une fois dans la vie et qui peut concerner lensemble dune journe et non une seule ingestion. Par consquent, la concentration maximale de MC-LR et de saxitoxines dans les eaux de baignade permettant de garantir labsence deffets indsirables lors dune exposition aigu a t calcule en utilisant la VTR aigu dcline par les experts du CES RCCP : 2,5 g.kg-1 pour la MC-LR (drive daprs Dietrich et Hoeger, 2005), et la VTR aigu propos par la FAO/IOC/WHO (2004) pour les saxitoxines de 0,7 g.kg-1. En revanche, pour le cas de lingestion accidentelle dcume, il nexiste pas de VTR spcifique. Toutefois, une DSENO de 333 g.kg-1j-1 a t tablie lors dune tude de gavage de souris avec un extrait de cyanobactries toxiques appartenant au genre toxique Anabaena flosaquae (Schaeffer et al. 1999). Cette valeur est 10 fois plus leve que celle obtenue lors des tudes de gavage avec les toxines purifies. Sur la base de ce constat et toxicit gale par rapport des eaux contamines par ces mmes toxines, ce serait des volumes de 1 2 litres dcumes qui devraient tre ingrs pour atteindre la dose de toxicit aigu. Cette hypothse est peu raliste, mme pour de jeunes enfants qui joueraient dans de telles cumes. Il faut noter cependant, que cette tude na pas t juge dune qualit scientifique suffisante par plusieurs groupes dexpertise internationaux.

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Pour ces raisons, en labsence de donnes scientifiques plus solides compte tenu de la forte variabilit de la concentration en cyanobactries dans les cumes et du fait que ces cumes ne sont pas obligatoirement toxinognes, le groupe dexpertise de lAfsset dcide de ne pas retenir un scnario spcifique dexposition aux cumes. Il nest reste pas moins que des procdures de gestion de prcaution doivent tre dfinies pour viter le contact avec des cumes de cyanobactries mme sans savoir si elles contiennent des toxines.

Exposition rpte irrgulirement sur une vie entire. Les experts Afsset estiment, daprs leurs connaissances et leurs expriences, que lexposition par la baignade ou la pratique rgulire dune activit de loisir aquatique est une exposition rpte annuellement mais de manire discontinue sur une vie entire. Dans ce contexte et bien que le nombre exact de jours de baignade soit inconnu, ils ont retenu par dfaut et provisoirement, une hypothse maximaliste qui tient compte des cas les plus extrmes tel que lexemple dun individu se baignant quotidiennement pendant 4 semaines par saison dt, o bien, le cas dun individu habitant prs dun plan ou cours deau et pratiquant une activit sportive pendant plusieurs mois de lanne. Cette hypothse maximaliste conduit estimer que lexposition rpte par la baignade et/ou la pratique de loisirs aquatiques, cumule sur une vie entire, serait denviron 10 % dune vie entire. Ce type dexposition ne correspondant pas une des dfinitions dexposition classiques et acceptes au niveau international, deux positions scientifiques divergentes sur la valeur toxicologique utiliser pour estimer lexposition aux cyanotoxines, par les eaux de baignade sont apparues parmi les experts et cette divergence ncessite que soient prsentes les deux positions : lune considre que lexposition par la baignade et autres loisirs aquatiques correspond plus la dfinition dune exposition sub-chronique ou intermdiaire telles que dfinies, respectivement, par lEnvironmental Protection Agency des tats Unis (US EPA, 1993) et par lAgency for Toxic Substances and Disease Registre (ATSDR 2006) ; par consquent, les experts partisans de cette approche prconisent dutiliser la valeur toxicologique repre sub-chronique de la MC-LR de 0,4 g.kg-1 par jour de baignade, telle que propose par lINSPQ ; cette valeur est dcline partir de la DSENO de 40 g.kg-1j-1 de ltude dexposition sub-chronique (Fawell et al., 1994) tude considre par lensemble des experts toxicologues comme pertinente (cf. chapitre III toxicologie de ce mme rapport ; tude retenue pour la construction de la VTR applique lalimentation) divise par un facteur dincertitude de 100 (variabilit inter- et intra-espce). Dans le contexte particulier de la baignade, les experts qui proposent dappliquer lapproche sub-chronique ne jugent pas ncessaire de retenir le facteur supplmentaire de 10 qui est appliqu par lOMS pour leau dalimentation et destin tenir compte la fois de la dure de ltude (passage de sub-chronique au chronique), de la promotion tumorale et des connaissances rduites dans le domaine de la toxicit et de la reproduction (cf. point 1.1.1.11- conclusions du chapitre III toxicologie) ; ils ne retiennent pas non plus la VTR propose par le NHMRC car fonde sur une DMENO et non une DSENO ; lautre estime que ltude de toxicit subchronique de Fawell et al. nest pas assez solide pour saffranchir dun facteur de scurit supplmentaire de 10, dautant plus que les observations de Heinze (1999) mettent en vidence des altrations hpatiques chez le rat lors de ladministration orale de 50 g.kg-1 de MC-LR pendant 28 jours, ce qui laisse une marge de scurit faible par rapport la DSENO de 40 g.kg-1j-1. Par ailleurs, en ltat actuel des donnes disponibles, il apparat difficile de dfinir la priode de temps qui correspondrait une exposition subchronique pour laquelle il serait possible de garantir la scurit des personnes au regard de ce risque. Ils prconisent donc de travailler avec la VTR chronique dfinie par lOMS, cest--dire avec la DJT de 0,04 g.kg-1j-1 (bien quelle ne soit pas la plus conservatrice, celle du NHMRC conduisant une DJE de 0,02 g.kg-1j-1) , dans lattente de lobtention de donnes toxicologiques permettant de mieux caractriser le pouvoir gnotoxique et lactivit de promotion tumorale des MCs. Enfin, en raison du petit nombre de donnes de contamination dans leau de boisson, leau de baignade et les aliments, les experts considrent quil est difficile destimer la contribution relative la DJT de ces trois sources dexposition. Cependant, selon les hypothses de lOMS, nanmoins, certains experts estiment que 80 % de la DJT pourraient tre attribus leau de boisson et les 20 % restants aux autres sources dapport de cyanotoxines. Les reprsentants des deux opinions acceptent, en revanche et conjointement, que la toxicit des cyanotoxines soit une toxicit dite seuil. Le tableau VII.2 rcapitule lensemble des valeurs paramtriques retenues pour estimer les risques lis la baignade.

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Tableau VII-VIII : Valeurs paramtriques prises en compte par diverses institutions pour lestimation des risques lis une exposition la MC-LR par lingestion des eaux de baignade et valeurs retenues pour la prsente valuation de risques.
OMS* Enfants Masse corporelle (kg) 15 Adultes 60 NHMRC** Enfants 10 Adultes 70 INSPQ*** Enfants 10 Prsente tude Enfants et Adultes Enfants : 8 13 12 22 19 40 34 70 Adultes : 42 83 Volume deau ingr accidentellement (mL) Valeur toxicologique de repre de MC-LR Facteur de scurit 250 100-200 100 100 250 40 g.kg-1j-1 (DSENO, souris, 90 jours) 100 10 : variabilit interspcifique 10 : variabilit interindividuelle 8 13 kg : 100 > 12 : 250 40 g.kg-1j-1 (DSENO, souris, 90 jours) 100 (sub-chronique) ou 1 000 (chronique) 10 : variabilit inter-espces 10 : variabilit intra-espce 10 : associe lextrapolation dune exposition sub-chronique une exposition chronique et incertitude sur cancrogense exposition sub-chronique : environ 10 % dune vie entire exposition chronique : DJT soit exposition quotidienne vie entire Indiqus dans la suite de ce chapitre

40 g.kg-1j-1 (DSENO, souris, 90 jours) 1 000 10 : variabilit inter-espces 10 : variabilit intra-espce 10 : extrapolation tude sub-chronique chronique, manque de donnes sur la toxicit chronique et promotion tumorale

100 g.kg-1j-1 (DMENO, porc, 44 jours) 5 000 5 : utilisation dune DMENO la place dune DSENO 10 : variabilit inter-espces 10 : variabilit intra-espce 10 : incertitude sur cancrogense 11

Nombre de jours dexposition par an

Tous les jours sur une vie entire Risque faible : 2 4 g.L-1 de MC-LR

NP

Valeurs guides pour les eaux de baignade

Risque modr : 20 g.L-1MC-LR avec M. aeruginosa et 40 g.L-1 MC-LR avec Plantothrix agardii Risque lev : cume

8 g.L-1

56 g.L-1

16 g.L-1

NP : non prcis ; MC-LR : microcystine-LR, * OMS 2004 ** NHMRC 2004, ***INSPQ. 2005

Les discussions entre les experts sur lapproche utiliser lors dune exposition rpte de manire discontinue sur une vie entire montrent quil nexiste pas dapproche ou de dfinition de VTR valide par un panel dexperts internationaux ou nationaux pour ce type dexpositions. Ceci conduit les experts recommander la mise en place dun groupe dexperts internationaux pour examiner cette question, notamment parce que ce type dexposition est couramment rencontr dans le cadre de lexposition de population gnrale et professionnelle via lenvironnement. En ce qui concerne la cylindrospermopsine, bien que les experts du CES RCCP de lAfssa aient propose une VTR chronique, les experts Afsset ont considr quen labsence de mthode analytique et de donnes de frquence et amplitude de cylindrospermopsine dans les eaux de baignade, il ntait pas pertinent destimer une limite de qualit.

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3.4. Estimation dune concentration maximale tolrable de cyanotoxines dans les eaux usage de baignade et autres activits rcratives.
3.4.1. Objectif et mthode
Lobjectif est destimer la concentration maximale tolrable (CMT) de cyanotoxines dans les eaux rcratives permettant de garantir labsence deffets indsirables lors dune ingestion unique (exposition aigu) ou lors des ingestions rptes annuellement (exposition sub-chronique) ou rptes quotidiennement (exposition chronique). Dans tous les cas la concentration maximale tolrable dcoule directement des valeurs de rfrence toxicologiques et des doses repres retenues, exposes dans le paragraphe prcdant et selon la formule suivante : CMT = VTr x mc / V CMT = concentration maximale tolrable de cyanotoxine dans les eaux rcratives VTr = valeur toxicologique repre (DJT ou VTR sub chronique ou aigu) en g.kg-1j-1 mc = masse corporelle en kg V = volume deau ingr par jour de baignade en L. j-1.

