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PROGRAMA GENERAL DE BIOQUIMICA

CICLO ESCOLAR: 2011 2012

MAESTROS DEL CURSO: DR. LUIS BENJAMN SERRANO GALLARDO M. en C. MARIO ALBERTO RIVERA GUILLEN M.C.E.. MA. FRANCISCA SAMIGUEL SALAZAR QFB. MA. CONCEPCIN HERNNDEZ SERRANO

CONTENIDO PROGRAMTICO (2011-2012) Inicio: 15 de agosto del 2011. 1. MTODOS Y TCNICAS DE ESTUDIO EN BIOQUMICA.

PROGRAMA GENERAL DE BIOQUMICA CONTENIDO PROGRAMTICO (2011-2012) Inicio: 15 de Agosto de 2011. 1. MTODOS Y TCNICAS DE ESTUDIO EN BIOQUMICA. Agosto 15 a agosto 19 de 2011. 3 horas

1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5.

Tcnicas de integracin grupal. Examen diagnstico de Qumica inorgnica y orgnica Tcnicas de estudio y herramientas para el aprendizaje Discusin del contenido programtico, Reglamento de Laboratorio, etc Importancia de la Bioqumica en el rea biomdica

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BIOQUIMICA Y MEDICINA

Del 22 al 24 de Agosto de 2011. 2 horas. 2.1. 2.2. 2.3. 3. Concepto General de la Lgica Molecular de la Materia Viva. Evolucin de la Vida. Axiomas fundamentales de la Lgica Molecular de la Materia Viva.

GENERALIDADES DE QUIMICA

Del 25 al 29 de Agosto de 2011. 2 horas. 3.1 Conceptos generales de Qumica Inorgnica y Orgnica. 3.1.1. Tabla peridica de los elementos. 3.1.2. Electronegatividad. 3.1.3. Funciones de oxidorreduccin. 3.1.4. Funciones elementales de Qumica Orgnica. 3.2 Composicin qumica de las clulas y de los alimentos 4. AGUA: CONCEPTOS DE pH.

Del 30 de Agto. al 9 de Septiembre de 2011. 5 horas. 4.1. 4.2. 4.3. 4.4. 4.5. 4.6. Importancia biomdica y Resumen La interaccin con el agua afecta la estructura de las molculas Definicin de pH y ejemplos matemticos Ecuacin de Henderson y Hasselblach: Problemas prcticos. Alteraciones: acidosis y alcalosis (bibliografa complementaria; Gonzalez Buitrago, 1998, pag 529-547) Discusin de Articulo de investigacin del agua.

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PROTEINAS.

Del 12 de Septiembre al 17 de Octubre de 2011. 15 horas. 5.1. Aminocidos y pptidos. 5.1.1. Importancia y resumen 5.1.2. Propiedades de loa aminocidos 5.1.3. Los grupos alfa R 5.1.4. Metabolismo de aminocidos Estructura y funcin de las protenas. 5.2.1. Importancia y resumen 5.2.2. Purificacin para anlisis 5.2.3. Secuencia de polipetidos 5.2.4. Genmica, proteonmica Protenas: Niveles de estructuracin 5.3.1. Importancia y resumen 5.3.2. Configuracin y clasificacin primaria y secundaria 5.3.3. Estructura terciaria y cuaternaria, mtodos de estudio 5.3.4. Plegamiento y consecuencias patolgicas 5.3.5. El colgeno 5.3.6. Discusin de artculo de investigacin 5.3.7. Caso clnico PRIMER EXAMEN PARCIAL 19 DE OCTUBRE DE 2011

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5.3.

6.

HEMOGLOBINA Y MIOGLOBINA.

Del 20 de Octubre al 30 de Noviembre de 2011. 15 Horas. 6.1. Hemoglobina. 6.1.1. Importancia y resumen 6.1.2. Grupo hemo y hierro 6.1.3. Curvas de disociacin y propiedades alostricas 6.1.4. Hemoglobinopatas 7. ENZIMAS Del 1. de Diciembre de 2011 al 25 de Enero de 2012. 15 horas

7.1 Mecanismo de accin 7.1.1. Importancia y resumen 7.1.2. Catalizadores enzimticos 7.1.3. Clasificacin 7.1.4 Grupos prostticos, cofactores y coenzimas, sitio activo, sustratos 7.1.5. Mecanismos enzimticos 7.1.6. Ejemplos de catlisis 7.1.7. Isoenzimas 7.1.8. Marcadores enzimticos en el diagnstico (Bibliografa complementaria (Bioqumica Hicks, 2001, pag 115-126, McGraw-Hill) Bibliografa complementaria: Bioqumica de Champe, 2006, Capitulo 5; pp 61-78 7.2. Cintica enzimtica, regulacin e inhibicin SEGUNDO EXAMEN PARCIAL: 27 de Enero de 2012 EXAMEN SEMESTRAL 19 Diciembre 2011. 8. CARBOHIDRATOS. Del 1. de Febrero al 7 de Marzo de 2012, 15 horas 8.1 Bioenergtica 8.2 Oxidacin biolgica y Cadena respiratoria 8.3. Generalidades de carbohidratos 8.3.1. Importancia, Estructura, funcin, nomenclatura y clasificacin de los carbohidratos.

8.3.2. Mono y disacridos. 8.3.3. Polisacridos. Glucgeno. 8.3.4. Carbohidratos complejos. 8.4. Metabolismo de carbohidratos. 8.4.1. Digestin y absorcin. 8.4.2. Glucogenosntesis. 8.4.3. Glucogenlisis. Gluclisis. 8.4.4. Ciclo de Krebs. 8.4.5. Mecanismos de regulacin. 8.4.6. Ciclo de las Pentosas. 8.5. Aspectos Clnicos. TERCER EXAMEN PARCIAL, MARZO 30 del 2012 9. LPIDOS.

Del 8 de Marzo al 27 de Abril de 2012. 15 horas. 9.3. 9.4. Estructura, funcin, nomenclatura y clasificacin. 9.3.1. cidos grasos. 7.1.1. Lpidos simples y complejos. Metabolismo de los Lpidos. 7.2.1. Digestin y absorcin. 7.2.2. Degradacin: Oxidacin. 7.2.3. Sntesis. 7.2.4. Aspectos Clnicos. Colesterol. 7.3.1. Absorcin y excrecin. 7.3.2. cidos biliares. 7.3.3. Biosntesis de colesterol. 7.3.4. Aspectos clnicos. Lipoprotenas. 7.4.1. Tipos y funcin de lipoprotenas plasmticas. 7.4.2. Sntesis y metabolismo. 7.4.3. Aspectos Clnicos. Regulacin de la movilizacin de lpidos.

9.5.

9.6.

9.7.

10.

ACIDOS NUCLEICOS

Del 2 al 7 de Mayo de 2012. 3 horas. 10.3. 10.4. cidos nucleicos, estructura y funcin. Metabolismo de purinas y pirimidinas. Aspectos clnicos.

11. MEMBRANAS BIOLGICAS. Del 8 al 18 de Mayo de 2012. 5 horas. 11.1. Estructura. 11.1.1. El mosaico fluido. 11.2. Receptores de membrana. 11.3. Funcin de las membranas. 11.4. Transporte a travs de la membrana. 11.5. Membranas excitables. 11.6. Aspectos clnicos.

12. COMUNICACIN INTRACELULAR. Del 21 al 30 de Mayo de 2012. 5 horas. 12.1. Generalidades. 12.1.1. Primeros mensajeros y segundos mensajeros. 12.2. Hormonas. 13.2.1. Hormonas activas en la superficie celular. 13.2.2. Hormonas activas en el interior de las clulas. 13.2.3. Aspectos clnicos. 12.3. Prostaglandinas y otros autacoides. 13.3.1. Nomenclatura. 13.3.2. Biosntesis. 13.3.3. Aspectos clnicos. Cuarto Examen Parcial, Mayo 17 del 2012 EXAMEN FINAL : 30 DE Mayo de 2012 En Horas de Laboratorio del mes de MAYO se programarn los siguientes temas: 13.1. Bioqumica de la Enfermedad. 13.2. Cncer, Oncogenes y Factores de Crecimiento. 13.3. Metabolismo de Xenobiticos. 13.4. Bioqumica de la Respuesta Inmune. 13.5. Bioqumica de las Enfermedades Neurodegenerativas. 13.6. Calentamiento Global REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Bioqumica de Harper , Editorial McGraw Hill, 28. Edicin. (LIBRO DE TEXTO), 2010. 2. Bioqumica Mdica, John W. Baynes, Marek H. Dominiczak. Ed. Elsevier Mosby. 2. Edicin 2006, Madrid, Espaa, ( Libro de texto ). 3. Bioqoumica: La base molecular de la vida, Trudy Mackee, James R. McKee, McGrawHill-Interamericana 4. Montgomery, R.; Conway, T. y Spector, A., Bioqumica, casos y texto. Mosby-Year Book Wolfe Publishing. Barcelona. 5. Lehninger, A., Bioqumica, las bases moleculares de la estructura y funcin celular. Ediciones Omega, S.A. Barcelona. 6. Alberts, B., Bray, D.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K. y Watson, J.D., Molecular Biology of the Cell. Gerland Flublishing, Inc. New York. 7. Gonzlez de Buitrago, Bioqumica Clnica, McGraw-Hill, 1998 8. Champe, Bioqumica, Tercera edicin, 2006

MTODO DE EVALUACIN DE LA MATERIA


Se realizarn cuatro evaluaciones parciales acumulativos adems de la Semestral y Final. Las evaluaciones parciales se realizarn en forma bimestral: 1ra. Evaluacin (formativa) 19 de Octubre del 2011 ( Examen Parcial) 2da. Evaluacin (formativa) 27 de Enero de 2012 ( Examen Parcial) Ira. Evaluacin (sumativa) 19 de Diciembre de 2011 ( Examen Semestral) 3ra. Evaluacin (Formativa) 15 de 30 de Marzo de 2012( Examen Parcial) 4ta. Evaluacin (Formativa) 17 de Mayo de 2012 ( Examen parcial) 2da. . Evaluacin (Sumativa) 30 de Mayo de 2012. ( Examen final) Los resultados de cada evaluacin se discutirn con el grupo en una sesin para evaluar el curso y planear, en caso necesario, la modificacin de las estrategias didcticas. En la evaluacin final se tomarn en cuenta todos los parmetros que se sealan en el punto parmetros a evaluar. En concordancia con lo anterior se pedirn reportes trimestralmente tanto a los auxiliares de laboratorio como a los Maestros responsables del Laboratorio. En el laboratorio se aplicarn 2 exmenes y esta calificacin se promediar con la obtenida en los Reportes y se multiplicara por 0.20 Los laboratorios empezarn a partir del 19 de Septiembre de 2011. REQUISITOS PARA PRESENTACIN DEL EXAMEN FINAL. Asistir al menos al 85% de las clases tericas. Asistir al menos al 80% de los laboratorio, el laboratorio incluye la sesin de laboratorio y su discusin de post prctica. As que faltar a alguno de los dos eventos, es una falta de laboratorio. Asistir al menos al 80% de las Discusiones. Cumplir con al menos el 90% de los trabajos encargados. Tener un promedio mnimo de 40 en los exmenes parciales Para los alumnos repitentes, debern tener un promedio mnimo de 40 en exmenes parciales y un 60 % de asistencia a clases. Nota: Tres retardos hacen una falta. PARMETROS A EVALUAR Los parmetros que se tomarn en cuenta para la evaluacin, as como sus respectivos porcentajes: Alumnos regulares: Alumnos Repitentes: 1) Exmenes parciales (4).................... 20 % ............. 50 % 2) Examen Semestral y Final .............. 30 % .............. 30 % 3) Participaciones en clase.................... 10 % .............. 20 % 4) Laboratorio........................................20 % 5) Examen generacional .. 10 % 6

