PROGRAMA NACIONAL DE CONTROLE E ERRADICAO DA BRUCELOSE E DA TUBERCULOSE ANIMAL (PNCEBT)

PRESIDENTE DA REPBLICA

Luiz Incio Lula da Silva

MINISTRO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO

Roberto Rodrigues
SECRETRIO EXECUTIVO

Lus Carlos Guedes Pinto

SECRETRIO DE DEFESA AGROPECURIA

Gabriel Alves Maciel

DIRETOR DO DEPARTAMENTO DE SADE ANIMAL

Jorge Caetano Junior

COORDENADOR GERAL DE COMBATE S DOENAS

Jamil Gomes de Souza

CHEFE DA DIVISO DE BRUCELOSE E TUBERCULOSE

Jos Ricardo Lbo

Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

PROGRAMA NACIONAL DE CONTROLE E ERRADICAO DA BRUCELOSE E DA TUBERCULOSE ANIMAL (PNCEBT)

Manual Tcnico

Braslia - 2006
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AUTORES

Andrey Pereira Lage Eliana Roxo Ernst Eckehardt Muller Fernando Padilla Poester Joo Crisostomo Mauad Cavallro Jos Soares Ferreira Neto Pedro Moacyr Pinto Coelho Mota Vitor Salvador Pico Gonalves
ORGANIZAO

Vera Cecilia Ferreira de Figueiredo Jos Ricardo Lbo Vitor Salvador Pico Gonalves
REVISO BIBLIOGRFICA

Neuza Arantes Silva

REVISO DE TEXTO

Attilio Brunacci
AGRADECIMENTOS

Carlos Eduardo Tedesco Silva SFA-MS/MAPA Maria Carmen de Rezende Costa SFA-MG/MAPA Maria do Carmo Pessa Silva SEAB/PR Orasil Romeu Bandini SFA-MS/MAPA

Catalogao na Fonte Biblioteca Nacional de Agricultura - BINAGRI permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte. Brasil. Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal (PNCEBT) / organizadores, Vera Cecilia Ferreira de Figueiredo, Jos Ricardo Lbo, Vitor Salvador Pico Gonalves. - Braslia : MAPA/SDA/DSA, 2006. 188 p. ISBN 85-99851-01-2 1. Doena animal - Brucelose - Controle 2. Doena Animal - Tuberculose - Controle I. Lage, Andrey Pereira. II. Roxo, Eliana. III. Muller, Ernst Eckehardt. IV. Poester, Fernando Padilla. V. Cavallro, Joo Crisostomo Mauad. VI. Ferreira Neto, Jos Soares. VII. Mota, Pedro Moacyr Pinto Coelho. VIII. Gonalves, Vitor Salvador Pico. IX. Secretaria de Defesa Agropecuria. X. Departamento de Sade Animal. XI. Ttulo. AGRIS 4110; L73 CDU 639.1.091

Apresentao

O Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, ao instituir o Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal (PNCEBT), reconheceu essas doenas como destacados problemas de sade animal e de sade pblica no Brasil. So zoonoses causadoras de considerveis prejuzos econmicos e sociais, em virtude do impacto que produzem na produtividade dos rebanhos e dos riscos que acarretam sade humana. Um pas com um servio oficial de defesa sanitria animal bem estruturado deve ser capaz de atuar com eficcia no controle e na erradicao dessas doenas. Sendo detentor do maior rebanho comercial de bovinos do mundo, o Brasil precisa colocar no mercado produtos de origem animal de qualidade e baixo risco sanitrio para consumidores internos e externos cada vez mais exigentes. Aps ampla discusso com os vrios segmentos envolvidos, o grupo de trabalho responsvel pela elaborao do PNCEBT concebeu um programa com estratgias e objetivos muito claros, calcado em padres internacionais e que envolve, na sua execuo, instituies de ensino e pesquisa em medicina veterinria e grande nmero de mdicos veterinrios que atuam no setor privado. Com isso, o servio oficial de defesa sanitria animal pode concentrar suas aes no estabelecimento das polticas pblicas de sade animal e nas atividades de fiscalizao e de certificao. Nada obstante isso, de essencial importncia a participao dos pecuaristas e da agroindstria, beneficirios primeiros da maior eficincia produtiva dos rebanhos e da certificao de propriedades livres e monitoradas para brucelose e tuberculose, pois tero a possibilidade de ofertar produtos com diferencial de qualidade e maior valor agregado. Jorge Caetano Junior
Diretor do Departamento de Sade Animal
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Prefcio

O Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) iniciou, no ano 2000, o processo de elaborao de uma proposta de programa para o controle da brucelose e da tuberculose animal. O assunto era tema de discusso recorrente em eventos tcnicos e cientficos, em fruns especializados, em teses de ps-graduao, ou, simplesmente, nas conversas entre veterinrios e produtores pecurios. Aes de saneamento de rebanhos, ou mesmo programas locais implementados por cooperativas, eram conhecidos. As autoridades sanitrias do Rio Grande do Sul, na dcada de 60, e de Minas Gerais, trs dcadas mais tarde, haviam iniciado programas sistemticos de vacinao contra a brucelose bovina. O prprio MAPA publicou legislao de controle da brucelose em 1976, porm sem que isso fosse seguido de implementao de um programa especfico. Apesar de todos os esforos, as aes que visavam combater estas enfermidades careciam de padronizao, de princpios metodolgicos claramente definidos com abordagem populacional, e, sobretudo, no constituam um esforo organizado e estruturado que configurasse um programa sanitrio. Assim, tornava-se necessrio repensar a estratgia de combate a estas zoonoses para construir as bases de um programa sanitrio adequado situao epidemiolgica, s caractersticas do setor pecurio brasileiro e infra-estrutura de servios veterinrios disponvel. Para elaborar a proposta de programa, o MAPA instituiu um grupo de trabalho multidisciplinar, cuja misso durou seis meses. Durante esse perodo, foram realizadas reunies com representantes do servio de defesa sanitria, dos produtores, do setor agroindustrial, das associaes de classe e, ainda, com pesquisadores e acadmicos. Chegou-se, por fim, a uma proposta baseada em algumas idiaschave, que abriam caminho para uma nova abordagem do problema.
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Em primeiro lugar, ficou claro que no seria possvel, nem desejvel, comear as aes de controle com medidas caractersticas de fases avanadas de erradicao. O exemplo principal desse equvoco era a tendncia de exigir a realizao de testes diagnsticos em todas as situaes de trnsito de animais, inclusive para a participao em qualquer tipo de evento ou aglomerao. Tal exigncia levaria a realizar vrios milhes de testes de brucelose e tuberculose todos os anos, sem controle de qualidade e sem resultar em saneamento dos focos existentes. O combate a doenas crnicas de tipo endmico no pode depender apenas da preveno da disseminao do agente infeccioso, uma vez que este pode manter-se em equilbrio, e por muito tempo, em rebanhos infectados. Ou seja, ou se eliminam as fontes de infeco, fazendo o saneamento dos focos, ou a incidncia de enfermidade permanecer inalterada. necessrio ressaltar que os animais reagentes aos testes diagnsticos devem ser eliminados, o que requer algum controle dos mdicos veterinrios privados e oficiais sobre o destino dos animais. Para atingir o objetivo de eliminao progressiva de focos, optou-se por um programa voluntrio de certificao de rebanhos livres, garantindo-se a isonomia deste conceito. A adeso dos produtores ao programa depender dos estmulos e restries aos quais forem expostos. Se os programas de qualidade do leite e da carne forem incorporando o controle da brucelose e da tuberculose, exigindo que os produtos sejam procedentes de propriedades livres, a preocupao com a sade animal e a sade pblica ser entendida como parte do processo de produo, mais do que como uma imposio do servio de defesa sanitria, aplicando o princpio da segurana dos alimentos do campo mesa. A defesa sanitria estar fazendo apenas uma parte do combate a essas zoonoses, assumindo a tarefa de certificao sanitria junto ao produtor. O envolvimento de toda a cadeia produtiva, e do consumidor, que vai determinar a eficcia de implementao do programa de certificao de propriedades livres.
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Para envolver as grandes propriedades de produo de carne existentes no Brasil, elaboraram-se medidas adaptadas s condies de manejo e ao tamanho desses rebanhos, as quais justificam a criao do programa de propriedades monitoradas. Esses rebanhos estaro sujeitos a um sistema de monitoramento permanente que visa prevenir a introduo do agente infeccioso e garantir baixos nveis de risco de manuteno de situaes endmicas. A vacinao de bezerras contra a brucelose foi considerada prioritria em razo de a prevalncia ser alta em quase todo o pas. Com essa medida espera-se reduzir significativamente a prevalncia e a incidncia da brucelose em um prazo de 10 anos. Os exemplos de sucesso em Minas Gerais e no Rio Grande do Sul so motivo para acreditar no acerto dessa estratgia. O PNCEBT tambm um programa aberto a inovaes, como a introduo de novas vacinas ou testes de diagnstico. Essa caracterstica importante para garantir que os produtores e os mdicos veterinrios tenham acesso constante a mtodos de boa eficcia e de custo baixo. Finalmente, o PNCEBT envolve os mdicos veterinrios, as universidades e centros de pesquisa como parte ativa de todo o processo. Esta uma soluo nova no Brasil, baseada na idia de que a grande capacidade tcnica instalada das instituies de ensino e pesquisa e a disponibilidade de servios veterinrios existentes no Pas podem e devem dar uma contribuio importante a todas as fases de um programa de sade animal. Acreditamos que as estratgias e normas seguidas pelo PNCEBT so adequadas e podem transformar o combate brucelose e tuberculose em um esforo organizado de todos os setores ligados produo pecuria e promoo da sade pblica. A partir de agora ser necessrio monitorar o andamento e o impacto das medidas propostas. S o tempo mostrar os erros e os acertos e tornar mais evidentes as necessidades de corrigir ou de reforar o rumo seguido. Comit Cientfico Consultivo do PNCEBT
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Sumrio
PROGRAMA NACIONAL DE CONTROLE E ERRADICAO DA BRUCELOSE E DA TUBERCULOSE ANIMAL (PNCEBT) ....................... 15 Apresentao do Programa ............................................................... 15 Breve Diagnstico da Situao Atual ...................................................... 15 Objetivos Especficos do Programa ......................................................... 17 Estratgias ......................................................................................... 17 Propostas Tcnicas .............................................................................. 18 Vacinao contra Brucelose ............................................................ 18 Certificao de Propriedades Livres de Brucelose e Tuberculose ........... 19 Certificao de Propriedades Monitoradas para Brucelose e Tuberculose ............................................................. 20 Controle do Trnsito de Animais ................................................. 21 Habilitao e Capacitao de Mdicos Veterinrios ..................... 21 Diagnstico e Apoio Laboratorial ....................................................... 22 Brucelose ................................................................................... 22 Tuberculose ............................................................................... 23 Participao do Servio Veterinrio Oficial ............................................... 24 BRUCELOSE BOVINA (Brucella abortus) .............................................. 25 Definio .......................................................................................... 25 Etiologia ........................................................................................... 25 Epidemiologia ................................................................................... 26 Situao no Brasil ...................................................................... 26 Perdas Econmicas ..................................................................... 27 Resistncia ................................................................................. 28 Mecanismos de Transmisso .............................................................. 29 Patogenia ......................................................................................... 31 Sinais Clnicos e Leses ...................................................................... 32 Resposta Imune contra a Brucelose na Infeco e na Vacinao .......... 33 Diagnstico ...................................................................................... 36 Mtodos Diretos ........................................................................ 36 Mtodos Indiretos ou Sorolgicos .............................................. 36
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Testes de Triagem .................................................................. 38 Teste de Soroaglutinao com Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) ....................................... 38 Teste do Anel em Leite (TAL) .......................................... 39 Testes Confirmatrios .......................................................... 39 Teste do 2-Mercaptoetanol (2-ME) ................................ 39 Teste de Soroaglutinao em Tubos (SAT) ...................... 40 Fixao de Complemento (FC) ....................................... 40 Novos Mtodos de Diagnstico ........................................... 41 Teste de Elisa Indireto (I-Elisa) ........................................ 41 Teste de Elisa Competitivo (C-Elisa) ................................ 41 Teste de Polarizao de Fluorescncia (FPA) .................... 42 Controle da Brucelose ....................................................................... 42 Vacinas contra Brucelose ................................................................... 43 Vacina B19 ................................................................................ 44 Vacina no Indutora de Anticorpos Aglutinantes ......................... 45 Doena no Ser Humano .................................................................... 45 Bibliografia ........................................................................................ 47 TUBERCULOSE BOVINA (Mycobacterium bovis) .............................. 51 Definio ........................................................................................... 51 Etiologia ............................................................................................ 51 Epidemiologia .................................................................................... 52 Distribuio ................................................................................ 52 Importncia Econmica ................................................................. 53 Mecanismos de Transmisso ................................................................. 53 Patogenia .......................................................................................... 55 Diagnstico ........................................................................................ 57 Diagnstico Clnico ...................................................................... 58 Diagnstico Anatomopatolgico .................................................... 58 Diagnstico Bacteriolgico ............................................................ 59 Diagnstico Alrgico-cutneo ........................................................ 60 Tuberculinas ......................................................................... 61 Mecanismos da Reao Alrgica Tuberculina ........................... 61
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Equipamentos para os Testes de Tuberculinizao ..................... 63 Mtodos de Turberculinizao ................................................ 64 Cuidados na Tuberculinizao de Rebanhos .............................. 64 Novos Mtodos de Diagnstico da Tuberculose Bovina ...................... 65 Controle da Tuberculose ...................................................................... 66 Tuberculose Humana de Origem Bovina .................................................. 68 Bibliografia ........................................................................................ 68 PROPRIEDADES DOS TESTES DE DIAGNSTICO E IMPLICAES NO DELINEAMENTO DE ESTRATGIAS SANITRIAS .................................... 73 O Caso dos Programas de Controle da Brucelose e da Tuberculose ...... 73 Concluso .......................................................................................... 79 Bibliografia ........................................................................................ 79 COLHEITA DE MATERIAL PARA EXAME LABORATORIAL ........................ 81 Exame Direto (bacteriolgico) ................................................................ 81 Tuberculose ................................................................................ 82 Brucelose .................................................................................... 83 Exame Histopatolgico ........................................................................ 84 Exame Indireto (sorolgico) .................................................................. 84 Identificao e Encaminhamento do Material de Necropsia ........................ 87 Preenchimento do Formulrio de Encaminhamento de Amostra para Diagnstico ................................................................ 88 PROTOCOLO PARA DIAGNSTICO DA BRUCELOSE ............................... 91 Diagnstico Sorolgico ..................................................................... 91 Antgenos .................................................................................. 91 Identificao dos Animais .......................................................... 91 Testes ........................................................................................ 91 Teste do Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) ................. 91 Teste do Anel em Leite (TAL) ................................................ 93 Teste do 2-Mercaptoetanol (2-ME) ...................................... 96

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PROTOCOLO PARA DIAGNSTICO DA TUBERCULOSE ...................... 103 Diagnstico Alrgico ......................................................................... 103 Tuberculinas .............................................................................. 103 Equipamentos ........................................................................... 103 Identificao dos Animais ........................................................... 103 Testes ....................................................................................... 104 Teste Cervical Simples (TCS) ................................................... 104 Teste Cervical Comparativo (TCC) ........................................... 106 Teste da Prega Caudal (TPC) .................................................. 109 ELIMINAO DE ANIMAIS ................................................................ 111 MTODOS DE DESINFECO .......................................................... 113 Bibliografia ...................................................................................... 115 PERGUNTAS E RESPOSTAS SOBRE NORMAS E PROCEDIMENTOS .... 117 Vacina contra Brucelose ..................................................................... 117 Cadastramento de Mdicos Veterinrios ............................................... 119 Habilitao de Mdicos Veterinrios ..................................................... 120 Antgenos para Brucelose e Turbeculinas .............................................. 121 Diagnstico de Brucelose ................................................................... 122 Diagnstico de Tuberculose ................................................................ 125 Destino dos Animais Reagentes Positivos .............................................. 128 Trnsito Interestadual e Aglomeraes de Bovinos e Bubalinos (Feiras e Exposies) ........................................................ 129 Certificao de Estabelecimento de Criao Livre de Brucelose e Tuberculose ................................................................... 130 Certificao de Estabelecimento de Criao Monitorado para Brucelose e Tuberculose .............................................................. 134 LEGISLAO PNCEBT ....................................................................... 141 ENDEREOS DAS SUPERINTENDNCIAS FEDERAIS DE AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO SFAs/MAPA ..... 181

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

PROGRAMA NACIONAL DE CONTROLE E ERRADICAO DA BRUCELOSE E DA TUBERCULOSE ANIMAL (PNCEBT)

Apresentao do Programa
O Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal (PNCEBT) foi institudo em 2001 pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) com o objetivo de diminuir o impacto negativo dessas zoonoses na sade humana e animal, alm de promover a competitividade da pecuria nacional. O PNCEBT introduziu a vacinao obrigatria contra a brucelose bovina e bubalina em todo o territrio nacional e definiu uma estratgia de certificao de propriedades livres ou monitoradas.

Breve Diagnstico da Situao Atual

A brucelose, causada por Brucella abortus, e a tuberculose, ocasionada por Mycobacterium bovis, esto disseminadas por todo o territrio nacional; a sua prevalncia e distribuio regional, porm, no esto bem caracterizadas. Sabe-se que a brucelose atinge tanto o gado de corte como o gado de leite, enquanto a tuberculose um problema mais srio para os produtores de leite. Ambas as enfermidades afetam a populao de bubalinos. O ltimo diagnstico de situao da brucelose bovina em nvel nacional foi realizado em 1975, tendo sido estimada a porcentagem de animais soropositivos em 4% na Regio Sul, 7,5% na Regio Sudeste, 6,8% na Regio Centro-Oeste, 2,5% na Regio Nordeste e 4,1% na Regio Norte. Posteriormente, outros levantamentos sorolgicos por amostragem, realizados em alguns
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Estados, revelaram pequenas alteraes na prevalncia de brucelose: no Rio Grande do Sul, a prevalncia passou de 2,0% em 1975, para 0,3% em 1986, aps uma campanha de vacinao bem sucedida; em Santa Catarina, passou de 0,2% em 1975, para 0,6% em 1996; no Mato Grosso do Sul, a prevalncia estimada em 1998 foi de 6,3%, idntica ao valor encontrado em 1975 para o territrio mato-grossense; em Minas Gerais, passou de 7,6% em 1975, para 6,7% em 1980; no Paran, a prevalncia estimada em 1975 foi de 9,6%, passando para 4,6% de bovinos soropositivos em 1989. Os dados de notificaes oficiais indicam que a prevalncia de animais soropositivos se manteve entre 4% e 5% no perodo de 1988 a 1998. Entre 1989 e 1998, os dados de notificaes oficiais de tuberculose bovina indicam uma prevalncia mdia nacional de 1,3% de animais infectados. Um levantamento realizado em 1999, no Tringulo Mineiro e nas regies do centro e sul de Minas Gerais, envolvendo aproximadamente 1.600 propriedades e 23.000 animais, estimou a prevalncia aparente de animais infectados em 0,8%. No mesmo estudo, foram detectadas 5% de propriedades com animais reagentes, sendo importante destacar que esse valor subiu a 15% no universo de propriedades produtoras de leite com algum grau de mecanizao da ordenha e de tecnificao da produo. A partir da instituio do Programa em 2001, um inqurito soroepidemiolgico para a brucelose est sendo realizado em nvel nacional, com critrios padronizados e encontra-se em fase adiantada. Os critrios para a realizao de estudo de prevalncia da tuberculose no Pas esto sendo estabelecidos. Antes do lanamento do PNCEBT, o controle da brucelose estava regulamentado pela Portaria Ministerial nO 23/76, que no vinha obtendo a eficcia desejada. O mesmo aplica-se ao problema da tuberculose, cujas normas e procedimentos de controle s com este Programa passaram a estar regulamentados em nvel nacional. importante destacar a iniciativa da Associao Brasileira de Buiatria que, em 1999, organizou grupos de discusso sobre o
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controle da tuberculose bovina no Brasil e culminou no encaminhamento de uma proposta de ao ao MAPA em dezembro desse mesmo ano. Quanto brucelose e tuberculose dos sunos, o controle feito de acordo com as normas de certificao de granjas de reprodutores sudeos da Secretaria de Defesa Agropecuria/MAPA, que estabelecem procedimentos de diagnstico e controle na populao de matrizes. A brucelose ovina e caprina de importncia epidemiolgica, causada por Brucella melitensis, no foi diagnosticada no Brasil at o presente momento. A epididimite ovina, provocada por Brucella ovis, no considerada nas medidas propostas neste Programa, pois trata-se de doena com caractersticas prprias, pelo que ser considerada no mbito de programas de controle de doenas dos ovinos. No existem dados sobre tuberculose ovina e caprina no Brasil que justifiquem a implantao de medidas especficas visando o controle sistemtico da doena em pequenos ruminantes.

