AVALIAO DA TCNICA DE BIOAUMENTO NO TRATAMENTO DE SOLO IMPACTADO POR PETRLEO

Hugo Monteiro de Magalhes Bolsista de Inic. Cientfica, Qumica Bacharel e Licenciatura, UFF Cludia Duarte da Cunha Orientadora, Engo. Qumica, M. Sc.

RESUMO
Dentre vrias tecnologias de tratamentos de solos impactados por petrleo, a biorremediao destaca-se por ser o principal processo natural de remoo das vrias fraes desse contaminante do meio ambiente. Duas diferentes tcnicas podem ser aplicadas no processo de biorremediao: bioestimulao e bioaumento. Neste trabalho, foi utilizada a tcnica do bioaumento para tratamento de um solo impactado por petrleo h 4 anos. Quatro sistemas foram testados variando o tamanho do inculo do consrcio microbiano e a relao C:P. A adio do inculo menor e a relao C:P menor, apresentou uma eficincia de biodegradao de 15,43% atravs da gerao de CO2 e uma remoo de 44,6% do leo, atravs dos valores de TPH obtidos, apresentando potencial de utilizao no processo de biorremediao do solo em estudo.

1. INTRODUO Explorado comercialmente desde meados do sculo XIX, o petrleo foi usado, por muitas dcadas, para iluminao e, em menor escala, como lubrificante. A inveno do motor de combusto interna e sua adoo rpida em todas as formas de transporte ampliaram o emprego desse recurso natural, aumentando a demanda e com isso, a produo, o transporte, a estocagem e a distribuio tanto do leo cr quanto dos seus derivados. Todas essas atividades envolvem riscos de poluio. A poluio pode ser dada de forma acidental(derramamentos e vazamentos) ou de forma proposital (despejos indiscriminados de efluentes e resduos, gases e particulados de chamins industriais).

Dentre as vrias tecnologias disponveis para tratamento destes locais contaminados, a biorremediao, aproveita justamente a capacidade dos microrganismos em degradar substncias orgnicas produzindo atravs da mineralizao, CO2 e gua. Ela pode ser definida como a utilizao de microrganismos para remover poluentes ambientais de solos, guas e sedimentos. Sendo assim considerada, a biorremediao, o principal processo natural de remoo das vrias fraes de petrleo do meio ambiente. Duas diferentes tcnicas podem ser usadas no processo de biorremediao de ambientes contaminados. A primeira delas a bioestimulao que consiste no favorecimento das condies ambientais (valor de pH teor e disponibilidade de nutrientes inorgnicos e aceptores finais de eltrons, dentre outros) para estimular a ao dos microrganismos presente no material contaminado. Outra tcnica a do bioaumento, na qual so introduzidos microrganismos com capacidade de degradar determinados poluentes. Essas espcie so selecionadas e introduzidas no meio para auxiliar na converso desses poluentes em substncias menos txicas. Algumas destas tecnologias de tratamento, podem ser classificadas em duas categorias: in situ e ex situ. No caso das medidas in situ, o tratamento do solo contaminado feito no prprio local. J a ex situ consiste em escavar o

solo contaminado para aplicar o tratamento em outro local.

No existe uma regra para a escolha do tipo de tratamento de locais contaminados. Cada caso deve ser analisado individualmente, avaliando suas particularidades. A aceitao da biorremediao como uma tecnologia vivel de remediao, porm, ainda depende da relao custo/benefcio e os mtodos empregados precisam ter no mximo os mesmos valores dos tratamentos qumicos e fsicos existentes. 2. OBJETIVO O Presente trabalho teve como objetivo, utilizar a tcnica do bioaumento para tratamento de solo contaminado por petrleo definindo o melhor tamanho de inculo e a melhor concentrao de fsforo para se obter uma melhor eficncia de biodegradao.

3. MATERIAIS E MTODOS
3.1 Solo

O solo utilizado nos experimentos de biodegradao, foi contaminado h 4 anos devido a ocorrncia de um vazamento de um oleoduto, em Guararema So Paulo. O teor inicial de hidrocarbonetos totais de petrleo(TPHinicial) era de 23,05mg/g.
3.2 Descrio do Sistema

Para realizao dos ensaios de biodegradao, foram utilizados kitasatos de 250mL com rolhas de borracha/silicone com um tubo de ltex fixado sada lateral a qual foi vedada com uma pina de Mohr, como pode ser visualizado na Figura1.

Figura1: Aparato experimental utilizado nos teste de biodegradao.