Participaciones. La participacin ser evaluada con la participacin de clase diaria y algunas de las siguientes estrategias segn se detalla a continuacin. A) Clase Diaria. Se evaluar la participacin del alumno al preguntarle en forma diaria y al azar, o bien participando por equipo con el tema que se est revisando. Se otorgarn calificaciones por cada participacin o se rebajarn puntos en caso de negativa a participar. La asignacin de puntos ser como sigue: Puntos 10 8.5 7.0 0 6.5 -3.0

Excelente Buena Regular Mala No participa

Expone el tema con claridad y/o se apoya en diferentes bibliografas Expone el tema con claridad slo del libro de texto y se ayuda de apuntes con frecuencia Expone el tema con titubeos y errores apoyndose con frecuencia slo del libro Expone slo una parte del tema con poca claridad En caso de que el alumno no exponga clase

B) Exmenes de Tema diario. Dependiendo del grado de participacin del grupo, se podrn implementar exmenes sorpresa sobre el tema, para responder en no ms de 15 minutos, con 6 preguntas abiertas o de opcin mltiple. Su computo se har en el rubro de participaciones. C) Preguntas. Al final de cada unidad temtica se dictarn preguntas a los alumnos sobre las siguientes unidades didcticas. Estas preguntas se traern preparadas para las clases de la siguiente unidad. REGLAMENTO PARA EL SALON DE CLASE, LABORATORIO DISCUSION: 1. NO TENER ENCENDIDA LAP-TOP (SOLO LOS ALUMNOS QUE EXPONDRAN CLASE). 2. APAGAR TELEFONOS CELULARES DURANTE LA CLASE. 3. NO USAR DISPOSITIVOS AUDITIVOS EN HORAS DE CLASE. 4. UNA VEZ INICIADA LA CLASE, NO SE PERMITIR LA SALIDA. 5. NO INTRODUCIR ALIMENTOS NI BEBIDAS AL SALON DE CLASE. 6. NO SE PERMITE EL USO DE LENTES OBSCUROS EN CLASE. REGLAMENTO DEL LABORATORIO Y DE LAS INSTRUCCIONES 1. Para ingresar al laboratorio a) Traer bata blanca larga y un cuaderno especial para el laboratorio. b) Traer el material que se haya indicado (aparece en negritas en cada pagina) c) Slo entrarn los alumnos que tengan prctica y que hayan acudido a la pre- prctica. Y

d) El equipo deber llevar al laboratorio un protocolo preliminar sobre la prctica de no ser as, la calificacin del reporte correspondiente bajar 10 puntos. 2. Dentro del laboratorio a) No fumar ni tomar alimentos. b) No sentarse en las mesas de trabajo. c) Al recibir el material para la prctica debe revisarse y notificarse de inmediato si ste presenta algn desperfecto. d) El material que sea daado por un miembro del equipo tendr que ser repuesto por todo el equipo. e) Se deber permanecer en la mesa de trabajo asignada al equipo durante toda la prctica. Si existe tiempo de espera (tiempos de incubacin, centrifugacin, etc.), no se podr salir del laboratorio. En este caso, se deber de permanecer en la mesa y realizar en el cuaderno del laboratorio los ejercicios que se indiquen. Se deber anotar tambin es este cuaderno, los resultados del equipo y los resultados de todo el grupo. f) Al trmino de la prctica se podr salir slo cuando todo el equipo haya terminado su trabajo, haya entregado el material limpio y haya dejado aseado su sitio de trabajo. A juicio de los auxiliares deber mostrar su cuaderno con las anotaciones que se piden en el punto anterior. g) La forma como quede integrado el equipo ser definitiva para todo el ciclo escolar. h) La persona que falte al laboratorio injustificadamente tendr cero en el reporte correspondiente. Si la falta es justificada y entrega el reporte, tendr el 80% de la calificacin que se obtenga en dicho reporte. i) Tres retardos a la discusin o al laboratorio harn que la calificacin del reporte baje un 20%. Esto se aplicar al reporte correspondiente al da en que se acumule el tercer retardo. Si el alumno no acude a la sesin de discusin, tendr cero en el reporte y contar como inasistencia, an teniendo asistencia a la prctica correspondiente y con mas de 2 faltas al laboratorio y/o a la discusin perder el derecho a examen final ordinario. j) El no llevar el protocolo a la discusin har que la calificacin del reporte sea cero puntos. k) La calificacin del laboratorio correspondiente al 20 %, estar conformado por el promedio de la calificacin de examen de laboratorio y la calificacin de los protocolos y participacin en la discusin.

RECOMENDACIONES PARA EL LABORATORIO


1. Reportar inmediatamente cualquier accidente o dao al equipo o instrumental, sobre todo algn dao personal, por leve que ste sea. 2. No sacudir las pipetas. 3. No pipetear con la boca cidos o bases fuertes. 4. Cuidar de no contaminar las sustancias de trabajo (por ejemplo al pesarlas).

5. Manejar cuidadosamente el material, equipo y las muestras biolgicas, evitando contaminacin de la propia persona. 6. Mantener siempre limpio y despejado su lugar de trabajo. 7. Tener precaucin con las fugas de gas cuando se utilicen mecheros. 8. Balancear bien (por peso) los tubos que se sometan a centrifugacin. 9. Leer cuidadosamente la prctica antes de iniciarla. Si tiene alguna duda en alguno de los procedimientos, pregunte antes de realizarlo. Laboratorio. A) Reportes. Cada reporte deber contener los siguientes puntos y en este mismo orden, los cuales sern calificados como sigue: Portada ................................. 3 puntos Introduccin.......................... 15 puntos Justificacin...................... ..... 5 puntos Objetivos............................... 4 puntos Hiptesis................................ 5 puntos Metodologa.......................... 4 puntos Resultados............................. 14 puntos Anlisis............................... 20 puntos Conclusiones........................ 10 puntos Aplicacin Clnica................. 6 puntos Bibliografa........................... 5 puntos Ejercicios ............................. 9 puntos EL REPORTE SERA POR EQUIPO Se tomar en cuenta tambin la presentacin del reporte: se rebajarn hasta 5 puntos por un trabajo muy sucio o muy mal presentado (por ejemplo hojas sueltas o sin folder). Tambin se rebajarn puntos por faltas ortogrficas obvias: se rebajar 1 puntos por cada 4 faltas ortogrficas detectadas; se podr bajar hasta un mximo de 5 puntos por reporte por mala ortografa. Por el contrario, podrn obtenerse tambin puntos extras: una presentacin excelente (independientemente del contenido) le dar al reporte 3 a 5 puntos adicionales a juicio del profesor. B) Participacin en laboratorio. El restante 20% de la calificacin del laboratorio ser asignado por la participacin del alumno en las discusiones del reporte (posprctica), calificacin del protocolo y de los exmenes de laboratorio. EL PROTOCOLO Este deber ser elaborado antes de la prctica y ser requisito presentarlo en la discusin, la cual ser realizada durante los quince primeros minutos del laboratorio. El protocolo deber contener Introduccin, Justificacin, Objetivos, Hiptesis y un Flujo grama de la metodologa que se va a realizar. El protocolo podr ser un borrador en sucio. Introduccin. Informacin general de lo que se sabe acerca del tema. Se puede sealar tambin informacin relevante referente a la 9

metodologa utilizada. Por ejemplo en una prctica sobre pH se podr dar informacin sobre el concepto de pH y su importancia en clnica, adems se podr incluir informacin relevante del mtodo con el que se midi el pH, por ejemplo como funciona un indicador, tipos de indicadores, tipos y funcionamiento de un potencimetro. Se recomiendan de tres a cinco cuartillas a espacio sencillo. Aqu, las citas que sean relevantes (de conceptos no conocidos a nivel licenciatura) debern ser referidas, de preferencia indicando autor y ao, por ejemplo: la fenoftaleina es uno de los indicadores de pH ms comunes (Sanger y cols., 1992) Justificacin. Describir por que se justifica realizar la prctica: que beneficios traer su realizacin, por que es importante en la clnica o en la prctica mdica dicha prctica, cmo puede relacionarse con la clnica, etc. Se recomienda elaborar entre 5 y 15 lneas. Objetivos. Describir, de una manera clara y concisa, lo que se pretende realizar para demostrar la hiptesis y para obtener un beneficio de la realizacin de la prctica. Se recomienda utilizar verbos en infinitivo, como: comprender, utilizar, aprender, describir, etc. Pueden tomarse como base los objetivos que se especifican en el cuadernillo de prcticas, pero el alumno tiene que redactarlos de otra forma o bien agregar otros. Hiptesis. Describir en forma concisa y clara cules resultados podrn ser obtenidos y por qu. Puede establecerse mas de una hiptesis, las cueles sern nombradas como H1, H2 ..... Hn. Se recomienda emplear entre 10 y 30 lneas. Ejemplo: debido a que la molcula de indicador cambia de conformacin al protonarse y esto hace que absorba luz de longitud de onda diferente a la que absorba antes de protonarse, es de esperarse que cuando el pH de la solucin se acidifique, cambie el color de la solucin como consecuencia de un cambio en el indicador Flujo grama. Elaborar un diagrama de flujo del procedimiento que se va a seguir. Se recomienda utilizar niveles verticales que den una idea de la secuencia cronolgica, de modo que procesos que se realicen simultneamente se encuentren en el mismo nivel. EL REPORTE Deber ser realizado a mquina o a computadora. Una mala presentacin (limpieza, ortografa, falta de folder) podr disminuir su calificacin. Deber de contener: Portada. En donde se especificar la institucin, materia, nmero de prctica, nombre de la prctica, integrantes del equipo, grupo, titular de la materia, instructores del grupo, lugar y fecha. Introduccin, Justificacin, Objetivos e Hiptesis. Sern las que se realizaron para el protocolo, idnticas o modificadas. Material y Mtodo. Describir la metodologa. Puede hacerse tal y cmo se menciona en la prctica. Puede utilizarse el diagrama de flujo, pero no se recomienda utilizarlo en forma nica por que generalmente no considera todos los detalles y recomendaciones que suelen darse en una descripcin detallada.

