Resumen La versatilidad de biosntesis microbiana es enorme.

La primaria industrialmente ms importante memetabolitos son los aminocidos, nucletidos, vitaminas, solventes y cidos orgnicos. Millones de toneladas de los aminocidos se producen cada ao con un mercado total de miles de millones de dlares. Muchos vitamina sinttica los procesos de produccin estn siendo sustituidos por fermentacin microbiana. Adems de las mltiples reacciones cion secuencias de fermentaciones, microorganismos son extremadamente tiles en el desempeo biotransformacin los procesos. Estos son aspectos esenciales para la industria de qumica fina en la produccin de un solo ismero intermedios. Microbially producen metabolitos secundarios son sumamente importantes para nuestra salud y nutricin. Como grupo, los que tienen importancia econmica enorme. El mercado de los antibiticos casi 30 mil millones de dlares e incluye alrededor de 160 antibiticos y derivados como el b-antibiticos pptido, la eritromicina de Polictido macrlidos, tetraciclinas, aminoglucsidos y otros. Otros productos importantes farmacuticos producidos por microorganismos son hypocholesteragentes de olemic, los inhibidores de la enzima, inmunosupresores y compuestos antitumorales, algunos con marmercados de ms de 1 mil millones de dlares por ao. Metabolitos secundarios de importancia agrcola incluyen coccidIOSTATS, promotores de crecimiento de los animales, antihelmintics y biopesticidas. La biotecnologa moderna la industria ha tenido un impacto importante en el mundo de los negocios, productos biofarmacuticos (protena recombinante medicamentos, vacunas y anticuerpos monoclonales) un mercado de 15 millones de dlares. ADN recombinante La tecnologa tambin ha producido una revolucin en la agricultura y ha aumentado notablemente los mercados para los mienzimas crobial. Se agregaron a mutacionales tcnicas moleculares manipulaciones como medio de enarrugas y los rendimientos de los ttulos de procresses microbiana y en el descubrimiento de nuevos frmacos. Hoy en da, la microbiologa es un participante importante en la industria mundial. Lo mejor est por llegar como microbios mover a environsectores mental y la energa.

1. Introduccin Durante miles de aos, los microorganismos han sido utilizados para abastecernos de productos tales como pan, cerveza, bebidas alcohlicas destiladas, vino, vinagre, queso, encurtidos y otros materiales fermentados. Estos procesos fueron desarrollados originalmente para la conservacin de frutas, verduras y leche, pero developed en productos sofisticados satisfacer el paladar y la mente de los seres humanos. Una segunda fase de la biotecnologa comenz durante la Primera Guerra Mundial que dio lugar a un salto cuntico en el desarrollo econmico importancia de los microbios. En Inglaterra, Chaim Weizmann desarroll la acetona-butanol fermencin y en Alemania, la fermentacin de glicerol fue formulada por Neuberg. Tanto la acetona y glicerol eran necesarios para la fabricacin de municiones para apoyar los esfuerzos de la guerra de los respectivos oponerse a las naciones. Estos acontecimientos fueron seguidos despus de la guerra por el desarrollo de la fermentacin, bioconversin y procesos enzimticos dando muchos productos tiles con gran mar anualmercados. Estos son los aminocidos, nucletidos, vitaminas, cidos orgnicos, solventes, vacunas y polisacridos. Un segmento importante de la segunda fase fue representado por secundaria metabosatlites, como los antibiticos. Desde el descubrimiento de la penicilina en 1929 y su desarrollo comercialopment desde el comienzo de la Segunda Guerra Mundial, molculas antibiticos ha tenido importantes beneficioslos efectos beneficiosos sobre la salud humana y animal. Muchos metabolitos secundarios que tienen los antibiticos actividad (significado matar o crecimiento inhibicin de bacterias y hongos) se utilizan para otros purplantea. Estos incluyen agentes hipocolesterolmicos, inmunosupresores, agentes contra el cncer, la bioherbicidas, BIOINSECTICIDA, coccidiostticos, promotores de crecimiento de los animales y alcaloides de cornezuelo. importantes metabolitos secundarios no tienen actividad antibitica, que incluyen el antihelmntico Ivermectina, el spinosad BIOINSECTICIDA y los estimulantes de crecimiento de la planta, las giberelinas. En la dcada de 1970, una tercera fase fenomenal comenz con el nacimiento de ADN recombinante tecnologa. Microbiologa industrial tradicional se fusion con biologa molecular para obtener muchos productos nuevos de la era de la biotecnologa moderna. Tecnologa del ADN recombinante ha impactadas la produccin de metabolitos primarios y secundarios, bioconversions