Foram adicionados 50g de solo contaminado, homogenizado e com pH corrigido para um valor prximo neutralidade. O teor de umidade foi ajustado para 50% da capacidade de campo. Os frascos foram mantidos em estufa 30C por 37 dias.
3.3 Preparo das Amostras

Alguns procedimentos padres foram adotados no preparo das amostras, tais como:
3.3.1 Secagem do Solo

Pelo fato do solo ser estocado em geladeira, este apresentava uma alta umidade. Como pretendiam-se realizar os experimentos nos solos contendo

um teor de umidade, de 50% da Capacidade de Campo, foi necessria a secagem a temperatura ambiente para ajuste aps adio de inculo e nutrientes.
3.3.2 Correo do pH

A Correo do pH foi feita adicionando-se Ca(OH)2 em quantidade suficiente para elevar o pH para prximo da neutralidade atravs de uma curva de calibrao elaborada anteriormente.
3.3.3 Inculo

Foram testados dois tamanhos de inculo distintos do consrcio microbiano constitudo por Rhodotorula glutinis e Nocardia nova a saber: 108 e 1010 UFC/g solo. As cepas foram crescidas separadamente em meio mineral contendo leo cr como nica fonte de carbono. Aps o tempo necessrio para cada uma atingir a fase exponencial de crescimento, de acordo com a anlise obtida em fase preliminar, alquotas foram retiradas e diludas para obteno da concentrao desejada.
3.3.4 Correo de Nutriente

A correo de fsforo foi realizada utilizando soluo de fosfato dibsico de potssio (K2HPO4). As seguintes relaes C:P 100:1 e 100:2, foram utilizadas nos experimentos.
3.3.5 Aerao

Pelo fato do processo em estudo ser aerbico, fez-se a aerao dos sitemas em intervalo de 48h, com objetivo de suprir a demanda de oxignio requerida pelos microrganismos, bem como expulsar o CO2 gerado aps monitoramento do mesmo. Esse processo foi realizado por meio de injeo de ar comprimido aos frascos por dois minutos.

3.4 Determinaes Quantitativas

Algumas determinaes quantitativas foram realizadas durante a conduo dos ensaios.

3.4.1 Anlise Cromatogrfica do CO2 Produzido:

Com o auxlio da seringa, do tipo Gas Tight, apropriada para anlises cromatogrficas gasosas, foram injetadas no Cromatgrafo gs HP 5890, amostras de 0,5mL das atmosferas internas dos kitasatos (headspaces) referentes s condies analisadas. As condies gerais empregadas nas anlises encontram-se listadas:

Vazo do Gs de Arraste (He): 17,5mL Vazo do Gs de Referncia (He): 29,0mL Temperatura do Forno: 105C Temperatura do Injetor: 110C Temperatura do Detetor de condutividade Trmica (TCD): 220C Coluna de Ao Inox (3mx3m) Recheada com Chromosorb 102

O monitoramento do CO2 gerado, foi feito por cromatografia gasosa e a eficincia de biodegradao dos contaminantes calculada atravs da frmula: EB (%) = (Cconsumido x 100)/Ci onde: Cconsumido = 2 x (CO2 acumulado - CO2 acumulado no controle); Ci = concentro inicial de carbono = 85% da concentrao inicial de TPH.
3.4.2 Quantificao dos Microrganismos Heterotficos Totais:

A quantificao da populao microbiana heterotrfica total foi feita a partir do plaqueamento em meio orgnico slido pela tcnica de pour plate. Foram adicionados 5g de solo em 50mL de soluo salina (NaCl 0,9%) e fez-se a agitao da suspenso em shaker por 1 hora a 30C. Aps agitao, ento, foi feito o plaqueamento adicionando 0,1ml de diluies adequadas da

suspenso salina nas placas. Incubou-se por 48 horas a 30C e contou-se o nmero de unidades formadoras de colnias (resultados expressos em UFC/gsolo)
3.4.3 Determinao de Hidrocarbonetos Totais de Petrleo:

Esta foi uma anlise complementar que foi realizada por Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo, conforme o Mtodo EPA 8015B, realizada por um laboratrio externo (Analytical Solution).
3.5 Ensaios de Biodegradao

Os experimentos de biodegradao foram realizados variando-se o tamanho de inculo e a relao C:P, em quatros sistemas de tratamento a saber: Sistema 1: Tamanho de inculo de 108UFC/g solo e relao C:P 100:1 Sistema 2: Tamanho de inculo de 1010UFC/g solo e relao C:P 100:1 Sistema 3: Tamanho de inculo de 108UFC/g solo e relao C:P 100:2 Sistema 4: Tamanho de inculo de 1010UFC/g solo e relao C:P 100:2 Os experimentos foram realizados em duplicata, sendo tambm utilizados mais dois frascos de sacrifcio para determinao quantitativa inicial e final de microrganismos heterotrficos totais. 4. RESULTADOS E DISCUSSO Os resultados de CO2 gerado para cada sistema nos ensaios de biodegradao, esto apresentados na figura 2.