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Resultados. Describir en forma detallada todos los datos que se obtuvieron en el equipo. Presentar tambin los resultados promedio del grupo. Utilizar tablas y/o grficas. No tiene caso presentar un mismo conjunto de datos de dos maneras (por ejemplo tabla y grfico); utilizar la forma que ms convenga. Todas las tablas y grficos debern llevar un pie de figura, en donde se explique que es lo que se muestra y como leerlo. Puede incluirse en dicho pie una descripcin breve de como se obtuvieron los resultados y la simbologa necesaria. Discusin (Anlisis). Explicar por que se obtuvo cada resultado: era lo esperado?; si no, por qu se pudo dar esta diferencia con lo esperado?; Comparar con lo obtenido en el equipo con lo obtenido en el resto del grupo. Qu implicaciones tienen los resultados?. Se recomienda un mnimo de una cuartilla a espacio sencillo. Conclusiones. Resumir en forma breve (5 a 15 lneas) los principales resultados y la principal implicacin de la prctica. Aplicacin Clnica. Presentar un caso clnico, o describir una patologa o patologas relacionadas con la prctica. Por ejemplo en la determinacin de aminocidos se pueden describir que son y cuales son los detalles clnicos de las aminoacidurias. Se recomienda una extensin de una a dos cuartillas a espacio sencillo. Bibliografa. Se recomienda que se organice por orden alfabtico. Se sugiere la siguiente estructura: 1. En caso de libros: Autor, (ao). Titulo del capitulo. En: Autor del libro, Titulo del libro, Editorial. Pas. Pginas. 2. En caso de revistas: Autor (ao). Titulo del artculo. Revista, volumen (nmero): pginas. Pueden referirse citas de Internet mencionando la fecha y la direccin de la pgina Web. Se exigir un mnimo de tres libros y un artculo de alguna revista cientfica (o bien una cita de internet). Ejercicios. Al final del reporte debern de incluirse la resolucin de los ejercicios de cada prctica.

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PRACTICA 1
MTODOS DE MEDIDA. VARIABILIDAD POR MEDICION Y VARIABILIDAD BIOLGICA. INTRODUCCIN La materia tiene diversas propiedades entre las que se encuentran peso, volumen, densidad, temperatura, punto de fusin. Estas propiedades siempre se refieren a un patrn de comparacin que se toma como unidad de medida. El sistema de medidas mas empleado es el sistema mtrico decimal, aunque en algunos parmetros se emplean unidades del sistema ingls (p. ej. onzas, pulgadas, libra/pulgada2 (PSI), etc.) o de otros sistemas (atmsferas, grados Kelvin, etc.). Las mediciones deben de realizarse con el instrumento ms apropiado de lo contrario llevarn a errores en el resultado. An cumpliendo con este requisito, y dependiendo de la naturaleza de la medicin, puede existir variacin que depende de: 1) el experimentador, 2) el instrumento de medicin, 3) las condiciones en las que se realiza la medicin. En cualquier experimento se deben tomar precauciones para minimizar las variaciones atribuidas a estos factores. Por ejemplo la toma de todas las mediciones debe ser realizada por un slo individuo, se debe verificar la precisin del instrumento de medicin y se deben controlar todas las variables que puedan influir en el parmetro que se mide. Por otra parte en los seres vivos, muchos parmetros varan de acuerdo a factores individuales, por ejemplo estatura, TA, glicemia, etc. A esto se le llama variabilidad biolgica y una de sus propiedades es que las diferentes medidas se distribuyen ya sea siguiendo una campana de Gauss (normal) o una curva de Poisson (en el caso de sucesos raros) OBJETIVOS Al terminar la prctica el alumno ser capaz de: 1. Manejar correctamente el material de laboratorio. 2. Utilizar algunos mtodos de medicin y definir las unidades de medida. 3. Calcular volumen o peso de una sustancia con base en su densidad. 4. Entender la importancia de la precisin y reproducibilidad en las mediciones (control de calidad) 5. Encontrar factores de variabilidad en sus mediciones 6. Entender el concepto de promedio, desviacin estndar y error estndar 7. Definir el concepto de densidad y calcular este parmetro tanto para lquidos como para slidos.

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NaCl granataria precipitados Pipetas (0.1,1.0 y 10 ml) mtrica Matraz vol. De 10 ml. Estetoscopio

MATERIAL Y MTODO Solucin de CuSO4 100 ml de alcohol etlico Bureta de 25 ml Probetas graduadas Baumanmetro

Densmetro Balanza Vasos de Cinta

MEDIDAS DE VOLUMEN Y LONGITUD Las indicaciones siguientes debern ser realizadas rpida y organizadamente por cada uno de los miembros del equipo. Se reportar slo el promedio de los resultados por equipo. En los pasos 1 al 5, los equipos 1 y 2 debern de trabajar con las pipetas ms adecuadas. Los equipos 3 y 4 debern de hacerlo slo con la pipeta de 10 ml. Los equipos 5 y 6 trabajarn slo con la pipeta de 1 ml. 1. Llenar la bureta con la solucin coloreada de CuSO4 2. En un vaso de precipitados de 250 ml (vaso "A") vierta 18 ml de la solucin de la bureta 3. Del vaso de precipitados "A" mida 8 ml con una pipeta y virtalos en un vaso de 100 ml (vaso "B") 4. Mida nuevamente con una pipeta, 1 ml de la solucin del vaso "A" y virtalos en el vaso "B" 5. Ahora mida 0.5 ml del vaso "A" y virtalos en el vaso "B". 6. Mida cuidadosamente, empleando las pipetas ms adecuadas, la cantidad de solucin coloreada que qued en el vaso "B". Al hacer esto, la solucin coloreada deber de regresarse a la bureta. Tenga cuidado cuando haya poca solucin, ya que se puede succionar aire y el lquido podra ser ingerido. Conteste lo siguiente: A. Qu cantidad de solucin qued en el vaso "B"? (reporte el promedio y D.E. de todas las mediciones individuales en las que se emplearon las mismas pipetas, inclusive de otros equipos) (maneje hasta 2 decimales) Valor Esperado:______________ Valor Observado:__________ ________ Desviacin O - E: __________ B. Que indica la D.E. y qu la desviacin O-E? A que se deben la variaciones observadas entre los individuos que trabajaron con las mismas pipetas? Y las observadas entre los equipos que trabajaron con pipetas diferentes? 7. Mida la estatura de cada miembro del equipo con la cinta mtrica (reporte en centmetros) A. Cul es el promedio y desviacin estndar para hombres y mujeres del grupo?_________________ B. Construya una grfica de distribucin por sexo para

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su grupo y otra para toda la generacin Qu diferencias existen entre lo reportado para el grupo y para la generacin?. Discuta los resultados MEDIDAS DE PESO. DENSIDAD Para obviar tiempo, lo siguiente no ser realizado por cada miembro del equipo, pero cada uno debe realizar al menos un ejercicio. Pese lo siguiente: 1. Tare un vaso de precipitados 250 ml y pese en l 4 g de NaCl. Conserve la sal en el vaso. 2. Tare una probeta de 100 ml y coloque en ella 100 ml de agua destilada. Pese el agua. Con base en lo anterior calcule la densidad del agua (d = P/V) y comprubela con el densmetro. Conserve el agua en la probeta. 3. Vierta los 100 ml de agua en el vaso con sal y mezcle bien. Pese la mezcla y calcule su densidad. Finalmente compruebe su clculo empleando el densmetro. 4. Vierta 50 ml de alcohol en la probeta de 100 ml previamente tarada, pese y calcule la densidad del alcohol. Verifique con el matraz volumtrico de 10 ml. Regrese el alcohol a la probeta. Tenga cuidado de no perder alcohol al pasarlo al matraz de 10 ml. o al regresarlo a la probeta. Si esto pasa recupere en la probeta los 50 ml de alcohol. 5. Agregue a lo anterior (punto 4) 50 ml de agua destilada medidos separadamente. No afore hasta 100 ml. A. Cual es el volumen, peso, y densidad de la mezcla?.. B. Estos parmetros son la suma (para volumen y peso) y el promedio (para la densidad) de los obtenidos para agua y alcohol por separado? MEDIDA DE LA TENSIN ARTERIAL 1. Usando un estetoscopio y un Baumanmetro, mida la T. A. braquial media de cada miembro del equipo. A. Cul es el promedio y la D.E. para los hombres y las mujeres del grupo? Y el promedio y D.E. de toda la generacin? Existe diferencia entre sexos? Y entre promedios de grupo y generacional? Y en las desviaciones estndar? B. Realice una grfica de distribucin (agrupando valores) y empleando las mediciones de toda la generacin (hombres y mujeres tomados en conjunto). Discuta los resultados. EJERCICIOS 1 Describa brevemente el uso del siguiente material de laboratorio. a) Balanza granataria f) Desecador b) Balanza analtica g) Pipeta serolgica c) Bureta h) Pipeta volumtrica d) Probeta graduada i) Vaso de precipitado

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e) Matraz volumtrico

j) Micropipeta de precisin k) Densmetro

2. Mencione las siguientes unidades de medicin del Sistema Internacional ( SI ) a) Unidad de longitud f) Unidad de densidad b) Unidad de masa g) Unidad de fuerza c) Unidad de energa h) Unidad de presin d) Unidad de volumen i) Unidad de temperatura e) Unidad de velocidad 3. Consulte y diga los pesos de: a) Un electrn c) El cerebro humano 4. Realice las siguientes conversiones: 2.15 x 10-2 = ___________ = ___________x 10-1 = ___________x 10-3 =____________ x 102 1 ml = _______ = _______dl = _______ml = _______cm3 = _________ onzas 1 onza = _______ml = _______dl = ________cm3 = ________dm3 = _________ 1 pulgada = _______cm = _________m = _________mm = __________ 2.5 x 10-5g =____________mg _____________Kg = __________pg = ___________ng = b) Un protn d) La tierra

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PRACTICA 2 PREPARACIN DE SOLUCIONES Y POTENCIAL DE HIDROGENIONES INTRODUCCIN Las soluciones son mezclas homogneas de dos o mas sustancias. Por convencin a la sustancia en mayor cantidad se le llama solvente o disolvente y en la prctica es generalmente un lquido; a la sustancia de menor cantidad se le llama soluto y puede ser un slido (ms comnmente), un lquido o un gas. Atendiendo a la relacin cuantitativa entre el soluto y el solvente (concentracin del soluto), las soluciones pueden expresarse como soluciones porcentuales, soluciones molares o soluciones normales, sin embargo es vlido expresar la concentracin de un soluto en cualquier unidad de peso/volumen, por ejemplo gr/L, gr/ml, pg/ml, gr/cm3, gr/dl, gr/100 ml, libras/L, onzas/cm3, etc. Las sustancias pueden tener diferentes comportamientos cuando estn en solucin. Por ejemplo, las molculas que las forman se pueden disociar para dar tomos o grupos funcionales cargados elctricamente (iones), lo cual permite el paso de la electricidad en el seno de la solucin. A estas soluciones se les conoce como soluciones electrolticas. Adems de esto las molculas en solucin en determinadas condiciones pueden generar fenmenos de gran inters biolgico como lo es la smosis. Una propiedad importante de las molculas de agua, tanto en el agua pura como en las soluciones, es que una pequea proporcin de molculas de agua se disocia en iones H+ y OH-. En el agua pura el nmero de molculas de H2O que se encuentra disociado es de 1 x 10-7. La concentracin del ion H+, parmetro conocido como potencial de hidrogeniones (pH), determina caractersticas importantes de la estructura y funcin de muchas macromolculas biolgicas, por lo que su medicin resulta de suma importancia. El pH se define matemticamente como el logaritmo negativo de la concentracin de hidrogeniones, esto es pH = -Log [H+]. Existen sustancias capaces de liberar H+ (es decir, protones) al medio, estas se conocen como cidos. Los cidos pueden ser fuertes o dbiles dependiendo de la facilidad con la que liberan sus protones. Las sustancias capaces de capturar protones del medio, por ejemplo sustancias que liberan al ion OH- (ya que este ion captura al protn), disminuyen la concentracin de H+ de la solucin y reciben el nombre de bases, las cuales pueden ser tambin fuertes o dbiles dependiendo de su capacidad para capturar protones. OBJETIVOS Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de: Definir el concepto de molaridad, normalidad. Preparar soluciones electrolticas de diversas concentraciones. Definir los conceptos de pH, cido y base. Preparar soluciones electrolticas con un pH determinado Obtener soluciones diluidas a partir de soluciones "madre"

1. 2. 5. 3. 4.