y especialmente la industria de las enzimas. En este artculo, espero que para impresionar al lector con los econmicos positivos importancia del mundo microbiano. 2. Por qu son los microorganismos utilizados en la industria? La importancia de la industria de fermentacin reside en cinco caractersticas importantes de microorganismos: (1) una alta proporcin de superficie y volumen, lo que facilita la absorcin rpida de nutrientes necesarios para soportar altas tasas de metabolismo y biosntesis; (2) un tremendo variedad de reacciones que los microorganismos son capaces de llevar a cabo, (3) una facilidad para adaptarse para una gran variedad de entornos diferentes, lo que permite una cultura ser trasplantado de naturaleza en el matraz de laboratorio o la fbrica de fermentacin, donde es capaz de crecer en inexpensive carbono y fuentes de nitrgeno y producir compuestos valiosos; (4) la facilidad de gentica manipulacin, tanto in vivo como in vitro, para aumentar la produccin de los productos, para modificar estructuras y actividades y hacer productos totalmente nuevos; y (5) la capacidad de hacer spe - enantimeros especficos, por lo general los que estn activos, en los casos en que la sntesis qumica normal, se obtiene mezcla de enantimeros activos e inactivos. Los microorganismos son importantes para nosotros por muchas razones, pero una de las principales es que producen cosas de valor para nosotros. Pueden ser materiales muy grandes como las protenas, nucleic cidos, polmeros de hidratos de carbono, o incluso las clulas, o pueden ser molculas ms pequeas que suelen separar en metabolitos esenciales para el crecimiento vegetativo y los superfluos (es decir metabolitos primarios y secundarios, respectivamente). El poder de la cultura microbiana en el mundo competitivo de sntesis comercial puede ser apreciado por el hecho de que incluso simple molculas (es decir, cido L-glutmico y L-lisina), son fabricados por fermentacin y no por qusntesis de iCal. Aunque algunos productos han perdido temporalmente para sntesis qumica (Por ejemplo, disolventes como la acetona y butanol), es evidente que la mayora de los productos naturales se hacen tecnologa de fermentacin. A pesar de la eficacia del producto qumico enrutar a riboflavina, mucho de la produccin de este compuesto se lleva a cabo mediante la fermentacin, procesos qumicos para vi-C Tamin y esteroides todava emplean medidas de bioconversin microbiana. Productos ms naturales son tan centros de tantos complejos y contienen de asimetra que probablemente nunca se har comercialmente por sntesis qumica. Aunque los microbios son muy buenos en la presentacin de nosotros con una increble variedad de valiosas productos, generalmente producen slo en cantidades que necesitan para su propio beneficio; por lo tanto que tienden a no producir un exceso de sus metabolitos. Mecanismos de regulacin han evolucionado en microorganismos que permiten una cepa evitar la produccin excesiva de sus metabolitos para que pueda compete eficientemente con otras formas de vida y sobrevivir en la naturaleza. El microbilogo de fermentacin, Sin embargo, desea una cepa 'derroche' que overproduce y excretar un compuesto particular que pueden ser aisladas y comercializada. Durante la etapa de clasificacin, el microbilogo es la bsqueda de organismos con dbiles mecanismos reguladores. Una vez que se encuentra una cepa deseada, un desarrollo pro programa se comienza a mejorar los ttulos de la modificacin de las condiciones de cultivo, la mutacin y la recombinacin Tecnologa de ADN. El microbilogo realmente es modificar los controles reglamentarios en la cultura de origen, de modo que su "ineficiencia" se puede aumentar y el microorganismo excretar una gran cantidad de estos valiosos productos en el medio. La principal razn para el uso de microorganismos para producir compuestos que de otra forma aislados de plantas y animales o sintetizados por los qumicos es la facilidad de aumento proproduccin mediante la manipulacin ambiental y gentica. Mil veces los aumentos han sido reCorded de pequeos metabolitos. Por supuesto, cuanto mayor sea el nivel especfico de la produccin, simpler es el trabajo de aislamiento del producto. 3. La produccin de metabolitos primasry Metabolitos primarios son las pequeas molculas de las clulas vivas que son los intermediarios o acabar con los productos de las vas del metabolismo intermediario, o son elementos para essenmacromolculas potenciales, o se convierten en coenzimas. El ms importante en la industria

son los aminocidos, nucletidos, vitaminas, disolventes y cidos orgnicos. Metabolitos primarios varan de tamao a partir del gas de hidrgeno (2 Da) y metano (16 Da) a la vitamina 1 2B(1355 Da). No es unse esperaba que se utilizan en la alimentacin humana y animal, el etanol, aminocidos y vitaminas acetona, butanol y se utilizan como combustibles y / o solventes, y que los cidos ctrico y actico utilizado como acidulants. Sin embargo, muchos de estos metabolitos generales se utilizan de manera novedosa: el sales de sodio de glutmico, 9cido 5-inosnico y9 5 guanlico, como potenciadores del sabor, sodio glu-CONATE como agente secuestrante para evitar la deposicin de scums soap en superficies limpios, y fumarato en la fabricacin de resinas de polister. Organismos que producen estos productos son fantstico en su grado de sobreproduccin. Cerca de 1 milln de toneladas de aminocidos con un mercado de $ 3 billones anualmente se producen (Cuadro 1) (Hols et al., 1999). En la produccin de aminocidos, Reglamento de comentarios se omite por aislamiento de un mutante auxotrficos y parcialmente hambre de sus necesidades. Un segundo medio para omitir comentarios Reglamento es producir a mutantes resistentes a un txico anlogo de la demetabolito deseado (es decir, un antimetabolito). Las combinaciones de auxotrficos y antimetabolito reasistencia mutaciones son comunes en la principales productora de metabolito microorganismos. Aproximadamente millones de libras de glutamato monosdico, un potenciador del sabor potente, se realizan anualmente por fermentacin utilizando (por ejemplo, varias especies de los gneros Corynebacterium y Brevibacterium Corynebacterium glutamicum, Brevibacterium flavum y lactofermentum Brevibacterium). Hoy, estos productores de glutamato se clasifican como subespecies de C. glutamicum (por ejemplo, C. glutamicum ssp. flavum y C. glutamicum ssp. lactofermentum). Glutamato monosdico se vende por unos $0,95 dlares por libra (Wilke, 1999). La mayor parte de los cereales se consumen en el mundo son deficientes en el aminocido esencial, L-lisina. Suplementos de lisina convierte estos cereales en alimento balanceado o pienso. Lisina es un miembro de la familia de aspartato de aminocidos. Es producida por la bacteria por una ramificada camino que tambin produce metionina, treonina y isoleucina. Esta ruta es controlada muy bien en un organismo como la Escherichia coli, este organismo tiene tres ki-aspartatonases, cada uno de los que se rige por un producto final diferente. Adems, despus de cada rama punto, las enzimas son inhibidas por la inicial de sus respectivos productos finales y no-sobreproduccin