3.4.2. Rsultats
Les tableaux VII-IX VII-XI prsentent les valeurs de CMT de cyanotoxines dans les eaux usage rcratif permettant de garantir labsence deffet nocif observable lors dune exposition aigu ou sub-chronique en fonction de lge des individus et obtenues en utilisant les valeurs paramtriques indiques dans les paragraphes prcdents.

Tableau VII-IX : Scnario dexposition aigu : Concentrations maximales tolrables (CMTs) de MC-LR pour leau usage rcratif lors dune ingestion unique.
Masse corporelle (kg) 8 12 12 22 19 40 34 77 42 82 Volume deau ingre (L) 0,100 0,100 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 Concentration maximale tolrable de MC-LR pour leau usage rcratif lors dune ingestion unique (g.L-1) CMT 200 300 120 220 190 400 340 770 420 820 + 50 % du volume 50 % du volume deau deau 133 200 80 147 127 267 227 513 280 547 400 600 240 440 380 800 680 1 540 840 1 640

ge

1 2 ans > 2 7 ans > 7 12 ans > 12 17 ans Adulte > 17 ans

Tableau VII-X : Scnario dexposition aigu : Concentrations maximales tolrables (CMTs) de saxitoxines pour leau usage rcratif lors dune ingestion unique.
Masse corporelle (kg) 8 12 12 22 19 40 34 77 42 82 Volume deau ingre (L) 0,100 0,100 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 Concentration maximale tolrable de saxitoxines pour leau usage rcratif lors dune ingestion unique (g.L-1) CMT 56 84 33 61 53 112 95 215 117 229 + 50 % du volume 50 % du volume deau deau 37 56 22 41 36 75 63 144 78 153 112 168 67 123 106 224 190 431 235 459

ge

1 2 ans > 2 7 ans > 7 12 ans > 12 17 ans Adulte > 17 ans

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Compte tenu des avis divergents des experts sur les valeurs toxicologiques de rfrence (chronique ou subchronique) utiliser pour calculer les concentrations maximales tolrables en MC-LR dans leau usage rcratif, les tableaux VII-XI et VII-XII prsentent les concentrations maximales tolrables pour la MC-LR en utilisant les valeurs paramtriques retenues pour lexposition sub-chronique (tableau VII-XI) et chronique (tableau VII-XII) dcrites dans les paragraphes prcdents.

Tableau VII-XI : Scnario dexposition sub-chronique : Concentrations maximales tolrables (CMTs) de MC-LR pour leau usage rcratif lors dune ingestion deau rpte annuellement.
Poids corporel (kg) 8 13 12 22 19 40 34 77 42 82 Volume deau ingre (L) 0,100 0,100 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 0,250 Concentration maximale tolrable de MC-LR pour leau usage rcratif lors dune ingestion rpte annuellement (g.L-1) CMT 32 52 19 35 30 64 54 123 67 133 + 50 % du volume 50 % du volume deau deau 21 35 13 23 20 43 36 82 45 90 64 100 40 70 60 130 100 250 130 27

ge

1 2 ans > 2 7 ans > 7 12 ans > 12 17 ans Adulte > 17 ans

Tableau VII-XII : Scnario dexposition chronique : Concentrations maximales tolrables de MC-LR pour leaux usage rcratif lors dune ingestion quotidienne dun adulte de 60 kg.
Masse corporelle (kg) Volume deau ingre (L) Concentration maximale tolrable pour les eaux usage rcratif lors dune ingestion quotidienne (g.L-1) CMT 12 + 50 % du volume 50 % du volume deau deau 8 24

Cyanotoxine

Microcystine -LR

60

0,200

3.4.3. Prise en compte de la part relative lie aux autres apports journaliers
Les CMTs calcules en utilisant la cl de rpartition arbitraire propose par lOMS, pour la DJT de la MC-LR entre leau de boisson et leau de baignade sont prsentes, titre informatif, sur le tableau VII.7.

Tableau VII-XIII : Scnario dexposition chronique : rpartition arbitraire de la DJT entre leau alimentaire et leau de baignade et dduction des concentrations maximales tolrables dans leau de baignade pour un adulte de 60 kg.
Pourcentage de la DJT chronique attribue leau de baignade (%) 20 CMT de MC-LR Masse corporelle (kg) Volume deau mL CMT (g.L-1) CMT 50 % du volume deau (g.L-1) 4,8 CMT + 50 % du volume deau (g.L-1) 1,6

60

200

2,4

CMT pour leau potable correspondant 80 % de la DJT = 1 g.L-1

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3.5. Principaux enseignements de lvaluation de risques

3.5.1. Populations risque
Les calculs montrent que, pour les expositions aigus et rptes annuellement, ce sont les enfants de 2 7 ans qui sont les individus les plus exposs aux cyanotoxines. Ces donnes sexpliquent par le ratio masse corporelle sur le volume deau ingr ; en effet, le volume deau attribu est le mme pour tous les individus prsentant une masse corporelle gale au suprieur 12 kg. La tranche dge 1 2 ans (masse corporelle moyenne de 10 kg) est moins expose que la tranche dge 2 7 ans car le volume deau ingr accidentellement assign par dfaut est infrieur (100 mL). Rappelons que le volume deau, retenu par dfaut par le NHMRC pour les enfants de 10 kg (100 mL), est considr par les experts de lAfsset comme plus pertinent que les 250 mL assigns par lOMS aux enfants dune masse corporelle suprieure 15 kg, en particulier si lon considre que cette tranche dge est plus surveille par les parents que les enfants de 2 7 ans.

3.5.2. Concentrations risque

Les CMT obtenues pour chaque toxine en fonction du type dexposition et permettant de garantir labsence deffets indsirables pour la population la plus expose sont synthtises dans le tableau VII-XIV.

Tableau VII-XIV : Concentrations maximales tolrables calcules pour les diffrentes toxines en fonction du type dexposition.
Cyanotoxines MC-LR MC-LR MC-LR MC-LR Saxitoxines Type dexposition aigu sub-chronique chronique (100% de la DJT) chronique (20 % de la DJT) aigu CMT valeur minimale (g.L-1) 80 13 8 1,6 22,4 CMT maximale (g.L-1) 440 70 24 4,8 123,2

Les concentrations maximales tolrables en MC-LR pour leau usage rcratif permettant de garantir labsence deffets nocifs pour les tranches dge les plus exposes sont celles obtenues avec le scnario sub-chronique (13 70 g.L-1). La valeur correspondant la limite basse est proche des valeurs guides prconises par lOMS (entre 2 et 10 g.L-1) pour un risque faible, par le NHRMC (8 g.L-1 pour les enfants) et par lINSPQ (16 g.L-1 pour les enfants). Bien quil soit difficile destimer la rpartition relative de la DJT entre les eaux de baignade et les eaux potable, les valeurs obtenues en appliquant la rpartition arbitraire de la DJT prconiss par lOMS, (80 % pour leau potable et 20 % pour les autres sources), des concentrations maximales tolrables ont t calcules. Ces valeurs de 1,6 4,8 g.L-1 restent dans lintervalle des concentrations basses prconises pour les eaux de baignade par lOMS. Au vu de ces calculs et constatant que les concentrations maximales tolrables obtenues avec les hypothses les plus protectrices restent en dessous de 13 g.L-1, les experts du groupe de travail Afsset considrent que la valeur limite de qualit en MCs (somme de la concentration de tous les drivs de MC) pour interdire la baignade et la pratique des activits nautiques par des enfants et des adultes dbutants, devrait, au moins compte tenu des divergences exprimes, ne pas dpasser la concentration maximale tolrable de 13 g.L-1. Cette valeur devrait saccompagner dun facteur de +/- 5% ce qui permet de prendre en compte lincertitude associe aux techniques analytiques du dosage des microcystines (cf. chapitre III de ce mme rapport). Il est souligner quen France, la valeur limite de qualit recommande actuellement par les autorits sanitaires pour linterdiction de la baignade avec maintien limit des activits nautiques, 25 g.L-1 +/- 5 % en MC-LR, se situe dans la gamme de valeurs basses obtenues avec les scnarii dexpositions sub-chroniques et de valeurs hautes obtenues avec les scnarii dexpositions chroniques.

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En ce qui concerne la cylindrospermopsine et la saxitoxine rappelons ici quen labsence de mthode analytique valide (cf. Chapitre II de ce mme rapport) et de donnes sur la frquence et lamplitude de la concentration de cylindrospermopsine dans les eaux de baignade, les experts ont considr quil ntait pas pertinent de proposer une valeur limite de qualit pour les eaux de baignade. Pour ces mmes raisons et du fait que pour lanatoxine a, il nexiste pas de VTR valide, ni de protocole de prlvement permettant de bien estimer la contamination dun cours ou plan deau aucune valeur limite de qualit nest propose. Nanmoins, il convient de signaler que la valeur de 40 g.L-1 propose comme concentration maximale tolrable dans leau de baignade par lINSPQ peut servir provisoirement, en lattente de lacquisition de connaissances et de nouvelles donnes, comme rfrence en cas de situation dalerte avre. Ces situations dalerte sont, en effet, probables dans la mesure o des tudes ont pu dmontrer que la mort de chiens tait attribuable lingestion deau douce dun cours deau de lhexagone contamine avec de lanatoxine a (Gugger, et al. 2005). En outre, les sites fortement suspects pourraient faire lobjet des campagnes de collecte des donnes.

3.6. Limites de qualit relatives la concentration en cellules de cyanobactries dfinies par une approche probabiliste
La probabilit de dpassement des concentrations maximales tolrables de MCs dans les eaux rcratives les plus protectrices en fonction du nombre de cellules de cyanobactrie a t ralise daprs une rgression logistique partir des donnes disponibles sur la base Afssa-Afsset. Pour ce faire 228 rsultats de prlvements raliss en eau de baignade et 272 en eaux destines aux activits aquatiques ont t considrs. Ils prsentaient paralllement un dnombrement des cyanobactries non nul et un dosage de la concentration en MCs suprieur ou infrieur une limite de dtection de 0,16 g.L-1. Les limites de qualit relatives la concentration de MCs dans les eaux rcratives proposes par les experts ont t retenues. Ces calculs ont t raliss en appliquant la formule suivante :

logit(PMC>S) = + x log(NbCC)

o :
logit(P) = log(P/(1 P)) est la fonction logit ; PMC>S est la probabilit que la concentration en microcystines dpasse la valeur seuil S ; NbCC est le nombre de cellules de cyanobactries ; et sont les coefficients de la rgression estims grce aux rsultats de prlvements.