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Probetas vidrio con tapa CH3C00H

MATERIAL Y MTODO Vasos de precipitado NaCl HCl Potencimetro

5 viales de CH3COONa NaOH Matraces

H2SO4

Tubos de Folin volumtricos

1. Mida 100 ml de agua destilada. Mida su pH. Consrvela para utilizarla en la preparacin de otras soluciones. 2. Prepare 50 ml de CH3COONa al 2%, calcule concentracin molar y mida su pH. Deschelos. A. Discuta el resultado: Cmo y en qu proporcin se disocia el acetato de sodio?. De qu manera puede sto modificar el pH del agua?. B. Si en vez de CH3COONa hubiera sido CH3COOH cmo se disocia este compuesto y qu cambios originara en el pH del agua? 3. Prepare 80 ml de una solucin de H2SO4 al 0.01 N. Cul es su molaridad?. Calcule su pH. Mida su pH empleando el potencimetro. Conserve la solucin. A. Existe diferencia entre lo calculado y lo medido?. Si es as repita hasta que la diferencia sea mnima. 4. Tome 40 ml de la solucin de H2SO4 y aada ahora 0.5 moles de cloruro de sodio. Mida su pH. 5. A los restantes 40 ml de la solucin anterior aada 0.5 moles de acetato de sodio. Mida su pH. A. Discuta: Cambi el pH? Por qu si o por que no? B. Por que razn el Cl- no atrapa a los H+ disminuyendo su concentracin y aumentando as el pH de la solucin? Deseche todo lo anterior y enjuague bien el material. 6. Prepare en un matraz volumtrico 100 ml de HCl 0.1M. Calcule su pH. Verifique el pH. Conserve la solucin. Esta solucin ser una solucin madre para preparar soluciones mas diluidas. A. Discuta: concuerda el pH calculado con el medido? por qu estando los dos cidos (clorhdrico y actico) a la misma concentracin se obtienen diferente pH para sus soluciones? concuerda esto con el concepto de cido fuerte y cido dbil? 7 Ahora prepare en otro matraz volumtrico 100 ml de NaOH 0.1M. Calcule y mida su pH. Conserve la solucin. 8. A partir de la solucin madre de HCl prepare en tubos de Foln, 25 ml de solucin de HCl en las siguientes concentraciones: 0.01 M, 10-4 M y 1 x 10--6 M . A. Cul debe ser el pH de cada una de ellas?. Verifquelo con el potencimetro. 9. Mezcle 10 ml de HCl 0.1 M ms 10 ml de NaOH 0.1 M. Calcule y verifique el pH de la mezcla. A. Discuta: Concuerda lo calculado con lo medido? Por que se neutraliz la solucin? 10. Mezcle 10 ml de HCl 0.1 M ms 5 ml de NaOH 0.1M. Calcule y verifique el pH de la mezcla. 17

A. Discuta: Concuerda lo calculado con lo medido? Por que no se neutraliz la solucin? Cuantos moles de H+ haba en la solucin de HCl? Cuantos moles de OH- se aadieron? Cuantos moles de H+ quedaron en la mezcla?

EJERCICIOS 1. Conteste lo siguiente: a) La concentracin de Na+ en el plasma de un paciente es de 120 mEq/L. Esto es igual a: __________g/L ___________mM ____________mg% __________g/dl b) Cuntos miligramos de Na+ ingresaron a un paciente al que se le administraron 750 ml de solucin fisiolgica (NaCl al 0.9 %) ?: _______________, a cuntos mEq de Na corresponde lo anterior?: ________________ c) Un equipo de venopack estndar produce gotas de 50 l. Si a un paciente se le coloca una solucin glucosada al 5% y el goteo se ajusta a 25 gotas/minuto cuntos mg de glucosa han pasado al paciente al cabo de 4 horas ? : ___________________ . a cunto corresponde lo anterior en mmoles de glucosa? : _________________ 2. Se toman 10 ml de HCl al 37%. La densidad es de 1.18 g/ml. Cuntos moles de HCl se tomaron.

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PRACTICA 3
AISLAMIENTO DE UNA PROTENA E IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS. INTRODUCCIN Las protenas son polmeros de aminocidos y tiene una importancia primordial en la dieta del hombre. La casena es la principal protena de la leche y representa el 80% del contenido protico de sta. Existen varios tipos de casenas. Las casenas alfa y beta son ricas en residuos de fosfoserina, lo cual les permite formar complejos con el calcio (Ca2+). De esta manera la casena de la leche constituye una fuente importante de protenas, fosfato y calcio. Las casenas de la leche se encuentran principalmente (85-90%) en estado micelar y en equilibrio con la forma soluble (10-15%). A pesar de que la forma micelar es bastante estable a altas temperaturas, cuando se disminuye el pH hasta el punto isoelctrico de la casena (pH=4.7), cambia las cargas de la protena ocasionando que el Ca2+ se disocie de la micela. Esto hace que la micela pierda su estabilidad y pierda solubilidad. Adicionalmente, en su punto isoelctrico, la casena en menos soluble que a pH=7 (punto en el cual est cargada negativamente). Todo lo anterior explica que la casena precipite en un pH de 4.7. Mediante el lavado con alcohol y ter, se pueden disolver y eliminar otros compuestos que hayan co-precipitado junto con la casena, obteniendo de esta manera una casena pura. Una vez que se asla una protena, existen varios procedimientos para identificar los aminocidos que la constituyen. Entre los ms sencillos estn una serie de reacciones qumicas que producen un color especfico cuando los reactivos utilizados se combinan con ciertos grupos de los aminocidos. As por ejemplo, en la reaccin xantoprotica se produce un color amarillo cuando el cido ntrico reacciona con un anillo bencnico. Esto nos permite identificar la presencia de los aminocidos fenilalanina, tirosina y triptofano, y por lo tanto la presencia o ausencia de protena (ya que sera muy difcil encontrar una protena que careciera al mismo tiempo de los tres aminocidos mencionados). OBJETIVOS 1. Que el alumno conozca el concepto de estructura primaria, secundaria y terciaria de una protena. 2. Que el alumno entienda el concepto de punto isoelctrico y su importancia en la solubilidad de la protena. 3. Conocer un mtodo sencillo para aislar una protena. 4. Conocer un mtodo sencillo que permita identificar una protena. 5. Que el alumno infiera como se puede cuantificar una protena en base a reacciones de coloracin.

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MATERIAL Y MTODO 100 ml de leche HCI al 2% Eter Vasos de precipitados Pipetas Papel filtro 1 huevo AgNO3 al 5% NaOH al 40% Ninhidrina Tubos de ensaye Esptula solucin de casena al 3% etanol HNO3 concentrado Solucin de aminocidos Potencimetro TELA MAGITEL

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

11. 12. 13.

AISLAMIENTO DE LA CASEINA DE LA LECHE En un vaso de precipitado de 500 ml coloque 100 ml de leche, agregue 300 ml de agua destilada y calintela a 40C. Agregue lentamente y agitando, HCI al 2% hasta que observe que la casena empieza a precipitar (10 ml aproximadamente hasta un pH de 4.8). Agite durante 5 minutos y deje sedimentar por 15-20 minutos. Elimine el sobrenadante, agregue 100 ml de agua destilada al precipitado, mezcle y filtre en la tela de muselina. Deseche el agua filtrada, lave el vaso y vuelva a lavar el precipitado con 100 ml de agua desionizada cada vez hasta que el filtrado este excento de iones cloruro. Para verificar lo anterior en cada filtrado agregue 5 gotas de cromato de potasio y 3 gotas de NO3Ag. Un color caf indica presencia de cloruros y un color amarillo ligero, ausencia de ellos. Deposite el precipitado en un vaso limpio (use una esptula) Aada 50 ml de etanol, agite fuertemente con varilla durante 5 minutos y filtre sobre un papel filtro. Pase el precipitado a un vaso limpio. Lave el precipitado con 50 ml de una mezcla de etanol-ter (volmenes iguales) agitando con una varilla durante 3 minutos. Filtre la mezcla en un papel filtro tarado. Lave el precipitado sobre el mismo papel filtro agregando poco a poco 50 ml de ter puro. Deje secar el precipitado primero al ambiente y despus en una estufa a 50C. El polvo obtenido es la casena. Pese la casena obtenida y tome 0.03 g de ella y resto entrguelo para conservarlos. Diluya la casena en 10 ml de NaOH 0.1 N que le ser entregado. Realice la reaccin xantoproteca para identificar aminocidos aromticos, empleando como patrn una solucin de casena de igual concentracin.

IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS. Mientras transcurren los 20 minutos de sedimentacin o el tiempo de secado del experimento anterior, realice las siguientes dos reacciones de identificacin de aminocidos.

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a) Reaccin xantoproteca. 1. En un tubo de ensaye (Pr. problema) coloque 1 ml de clara de huevo diluida 1:10; y en otro marcado con P (patrn) 1 ml de la solucin patrn de aminocidos. 2. Agregue lentamente (y agite mientras hace esto) 0.5 ml de cido ntrico. 3. Caliente suavemente la base del tubo que empiece a hervir y observe el color que aparece. 4. Deje enfriar y agregue gota a gota la solucin de NaOH hasta observar un cambio de color. 5. Compare ambos tubos. Para la reaccin xantoproteca para casena coloque 1 ml de la solucin de casena que obtuvo en un tubo marcado como PrC. Se le dar otro tubo marcado con PC que contiene una solucin patrn de casena de 0.03gr/ml. En ambos tubos realice al mismo tiempo la reaccin arriba descrita, tape con 2 trozos de papel parafilm. b) Reaccin de Ninhidrina. 1. En un tubo de ensaye (Pr. Problema) coloque 1 ml de clara de huevo diluida 1:10; y en otro marcado con P (patrn) 1 ml de la solucin patrn de aminocidos. 2. Agregue 0.5 ml del reactivo de ninhidrina y caliente suavemente la base de los tubos. 3. Observe que color aparece y compare ambos tubos. EJERCICIOS Cul es la importancia diettica de la casena en el humano? Cul es el punto isoelctrico que encontr para la casena y cmo pudo determinarlo? Qu significa el punto isoelctrico? Es normal la presencia de protena en la orina? que significa esta presencia? cmo podra determinar si hay protena en la orina?. Qu son las aminoacidurias?. Cul es el fundamento de la reaccin xantoproteca y de la ninhidrina? Mencione otras reacciones de coloracin para identificar protena.