Sin embargo, en los organismos fermentacin de la lisina (por ejemplo, varios mutantes de C.glutamicum y sus familiares), no es una quinasa aspartato nico que se regula a travs concertadala inhibicin por retroalimentacin treonina y lisina. Por la eliminacin gentica de la deshidrogenasa homoserina, una produccin de glutamato de tipo salvaje Corynebacterium se convierte en una lysineoverproducing mutante que no puede crecer a menos que la metionina y treonina se aaden a la mediano plazo. Siempre y cuando el suplemento de treonina se mantiene baja, la concentracin intracelular de treonina es la limitacin y la inhibicin por retroalimentacin de la quinasa aspartato se pasa por alto. Tcnicas de ADN recombinante se han abierto camino en el rea de produccin de cido amino. Las cepas de E. coli y Serratia marcescens se han construido con plsmidos teniendo amino operones de biosntesis de cidos. Transformacin del plsmido se ha logrado en C. glutamicum, de modo que la tecnologa del ADN recombinante se utiliza ahora para mejorar estos acidproducing amino comerciales las cepas. Las manipulaciones ms importantes han implicado la clonacin de genes para aumentar los niveles de retroalimentacin resistente aspartato quinasa y dihydrodipicolinate sintasa. Como resultado, la lisina la produccin industrial produce 170 g por litro y 0,54 g L-lysine.HCl por g de glucosa utilizado (molar rendimiento de 0,54 moles de L-lisina por mol de glucosa utilizada) (Eggeling y Sahm, 1999; Kawahara et al., 1990). L-lisina se produce a un nivel anual de 300 000 toneladas, con un mercado de $ 600 millones (McCoy, 1999). Se vende por alrededor de $ 1 por libra (Wilke, 1999; Reisch, 2000).

La tecnologa recombinante, as como la mutagnesis y seleccin tradicional han sido los principales influye en la construccin de cepas bacterianas capaces de producir 100 g por L de L-treonina, de 40 aos g por L de L-isoleucina, 34 g por litro de L-leucina, 31 g por litro de L-valina, 28 g por litro de L-fenilalanina, 58 g por litro de L-triptfano, 26 g por L de L-tirosina, 100 g por L de L-prolina, de 65 aos g por L de L-arginina y 40 g por litro de Lhistidina. Algunas de las cifras de produccin y / o valores de mercado de un nmero de estos aminocidos son los siguientes: Lfenilalanina: 13 000 toneladas, $ 198 millones, el cido L-asprtico: $ 43 millones (McCoy, 1999), L-isoleucina: 400 toneladas. La precio de L-treonina es de $ 4 por libra y el Ltriptfano 20 dlares por libra (Wilke, 1999). El inters comercial en las fermentaciones de nucletidos se debe a la actividad de ribonuclesido purina dos 5 9-monofosfato, es decir, cido guanlico (5 9-GMP) y el cido inosnico (5 9-IMP) como potenciadores del sabor (Demain, 1978; Kuninaka, 1996). Entre 2500 toneladas de GMP y IMP Anualmente se producen slo en Japn, con un mercado combinado de US $ 350 millones por ao (Mc- Coy, 1999). Tres procesos principales se utilizan: (1) hidrlisis de ARN de levadura por hongos nucleasa a AMP y GMP seguido por desaminacin enzimtica de la AMP en IMP, (2) la produccin fermentativa de los nuclesidos inosina y guanosina por Bacillus subtilis mutantes seguido por fosforilacin qumica, y (3) la fermentacin directa de azcar al IMP por C. glutamicum mutantes ms gasto de conversin de la guanina a GMP por sntesis de rescate con clulas intactas de Brevibacterium ammoniagenes. Los ttulos de IMP por fermentacin directa han llegado a 27 g por litro (Kuninaka, 1996). La clave para la acumulacin de purinas eficaz es la limitacin de la intracelulares AMP y GMP. Esta limitacin est en mejores condiciones por la alimentacin restringida de auxtrofos purina. Por lo tanto, la adenina-que requieren mutantes que carecen de sintetasa adenilosuccinato acumular hipoxantina o inosina que resulta de la descomposicin del IMP intracelularmente acumulado. Ciertos adenina- auxtrofos de B. subtilis excretan ms de 10 g de inosina por L. Estas cepas siguen siendo objeto a la represin GMP de las enzimas del camino comn. Para minimizar la gravedad de este la regulacin, la adenina se auxtrofos ms mutado para eliminar IMP deshidrogenasa. Estos auxtrofos doble adenina-xantina muestran un incremento del doble en la actividad especfica de algn camino comn enzimas y se acumulan hasta un 15 por inosina g L en condiciones de limitar la adenina y la xantina (o guanosina). Una mayor desregulacin se logra mediante la seleccin de mutantes resistentes a los anlogos de la purina. Por lo tanto, los mutantes que requieren la adenina y la xantina y resistente a azaguanina producir ms de 20 g por inosina inactivacin L. en la insercin del IMP gen de la deshidrogenasa en otra cepa B. subtilis producido una cultura produciendo inosina 35 g por L (Miyagawa et al., 1989). La ingeniera gentica de la inosina monofosfato deshidrogenasa gen en una cepa de B. subtilis, que se estaba produciendo 7 g por guanosina L y 19 g por litro inosina, la produccin cambi a 20 g por guanosina L y 5 g por litro inosina (Miyagawa et al. , 1986). Otros B. subtilis mutantes producir hasta 23 g por litro de guanosina (Kuninaka, 1996). En lo que respecta a la produccin de pirimidina, otra cepa recombinante de B. subtilis produce 18 g por litro de citidina y un mutante que carecen de homoserina deshidrogenasa (que aument el concentracin de la aspartato precursor de la clula) produce 30 g por litro (Asahi et al., 1996). Riboflavina (vitamina B2) fue producido comercialmente durante muchos aos por la fermentacin y productos qumicos de sntesis (Demain, 1972), pero hoy en da, la fermentacin es la va principal. Riboflavina superproductoras incluyen dos como la levadura, los mohos, Eremothecium ashbyii y Ashbya gossypii, que sintetizar la riboflavina en concentraciones superiores a 20 g por L. Produccin de riboflavina ascendieron a 4 millones de libras en 1992 (Vandamme, 1992). A riboflavina