Ce modle est ajust sur les donnes disponibles au travers dune variable MCS qui vaut 1 lorsque la concentration en microcystines dpasse la valeur dexposition limite S, (8 ou 13 g.L-1) et 0 dans le cas contraire. Les rsultats sont prsents sur le tableau VII-XV.

Tableau VII-XV : Probabilit de dpassement des limites de qualit relatives aux MCs dans les eaux rcratives prconises dans cette tude en fonction de labondance des cyanobactries.
Nombre de cyanobactries.mL-1 1 000 10 000 20 000 50 000 100 000 200 000 500 000 Seuil MCs = 8 g.L-1 BE 0,00 0,02 0,02 0,04 0,06 0,10 0,16 IC 95 % 0,00-0,02 0,01-0,05 0,01-0,06 0,02-0,08 0,04-0,11 0,06-0,14 0,12-0,21 BE 0,00 0,01 0,01 0,02 0,03 0,05 0,09 Seuil MCs = 13 g.L-1 IC 95 + % 0,00-0,01 0,00-0,03 0,00-0,04 0,01-0,05 0,01-0,07 0,03-0,09 0,06-0,14

* BE = best estimate. Valeur de meilleure estimation dans la prdiction. ** IC = Intervalle de confiance ( 95 %) de la prdiction.

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Les donnes releves sur des eaux de baignade et de loisirs aquatiques collectes entre 2002 et 2004 permettent de montrer que lorsque le nombre de cyanobactries est de : 100 000 cellules.mL-1, 1 7 % de prlvements ont une probabilit significative ( 95 %) de dpasser une valeur limite de qualit de 13 g.L-1 et 4 11% de prlvements une probabilit significative ( 95 %) de dpasser une valeur limite de qualit de 8 g.L-1 ; 20 000 cellules.mL-1, de 0 4 % et de 1 6 % de prlvements ont une probabilit significative (95 %) de dpasser, respectivement, une valeur limite de qualit de 13 g.L-1 ou de 8 g.L-1. Ces donnes montrent quil existe probablement des situations pour lesquelles la prsence de 100 000 cellules.mL-1 de cyanobactries potentiellement toxinognes pourrait conduire au dpassement des valeurs limites de qualit les plus conservatrices calcules pour les jeunes enfants. Ces situations seraient cependant assez rares.

3.7. Conclusions et recommandations

Les cours et plans deau de zones amnages ou non pour la baignade et/ou pour la pratique dautres activits rcratives sont des sources ventuelles dexposition aux cyanotoxines lors de ces activits. Pourtant, seule une partie de ces zones fait lobjet de recommandations rglementaires de surveillance de la prolifration de cyanobactries et de la contamination des eaux par les microcystines. Les experts soulignent la ncessit de disposer de donnes autant sur les sites amnags que non amnags afin destimer de manire raliste lexposition aux cyanotoxines de lensemble de la population franaise lors des activits rcratives. Lamont des lieux de baignades est galement prendre en compte en raison de la prsence de biofilms contenant des cyanobactries benthiques potentiellement neurotoxiques et de leur dplacement dans un cours deau. En effet, sous certaines conditions environnementales, ces biofilms peuvent se dcoller de leur support (sdiment, cailloux,) et tre transports en aval par le courant. Les experts estiment, daprs leurs connaissances et leur exprience de terrain, que lexposition par la baignade ou la pratique rgulire dune activit de loisir aquatique est une exposition rpte annuellement et de manire discontinue sur une vie entire. Ce type dexposition ne correspondant pas exactement une dfinition dexposition classique et accepte au niveau international, deux positions sur la valeur toxicologique repre utiliser pour estimer les concentrations maximales tolrables de cyanotoxines pour les eaux rcratives hors exposition accidentelle aigu, sont apparues parmi les experts : une approche sub-chronique et une autre chronique : pour les enfants et selon des hypothses dexposition rptes annuellement et des hypothses dingestion de volumes deau particulirement maximalistes (375 mL-1), les concentrations maximales tolrables calcules selon un scnario dexposition sub-chronique se situent dans lintervalle de 13 g.L-1 70 g.L-1 en MC-LR ; pour un adulte de 60 kg en utilisant la DJT dfinie par lOMS correspondant une exposition chronique la MC-LR, les concentrations maximales tolrables varient entre 8 et 24 g.L-1 et de 1,6 4,8 g.L-1 si seulement 20 % de la DJA est assign leau de loisirs. Compte tenu des habitudes de comportement, des caractristiques des individus considrs dans les hypothses et scnarii retenus et du fait que la population la plus expose en France est la tranche dge des enfants de 2 7 ans, notamment en raison dun volume deau maximaliste (375 mL) rapport une faible masse corporelle (12 22 kg), le groupe dexperts de lAfsset considre : que la valeur limite de qualit relative la somme de la concentration de tous les drivs de MCs dans les eaux rcratives devrait, au moins compte tenu des divergences dexpertise, ne pas dpasser une valeur de 13 g.L-1 +/- 5%. quen labsence de protocole de prlvements permettant de bien estimer la contamination dun cours ou plan deau par des cyanobactries benthiques potentiellement toxiques et dans lattente de la progression des connaissances, toute mortalit danimaux potentiellement attribuable lingestion de ces cyanobactries (prsence sur les roches ou les sdiments dun biofilm important ou de plaques flottantes, cyanobactries en quantits importantes dans les estomacs des animaux morts, symptmes au moment de la mort correspondant ceux causs par les effets des neurotoxines ) devrait se traduire par une interdiction temporaire de la baignade en lattente des rsultats des analyses permettant de dterminer prcisment la prsence de cyanotoxines et/ou lorigine de la mort de lanimal. Une information doit tre affiche sur les lieux frquents. Cette interdiction pourra se prolonger sil savre que les cyanobactries sont la cause du dcs de lanimal jusqu ce que les toxines ne soient plus dtectables ou que les espces en cause aient disparues depuis au moins une semaine. Les donnes de la base Afssa-Afsset montrent quun dnombrement concomitant de cyanobactries et un dosage de microcystines nont t effectus que sur 500 prlvements. 7,6 % et 12 % dentre eux ont, respectivement, dpass les concentrations limites dexposition de 13 g.L-1 et de 8 g.L-1.

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Lanalyse statistique des donnes de la base, avec toutes les limites relatives ces donnes, a permis de montrer que les probabilits statistiquement significatives (95 %) de dpasser les concentrations maximales dexposition les plus protectrices de 8 et 13 g.L-1 sont infrieures , respectivement 1 6 % et 0 4 % des chantillons lorsque les prlvements contiennent 20 000 cyanobactries par mL. Par consquent, considrant que la concentration maximale tolrable pour la somme de MCs ne pas dpasser dans les eaux de baignade, 13 g.L-1, et que lanalyse statistique des donnes de la base Afssa-Afsset montre que 0 4 % des prlvements prsentant un nombre de cyanobactries de 20 000 cellules.mL-1 pourraient dpasser cette valeur, les experts proposent de retenir : la valeur de 20 000 +/- 20% cellules.mL-1 comme seuil dalerte pour passer une surveillance hebdomadaire ; la valeur de 20 000 cellules.mL-1 +/- 20% si cette communaut est domine par un ou plusieurs genres potentiellement toxiques pour dclencher la recherche et le dosage des toxines ou deffets toxiques globaux et en tout tat de cause de MCs selon le genre dominant ; provisoirement la valeur de 100 000 +/- 20% cellules.mL-1 pour linterdiction de la baignade comme mesure conservatoire sans limiter les autres activits rcratives. Cette mesure conservatoire permet de prendre en compte le fait que de nombreuses toxines ne sont pas doses ce jour (anatoxines, BMAA,) et que peu de donnes sont disponibles quant la prsence ou labsence de ces toxines dans les genres de cyanobactries frquemment prsents dans les cours et plans deau. La valeur propose permettrait donc de prvenir une ventuelle exposition des individus des quantits leves de ces toxines lors dune prolifration massive de cyanobactries. Cette recommandation devrait faire lobjet dune rvaluation lorsque les connaissances auront progresses. Le public doit tre inform par laffichage sur les lieux concerns des raisons ayant conduit linterdiction.