Objetivos Especficos do Programa

Reduzir a prevalncia e a incidncia de novos focos de brucelose e de tuberculose. Criar um nmero significativo de propriedades certificadas como livres de brucelose e tuberculose ou monitoradas para brucelose e tuberculose, e que ofeream ao consumidor produtos de baixo risco sanitrio.

Estratgias
A estratgia deste programa consiste em um conjunto de medidas sanitrias compulsrias, associadas a aes de adeso voluntria. As medidas compulsrias tm eficcia comprovada e permitem obter uma importante reduo da prevalncia e da
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incidncia das duas doenas a custos reduzidos. Trata-se da vacinao de bezerras contra a brucelose e do controle do trnsito de animais destinados reproduo. importante ressaltar que a prioridade neste Programa a vacinao contra a brucelose. As aes de adeso voluntria dizem respeito certificao de propriedades livres e de propriedades monitoradas, que nada mais so do que um instrumento que os produtores e o setor agroindustrial utilizaro para agregar valor aos seus produtos. Assim sendo, este no um programa apenas do governo federal e dos governos estaduais; um projeto que dever envolver o setor produtivo e suas comunidades, o setor industrial e os consumidores, no esquecendo os mdicos veterinrios que atuam no setor privado. Em outras palavras, o setor pblico dever atuar como agente certificador dentro de um processo que envolve diretamente toda a cadeia produtiva. Para garantir a qualidade tcnica das aes do Programa, foi elaborada uma srie de medidas que visam: capacitar mdicos veterinrios e laboratrios, tanto oficiais como privados; padronizar os mtodos de diagnstico utilizados; permitir as aes de fiscalizao e monitoramento que cabem ao servio oficial de defesa sanitria animal; melhorar a integrao desse servio de defesa sanitria com o servio oficial de inspeo de produtos de origem animal.

Propostas Tcnicas Vacinao contra Brucelose

Estabeleceu-se um prazo at dezembro de 2003 para cada Estado implantar em todo o seu territrio a obrigatoriedade de vacinao de bezerras contra a brucelose. A vacinao s poder ser realizada sob a responsabilidade de mdicos veterinrios; estes devero estar cadastrados no servio oficial de defesa sanitria animal de seu Estado de atuao. Em regies onde houver carncia de veterin18

rios privados, ou nos casos em que eles no atendam plenamente s necessidades do Programa, o servio oficial de defesa sanitria animal poder executar ou supervisionar as atividades de vacinao. Esperase que, at dezembro de 2010, ao menos 80% da populao de fmeas adultas tenham sido vacinadas entre 3 e 8 meses de idade. Quando essa meta for atingida, a prevalncia de brucelose dever situar-se em nveis que permitam passar fase de erradicao. O PNCEBT tambm autoriza a vacinao de fmeas com idade superior a oito meses, desde que sejam utilizadas vacinas que no interfiram com os testes de diagnstico e atendam aos critrios estabelecidos em norma especfica.

Certificao de Propriedades Livres de Brucelose e Tuberculose

Os procedimentos de certificao de propriedades livres de brucelose e de tuberculose obedecem aos princpios tcnicos estabelecidos pela Organizao Mundial de Sade Animal (OIE) e, portanto, acreditados e aceitos internacionalmente. A sua aplicao foi ajustada realidade dos sistemas de produo brasileiros e s necessidades do PNCEBT. A adeso ao processo de certificao voluntria e seria extremamente positiva a implementao de mecanismos de incentivo e de compensao. Tais iniciativas devero ser desenvolvidas em colaborao com todos os atores da cadeia produtiva, principalmente a indstria. O saneamento das propriedades que entram em processo de certificao deve ser realizado testando todos os animais e sacrificando os reagentes positivos. Os testes em todo o rebanho sero repetidos at a obteno de trs testes sem um nico animal reagente positivo, ao longo de um perodo mnimo de nove meses. Uma vez terminado o saneamento, a propriedade obtm o certificado de livre dessas doenas, cuja manuteno depende do cumprimento de todas as regras e normas sanitrias estabelecidas. As propriedades certificadas ficam obrigadas a repetir os testes anualmente. importante destacar a exigncia de dois testes
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negativos para o ingresso de animais na propriedade, se eles no forem provenientes de outra propriedade livre. Os testes de diagnstico para brucelose so realizados exclusivamente em fmeas de idade igual ou superior a 24 meses, desde que vacinadas entre 3 e 8 meses; em machos e fmeas no vacinadas, realizam-se a partir dos 8 meses de idade. Sero submetidos a testes de diagnstico para tuberculose todos os animais com idade igual ou superior a 6 semanas. As atividades de saneamento para a certificao de propriedades livres ou monitoradas sero desenvolvidas por mdicos veterinrios privados habilitados, depois de aprovados em curso de treinamento reconhecido pelo MAPA. O servio oficial de defesa sanitria animal dever monitorar e fiscalizar essas atividades.

Certificao de Propriedades Monitoradas para Brucelose e Tuberculose

Existe uma dificuldade de aplicao das normas tcnicas estabelecidas para propriedades livres em estabelecimentos de criao extensiva e com muitos animais, como caracterstico da pecuria de corte no Brasil. Por esse motivo, criou-se a certificao de propriedade monitorada para brucelose e tuberculose, tambm de adeso voluntria. Nelas, os testes de diagnstico so realizados por amostragem, seguindo procedimentos estabelecidos no Regulamento do PNCEBT. Se no forem detectados animais reagentes positivos, a propriedade receber o certificado de monitorada para brucelose e tuberculose. Se forem encontrados animais reagentes positivos, os animais no includos na amostragem sero submetidos a testes de diagnstico, e todos os animais reagentes positivos sero sacrificados ou destrudos. Somente aps essa etapa a propriedade receber o certificado de monitorada para brucelose e tuberculose. Em propriedades monitoradas, os testes sero realizados apenas em fmeas com mais de 24 meses e em machos reprodutores, com periodicidade anual para brucelose e a cada dois anos para tuberculose (aps obtidos dois testes anuais de
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rebanho para tuberculose, com resultados negativos). S podero ingressar na propriedade animais com dois testes negativos ou provenientes de propriedades de condio sanitria igual ou superior. semelhana das propriedades livres, as propriedades monitoradas so obrigadas a ter superviso tcnica de mdico veterinrio habilitado. O certificado de propriedade monitorada para brucelose e tuberculose ser atribudo exclusivamente a fazendas de gado de corte. O MAPA entende que esta uma forma eficaz de diminuir a prevalncia de tais enfermidades em propriedades com grande nmero de animais e de criao extensiva, enquanto garante o reconhecimento oficial de um trabalho sistemtico de vigilncia e saneamento. Para as indstrias exportadoras de carne, muito importante poder dar garantias aos mercados consumidores de que o seu produto provm de propriedades de criao onde o controle dessas doenas feito de forma sistemtica, aplicando-se princpios de gesto de risco.

Controle do Trnsito de Animais Destinados Reproduo, e Normas Sanitrias para a Participao em Exposies, Feiras, Leiles e em outras Aglomeraes de Animais
O PNCEBT estabelece exigncias de diagnstico para efeito de trnsito interestadual de animais destinados reproduo. Animais que participam de exposies tambm devem ser submetidos a teste de diagnstico, ou ser provenientes de propriedade livre. A emisso de Guia de Trnsito Animal (GTA) ser tambm condicionada comprovao da vacinao das fmeas da propriedade contra a brucelose, qualquer que seja a finalidade do trnsito animal.

Habilitao e Capacitao de Mdicos Veterinrios

O PNCEBT envolve um grande nmero de aes sanitrias profilticas e de diagnstico a campo. Assim sendo, torna-se necessrio habilitar mdicos veterinrios do setor privado para
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atuarem junto ao PNCEBT, sob superviso do MAPA e das Secretarias de Agricultura dos Estados. A vacinao contra brucelose dever ser realizada sob responsabilidade de mdicos veterinrios. Por tratar-se de vacina viva atenuada, sua compra s poder ser efetuada mediante a apresentao da receita emitida por mdico veterinrio. Esses profissionais ficaro obrigatoriamente cadastrados no servio veterinrio oficial de seu Estado de atuao. Para executar as atividades de diagnstico a campo e participar do programa de certificao de propriedades livres ou monitoradas, o MAPA s habilitar mdicos veterinrios que tenham sido aprovados em curso de treinamento em mtodos de diagnstico e controle de brucelose e tuberculose, previamente reconhecido por esse Ministrio. Esses cursos so ministrados em instituies de ensino ou pesquisa de todo o Pas com o objetivo de atualizar os conhecimentos dos profissionais que vo atuar no Programa e, sobretudo, de padronizar as aes sanitrias. Os instrutores desses cursos sero habilitados por meio da participao em seminrios de referncia do Programa Nacional, organizados pelo MAPA e oferecidos regularmente. A capacitao dos profissionais do setor privado e a sua participao neste Programa Nacional representam um desafio e uma oportunidade para a classe mdico-veterinria demonstrar sua capacidade de contribuir para a soluo de importantes problemas de sade pblica e de sade animal, a partir da integrao do servio veterinrio oficial com o setor privado e da constante melhoria do padro de servios oferecidos aos pecuaristas.

Diagnstico e Apoio Laboratorial

A eficcia de um programa nacional de combate a qualquer doena depende, em parte, da qualidade e da padronizao dos procedimentos de diagnstico utilizados. Os testes para diagnstico indireto reconhecidos como oficiais so:
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Brucelose
1) o teste do antgeno acidificado tamponado, que muito sensvel e de fcil execuo, o teste de triagem realizado por mdicos veterinrios habilitados, por laboratrios credenciados ou por laboratrios oficiais credenciados; 2) os animais que reagirem ao teste de triagem podero ser submetidos a um teste confirmatrio, o 2-Mercaptoetanol, que mais especfico, e executado por laboratrios credenciados ou por laboratrios oficiais credenciados; 3) o teste de fixao de complemento, ou outro que o substitua, realizado em laboratrios oficiais credenciados para efeito de trnsito internacional, como teste confirmatrio em animais reagentes ao teste de triagem, ou para diagnstico de casos inconclusivos ao teste do 2-Mercaptoetanol; 4) o teste do anel em leite poder ser utilizado para monitoramento da condio sanitria de propriedades livres ou como ferramenta de diagnstico em sistemas de vigilncia epidemiolgica; pode ser executado por mdicos veterinrios habilitados, por laboratrios credenciados ou por laboratrios oficiais credenciados.

Tuberculose
1) o teste cervical simples a prova de rotina em gado de leite devido sua boa sensibilidade; 2) o teste da prega ano-caudal pode ser utilizado como prova de triagem, porm, exclusivamente em gado de corte; 3) o teste cervical comparativo a prova confirmatria para animais reagentes ao teste da prega ano-caudal ou ao teste cervical simples; todavia, tambm pode ser empregado como nica prova diagnstica em rebanhos com histrico de reaes inespecficas. Os testes acima mencionados colocam o diagnstico de brucelose e de tuberculose no Brasil em sintonia com os padres internacionais, e, em particular, com as recomendaes do Cdigo
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Zoossanitrio Internacional da OIE. Entretanto, o MAPA pretende atualizar os mtodos de diagnstico medida que novos e melhores testes forem surgindo.

Participao do Servio Veterinrio Oficial

A credibilidade das atividades propostas neste Programa, principalmente a certificao de propriedades, est diretamente associada s aes de monitoramento e fiscalizao do servio veterinrio oficial. Uma vez que este no vai executar as aes sanitrias, o seu papel de rgo certificador de qualidade ser garantido atuando em pontos crticos do processo. Por exemplo, o servio oficial poder, em qualquer momento, realizar diagnsticos por amostragem em propriedades certificadas e far um acompanhamento direto dos testes finais que conferem o certificado de propriedade livre. Um ponto fundamental a integrao do servio de inspeo de produtos de origem animal neste Programa, em virtude do seu papel tanto na proteo ao consumidor como na vigilncia epidemiolgica. Com tal objetivo, ser estabelecido um fluxo sistemtico de informaes nosolgicas entre o servio de inspeo e o servio de defesa sanitria animal. Finalmente, deve ser ressaltada a necessidade de integrar o controle da brucelose e tuberculose nos programas de educao sanitria.

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

BRUCELOSE BOVINA (Brucella abortus)

Definio
A brucelose uma doena infecto-contagiosa provocada por bactrias do gnero Brucella. Produz infeco caracterstica nos animais, podendo infectar o homem. Sendo uma zoonose de distribuio universal, acarreta problemas sanitrios importantes e prejuzos econmicos vultosos. As principais manifestaes nos animais como abortos, nascimentos prematuros, esterilidade e baixa produo de leite contribuem para uma considervel baixa na produo de alimentos. No homem, a sua manifestao clnica responsvel por incapacidade parcial ou total para o trabalho. Tendo em vista ser o presente manual parte integrante do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal (PNCEBT) em bovinos e bubalinos, os conceitos emitidos a seguir sero dirigidos a essas duas espcies animais.

Etiologia
Dentro do gnero Brucella, so descritas seis espcies independentes, cada uma com seu hospedeiro preferencial: Brucella abortus (bovinos e bubalinos), Brucella melitensis (caprinos e ovinos), Brucella suis (sunos), Brucella ovis (ovinos), Brucella canis (ces) e Brucella neotomae (rato do deserto). Duas novas espcies, recentemente isoladas de mamferos marinhos esto sendo estudadas. As trs espcies principais, tambm denominadas clssicas, so subdivididas em biovariedades ou biovares: B. abortus 7 biovares; B. melitensis 3 biovares; B. suis 5 biovares.
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As bactrias do gnero Brucella so parasitas intracelulares facultativos, com morfologia de cocobacilos Gram-negativos, imveis; podem apresentar-se em cultivos primrios com morfologia colonial lisa ou rugosa (rugosa estrita ou mucide). Essa morfologia est diretamente associada composio bioqumica do lipopolissacardeo da parede celular, e para algumas espcies tem relao com a virulncia. B. abortus, B. melitensis e B. suis normalmente apresentam uma morfologia de colnia do tipo lisa; quando evoluem para formas rugosas ou mucides, deixam de ser patognicas. J as espcies B. ovis e B. canis apresentam uma morfologia de colnia permanentemente do tipo rugosa ou mucide. Embora os bovinos e bubalinos sejam suscetveis B. suis e B. melitensis, inequivocamente a espcie mais importante a B. abortus, responsvel pela grande maioria das infeces.

Epidemiologia Situao no Brasil

Estudos mostram que a brucelose bovina parece estar disseminada por todo o territrio brasileiro, com maior ou menor prevalncia dependendo da regio estudada. Em 1975, foram verificadas as seguintes prevalncias em animais, por regies: Sul, 4%; Sudeste, 7,5%; Centro-Oeste, 6,8%; Nordeste, 2,5% e Norte, 4,1%. Posteriormente, alguns Estados realizaram estudos sorolgicos por amostragem, os quais no evidenciaram grandes alteraes em relao aos ndices nacionais verificados em 1975. No Rio Grande do Sul, a prevalncia decresceu de 2%, em 1975, para 0,3%, em 1986. Em Santa Catarina, passou de 0,2%, em 1975, para 0,6%, em 1996. No Mato Grosso do Sul, a prevalncia estimada em 1998 foi de 6,3%, semelhante de 1975 no antigo Estado do Mato Grosso. Em Minas Gerais, passou de 7,6%, em 1975, para 6,7%, em 1980. No Paran, a prevalncia estimada em 1975 foi de 9,6%, passando para 4,6% em 1989.
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Os dados oficiais, publicados no Boletim de Defesa Sanitria Animal, mostram que a prevalncia de animais positivos no Brasil manteve-se entre 4% e 5% no perodo entre 1988 e 1998. Apesar dos poucos estudos realizados visando identificao das biovariedades de Brucella isoladas de bovdeos no Brasil, j foram identificadas B. abortus biovares 1, 2 e 3 e B. suis biovar 1. Alm dessas espcies, de igual modo j foram identificadas B. canis e B. ovis infectando animais domsticos. At o presente momento, a B. melitensis, principal agente etiolgico da brucelose caprina, no foi identificada no Brasil.

Perdas Econmicas
Nos bovinos e bubalinos, a brucelose acomete, de modo especial, o trato reprodutivo, gerando perdas diretas devido, principalmente, a abortos, baixos ndices reprodutivos, aumento do intervalo entre partos, diminuio da produo de leite, morte de bezerros e interrupo de linhagens genticas. As propriedades onde a doena est presente tm o valor comercial de seus animais depreciado; as regies onde a doena endmica encontram-se em posio desvantajosa na disputa de novos mercados. Estimativas mostram ser a brucelose responsvel pela diminuio de 25% na produo de leite e de carne e pela reduo de 15% na produo de bezerros. Mostram ainda que, em cada cinco vacas infectadas, uma aborta ou torna-se permanentemente estril. Dentro das perdas indiretas, deve-se salientar as que resultam em infeces humanas. Na maioria das vezes, quando a enfermidade no tratada na fase aguda, o curso crnico da doena no homem produz perdas econmicas de vulto. Essas perdas esto relacionadas com os custos do diagnstico e tratamento, muitas vezes requerendo internaes prolongadas. Alm disso, no deve ser esquecido o custo do perodo decorrente da ausncia ao trabalho. No Brasil, no existem estudos concretos sobre os prejuzos econmicos ocasionados pela brucelose bovina ou bubalina.
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Nos Estados Unidos, estimou-se, em 1983, que as perdas por brucelose bovina foram da ordem de 32 milhes de dlares, apesar do programa americano ter-se iniciado h mais de 40 anos.

Resistncia
As bactrias do gnero Brucella, apesar de permanecerem no ambiente, no se multiplicam nele; elas so medianamente sensveis aos fatores ambientais. Entretanto, a resistncia diminui quando aumentam a temperatura e a luz solar direta ou diminui a umidade. A pasteurizao um mtodo eficiente de destruio de Brucella sp, assim como as radiaes ionizantes. A sobrevivncia de Brucella sp em esterco lquido inversamente proporcional temperatura dele, pois pode sobreviver nesse material por 8 meses a 15C, enquanto que s resiste por 4 horas se a temperatura do material for de 45 50C. O Quadro 1 mostra o tempo de resistncia de Brucella sp em algumas condies ambientais.
Quadro 1 Resistncia de Brucella sp em algumas condies ambientais

Condio ambiental Luz solar direta Solo Fezes Dejetos gua esgoto altas temperaturas potvel poluda seco mido a baixas temperaturas

Tempo de sobrevivncia 4 5 horas 4 dias 65 dias 151 185 dias 120 dias 8 240/700 dias 4 horas 2 dias 5 114 dias 30 150 dias 180 dias 200 dias

Feto sombra Exsudato uterino

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Adaptado de Wray (1975), OMS (1986) e Crawford et al. (1990).