overproducer como A. gossypii hace 40 000 veces ms vitamina que necesita para su propio crecimiento. La bioqumicas claves a la sobreproduccin riboflavina parece implicar la falta de sensibilidad a la represin efectos del hierro. Nuevos procesos utilizando las especies de Candida o cepas recombinantes de B. subtilis se han desarrollado en los ltimos aos, que producen 20 a 30 g de riboflavina por L. La vitamina B12 (cianocobalamina) se produce industrialmente con Propionibacterium shermanii o denitrificans Pseudomonas (Spalla et al, 1989;.. Kusel et al, 1984). Estas cepas que unas 100 000 veces ms vitamina B12 de la que necesitan para su propio crecimiento. La clave de la fermentacin es la evitacin de la represin de retroalimentacin con la vitamina B12. De gran importancia en el P. fermentacin denitrificans es la adicin de betana (Kusel et al., 1984). La vitamina B12 sobreproduccin es totalmente dependiente de la betana, pero el mecanismo de control es desconocida. Produccin de vitamina B12 se ha alcanzado un nivel de 150 mg por litro (Spalla et al., 1989). Cerca de 3 toneladas de cianocobalamina se se producen al ao con un mercado de US $ 71 millones (McCoy, 1999). En la produccin de la biotina, la retroalimentacin es causada por la represin de la enzima Acetil-CoA carboxilasa biotina holoenzyme sintetasa, con la biotina 5-ciclasa actuando como corepressor (Barker y Campbell, 1981). Las cepas de S. marcescens obtenidos por mutagnesis, seleccionadas por su resistencia a la biotina antimetabolitos y sometidos a la clonacin molecular, produccin de 600 mg por litro en el presencia de altas concentraciones de hierro de azufre y hierro (Masuda et al., 1995). Como un ttulo es lo suficientemente alto como para competir econmicamente con el proceso qumico tradicional. La biotina mercado es de $ 100 millones por ao (Shaw et al., 1999). Tradicionalmente, se ha producido procesos biolgicos qumicamente, pero se estn convirtiendo en nuevos econmica. Ingeniera de E. coli genes en Agrobacterium / Rhizobium HK4 llev a la produccin de 110 mg por litro (Shaw et al. 1999). Vitamina C (cido L-ascrbico) se ha producido qumicamente durante muchos aos. Se fabrica a razn de 60 000 toneladas por ao con un mercado de $ 60 millones (Wilke, 1999). Una novela proceso implica el uso de una cepa genticamente Erwinia herbicola que contiene unagen de Corynebacterium sp. El organismo de ingeniera convierte la glucosa en 2 ketogulonic cido, que puede ser fcilmente convertido por el cido o base de cido ascrbico (Pramik, 1986). Otro proceso desarrollado de forma independiente se convierte 40 g de glucosa por L a 20 g por L 2-ceto-L gulonate (Grindley et al., 1988). Este proceso implica la clonacin del gen que codifica 2,5 - diceto-D-gluconato de reductasa de Corynebacterium sp. a Erwinia citreus. La clonacin del plsmido de los genes que codifican L-sorbosa deshidrogenasa y la deshidrogenasa L-sorbosone de Oxydans Gluconobacter de nuevo en el mismo organismo dio una cepa capaz de convertir 150 g por litro de D-sorbitol en 130 g por litro de 2-ceto-L-gulonate (Saito et al., 1997). Los microbios han sido ampliamente utilizados para la produccin comercial de los cidos orgnicos. Alrededor de 1 millones de libras de cido ctrico se producen al ao con un importante mercado de $ 1.4 mil millones. Este cido orgnico que se produce a travs de la va de Embden-Meyerhof y el primer paso de la tricarboxlico ciclo del cido. El mayor control del proceso consiste en la inhibicin por retroalimentacin de fosfofructoquinasa por el cido ctrico. El proceso comercial emplea el hongo Aspergillus niger en deficiencia de hierro y manganeso, los medios de comunicacin. La deficiencia de manganeso tiene dos efectos beneficiosos en la fermentacin del cido ctrico: (1) conduce a altos niveles de NH4 intracelular que invierte la inhibicin del cido ctrico de la fosfofructoquinasa, y (2) que aporta en la formacin de pequeas bolitas de micelio, que es la mejor forma morfolgica para la produccin de cido ctrico. La efecto morfolgico se debe a un cambio en la composicin de la pared

celular causada por el crecimiento en baja Minnesota 1. Un alto nivel de produccin de cido ctrico tambin se asocia con una alta concentracin intracelular de la fructosa 2,6-bifosfato, un activador de la gluclisis (Harmsen y col., 1992). Otros factores que contribuyen a la alta produccin de cido ctrico son la inhibicin de la isocitrato deshidrogenasa por el cido ctrico, y el ptimo de pH bajo (1,7-2,0). Los niveles ms altos de pH (por ejemplo, 3.0) conducen a la produccin de los cidos oxlico y glucnico en lugar de cido ctrico. El bajo pH inactiva la glucosa oxidasa, que normalmente se producira cido glucnico (Kubicek y Rohr, 1986). En aproximadamente 4-5 das, la mayor parte (80%) de que el azcar se convierte en cido ctrico, los ttulos de llegar a alrededor de 100 g por L. El cido ctrico es fcil de asimilar, sabroso y tiene una baja toxicidad. Por lo tanto, es ampliamente utilizado en la industria alimentaria y farmacutica. Se emplea como un acidificantes y mejorar el sabor del agente, como antioxidante para la inhibicin de la rancidez en las grasas y aceites, como un amortiguador en las mermeladas y jaleas, y como estabilizador en una variedad de alimentos. La industria farmacutica la industria utiliza aproximadamente el 16% de la oferta disponible de cido ctrico. Los procesos han sido desarrollado para la produccin de cido ctrico por levaduras del gnero Candida, especialmente de los hidrocarburos o los aceites. Levaduras son capaces de convertir las n-parafinas a los cidos ctrico y isoctrico en muy altos rendimientos (150 a 170% en funcin del peso). Produccin de cido ctrico en lugar de isoctrico cido se ve favorecida por la seleccin de mutantes que son deficientes en la enzima aconitasa. Ctricolos ttulos de cido de hasta 225 g por litro se han alcanzado con estas levaduras (Kubicek y Rohr, , 1986). Otros cidos orgnicos valiosos incluyen actico, lctico, mlico, glucnico, itacnico, tartrico y succnico. El cido succnico pueden ser producidos por el organismo Actinobacillus succinogenes rumen a 110 g por litro (Zeikus y Jain, 1999). El precio proyectado en el 75 000 toneladas / ao nivel es de $ 0,55 por kg. La produccin actual es de 15 000 toneladas por ao, todos hechos en petrochemically un precio de $ 5.90 a 8,80 por kg. El mercado mundial de cido lctico es ms de 100 000 toneladas al ao (Skory y Bothast, 1999) y su precio es de $ 1.05 por libra (Wilke, 1999). Productos en desarrollo son los no clorados solvente lactato de etilo, y bioplstico, polilactida. Rhizopusoryzae es el favorito para la produccin ya que slo tiene L(estereoqumicamente puro 1)-cido lctico. El cido lctico se hizo en un momento de sntesis qumica, pero este proceso ha sido totalmente eliminado en favor de la fermentacin. Se produce anaerbicamente con un 95% (w / w) de rendimiento sobre la base de hidratos de carbono cargado, un ttulo de ms de 100 g por litro y una productividad de ms de 2 g perLh. El cido lctico se polimeriza en polilactida que podra convertirse en un importante bioplstico en el futuro. A pesar de los procesos microbianos existen para los otros cidos, que no han sido explotados comercialmente a gran escala. Una aplicacin interesante de la ingeniera gentica para la fermentacin del cido actico fue la clonacin del gen de la aldehdo deshidrogenasa de Acetobacter polyoxogenes en un vector plsmido en Acetobacter aceti subsp. xylinum. Esta manipulacin aumento de la tasa de produccin de cido actico por encima del 100% (de 1,8 a 4 g por LH) y el ttulo en un 40% (de 68 a 97 g por litro) (Fukaya et al., 1989). El cido glucnico es un mercado de $ 93 millones, un precio de $ 0.85 por libra y una produccin de 40 000 toneladas por ao (Wilke, 1999). cido itacnico tiene un mercado anual de US $ 68 millones (McCoy, 1999). El alcohol etlico es un metabolito principal que puede ser producido por la fermentacin de azcar o un polisacrido que puede ser despolimerizado a un azcar fermentable. Las levaduras son los preferidos para estas fermentaciones, pero las especies utilizadas