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Points retenir Les cours et plans deau destines la baignade et/ou la pratique de sports nautiques de sites ou zones amnages ou non constituent des sources ventuelles dexposition aux cyanotoxines. Seuls les sites de zones dont la frquentation est rptitive pour la baignade et/ou pour des activits nautiques font lobjet de recommandations de surveillance sanitaire relatives la prsence de cyanobactries et de cyanotoxines. Compte tenu des coutumes de vie et des caractristiques des individus considrs dans les hypothses et scnarii retenus, la population la plus expose en France est la tranche dge des enfants de 2 7 ans, notamment en raison dun volume deau maximaliste (375 mL) rapport une faible masse corporelle. Pour cette population la concentration maximale tolrable en MC-LR dans leau de baignade calcule pour une pratique discontinue dans lanne mais rpte chaque anne la plus protectrice est de 13 g.L-1. Pour un adulte de 60 kg, la concentration maximale tolrable en MC-LR calcule partir de la DJT, supposant une pratique quotidienne pendant 70 ans est de 8 g.L-1 et de 1,6 g.L-1 si seulement 20 % de la DJT est assigne leau de baignade. Ces valeurs sont infrieures la concentration actuellement recommande, donc plus protectrices car obtenues avec des hypothses maximalistes qui devraient permettre de garantir labsence deffets nocifs observables lis lingestion involontaire deau contamine par des microcystines lors de la baignade ou de la pratique de sports nautiques. Daprs les donnes de la base Afssa-Afsset, parmi les prlvements ayant fait lobjet concomitant dun dnombrement de cyanobactries et un dosage de MCs, la frquence de prlvements ayant dpasse la CMT de 13 g.L-1 est de 7,6 %. Ce pourcentage est probablement surestim dans la mesure o partir dun total de prlvements de 2 680 seul 500 ont fait lobjet dun dosage de MCs. Lanalyse statistique de ces donnes montre que 0 4 % des prlvements prsentant un nombre de cyanobactries de 20 000 cellules.mL-1 pourraient dpasser la concentration maximale tolrable de 13 g.L-1. Les experts recommandent de fixer : - un seuil dalerte 20 000 +/- 20 % cellules.mL-1 en remplacement du seuil actuel de 100 000 +/- 20 % cellules.mL-1. Ce seuil dclencherait : le passage une surveillance hebdomadaire, la recherche et le dosage des toxines ou deffets toxiques globaux si cette communaut est domine par un ou plusieurs genres potentiellement toxiques et en tout tat de cause la recherche de MCs selon le genre dominant ; - linterdiction temporaire de la baignade pour les enfants lors de toute mortalit danimaux potentiellement attribuable lingestion des cyanobactries benthiques en lattente des analyses permettant de dterminer prcisment lorigine de la mort de lanimal. Sil savre que les cyanobactries sont la cause du dcs de lanimal, linterdiction devrait se prolonger jusqu ce que les toxines ne soient plus dtectables ou que les espces en cause aient disparues depuis au moins une semaine ; - linterdiction de la baignade pour lensemble de la population sans restriction de la pratique de sports nautiques lorsquune abondance de 100 000 +/- 20% cellules.mL -1 est atteinte ainsi que lorsquil y a prsence dcumes ; - linterdiction de la baignade et de la pratique de sports nautiques une valeur seuil ne dpassant pas la concentration maximale tolrable de 13 g.L-1+/- 5 %, valeur permettant de garantir un niveau dexposition acceptable pour la population gnrale et pour les individus les plus exposs (2 7 ans). - pour toutes les situations dinterdiction, le public doit tre inform et les causes ayant conduit linterdiction indiques dans laffiche dinformation au public du site concern. Les experts conseillent llargissement du dispositif actuel dinformation du public aux individus frquentant un site non amnag lorsque celui-ci fait partie de la mme masse deau quun site amnag afin de rduire les risques dexposition.

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VIII. Synthse et recommandations

1. Synthse
Les cyanobactries sont des microorganismes procaryotes adapts des cosystmes trs varis et de nombreux genres se dveloppent en eau douce comme en eau marine. Ces microorganismes sont capables de se multiplier trs rapidement et peuvent conduire lapparition dune coloration trs intense de leau voire dcumes en surface. Ces cumes peuvent saccumuler, dans les zones o le vent les pousse, sous la forme de dpts. Certaines souches de diffrentes espces ont t remarques pour leur capacit produire des toxines, essentiellement intracellulaires et libres dans le milieu en cas datteinte de lintgrit de la cellule. Les toxines produites par les cyanobactries sont extrmement nombreuses. Elles sont classes selon leur type daction toxique et en fonction de leur structure molculaire : Hpatotoxines : microcystines, nodularines, cylindrospermopsines ; Neurotoxines : anatoxines, saxitoxines, et rcemment la BMAA. Des effets irritants ou allergisants ont t dcrits,mais les molcules responsables ne sont pas clairement identifies. En milieu marin, dautres organismes, notamment des dinoflagells, sont connus pour produire des phycotoxines qui peuvent contaminer les fruits de mer. Parmi ces phycotoxines, les saxitoxines sont identiques celles produites par certaines cyanobactries deau douce. La production de cyanotoxines lors de certaines prolifrations de cyanobactries a t observe sur tous les continents. Ces toxines ont pu conduire un nombre restreint dintoxications humaines ou animales avres, parfois mortelles. LOMS a traduit cette proccupation mondiale par la publication dun ouvrage de rfrence, Toxic cyanobacteria in water, en 1999. Bien quaucun cas dintoxication humaine confirme nait t signal jusqu prsent en France, la Direction gnrale de la sant a saisi lAfssa et lAfsset dune demande dvaluation des risques lis la prsence de cyanobactries dans les eaux destines la consommation humaine et dans les eaux de baignade.

1.1. Que sait-on de la prsence des cyanobactries toxinognes et des cyanotoxines en France ?
La prsence, en France mtropolitaine, de prolifrations de cyanobactries potentiellement toxinognes est rgulirement confirme dans les eaux continentales et parfois accompagne de celle de cyanotoxines. Les cyanotoxines identifies de faon formelle en France appartiennent aux familles des microcystines et des anatoxines, qui sont souvent prsentes sous la forme dun mlange de plusieurs variants de la mme famille. La reprsentativit des donnes recueillies dans le cadre du prsent rapport est difficile valuer compte tenu du fait que les donnes obtenues proviennent essentiellement de louest et du centre de la mtropole. Les distributions gographique et temporelle des prolifrations de genres potentiellement toxinognes et de la production de microcystines sont imparfaitement connues lchelle du territoire. Nanmoins, le dveloppement de cyanobactries potentiellement toxinognes semble pouvoir survenir sur lensemble du territoire mtropolitain et probablement aussi dans les DOM-TOM, bien quaucune donne nait t reue concernant ces zones. Les informations sur la prsence de cyanobactries dans les milieux saumtres et marins sont galement parcellaires. Pour les toxines autres que les microcystines, des pisodes de contamination par des anatoxines ont t signals en France. Des nodularines, des cylindrospermopsines et des saxitoxines ont t identifies dans dautres pays europens. En labsence de recherche cible, il est impossible dexclure leur prsence en France. Les distributions gographique et temporelle de ces cyanotoxines restent inconnues. La raret et la faible reprsentativit des donnes recueillies sur les cyanobactries et les cyanotoxines rsultent notamment : de labsence dobligation de surveillance de ces paramtres dans les eaux brutes destines la production deau dalimentation ou aux activits de loisirs ;

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 de linscription rcente de la seule microcystine-LR, parmi toutes les toxines potentielles, dans les paramtres rglementaires pour leau dalimentation ; du fait quil est difficile de dfinir les prolifrations algales, critre retenu dans le Code de sant publique pour dclencher lanalyse de la microcystine-LR ; de labsence de mthodes analytiques valides permettant didentifier les autres cyanotoxines que la MC-LR, ce qui limite toute conclusion sur leur incidence en France ; du manque de disponibilit des talons ncessaires pour effectuer les dosages. Il nexiste pas de rseau de surveillance des cyanotoxines et/ou des cyanobactries lchelle nationale permettant lacquisition de donnes, comme cela peut-tre le cas concernant les phycotoxines marines et les fruits de mer. Des analyses sont nanmoins ralises, mais les rsultats ne sont pas toujours intgrs dans les bases de donnes nationales existantes sur la qualit des eaux : SISE-Eaux et SISE-Baignades, Systme de donnes sur leau (SDDE). Outre les apports en phosphore et en azote dans les eaux continentales, les facteurs et les mcanismes conditionnant lmergence des prolifrations de cyanobactries sont complexes. Le potentiel toxinogne des diffrents genres de cyanobactries dpend en grande part de caractristiques gntiques, dont linvestigation doit tre poursuivie, en lien avec lvolution de la classification taxonomique de ces organismes. De plus, les mcanismes molculaires de rgulation de la toxinogense ne sont que partiellement lucids. Compte tenu de ces limites, il nexiste pas aujourdhui de modle de prdiction des prolifrations, et encore moins de la production des toxines, en fonction des caractristiques physico-chimiques des ressources. Cependant, les volutions climatiques attendues (hydrologie, temprature, ensoleillement) pourraient avoir une influence sur la dynamique des cyanobactries et conduire des changements aussi bien dans la localisation des prolifrations que dans leur frquence, leur intensit ou la nature des organismes colonisateurs.

1.2. Que sait-on des effets toxiques de ces composs ?

Les principaux effets aigus des diffrentes familles de cyanotoxines sont identifis, au moins chez lanimal. La plupart des tudes toxicologiques concernent la recherche deffets trs court terme et la dtermination dune dose ltale 50 % chez les rongeurs. Les informations concernant des aspects toxicologiques plus spcifiques (neurotoxicit, tratogense, immunotoxicit, effets sensibilisants et allergiques) sont extrmement fragmentaires. Des tudes dexposition sub-chronique ne sont disponibles que pour quelques toxines (microcystine-LR, anatoxine-a, cylindrospermopsine). Concernant le pouvoir cancrogne, des tudes in vitro ont permis didentifier, pour certaines toxines, des caractres lis au processus de cancrisation, comme la capacit former des adduits ou provoquer des cassures de lADN. Des tudes in vivo rvlent un pouvoir de promotion tumorale avr chez lanimal pour la MC-LR et la nodularine. Cependant, lensemble des tudes permettant de qualifier avec certitude un compos de cancrigne pour lhomme na t ralis pour aucune de ces toxines. La caractrisation des effets toxiques de ces molcules reste donc trs lacunaire : une seule valeur toxicologique de rfrence (VTR) a t propose par lOMS, pour la microcystine-LR. Elle repose sur une exprimentation de 13 semaines chez la souris et conduit, aprs application dun facteur de scurit de 1000, une dose journalire tolrable de 0,04 g.kg-1.j-1 par voie orale pour une exposition vie entire ; aucune relation dose-effet ou dose-rponse concernant les effets aigus des diffrentes cyanotoxines nest disponible ; lvaluation de la toxicit chronique des chefs de file de certaines familles de toxines a juste dbut.