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Se puede cuantificar protena mediante reacciones de color o estas pruebas slo son cualitativas? s la respuesta es afirmativa explique cmo puede ser.

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PRACTICA 4

SEPARACIN DE AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFIA

INTRODUCCIN
La cromatografa es un mtodo separativo que tiene lugar gracias a las afinidades diferenciales entre los diversos compuestos de una mezcla y una matriz slida o lquida. Debido a esto, cuando la mezcla es obligada a eluir (debido al flujo de un solvente llamado fase mvil) a travs de un absorbente (fase estacionaria), ocurre una migracin diferencial de los compuestos. Esto se debe a que las afinidades ya sea por la fase estacionaria o por la fase mvil, son diferentes para cada compuesto. Un compuesto que no tenga afinidad por la fase estacionaria y se disuelva bien en la fase mvil, eluye junto con ella; los otros compuestos lo harn a diferentes velocidades dependiendo de su fijacin a la fase estacionaria. Eventualmente un compuesto pegado a la fase estacionaria podr ser eluido (desplazado) por la fuerza del flujo de la fase mvil. El absorbente puede ser simplemente un papel filtro (cromatografa en papel) o esferas de slica-gel empacadas en una columna (cromatografa de columna). Las sustancias separadas pueden hacerse visibles en un papel al emplear un colorante o pueden cuantificarse empleando deteccin fluoromtrica, electroqumica, etc. En la actualidad la cromatografa ms empleada es la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, por sus siglas en ingls: High Performance Liquid Cromatography) efectuada en una gran diversidad de columnas. Los aminocidos libres (por ejemplo de un hidrolizado de una protena) pueden separarse por cromatografa o por electroforesis. Esto puede hacerse en base a sus cargas elctricas netas, las cuales pueden predecirse a partir de los valores de pK de los grupos ionizables y del pH de la fase mvil. Un analizador de aminocidos es un instrumento que los separa automticamente empleando cromatografa de intercambio inico y determinando sus relaciones molares. OBJETIVOS Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de: 1. Comprenda el fundamento de la cromatografa. 2. Realizar una cromatografa sobre papel para separar aminocidos. 3. Definir los conceptos de frente del solvente y frente de los aminocidos y explicar la importancia de la relacin de frentes. 4. Identificar aminocidos en una corrida cromatogrfica de acuerdo a los Rf de los diferentes aminocidos.

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MATERIAL Y MTODO 4 cajas de Petri 4 hojas de papel filtro circular con un recorte radial de una tira a manera de lengeta. Soluciones patrn de aminocidos Muestras de orina ( de preferencia la 1. De la maana) Lpiz y una regla escolar graduada en milmetros Pipeta capilar o varilla de vidrio Estufa incubadora y Estufa desecadora que alcance 90-100 oC Solvente cromatogrfico (cido actico-acetona-butanol y agua) Solucin reveladora de ninhidrina 1. Por el extremo unido al centro, doble la tira recortada del papel. 2. En el centro del crculo dibuje, con punta fina de lpiz, un pequeo crculo de unos 4 mm de dimetro. 3. Con la pipeta capilar o varilla de vidrio aplique una gota (o unas gotas, segn se indica ms adelante) de la solucin a analizar. Esto debe hacerse sobre el circulo trazado. 4. Para efectuar correctamente la aplicacin de la(s) gota(s): a) Moje la pipeta, escrrala y toque con la punta de la pipeta un trozo de papel filtro para prueba. Si el crculo de la mancha es muy grande hay que tocar otra vez el trozo de papel y repetirlo hasta tener un crculo de dimetro adecuado (3-5 mm). b) Conseguido lo anterior, hay que hacer el toque definitivo de la muestra en el papel filtro correspondiente. 5. El nmero de gotas debe ser: a) Una gota de la solucin patrn de un aminocido (diferente para cada equipo) (Filtro I) b) Una gota de la solucin de la mezcla de aminocidos (Filtro II) c) Tres gotas de orina (dejar secar brevemente cada gota antes de aplicar la siguiente) (Filtro III) 6. Seleccione un sitio nivelado y firme, coloque con cuidado ah cada una de las cuatro cajas de petri. Agregue a cada una 10 ml de solvente. 7. Coloque los crculos de papel filtro cuidadosamente sobre el borde superior de cada una de las cajas que contienen al solvente. El papel debe sobresalir apenas de la circunferencia de la caja. 8. Compruebe que la lengeta del papel filtro se sumerja en el solvente. 9. Disponga cuidadosamente la otra tapa (de la caja de petri) de igual dimetro encima del circulo de papel dispuesto en la primer tapa. El papel debe quedar presionado entre ellas. 10. Inmediatamente fije las tapas con un objeto encima de ellas para que se mantengan presionadas. 11. Abandone en reposo hasta que el frente del lquido haya avanzado ms de 2/3 del radio del filtro, lo que transcurre en un tiempo de de hora aproximadamente.

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12. Al retirar los filtros de la caja, procure presionar con los dedos las orillas del papel filtro de arriba abajo, con el objeto de levantar el centro del papel. 13. Tan pronto como sea posible, marque con un lpiz el lugar hasta donde lleg el solvente. Esto es lo que se conoce como frente del solvente, el cual va a ser posteriormente medido. 14. Seque las hojas de papel sin sobrecalentar y de la manera que sigue: a) Al ambiente (hasta que casi haya desaparecido el olor del solvente). b) En la estufa a 37C por 5 minutos. 15. Retire los filtros de la estufa, djelos enfriar y trtelos con solucin de ninhidrina, rociando uniformemente y sin saturar las hojas de filtro. 16. En seguida secar, primero al ambiente, luego a 37 C por 3 minutos y posteriormente de 90-100 C por 5 a 8 minutos. 17. Medir el Fa y el Fs: a) Mida y anote la distancia en cms desde el punto de colocacin de la gota de la muestra al centro de cada una de las manchas. Esta distancia se llama frente del aminocido (Fa). b) Mida y anote la distancia desde el punto de colocacin de la muestra al frente del solvente. Esta distancia se llama frente del solvente (Fs). 18. Calcule la relacin de los frentes (Rf) (velocidad de avance de cada aminocido), dividiendo Fa/Fs. 19. Calcule el Rf para el aminocido patrn que le toc a su equipo y pase el resultado a los otros equipos. 20. Calcule la Rf de los aminocidos presentes en la mezcla de aminocidos, en saliva y en orina y trate de identificarlos con base en los Rfs de los aminocidos patrones. 21. Ilustre por medio de una grfica los Rf determinados en cada uno de sus filtros. EJERCICIOS 1) Mencione los factores que determinan los Rfs de los aminocidos (y en general de cualquier substancia). 2) Como reacciona la ninhidrina con los aminocidos y que otras reacciones se pueden emplear para identificar aminocidos. 3) Si dos substancias tuvieran el mismo tiempo de retencin que podra hacerse para que se separaran. 4) La cromatografa separa compuestos, pero para cuantificarlos se requieren detectores: UV/visible, fluoromtrico o electroqumico. Investigue como trabajan estos detectores. 5) Se quiere separar al compuesto X de una mezcla de sustancias. Se emplea un detector electroqumico. Cmo se podra asegurar que lo que eluye en el tiempo del compuesto X, es este compuesto y no otro que pudiera tener el mismo tiempo de retencin?

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PRACTICA 5
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE UNA REACCIN ENZIMATICA: [S]. DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE ALFA AMILASA. La velocidad de las reacciones enzimticas puede alterarse cambiando parmetros tales como el pH. la temperatura, la composicin inica del medio o empleando ligandos diferentes al sustrato (inhibidores). Una forma de aumentar la velocidad de una reaccin es aumentando la concentracin del sustrato [S]. Cuando en una reaccin se aumenta [S], manteniendo constante las dems condiciones, la velocidad de la reaccin es proporcional al incremento del sustrato hasta llegar a un mximo, ya que se alcanza un lmite en la formacin del complejo enzima-sustrato, el cual es el factor limitante en la velocidad de formacin del producto. Cuando la velocidad de la reaccin ya no aumenta, a pesar de incrementos en la [S] este punto se le llama velocidad mxima (V max). Desde este momento la velocidad slo depende de la rapidez con que la enzima elabore los productos y se desprenda de ellos. Podemos considerar que la digestin de los carbohidratos inicia en la boca, ya que una enzima presente en la saliva: la -amilasa salival (ptialina), hidroliza las uniones alfa-1-4 del almidn y hace aparecer dextrinas y maltosa. Su accin se detiene en el estmago debido al bajo pH gstrico, pero la hidrlisis de las dextrinas y de la maltosa contina en el duodeno por otra amilasa de origen pancretico. En esta prctica se utilizar la a-amilasa salival para demostrar el proceso hidroltico . OBJETIVOS: El alumno ser capaz de: 1. Conocer y describir como influye la concentracin de la enzima, el sustrato, producto y otros factores en la velocidad de una reaccin enzimtica 2. Que conozca que es la alfa-amilasa y dnde y cmo acta. 3. Que describa las porciones que resultan de la hidrlisis de la alfaamilasa. MATERIAL Y MTODOS Tubos de ensaye chicos Bao de agua a 38C Almidn al 0.3% en buffer de fosfatos (pH=7.1) Sol. salina fisiolgica 0.85 % vasos de precipitados Reactivo de coloracin (sol. de yodo al 0.008 N) Pipeta pauster adaptada con jeringa Pipeta de 1 ml tubos de ensaye grandes con tapn Saliva sin residuos de alimentos Hielo triturado

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1. Preparar una solucin de saliva (de quien no haya comido nada 3 horas antes) diluida a 1:300 (0.1 ml de saliva ms 30 ml de Soln salina fisiolgica. (Debe hacerse nfasis en la exactitud de la dilucin). 2. En tubos de ensayo rotulados del 2 al 6 agregar solucin de almidn al 0.3% amortiguado a pH = 7.1. La cantidad de solucin a colocar en cada tubo se seala en la tabla 1. 3. Luego aadir agua destilada en cada tubo segn se seala en la tabla 1 4. Mezclar bien y dejar en bao Mara a 38C durante 7 minutos. 5. Enseguida agregar a cada tubo 2 gotas (0.1 ml) de saliva diluida (excepto el tubo 6); mezclar bien e incubarlos exactamente por 15 minutos a 38C (nota: Es muy importante la exactitud del tiempo de incubacin, por lo que el siguiente paso se debe hacer inmediata y simultneamente para todos los tubos). 6. Justo al trmino del tiempo meter los tubos simultneamente al agua helada (con trozos de hielo). 7. Mientras los tubos chicos estn en hielo, aadir en cada uno de los tubos grandes, 25 ml de agua destilada fra, agregar 2.5 ml de reactivo de yodo y mezclar bien. 8. Vaciar el contenido de cada tubo chico en su tubo grande correspondiente (estn numerados). Lavar los tubos chicos con agua destilada fra, y el agua del lavado vaciarla en los correspondientes tubos grandes, hasta completar en estos tubos 50 ml (hasta la marca sealada). 9. Colocar el tapn de hule, mezclar rpidamente y dejar reposar por cinco minutos. Leer en el espectrofotmetro y anotar las lecturas (en unidades de densidad ptica D.O.) 546 nm.