Mecanismos de Transmisso
No animal infectado, as localizaes de maior freqncia do agente so: linfonodos, bao, fgado, aparelho reprodutor masculino, tero e bere. As vias de eliminao so representadas pelos fluidos e anexos fetais eliminados no parto ou no abortamento e durante todo o puerprio , leite e smen. A principal fonte de infeco representada pela vaca prenhe, que elimina grandes quantidades do agente por ocasio do aborto ou parto e em todo o perodo puerperal (at, aproximadamente, 30 dias aps o parto), contaminando pastagens, gua, alimentos e fmites. Essas bactrias podem permanecer viveis no meio ambiente por longos perodos, dependendo das condies de umidade, temperatura e sombreamento, ampliando de forma significativa a chance de o agente entrar em contato e infectar um novo indivduo suscetvel. A porta de entrada mais importante o trato digestivo, sendo que a infeco se inicia quando um animal suscetvel ingere gua e alimentos contaminados ou pelo hbito de lamber as crias recmnascidas. Uma vaca pode adquirir a doena apenas por cheirar fetos abortados, pois a bactria tambm pode entrar pelas mucosas do nariz e dos olhos. O tempo transcorrido entre a exposio ao agente infeccioso e o aparecimento dos sintomas visveis o que se define como perodo de incubao. No caso da brucelose, esse perodo pode ser de poucas semanas e at mesmo de meses ou anos. Considerando-se o momento em que ocorre a infeco, o perodo de incubao inversamente proporcional ao tempo de gestao, ou seja, quanto mais adiantada a gestao, menor ser o perodo de incubao. A transmisso pelo coito parece no ser de grande importncia entre bovinos e bubalinos. Na monta natural, o smen depositado na vagina, onde h defesas inespecficas que dificultam o processo de infeco.
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Entretanto, um touro infectado no pode ser utilizado como doador de smen; isso porque, na inseminao artificial, o smen introduzido diretamente no tero, permitindo infeco da fmea com pequenas quantidades do agente, sendo por isso importante via de transmisso e eficiente forma de difuso da enfermidade nos plantis. A transferncia de embries realizada segundo os protocolos internacionalmente preconizados de lavagem e tratamento para a reduo da transmisso de agentes infecciosos , no apresenta risco de transmisso de brucelose entre doadoras infectadas e receptoras livres da doena. Fmeas nascidas de vacas bruclicas podem infectar-se no tero, durante ou logo aps o parto. Quando infectadas, essas fmeas em geral abortam na primeira prenhez, e s apresentam resultados positivos para os testes sorolgicos no decorrer da gestao. Esse fenmeno ocorre em freqncia baixa, porm, apesar de no impedir o avano dos programas de controle e erradicao, invariavelmente acarreta considervel retardo na obteno de bons resultados deles. Vrias espcies domsticas ou silvestres so suscetveis infeco por B. abortus, entretanto, so consideradas como hospedeiros finais da infeco, pois no transmitem o agente novamente aos bovinos. Entre aquelas espcies em condies de ter alguma importncia na epidemiologia da brucelose bovina, podem ser citados: os eqdeos, que podem apresentar leses articulares abertas, principalmente de cernelha; os ces, que podem abortar pela infeco; e os saprfagos, pela possibilidade de levar restos de placenta ou feto de um lugar para outro. A principal forma de entrada da brucelose em uma propriedade a introduo de animais infectados. Quanto maior a freqncia de introduo de animais, maior o risco de entrada da doena no rebanho. Por essa razo, deve-se evitar introduzir animais cuja condio sanitria desconhecida. O ideal que esses animais procedam de rebanhos livres ou, ento, que sejam
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submetidos rotina diagnstica que lhes garanta a condio de no infectados.

Patogenia
A B. abortus geralmente entra no organismo do hospedeiro pela mucosa oral ou nasal. Aps a penetrao na mucosa, as bactrias se multiplicam e so fagocitadas. Em geral, quando ocorre a entrada pela via digestiva, as tonsilas so um dos principais pontos de multiplicao do agente. Uma das caractersticas da infeco por Brucella sp o fato de a bactria poder resistir aos mecanismos de destruio das clulas fagocitrias e sobreviver dentro de macrfagos por longos perodos. Essa localizao intracelular um dos mecanismos de evaso do sistema imune, porque protege as brucelas da ao do complemento e de anticorpos especficos. Aps a multiplicao no stio de entrada, a B. abortus transportada, livre ou dentro de macrfagos, para os linfonodos regionais, nos quais pode permanecer por meses. Se a bactria no for destruda ou no se tornar localizada, h disseminao para vrios rgos por via linftica ou hematgena. As localizaes preferenciais so: linfonodos, bao, fgado, aparelho reprodutor masculino, bere e tero. Eventualmente, pode instalar-se nas articulaes mais exigidas, dando origem a leses denominadas higromas, que podem supurar. Devido ao seu tropismo por algumas substncias, como o eritritol, grande parte das brucelas se localiza nos testculos e no tero gestante. A infeco do tero gestante ocorre por via hematgena. As brucelas multiplicam-se inicialmente no trofoblasto do placentoma, infectando tambm as clulas adjacentes, levando a uma reao inflamatria da placenta. Alm disso, h infeco do feto, de igual modo por via hematgena. As leses placentrias raramente atingem todos os placentomas; em geral, apenas parte deles afetada. Tais leses
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inflamatrio-necrticas de placentomas, que impedem a passagem de nutrientes e oxignio da me para o feto, assim como provocam a infeco macia do feto por B. abortus, so as responsveis pelo aborto. Com o desenvolvimento de imunidade celular aps o primeiro aborto, h uma diminuio do nmero e do tamanho das leses de placentomas nas gestaes subseqentes. Com isso, o aborto torna-se infreqente, aparecendo outras manifestaes da doena, como, por exemplo, a reteno de placenta, a natimortalidade ou o nascimento de bezerros fracos.

Sinais Clnicos e Leses

A brucelose pode manifestar-se de maneira distinta conforme o hospedeiro. Nos bovinos e bubalinos, a principal manifestao clnica o aborto, que ocorre em torno do stimo ms de gestao. Aps a infeco, o aborto quase sempre acontece na primeira gestao, mas, em decorrncia do desenvolvimento da imunidade celular, pouco freqente na segunda gestao aps a infeco, e muito raro nas subseqentes. Os animais infectados apresentam uma placentite necrtica, sendo comum a reteno de placenta. Aps o primeiro aborto, so mais freqentes a presena de natimortos e o nascimento de bezerros fracos. O feto geralmente abortado 24 a 72 horas depois de sua morte, sendo comum sua autlise. No h nenhuma leso patognomnica da brucelose no feto abortado, mas, com freqncia, observa-se broncopneumonia supurativa. Nos rebanhos com infeco crnica, os abortos concentram-se nas fmeas primparas e nos animais sadios recentemente introduzidos. Nos machos existe uma fase inflamatria aguda, seguida de cronificao, freqentemente assintomtica. As bactrias podem instalar-se nos testculos, epiddimos e vesculas seminais. Um dos possveis sinais a orquite uni ou bilateral, transitria ou permanente,
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com aumento ou diminuio do volume dos testculos. Em outros casos, o testculo pode apresentar um aspecto amolecido e cheio de pus. Leses articulares tambm podem ser observadas.

Resposta Imune contra a Brucelose na Infeco e na Vacinao

As bactrias do gnero Brucella so parasitas intracelulares facultativos, com capacidade de se multiplicar e sobreviver dentro de macrfagos. Em razo dessa habilidade, a proteo contra a infeco e a eliminao da bactria do organismo hospedeiro dependem primariamente da resposta imune mediada por clulas. Tal resposta d-se pela interao de clulas fagocitrias neutrfilos e macrfagos e de clulas especficas, linfcitos T auxiliares e citotxicos. Apesar de existirem metodologias para se medir a intensidade dessa resposta imune celular, essas tcnicas, por serem complexas e de difcil execuo, no so utilizadas na rotina de diagnstico da infeco por Brucella sp. Alm da resposta imune celular, anticorpos especficos (imunidade humoral) contra a cadeia O tambm so produzidos durante a infeco. Os anticorpos dirigidos contra o lipopolissacardeo (LPS) de Brucella sp tm sido bastante estudados, de modo especial por serem detectados com facilidade em provas sorolgicas. A maioria das imunoglobulinas presentes no soro de bovinos e bubalinos da classe G (IgG1 e IgG2), seguidas das classes M (IgM) e A (IgA). A resposta humoral de bovinos infectados por B. abortus ou vacinados com B19, caracteriza-se pela sntese dos quatro isotipos principais de imunoglobulinas. A resposta sorolgica ps-infeco ou vacinao produz-se a partir da primeira semana, aparecendo, em primeiro lugar, o isotipo IgM e, logo aps, o IgG1. As respostas de IgG2 e IgA aparecem mais tarde, aumentam gradativamente, mas permanecem em nveis baixos (Figura 1). A observao por perodos prolongados da resposta humoral em animais infectados
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demonstra que h um leve decrscimo dos nveis de IgM, enquanto que os de IgG1 permanecem altos, inalterados. A IgG2 e IgA permanecem em nveis mais baixos e estveis (Figura 2). A observao por perodo prolongado em animais vacinados com B19, quando vacinados at 8 meses, demonstra que o nvel de anticorpos decresce rapidamente, atingindo ttulos inferiores a 25 UI depois de 12 meses (Figura 3). Por outro lado, se a vacinao for realizada acima de 8 meses de idade, os ttulos vacinais tendem a permanecer elevados por mais tempo, podendo gerar reaes falsopositivas nos testes indiretos de diagnstico.
Figura 1 Resposta dos principais isotipos de anticorpos em bovinos infectados com amostra patognica de Brucella abortus ou vacinados com B19

Fonte: Adaptado de Nielsen et al., 1996.

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Figura 2 Resposta a longo termo dos principais isotipos de anticorpos em bovinos infectados com amostra patognica de Brucella abortus

Fonte: Adaptado de Nielsen et al., 1996.

Figura 3 Resposta a longo termo dos principais isotipos de anticorpos em bovinos vacinados com a amostra B19 de Brucella abortus

Fonte: Adaptado de Nielsen et al., 1996.

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Diagnstico
O diagnstico da brucelose pode ser feito pela identificao do agente por mtodos diretos, ou pela deteco de anticorpos contra B. abortus por mtodos indiretos.

Mtodos Diretos
Os mtodos diretos incluem o isolamento e a identificao do agente, imunohistoqumica, e mtodos de deteco de cidos nucleicos, principalmente a reao da polimerase em cadeia (PCR). O isolamento e a identificao da B. abortus a partir de material de aborto (feto, contedo estomacal de feto, placenta) ou de secrees apresentam resultados muito bons se a colheita e o transporte da amostra forem bem realizados e se a amostra for processada em laboratrios capacitados e com experincia. Entretanto, devido ao risco de contaminao humana durante o processamento da amostra, poucos so os laboratrios que realizam o exame. A imunohistoqumica pode ser procedida em material de aborto aps a fixao em formol e permite tanto a identificao do agente como a visualizao de aspectos microscpicos do tecido examinado. A PCR detecta um segmento de DNA especfico da B. abortus em material de aborto, em secrees e excrees. uma tcnica bastante sensvel e especfica, mas requer equipamentos sofisticados e pessoal treinado.

Mtodos Indiretos ou Sorolgicos

O conhecimento da dinmica das imunoglobulinas nos diferentes estgios da resposta imune tem orientado o desenvolvimento de inmeros testes sorolgicos. Esses testes visam demonstrar a presena de anticorpos contra Brucella sp em vrios fluidos corporais, como soro sanguneo, leite, muco vaginal e smen. Um teste sorolgico perfeito deveria detectar infeco nos estgios
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iniciais da doena, antes da ocorrncia do aborto, e deveria discriminar anticorpos de vacinao e de infeco; da mesma maneira, no deveria apresentar reaes falso-positivas ou falsonegativas. Ainda no existe tal teste para o diagnstico da brucelose. Acrescente-se que nenhuma doena conta com um recurso diagnstico com esse desempenho. As reaes falso-positivas so decorrentes de dois fatores distintos. Primeiro, a reao pode ocorrer devido presena de anticorpos no especficos presentes nas infeces por outras bactrias, como Yersinia enterocolitica O:9, Salmonella sp, Escherichia coli O:157, ou Pseudomonas sp. Segundo, podem decorrer como resultado da vacinao com B19 aps a idade recomendada. A resposta sorolgica infeco por Brucella sp influenciada por muitos fatores, os quais refletem no desempenho das diferentes provas sorolgicas. Destacam-se, entre esses fatores, o longo e varivel perodo de incubao da doena, durante o qual a sorologia pode ser negativa, a condio vacinal dos animais, a natureza do desafio, a variao individual de resposta vacinao e infeco e o estgio da gestao no momento da infeco. A melhor estratgia que tem sido validada por vrios pases que conseguiram avanos significativos no combate brucelose costuma ser a combinao de testes, utilizados em srie. Essa estratgia tem como base a escolha de um teste de triagem de fcil execuo, barato e de boa sensibilidade, seguido de um teste confirmatrio, a ser realizado apenas nos soros que resultarem positivos no teste anterior, geralmente mais elaborado, porm com melhor especificidade que o teste de triagem. Esse teste confirmatrio tem que ter tambm boa sensibilidade. A quantidade de testes indiretos disponveis para o diagnstico de brucelose bastante ampla; cada pas, segundo suas disponibilidades e caractersticas, deve escolher aqueles que melhor se adaptem sua estratgia. Em geral, os testes sorolgicos so classificados segundo o antgeno utilizado na reao. Nos testes
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de aglutinao (lenta, com antgeno acidificado, do anel em leite, de Coombs), de fixao do complemento ou imunofluorescncia indireta, o antgeno representado por clulas inteiras de B. abortus. Nos testes de imunodifuso em gel (dupla ou radial), Elisa (indireto e competitivo), hemlise indireta e Western blot, o antgeno representado pelo lipopolissacardeo da parede celular da B. abortus semipurificado. A escolha dos mtodos sorolgicos precisa levar em considerao o custo, o tamanho e as caractersticas da populao sob vigilncia, a situao epidemiolgica da doena, a sensibilidade e a especificidade dos testes, bem como a utilizao de vacinas. No Brasil, o PNCEBT definiu como oficiais os seguintes testes: Antgeno Acidificado Tamponado (AAT), Anel em Leite (TAL), 2Mercaptoetanol (2-ME) e Fixao de Complemento (FC). Os dois primeiros como testes de triagem; os dois ltimos como confirmatrios. Clulas inteiras da amostra de B. abortus 1119-3 so utilizadas na preparao dos antgenos. Testes de Triagem Teste de Soroaglutinao com Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) preparado com o antgeno na concentrao de 8%, tamponado em pH cido (3,65) e corado com o Rosa de Bengala. o teste de triagem do rebanho. A maioria dos soros de animais bacteriologicamente positivos apresenta reao a essa prova. Como podem ocorrer alguns poucos casos de reaes falso-positivas em decorrncia da utilizao da vacina B19, sugere-se a confirmao por meio de testes de maior especificidade para se evitar o sacrifcio de animais no infectados. uma prova qualitativa, pois no indica o ttulo de anticorpos do soro testado. A leitura revela a presena ou a ausncia de IgG1. Nas provas clssicas de aglutinao, reagem tanto anticorpos IgM como IgG, enquanto que, nessa prova, reagem somente os isotipos da classe IgG1. O pH acidificado da mistura
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soro-antgeno inibe a aglutinao do antgeno pelas IgM. O AAT detecta com maior precocidade as infeces recentes, sendo, nesse aspecto, superior prova lenta em tubos. Teste do Anel em Leite (TAL) Foi idealizado para ser aplicado em misturas de leite de vrios animais, uma vez que a baixa concentrao celular do antgeno (4%) torna-o bastante sensvel. Empregam-se mais comumente antgenos corados com hematoxilina, que d a cor azul caracterstica reao positiva. Se existirem anticorpos no leite, eles se combinaro com as B. abortus do antgeno, formando uma malha de complexo antgeno-anticorpo que, por sua vez, ser arrastada pelos glbulos de gordura, fazendo com que se forme um anel azulado na camada de creme do leite (reao positiva). No havendo anticorpos presentes, o anel de creme ter a colorao branca, e a coluna de leite permanecer azulada (reao negativa). uma prova de grande valor no s para se detectar rebanhos infectados, como tambm para se monitorar rebanhos leiteiros livres de brucelose. Tal prova tem limitaes, pois poder apresentar resultados falso-positivos em presena de leites cidos, ou provenientes de animais portadores de mamites ou, ainda, de animais em incio de lactao (colostro). Testes Confirmatrios Teste do 2-Mercaptoetanol (2-ME) uma prova quantitativa seletiva que detecta somente a presena de IgG no soro, que a imunoglobulina indicativa de infeco crnica. Deve ser executada sempre em paralelo com a prova lenta em tubos. Baseia-se no fato de os anticorpos da classe IgM, com configurao pentamrica, degradarem-se em subunidades pela ao de compostos que contenham radicais tiol. Essas subunidades no do origem a complexos suficientemente grandes para provocar aglutinao. Desse modo, soros com predomnio de IgM apresentam reaes negativas nessa prova e
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reaes positivas na prova lenta. A interpretao dos resultados dada pela diferena entre os ttulos dos soros sem tratamento (prova lenta), frente ao soro tratado com 2-ME. Os resultados positivos na prova lenta e negativos no 2-ME devem ser interpretados como reaes inespecficas ou como devido a anticorpos residuais de vacinao com B19. Resultados positivos em ambas as provas indicam a presena de IgG, que so as aglutininas relacionadas com infeco, devendo os animais ser considerados infectados. Teste de Soroaglutinao em Tubos (SAT) Tambm chamada de prova lenta porque a leitura dos resultados feita em 48 horas , a prova sorolgica mais antiga e ainda hoje bastante empregada. utilizada em associao com o teste do 2-Mercaptoetanol para confirmar resultados positivos em provas de rotina. uma prova padronizada frente a um soro padro internacional, sendo o resultado expresso em unidades internacionais. A prova permite identificar uma alta proporo de animais infectados, porm, costuma apresentar resultados falso-negativos, no caso de infeco crnica e, em algumas situaes, podem aparecer ttulos significativos em animais no infectados por B. abortus como decorrncia de reaes cruzadas com outras bactrias. Em animais vacinados com B19 acima de 8 meses, uma proporo importante deles pode apresentar ttulos de anticorpos para essa prova por um longo tempo, ou permanentemente. Fixao de Complemento (FC) Este teste tem sido empregado em diversos pases que conseguiram erradicar a brucelose ou esto em fase de erradic-la. o teste de referncia recomendado pela Organizao Mundial de Sade Animal (OIE) para o trnsito internacional de animais. Na brucelose bovina, apesar de a FC detectar tanto IgG1 como IgM, o isotipo IgG1 muito mais efetivo como fixador do complemento.
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Animais infectados permanecem positivos por perodos mais longos e com ttulos de anticorpos fixadores de complemento mais elevados do que os detectados nas provas de aglutinao. Em animais vacinados acima de 8 meses de idade, os anticorpos que fixam complemento desaparecem mais rapidamente do que os aglutinantes. um teste trabalhoso e complexo, que exige pessoal treinado e laboratrio bem equipado.

Novos Mtodos de Diagnstico

Teste de Elisa Indireto (I-Elisa) Existem vrios protocolos de I-Elisa que tm apresentado bons resultados. Emprega-se como antgeno o lipopolissacardeo de B. abortus imobilizado em placas de 96 poos. Como conjugado, utiliza-se um anticorpo monoclonal anti-IgG1 bovina conjugado com a peroxidase. Agentes quelantes (EDTA/EGTA) so utilizados para minimizar reaes no especficas. O teste possui alta sensibilidade; entretanto, sua especificidade assemelha-se quela do AAT. Teste de Elisa Competitivo (C-Elisa) Neste teste, utiliza-se tambm como antgeno imobilizado na fase slida o lipopolissacardeo (LPS) de B. abortus. No momento da prova, o soro a testar misturado com um anticorpo monoclonal especfico contra a cadeia O de B. abortus. Um conjugado peroxidase-anti-IgG utilizado para detectar o anticorpo monoclonal ligado ao antgeno imobilizado na fase slida do teste. Quanto maior a quantidade de anticorpos anticadeia O de Brucella sp no soro testado, maior a competio com o anticorpo monoclonal especfico e menor a quantidade de cor desenvolvida. Por comparao com um controle, possvel determinar a quantidade relativa de anticorpos anti-Brucella no soro teste. um teste muito sensvel e especfico, e recomendado pela Organizao Mundial de Sade Animal (OIE) como teste confirmatrio para o diagnstico de brucelose, assim como a FC. Seu custo elevado.
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Teste de Polarizao de Fluorescncia (FPA) O antgeno utilizado no teste preparado com o polissacardeo O, tambm denominado cadeia O, de B. abortus, conjugado com o isotiocianato de fluorescena. A prova se fundamenta na comparao de velocidades dos movimentos aleatrios das molculas em soluo. O tamanho molecular o principal fator que influencia a velocidade de rotao de uma molcula, sendo inversamente proporcional a ela. Havendo anticorpos no soro, haver a formao dos complexos anticorpo-antgenoconjugado, cuja velocidade de rotao ser inferior do antgenoconjugado isolado. Determina-se a velocidade de rotao das molculas com o auxlio de um equipamento de iluminao por luz polarizada. Por meio da utilizao de controles e de soro pr-titulado, possvel calcular a quantidade de anticorpos presente no soro testado. O teste concludo em poucos minutos; pode ser realizado em soro e leite e tem-se mostrado muito promissor para o diagnstico de brucelose tambm em outras espcies.

