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EXTRACCIN DE ESPORAS DE HMA DEL SUELO En el suelo rizosfrico de plantas colonizadas por HMA es posible encontrar mltiples propgulos

infectivos, particularmente estructuras como vesculas, hifas extrarradicales, fragmentos de races colonizadas, esporocarpos y esporas. Sin embargo, cuantificar la totalidad de propgulos infectivos exige el uso de tcnicas que demandan tiempo, como la del Nmero Mas Probable (NMP). Un mtodo fcil y rpido para determinar la abundancia de HMA, es la extraccin y conteo de esporas. Los resultados pueden dar una idea estimada de la abundancia y diversidad de HMA. Una vez las esporas de HMA hallan sido aisladas del suelo es posible probar su viabilidad determinando el porcentaje de germinacin. Comnmente no todas las esporas de HMA estn listas para germinar e infectar una planta hospedera. Esto sucede porque las esporas tienen un estado de dormancia en las cuales ellas no germinan hasta que las condiciones para su crecimiento y desarrollo sean favorables. PROCEDIMIENTO A. EXTRACCIN DE ESPORAS 1. Recoja muestras (500 g) de suelo de la rizosfera de plantas nativas del cultivo, a una profundidad en la cual se encuentren la mayora de las races (0-20 cm). En terrenos abiertos y con poca vegetacin, divida el lote en cuadriculas de 100 m2 y en cada una de ellas tomar como mnimo 10 submuestras a una profundidad promedio de 20 cm. Las muestras se homogenizan en un balde limpio y luego tomar una muestra compuesta por cuadricula de 500 gramos los cuales llevara al laboratorio para realizar la extraccin de esporas. 2. Determine el porcentaje de humedad para que pueda reportar los resultados en base seca 3. Transfiera 100 g a un beaker. 4. Adicione agua corriente y pirofosfato de sodio (1% m/v) y ponga en agitacin por 10 min (agitador con magneto). El propsito de este paso es dispersar los agregados del suelo. 5. Pase la suspensin por un juego de tamices con aperturas de 750 250 106 y 53m. 6. Generalmente no se procesa el material que es retenido en el tamiz de 750 m por la cantidad de races y detritos orgnicos. Se recogen las races y se transfieren a una caja de Petri con una lmina de agua de 1mm y se observan a partir del siguiente da en estereoscopio. 7. Recoja el material que fue retenido en los tamices de 250, 106 y 53m en tubos de centrfuga (50 ml). Use frasco lavador con agua corriente para arrastrar el material a los tubos. 8. Adicione una solucin de sucrosa (50% v/v) y centrifugue por 5 min. a 1800 rpm. 9. Pase el sobrenadante por el tamiz correspondiente y lave con agua corriente para remover la sucrosa. La exposicin de las esporas por mucho tiempo a la solucin de sucrosa puede deshidratarlas y causar un shock osmtico. 10. Arrastre el material de los tamices con agua corriente y recoja en papel filtro Whatman No.1 con lneas gua para facilitar la lectura en el estereoscopio.

BIBLIOGRAFA CONSULTADA

Habte, M and N.W. Osorio. 2001. Arbuscular Mycorrhizas: Producing and Applying Arbuscular Mycorrhizal Inoculum. College of Tropical Agriculture & Human Resources, Hawaii at Manoa. pp. 47.

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