depende del sustrato empleado. Saccharomyces cerevisiae es empleado para la fermentacin de hexosas, mientras que Kluyveromyces fragilis o Especies de Candida pueden ser utilizados si la lactosa o pentosas, respectivamente, son los sustratos. Bajo condiciones ptimas, aproximadamente 10-12% de etanol por volumen se obtiene dentro de 5 das. Una concentracin tan elevada de crecimiento se ralentiza y se interrumpe la fermentacin. Con especial levaduras, la fermentacin se puede continuar con la concentracin de alcohol de 20% en volumen. Sin embargo, estas concentraciones se alcanzan slo despus de meses o aos de fermentacin. Aunque la produccin de etanol de sntesis del etileno petroqumica fue la predominante fuente de etanol industrial, hoy en da se fabrica principalmente por la fermentacin en un nivel de 4 millones de toneladas anuales, las cantidades de etanol sinttico a slo 1 milln de toneladas. Las bacterias tales como clostridios y Zymomonas estn siendo reexaminados para la produccin de etanol, despus de aos de abandono. Clostridium thermocellum, un termfilo anaerbica, puede convertir la celulosa de residuos directamente al etanol. Acetato de otros productos clostridios, lactato, acetona y butanol y ser utilizado como el petrleo se agota en el mundo. Combustible de etanol producido a partir de biomasa se ofrecer una ayuda de la contaminacin del aire causada por el uso de gasolina y no contribuira al efecto invernadero. Debido a la eliminacin del plomo de la gasolina, el etanol se est sustituido como una mezcla para aumentar el octanaje de la gasolina. La demanda de EE.UU. para el etanol combustible en 1995 fue de 1000 millones de galones por ao, principalmente como combustible oxigenado (O'Brien y Craig, 1996) y se espera llegar a los 2 millones de galones en 2001. E. coli se ha convertido en una excelente productor de etanol (43% v / v) por tecnologa de ADN recombinante (Ingram et al., 1987). Alcohol deshidrogenasa II y piruvato descarboxilasa genes de Zymomonas mobilis se insertaron en E. coli y se convirti en el sistema dominante para la regeneracin de NAD. El etanol representa ms del 95% de los productos de fermentacin de la cepa genticamente modificados, mientras que el original Cepa de E. coli lleva a cabo una fermentacin cido mixta. Con respecto al etanol, bebidas, unos 60 millones de toneladas de cerveza y 30 millones de toneladas de vino se producen cada ao. Los polisacridos son tambin importantes productos comerciales por microorganismos. La ms conocido es xantana que se produce en 30 000 toneladas por ao con un mercado de $ 408 millones (Wilke, 1999; McCoy, 1999). Adems de las mltiples secuencias de reaccin de la fermentacin, los microorganismos son extremadamente tiles para llevar a cabo procesos de biotransformacin en el que se convierte en un compuesto en un producto estructuralmente relacionados por uno o un pequeo nmero de enzimas contenidas en las clulas (Rosazza, 1982). Bioconverting organismos son conocidos por prcticamente todos los tipos de qumicos reaccin. Los esteroides han sido transformados de productos muy importantes para la industria farmacutica. Una de las primeras y ms famosas es la biotransformacin de la progesterona a 11 uno-hidroxiprogesterona. Las reacciones son estereoespecfica, lo ltimo en la especificidad de ser emplified por ejemplo bioconversin de esteroides. Esta especificidad es explotada en la resolucin de mezclas racmicas, cuando un ismero bien definido, en lugar de una mezcla racmica se desea. Bioconversin resulta esencial para la industria de qumica fina en la que sus clientes demandan singleisomer intermedios (Rogers, 1999). Bioconversin se caracterizan por muy altos rendimiento (es decir, 90-100%). Otros atributos incluyen condiciones suaves de reaccin y el acoplamiento de las reacciones utilizando un microorganismo que contiene varias enzimas que trabajan en serie. Hay una enorme inters en las clulas inmovilizadas para llevar a cabo estos procesos. Estos son generalmente mucho ms estable que cualquiera de las clulas o enzimas libres y son ms econmicas que las enzimas inmovilizadas. Tcnicas de ADN recombinante han sido tiles en el desarrollo de nuevos

bioconversiones. Por ejemplo, la clonacin del gen que codifica fumarasa en S. cerevisiae mejorar la bioconversin de malato a fumarato de 2 g por litro a 125 g por litro en un slo movimiento (Neufeld et al., 1991). El rendimiento de conversin con la cepa se construy cerca del 90%.