Controle da Brucelose
O controle da brucelose apoia-se basicamente em aes de vacinao massal de fmeas e diagnstico e sacrifcio dos animais positivos. So tambm muito importantes as medidas complementares, que visam diminuir a dose de desafio caso ocorra a exposio bem como importante o controle de trnsito para os animais de reproduo. Programas de desinfeco e utilizao de piquetes de pario so iniciativas simples que trazem como resultado a diminuio da quantidade de brucelas vivas presentes no ambiente. Isso representa diminuir a dose de desafio, o que, por sua vez, significa aumentar os ndices de proteo da vacina e diminuir a chance de a bactria infectar um novo suscetvel. Com uma cobertura vacinal ao redor de 80% ou seja, quando cerca de 80% das fmeas em idade de procriar de uma
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populao estiverem vacinadas , a freqncia de animais infectados ser bastante baixa. Portanto, uma reduo importante da prevalncia pode ser obtida utilizando apenas um bom programa de vacinao. Por essa razo, a vacinao deve ser priorizada nas fases iniciais do programa, quando as prevalncias so elevadas. A eliminao das fontes de infeco, feita por meio de uma rotina de testes diagnsticos com sacrifcio dos positivos, a base das aes que visam criar propriedades livres da doena. Em resumo, inicialmente deve-se baixar a prevalncia com um bom programa de vacinao e, paulatinamente, ir aumentando as aes de diagnstico para a obteno de propriedades livres. Em regies onde a freqncia da doena muito baixa, a implantao de eficientes sistemas de vigilncia, adaptados realidade local, pode ser de grande valia na descoberta de focos de brucelose. Assim sendo, os mtodos de controle da brucelose so bastante simples. O mais importante conhecer muito bem tanto a epidemiologia da doena, quanto a populao em que as aes devero ser desenvolvidas, e escolher a melhor estratgia para implement-las.

Vacinas contra Brucelose

Desde a identificao do agente etiolgico da brucelose, vrios pesquisadores tm procurado desenvolver vacinas que sejam protetoras e que no interfiram no diagnstico da doena. Em decorrncia desses estudos, vem sendo desenvolvido um grande nmero de vacinas vivas atenuadas, mortas, de subunidades, recombinantes e de DNA. Muitas dessas vacinas mostraram-se pouco protetoras, como as vacinas mortas, ou ainda esto em fases de testes, como as vacinas de subunidades, recombinantes e de DNA. As vacinas vivas atenuadas so aquelas que efetivamente foram e ainda so utilizadas nos programas de controle da
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brucelose. Duas delas, recomendadas pela Organizao Mundial de Sade Animal (OIE), so as mais empregadas: a B19 e a vacina no indutora de anticorpos aglutinantes (amostra RB51). Ambas so boas indutoras de imunidade celular.

Vacina B19
A vacina B19 uma amostra de B. abortus lisa, que foi isolada do leite de uma vaca Jersey em 1923. Depois de acidentalmente esquecida por mais de um ano temperatura ambiente, a amostra perdeu a virulncia e desde a dcada de 1930 tem sido utilizada como vacina. Essa vacina foi empregada em vrios pases que erradicaram a doena como, por exemplo, Austrlia, Canad, Dinamarca, Inglaterra, Holanda, Sucia, entre outros. Foi tambm a vacina utilizada no programa de controle nos EUA at a primeira metade da dcada de 1990. No Brasil, a vacina obrigatria para bezerras com idade entre 3 e 8 meses. A B19 atenuada para fmeas jovens; pode, entretanto, causar orquite nos machos e provocar aborto se administrada durante a gestao. Pode ainda infectar o homem, e dar origem doena. Portanto, no se recomenda a vacinao de machos ou fmeas gestantes com a amostra B19. Durante a vacinao, devem ser adotadas certas precaues quanto proteo individual (uso de culos de proteo, luvas, etc.) e quanto ao descarte de seringas e frascos de vacinas. Por ser uma amostra lisa de B. abortus, a B19 induz a formao de anticorpos especficos contra o LPS liso e pode interferir no diagnstico sorolgico da brucelose. A persistncia desses anticorpos est relacionada com a idade de vacinao. Se as fmeas forem vacinadas com idade superior a 8 meses, h grande probabilidade de produo de anticorpos que perdurem e interfiram no diagnstico da doena aps os 24 meses de idade. Quando a vacinao ocorre at os 8 meses de idade, tais anticorpos desaparecem rapidamente, e os animais acima de 24 meses so totalmente negativos nas provas sorolgicas.
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Vacina no Indutora de Anticorpos Aglutinantes (amostra RB51)

A vacina elaborada com uma amostra de B. abortus rugosa atenuada, originada da amostra lisa virulenta 2308 que sofreu passagens sucessivas em meio contendo concentraes subinibitrias de rifampicina. Ela possui caractersticas de proteo semelhantes s da B19, porm, por ser uma amostra rugosa, no induz a formao de anticorpos anti-LPS liso e no interfere no diagnstico sorolgico da doena. Atualmente, a vacina no indutora de anticorpos aglutinantes (amostra RB51) a vacina oficial do programa de controle de brucelose dos EUA, do Mxico e do Chile. Tambm est aprovada em outros pases onde vem sendo utilizada. No Brasil, ser empregada para a vacinao estratgica de fmeas adultas. Por ser uma vacina viva, o seu manuseio exige as mesmas precaues da B19, j referidas.

Doena no Ser Humano

A brucelose humana uma doena importante, mas de difcil diagnstico porque apresenta sintomatologia inespecfica. A transmisso da doena ocorre pelo contato do agente com mucosas ou solues de continuidade da pele. O grande risco para a sade pblica decorre da ingesto de leite cru ou de produtos lcteos no submetidos a tratamento trmico (queijo fresco, iogurte, creme, etc.), oriundos de animais infectados. A carne crua com restos de tecido linftico e o sangue de animais infectados podem conter microorganismos viveis e, portanto, de igual modo representam risco para a populao humana consumidora. A brucelose uma zoonose que apresenta um forte componente de carter ocupacional: tratadores e veterinrios, por fora de suas atividades, freqentemente manipulam anexos placentrios, fluidos fetais e carcaas de animais, expondo-se ao risco de infeco quando esses materiais provm de animais
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infectados. O manuseio da vacina B19, que patognica para o homem, tambm pe em risco algumas classes de profissionais. Magarefes, trabalhadores da indstria de laticnios e donas-decasa, pelo contato com carne ou leite contaminados, so igualmente indivduos sujeitos a um maior risco de infeco. Laboratoristas, por manipularem grandes massas bacterianas na produo de vacinas e antgenos, ou mesmo na rotina de diagnstico direto, podem infectar-se por meio de solues de continuidade da pele ou pelo contato com mucosas, sobretudo a conjuntiva e a mucosa respiratria (a inalao uma eficiente forma de infeco). No ser humano, os quadros clnicos mais graves so provocados pela B. melitensis, decrescendo em gravidade quando a doena decorrente da infeco por B. suis e, assim, sucessivamente para a B. abortus e B. canis. O perodo de incubao no ser humano pode variar de uma a trs semanas at vrios meses. A doena produzida pela B. abortus agente mais difundido no nosso meio e responsvel pelo real problema da brucelose bovina no pas , na grande maioria das vezes caracterizada por sintomas inespecficos, presentes nos processos bacterianos generalizados nos quais se destacam a febre, a sudorese noturna, e as dores musculares e articulares. A enfermidade tanto pode manifestar-se de forma branda, com evoluo para a cura espontnea, quanto grave e prolongada, acompanhada por toxemia. Seu curso pode ser dividido em duas fases, sendo a febre intermitente recorrente uma caracterstica marcante. Na fase aguda prevalecem a febre, a debilidade, a cefalia, as dores musculares e articulares, a sudorese noturna intensa, os calafrios e prostrao. O quadro agudo pode evoluir para toxemia, trombocitopenia, endocardite e outras complicaes, podendo levar morte. Geralmente confundida com gripe recorrente, sendo observadas fadiga, cefalia, dores musculares e sudorese. Algumas das complicaes mais freqentes so tromboflebite, espondilite e artrite perifrica.
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Em geral, o tratamento feito pela administrao de uma associao de antibiticos por seis semanas. As drogas mais utilizadas so tetraciclinas, doxiciclina e rifampicina. Convm salientar que em caso de infeco acidental com a amostra RB51, o uso da rifampicina no indicado.

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

TUBERCULOSE BOVINA (Mycobacterium bovis)

Definio
A tuberculose causada pelo Mycobacterium bovis uma zoonose de evoluo crnica que acomete principalmente bovinos e bubalinos. Caracteriza-se pelo desenvolvimento progressivo de leses nodulares denominadas tubrculos, que podem localizar-se em qualquer rgo ou tecido. Tendo em vista ser o presente manual parte integrante do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal (PNCEBT) em bovinos e bubalinos, os conceitos emitidos a seguir sero dirigidos a essas duas espcies animais.

Etiologia
As bactrias causadoras da tuberculose pertencem famlia Mycobacteriaceae, gnero Mycobacterium. So bastonetes curtos aerbicos, imveis, no capsulados, no flagelados, apresentando aspecto granular quando corados, medindo de 0,5 a 7,0 m de comprimento por 0,3 m de largura, sendo a lcool-cidoresistncia a sua propriedade mais caracterstica. No entanto, muitas dessas caractersticas, inclusive a tintorial, superpem-se nos gneros Mycobacterium, Nocardia, Rhodococcus e Corynebacterium. Trs espcies de hospedeiros contriburam para a perpetuao da tuberculose atravs dos sculos: o bovino, o homem e as aves em geral. As micobactrias do complexo M. tuberculosis (M. tuberculosis, M. bovis e M. africanum) so as principais causadoras da tuberculose nos mamferos.
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O M. bovis tem um amplo espectro de patogenicidade para as espcies domsticas e silvestres, principalmente bovinos e bubalinos, e pode participar da etiologia da tuberculose humana. A doena humana causada pelo M. bovis tambm denominada tuberculose zoontica. O M. tuberculosis a principal causa de tuberculose no ser humano. Pode infectar bovinos, porm no causa doena progressiva nessa espcie; todavia, ocasionalmente, pode sensibiliz-los ao teste tuberculnico. O M. avium o causador da tuberculose em vrias espcies de aves e integrante do complexo MAIS (M. avium, M. intracellulare e M. scrofulaceum). As micobactrias do complexo MAIS causam leses granulomatosas nos linfonodos do trato gastrointestinal de sunos, a linfadenite granulomatosa, que leva a srias perdas no abate desses animais. No ser humano, a infeco pelas micobactrias do complexo MAIS tem importncia para os indivduos com deficincia imunolgica. As micobactrias do complexo MAIS no so patognicas para os bovinos e bubalinos; entretanto, provocam reaes inespecficas tuberculinizao, dificultando o diagnstico da tuberculose nessas espcies.

Epidemiologia Distribuio
Os pases que implantaram programas de controle da tuberculose animal ao longo do sculo passado, com bases em tuberculinizao e sacrifcio dos animais reagentes, conseguiram reduzir consideravelmente a freqncia de animais infectados. Nos dias atuais, a prevalncia da doena maior nos pases em desenvolvimento, e menor nos pases desenvolvidos, onde o controle e a erradicao encontram-se em fase avanada. Alguns pases da Europa j erradicaram a doena; outros esto na etapa final de erradicao, com prevalncias baixas. Na Amrica Latina e Caribe existem reas com prevalncia que ultrapassa 1%. No Brasil,
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dados de notificaes oficiais indicam uma prevalncia mdia nacional de 1,3% de animais reagentes tuberculina no perodo de 1989 a 1998. Em Minas Gerais, um estudo realizado pelo Instituto Mineiro de Agropecuria (IMA) em 1999, envolvendo aproximadamente 1.600 propriedades e 23.000 animais, estimou uma prevalncia de 0,85% de animais reagentes ao teste de tuberculinizao. No mesmo estudo, foram detectados 5% de propriedades com animais reagentes.

Importncia Econmica
No Brasil, no decorrer dos ltimos anos, verificou-se que o controle da tuberculose bovina no motivou os mdicos veterinrios, os criadores, as autoridades sanitrias e os consumidores de produtos de origem animal. Em parte, isso se deve ao fato de ser uma doena crnica que no apresenta sinais clnicos alarmantes aborto, febre alta, queda abrupta de produo como o caso das doenas de carter agudo. Quando, por alguma razo, o criador alertado para o problema da tuberculose e procura auxlio profissional, a prevalncia no rebanho revela-se alta, de maneira geral. A importncia econmica atribuda doena bovina est baseada nas perdas diretas resultantes da morte de animais, da queda no ganho de peso e diminuio da produo de leite, do descarte precoce e eliminao de animais de alto valor zootcnico e condenao de carcaas no abate. Estima-se que os animais infectados percam de 10% a 25% de sua eficincia produtiva. Existe ainda a perda de prestgio e credibilidade da unidade de criao onde a doena constatada.

Mecanismos de Transmisso
A mais significativa fonte de infeco para os rebanhos o bovino ou o bubalino infectados. A principal forma de introduo da tuberculose em um rebanho a aquisio de animais infectados.
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Outras espcies de animais podem assumir papel importante como reservatrio do M. bovis, em condies de introduzir ou reintroduzir a doena em rebanhos bovinos. Em pases desenvolvidos, onde a tuberculose bovina encontra-se em fase final de erradicao ou j erradicada, espcies silvestres assumem importncia como reservatrio do M. bovis para bovinos. Na Europa, verificou-se que o texugo (Meles meles) fez a tuberculose bovina ressurgir em reas de onde j havia sido erradicada. Na Nova Zelndia, um pequeno marsupial silvestre (Trichossurus vulpecula) apontado como um dos principais responsveis pela reinfeco de bovinos pelo M. bovis. Nos EUA, acredita-se que os cervdeos tenham alguma importncia como reservatrio de M. bovis para bovinos. No Brasil, certamente existem espcies silvestres suscetveis ao M. bovis, mas desconhecida a importncia desses animais como reservatrio do agente para bovinos. Eventualmente, o homem com tuberculose causada pelo M. bovis pode ser fonte de infeco para os rebanhos. Em um animal infectado, o M. bovis eliminado pelo ar expirado, pelas fezes e urina, pelo leite e outros fluidos corporais, dependendo dos rgos afetados. A eliminao do M. bovis tem incio antes do aparecimento dos sinais clnicos. A principal porta de entrada do M. bovis a via respiratria; a transmisso, em aproximadamente 90% dos casos, ocorre pela inalao de aerossis contaminados com o microorganismo. O trato digestivo tambm porta de entrada da tuberculose bovina, principalmente em bezerros alimentados com leite proveniente de vacas com mastite tuberculosa e em animais que ingerem gua ou forragens contaminadas. Nesse caso, o complexo primrio localizarse- nos rgos digestivos e linfonodos regionais. Em estbulos, ao abrigo da luz, o M. bovis tem condies de sobreviver por vrios meses. Alguns fatores podem contribuir para que a enfermidade se propague com maior eficincia. Entre eles, destacam-se de modo especial a aglomerao dos animais em estbulos e a inadequao das instalaes zootcnicas. Ambos os
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fatores podem ampliar a sobrevivncia da bactria no ambiente e propiciar o contato estreito e freqente entre os animais infectados e suscetveis. Raramente vacas com tuberculose genital transmitem a doena ao feto pela via transplacentria. Pode ocorrer transmisso sexual nos casos de epididimite e metrite tuberculosa. A infeco cutnea pode ocorrer por contato com objetos contaminados. Porm, esses trs ltimos mecanismos de transmisso so pouco freqentes. A infeco pelo M. bovis se propaga nos animais independentemente do sexo, da raa ou da idade. A introduo e a manuteno da doena em um rebanho so fortemente influenciadas por caractersticas da unidade de criao, entre as quais se destacam o tipo de explorao, o tamanho do rebanho, a densidade populacional e as prticas zootcnicas e sanitrias. Observa-se que a doena mais freqente em rebanhos leiteiros do que em rebanhos de corte. Contudo, quando bovinos de corte e bubalinos so mantidos em confinamento ou submetidos a condies naturais de aglomerao em torno de bebedouros durante a seca ou nas partes mais altas das pastagens durante as enchentes ficam submetidos s mesmas condies de risco. Constituem prticas comuns que podem introduzir a doena no rebanho tanto a alimentao de bezerros com leite de vacas tuberculosas quanto a aquisio de receptoras de embrio sem controle sanitrio.

Patogenia
Aproximadamente 90% das infeces pelo M. bovis em bovinos e bubalinos ocorrem pela via respiratria por meio da inalao de aerossis contaminados com o microorganismo. Uma vez atingido o alvolo, o bacilo capturado por macrfagos, sendo o seu destino determinado pelos seguintes fatores: virulncia do microorganismo, carga infectante e resistncia do hospedeiro.
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Na fase seguinte, caso no sejam eliminados, os bacilos multiplicarse-o dentro dos macrfagos at destru-los. Os bacilos liberados pelos macrfagos infectados sero fagocitados por outros macrfagos alveolares ou por moncitos recm-chegados da corrente circulatria, atrados pelos prprios bacilos liberados, ou por fatores quimiotticos produzidos pelo hospedeiro. A terceira fase comea quando cessa essa multiplicao, cerca de 2 a 3 semanas aps a inalao do agente infeccioso, e caracterizada por resposta imune mediada por clulas e reao de hipersensibilidade retardada. Nessa fase, em decorrncia da reao de hipersensibilidade retardada, o hospedeiro destri seus prprios tecidos por meio da necrose de caseificao para conter o crescimento intracelular das micobactrias. Com a mediao dos linfcitos T, ocorre a migrao de novas clulas de defesa, culminando com a formao dos granulomas. Tais granulomas so constitudos por uma parte central, por vezes com rea de necrose de caseificao, circundada por clulas epiteliides, clulas gigantes, linfcitos, macrfagos e uma camada perifrica de fibroblastos. Os bacilos da leso tuberculosa do parnquima pulmonar propagam-se ao linfonodo satlite, no qual desencadeiam a formao de novo granuloma, constituindo, assim, o complexo primrio. As leses pulmonares tm incio na juno bronquoloalveolar com disseminao para os alvolos e linfonodos brnquicos, podendo regredir, persistir estabilizadas ou progredir. A disseminao da infeco para outros rgos pode ocorrer precocemente durante o desenvolvimento da doena, ou numa fase tardia, provavelmente em funo de uma queda na imunidade do animal. A generalizao da infeco pode assumir duas formas: 1) miliar, quando ocorre de maneira abrupta e macia, com entrada de um grande nmero de bacilos na circulao; 2) protrada, mais comum, que se d por via linftica ou sangunea, acometendo o prprio pulmo, linfonodos, fgado, bao, bere, ossos, rins, sistema nervoso central, disseminando-se por, praticamente, todos os tecidos.
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As leses macroscpicas tm, em geral, colorao amarelada em bovinos, e ligeiramente esbranquiadas em bfalos; apresentamse na forma de ndulos de 1 a 3 cm de dimetro, ou mais, que podem ser confluentes, de aspecto purulento ou caseoso, com presena de cpsula fibrosa, podendo apresentar necrose de caseificao no centro da leso ou, ainda, calcificao nos casos mais avanados. Embora possam estar presentes em qualquer tecido do animal, as leses so encontradas com mais freqncia em linfonodos (mediastnicos, retrofarngeos, bronquiais, parotdeos, cervicais, inguinais superficiais e mesentricos), em pulmo e fgado. Sendo uma doena de evoluo muito lenta, os sinais clnicos so pouco freqentes em bovinos e bubalinos. Em estgios avanados, e dependendo da localizao das leses, os bovinos podem apresentar caquexia progressiva, hiperplasia de linfonodos superficiais e/ou profundos, dispnia, tosse, mastite e infertilidade, entre outros.