TUBO 1 2 3 Solucin de 0 ml 2.5 ml 5 ml almidn Agua destilada 10 ml 7.5 ml 5 ml Saliva diluida 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml Tabla 1. cantidad de sustrato, agua y saliva tubos de ensayo pequeos.

4 7.5 ml

5 10 ml

6 10 ml

2.5 ml 0 ml 0 ml 0.1 ml 0.1 ml 0 ml en cada uno de los

EJERCICIOS 1. Defina con sus propias palabras velocidad de una reaccin qumica en cuanto a la accin de una enzima 2. Cul es la importancia de que el sustrato empleado en esta prctica este en una solucin amortiguada?.

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3. Por qu despus de incubar del sustrato (almidn) con la enzima (amilasa salival) se deben de colocar en hielo los tubos donde se estaba realizando la reaccin enzimtica?. 4. Investigar cmo es el funcionamiento general de un espectrofotmetro. Qu diferencia hay con un Fotocolormetro?. 5. A que longitud de onda se debe de leer la reaccin de coloracin con el yodo?. 6. En qu patologas puede elevarse la concentracin srica de amilasas?. 7. Con lo realizado en esta prctica podra determinarse la concentracin srica de amilasa pancretica en un paciente ?. Disee el mtodo para hacerlo.

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PRACTICA 6 TCNICA PARA OBTENER SANGRE VENOSA Y DETERMINACION DE HEMOGLOBINA Y HEMATOCRITO


TECNICAS EMPLEADAS EN EL ANALISIS DE SANGRE

La sangre est formada por un lquido de composicin complicada y variable, el plasma que contiene eritrocitos, leucocitos y plaquetas en suspensin. Impidiendo la coagulacin, los elementos formes pueden ser separados del plasma, que tiene un color paja plido. Cuando la sangre se coagula, el lquido que queda despus de separarse el cogulo, se denomina suero. La diferencia fundamental entre el plasma y el suero consiste en que ste pierde el fibringeno protico, que se convierte en filamentos insolubles de fibrina en el curso de la coagulacin. El suero y el plasma se utilizan en muchas investigaciones importantes en qumica e inmunologa clnica. Las tcnicas hematolgicas tratan sobre todo los componentes celulares de la sangre, su nmero o concentracin, la distribucin relativa de los diversos tipos de clulas y los trastornos estructurales o bioqumicos que pueden producir una enfermedad. La sangre para pruebas de laboratorio pueden ser capilar perifrica y venosa. Una y otra tienen sus ventajas e inconvenientes. SANGRE VENOSA Las venas han adquirido importancia en la prctica mdica moderna por dos razones: por ser fuente de sangre para el nmero, cada vez mayor de anlisis de sangre y como va de introduccin de diversos agentes teraputicos, entre ellos la sangre misma. La conservacin de las venas compete principalmente a los qumicos, internos y residentes, porque son ellos quienes con ms frecuencia las utilizan. Una buena venipuntura implica tres factores: el operador, el paciente y sus venas y el instrumental. EL PACIENTE Y SUS VENAS. El paciente debe ponerse cmodo y con el brazo en la posicin conveniente para facilitar la puncin; no hay necesidad de aumentar las dificultades intentando hacerla en una postura inadecuada. Los pacientes ambulatorios se sentarn cmodamente, mejor en una silla de brazos o en una mesa que permita colocar el brazo bien apoyado; el qumico o el mdico tomar asiento al lado opuesto de la mesa. AGUJAS. La aguja debe elegirse asimismo de un calibre y una longitud convenientes. El nmero del calibre expresa el grosor de la aguja. Cuanto ms bajo sea el nmero, mas gruesa ser la aguja. La longitud de la aguja depende de la profundidad de la vena. METODO PARA EXTRAER SANGRE DE UNA VENA: 1. El paciente deber estar sentado cmodamente o recostado y apoyar bien el brazo. En ningn caso ha de tenerse al paciente de pie. Aunque son pocos los enfermos que se desmayan por el

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efecto de una puncin venosa, debe tenerse en cuenta siempre este riesgo. 2. Se utiliza un torniquete de goma para aumentar la presin venosa y para hacer resaltar las venas, facilitando as la puncin, pero, a fin de evitar que se concentre la sangre, esta presin no debe mantenerse ms de lo necesario. El ltimo trozo del torniquete se meter por debajo de la ltima vuelta, de manera que un leve tirn basta para que se suelte el torniquete. Se pide al paciente que abra y cierre el puo varias veces, lo cual distiende las venas. Aunque las venas no se vean se suelen palpar debajo de la piel. 3. Despus de estas medidas preliminares, se limpia la piel con alcohol al 70 % y se deja secar. Es conveniente aplicar el torniquete mientras se est secando el alcohol. Posteriormente se fija en posicin, esto se hace sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el pulgar los tejidos blandos situados justo debajo del sitio elegido para la puncin. La jeringa se sujeta entre el pulgar y los tres ltimos dedos de la otra mano, apoyando su dorso en el brazo del paciente. El dedo ndice libre descansa sobre el casquillo de la aguja y sirve de gua. Una vena prominente puede pincharse con un solo golpe directo sobre la piel y vena. Cuando es difcil encontrar venas, se realiza en dos tiempos. Primero se punza la piel cerca de la vena y luego la vena misma; si se ha acertado aparece inmediatamente sangre en la jeringa. 4. Una vez extrada la cantidad de sangre necesaria, se pide al paciente que abra el puo, se suelta el torniquete y se retira la aguja y se oprime ligeramente el sitio de la puncin con una torunda humedecida con alcohol y se le invita al paciente a levantar el brazo estirado durante unos minutos. En vez de jeringa, se pueden emplear otros instrumentos diversos para extraer sangre de las venas. Uno de estos, es el B-D Vacutainer. Estos tubos Vacutainer estn provistos de una cantidad determinada de anticoagulante (otros no) y de un vaco suficiente para sacar un volumen predeterminada de sangre, estn sellados con un tapn de goma. La aguja desechable se enrosca en el sujetador, y se coloca el tubo vacutainer en el sujetador de manera que el tapn de goma alcance justo la lnea gua. La aguja se mete dentro del tapn de goma pero no lo penetra y por lo tanto no rompe el vaco. Una vez la aguja metida en la vena del brazo de la manera antes descrita, se empuja el tubo hasta el fondo del sujetador, se rompe el vaco y la sangre empieza a entrar en el tubo. Cuando termina el flujo

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puede sustituirse el tubo por otro, o si slo se necesita un tubos, se retira todo el conjunto de la misma manera que la descrita para la jeringa.

DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA Y HEMATOCRITO En el interior del eritrocito se encuentra la hemoglobina (Hb), una hemoprotena tetramerica encargada del transporte de oxigeno a todas las clulas. La Hb ms comn es la Hb A1 la cual contiene 2 subunidades alfa (con 141 aminocidos) y dos beta (con 146 aminocidos). Existen otros tipos como la A2 (2 y 2 ), la F o fetal (2 y 2 ) y la E o embrionaria (2 y 2 ). Cada subunidad contiene un grupo hemo, el cual esta formado por un anillo tetrapirrlico (porfirina) con un tomo de Fe2+ en el centro. As, cada molcula de Hb puede transportar hasta 4 molculas de oxigeno. Cuando la Hb se combina con el O 2, el Fe2+ no cambia su valencia, por lo que se dice que la Hb no se oxida, sino que se oxigena (HbO2 u oxihemoglobina). Un parmetro importante para evaluar la eritropoyesis y diferenciar formas de anemia es la cantidad de Hb en cada eritrocito. Al promedio de la cantidad de Hb por eritrocito se le llama hemoglobina corpuscular media (MCH, mean corpuscular hemoglobin) y se encuentra dividiendo la cantidad de Hb por el nmero de eritrocitos en el mismo volumen de sangre. El hematocrito (Hto), otro parmetro importante nos indica el volumen que ocupan los eritrocitos como un porcentaje del volumen sanguneo total. Si se divide el Hto entre el nmero de eritrocitos tendremos una idea aproximada del tamao de los eritrocitos. Esto es llamado volumen corpuscular medio (MCV, mean corpuscular volume). Finalmente si dividimos la Hb entre el Hto obtendremos la concentracin de hemoglobina corpuscular media (MCHC). Estos parmetros resultan tiles para clasificar los diferentes tipos de anemias. OBJETIVOS. 1. Que el alumno entienda el procedimiento colorimtrico para determinar la concentracin de Hb. 2. Que el alumno comprenda el concepto de hematocrito y su importancia en clnica. 3. Que el alumno sea capaz de determinar los valores de Hb y Hto en una muestra de sangre. 3, Que a partir de datos como Hb, Hto y nmero de eritrocitos, el alumno sea capaz de calcular los parmetros de MCH, MCV y MCHC y entienda su significado clnico. 4. Que el alumno sea capaz de comprender la naturaleza de las diversas anemias con base en los parmetros antes descritos.

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MATERIAL Y MTODO. Vacutainer Torniquete y torundas 3 Tubos de ensayo Reactivo de ferrocianuro

Espectrofotmetro Pipeta de 10 ml Micropipeta de 20 ul Tubos capilares

Mechero de Bunsen Microcentrfuga Tubos para sangre

1. Colocar la solucin de ferrocianuro en los tubos blanco, patrn y problema como se indica en la tabla. 2. Extraer 3 ml de sangre y con la micropipeta colocar 20 ul en el tubo problema, enjuagando la punta en la misma solucin. De la misma manera colocar la sangre patrn (20 ul) en su tubo. tubo blanco 5 ml 0 0 tubo patrn 5 ml 20 ul 0 tubo problema 5 ml 0 20 ul

Sol. de ferricianuro sangre patrn sangre problema

3. Dejar reposar 3 minutos y leer en el Espectrofotmetro a 546 nm. 4. Calcular la concentracin de Hb del problema como sigue: Hb = (Conc. del patrn/Absorbancia del patrn) x Absorbancia del problema 5. Llenar un tubo capilar hasta las 2/3 partes con sangre y sellar con fuego por un extremo. 6. Centrifugar por 3 minutos en la Microcentrfuga. 7. Leer el Hto en un disco lector.

EJERCICIOS 1. Suponiendo que su muestra de sangre contenga 5 x 106 eritrocitos/ml calcule: a) MCH, b) MCV y c) MCHC y compararlos con los valores normales. 2. Hacer una tabla en donde relacione los diferentes tipos de anemias y los parmetros antes mencionados.