4. Produccin de metabolitos secundarios Producidas por microorganismos metabolitos secundarios (Tabla 2) son muy importantes para nuestra salud y nutricin (Demain y Fang, 1995). Como un grupo que incluye antibiticos, medicinas otras, toxinas, pesticidas y de los animales y los factores de crecimiento de las plantas, tienen una tremenda econmica importancia. En la cultura de lote o lotes alimentados, los metabolitos secundarios se producen por lo general

despus de que el crecimiento se ha ralentizado. Ellos no tienen ninguna funcin en el crecimiento de los cultivos de produccin, son producidas por ciertos grupos taxonmicos restringidos de los organismos, y se forman generalmente como mezclas de miembros estrechamente relacionados de una familia qumica. En la naturaleza, los metabolitos secundarios son importantes para los organismos que las producen, que funciona como: las hormonas sexuales (1), (2) ionforos; (3) armas competitivas frente a otras bacterias, hongos, amebas, insectos y plantas; (4) agentes de la simbiosis, y (5) efectores de diferenciacin (Demain, 1996). El ms conocido de los metabolitos secundarios son los antibiticos. Este notable grupo de compuestos forman un conjunto heterogneo de molculas biolgicamente activas con diferentes estructuras y modos de accin. Atacan a prcticamente todo tipo de actividad microbiana, como La sntesis de ADN, el ARN y protenas, funcin de la membrana, el

transporte de electrones, la esporulacin, la germinacin, y muchos otros. Desde 1940, hemos asistido a una explosin de nuevos y potentes las molculas de los antibiticos que han sido de gran utilidad en la medicina, la agricultura y la investigacin bsica. Sin embargo, la bsqueda de nuevos antibiticos contina con el fin de combatir la evolucin de los patgenos y bacterias resistentes de forma natural y hongos y microorganismos hasta entonces susceptibles que se han desarrollado la resistencia, la mejora de las propiedades farmacolgicas, los tumores de combate, virus y parsitos, y descubrir compuestos ms seguros y ms potentes. De 1990 a 1994, ms de 1000 nuevos metabolitos secundarios se caracterizaron de los actinomicetos solo (Sanglier et al., 1996). Alrededor de 6000 los antibiticos Se han descrito, a partir de 4000 los actinomicetos, y todava se estn descubriendo en un tasa de alrededor de 500 por ao. Streptomyces griseus cepas producen ms de 40 diferentes antibiticos y B. subtilis de 60 aos. Las cepas de Streptomyces hygroscopicus que casi 200 antibiticos. Una cepa Micromonospora puede producir 48 aminociclitol antibiticos. Los antibiticos varan en tamao de las molculas pequeas como la cicloserina (102 daltons) y bacilysin (270 daltons) para polipptidos, tales como la nisina, que contiene 34 residuos de aminocidos. En la bsqueda de antibiticos eficaces, muchos de los nuevos productos se fabrican qumicamente mediante la modificacin de los antibiticos naturales; Este proceso se llama "semisntesis. Ya en 1974, haba ms de 20 000 semisinttico penicilinas, cefalosporinas de 4000, 2500 tetracylines, 1000 rifamicinas, 500 kanamycins, y 500 chloramphenicols que se haba preparado. El mercado de los antibiticos incluye alrededor de 160 los antibiticos y derivados, como los antibiticos pptido b-lactmicos, el macrlido eritromicina polictido, tetraciclinas, aminoglucsidos y otros (Strohl, 1997; Brown, 1996). En el mundo mercado de los antibiticos en 1996 fue de ms de $ 28 millones (Bentley, 1999). Los antibiticos b-lactmicos son los naturales de la penicilina G y la biosntesis de la penicilina V con un mercado combinado de US $ 4,4 millones de dlares, penicilinas semisintticas muchas, y las cefalosporinas semisintticas que tienen un de mercado de $ 11 mil millones. Veinte y seis mil toneladas de penicilina G y 10 000 toneladas de penicilina V se hacen por ao (van Nistelrooij et al., 1998). El precursor de las penicilinas semisintticas, cido 6aminopenicilnico (6APA), se hace a un nivel de 9.000 toneladas por ao (Lalonde, 1997). En 1992, el 16 900 toneladas de penicilina G producidos se distribuyeron de la siguiente manera:

1. uso mdico directo: 12% 2. conversin de 6-APA: 65% 3. conversin a 7-ADCA y otros intermediarios: 20% 4. la utilizacin de piensos: un 2%. De las 7500 toneladas de penicilina V producido, las distribuciones ocurri lo siguiente: 1. uso mdico directo: 19%
2. conversin de 6-APA: 59% 3. conversin a 7-ADCA y otros intermediarios: 23%. De los 7.350 toneladas de 6-APA producido a partir de las penicilinas G y V, el 48% se utiliz para la ampicilina y 27% para la amoxicilina. Un solo semisinttico ceftriaxona cefalosporina, (5rocephin) tiene un mercado de US $ 1 mil millones. El mercado de las tetraciclinas es de $ 1,4 mil millones, para la eritromicina $ 3.5 billones, y para la vancomicina glucopptidos ms teicoplanina, $ 1 mil millones (McDaniel et al, 1999;.