Diagnstico
O diagnstico da tuberculose bovina pode ser efetuado por mtodos diretos e indiretos. Os diretos envolvem a deteco e identificao do agente etiolgico no material biolgico. Os indiretos pesquisam uma resposta imunolgica do hospedeiro ao agente etiolgico, que pode ser humoral (produo de anticorpos circulantes) ou celular (mediada por linfcitos e macrfagos). A tuberculinizao uma medida da imunidade celular contra M. bovis por uma reao de hipersensibilidade retardada (tipo IV). A reao tuberculnica, a bacteriologia e a histopatologia so os mtodos mais utilizados para o diagnstico da tuberculose bovina e bubalina. A grande inespecificidade dos sinais clnicos, a dificuldade de isolamento do M. bovis do animal vivo e o baixo nvel de anticorpos durante o perodo inicial de infeco fazem com que os diagnsticos clnico, bacteriolgico e sorolgico tenham um valor relativo.
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O diagnstico clnico, associado tuberculinizao, possibilita a identificao de animais com tuberculose avanada, os quais geralmente apresentam um decrscimo da sensibilizao alrgica, podendo, por vezes, chegar anergia. Pode-se afirmar que existem mtodos diagnsticos adequados para o desenvolvimento de programas de controle e erradicao da tuberculose bovina; entretanto, no existe um mtodo diagnstico da tuberculose bovina que tenha uma eficcia absoluta. A prova tuberculnica, a vigilncia epidemiolgica em matadouros, os controles sanitrios, o diagnstico de laboratrio, so todos elementos bsicos que devem ser empregados com critrio e de modo adequado a cada situao epidemiolgica. Independentemente dos mtodos de diagnstico utilizados, fundamental que os animais positivos sejam abatidos, evitando-se, assim, a disseminao da tuberculose.

Diagnstico Clnico
Possui valor relativo, porque o animal pode estar infectado com um foco localizado e apresentar-se aparentemente sadio. O diagnstico clnico torna-se importante para os animais com tuberculose avanada, para os quais o teste tuberculnico perde seu valor pela possibilidade do fenmeno da anergia tuberculina. Os sinais clnicos mais freqentes so a caquexia progressiva e a tosse seca, curta e repetitiva. Animais tuberculosos, quando submetidos marcha forada, tendem a posicionar-se atrs dos demais, demonstrando cansao e baixa capacidade respiratria. Pode ocorrer linfadenomegalia localizada ou generalizada.

Diagnstico Anatomopatolgico
A inspeo de carcaa ou a necropsia detalhada constituem importantes ferramentas no diagnstico da tuberculose bovina. As leses provocadas pelo M. bovis no so patognomnicas da tuberculose bovina. Apresentam colorao amarelada em bovinos, e ligeiramente esbranquiadas em bfalos. So ndulos de 1 a 3 cm de dimetro ou mais, que podem ser confluentes, de
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aspecto purulento ou caseoso, com presena de cpsula fibrosa, podendo apresentar necrose de caseificao no centro da leso, ou, ainda, calcificao nos casos mais avanados. Em 70% a 90% dos casos, as leses encontram-se em linfonodos de cabea e trax, e 66% dos animais necropsiados apresentam apenas uma nica leso visvel. Em 95% dos casos, as leses esto localizadas em linfonodos (mediastnicos, retrofarngeos, bronquiais, parotdeos, cervicais, inguinais superficiais e mesentricos), pulmo e fgado. Com menor freqncia, podem estar presentes em intestino e tecido mamrio, ou em qualquer outro rgo ou tecido do animal. Animais reagentes ao teste tuberculnico podem no apresentar leses visveis a olho nu; isso no significa, porm, que se trata de reao falso-positiva. As leses podem estar em estgios iniciais de evoluo, ou simplesmente no terem sido encontradas pela necropsia. Fragmentos de tecido com leses sugestivas de tuberculose (ndulos caseosos em linfonodos, pulmo, fgado, etc.) podem ser enviados para exame histopatolgico em frasco de boca larga (plstico ou vidro), hermeticamente fechado, imersos em soluo de formaldedo a 10%, observando-se a proporo de uma parte de amostra para 10 de formaldedo.

Diagnstico Bacteriolgico
O diagnstico definitivo da tuberculose realizado mediante o isolamento e a identificao do agente por mtodos bacteriolgicos. Amostras frescas podem ser fixadas em lmina e coradas pelo mtodo de Ziehl-Neelsen para a pesquisa de bacilos lcool cido resistentes (BAAR), contudo, a sensibilidade do mtodo baixa, e um resultado positivo sugere fortemente tratar-se de micobactria, mas no informa a espcie. Essa mesma colorao pode ser empregada para colnias isoladas em meios de cultura. Muitas caractersticas, inclusive a propriedade tintorial, superpem-se nos gneros Mycobacterium e Nocardia, tornando difcil, em alguns casos, a diferenciao entre ambos.
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O diagnstico bacteriolgico por isolamento requer um longo perodo de incubao (30 a 90 dias), pois o M. bovis cresce lentamente em meios de cultura artificiais. Para permitir o isolamento de qualquer bactria do gnero Mycobacterium sp, recomenda-se a semeadura concomitante nos meios de cultura Lwenstein-Jensen e Stonebrink-Lesslie. As anlises bacteriolgicas completas s sero necessrias nas seguintes situaes: confirmao da presena de infeco tuberculosa em bovinos de um pas ou regio onde no foi comprovada anteriormente; estudo de animais positivos ao teste tuberculnico, nos quais no se observaram leses macroscpicas sugestivas de tuberculose. Nesses casos, a pesquisa bacteriolgica ser feita especialmente em amostras de linfonodos do trato respiratrio e intestinal; confirmao da presena de infeco em animais positivos ao teste tuberculnico, com ou sem leses macroscpicas, de uma propriedade considerada livre de tuberculose; pesquisa de micobactrias em leses sugestivas de tuberculose, encontradas durante a inspeo sanitria post-mortem de animais provenientes de unidades de criao monitoradas para tuberculose; pesquisa de micobactrias em amostras de leite e de outros produtos de origem animal; necropsias de animais com reaes inespecficas, nos quais so encontradas leses sugestivas de tuberculose.

Diagnstico Alrgico-cutneo
O diagnstico alrgico-cutneo com tuberculina o instrumento bsico para programas de controle e erradicao da tuberculose bovina em todo o mundo. Pode revelar infeces incipientes a partir de 3 a 8 semanas da exposio ao Mycobacterium, alcanando boa sensibilidade e especificidade e
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sendo considerado pela OIE como tcnica de referncia. Para que realmente funcione como ferramenta diagnstica em um programa de controle, indispensvel que o procedimento seja padronizado quanto produo das tuberculinas, equipamentos para realizao das provas, tipos de provas e critrios de leitura. Tuberculinas A tuberculina pode ser definida como um extrato obtido de filtrados de cultivos de Mycobacterium sp previamente esterilizados pelo calor, para ser utilizado com o propsito de medir a hipersensibilidade retardada causada pela infeco por micobactrias. A tuberculina preparada pela primeira vez por Robert Koch, em 1890 atualmente denominada tuberculina velha (OT-Old tuberculin). Em 1934, Seibert desenvolveu a tuberculina conhecida como PPD (Purified Protein Derivative), em que as protenas so separadas do meio de cultura por precipitao, purificadas por lavagens com cidos e fosfatos e diludas na concentrao adequada para uso. No Brasil, a prova tuberculnica realizada com o PPD bovino, produzido a partir da amostra AN5 de M. bovis, contendo 1 mg de protena por mL (32.500 UI). No teste cervical comparativo, utiliza-se tambm o PPD avirio, produzido a partir da amostra D4 de M. avium, contendo 0,5 mg de protena por mL (25.000 UI). As tuberculinas devem ser mantidas sob a temperatura de 2 a 8 C (no congelar) e tm validade de um ano aps a data de fabricao. Os frascos precisam ser protegidos da luz solar direta durante os trabalhos de campo. Uma vez aberto um frasco de tuberculina, seu contedo deve ser utilizado num nico dia, descartando-se eventuais sobras. O PPD bovino apresenta-se sob a forma lquida incolor e o PPD avirio, sob a forma lquida com colorao vermelho claro. Mecanismos da Reao Alrgica Tuberculina Alergia significa uma reao anormal e especfica do organismo aps sensibilizao por uma substncia estranha.
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A reao alrgica tuberculina ocorre de vrias maneiras: aps infeco por micobactrias, administrao parenteral de protenas micobacterianas, inoculao de micobactrias inativadas ou vacina BCG. Na prtica, a alergia tuberculnica indica que o organismo est infectado por bacilos virulentos, atenuados, inativados, vacinais ou ambientais, no significando que tenha imunidade contra a tuberculose, nem indicando o rgo ou local da infeco ou extenso das leses. A reao mediada por clulas e classificada como reao de hipersensibilidade retardada do tipo IV. Quando se injeta a tuberculina na pele de um animal normal, no ocorre nenhuma resposta significativa. Mas, ao injet-la em um animal infectado por micobactrias, portanto, sensibilizado para a tuberculina, ocorrer uma resposta de hipersensibilidade retardada com endurecimento e edema progressivo no local da inoculao, que atinge seu mximo s 72 horas, com uma variao de at 6 horas para mais ou para menos. Aps esse tempo, a reao tende a diminuir lentamente. A intensidade da reao cutnea pode ser quantificada pela mensurao do tamanho do endurecimento ou do engrossamento da pele. A reao tuberculina pode evoluir para uma necrose central, algumas vezes acompanhada por vescula e endurao caractersticas de uma hipersensibilidade intensa. Aps a inoculao, a tuberculina fagocitada e processada, e seus peptdeos so apresentados no complexo principal de histocompatibilidade (MHC) do tipo II na superfcie celular de macrfagos. A resposta especfica inicia-se quando linfcitos T sensibilizados reconhecem, ento, os antgenos tuberculnicos e secretam citocinas, entre elas o interferon gama. Algumas dessas citocinas ativam clulas endoteliais venulares que recrutam moncitos e outros leuccitos do sangue; outras convertem os moncitos em macrfagos ativados capazes de eliminar o antgeno. As clulas T envolvidas na reao de hipersensibilidade retardada so, em geral, do tipo CD4+ Th1.
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H bovinos que, embora infectados, no reagem tuberculinizao devido a uma deficincia temporria do sistema imunitrio, induzida por inoculaes sucessivas de tuberculina ou aplicao de altas concentraes do antgeno, denominada dessensibilizao. um fenmeno de curta durao e cessa quando a populao de linfcitos T restabelecida. Reaes falso-negativas tambm podem ocorrer em tuberculinizaes prximas ao parto ou em animais com alimentao deficiente. Em animais com tuberculose generalizada, ou em estgios finais da doena, h um excesso de antgeno circulante que induz uma imunossupresso especfica e, por conseqncia, uma inibio da produo de citocinas necessrias ativao de macrfagos participantes da reao de hipersensibilidade retardada. Trata-se do fenmeno de anergia referido em pginas anteriores. Equipamentos para os Testes de Tuberculinizao A qualidade da prova tuberculnica conseqncia direta da escolha dos instrumentos para realiz-la. Devem ser adotados os equipamentos desenvolvidos especificamente para essa finalidade. A seringa com dosador automtico de 0,1 mL indispensvel e pode ser acompanhada por cinto e bainha, acessrios bastante teis que permitem prescindir de auxlio para as tarefas de tricotomia e mensurao. As agulhas devem ser pequenas (3 a 4 mm) e finas (< 26 G). Seringas e agulhas precisam estar limpas e esterilizadas antes do uso. importante que agulhas e seringas estejam livres de desinfetantes e anti-spticos. Uma pequena quantidade de vaselina lquida suficiente para a lubrificao do mbolo. O cutmetro equipado com cabo facilita o manuseio do instrumento, e a mola fornece presso regular nas medidas. A ponta do cutmetro mais larga evita aprofundamento indevido, principalmente em medidas de reaes edematosas. Os locais de inoculao no bovino devem ter o plo raspado com lmina de barbear simples ou mquina de tosquiar.
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Mtodos de Turberculinizao Para o diagnstico de rotina da tuberculose bovina, a tuberculinizao um mtodo rpido, seguro e econmico e serve para pesquisar a sensibilidade dos animais s tubrculo-protenas especficas. O mtodo preconizado o intradrmico nas suas trs modalidades, ou seja, prega caudal, cervical simples e comparativo. O teste da prega caudal o mtodo de execuo mais simples e prtico e, portanto, quando h necessidade da realizao de um teste de triagem, a escolha natural. importante lembrar que, pela legislao, esse teste admitido para utilizao de rotina, exclusivamente em estabelecimentos de criao especializados na pecuria de corte. Considera-se que a sensibilidade do teste cervical simples maior do que a do teste da prega da cauda. Alm disso, menos subjetivo, pois o resultado advm da tomada de medidas com o cutmetro. O teste cervical comparativo, com PPD bovino e avirio aplicados simultaneamente, deve ser utilizado como teste confirmatrio, por sua maior especificidade em relao aos testes simples. Esse teste permite eliminar a maior causa de reaes falsopositivas, que so as infeces por micobactrias ambientais. Esse deve ser o teste de eleio para rebanhos com alta freqncia de reaes inespecficas, evitando-se os prejuzos decorrentes da eliminao de animais falso-positivos. Cuidados na Tuberculinizao de Rebanhos A realizao de testes tuberculnicos em rebanho requer os seguintes cuidados especiais: as tuberculinas precisam ser mantidas sob refrigerao (2 a 8 C), evitando-se o seu congelamento; os animais a serem tuberculinizados devero estar devidamente contidos e identificados; a inoculao intradrmica da tuberculina s perfeita quando h formao de uma ppula;
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 animais infectados h menos de 40 dias podem no responder aos testes tuberculnicos; novo teste tuberculnico s dever ser realizado aps um perodo mnimo de 60 dias; a intensidade da reao alrgica tuberculina no proporcional evoluo da doena no organismo do animal; um nico teste tuberculnico no garante ausncia de infeco; a observao cuidadosa do rebanho, de preferncia aps movimentao, pode permitir a individualizao de animais com os seguintes sintomas: tosse crnica, dificuldade respiratria, problemas digestivos e timpanismo, claudicao; sinais clnicos que podem estar presentes em animais anrgicos tuberculinizao; na anamnese de rebanhos infectados deve ser levada em considerao a possvel existncia de portadores da infeco entre os tratadores, os gatos e ces da propriedade; os animais reagentes tm que ser isolados e sacrificados ou destrudos; os funcionrios da propriedade precisam ser submetidos periodicamente a exames mdicos; em rebanho com tuberculose, as pessoas que lidam com os animais devem ser encaminhadas para exame mdico; as fmeas que estiverem no perodo compreendido entre 15 dias antes e 15 dias depois do parto, no devem ser submetidas ao teste tuberculnico, pois podem apresentarse menos reativas nesse perodo.

Novos Mtodos de Diagnstico da Tuberculose Bovina

Nos ltimos anos, os avanos da biologia molecular e a evoluo dos conhecimentos sobre a imunidade contra as micobactrias levaram ao aparecimento de novos mtodos diretos e indiretos para o diagnstico da tuberculose bovina.
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Dentro dos mtodos indiretos surgiram novos testes sorolgicos, que visam detectar alteraes dos componentes sricos na resposta infeco pelo M. bovis, e mtodos de avaliao in vitro da resposta imunolgica celular contra o M. bovis. O desenvolvimento de um mtodo para a deteco de interferon gama aps estimulao do sangue total com PPD mostrou-se muito til e especfico para detectar animais tuberculosos, e vem sendo empregado como teste complementar da tuberculinizao em alguns pases, como Austrlia e Nova Zelndia. Os mtodos diretos passaram por uma verdadeira revoluo em virtude do desenvolvimento do mtodo molecular denominado reao da polimerase em cadeia (PCR), que tem como princpio bsico a deteco de um fragmento de DNA especfico do gnero ou ento do complexo M. tuberculosis. Mtodos de biologia molecular esto sendo desenvolvidos para detectar diretamente o agente em amostras clnicas, para identificar o agente isolado pelos mtodos clssicos de bacteriologia e para avaliar a variao gentica dentro de uma espcie de micobactria. As tcnicas moleculares j encontram alguma aplicao prtica dentro dos programas de controle e erradicao da tuberculose bovina, sendo utilizadas de forma complementar aos procedimentos bacteriolgicos clssicos. Quanto aos mtodos indiretos, nenhum novo mtodo apresentou desempenho que justificasse a substituio dos testes tuberculnicos padres.

Controle da Tuberculose
O controle da tuberculose fundamenta-se no bloqueio de pontos crticos da cadeia de transmisso da doena. O primeiro passo a ser dado em uma unidade de criao conhecer a situao sanitria do rebanho. A identificao das fontes de infeco feita por meio da implementao de uma rotina de
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testes tuberculnicos com abate dos animais reagentes. O exame clnico pode ser til nos casos de anergia. Na compra de animais, antes da introduo no rebanho, deve-se test-los na origem e test-los de novo logo aps a entrada no quarentenrio da unidade de criao, respeitando-se o intervalo mnimo de 60 dias entre os testes. Adotar como regra a aquisio de animais de propriedades livres da doena. O risco de infeco menor em rebanhos fechados. importante que a sade dos trabalhadores da propriedade seja rotineiramente monitorada. Aes sobre possveis reservatrios domsticos, sinantrpicos ou silvestres devem ser consideradas. Instalaes adequadas, que permitem boa ventilao e exposio direta luz solar, contribuem para prevenir a contaminao do ambiente. Recomenda-se higienizar e desinfetar periodicamente todas as instalaes, especialmente os bebedouros e os cochos (hipoclorito de sdio 5%, fenol 5%, formaldedo 3%, cresol 5%). Deve-se abolir a utilizao do leite de vacas reagentes para qualquer finalidade, e em quaisquer circunstncias. Constituem medidas importantes o monitoramento dos rebanhos pela deteco de leses tuberculosas realizado pelo servio de inspeo de carcaas quando do abate dos animais , e o controle de trnsito e de participao em exposies, feiras e leiles. A inspeo sanitria dos produtos de origem animal destinados ao consumo humano e a pasteurizao ou esterilizao do leite e derivados diminuem os riscos de transmisso do M. bovis ao homem. Apesar de diversos estudos sobre vacinao e tratamento da tuberculose bovina, at o presente, os resultados obtidos no justificam a adoo dessas medidas como forma de controle da enfermidade. Alm disso, em pases que alcanaram grande sucesso com programas implementados para o combate tuberculose bovina, essas prticas no foram utilizadas; e, portanto, no esto contempladas na estratgia de ao do PNCEBT.
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Tuberculose Humana de Origem Bovina

Bovinos infectados podem ser responsveis por parte dos casos de tuberculose humana causada pelo M. bovis, principalmente em reas de alta prevalncia de infeco e onde no existe controle sanitrio dos produtos de origem animal. O homem adquire a doena por meio da ingesto de leite e derivados crus oriundos de vacas infectadas. O risco maior para crianas, idosos e pessoas com deficincia imunolgica, nas quais ocorrem principalmente as formas extrapulmonares. Os tratadores de rebanhos infectados e os trabalhadores da indstria de carnes constituem os grupos ocupacionais mais expostos doena. Nesses grupos, a principal forma clnica observada a pulmonar. A incidncia da tuberculose humana de origem animal tem diminudo nos pases onde existem campanhas de combate tuberculose bovina e a pasteurizao do leite obrigatria. Atualmente, nos pases anglo-saxnicos, a incidncia da infeco humana por M. bovis baixa e limitada a um grupo de idade mais avanada. Na Gr-Bretanha, apesar da reduo da infeco humana por cepas bovinas, a tuberculose dessa origem continua ocorrendo. Convm observar que, no ser humano, o exame clnico e a baciloscopia do escarro no permitem a diferenciao entre a infeco pelo M. bovis e M. tuberculosis. Essa distino s possvel pelo isolamento e pela identificao do agente.

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

PROPRIEDADES DOS TESTES DE DIAGNSTICO E IMPLICAES NO DELINEAMENTO DE ESTRATGIAS SANITRIAS

O Caso dos Programas de Controle da Brucelose e da Tuberculose

Os planos de combate tuberculose e brucelose envolvem aes de profilaxia sanitria que dependem da utilizao de testes para diagnstico indireto. Entre elas destacam-se: deteco de rebanhos infectados mediante realizao de testes peridicos; saneamento de rebanhos infectados, com a realizao de testes sistemticos e sacrifcio dos animais reagentes; proteo de rebanhos no infectados, comprovando a condio sanitria de animais que ingressam no plantel indene, por meio de testes de diagnstico realizados na origem e durante a quarentena no destino; comprovao da condio de rebanho ou de zona livre, mediante a realizao de testes peridicos. Assim, o controle e a erradicao dessas doenas dependem em grande medida da correta utilizao e interpretao de testes diagnsticos. Como esses testes nunca so perfeitos, torna-se necessrio avaliar a probabilidade de acerto do diagnstico. O desempenho de um teste pode ser avaliado por caractersticas intrnsecas, como sensibilidade e especificidade, e por caractersticas extrnsecas, como os valores preditivos positivo e negativo.