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PRACTICA 7 CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA Los carbohidratos representan la principal fuente de energa para el organismo, y se destaca la glucosa como el principal monosacrido empleado para este fin. Sin embargo, los carbohidratos no slo son empleados como fuente de energa, sino que tambin son utilizados en la construccin de glicolpidos, glicoprotenas, heparina, cidos nucleicos y otras sustancias. Cuando una molcula de glucosa es absorbida o sintetizada por un organismo puede ser incorporada a diversas vas metablicas dependiendo de las necesidades del organismo. Los procesos ms importantes del metabolismo de la glucosa son la glucogenognesis, la glucogenlisis, la gluclisis, la gluconeognesis y el ciclo de Krebs. La movilizacin de la glucosa y su procesamiento por los diferentes caminos metablicos, esta regido por diversas influencias hormonales entre las que destacan la adrenalina, la somatostatina, el glucagon, la insulina, los glucocorticoides y otras ms. Las interacciones de las hormonas anteriores conservan estable la cifra de glucosa sangunea en un valor aproximado de 100-120 mg/100 ml. La cuantificacin de la glucosa sangunea (glicemia) se realiza de manera rutinaria (qumica sangunea) para valorar la condicin de un paciente an cuando no sea diabtico. Uno de los mtodos ms utilizados es el mtodo de Trinder o glucosa enzimtica, que puede ser cuantificado por espectrofotometra. Despus de una ingesta de carbohidratos, los valores de glicemia se elevan en una forma moderada, ya que la insulina liberada en respuesta a la ingesta de carbohidratos no permite que se rebasen ciertos niveles de glicemia. La misma insulina hace que la glicemia retorne a la normalidad al cabo de 2 horas. Lo anterior es valorado en una prueba denominada prueba de tolerancia a la glucosa. Aunque un paciente no manifieste una diabetes franca, puede ser prediabtico o estar en una etapa inicial de la enfermedad; esto puede ser descubierto al realizarse la prueba de tolerancia a la glucosa.

OBJETIVOS Al terminar la prctica el alumno ser capaz de: 1. Definir el trmino glicemia y sealar los caminos metablicos que puede seguir la glucosa. 2. Identificar la actividad de diferentes hormonas sobre la glicemia. 3. Determinar la glicemia venosa y capilar (tira reactiva). 4. Realizar una prueba de tolerancia a la glucosa y con base en ella, hacer el diagnstico de diabetes o de intolerancia a la glucosa.

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MATERIAL Y MTODO Tubos para Solucin patrn de extraccin de sangre glucosa Torniquete Reactivo de glucosa (4-amino-antipirina, p-hidroxibenzoato, solucin buffer y estabilizadores) Tubos de ensayo Bao de agua estufa a 37 oC 100gr de azcar/equipo

Cronmetro Pipetas y micropipetas para medir reactivo, agua y muestras.

Cinta adhesiva Espectrofotmetro 2 limones / equipo

Fundamento del mtodo: La glucosa es oxidada enzimticamente por la glucosa oxidasa (GOD) a cido glucnico y peroxido de hidrgen. Este ltimo en presencia de peroxidasa (POD) produce la copulacin oxidativa del p-hidroxibenzoato (PHB) con la 4-aminoantipirina (4-AA), dando lugar a la formacin de un cromgeno con absorbancia mxima a 505 nm. El alumno que vaya a realizarse la prueba deber de tener, dos das antes, una dieta abundante en carbohidratos y antes de la prueba un ayuno de 8 horas, para lo cual deber de tener una cena sin restriccin una noche antes. Deber de estar libre de infecciones o de alguna enfermedad intercurrente y no haber consumido medicamentos por 12 horas. Durante la maana (tiempo de la prueba) se mantendr sin estrs, sin fumar y en reposo. Durante la prueba permanecer acostado. 1. Se colocar al paciente un punzocat para tomar una muestra de 2-3 ml de sangre venosa, el cual se sellar para tomar muestras posteriores. El tubo donde se tome la muestra deber tener anticoagulante. 2. El paciente beber 350 ml de una solucin con 100 gramos de azcar (con o sin limn). Despus se tomarn muestras de sangre a los 30, 60 y 90 minutos. A los 90 minutos se tomar adicionalmente una glicemia capilar, si sta resulta ms de 200 mg se tomar una muestra adicional a los 120 minutos.

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METODO: 1. Colocar 2 ml. De reactivo reconstituido a una serie de tubos marcados con blanco, estndar y muestra (suero o plasma). 2. Incubar todos los tubos a 37 oC por 5-10 minutos. 3. Agregar 0.02 ml de agua, estndar y muestra (suero) a los tubos previamente marcados y continuar la incubacin por 10 minutos. 5. Seleccionar una longitud de onda de 505 nm en el espectrofotmetro, llevar el instrumento a cero de absorbancia con el blanco y leer el estndar y las muestras.

CALCULOS DE LOS RESULTADOS


GLUCOSA (mg/dl) = del estandar Absorbancia de la muestra Absorbancia del estandar CLCULOS E INTERPRETACIN 1. Una glicemia en ayunas de ms de 140 mg/dl hace diagnstico de diabetes en pacientes con datos clnicos (polidipsia, poliuria, polifagia). 2. Dos o ms glicemias de ms de 140 mg/dl hacen diagnstico de diabetes en pacientes asintomticos. 3. Glicemias de 200 mg/dl o ms, dos horas despus de ingerir la carga de glucosa, hacen diagnstico de diabetes en pacientes con factores de riesgo, an teniendo menos de 140 mg/dl de glucemia en ayunas. 4. Glicemias entre 140 y 200 mg/dl, dos horas despus de ingerir la carga de glucosa, hacen el diagnstico de intolerancia a la glucosa. EJERCICIOS 1. Que propiedad de la glucosa determina la reduccin del ion cprico (+2) a cuproso (+1). 2. Investigar y mencionar muy brevemente como funciona una tira reactiva. 3. Cmo cabe esperar una glicemia capilar en relacin con una glicemia venosa. 4.En los estados hipoglicmicos qu hormona y que enzima es fundamental para la conversin de glucgeno en glucosa. 5. Cundo se considera que una curva de tolerancia a la glucosa es de tipo diabtico. X Concentracin

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PRACTICA 8
DETERMINACIN DE COLESTEROL. INTRODUCCIN El colesterol es una sustancia hidrfoba, insoluble en medios acuosos y por tanto insoluble en el plasma sanguneo. La circulacin sistemtica del colesterol es posible gracias a la formacin de complejos solubles por su unin a protenas, las lipoprotenas sricas, y entre ellas las de tipo B low density lipoproteins (LDL) son las que representan el mayor porcentaje, con aproximadamente un 60-70 % del total. El hgado es el rgano principal donde se produce la incorporacin del colesterol y otros lpidos a las lipoprotenas. Asimismo, en el hgado se esterifica, con cidos grasos, la mayor parte de colesterol (60-70 % del total) Fundamento: La colesterol esterasa hidroliza los steres de colesterol presentes en la muestra dando colesterol libre y cidos grasos, una posterior oxidacin enzimtica mediante la colesterol oxidasa se forma H2 O2 y colesterona. El H2 O2 se valora por la reaccin de Trinder, medaiante un cromgeno, fenol y 4-aminoantipirina, en presencia de peroxidasa, formando una quinonimina cuya coloracin encarnada, es proporcional a la concentracin de colesterol presente en la muestra. OBJETIVOS: 1. Que el alumno aprenda la manera correcta de extraer sangre venosa. 2. Que comprenda y describa cmo el colesterol interviene en el proceso de ateroesclerosis. 3. Que conozca el fundamento en que se basa la determinacin de colesterol. 4. Que conozca y comprenda la importancia de las diferentes fracciones de lipoprotenas. Material necesario: Pipetas de 2 ml y 50 ul. Bao de temperatura a 37 oC. Cronmetro o reloj. Espectrofotmetro. Centrfuga Micropipetas, pipetas, bao de agua a 30 oC. Tubos para extraccin de sangre sin anticoagulante REACTIVOS: Reactivo enzimtico:4-aminofenozona, fenol, peroxidasa, colesterol esterasa y colesterol oxidasa. Estndar: Solucin de colesterol de 200 mg/dl. PREPARACIN Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS. Esta solucin es estable 4 meses en refrigeracin 2-8 oC 40 dias a 1525 oC protegido de la luz. 35

MUESTRA: Suero, plasma heparinizado o plasma recogida con EDTA. La estabilidad de la muestra es de una semana tapada y guardada entre 2 8 oC. TCNICA: Estndar Muestra Reactivo enzimtico Mezclar e incubar 5 minutos a 37 oC o 10 minutos a temperatura ambiente. Ajustar el Espectrofotmetro a cero con el blanco de reactivos. Leer a 505 nm, la densidad ptica del estndar y de la muestra. La coloracin es estable 60 minutos. CALCULOS:
D. O. muestra D. O. St. Conc. St. Conc. muestra

BLANCO ----------------2.0 ml

ESTANDAR 20 ul --------2.0 ml

MUESTRA ---------20 ul 2.0 ml

Factor de conversin: mg/dl x 0.0258 = mmol/L (SI) LINEALIDAD: Hasta valores de 600 mg/dl (15.4 mmol/L) Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con soln salina y multiplicar el resultado por 2.

VALORES NORMALES: Valores sospechosos a partir de 220 mg/dl (5.7 mmol/L) Valores elevados a partir de : 260 mg/dl (6.7 mmol/L) EJERCICIOS: 1. A partir de qu molculas se forma el colesterol? 2. Cmo vara la concentracin de colesterol, conforme a la edad?. 3. A qu se debe el posible aumento de colesterol en la mujer menopusica? 4. Cmo se dividen las lipoprotenas y cual es su concentracin en sujetos normales? 5. Qu factores hacen que se eleven las HDL?.