1.3. De quelle faon peut-on tre expos ces toxines ? Des intoxications par les cyanotoxines ont-elles t recenses en France ?
Exprimentalement chez lanimal, des effets lis aux cyanotoxines ont t observs suite une exposition par ingestion ou par inhalation, voire par contact pour certains effets irritants ou allergisants. Les modalits dexposition rapportes dans la littrature lors dintoxications animales impliquent essentiellement lingestion deau brute lors de la baignade ou de labreuvement dans le milieu naturel. Chez lhomme, en dehors des intoxications rsultant dune dialyse avec une eau insuffisamment traite, les pisodes dintoxication dcrits dans la littrature concernent la baignade en milieu naturel ou la consommation deau de boisson dont le

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traitement tait insuffisant pour liminer les toxines. Pour ce dernier mode dexposition, il apparat que, parmi les personnes touches, les enfants ont dvelopp des symptmes plus svres. Cette observation est actuellement attribue au volume deau consomm par unit de masse corporelle, particulirement lev chez les enfants, et non une sensibilit particulire aux toxines. Dautres sources dexposition par voie alimentaire aux cyanotoxines sont suspectes, il sagit notamment : de la chair dorganismes aquatiques (poissons, crustacs, mollusques) se dveloppant dans une eau contamine ; de lgumes feuilles irrigus par aspersion avec une eau contamine ; de complments alimentaires base de cyanobactries. Les rares donnes publies de contamination relatives ces diffrentes sources dexposition portent sur des produits chantillonns ltranger et lacquisition de donnes complmentaires est actuellement limite par les possibilits analytiques. La biodisponibilit des toxines accumules dans ces diffrentes matrices est insuffisamment value. Elle apparat forte pour les saxitoxines et la BMAA, mais reste valuer pour les autres toxines. Aucun cas dintoxication humaine en relation avec ces sources dexposition na t document. En revanche des intoxications animales par consommation dorganismes aquatiques sont suspectes dans diffrents pays trangers, dont certains pays europens. Lingestion deau contenant des toxines ou des cyanobactries toxinognes est donc considre comme la principale voie dexposition aux cyanotoxines, bien que la contribution dautres sources et dautres voies dexposition ne soit pas quantifie. lheure actuelle en France, aucune intoxication humaine na t impute aux cyanotoxines. En revanche, depuis 2002, lintoxication dun peu plus de trente chiens par des cyanotoxines de type neurotoxines a t suspecte en mtropole. Pour deux chiens, lintoxication par des anatoxines a t confirme. Outre les traitements symptomatiques et gnraux pour lutter contre leffet des intoxications, il nexiste pas dantidote spcifique des cyanotoxines. Il reste souvent difficile de confirmer ltiologie de ces intoxications. Le manque de connaissances prcises sur les effets de ces toxines et sur leur dosage contribue ce quaucune tude pidmiologique nait t ralise en France sur ce sujet.

1.4. Que peut-on dire concernant les risques lis aux cyanotoxines en France ?
Outre les lacunes dans les donnes toxicologiques et le manque de VTR prcdemment signal pour ces toxines, le niveau de connaissance sur les expositions humaines aux cyanotoxines est trs insuffisant, notamment car la nature, les concentrations et la frquence de contamination des sources sont insuffisamment dcrites. Il nest donc pas possible didentifier les populations ventuellement concernes de faon exhaustive et de dfinir des scnarios reprsentatifs de la ralit de lexposition. De plus, il est encore impossible dlaborer des scnarios intgrant les diffrentes voies dexposition (inhalation, ingestion...). Compte tenu de ce contexte, seules des tendances peuvent tre esquisses concernant les risques lis la microcystine-LR. Concernant les effets aigus : la probabilit dexposition par leau de distribution publique une concentration de microcystine-LR susceptible dentraner lapparition court terme deffets sur la sant semble nulle ngligeable au regard des donnes disponibles en France. Ces donnes savrent cependant rares et leur reprsentativit ne peut tre estime. Il nest donc pas possible de fournir une valuation chiffre de ce risque. Concernant les effets long terme : la microcystine-LR possde des caractres qui contribuent au processus de cancrisation. Ces effets sont encore insuffisamment valus lheure actuelle et ce risque ne peut tre estim, quelles que soient les modalits dexposition envisages (alimentation ou activits rcratives). Pour toutes les autres cyanotoxines, les connaissances toxicologiques comme les donnes de contamination sont trs insuffisantes et ne permettent pas de conduire une valuation du risque sanitaire li lexposition par leau de boisson ou au cours des activits de loisirs en eau douce.

1.5. Quelles sont les possibilits de matrise de lexposition aux cyanotoxines ?

La prvention long terme des prolifrations de cyanobactries, et donc des risques de production de cyanotoxines, repose sur la rduction des apports nutritifs, et en particulier des apports de phosphore aux ressources.

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Concernant lexposition par le biais de leau dalimentation, la littrature et lanalyse de la base de donnes constitue dans le cadre du prsent rapport tendent montrer que le risque dexposition aux microcystines ou aux cellules de cyanobactries peut thoriquement tre matris de faon satisfaisante, condition de veiller loptimisation des conditions de pilotage des filires de traitement et dadapter celles qui ne sont pas encore mises niveau pour traiter ces dangers. En labsence de donnes reprsentatives de la contamination des ressources et de leau traite ou dune typologie prcise des ressources susceptibles dtre affectes par des prolifrations de cyanobactries toxiques, il nest pas possible dapprcier ladquation du parc de filires de traitement actuellement install en France avec la qualit des eaux traiter. Toutes les filires de traitement des usines de production deau dalimentation concernes par ces toxines ne sont pas systmatiquement au niveau requis pour matriser cette exposition en toutes circonstances : la formation des personnels, la surveillance de la ressource et de leau produite et les filires de traitement restent parfois optimiser. Trop peu de donnes sont disponibles sur lefficacit des filires liminer les autres cyanotoxines. Lanalyse de la base de donnes, malgr les limites de sa reprsentativit, montre que les rendements moyens dlimination des cellules de cyanobactries par les filires sont trs suprieurs aux rendements moyens dlimination des toxines libres. Ceci plaide en faveur de la non-utilisation dalgicides en amont des filires de traitement, afin de favoriser la rtention des toxines sous forme intracellulaire conjointement aux cellules, au lieu dimposer le traitement des toxines sous forme dissoute. En effet, le sulfate de cuivre est le plus souvent utilis sans tude des impacts sur le systme global eau-sdiment-biocnose et parfois mme sans suivi du relargage des toxines, alors que son accumulation dans les sdiments et son transfert en aval sont avrs et que ces inconvnients sont insuffisamment valus.

1.6. Quels sont les moyens disponibles pour la surveillance des risques lis aux cyanotoxines ?
Les systmes de production deau destine la consommation humaine ou lirrigation des cultures, les sites de baignade et des activits aquatiques rcratives, les activits de pche, professionnelle, ne font pas toujours lobjet dune surveillance suffisante et adapte ces dangers. Aux dires des acteurs de terrain, le cadre et les obligations de surveillance pour certaines de ces situations ne sont pas assez prcis. Concernant les effets sanitaires long terme, de type cancers hpatiques, lInstitut de veille sanitaire (InVS) estime que lpidmiologie ne plaide pas pour la mise en place dun suivi spcifique et ne fournit pas dlments probants de la faisabilit dune telle surveillance, compte tenu des autres tiologies possibles. En revanche, il est utile dorganiser une veille pidmiologique des effets aigus sur la sant animale et humaine de toutes les prolifrations de cyanobactries. Un programme de surveillance nationale des pidmies dorigine hydrique et des pollutions accidentelles de leau distribue est en cours de ralisation lInVS. Parmi les outils mis disposition dans le cadre de ce programme, un systme de recueil dinformation sur les pollutions accidentelles des eaux dalimentation (PADEA2) permettra de pointer les tendances pidmiologiques et tiologiques de ces vnements. Ce dernier point prend en compte les cyanotoxines, mme si le systme nest pas spcifique des risques lis aux cyanobactries. En parallle de cette surveillance des effets des cyanotoxines, et compte tenu de ses limites, il apparat ncessaire de suivre directement par des analyses la prsence des cyanotoxines dans les diffrentes sources dexposition. Concernant les microcystines, un seul projet de norme ISO TC 147/SC2, dont la dernire version date du 10/01/2005, permet la dtermination, dans leau brute ou leau dalimentation, des microcystines -LR, -RR, -YR par CLHP-UV ou par couplage CLHP-spectromtrie de masse. Il na pas encore t mis en place dessai daptitude interlaboratoire pour ces paramtres. Les autres mthodes de dosage des microcystines (mthodes immunologiques) nont pas fait lobjet de travaux dintercomparaison grande chelle. Concernant les autres sources dexposition (biomasses plagiques et benthiques, sdiments, aliments), et notamment la chair des organismes aquatiques, lacquisition de donnes relatives la contamination de ces produits par les microcystines est fortement limite par labsence de mthodes valides de leur dosage dans ces matrices complexes. Le dveloppement de la surveillance des autres cyanotoxines reste trs limit, en raison de labsence de mthodes analytiques valides et de difficults dapprovisionnement en talons, lorsquils existent. Il est possible en outre de recourir des indicateurs indirects qui alertent de leur prsence potentielle par la rvlation dune activit biochimique (test phosphatase, test actylcholinestrase) ou dune activit biologique

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(bioessais sur animaux ou sur lignes cellulaires), bien que ces mthodes ne soient pas normalises et que certaines impliquent des manipulations sur animaux. Enfin, linstar de ce qui est pratiqu pour la surveillance des phycotoxines marines, il est frquemment propos, pour rationaliser le recours aux analyses de toxines, de surveiller la prsence de cyanobactries ou des paramtres indicateurs de leur prsence. Concernant les cyanobactries elles-mmes, lanalyse du phytoplancton (identification et dnombrement) par observation microscopique apparat comme la mthode la plus spcifique. Elle permet notamment lidentification, par des spcialistes, des genres toxinognes et fait lobjet dun projet de norme CEN prEN15204 soumis enqute en dcembre 2005 avant le vote dapprobation. Dautres mthodes, bases sur la composition pigmentaire spcifique des cyanobactries, semblent galement prometteuses mais aucune nest encore valide. Les paramtres indirects et non spcifiques tels que la mesure de la chlorophylle-a, ou le suivi des variations de la turbidit, du pH ou des concentrations en oxygne ou en CO2 sont utiliss par diffrents acteurs pour dceler lapparition de prolifrations et en suivre la cintique. La mesure de ces paramtres est normalise, mais linterprtation des rsultats par rapport la surveillance des cyanobactries ncessite nanmoins une observation microscopique conjointe du phytoplancton. Pour exercer cette surveillance, la France dispose de comptences au sein de laboratoires ingalement rpartis sur le territoire et dont les prestations (identification et dnombrement microscopiques, analyse et quantification des toxines, tests de toxicit ou dallergie ), en labsence de tout rfrentiel normalis, peuvent prsenter des difficults dinterprtation. Il nexiste pas en France de laboratoire proposant de doser en routine les toxines autres que les microcystines. Pour ces dernires, il peut savrer difficile didentifier les laboratoires pour faire procder aux analyses, notamment en situation durgence. La liste de ces comptences, publie dans la circulaire du 5 juillet 2005 relative aux modalits dvaluation et de gestion des risques sanitaires face des situations de prolifrations de micro-algues dans les zones de baignade et de loisirs nautiques, nest pas aisment accessible tous les acteurs de terrain. Il nexiste pas de structure nationale de rfrence, tels que celles consacres dautres microorganismes effets pathognes ou dautres contaminants. Le nombre de limnologistes et de taxonomistes susceptibles dassurer des dterminations fiables est insuffisant et les techniciens de laboratoire capables didentifier et de dnombrer les cyanobactries restent former. Enfin les stratgies dchantillonnage et de prlvement ne sont pas harmonises et ne prennent pas toujours en compte lhtrognit spatiale mais galement temporelle de la distribution des cyanobactries et de leurs toxines dans les diffrents compartiments pouvant conduire une exposition. Par ailleurs, des questions demeurent quant la stabilit des toxines prleves, aux conditions de temprature et aux temps de transport avant analyse, mais aussi concernant le flaconnage et les ventuelles oprations de stabilisation ou de prtraitements ncessaires.