Williams y Bardsley, 1999). Durante aos, los productos farmacuticos ms importantes (tales como agentes hipertensivos y anti-inflamatorio) utiliza para las enfermedades no infecciosas son productos estrictamente sintticas. Del mismo modo, la teraputica importante para no microbianos enfermedades parasitarias en los animales (por ejemplo, los coccidiostticos y antihelmnticos) vino de la deteccin de los compuestos sintetizados seguido por modificacin molecular. A pesar de las pruebas de miles de compuestos sintticos, slo unos pocos estructuras prometedoras fueron descubiertos. Como nuevos compuestos de plomo se hizo ms y ms difcil de encontrar, microbiano caldos llenaron el vaco y los productos microbianos aumentado en importancia en el tratamiento de nonmicrobial las enfermedades. Hoy en da, politeres producidas por microorganismos (Westley, 1977) como la monensina, lasalocid y salinomicina dominan el mercado coccidiosttico y tambin el crecimiento de la divisin promotores en el uso de los animales rumiantes. Las avermectinas, otro grupo de estreptomiceto productos con un mercado de casi mil millones de dlares al ao, tienen una elevada actividad contra los helmintos y artrpodos (Campbell et al., 1983). De hecho, su actividad es un orden de magnitud mayor de lo que se descubrieron los agentes antihelmnticos, la gran mayora de los cuales eran sintticas. Muchos de los productos microbianos con importantes actividades farmacolgicas fueron descubiertos mediante la deteccin de inhibidores mediante simples ensayos enzimticos (Umezawa, 1982). Un gran xito ha sido las estatinas, como lovastatina (mevinolina), pravastatina y otros producidos por hongos (Endo, 1985) que actan como agentes reductores de colesterol. La lovastatina es producido por Aspergillus terreus. Las estatinas son potentes inhibidores competitivos de la 3-hidroxi-3-metilglutaril- coenzima A reductasa de hgado. Ellos tienen un mercado muy grande de $ 8.4 mil millones (Stinson, , 1998). Otro inhibidor de la enzima importante es el cido clavulnico, un actinomiceto b-lactmicos, que acta como un inhibidor de b-lactamasas y se vende en combinacin con la penicilina. A El tercer tipo de inhibidor de la enzima en el mercado es la acarbosa, un inhibidor natural de la glucosidasa intestinal (Mller, 1986), que es producida por un actinomiceto del Actinoplanes gnero. Lo disminuye la sntesis de la hiperglucemia y los triglicridos en el tejido adiposo, el hgado y el intestino pared de los pacientes que sufren de diabetes, la obesidad y la hiperlipidemia tipo IV. Tambin en el uso comercial son los bioplaguicidas como fungicidas (por ejemplo, kasugamicina, polyoxins), bioinsecticidas (cristales de Bacillus thuringiensis, nikkomycin, espinosinas), bioherbicidas (Bialafos), antihelmnticos y coccidiostticos como se mencion anteriormente, los promotores de crecimiento de los rumiantes (Monensina, lasalocid, salinomicina), reguladores del crecimiento vegetal (giberelinas), inmunosupresores para trasplantes de rganos [ciclosporina A, FK-506, la rapamicina], agentes anabolizantes en la granja animales (zearelanone), uterocontractants (alcaloides del cornezuelo de centeno), y agentes antitumorales (doxorubicina, mitomicina daunorubicina, bleomicina) (Demain, 1983; Chadwick y Whelan, 1992). La ciclosporina A es un mercado de US $ 1,5 millones. La planta de metabolitos secundarios, el taxol, que es tambin por hongos, tiene un mercado de US $ 1 mil millones (Mitscher et al, 1998.) agujas de pino del tejo las plantas son la fuente comercial importante. Muchos de los compuestos anteriores se aislaron por primera vez como antibiticos pobres o txicos (monensina, por ejemplo, ciclosporina, rapamicina), o como las micotoxinas (kaloids al ergot, giberelinas, zearelanone) antes de ser puestos a trabajar para nuestro beneficio. Las giberelinas se regulatotors isoprenoides controlar el crecimiento de floracin, germinacin de las semillas y el tallo elongacin (Tudzinski, 1999). Que se producen a un nivel de ms de 25 toneladas por ao y han un mercado de 100 millones de dlares. El cristal de la protena del Bacillus thuringiensis tiene una bioinsecticida de mercado de $ 125 millones (Stabb et al., 1994),

pero su importancia radica en su gen que se utiliza para hacer resistentes a los insectos recombinante plantas. La gentica ha tenido una larga historia de contribuir a la produccin de microorganismos secundarios metabolitos, como los antibiticos (Holt y Saunders, 1985). Los enormes aumentos en la fermentacin la productividad y los consiguientes descensos en los costos se han producido principalmente por mutagnesis y la deteccin de cepas microbianas mayor produccin. La mutacin tambin ha servido para: (1) cambio de la proporcin de metabolitos producidos en un caldo de fermentacin de un entorno ms favorable distribucin, (2) aclarar las vas del metabolismo secundario, y (3) rendimiento de los nuevos compuestos. Los productos de utilidad mdica desmetiltetraciclina y doxorrubicina (adriamicina) fueron descubiertas por simple mutacin de las culturas producir la tetraciclina y la daunorubicina (Daunomicina), respectivamente. La tcnica de la biosntesis mutacional ha sido utilizado para la descubrimiento de muchos nuevos aminoglucsidos, macrlidos y antibiticos de antraciclina. Recientemente se ha empleado con xito en la produccin de una avermectina comercial, llamado doramectina (Denoya et al., 1995).