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O quadro abaixo mostra um exemplo hipottico de aplicao de um teste diagnstico. INFECO Infectado No Infectado TESTE Positivo (+) Negativo () Total 45 (a) 5 (c) 50 38 (b) 912 (d) 950

Total 83 917 1000 (N)

Sensibilidade (SEN) a probabilidade de um animal infectado ser classificado como positivo pelo teste de diagnstico. Testes de baixa sensibilidade resultam em maior nmero de animais falsonegativos. Considerando o exemplo que se apresenta no quadro acima, teramos SEN = [a/(a+c)] = 45/50 = 0,90 ou 90%, ou seja, a cada 100 animais infectados, o teste classificaria 90 como positivos e 10 como negativos (falso-negativos). Especificidade (ESP) a probabilidade de um animal no infectado ter resultado negativo no teste de diagnstico. Testes de baixa especificidade resultam em maior nmero de falso-positivos. Nesse caso, teramos ESP = [d/(b+d)] = 912/950 = 0,96 ou 96%, isto , a cada 100 animais no infectados, o teste classificaria 96 como negativos e 4 como positivos (falso-positivos). Nos testes indiretos quantitativos, existe sempre um ponto de corte, ou seja, um determinado ttulo de anticorpos (na brucelose) ou um aumento da espessura da dobra da pele na reao cutnea de hipersensibilidade retardada (na tuberculose), a partir do qual o teste considerado positivo. Os valores de SEN e ESP de um determinado teste dependem do ponto de corte e esto inversamente relacionados. Se o ponto de corte do teste diagnstico for modificado para aumentar a sensibilidade, a especificidade diminuir. De maneira inversa, se o ponto de corte do teste diagnstico for modificado para elevar a especificidade, haver perda de sensibilidade. Em situaes reais, o verdadeiro estado sanitrio do animal (isto , infectado ou no) no conhecido; conhecido apenas o
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resultado do teste. Por essa razo, importante saber a proporo de animais com resultado positivo que realmente esto infectados valor preditivo positivo (VPP) e a proporo de animais com resultado negativo que no esto infectados, valor preditivo negativo (VPN). Nesse caso, teramos VPP = [a/(a+b)] = 45/83 = 0,54 = 54%, ou seja, a cada 100 animais positivos no teste, 54 esto realmente infectados. Estes valores so indicativos da confiana que temos de que um resultado negativo corresponde a um animal no infectado (VPN) e de que um resultado positivo de um animal infectado (VPP). O VPN seria igual a [d/(c+d)] = 912/917 = 0,995 ou 99,5%, o que significa que 99,5% dos animais negativos no esto infectados. Os valores preditivos so determinados pelos valores de SEN e ESP do teste utilizado e pela prevalncia da doena na populao submetida ao diagnstico, ou seja, variam em funo da situao epidemiolgica, como ilustra o exemplo da Figura 1.
Figura 1 Efeito da variao de prevalncia (PREV), entre 1% e 100%, sobre os valores preditivos positivo (VPP) e negativo (VPN) de um teste de diagnstico com sensibilidade (SEN) de 80% e especificidade (ESP) de 99%

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Quando a prevalncia da enfermidade inferior a 10%, o VPN de um teste de sensibilidade apenas moderada (80%) muito alto e tende a aumentar medida que a prevalncia da doena diminui. O VPP segue trajetria inversa, sendo muito baixo quando a prevalncia inferior a 10%, diminuindo ainda mais medida que a prevalncia da doena tambm diminui. Em conseqncia, num programa de erradicao baseado em teste e sacrifcio de animais, a proporo de animais com reaes falso-positivas que so sacrificados aumenta medida que a campanha avana e a prevalncia da enfermidade diminui. Portanto, quando a prevalncia da doena diminui, cresce a necessidade de diminuir a proporo de reaes falso-positivas, o que conseguido por meio de ganhos em especificidade dos mtodos diagnsticos. A interao da especificidade do teste com a prevalncia da doena na determinao do VPP ilustrada na Figura 2.
Figura 2 Efeito de diferentes valores de especificidade (ESP), entre 80,0% e 99,9%, sobre o valor preditivo positivo (VPP) de vrios testes diagnsticos, assumindo que todos teriam sensibilidade (SEN) de 80%, para valores de prevalncia (PREV) entre 1% e 100%

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A proporo de falso-positivos bastante influenciada pela especificidade do teste utilizado, qualquer que seja a prevalncia da doena (Figura 2). Para valores de prevalncia muito baixos, mesmo um teste de boa especificidade (99%) resulta em alta proporo de falso-positivos. Assim sendo, quando o diagnstico feito em populaes de baixa prevalncia, deve ser utilizado um teste de especificidade prxima a 100%. Se no houver um nico teste com essa caracterstica, podero ser empregados dois testes em seqncia; o primeiro teste, ou de triagem, serve para detectar animais reagentes, os quais so submetidos a novo teste para diagnstico confirmatrio. O teste de triagem precisa ter boa sensibilidade, ser barato e de fcil execuo. O teste confirmatrio deve ter especificidade muito alta e tambm boa sensibilidade. A realizao de testes em seqncia, quando se faz o teste confirmatrio nos indivduos reagentes ao teste de triagem, aumenta a especificidade do procedimento diagnstico e diminui o nmero de falso-positivos. Com esse objetivo, no controle da brucelose, utiliza-se o teste do Antgeno Acidificado Tamponado como teste de triagem, seguido de teste confirmatrio (2-Mercaptoetanol ou Fixao de Complemento) nos animais reagentes. No controle da tuberculose, o Teste na Prega Ano-caudal, com PPD bovina, pode ser utilizado para triagem, seguido de Tuberculinizao Comparativa, com PPD bovino e avirio, nos animais reagentes. Uma vez confirmada a condio de foco de um rebanho, necessrio eliminar todos os animais infectados. A experincia mostra que esse processo mais difcil em rebanhos grandes do que em rebanhos pequenos, dado que, quanto maior for o nmero de animais infectados, maior ser o risco de no detectar todos eles com apenas um teste. Por exemplo: com uma SEN individual de 95% (muito boa), esse risco ser de 5% se houver apenas um animal infectado; de 10% se houver dois animais infectados e de 40% se houver 10 animais infectados. Tal evidncia fundamentou a deciso de alguns pases, como os EUA, de sacrificar todos os
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animais quando uma grande parte do rebanho estivesse infectada. Uma alternativa menos radical consiste em realizar testes sistemticos em todo o rebanho, com intervalos peridicos, at que no exista mais nenhum animal positivo. O saneamento ser mais rpido e eficaz se forem utilizados testes de boa sensibilidade, repetidos ao longo do tempo. Em programas de erradicao da tuberculose bovina, quando a prevalncia da enfermidade e o VPP so muito baixos, a vigilncia epidemiolgica em locais de abate assume papel mais importante do que o teste sistemtico de animais na propriedade. Em alguns pases que atingiram prevalncia muito baixa (EUA, Austrlia e Uruguai), a vigilncia nos matadouros foi o principal meio de deteco de novos casos de tuberculose. Quando se descobre um caso de tuberculose na inspeo de carnes, o servio de defesa sanitria animal realiza uma investigao na propriedade de origem do animal afetado. Trata-se de uma estratgia que tem sido bem sucedida. Todavia, alguns aspectos devem ser realados: 1) quando a prevalncia baixa, o VPP da inspeo visual igualmente baixo (muitas leses no so tuberculosas) e, portanto, as leses devem ser enviadas para exame histopatolgico e/ou microbiolgico; 2) a SEN da inspeo de rotina baixa (de acordo com alguns autores, varia entre 33% e 67%), uma vez que muitos animais tm apenas uma nica leso, de difcil deteco; 3) a vigilncia epidemiolgica em matadouros s pode substituir o teste de tuberculinizao sistemtica quando todos os animais da populao sob vigilncia so abatidos em estabelecimentos com inspeo veterinria.

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Concluso
O combate s doenas dos animais exige que os veterinrios que dele participam saibam interpretar os resultados dos testes de triagem e/ou confirmatrios, em funo do contexto epidemiolgico e dos objetivos do diagnstico. No existem testes perfeitos, e o diagnstico ter sempre uma margem de erro. O bom conhecimento das propriedades dos testes permite aumentar a probabilidade de acerto e melhorar a eficcia das aes sanitrias. No existem receitas aplicveis a qualquer situao nem testes infalveis; existem, sim, princpios epidemiolgicos que no s devem ser compreendidos, como tambm adaptados a situaes diversas.

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

COLHEITA DE MATERIAL PARA EXAME LABORATORIAL

Convm salientar que manipular materiais infectados, ou potencialmente infectados, com Brucella sp. e M. bovis perigoso, exigindo cuidados especiais, uma vez que a sua manipulao uma das importantes formas de transmisso da brucelose e tuberculose ao ser humano. Equipamentos de proteo individual, como culos de segurana, aventais de manga longa, luvas descartveis e mscaras com filtros P-2 ou P-3, devem ser usados ao manipular material suspeito de conter Brucella abortus ou Mycobacterium bovis. imprescindvel que todo material a ser colhido seja devidamente identificado e acondicionado, devendo ser conduzido ao laboratrio acompanhado de uma ficha completa contendo o histrico do caso e o maior nmero possvel de informaes referentes a ele. Sero empregados recipientes resistentes e prova de vazamentos. O material utilizado na colheita deve ser desinfectado ou destrudo.

Exame Direto (bacteriolgico)

O sucesso no cultivo bacteriolgico de amostras de campo depende de uma srie de fatores. A forma de colheita, o tipo de pea anatmica, a quantidade de material colhido, o acondicionamento, o transporte, o tempo aps colheita e o tempo de estocagem constituem alguns dos fatores que interferem significativamente no resultado do diagnstico laboratorial. Os materiais devem ser resfriados imediatamente aps a colheita ou congelados, se demorarem mais de 12 horas em trnsito. Ao chegar
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ao laboratrio, devem ser congelados ou mantidos congelados se no forem processados logo em seguida. Os materiais precisam ser acondicionados em frascos ou em sacos plsticos prova de vazamentos e de tamanho apropriado, de modo a evitar excesso de ar, o que prejudica a refrigerao. Em lugar de frascos rgidos, devem ser preferidos sacos plsticos estreis do tipo whirl-pak, que se adaptam ao tamanho e forma dos rgos coletados. As peas (fragmentos de linfonodos ou rgos) podem ser encaminhadas dentro de frascos de boca larga no estreis; que devem, porm, estar limpos e secos, sem resduos (por exemplo: sangue, fezes e outros), no ultrapassando mais da metade do recipiente de envase. As amostras, dentro dos recipientes, devem ser acondicionadas em sacos de polietileno (plsticos) transparentes e resistentes. Amostras de animais diferentes devero ser acondicionadas em separado e devidamente identificadas. Podem ser utilizados frascos coletores universais.

Tuberculose
Em geral, as amostras de origem animal remetidas ao laboratrio para diagnstico de tuberculose so linfonodos ou partes de rgos/tecidos procedentes de matadouro sob inspeo sanitria. So tambm provenientes de necropsias realizadas no estabelecimento de criao por um mdico veterinrio. Para avaliar melhor as leses dos rgos e/ou dos tecidos, devem ser efetuados cortes durante a inspeo ou necropsia. Devem ser colhidos preferencialmente linfonodos do trato respiratrio: mediastinais (anteriores, posteriores e ventrais), bronquiais (esquerdo, direito, dorsal ou mdio) e pulmonares. Observar a pleura e o tecido pulmonar por palpao, a fim de constatar reas com leses nodulares. Observar presena de leses tuberculosas nos linfonodos mesentricos e leses hepticas. Deve-se inspecionar ainda os linfonodos da cabea e os cervicais.
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De preferncia, colher os fragmentos logo aps a morte do animal. Retirar somente a leso de aspecto caseoso, evitando resduos como, por exemplo, sangue e outros lquidos. importante colher parte do tecido lesado e parte do tecido normal de uma mesma pea, perfazendo um total de at 200 gramas. Enviar tambm parte do material em soluo de formol a 10% para exames histopatolgicos.

Brucelose
O material ideal para o isolamento de Brucella sp o proveniente do aborto. Entre os materiais de eleio destacam-se: Feto e anexos fetais O feto pode ser enviado inteiro, acondicionado em sacos plsticos duplos prova de vazamentos. Se for mediante necropsia efetuada no prprio estabelecimento, colhe-se lquido do abomaso, pulmo, linfonodo bronquial, bao, fgado e suabe retal. No caso de membranas fetais, escolher aqueles cotildones que apresentem aspecto anormal, com perda da cor e do brilho caracterstico; eles devero ser cuidadosamente manipulados (usar luvas e mscaras especiais com pelo menos 95% de eficincia) em funo da alta concentrao de bactrias presentes. Exsudato vaginal A eliminao de B. abortus pode durar vrias semanas aps o parto ou o aborto. O exsudato vaginal deve ser colhido mediante o uso de suabes especiais ou pipetas de inseminao. Existem suabes comerciais com meio de transporte que mantm as bactrias viveis por perodos mais prolongados. Leite Antes da colheita, o bere precisa ser cuidadosamente lavado e feita tambm a assepsia dos tetos. Colher em frascos esterilizados
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cerca de 20 mL de leite de cada teto, desprezando-se os primeiros jatos. Enviar o quanto antes ao laboratrio sob refrigerao (2 a 8C) ou congelado (-20C), caso permanea mais de 12 horas em trnsito at o laboratrio, para evitar a proliferao de contaminantes. Colher primeiro dos tetos que esto afastados do operador. Fazer a assepsia das mos antes de realizar a colheita em outro animal. Animais necropsiados ou colheita em matadouro Os materiais de escolha so aqueles do sistema retculoendotelial. Os linfonodos mais importantes so os supramamrios, os parotdeos, os retrofarngeos, os ilacos internos e os prescapulares. Alm deles, o bao, os cotildones, o tero e o bere so tambm importantes nas fmeas. Nos machos, alm dos linfonodos citados e do bao, so tambm importantes os testculos, a prstata, os epiddimos e as vesculas seminais.

Exame Histopatolgico
Para o exame histopatolgico, podem ser remetidas amostras dos mesmos linfonodos ou rgos indicados na colheita para diagnstico de brucelose ou tuberculose, com ou sem leso macroscpica. Fragmentos em torno de 0,5 cm x 1,0 cm x 1,0 cm devem ser fixados em um volume 50 vezes maior de formol a 10% e enviados ao laboratrio temperatura ambiente. Esse material no deve ser congelado ou resfriado.

Exame Indireto (sorolgico) Sangue

A colheita de sangue para a obteno de soro com o qual sero realizados os testes para o diagnstico da brucelose, alm de ser mais simples, oferece menos risco de contgio ao profissional, se comparada com a colheita de material para o exame bacteriolgico.
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O material preferencialmente utilizado para colher a amostra deve ser constitudo de tubos que contm vcuo (sem anticoagulante) e siliconizados, que facilitam a retrao do cogulo, com agulhas individuais e descartveis. Tubos e agulhas convencionais podem tambm ser utilizados; apresentam, porm, o inconveniente de necessitar de limpeza, de preparao e distribuio, alm de acrescentarem risco biolgico na manipulao. As tarefas da colheita exigem o cumprimento de algumas normas, que podem ser assim resumidas: a amostra de sangue colhida deve cobrir no mnimo 50% da capacidade de um tubo de 10 mL; para se obter um bom soro, os tubos com sangue devem ser mantidos temperatura ambiente por, no mnimo, 2 ou 3 horas, ao abrigo da luz, at que ocorra a coagulao sangnea. Aps a separao do cogulo, transferir o soro para um frasco limpo e seco. No usar frascos ou tubos midos, porque podem hemolisar o sangue; os frascos contendo o soro devero ser enviados o quanto antes ao laboratrio e em horrio de recepo previamente estabelecido; evita-se, assim, a deteriorao do material. Caso sejam enviados ao laboratrio em algumas horas, devero ser refrigerados, ou congelados; os tubos sero identificados de tal forma que o nmero corresponda ao especificado na folha de campo; nas folhas de campo constaro somente os dados estritamente necessrios, tais como nome do proprietrio, nmero de animais na propriedade, nmero total de amostras colhidas, espcie, sexo, situao relativa vacinao (data da vacinao), e outros dados considerados de interesse diagnstico.

Leite (para o Teste do Anel em Leite)

A correta colheita da amostra fundamental para a obteno de resultados confiveis. As amostras para a realizao desse teste devem ser colhidas de mistura de leite em lato, no mximo de
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trs lates, ou em tanque, no mximo de um. Misturar o leite para que o creme no se separe e esteja bem homogneo. Colher o leite utilizando como conservante o formol a 1%, ou o cloreto de mercrio a 2%, na proporo de 1 mL de conservante para cada 10 mL de leite. O leite deve ser refrigerado e enviado ao laboratrio. A prova pode ser influenciada pelos seguintes fatores: amostra de leite mal homogeneizada, contendo excesso ou falta de gordura; agitao excessiva; aquecimento excessivo. Acima de 45C e durante cinco minutos, h uma queda acentuada de anticorpos; excessivo tempo e temperatura de armazenamento. Amostras armazenadas a 4C, durante at duas semanas, podem ser usadas para o teste, j que no se produzem perdas nos ttulos de anticorpos, sucedendo o contrrio com o aumento de temperatura. A prova pode apresentar resultados falso-positivos nas seguintes situaes: utilizao de leite fresco, ou seja, quando o teste realizado no mesmo dia da colheita. Em geral, essa situao desaparece depois da refrigerao do leite; alterao do leite como conseqncia de mamites que do origem presena de protenas, clulas e bactrias no habituais, que dificultam a leitura da prova; presena de colostro. A agitao suave do leite no recipiente de colheita imprescindvel para uma boa homogeneizao da gordura.

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Identificao e Encaminhamento do Material de Necropsia

Aps o acondicionamento do material no recipiente de envase, deve-se identific-lo com uma etiqueta (ver modelo de Etiqueta 1) e acomod-lo em um saco plstico, evitando o contato direto da etiqueta com o material refrigerante (o que poderia danific-la, tornando impossvel a identificao). Uma vez acondicionada e identificada, a amostra dever ser remetida ao laboratrio o mais rpido possvel e em recipiente isotrmico (isopor) com gelo (preferencialmente os reciclveis). Na parte externa do recipiente isotrmico afixar o endereo do laboratrio (ver modelo de Etiqueta 2). Caso no seja possvel o envio imediato, a amostra poder ser congelada e encaminhada posteriormente.
Modelo de Etiqueta 1 Identicao do material de necropsia

A etiqueta dever ser elaborada pelo prprio responsvel pela colheita, contendo os dados do modelo abaixo: Origem: SIF: Lacre: Material enviado: Responsvel pela colheita:
MAPA/Manual do PNCEBT /2005

Data da colheita

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Modelo de Etiqueta 2 Endereo do laboratrio

(Nome do laboratrio ao qual est sendo enviado o material) Endereo: Municpio: CEP: Telefone: ( ) E-mail:
MAPA/Manual do PNCEBT /2005

UF:

Fax: ( )

Preenchimento do Formulrio de Encaminhamento de Amostras para Diagnstico

Os formulrios (ver modelos de Formulrios 1 e 2) devero ser corretamente preenchidos e encaminhados juntamente com as amostras. ESSES FORMULRIOS NO DEVERO SER ACONDICIONADOS NO INTERIOR DO RECIPIENTE ISOTRMICO EM QUE SE ENCONTRA A AMOSTRA.

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Modelo de Formulrio 1 Encaminhamento de amostras para diagnstico de brucelose

ESPAO RESERVADO PARA O LABORATRIO

Condio na recepo: ( ) Congelada ( ) Satisfatria I - DADOS DO REMETENTE 1. Local: 2. Registro: 3. Endereo: Rua, Av.: Complemento: Municpio: Telefone: E-mail: II - DADOS DA AMOSTRA

( ) Resfriada Data do recebimento: ( ) Insatisfatria Recebido por:

(este campo destina-se a peas originrias de matadouros sob Inspeo Federal, Estadual ou Municipal)

n Bairro: UF: Fax: CEP:

1. Origem do animal (propriedade, proprietrio, localizao, Municpio, Estado): 2. Espcie animal: 3. Raa: 4. Animal vacinado: ( ) Sim Sexo: Idade: / /

Data:

( ) No ( ) No se sabe 5. Abortos na propriedade: ( ) Sim ( ) No 6. Testes sorolgicos: ( ) Sim Quando: / / ( ) No ( ) No se sabe 7. Resultado da sorologia: 8. Histrico: 9. Destino da carcaa: ( ) condenao total 10. 11. 12. 13.