2. Recommandations
la vue de ce constat, les experts du groupe de travail cyanobactries et cyanotoxines de lAfssa et les experts du groupe eau de baignade de lAfsset expriment la ncessit de prter une plus grande attention cette problmatique et souhaitent que soient retenus trois thmes majeurs composs de 8 principaux axes de recommandations, indispensables pour amliorer lvaluation des risques et renforcer leur prvention et leur matrise. Permettre lvaluation des risques lis aux cyanotoxines : - acqurir des connaissances sur les toxines et les ressources ; - identifier les ressources risques et valuer lefficacit des traitements de leau destine la consommation humaine ; - dvelopper les moyens analytiques et harmoniser les mthodes, de lchantillonnage la mesure ; - dvelopper une stratgie de surveillance des toxines et de leurs effets adapte aux diffrents usages. Renforcer la prvention et la matrise des risques : - renforcer la prvention ; - favoriser la gestion. Recommandations spcifiques la problmatique des baignades et autres activits aquatiques rcratives. - concernant les suivis des masses deaux et les seuils de qualit ; - concernant lidentification et le classement des lieux dexposition.

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La mise en uvre de ces recommandations suppose diffrentes actions reposant sur lacquisition de donnes laide doutils analytiques existants mais galement sur la recherche et le dveloppement doutils nouveaux pour lacquisition de connaissances fondamentales et appliques et le dveloppement de modles. Avant de les dtailler, les experts rappellent quil importe quun programme national de financement de recherches spcifiques aux problmatiques lies aux cyanobactries soit propos, linstar du programme national efflorescences algales toxiques (PNEAT) mis en place en milieu marin.

2.1. Permettre lvaluation des risques lis aux cyanotoxines

2.1.1. Acqurir des connaissances sur les toxines et les ressources
Renforcer les programmes de recherche portant sur la toxicit des cyanotoxines. Cette action doit porter sur les effets aigus et long terme des cyanotoxines (exposition chronique,cancrogense et maladies neurodgnratives) en vue de lobtention des relations doses-rponse et de ltablissement des VTR. Ceci suppose : - didentifier et de caractriser la structure des toxines nouvelles ; - de raliser des essais de toxicit subchronique et chronique pour un plus grand nombre de toxines ; - de raliser des essais dvaluation de la cancrognicit sur des toxines purifies et des mlanges ; - de complter la connaissance de volets toxicologiques plus spcifiques tels que : neurotoxicit, tratogense, immunotoxicit, effets sensibilisants et allergiques, ; - didentifier la nature des composs et les mcanismes lorigine de la dermatotoxicit et des irritations cutanes ; - dvaluer les diffrents effets biologiques (synergies, antagonismes) des mlanges complexes de cyanotoxines et de micropolluants organiques rencontrs dans les eaux continentales, en tenant compte des interactions possibles avec les produits de traitements de leau dalimentation. Acqurir suffisamment de donnes reprsentatives sur les cyanotoxines produites par les cyanobactries planctoniques et benthiques dans les milieux (eaux douces, saumtres et marines) lis des usages rcratifs, la production deau dalimentation ou de denres alimentaires, et ce pour lensemble de la mtropole et des DOM-TOM. Cette action constitue un pralable indispensable pour : - mesurer les variabilits gographiques et saisonnires afin de prciser selon les usages (baignade, production deau potable, pche), les sites et les priodes dexposition potentielle ncessitant une surveillance renforce et daffiner la matrise des risques ; - pouvoir tudier les dterminants et les mcanismes de rgulation du dveloppement des cyanobactries et de la production de toxines en conditions naturelles. Ceci suppose de coordonner des campagnes de prlvement et danalyse rparties sur toute lanne et sur au moins plusieurs rgions pilotes, selon une stratgie dchantillonnage statistiquement adapte. Cette action est immdiatement envisageable pour les toxines pour lesquelles les mthodes danalyse sont disponibles. Pour les autres toxines connues, il convient de dvelopper les outils analytiques. Dvelopper, entretenir et renseigner rgulirement, partir de celle ralise dans le cadre du prsent groupe de travail, une base de donne nationale comprenant lensemble des lments en relation avec la problmatique (climat, gographie, qualits des eaux, hydraulique, genres identifis, toxines analyses, pidmiologie ) et la rendre accessible tous les acteurs du domaine. Cette action a pour objet : - dtudier les facteurs agissant sur la dynamique des cyanobactries et leur production de toxine (hydrologie, temprature, ensoleillement) ; - dtudier limpact des volutions climatiques attendues sur ces facteurs, qui pourraient conduire une exposition plus tendue spatialement ou dans le temps ou plus importante quantitativement ; - de dvelopper des outils de prdiction. Poursuivre le soutien financier des projets de recherche consacrs la rvision de la classification des cyanobactries sous langle bactriologique afin de : - caractriser prcisment les espces toxinognes, connues ou nouvelles ; - permettre ltude du potentiel toxique des genres dun point de vue phylogntique et dvelopper de nouveaux critres dalerte concernant ce caractre.

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La France dispose, lInstitut Pasteur de Paris et au Musum National dHistoire Naturelle de Paris, dimportantes collections de cyanobactries indispensables la conduite de ces projets : la maintenance, le dveloppement et lusage de ce patrimoine pour la recherche, voire pour la production dtalons, doivent tre soutenus et encourags. Amliorer lidentification des voies et sources dexposition de lHomme aux cyanotoxines et quantifier la contribution de chacune lexposition globale. Cette action suppose : - damliorer les connaissances sur la rpartition des cyanotoxines dans les diffrents compartiments environnementaux (eau, sdiments, arosols) et biologiques (foie, muscle, SNC, feuilles, fruits) en tudiant la bioaccumulation dans les diffrentes sources alimentaires ; - dvaluer les concentrations de cyanotoxines dans les diffrentes sources alimentaires (eau, complments alimentaires, produits de la pche, produits du marachage ...) et dans les eaux usage rcratif ; - dtudier la biodisponibilit des cyanotoxines, selon les compartiments dorigine et les voies dexposition envisages ; - de mieux caractriser lexposition par voie orale, notamment les consommations de certaines sources alimentaires (complments alimentaires, produits de la pche, notamment deau douce) et les volumes deau ingrs lors de la baignade ou dautres activits nautiques, et lexposition par voie arienne, afin de pouvoir : mesurer la variabilit et lincertitude de lexposition pour permettre une aide la dcision dans les cas de non-conformit des eaux destines la consommation humaine, dvelopper un modle agrgatif permettant lestimation dun risque global en intgrant les expositions de type aigu, sub-aigu, chronique et sub-chronique, de dfinir prcisment les zones dusage pour les activits rcratives.

2.1.2. Identifier les ressources risques et valuer lefficacit des traitements de leau destine la consommation humaine
Identifier les ressources potentiellement concernes par des prolifrations de cyanobactries et utilises pour la production deau de consommation humaine ou pour des loisirs nautiques (en particulier les zones de baignade amnages et non amnages) et caractriser les populations desservies ou concernes. Cette action suppose de dvelopper une typologie hydromorphologique des ressources en eau utilises en AEP et loisirs nautiques en cohrence avec la mise en uvre de la Directive Cadre sur lEau afin de pouvoir relier ces informations avec celles des suivis de cellules et de toxines et les donnes mtorologiques pour : - identifier de faon prventive les sites risques ; - alimenter les modles mcanistiques expliquant les dynamiques des populations de cyanobactries ; - tester les hypothses du rapport de ltude Grand-Ouest (DGS et al. 2004) lchelle nationale, en relation avec diffrentes classes trophiques . Raliser systmatiquement des dosages de cyanotoxines en entre et en sortie des filires de traitement des eaux destines la consommation humaine en cas de prolifration de cyanobactries. Cette action permettra dapprcier lefficacit, sur un nombre suffisant de donnes, des diffrents types de filires en conditions normales dopration et permettra dintgrer cette composante dans une valuation de risque intgre amont-aval.