SOLO CONTAMINADO DE GUARAREMA Avaliao do Tamanho de Inculo e Relao C/P

18,0 16,0 14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 0 7 14 21 28

CO2 acu. (mmol)

Sistema 1 Sistema 2 Sistema 3 Sistema 4 35 42

Tempo (dias)

Figura 2: Curva de evoluo de CO2

Verifica-se um acrscimo de CO2 liberado para as 4 condies, at o 28dia de teste, aproximadamente. Aps esse tempo, observa-se um incio de estabilizao para os sistemas 3 e 4 (relaoC:P maior), o que no procede para os sistemas 1 e 2 (relaoC:P menor) que geram CO2 de forma crescente durante todo perodo de teste (37 dias). Essa tendncia refora a possibilidade de obteno de maiores eficincias de biodegradao em perodos superiores a 37 dias. Possivelmente, o fator limitante do processo de biodegradao est associado soro do poluente matriz do solo, resultante do intemperismo, alm da relevante frao recalcitrante que permanece no solo aps 4 anos de contaminao. Baseado na quantidade de CO2 gerado e acumulado para cada sistema, fezse o clculo da eficincia de biodegradao, cujos resultados finais seguem apresentados na tabela 1 e figura 3.
Tabela 1 Resultado das Eficincias de Biodegradao para cada sistema em 37 dias. Sistemas 1 2 3 4 EB% 15,43 15,83 10,94 11,03

Sistema 1= inculo 108UFC/g solo e relao C:P 100:1; sistema 2= inculo 1010UFC/g solo e relao C:P 100:1; sistema 3 = inculo 108UFC/g solo e relao C:P 100:2; sistema 4= inculo 1010UFC/g solo e relao C:P 100:2

16 14 12 10 EB% 8 6 4 2 0

Sistema 1 Sistema 2 Sistema 3 Sistema 4

Figura 3: Grfico das Eficincias de Biodegradao

Observou-se uma maior eficincia de biodegradao para os sistemas 1 e 2 que utilizaram menor concentrao de fsforo, frente aos sistemas 3 e 4 que utilizaram uma maior concentrao de fsforo, independente do tamanho de inculo, comprovando o efeito inibitrio do fsforo quando corrigido para relao C:P de 100:2. Como no houve diferena significativa entre os resultados obtidos com os dois tamanhos de inculo testados, o uso do inculo menor se torna mais atraente em funo do menor custo envolvido com a sua utilizao.O valor obtido com a quantificao dos hidrocarbonetos totais de petrleo para o sistema 1, selecionado como a melhor condio, foi de 13,86 mg/g solo, mostrando uma reduo de 44,6% em relao ao valor de TPH inicial, confirmando os resultados obtidos com a gerao de CO2. Segue na tabela 2, os valores das contagens de microrganimos heterotrficos totais no incio e no final do experimento.

Tabela 2 Contagen de Microrganismos Heterotrficos Totais. Microrganismos Heterotrficos Totais Inicial Final (UFC/gsolo) (UFC/gsolo) 1,05x106 -------1,86x108 8,06x106 1,00x1010 6,20x106 1,86x108 2,20x107 1,00x1010 7,80x107

Condies Solo Sistema 1 Sistema 2 Sistema 3 Sistema 4

Sistema 1= inculo 108UFC/g solo e relao C:P 100:1; sistema 2= inculo 1010UFC/g solo e relao C:P 100:1; sistema 3 = inculo 108UFC/g solo e relao C:P 100:2; sistema 4= inculo 1010UFC/g solo e relao C:P 100:2

Pelos valores da contagem de microrganismos heterotrficos totais, observou-se um decrscimo da populao microbiana em todos os sistemas testados em relao ao valor inicial, mas atingiu valores prximos ou superiores ao da microbiota indgena do solo no tempo 0 h. A queda do nmero de microrganismos , aps longo tempo de biodegradao, comumente observada e pode estar relacionada com a diminuio da capacidade de determinados microrganismos em degradar o contaminante. Essa queda mais pronunciada da populao microbiana pode refletir, em parte, uma maior susceptibilidade s condies adversas encontradas aps 37 dias de experimento, ou seja, relao nutricional no favorvel ou incapacidade de metabolizar compostos mais recalcitrantes, dentre outros. 5. CONCLUSES Para o consrcio microbiano constitudo de Rhodotorula glutinis e Nocardia nova, o melhor tamanho de inculo obtido foi o de 108UFC/ g solo em funo de no ter havido diferenas significantes entre os dois valores testados na concentrao tima de fsforo. A correo do teor de fsforo para a relao C:P 100:2 apresentou efeito inibitrio, sendo portanto a relao C:P 100:1, a melhor a ser utilizada nos ensaios de biodegradao.

 A adio do inculo de 108UFC/ g solo do consrcio microbiano constitudo de Rhodotorula glutinis e Nocardia nova na relao C:P de 100:1, apresentou uma eficincia de biodegradao de 15,43% atravs da gerao de CO2 e uma remoo de 44,6% atravs dos valores de TPH obtidos apresentando potencial de utilizao no processo de biorremediao do solo em estudo. BIBLIOGRAFIA
TRINDADE, J. V. O. (2002). Avaliao das tcnicas de bioaumentao e bioestimulao no processo de biorremediao de solocontaminadopor hidrocarbonetos de petrleo, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Escola de Qumica. LIEBEG, E. W. E CUTRIGHT, T. J. (1999). The investigation of enhanced biorremediation thouught the adition of macro and micro nutrients in PAH contaminated soil, International biodeteriantion & biodegradetion, 44, 55-64.

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