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PRACTICA 9
REGULACIN DEL EQUILIBRIO ACIDO-BASE POR LA PRESENCIA DE SUSTANCIAS AMORTIGUADORAS O BUFFER INTRODUCCIN El pH de los diferentes compartimientos del organismo debe mantenerse dentro de un rango estrecho de valores (7.35-7.45 en el plasma), de lo contrario se presentan una serie de alteraciones que pueden culminar con la muerte celular. De aqu que el organismo deba regular estrictamente los cambios de pH. El principal mecanismo que dispone el organismo para lograr estabilidad en los valores de pH es el empleo de sistemas amortiguadores o buffer. Los amortiguadores estn formados por un cido dbil (HA) y una de sus sales, a la cual se le llama tambin base conjugada (A -). Para que el poder de amortiguacin de un buffer sea adecuado, el pK del cido que lo forma debe ser cercano al pH que se quiere mantener constante. El sistema amortiguador de fosfatos (pK = 6.7) parece ser muy efectivo como amortiguador qumico al pH de la sangre, pero su concentracin (1 mM) es tan baja que su papel como amortiguador fisiolgico se reduce al mnimo. Por tal razn, el sistema cido carbnico/bicarbonato (pK = 6.1 con una concentracin de 25 mM) es el buffer que ms contribuye a mantener el pH del plasma en el rango de 7.35-7.45. Otro sistema buffer presente en el plasma lo es el de aminocidos; este sistema puede regular reas de pH ms amplias debido a que tienen al radical -NH3+ el cual puede amortiguar alcalis, y al radical R-COO- el cual puede amortiguar cidos, sin embargo sus mesetas de amortiguacin quedan alejadas del pH fisiolgico (para el grupo carboxilo pK 2, y para el grupo amino pK 9); slo la histidina tiene utilidad apreciable como buffer a pH = 7.4 (ya que el NH2+ de su grupo imidazol tiene un pK = 6.0). OBJETIVOS: Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de: 1. Describir lo que es un amortiguador. 2. Describir los diferentes amortiguadores que existen en el organismo y su funcin. 3. Describir y comprender la ecuacin de Henderson-Hasselbalch y como se modifica su relacin cuando existen cambios en el pH sanguneo. MATERIAL Y MTODO 1 soporte universal 2 matraces volumtricos de 50 ml. 2 buretas (de 25 y 10 ml) Solucin de Ac. actico 0.1 N 3 vasos de precipitados de 50 ml (para Solucin de Glicina 0.1 N titular) 2 pipetas de 10 ml Solucin de NaOH 0.1 N 1 vaso de precipitados de 100 ml (para Solucin de HCI 0.1 N vaciar) 37

1. Titulacin de un cido dbil con una base fuerte. (NaOH 0.1N vs cido actico 0.1 N) 1. Mida 10 ml de cido actico 0.1 N, virtalo en un vaso de precipitados de 50 ml y mida su pH empleando el potenciometro o con una tira indicadora. 2. Despus aada cuidadosamente a la solucin anterior NaOH 0.1 N de 2 en 2 ml desde una bureta hasta completar 10 ml. Cada vez que aada 2 ml de NaOH mida el pH de la solucin utilizando una tira indicadora. Grafique el pH vs. los mililitros de NaOH aadidos para obtener una curva de titulacin. 2A. Titulacin de un aminocido con una base fuerte. (NaOH 0.1 N vs Glicina 0.1 N) 1. Mida 10 ml de glicina 0.1 N y tome el pH de esta solucin. 2. Titule con NaOH 0.1N en la misma forma que en el punto anterior, y de igual manera obtenga una curva de titulacin. Est curva ser acoplada a la grfica que obtendr en el siguiente punto (2B). Es decir, los mililitros de NaOH aadidos y su correspondiente pH se graficarn a la derecha del cero. Sobre el eje Y (el cero en el eje X) se graficar el pH de la solucin de glicina sola y a la izquierda el valor de pH correspondiente a los mililitros de HCI aadidos.

2B. Titulacin del aminocido con cido fuerte. (HCl 0.1 N vs Glicina 0.1 N) 1. Mida nuevamente 10 ml de glicina 0.1 N (teniendo cuidado de enjuagar bien el vaso de precipitados utilizado en la titulacin anterior). 2. titule ahora con HCI 0.1N agregndolo de 2 en 2 mililitros. Grafique esta titulacin acoplndola a la grfica de titulacin que se realiz con la base fuerte. 3A. Titulacin de una solucin buffer de fosfatos con cido fuerte. (HCI 0.05 N vs sol. de fosfato. 1. Se prepararn para todo el grupo 250 ml de una solucin de fosfato monobsico NaH2PO4 0.1 M, y 250 ml de otra solucin de fosfato dibsico Na2HPO4 0.1M 2. A partir de las soluciones anteriores, empleando la ecuacin de Henderson-Hasselbach, el equipo 1 preparar 50 ml de un buffer de fosfatos con un pH de 6.7, el equipo 2 preparar el mismo buffer pero con un pH de 6.2, el equipo 3 con un pH de 5.7, el equipo 4 con un pH de 7.2 y el equipo 5 con un pH de 7.7., equipo 6 pH 5.8; equipo 7 pH = 7.0. 3. Despus de haber preparado la solucin buffer, verifique su pH empleando preferentemente el potenciometro. 4. Tome 10 ml de la solucin anterior y colquela en un vaso. Agregue 1 ml de cido clorhdrico 0.05 N de la bureta, mida el pH y antelo.

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6. Contine aadiendo el cido poco a poco (ml a ml) y tome el pH cada vez. Prosiga las adiciones y mediciones hasta que vea un cambio notorio en el pH o complete 6 mediciones (lo que ocurra primero). 3B. Titulacin de una solucin buffer de fosfatos con una base fuerte. (NaOH 0.05 N vs sol. Buffer de fosfatos) 1. Tome 10 ml. De la solucin buffer de fosfatos y colquela en un vaso. 2. Agregue 1 ml. De Na OH 0.05 N, medir pH y anotar. 3. Seguir agregando base ml. A ml hasta obtener un cambio aparente en el pH o completar 6 mediciones (lo que ocurra primero). 4. Con los resultados obtenidos realizar la curva de titulacin y acplela a la grfica de titulacin con el cido, tal y como se realizo para la glicina. 5. Intercambie resultados con los otros equipos. EJERCICIOS: 1. Cuntos ml de NaOH 0.3 N se requieren para neutralizar 20 ml de HCI 0.5 N? 2. Cul fue la solucin buffer que mejor resisti los cambios de pH ocasionados por el cido y por la base? Cmo explica esto? 3. Calcular basndose en la ecuacin de Henderson Hasselbach la relacin bicarbonato/c. Carbnico en el suero sanguneo si el pH de ste fuera de 7.4. y si el pH fuera de 7.1?. y con un pH de 7.7? (el cido carbnico tiene una pK de 6.1). 4. Describa brevemente los cambios de pH, pCO2 y HCO3- que se presentan en los diferentes tipos de cidosis y alcalosis.

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PRACTICA 10
DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE UN ELECTROLITO (ION CLORO) EN LQUIDOS CORPORALES Y TITULACIN DE CO2 EN SUERO Los electrolitos tienden a disociarse en soluciones acuosas y su principal funcin en los diferentes compartimentos del organismo es conservar las condiciones elctricas y osmticas del cuerpo. El cloro en el suero se encuentra a una concentracin aproximada de 103 mEq/l. La ingesta de este vara de 69 a 260 mEq/da y se excreta alrededor de 119 mEq/da. Las prdidas de cloruro pueden ser acompaadas por prdidas de sodio o de otros cationes, lo cual en algunos casos especficos pueden dar lugar a alteraciones del equilibrio cido-bsico. Los principales productos finales del metabolismo celular lo son el bixido de carbono (CO2) y el agua. El CO2 es una gas que al acumularse en la clula ejerce una cierta presin que le permite salir al exterior. En el hombre el CO2 pasa del espacio intracelular al espacio intersticial en donde su permanencia es muy corta ya que pasa rpidamente al espacio intravascular en donde una fraccin de este se hidrata espontneamente formando cido carbnico (H2CO3) el cual permanece en el plasma. El resto del CO2 pasa al interior del eritrocito en donde la enzima anhidrasa carbnica forma activamente H2CO3, el cual se disocia produciendo un protn y el ion bicarbonato (HCO3-). Mientras que el protn es amortiguado por la hemoglobina, el HCO3- sale del eritrocito en un intercambio con el ion cloro. De esta manera el CO2 total del plasma est dado por el bicarbonato mas el cido carbnico. El contenido de CO2 de una muestra de plasma se determina midiendo el volumen de CO2 liberado al acidificar la muestra con un cido fuerte. La adicin del cido fuerte es necesaria para llevar todo el bicarbonato a cido carbnico, cuya titulacin indica la concentracin de CO2 en dicha muestra. Segn las leyes de los gases, 1 mmol de cualquier gas ocupa un volumen de 22.4 ml (a presin y temperatura normales). Como el CO 2 es un gas se puede obtener su volumen, y su concentracin suele expresarse como un porcentaje del volumen plasmtico que ocupara si no estuviera disuelto. La concentracin normal de CO2 total en plasma es de 22 a 27 mM. OBJETIVOS 1. Que el alumno sea capaz de explicar la relacin entre CO2 y el estado cido-bsico. 2. Que el alumno comprenda como la concentracin plasmtica de un ion (cloro) puede influir en el estado cido-bsico del paciente. 3. Que el alumno maneje el concepto de titulacin. 4. Que a travs de procesos de titulacin el alumno sea capaz de medir en plasma la concentracin de cloro y de CO2 total.

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MATERIAL Y MTODO 1 pipeta de 5 ml 3 tubos de ensayo Solucin salina al 0.85% Micropipetas 1 bureta de 25 ml Rojo de fenol 2 pipetas volum. 0.1 ml HCl 0.01 N Difenilcarbazona 0.01M Matraces Erlen Meyer de 50 ml . Hg (NO3)2 0.01N Sol. patrn de cloruros Suero sanguneo problema NaOH 0.01 N Determinacin de CO2 en suero 1. En un matraz de 50 ml colocar 0.1 ml de suero y aadir 3 ml de sol. salina al 0.85% 2. Agregar una gota de rojo de fenol 3. Aadir 1 ml de HCl 0.01 N (se obtendr un color amarillo verdoso) 4. Titular el exceso con la solucin de NaOH 0.01 N. El vire de color ser a un color rojo fresa. 5. Repetir lo anterior en una segunda muestra de suero para comprobar o corregir. Clculos: 1. ( 1 ml HCl) - ml gastados de NaOH) x 100 = mM de CO2 2. mM de CO2 x 2.24 = vol. de CO2 Valor normal: 22-27 mM (50-60 vol. %) Determinacin de cloro en suero 1. Marcar tres tubos de ensayo: A1 y A2 para el suero problema y tubo B: control. 2. Colocar 0.1 ml de suero en cada uno de los tubos A1 y A2, y 0.1 ml de solucin patrn de cloruros en el tubo B. 3. Aadir a cada uno de los tres tubos 0.9 ml de agua desionizada y 6 gotas de una solucin indicadora de Difenilcarbazona. 4. Titular con una solucin de Hg(NO3)2 0.01 N de la siguiente manera Aadir el nitrato mercrico gota a gota al tubo control (B) hasta el momento que aparezca un color violeta intenso. Esta valoracin ser testigo, es decir slo sirve para practicar y apreciar el punto final. Anote los mililitros de Hg(NO3)2 gastados. Aada el nitrato mercrico gota a gota al tubo A1 hasta obtener el color violeta intenso. (se obtiene un color mas obscuro por formacin de coloides). Anotar los mililitros gastados. Repetir el procedimiento anterior con el tubo A2 para comprobar o corregir lo obtenido en el tubo A1.

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Clculos: 1 ml de Hg(NO3)2 0.01 N titula 0.355 mg/100 ml de cloro de la solucin patrn. Por tanto: mg de Cl- / 100 ml de suero = ml gastados de Hg(NO3)2 X 355 mEq de Cl- / litro = (mg de Cl- / 100 ml x 10)/ 35.5 Valor normal: 334-395 mg/100 ml (94-111 mEq/l) EJERCICIOS 1. 2. 3. 4. Cmo se distribuye el cloro en el organismo? Que intervencin tiene en el equilibrio cido bsico el ion cloro? Cmo maneja el cloro el rin? Cmo maneja el CO2 el rin?

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