2.1.3. Dvelopper les moyens analytiques et harmoniser les mthodes, de lchantillonnage la mesure
Dvelopper les outils analytiques qui font dfaut pour tudier les cyanotoxines autres que la microcystine-LR et pour identifier de nouvelles cyanotoxines. Cette action suppose de : - dvelopper, valider et harmoniser des mthodes danalyse pour lensemble des cyanotoxines connues dans les matrices aqueuses ; - mettre au point et valider des mthodes de dosage des diffrentes cyanotoxines dans les matrices complexes (biomasses, sdiments, biofilms, aliments) et en particulier dans les sources alimentaires autres que leau pour affiner lvaluation de lexposition et du risque ; - rendre accessible aux laboratoires danalyses lapprovisionnement en talons, actuellement difficile ou impossible en raison de contraintes gopolitiques, voire de produire les talons manquants. Cette action pourrait sappuyer sur les collections franaises de cyanobactries de lInstitut Pasteur de Paris ou du Musum National dHistoire Naturelle de Paris ;

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- dvelopper des mesures de toxicit globale in vivo, mme si cette voie, actuellement employe dans le contrle sanitaire des coquillages, reste dun avenir incertain en raison des difficults et des contraintes rglementaires sur lexprimentation animale. Les laboratoires ne pouvant analyser toutes les toxines sur tous les chantillons suspects, certaines toxines tant peu ou pas analysables et le cot potentiel tant trop lev, la surveillance peut tre amliore par ce biais ; - favoriser lvaluation des sondes de dtection des cyanobactries mais galement le dveloppement danalyseurs, de capteurs ou de mthodes analytiques en ligne ou automatisables, permettant les dnombrements de cyanobactries et la dtection des toxines, de faon faciliter la surveillance de ces dangers. Standardiser les mthodes danalyse des cyanotoxines dj disponibles. Ceci suppose : - de finaliser le plus rapidement possible la norme analytique ISO pour le dosage dans leau des microcystines -LR, -RR, -YR par CLHP-UV ou par couplage CLHP-spectromtrie de masse ; - dharmoniser les protocoles et les stratgies dchantillonnage et de prlvements dans les eaux de surface, pour les cyanobactries benthiques et planctoniques ; - dtudier la stabilit des toxines dans les prlvements en fonction des conditions de temprature, des temps de transport avant analyse, du flaconnage afin de dfinir les ventuelles oprations de stabilisation ou de prtraitements ncessaires ; - de favoriser des travaux dinter-comparaison des diffrentes mthodes danalyse des microcystines ; - dencourager la normalisation de la mthode didentification et de numration des cyanobactries par observation microscopique, compte tenu du fait que ces informations font partie des premiers lments de dcision ; - dorganiser leur recueil et leur change en standardisant les paramtres : un identifiant unique pour une molcule x protocole x matrice x compartiment en distinguant au sein du total les fractions intracellulaire et libre, pour amliorer la qualit des donnes nationales relatives aux cyanotoxines ; - de crer une structure nationale de rfrence en charge de lharmonisation et la coordination des actions dans ce domaine et dont la structure, les moyens et le champ daction seront dfinis en concertation avec les comptences nationales existantes. Former les acteurs pour assurer une disponibilit plus large des comptences : - former un plus grand nombre de techniciens de laboratoire lidentification et au dnombrement des cyanobactries, en particulier dans les laboratoires dastreinte ou accessibles en situation durgence ; - assurer la formation de limnologues et de taxonomistes susceptibles dassurer des dterminations relevant du niveau de lexpertise.

2.2. Renforcer la prvention et la matrise des risques

2.2.1. Dvelopper une stratgie de surveillance des toxines et de leurs effets adapte aux diffrents usages
laborer un rfrentiel dinvestigation permettant la validation des cas dintoxications animales ou humaines par les cyanotoxines et organiser la collecte des cas potentiels ou confirms (pidmiovigilance). La mise en place dune surveillance pidmiologique apparaissant prmature en ltat actuel des connaissances, il est essentiel de poursuivre en parallle la surveillance environnementale des cyanotoxines et notamment des microcystines au niveau des sites de baignade et dautres activits aquatiques rcratives, et des systmes dadduction en eau potable. Structurer, comme cela a t fait pour les phycotoxines marines et les coquillages, un rseau national de surveillance spcifique ou a minima une stratgie de surveillance des cyanotoxines et des cyanobactries de rfrence, fonde sur des paramtres pertinents associs des mthodes dchantillonnage et danalyses normalises et adosses la base de donnes nationale ou des systmes de recueil nationaux prexistant : SISE-Eaux, SISE-Baignade, SIE (ex-RNDE). Ces deux actions doivent saccompagner : - du dveloppement, proximit des sites propices la production de cyanotoxines, de lpidmiovigilance animale et/ou humaine par les professionnels concerns (mdecins, vtrinaires, pharmaciens, ingnieurs du gnie sanitaire), qui doivent tre sensibiliss envisager cette tiologie face des intoxications et incits signaler les cas suspects ou avrs aux autorits sanitaires ;

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- du recensement annuel, en raison des variations interannuelles de frquentation, des sites concerns par lapplication de la stratgie de surveillance, que leur usage soit la production deau dalimentation, la baignade au sens rglementaire, ou les autres usages rcratifs, en prcisant la nature de ces derniers ; - de la formation des gestionnaires des ressources usage rcratif ou de production deau dalimentation le plus rapidement possible : la dtection prcoce des changements des caractristiques du milieu associs ventuellement la prolifration des cyanobactries, la diffusion des informations aux autorits comptentes et aux usagers. Rendre la liste des comptences et des laboratoires susceptibles de raliser les dnombrements cellulaires et les dosages de la stratgie de surveillance facilement accessible aux commanditaires potentiels. Mieux dfinir lapport, les limites dinterprtation, lusage possible et la fiabilit des indicateurs globaux indirects (chlorophylle-a, variations des concentrations en oxygne ou CO2, variation de pH, turbidit). Surveiller la prsence de cyanotoxines dans les complments alimentaires et les aliments bases de cyanobactries par le biais de plans de contrle cibls. Une stratgie de surveillance applicable aux ressources destines la consommation humaine fonde sur le dnombrement des cyanobactries et des toxines est donc propose (figure VIII.1).

Figure VIII-1 : Proposition de stratgie de surveillance des eaux destines la consommation humaine vis--vis des risques lis aux cyanotoxines. Les frquences proposes sont maintenues tant que deux rsultats conscutifs situs au niveau infrieur nont pas t obtenus.
Si P Total constamment 10 g.L
-1 -1

Absence de surveillance spcifique de la ressource

Si P Total > 10 g.L ou suspicion d'un problme ou historique de prolifration ou classification dans les sites risques de prolifration Comptage des cellules de cyanobactries dans l'eau brute (arrive d'usine) Frquence de surveillance 0 5.102 5.103 mensuelle bi-mensuelle hebdomadaire 2.105 bi-hebdomadaire 5.105 bi-hebdomadaire Utilisation d'une ressource de substitution recommande + Dosage bi-hebdomadaire des MCs en eau brute et en eau traite 1 suprieure bi-hebdomadaire
-1

Surveillance de la concentration en microcystines totales dans l'eau traite Frquence de surveillance 0 mensuelle limite de dtection 0,2 bi-mensuelle hebdomadaire 0,5 bi-hebdomadaire

+ Dosage hebdomadaire des MCs en eau brute et en eau traite

en nombre de -1 cellules.mL

Utilisation d'une ressource de substitution recommande. Mise niveau de la filire recommande.

en g MCs totales.L

2.2.2. Renforcer la prvention

Mettre en uvre lensemble des moyens disponibles, commencer par lapplication des rglementations existantes, pour rduire, dans les meilleurs dlais, les apports environnementaux en azote et phosphore dans les milieux aquatiques. En particulier un programme daction sur la rduction du phosphore (interdiction gnralise dans les lessives domestiques et mise en place de la dphosphatation sur les stations de traitement des eaux uses) et des plans de gestion appropris dans les zones agricoles excdents de phosphore lis aux levages intensifs ou lusage domestique devrait tre mis en uvre rapidement.

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 Encadrer la mise sur le march des procds ou produits commercialiss comme destins prvenir les prolifrations de cyanobactries dans les ressources, notamment par lvaluation de leur efficacit dans des conditions reprsentatives de leur utilisation sur site. En labsence de rglementation de lusage des algicides dans les ressources, et dans lattente des rsultats de lvaluation de ces produits dans le cadre de la rglementation biocides , interdire lusage de produits algicides et en particulier du CuSO4 en mode prventif ou curatif en cas de prolifration de cyanobactries : - dans les ressources, en raison de labsence dvaluation de limpact environnemental et du risque de slection de clones rsistants, - dans les bassins de stockage deau brute et les filires de traitement, en raison des difficults dlimination des cyanotoxines libres et de labsence de mthode analytique permettant la dtection de lensemble des toxines. Prendre en compte dans la rglementation le risque de prsence de cyanotoxines dans les complments alimentaires bases de cyanobactries et dans les aliments.

2.2.3. Favoriser la gestion

laborer des procdures de gestion des non-conformits de leau dalimentation, sur la base des valuations fournies dans le prsent rapport. Dfinir une stratgie nationale dinformation du public pour les usages rcratifs en largissant son application aux sites non amnags qui ne font pas lobjet de la rglementation baignade . Initier un programme de recherche en valuation conomique permettant de choisir, selon les sites, le scnario privilgier entre la reconqute de la qualit des ressources et linvestissement dans la mise niveau des installations de traitement, notamment en fonction des autres usages impliqus. Sensibiliser la problmatique les personnes publiques ou prives responsables de la prise en charge des frais occasionns. La situation de retour la normale aprs un pisode dalerte est dfinir compte tenu de la grande incertitude associe aux comptages de cyanobactries et aux dosages de microcystines et leur persistance dans le milieu. Aligner la stratgie des contrles sur celle qui est mise en uvre pour les pesticides en prescrivant la recherche dans les analyses de types RS et P2 du paramtre total des microcystines analyses . La frquence pourrait tre rduite sur les ressources prsentant une faible probabilit de prolifration de cyanobactries.

2.3. Recommandations spcifiques aux eaux de baignade et autres activits aquatiques rcratives
2.3.1. concernant les suivis des masses deaux et les seuils de qualit
Surveillance sanitaire Les experts recommandent pour les sites risque amnags et non amnags : un suivi rgulier, sous la responsabilit des gestionnaires de sites et en collaboration avec les autorits sanitaires, afin dassurer en toute circonstance la protection sanitaire de la population et de dtecter les changements des caractristiques du milieu, signes prcoces dun ventuel phnomne de prolifration de cyanobactries ; une surveillance base sur le dnombrement, au moins bimensuel, des cyanobactries avec identification de genres ; de procder une surveillance hebdomadaire si le nombre de cyanobactries est de 20 000 +/- 20 % cellules de cyanobactries.mL-1 car les phnomnes dynamiques peuvent conduire une augmentation rapide du nombre de cellules. de raliser des campagnes de sensibilisation des responsables et des surveillants de baignade la problmatique sanitaire des cyanotoxines, notamment parce quils pourraient contribuer au signalement des signaux prcoces tels quun changement de la couleur de leau qui peut traduire une phase de prolifration de cyanobactries. Mode de prlvement Dans lattente de la normalisation de protocoles de prlvements, les experts recommandent que dans le cadre de la surveillance sanitaire, les prlvements deaux soient effectus avec un tube permettant dintgrer les 50 premiers centimtres de la colonne deau.