5. ADN recombinante La industria de la biotecnologa moderna ha tenido un impacto importante en el mundo de los negocios. Biofarmacuticos (Frmacos de protenas recombinantes, vacunas y anticuerpos monoclonales) tienen un de mercado de $ 15 mil millones. Slo en los EE.UU., hay cerca de 1.600 empresas de biotecnologa, empleando 153 000 personas, con ingresos totales de $ 19.6 mil millones y las ventas de $ 13,4 millones (Ernst & Young, 1999). Las compaas de biotecnologa EE.UU. haba aprobado en 14 productos biofarmacuticos 1998 y 300 ms se encontraban en fase II y III de ensayos clnicos. La industria fue valorada en $ 93 mil millones en 1997 (Reisman, 1999). El mercado de la fabricacin por contrato es de $ 350-450 million por ao. Ms de 80 frmacos biotecnolgicos estn ahora en el mercado y ms de 1200 estn en ensayos clnicos. I + D en la industria de la biotecnologa se acerc a EE.UU. $ 10 billones en 1998, un aumento del 16% respecto a 1997 (Ernst & Young, 1999). Canad cuenta con 280 empresas, 10 empleados y 000 ingresos anuales de $ 1 mil millones (Yanchiski, 1999). Europa tiene casi 1.200 empresas, 45 000 empleados y unos ingresos de $ 3.7 billones, el Reino Unido y Alemania son los principales actores. Japons la biotecnologa ha llevado a cabo principalmente en los principales farmacutica, alimentaria y de bebidas empresas con slo unas pocas empresas de biotecnologa pequeas que existen. Sin embargo, se estn produciendo cambios en Japn y las nuevas empresas pequeas estn siendo animados y formados. El ms conocido de los productos de la industria de la biotecnologa moderna son los mamferos polipptidos como la eritropoyetina (EPO), con un mercado de $ 2,9 mil millones; interferona, $ 1.6 mil millones; hormona de crecimiento humano (HGH, la somatotropina humana), $ 1.1 mil millones; la insulina humana, $ 1 millones de dlares, y el tejido plasmingeno, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), $ 720 millones activador tisular (tPA), $ 290 millones, entre otros (Swartz, 1996; Pramik, 1999). Otro importante producto es la vacuna recombinante contra la hepatitis B ($ 725 millones). Estos polipptidos son principalmente por las bacterias tales como E. coli ($ 2,9 mil millones) y el cultivo de clulas mamferas ($ 3,3 millones) (Langer, 1999), pero las levaduras, hongos filamentosos y clulas de insectos tambin son importantes. El

desarrollo de la cultura de clulas animales fue facilitado por el desarrollo antes de la fermentacin microbiana tecnologa. En un futuro muy cercano, se espera que muchos productos se har en animales y plantas transgnicos. Una de las razones es el alto costo de los productos de clulas de mamferos (por ejemplo, 1992 los precios de venta de tPA, HGH, G-CSF y de la OEP fueron de US $ 23 000, $ 35 000, $ 450 000 y $ 840 000 por gramo, respectivamente). Tecnologa de ADN recombinante tambin ha producido una revolucin en la agricultura, donde en 1998, el mercado agrcola incluye resistente a los insectos del maz, papa, soja, resistente a los herbicidas canola, algodn, soja y maz, calabazas resistentes a virus, y canola contiene aceites especiales y el tomate con pectina aumenta. En 1999, las plantas transgnicas compone el 50% del algodn de cultivos, el 30% de la cosecha de soja y 15% de la cosecha de maz en los Estados Unidos. Por desgracia, estos acontecimientos increbles estn siendo obstaculizados por la presin poltica de antigenetics grupos. No se dan cuenta de que la revolucin verde, que era tan importante en la alimentacin el mundo en los ltimos 50 aos, se produjo a travs de la gentica en la forma de cultivo de plantas. La nueva gentica de la biotecnologa ser necesario para alimentar a la poblacin mundial en constante expansin. Experimentando el impacto inmediato de la evolucin de la tecnologa del ADN recombinante fue la industria de las enzimas que haba sido el suministro de enzimas industriales, con un mercado de alrededor de $ 300 millones en la dcada de 1980. Empresas de la enzima, al darse cuenta de que sus productos fueron codificados por un solo gen, rpidamente adoptado tcnicas de ADN recombinante para aumentar la enzima de produccin y hacer nuevas enzimas. Como resultado, el mercado de hoy enzima industrial anual ventas de $ 1.6 billones, con aplicaciones en el procesamiento de alimentos y el almidn (45%), detergentes (34%), textiles (11%), cuero (3%) y celulosa y papel (1,2%) (Stroh, 1998). La proteasa subtilisina, que se utiliza en los polvos de lavar, las cuentas de 200 millones de dlares de este mercado (Wackett, 1997). Ms del 60% de estas enzimas son los productos recombinantes (Cowan, 1996). La los mercados mundiales de algunos productos de las reacciones enzimticas son las siguientes (Rozell, 1999): 1. De alta fructosa de jarabe de maz de $ 1 mil millones 2. Aspartame: $ 800 millones 3. Acrilamida: $ 300 millones. Mercados existen importantes para las enzimas especiales, tales como la quimosina recombinante para el queso haciendo ($ 140 millones) (Stroh, 1994), las enzimas de restriccin para las tcnicas moleculares ($ 100 millones) (Wrotnowski, 1996) y la Taq polimerasa para aplicaciones de PCR ($ 80 millones) (Persidis, , 1998). Un gran mercado ($ 2,3 millones) existe para las enzimas teraputicas (Barber, 1996), muchos de los cuales son los mismos polipptidos mencionados anteriormente. Tecnologa de ADN recombinante se ha aplicado a la produccin de antibiticos (Chater, , 1990). Muchos de los genes que codifican enzimas de la biosntesis de antibiticos individuales han sido clonados y expresa en altos niveles de microorganismos heterlogos. Continuos esfuerzos en la aplicacin de tecnologa de ADN recombinante a las fermentaciones han llevado a la sobreproduccin de limitar las enzimas de las vas de biosntesis importante, por lo tanto aumentar la produccin de la final productos (Skatrud et al., 1989). Las vas de biosntesis de antibiticos a menudo son codificadas por cluster genes cromosmicos, especialmente en las bacterias, que facilita la transferencia de una ruta completa en un slo movimiento. Incluso en los hongos, los genes de la va a veces se agrupan, tales como los genes de la biosntesis de la penicilina en Penicillium. Para el descubrimiento de productos nuevos o modificados, tcnicas de ADN recombinante se utilizado para introducir genes que codifican para sintetasas antibiticos en los productores de otros antibiticoso en las

cepas no productores para obtener o modificar los antibiticos hbridos (Epp et al, 1989;. Strohl et al, 1989;. Khosla et al, 1996).. 6. comentarios finales Hoy en da, la microbiologa es un participante importante en la industria global. Lo mejor est por venir como los microbios se mueven en los sectores del medio ambiente y energa. Como se ha dicho hace muchos aos por W. Jackson Foster "Nunca subestimes el poder de los microbios", y por David Perlman "Si usted cuida de sus amigos microbiana, que se har cargo de su futuro "y va a vivir felices para siempre. Reconocimientos Doy las gracias a Aiqi Colmillo de asesoramiento y Fang Fang Traves de colaboracin en la preparacin del manuscrito.