( ) No se sabe Quais:

( ) condenao parcial

( ) destruio na propriedade Pea(s) anatmica(s) enviada(s) ao laboratrio: N Lacre: Responsvel pela colheita: Data da colheita: / /

CRMV:

14. Encaminhamento ao laboratrio: ( ) Congelada ( ) Resfriada Obs:

MAPA/Manual do PNCEBT /2005

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Modelo Formulrio 2 Encaminhamento de amostras para diagnstico de tuberculose

ESPAO RESERVADO PARA O LABORATRIO

Condio na recepo: ( ) Congelada ( ) Satisfatria I - DADOS DO REMETENTE 1. Local: 2. Registro: 3. Endereo: Rua, Av.: Complemento: Municpio: Telefone: E-mail:

( ) Resfriada Data do recebimento: ( ) Insatisfatria Recebido por:

(este campo destina-se a peas originrias de matadouros sob Inspeo Federal, Estadual ou Municipal)

UF: Fax:

n Bairro: CEP:

II - DADOS DA AMOSTRA 1. Origem do animal (propriedade, proprietrio, localizao, Municpio, Estado): 2. Espcie animal: Sexo: 3. Raa: Idade: 4. Animal tuberculinizado: ( ) Sim Data: / ( ) No ( ) No se sabe 5. O animal foi: ( ) Sacrificado Data: ( ) Encontrado morto Data: ( ) Abatido (matadouro) Data: 6. Outras mortes ou casos na propriedade: ( ) Sim ( ) No

Resultado*: (B A): Interpretao: Obs: B: mm A: / / / / / / Mesma espcie animal?

mm mm

7. Histrico: 8. Destino da carcaa: ( ) condenao total ( ) condenao parcial ( ) destruio na propriedade 9. Pea(s) anatmica(s) enviada(s) ao laboratrio: 10. N Lacre: 11. Responsvel pela colheita: CRMV: 12. Data da colheita: / / 13. Encaminhamento ao laboratrio: ( ) Congelada ( ) Resfriada Obs:

MAPA/Manual do PNCEBT /2005 B: diferena em mm aps 72 horas da inoculao da PPD bovina A: diferena em mm aps 72 horas da inoculao da PPD aviria

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

PROTOCOLO PARA DIAGNSTICO DA BRUCELOSE

Diagnstico Sorolgico
O diagnstico sorolgico da brucelose bovina e bubalina ser feito por mdico veterinrio habilitado, bem como por laboratrios credenciados.

Antgenos
Devero ser utilizados somente aqueles aprovados e controlados pelo MAPA. Os antgenos devero ser transportados e conservados em temperatura de, no mnimo, +2C e de, no mximo, +8C, bem como protegidos da luz solar direta.

Identificao dos Animais

Os animais sero identificados individualmente, quer por tatuagem, quer por outra forma, inclusive pelo Registro Genealgico; podero tambm ser identificados pelo mtodo definido para o programa de rastreabilidade do MAPA.

Testes
Teste do Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) Material Antgeno para AAT Soros a testar Pipetas de Bang Micropipetador de 30 L ou de volume ajustvel Ponteiras Placas com quadrados de 4 cm delimitados
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 Misturadores de plstico ou de metal Caixa com luz indireta para leitura Soro controle positivo Soro controle negativo Agitador de placas (opcional) Precaues na execuo do teste 1) O antgeno, quando no estiver em uso, precisa permanecer sempre entre 2C e 8C. Em caso de sua utilizao para realizar um pequeno nmero de testes, dividi-lo em alquotas e retirar da geladeira apenas a quantidade a ser utilizada a cada dia, evitando, assim, a perda de sensibilidade pelo constante resfriamento/aquecimento do antgeno. 2) A temperatura de execuo desejvel ser em torno de 22C 4C, devendo-se evitar temperaturas muito abaixo ou muito acima desse valor. 3) As placas, os misturadores e as pipetas devem ser limpos com gua corrente logo aps o uso. Imergi-los em uma soluo de detergente neutro por duas horas ou, de preferncia, durante a noite. Em seguida, lav-los em gua corrente e, na seqncia, em gua destilada. Secar em estufa ou temperatura ambiente. 4) Antes de utilizar os misturadores nos prximos soros a serem testados, limp-los em gua destilada e enxug-los em papel toalha. 5) Soros excessivamente hemolisados devem ser desprezados, porque podem apresentar resultados falso-positivos. 6) Em todos os testes devem ser simultaneamente testados soros controle positivo e negativo. Tcnica 1) Equilibrar os soros e o antgeno temperatura ambiente, por, pelo menos, 30 minutos. Caso os soros estejam congelados, o perodo de equilbrio temperatura ambiente deve ser maior. Homogeneizar os soros antes de realizar a prova.
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2) Preencher os protocolos de prova, identificando a localizao de cada soro. 3) Ao utilizar o micropipetador de 30 L ou a pipeta de Bang dotada de uma pra de borracha, ou outro dispositivo de pipetagem que evite o uso da boca, dispensar 30 L (ou da marca de 0,04 at 0,01 na pipeta de Bang) de soro por rea da placa; depositar essa quantidade sobre a placa de vidro, encostando nela a ponta da pipeta em ngulo de 45. 4) Agitar suavemente o antgeno e colocar uma gota (30 L) ao lado do soro, sem ser nele misturado. 5) Misturar, por meio de misturador simples ou mltiplo, o soro e o antgeno com movimentos circulares, de modo a obter um crculo aproximado de 2 cm. 6) Agitar a placa com movimentos oscilatrios, numa freqncia de, aproximadamente, 30 movimentos por minuto, de modo a permitir que a mistura soro-antgeno flua lentamente dentro de cada crculo; a placa deve ser agitada continuamente por 4 minutos. 7) Colocar a placa na caixa de leitura com luz indireta e realizar a leitura. 8) Anotar os resultados. 9) Desconsiderar as reaes de aglutinao que ocorrerem aps os 4 minutos. Interpretao dos resultados Presena de grumos REAGENTE Ausncia de grumos NO REAGENTE Teste do Anel em Leite (TAL) Material Antgeno para TAL Amostras do leite a ser testado Tubos de 10 mm x 75 mm ou 10 mm x 100 mm Grade para tubos
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 Pipetas de 1 mL Micropipetador calibrado para 30 L Estufa ou banho-maria a 37C Precaues na execuo do teste 1) As amostras para realizar o teste devem ser colhidas de mistura de leite em lato, no mximo de trs lates por amostra, ou em tanque, sendo no mximo um tanque por amostra. Antes de colher a amostra, homogeneizar suavemente o leite. Colher o leite utilizando como conservante o formol a 1%, ou o cloreto de mercrio a 2%, na proporo de 1 mL de conservante para cada 10 mL de leite. O leite deve ser refrigerado e enviado ao laboratrio. As amostras podem ser mantidas entre 2C e 8C por at duas semanas. 2) As amostras de leite devem ser mantidas entre 2C e 8C por, pelo menos, 24 horas antes da realizao do TAL. 3) Uma amostragem incorreta poder levar a contedo com excesso ou com insuficincia de creme, o que ir interferir na realizao do TAL. 4) A agitao excessiva da amostra quebra os glbulos de gordura e interfere na formao da camada de creme na superfcie do leite. 5) O aquecimento do leite acima de 45C diminui a quantidade de anticorpos anti-Brucella sp presentes na amostra. 6) O congelamento ou a pasteurizao da amostra podem ocasionar resultados falso-negativos, portanto, tais amostras no devem ser utilizadas no TAL. 7) Leite cido, leite recentemente colhido, leite contendo colostro, leite de vacas no perodo de secagem e leite de vacas com mamite podem apresentar resultados falso-positivos. 8) O tamanho do rebanho pode influenciar no resultado do teste quando o leite colhido de lates. Para tanto, e em funo do tamanho do rebanho, deve-se aumentar a quantidade de leite a ser utilizada no TAL, mantendo-se constante o volume do antgeno
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(30 L). Para rebanhos com at 150 vacas em lactao, utiliza-se 1 mL de leite. Para rebanhos com 151 a 450 vacas em lactao, utilizam-se 2 mL de leite. Nos rebanhos com 451 a 700 vacas em lactao, utilizam-se 3 mL de leite. Rebanhos com mais de 700 vacas em lactao devem ser divididos em lotes menores para a realizao do TAL. 9) Em todos os testes devem ser simultaneamente testadas amostras de leite controle positivo e negativo. Tcnica 1) Equilibrar as amostras de leite e o antgeno temperatura ambiente por, pelo menos, 60 minutos. 2) Misturar bem as amostras de leite. 3) Colocar 1 mL de leite em tubos 10 mm x 100 mm. A coluna de leite deve ter, no mnimo, 2 cm. Obs.: Em funo do tamanho do rebanho, a quantidade de leite a ser utilizada no teste (empregando-se a mesma quantidade de antgeno, 30 L) deve ser aumentada para 2 mL ou 3 mL, conforme as recomendaes do item 8 das Precaues na execuo do teste. 4) Adicionar ao leite uma gota (30 L) de antgeno. 5) Tampar o tubo e misturar por inverso vrias vezes. 6) Deixar em repouso por 1 minuto e verificar se a mistura est homognea. No deve sobrar antgeno nas paredes do tubo. 7) Incubar por 1 hora a 37C. 8) Proceder leitura. 9) Anotar os resultados. Interpretao dos resultados Anel de creme azul e coluna de leite branca ou azulada: REAGENTE Anel de creme branco e coluna de leite azul: NO REAGENTE
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Teste do 2-Mercaptoetanol (2-ME) Material Antgeno para a soroaglutinao lenta em tubo 2-Mercaptoetanol Salina 0,85% Salina 0,85%, fenicada 0,5% Amostras de soro a testar Soro controle positivo com ttulo alto Soro controle positivo com ttulo mdio Soro controle positivo com ttulo baixo Soro controle negativo Tubos de 10 mm x 75 mm ou 10 mm x 100 mm Grade para tubos Pipetas de Bang ou micropipetadores de volume ajustvel Dispensador automtico de 1 mL Dispensador automtico de 2 mL Pipetas de 10 mL Caixa com luz indireta para a leitura Estufa a 37C Vidraria para diluio dos reagentes Precaues na execuo do teste 1) A diluio do antgeno para a srie de tubos com 2-ME deve ser realizada em soluo salina a 0,85%, sem adio de fenol, pois este interfere com o 2-ME. 2) Recomenda-se fazer as diluies do antgeno 12 horas antes do uso. 3) Os antgenos diludos devem ser conservados sob refrigerao (2C a 8C), podendo ser utilizados por um perodo de at uma semana. 4) O 2-ME sensvel luz e ao calor e se deteriora rapidamente por exposio ao ar. Deve ser mantido em frascos de cor mbar, hermeticamente fechados e sob refrigerao.
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5) O 2-ME txico para o ser humano e deve ser manuseado em capela de exausto. 6) Em cada jornada de trabalho, deve ser includo pelo menos um soro selecionado especialmente, com alto contedo de anticorpos IgM anti-Brucella e que no contenha IgG detectvel pelo teste do 2-ME, bem como outro soro reagente na SAL e 2-ME. 7) Em cada teste sero includos tambm tubos de controle de antgeno, usando-se soros testados positivos de ttulo conhecido e soro negativo. 8) Foi estabelecido que a incubao a 37C durante 48 3 horas suficiente para se obter o mximo de aglutinao num soro de baixo contedo de aglutininas. Esse perodo de incubao suficiente para o diagnstico de rotina. 9) O Teste do 2-Mercaptoetanol incubado e lido junto com o Teste de Soroaglutinao (lenta) em Tubos. Ocasionalmente, o tubo da diluio 1:25 pode estar um pouco opaco na prova do 2ME, ainda que os tubos subseqentes estejam claros. Tal fato no deve ser considerado como resultado negativo do teste. 10) A diferena de ttulos entre ambos os testes (caso ela ocorra) interpretada como a capacidade aglutinante do soro em decorrncia de anticorpos da classe IgM. A presena de IgG geralmente est associada com infeco ativa. Assim sendo, toda reao positiva no teste do 2-ME (a partir de 1:25) deve ser considerada como indicativa de infeco. Em animais vacinados, predominam aqueles anticorpos sensveis ao 2-ME (IgM), apresentando usualmente resultados negativos. 11) Animais no incio de infeco apresentam a maioria dos anticorpos da classe IgM, apresentando-se negativos prova do 2-ME. Tcnica 1) Diluir o antgeno para soroaglutinao lenta em tubos 100 vezes em soluo salina a 0,85% contendo 0,5% de fenol. Concentrao final 0,045.
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2) Diluir o antgeno para soroaglutinao lenta em tubos 50 vezes em soluo salina a 0,85% sem adio de fenol. Concentrao final 0,090%. 3) Preparar soluo de 2-ME a 0,1 M misturando-se 7,8 mL de 2-ME a 992,20 mL de soluo salina a 0,85% sem fenol, ou volumes menores, proporcionalmente. 4) Para cada amostra de soro a testar, colocar, em uma estante, duas fileiras de quatro tubos. 5) Identificar o primeiro tubo de cada fileira com o nmero correspondente ao soro a testar. 6) A primeira fileira corresponde s quatro diluies do soro do teste de soroaglutinao lenta em tubos e deve ser marcada com uma letra T. A outra fileira, em que se far o teste do 2-ME, deve ser marcada com a letra M. 7) Com uma pipeta de Bang, dotada de uma pra de borracha, ou outro dispositivo de pipetagem que evite o uso da boca, carrega-se o soro at passar um pouco da graduao superior. Com um papel absorvente, limpa-se o extremo da pipeta; mantendo-se esta em posio vertical sobre a parede do tubo que contm a amostra, deixa-se escorrer o soro at que o fundo do menisco no interior da pipeta esteja nivelado com a sua graduao superior. 8) Com a pipeta no fundo do primeiro tubo da primeira fileira, deixa-se fluir 0,08 mL de soro. No segundo tubo, deposita-se 0,04 mL, no terceiro, 0,02 mL e no quarto, 0,01 mL. 9) Repete-se o procedimento descrito para depositar as mesmas quantidades de soro na segunda fileira de tubos (srie do 2-ME). 10) Para todas as amostras de soro, repete-se o procedimento de forma similar, pipetando os soros para cada duas fileiras de tubos adequadamente identificados. 11) Incluir os soros controle positivos com atividade aglutinante conhecida. 12) Incluir o soro controle negativo no teste do 2-ME.
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13) Com o dispensador automtico de 2 mL ou pipeta de 10mL, agregam-se a cada um dos quatro tubos das fileiras T, 2 mL do antgeno diludo 1:100 (0,045% de clulas) em salina fenicada (0,5% de fenol). 14) Com o dispensador automtico de 2 mL (regulado para 1 mL), ou pipeta de 10 mL, agrega-se 1 mL de soluo de 2-ME 0,1 M (diludo em soluo salina sem fenol) a cada um dos tubos das fileiras M. 15) Mistura-se bem, agitando a estante. 16) Deixar as estantes com as amostras em repouso durante 30 minutos temperatura ambiente. 17) Aps os 30 minutos, empregando-se outro dispensador automtico, ou outra pipeta de 10mL, agrega-se a cada tubo da fileira M, 1 mL do antgeno diludo 1:50 (0,09 % de clulas) em soluo salina fisiolgica (sem fenol). A concentrao final do antgeno na soluo ser 0,045% e a do 2-ME ser de 0,05M. 18) Mistura-se bem, agitando a estante. 19) Incubar a 37C por 48 3 horas. 20) A leitura do teste feita atravs de uma fonte de luz indireta contra um fundo escuro e opaco, com uma forte luz que atravesse os tubos. As fontes de luz estranhas devem ser reduzidas. As interpretaes baseiam-se no grau de aglutinao do antgeno e na firmeza dos grumos, aps agitao suave dos tubos. 21) Anotar os resultados. Se houver interesse na determinao do ttulo final de um soro, poder ser empregado o mtodo de diluies seriadas (dobradas). Interpretao dos resultados O grau de aglutinao em cada uma das distintas diluies deve ser classificado como: completo (+), incompleto (I) ou negativo (): Reao completa aquela em que o lquido da mistura soro-antgeno aparece translcido e a agitao suave no rompe os grumos;
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 Reao incompleta aquela em que a mistura soroantgeno aparece parcialmente translcida, e uma suave agitao no rompe os grumos; Reao negativa aquela em que a mistura soroantgeno aparece opaca ou turva, e uma agitao suave no revela grumos. A interpretao dos resultados da prova realizada segundo os Quadros 1 e 2.
Quadro 1 Interpretao da prova do 2-ME para fmeas com idade igual ou superior a 24 meses e vacinadas entre 3 e 8 meses de idade

2-ME SAL NR 25 I 25 50 I 50 100 I 100 200 I 200

NR Inc Inc Inc

25 I

25

50 I

50

100 I

100

200 I

200

Inc Inc Inc + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

+ : positivo : negativo Inc : reao inconclusiva : combinao que no pode ocorrer

2-ME : 2-Mercaptoetanol SAL : soroaglutinao lenta NR : no reagente I : reao incompleta

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Quadro 2 Interpretao da prova do 2-ME para fmeas no vacinadas e machos com idade superior a 8 meses

2-ME SAL NR 25 I 25 50 I 50 100 I 100 200 I 200

NR Inc Inc Inc Inc Inc

25 I

25

50 I

50

100 I

100

200 I

200

Inc Inc Inc Inc Inc + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

+ : positivo : negativo Inc : reao inconclusiva : combinao que no pode ocorrer

2-ME : 2-Mercaptoetanol SAL : soroaglutinao lenta NR : no reagente I : reao incompleta

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Teste do Antgeno Acidificado Tamponado Reao Positiva

Teste do Anel em Leite Tubo da esquerda: negativo Tubo da direita: positivo

Teste do 2-Mercaptoetanol 1o Tubo da esquerda: positivo

Teste de Fixao de Complemento

Negativo
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Positivo

Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

PROTOCOLO PARA DIAGNSTICO DA TUBERCULOSE

Diagnstico Alrgico
O diagnstico alrgico da tuberculose bovina ser feito por mdico veterinrio habilitado, empregando-se provas de tuberculinizao intradrmica.

Tuberculinas
Devero ser utilizadas somente as tuberculinas PPD (Purified Protein Derivative Derivado Protico Purificado) bovina e aviria, produzidas segundo as normas do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA), sendo as partidas controladas e aprovadas pelo Ministrio. As tuberculinas devero ser transportadas e conservadas em temperatura de, no mnimo, +2C e de, no mximo, +8C, e protegidas da luz solar direta. O contedo dos frascos, aps sua abertura, dever ser usado no mesmo dia.

Equipamentos
Para a realizao dos testes diagnsticos de tuberculose, ser obrigatria a utilizao de seringas e cutmetros adequados: seringas: seringas multidoses calibradas para 0,1 mL, com agulhas de calibre 22 G x 3 mm ou 4 mm de comprimento; cutmetro: cutmetros especficos para tuberculinizao de bovdeos.

Identificao dos animais

Os animais sero identificados individualmente, quer por tatuagem quer por outra forma, inclusive pelo Registro Genealgico; ou podero ser identificados pelo mtodo definido para o programa de rastreabilidade do MAPA.
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Testes
Teste Cervical Simples (TCS) Realizao do teste Para a tuberculinizao simples, a inoculao de tuberculina PPD bovina ser feita na regio cervical, no tero mdio, e a uma distncia igual das bordas superior e inferior do pescoo, ou escapular, na regio da espinha da escpula e a 20 cm da cernelha. A regio ser demarcada por tricotomia, devendo-se evitar local com leso ou ndulos de parasitos. A espessura da dobra da pele ser determinada com o auxlio de cutmetro antes da inoculao, e as medidas sero anotadas no formulrio para exame de brucelose e tuberculose, de acordo com as normas para habilitao. A tuberculina PPD bovina ser inoculada por via intradrmica na dosagem de 0,1 mL. A formao de uma ppula no local indica que a inoculao foi correta. Leitura e interpretao dos resultados Aps 72 6 horas da inoculao, ser realizada nova medida da dobra da pele no local de inoculao da tuberculina PPD bovina, sendo o resultado anotado no respectivo campo do formulrio para exame de brucelose e tuberculose . O aumento da espessura da dobra da pele (B) ser assim calculado: da medida da dobra da pele 72 horas aps a inoculao (B72), subtrai-se a medida da dobra da pele tomada no dia da inoculao para a tuberculina PPD bovina (B0). O resultado ser anotado no respectivo campo do formulrio para exame de brucelose e tuberculose (B= B72B0). Os resultados obtidos sero interpretados de acordo com os critrios definidos na Tabela 3 do Regulamento Tcnico do PNCEBT (ver pgina 155).