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Compte tenu du caractre htrogne de la distribution spatiale des cyanobactries lchelle des plans deau, plusieurs points de prlvements sont recommands. Lun de ces points sera obligatoirement ralis sur le lieu de baignade proprement dit, et il fera lobjet dun comptage cellulaire et ventuellement dun dosage de microcystines daprs les recommandations prsentes ci-dessous. Les autres points de prlvements ont pour objet dobtenir une estimation globale des concentrations cellulaires en cyanobactries lchelle du plan deau. Ils pourront tre rassembls en un seul chantillon sur lequel seront effectus un comptage cellulaire et un dosage ventuelle de toxines. Enfin, si une accumulation en surface de cyanobactries est observe sur une quelconque partie du plan deau, un prlvement sera ralis et trait de la mme faon que dcrit prcdemment. Concernant les cyanobactries benthiques, il nest pas possible, en ltat des connaissances, de proposer aujourdhui un protocole de prlvement. Seuil dalerte Il est recommand deffectuer une recherche systmatique de toxines ou deffets toxiques globaux lorsque le nombre de cyanobactries est gal ou suprieur 20 000 +/- 20 % cellules.mL-1 si cette communaut est domine par un ou plusieurs genres potentiellement toxiques et en tout tat de cause, la recherche de MCs selon le (les) genre(s) dominant(s). Restriction de la baignade Il est propos linterdiction temporaire de la baignade pour les enfants lors de toute mortalit danimaux potentiellement attribuable lingestion des cyanobactries benthiques en lattente des analyses permettant de dterminer prcisment lorigine de la mort de lanimal. En lattente des rsultats, le public doit tre inform des risques ventuels. Sil savre que les cyanobactries sont la cause du dcs de lanimal, linterdiction devrait se prolonger jusqu ce que les toxines ne soient plus dtectables ou que les espces en cause aient disparues depuis au moins une semaine. Seuil dinterdiction de la baignade sans restriction des activits nautiques Il est propos provisoirement et comme mesure conservatoire dinterdire la baignade sans limiter les autres activits rcratives lorsque 100 000 +/- 20% cellules.mL-1 de cyanobactries sont dnombres et lors de la prsence dcumes. Cette mesure conservatoire permet de prendre en compte le fait que de nombreuses toxines ne sont pas doses ce jour (anatoxines, BMAA,) et que peu de donnes sont disponibles quant la prsence ou labsence de ces toxines dans les genres de cyanobactries frquemment prsents dans les cours et plans deau. La valeur propose permettrait donc de prvenir une ventuelle exposition des individus des quantits leves de ces toxines lors dune prolifration massive de cyanobactries. Cette recommandation devrait faire lobjet dune rvaluation lorsque les connaissances auront progresses. Le public doit tre inform des risques ventuels et de causes ayant conduit linterdiction. Seuil dinterdiction de la baignade et de la pratique de sports nautiques Il est propos que ce seuil soit fix une valeur ne dpassant pas la concentration maximale tolrable de 13 g.L-1 +/- 5 % en MCs (somme de tous les drivs de microcystines), valeur permettant de garantir un niveau dexposition acceptable pour la population gnrale et pour les individus les plus exposs (2 7 ans) car calcule sur la base des hypothses particulirement maximalistes et lorsque une accumulation visible de cyanobactries est observe. Les experts proposent que linterdiction soit effective lorsque le dpassement de la valeur limite est confirm par le rsultat de deux prlvements mens avec trois jours dintervalle. En lattente des rsultats, le public doit tre inform des risques ventuels. Comme prcdemment, les risques ventuels et les causes ayant conduit linterdiction doivent tre signals dans laffiche dinformation au public. Dfinition du retour la normale Compte tenu de lincertitude associe aux dosages de microcystines, il conviendrait de lever linterdiction lorsquau moins deux dosages de toxine conscutifs, raliss trois jours dintervalle seront infrieurs la valeur limite de qualit en MCs fixer par les autorits sanitaires selon les recommandations dveloppes ici avec un maximum de 13 g/L en MCs.

2.3.2. concernant linformation du public.

En cas dinterdiction, il importe de prvoir llargissement du dispositif daffichage destin au public frquentant un site non amnag lorsque celui-ci fait partie de la mme masse deau quun site amnag concern par la prsence de cyanobactries.

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2.3.3. concernant lidentification et le classement des lieux dexposition

Identification des sites risque Dans la mesure o tous les contacts rcratifs avec les eaux douces nont pas lieu au sein de zones amnages et surveilles, il est recommand quun recensement annuel de toute zone de baignade ou de pratique de sports nautiques non amnages soit ralis au niveau de communes ou des dpartements, en prcisant leur(s) usage(s). Cette dmarche permettra de prendre en compte les usages ne rentrant pas dans le champ direct de la rglementation et les ventuelles volutions inter-annuelles de frquentation des sites. Classification des sites et laboration dun dispositif de surveillance et alerte. Llaboration dune grille de vulnrabilit permettant la classification a priori des sites est propose selon des notions de risques faible , modr et lev . Les critres seraient bass, par exemple, sur la morphologie des ressources, la dynamique de la masse deau, les apports connus en phosphore mais galement sur lhistorique de la prsence des cyanobactries. Il sagirait de rendre le dispositif de surveillance et dalerte plus appropri, efficace et conomiquement plus acceptable, en adaptant les moyens ncessaires au risque prsum. Llaboration dun tel outil permettrait de mieux rpondre une demande croissante de la part des lus et gestionnaires des sites.

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Annexe 1

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Annexe 2

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- 197 -

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Annexe 3

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- 199 -

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Annexe 4

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- 202 -

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Par dcision administrative de la Directrice Gnrale de lAfsset, le groupe de travail de lagence, intitul Cyanobactries et cyanotoxines dans les eaux de loisirs a t tabli comme suit : Experts ALLIX Sylvie BAAN Robert Domaine dexpertise Surveillance et gestion sanitaire. Senior scientist, unit of carcinogen identification and evaluation WHO/IARC. Organisme dattachement DDASS Manche Centre international de Recherche sur le cancer. Lyon. Membre du comit dexperts spcialiss valuation des risques lis aux substances chimiques de lAfsset. EA 3542 Sant publique-Environnement. Facult de Pharmacie de Chatenay-Malabry Universit Paris Sud 11. Agence de leau Seine-Normandie DERNS. Agence Franaise de Scurit Sanitaire des Aliments. Secrtaire scientifique du groupe de travail Afssa. Centre alpin de recherche sur les rseaux trophiques des cosystmes Limniques. UMR 42 - Institut National de Recherche Agronomique de Thonon les Bains. cole Nationale de la Sant Publique. EA 3542. Sant publique environnement. Facult de Pharmacie de Chatenay-Malabry. Universit Paris Sud. Membre du comit dexperts spcialiss eaux de lAfssa et prsident du groupe de travail cyanobactries-cyanotoxines - eau potable. UMR-CNRS 5119 Ecosystmes lagunaires . Universit de Montpellier 2 . DDASS Pays de la Loire. DDASS Gard.

BOUACHA Noureddine

Toxicologue, mcanismes daction des hpatotoxines. Eau et Sant. Cyanobactries-cyanotoxines - eau potable. Dynamique des populations de cyanobactries.

DUCHEMIN Jean HARVEY Mathilde

HUMBERT Jean-Franois

LEGEAS Michle LEVI Yves

Analyse et de gestion des situations risque. Sant publique environnement.

MONFORT Patrick PRAT Maryannick RIOU Jeanine

cologie microbienne. Mdecin inspecteur de Sant Publique. Gestion et surveillance sanitaire.

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X. Rfrences bibliographiques

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Figure A : Exemple de cyanobactrie unicellulaire coloniale. Genre Woronichinia. (Photo Luc Brient, Universit Rennes I).

Figure B : Exemple de cyanobactrie organise en trichomes. Genre Aphanizomenon. (Photo Luc Brient, Universit Rennes I).

Figure C : Exemple de cyanobactrie organise en filament : gaine visible lextrmit. Genre Phormidium. (Photo Cline Berger, MNHN).

Figure D : Trichome de cyanobactrie (genre Anabaena) prsentant un htrocyste (H) et un akinte (A) bien distincts. (Photo Luc Brient, Universit Rennes I).

Figure E : Filaments de la cyanobactrie Cylindrospermopsis raciborskii prsentant des akintes A et des htrocystes H (Photo A. Caruana INRA). Figure F : Prolifration de la cyanobactrie Planktothrix rubescens dans le lac du Bourget. La couleur lie de vin de leau est due la phycorythrine prsente en quantit importante chez cette espce. (Photo M. Roux, CSP).

Figure H : Accumulation de cyanobactries sur la berge dun plan deau. (Photo L. Brient, Universit Rennes).

Figure G : Prolifration sous la forme dcume de la cyanobactrie Planktothrix agardhii dans un lac de la rgion parisienne. (Photo C. Bernard, MNHN).

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Figure I : Dispositifs de prlvement utiliss depuis la berge (de gauche droite ci-dessus, filet plancton et tube chantillonneur) ou depuis un bateau (ci-contre, bouteille de prlvement de Van Dorn). (Photos M. Leitao, Bi-Eau).

Figure J : Immersion du disque de Secchi. (Photo L. Brient, Universit Rennes 1).

Figure K : Nombre de prlvements recenss dans la base par dpartement (cumul des annes 2002-2004).

Figure L : volution saisonnire des genres de cyanobactries les plus frquemment rencontrs dans la base de donnes (moyenne gomtrique du nombre de CC par mL en fonction du mois de lanne). Les donnes des trois annes 2002 2004 et des diffrents usages ont t agrges [rsultats bruts non modliss].
Aphanizom enon 30000 Anabaena M icrocystis 25000 Plank tothrix W oronichinia 20000

15000

10000

5000

0 av ril m ai juin juillet aot sept. oct. nov. dc.

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