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Tricotomia

Medida da espessura da dobra da pele (em mm)

Inoculao intradrmica de tuberculina (PPD bovino)

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Teste Cervical Comparativo (TCC) o teste confirmatrio utilizado em animais reagentes ao Teste Cervical Simples (TCS) e ao Teste da Prega Caudal (TPC). tambm recomendado como teste de rotina para estabelecimentos de criao com ocorrncia de reaes inespecficas, estabelecimentos certificados como livres e para estabelecimentos de criao de bubalinos, visando garantir boa especificidade diagnstica. Realizao do teste Para o TCC, as tuberculinas sero inoculadas por via intradrmica na dosagem de 0,1 mL, sendo o PPD avirio inoculado cranialmente e o PPD bovino caudalmente. A formao de uma ppula no local indica que a inoculao foi correta. A inoculao de tuberculina PPD aviria ser feita na regio cervical, na juno do tero anterior e do tero mdio e a uma distncia igual das bordas superior e inferior do pescoo, ou escapular, frente da espinha da escpula, e a 20 cm da cernelha. A tuberculina PPD bovina ser inoculada na regio cervical, na juno do tero mdio e tero posterior e a uma distncia igual das bordas superior e inferior do pescoo, ou escapular, atrs da espinha da escpula, e a 20 cm da cernelha, havendo uma distncia mnima de 15 a 20 cm entre as duas inoculaes. Recomenda-se que a inoculao seja efetuada de um mesmo lado de todos os animais do estabelecimento de criao. Os locais sero demarcados por tricotomia, devendo-se evitar reas com leso ou ndulos de parasitos. A espessura da dobra da pele ser determinada com o auxlio de cutmetro antes da inoculao. As medidas da dobra da pele do local da inoculao da tuberculina PPD aviria e da tuberculina PPD bovina sero anotadas nos respectivos campos no formulrio para exame de brucelose e tuberculose.

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Leitura e interpretao dos resultados Aps 72 6 horas da inoculao, ser realizada nova medida da dobra da pele no local de inoculao da tuberculina PPD aviria e da tuberculina PPD bovina, sendo os resultados anotados nos respectivos campos do formulrio para exame de brucelose e tuberculose. O aumento da espessura da dobra da pele ser assim calculado: da medida da dobra da pele 72 horas aps a inoculao, subtrai-se a medida da dobra da pele tomada no dia da inoculao para a tuberculina PPD aviria (A) e a tuberculina PPD bovina (B). Os resultados sero anotados nos respectivos campos no formulrio para exame de brucelose e tuberculose. A diferena de aumento da dobra da pele provocado pela inoculao da tuberculina PPD bovina (B) e da tuberculina PPD aviria (A) ser calculada subtraindo-se A de B. Anota-se o valor no campo respectivo do formulrio para exame de brucelose e tuberculose. Os resultados das diferenas (B A) sero interpretados de acordo com os critrios definidos na Tabela 4 do Regulamento Tcnico do PNCEBT (ver pgina 157).

cm 15 a 20

Tricotomia

Medida da espessura da dobra da pele (em mm)

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Inoculao intradrmica de tuberculina (PPD avirio): formao de ppula

Inoculao intradrmica de de tuberculina (PPD bovino)

Reao tuberculnica positiva

Reao inespecfica

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Teste da Prega Caudal (TPC) Esse teste s poder ser empregado em rebanhos de corte como prova de triagem ou como monitoramento. Realizao do teste A tuberculina PPD bovina ser inoculada por via intradrmica na dosagem de 0,1 mL, 6 cm a 10 cm da base da cauda, na juno da pele pilosa e da pele glabra. Antes da inoculao, o local deve estar limpo. A formao de uma ppula no local indica que a inoculao foi correta. A inoculao da tuberculina PPD poder ser feita na prega caudal de quaisquer dos lados; recomenda-se, todavia, que, para um determinado rebanho, seja utilizado o mesmo lado para inoculao. Leitura e interpretao dos resultados Aps 72 6 horas da inoculao ser realizada a leitura do teste, comparando-se, por avaliao visual e palpao, a prega inoculada com a prega do lado oposto. Qualquer aumento de espessura na prega inoculada REAGENTE. classificar o animal como REAGENTE

Inoculao de PPD bovino

Reao tuberculnica positiva

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

ELIMINAO DE ANIMAIS

Os animais que apresentarem testes diagnsticos positivos para tuberculose ou brucelose devero, preferencialmente, ser encaminhados ao abate sanitrio em estabelecimentos com servio de inspeo de carcaas. Como alternativa, eles podero ser destrudos na prpria unidade de criao, observados os critrios abaixo especificados. preciso salientar, ainda, que a destruio do animal precisa ser acompanhada pelo servio oficial de defesa sanitria animal. 1) A destruio deve ser feita por mtodo que assegure uma morte rpida e sem espalhamento de sangue. De preferncia, dentro da cova onde o animal ser enterrado (considerar Resoluo CFMV N 714, de 20 de junho de 2002). 2) No se aconselha fazer necropsia, pois so agentes zoonticos. Na eventualidade de realizao de necropsia, necessrio usar o equipamento de proteo individual e descontaminar todos os materiais utilizados. 3) A cova deve ser feita em terreno estvel e seco, distante de poos e cursos de gua, de nascentes e de bebedouros, para se evitar a contaminao do lenol fretico. A carcaa ser recoberta por um estrato de terra de aproximadamente 2 metros, impedindo que animais escavadores e minhocas tragam os patgenos para a superfcie. 4) Havendo necessidade de descontaminao de materiais (instrumentos de necropsia, vestimentas, botas, etc.), recomenda-se a fervura por 30 minutos ou, como alternativa, a imerso em desinfetantes qumicos.
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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

MTODOS DE DESINFECO

O Mycobacterium bovis e a Brucella abortus so agentes que podem sobreviver durante meses no meio ambiente, aumentando sua chance de infectar outros suscetveis. Portanto, a adoo de programas de desinfeco de currais, de estbulos e demais locais de aglomerao de animais adquire grande importncia como medida complementar ao combate a esses patgenos. uma prtica que pode ser aplicada s criaes intensivas e semiintensivas, pois haver bvias restries s extensivas. Para estas, recomenda-se um eficiente manejo das pastagens e piquetes, permitindo que os elementos naturais reduzam a sobrevivncia desses patgenos no ambiente. Boa insolao, baixa umidade e altas temperaturas so fatores que restringem a sua sobrevivncia. Quanto ao programa de desinfeco, no basta simplesmente aplicar o desinfetante. Deve-se, preliminarmente, desimpedir o local por meio da remoo de camas, palhas e esterco de todas as superfcies internas e externas, inclusive das reentrncias. O material recolhido ser queimado ou tambm submetido desinfeco. Em seguida, aplica-se o desinfetante, observando-se atentamente as recomendaes do fabricante, tendo o cuidado de distribu-lo bem sobre as superfcies. Veculos que transportam animais infectados devem de igual modo ser cuidadosamente desinfectados. Pastagens utilizadas por animais infectados que abortaram ou pariram precisam permanecer em descanso por, pelo menos, dois meses. Na eventualidade de haver contaminao de reas de terra nua ou com vegetao rasteira, recomenda-se delimitar o terreno para o espalhamento de p de cal (hidrxido de clcio) e posterior
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aradura ou revolvimento da terra para que as camadas superficiais do solo entrem em contato e misturem-se adequadamente cal. Em seguida, o solo dever ser nivelado e compactado com rolo ou socador, a fim de criar condies anaerbicas nas suas camadas mais profundas. Um detalhe bastante importante a escolha do princpio ativo. Os Quadros 1, 2 e 3 listam os desinfetantes mais adequados e orientam quanto melhor forma de aplic-los.
Quadro 1 Quantidade de desinfetante a ser utilizada para cada tipo de material a ser desinfetado

Item a ser desinfectado Instalaes Esterco lquido Pisos de terra Utenslios Roupas de trabalho Veculos em geral
Fonte: Adaptado de Russel et al. (1984).

Unidade m2 L m2 kg kg m

Quantidade de desinfetante a ser utilizado (L) 1 1 5 2 5 1

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Quadro 2 Desinfetantes utilizados em casos de brucelose bovina Tempo de Temperatura Desinfetante Concentrao exposio de utilizao Cal (hidrxido 15% 1 hora Ambiente de clcio) Cresis 5% 1 hora Ambiente Fenol 1% 1 hora 37C Formol Hipoclorito de clcio Hipoclorito de sdio Soda custica 5%1 2,5% 2,5% 2% 3% 1 hora 1 hora 1 hora 3 horas Ambiente Ambiente Ambiente 60C Uso indicado Instalaes, solo Instalaes Instalaes Instalaes, utenslios e roupas Instalaes e utenslios Instalaes e utenslios Instalaes e utenslios

Fonte: Adaptado de Russel et al. (1984). 1 Equivalente a 2% de formaldedo

Quadro 3 Desinfetantes utilizados em casos de tuberculose bovina Tempo de Temperatura Desinfetante Concentrao exposio de utilizao Cal (hidrxido 20% 3 horas Ambiente de clcio) Cresis 5% 3 horas Ambiente Fenol 5% 3 horas 37C Formol Hipoclorito de clcio Hipoclorito de sdio Soda custica 7,5%1 5% 5% 2% 3% 3 horas 3 horas 3 horas 3 horas Ambiente Ambiente Ambiente 60C Uso indicado Instalaes, solo Instalaes Instalaes Instalaes, utenslios e roupas Instalaes e utenslios Instalaes e utenslios Instalaes e utenslios

Fonte: Adaptado de Russel et al. (1984). 1 Equivalente a 3% de formaldedo

Bibliografia
RUSSEL, A.D.; YARNYCH, V.S.; KOULIKOVSKII, A.V. (Ed.). Guidelines on disinfection in animal husbandry for prevention and control of zoonotic diaseses. Geneva: World Health Organization,1984.(WHO/VPH/84.4).
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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

PERGUNTAS E RESPOSTAS SOBRE NORMAS E PROCEDIMENTOS

Colaboraram na elaborao deste Captulo: Maria Carmen de Rezende Costa (SFA-MG/MAPA) e Maria do Carmo Pessa e Silva (SEAB/PR)

Vacina contra Brucelose

1. POR QUE VACINAR CONTRA BRUCELOSE?

Para induzir imunidade ou proteo contra a doena e diminuir a prevalncia da brucelose bovina e bubalina. Quanto maior for o nmero de fmeas vacinadas, maior ser a imunidade do rebanho, menor o nmero de animais suscetveis e menor a possibilidade de difuso da doena.
2. QUAIS ANIMAIS DEVEM SER VACINADOS?

Todas as fmeas bovinas e bubalinas entre 3 e 8 meses de idade, somente uma vez na vida. proibida a vacinao de machos de qualquer idade e de fmeas com idade superior a 8 meses. Sendo vacinada at os 8 meses, evita-se que a fmea apresente ttulos aglutinantes persistentes em testes sorolgicos, aps os 24 meses de idade.
3. QUE TIPO DE VACINA PODE SER UTILIZADA?

Para a vacinao de fmeas entre 3 e 8 meses de idade obrigatrio o uso da vacina com amostra B19. Como uma vacina viva atenuada, apresenta riscos para a sade humana e, portanto, deve ser SEMPRE aplicada sob a responsabilidade tcnica de um mdico veterinrio. A utilizao de vacinas produzidas com outras amostras, que no a B19, para fins de vacinao estratgica, ser disciplinada em norma especfica do MAPA.
4. QUEM APLICA A VACINA?

Mdico veterinrio cadastrado na Unidade Veterinria Local (UVL) do servio oficial de defesa sanitria animal, ou um vacinador
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devidamente treinado e supervisionado por esse mdico veterinrio. Onde no houver mdicos veterinrios cadastrados, ou em regies onde eles no atenderem plenamente demanda do PNCEBT, o servio oficial de defesa sanitria animal poder assumir a responsabilidade tcnica ou, mesmo, a execuo da vacinao.
5. COMO CADASTRAR-SE PARA FAZER A VACINAO?

O mdico veterinrio deve solicitar o cadastramento em uma Unidade Veterinria Local do servio oficial de defesa sanitria animal do(s) Estado(s) onde trabalha.
6. ONDE E COMO ADQUIRIR A VACINA?

Em estabelecimentos comerciais de produtos de uso veterinrio, registrados no servio oficial de defesa sanitria animal. obrigatria a apresentao de receita emitida por mdico veterinrio cadastrado ou por mdico veterinrio oficial, nos casos em que estes assumirem a responsabilidade direta pela vacinao.
7. PRECISO EMITIR UMA RECEITA PARA CADA PROPRIEDADE?

No. O mdico veterinrio cadastrado poder adquirir vacina para mais de uma propriedade com uma nica receita apresentada em um estabelecimento comercial. Contudo, dever ser emitido um atestado de vacinao para cada propriedade atendida.
8. COMO CONSERVAR A VACINA?

Deve ser mantida sob refrigerao, em temperatura entre 2C e 8C, e ao abrigo do sol, inclusive durante o processo de vacinao das bezerras. Ao ser reconstituda na forma lquida, a vacina deve ser imediatamente aplicada, no podendo ser utilizada posteriormente.
9. COMO PREPARAR A VACINA PARA O USO?

A vacina liofilizada deve ser reconstituda imediatamente antes do uso. Deve ser agitada de maneira suave durante alguns minutos. Sobras de vacina no podem ser aproveitadas.
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10. QUAIS SO OS CUIDADOS NA APLICAO DA VACINA?

Por ser uma vacina viva e patognica para o homem, deve ser manuseada com cuidado, evitando-se a contaminao. Portanto, recomenda-se o uso de culos e luvas de proteo. Aps o uso, os frascos, as aguhas e seringas devem ser esterilizados e descartados adequadamente.
11. COMO APLIC-LA?

Usar agulhas e seringas estreis descartveis, e no usar desinfetantes. Pode-se tambm utilizar agulhas e seringas aps fervura. O volume de vacina usado para cada bezerra, assim como sua via de inoculao, deve ser conforme a recomendao do laboratrio fabricante (seguir a orientao da bula).
12. COMO IDENTIFICAR AS FMEAS VACINADAS?

As bezerras devero ser marcadas a ferro candente com a letra V, acompanhada do algarismo final do ano da vacinao, no lado esquerdo da cara. As fmeas destinadas ao registro genealgico, quando devidamente identificadas, ou aquelas identificadas individualmente por sistema aprovado pelo MAPA, ficam excludas da obrigatoriedade da marcao a fogo, sendo que, nesse caso, dever ser utilizado modelo especfico de atestado de vacinao.
13. COMO COMPROVAR A VACINAO?

Por meio de atestado, emitido pelo mdico veterinrio cadastrado responsvel pela vacinao, conforme a legislao vigente. O atestado dever ser encaminhado pelo proprietrio Unidade Veterinria Local do servio oficial de defesa sanitria animal, onde a propriedade est cadastrada. obrigatria a comprovao da vacinao de bezerras, no mnimo, uma vez por semestre.

Cadastramento de Mdicos Veterinrios

14. POR QUE SE CADASTRAR?

Para que a vacinao de bezerras contra a brucelose possa ter reconhecimento oficial. O servio oficial de defesa sanitria
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animal poder contatar o mdico veterinrio cadastrado sempre que houver necessidade de fiscalizar e monitorar as aes, ou para fornecer informaes oficiais.
15. QUEM FAZ O CADASTRAMENTO?

O servio oficial de defesa sanitria animal estadual.

16. QUANDO SE CADASTRAR?

No h prazo limite para cadastramento. Basta procurar um escritrio do servio oficial de defesa sanitria animal do Estado.

Habilitao de Mdicos Veterinrios

17. POR QUE SE HABILITAR E QUAIS OS DIREITOS DO HABILITADO?

Para realizar testes de diagnstico de rotina para brucelose (Antgeno Acidificado Tamponado AAT e Teste do Anel em Leite TAL) e tuberculose em bovinos e bubalinos. Para ser responsvel pelo processo de saneamento das propriedades, visando certificao de LIVRE ou MONITORADA para brucelose e tuberculose. O mdico veterinrio habilitado atua sob superviso do servio oficial de defesa sanitria animal.
18. O QUE PRECISO PARA SER HABILITADO E QUAIS OS DEVERES DO HABILITADO?

Estar inscrito no(s) Conselho(s) de Medicina Veterinria da(s) Unidade(s) Federativas(s) de atuao. Ter sido aprovado em curso de treinamento em mtodos de diagnstico e controle da brucelose e tuberculose, reconhecido pelo DSA/MAPA, e realizado por instituio de ensino ou pesquisa em Medicina Veterinria. Cumprir o Regulamento Tcnico e demais normas complementares do PNCEBT. Possuir infra-estrutura e material adequado execuo dos testes de diagnstico.
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Fornecer informaes e apresentar relatrios de atividades, relacionados com o PNCEBT Unidade Veterinria Local do servio oficial de defesa sanitria animal.
19. ONDE SE HABILITAR?

Ao concluir o curso de treinamento e de posse do certificado, o veterinrio dever formalizar seu pedido de habilitao junto a uma Unidade Veterinria Local do servio oficial de defesa sanitria animal, onde ir, estando habilitado, apresentar os relatrios de atividades relacionados ao PNCEBT.
20. QUAL A ABRANGNCIA PARA ATUAO DO HABILITADO?

Todo o territrio da Unidade Federativa na qual o mdico veterinrio foi habilitado. Para atuar em mais de uma Unidade da Federao, o mdico veterinrio dever estar inscrito no respectivo CRMV, procurar o servio oficial de defesa sanitria animal desse outro Estado, apresentar o certificado de concluso do curso de treinamento e formalizar seu pedido de habilitao.
21. QUAL A ABRANGNCIA DO CURSO DE TREINAMENTO?

O curso tem validade em todo o territrio nacional, desde que seja reconhecido pelo DSA/MAPA.

Antgenos para Brucelose e Tuberculinas

22. QUAIS SO OS TESTES PARA DIAGNSTICO DA BRUCELOSE?

Para uso do mdico veterinrio habilitado so: Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) e Teste do Anel em Leite (TAL). Para uso dos laboratrios credenciados so: Antgeno Acidificado Tamponado (AAT), 2-Mercaptoetanol (2-ME) e Teste do Anel em Leite (TAL). Para uso dos laboratrios oficiais credenciados so: Antgeno Acidificado Tamponado (AAT), 2-Mercaptoetanol (2-ME), Teste do Anel em Leite (TAL) e Fixao de Complemento (FC). O teste de Fixao de Complemento s ter valor oficial se realizado em laboratrio oficial credenciado.
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23. QUAIS SO AS TUBERCULINAS UTILIZADAS?

Para o Teste Cervical Simples (TCS) e o Teste da Prega Caudal (TPC) o PPD bovino. Para o Teste Cervical Comparativo (TCC) so os PPD bovino e PPD avirio.
24. ONDE ADQUIRI-LOS?

No servio oficial de defesa sanitria animal do Estado.

25. COMO ADQUIRI-LOS?

Mediante preenchimento de formulrio prprio, no local onde for adquirir os produtos biolgicos.
26. QUANDO ADQUIRI-LOS?

Sempre que necessrio. Para aquisio de novos produtos biolgicos, dever ser apresentado relatrio de utilizao dos insumos adquiridos anteriormente.
27. QUEM PODE ADQUIRI-LOS?

Somente os mdicos veterinrios habilitados junto ao PNCEBT, os laboratrios credenciados, os laboratrios oficiais credenciados, as instituies de ensino ou pesquisa em medicina veterinria e os mdicos veterinrios cadastrados no Servio Oficial como responsveis tcnicos de granjas de sudeos.
28. COMO CONSERVAR E UTILIZAR OS PRODUTOS BIOLGICOS?

Os produtos devem ser conservados sob refrigerao (2C a 8C) e usados sempre dentro do prazo de validade. No podem ser congelados.

Diagnstico de Brucelose
29. QUAIS ANIMAIS DEVEM SER TESTADOS?

As fmeas de idade igual ou superior a 24 meses, desde que vacinadas entre 3 e 8 meses; os machos e a as fmeas no vacinadas, a partir dos 8 meses de idade. Excluem-se desses os animais castrados.
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As fmeas submetidas a testes sorolgicos, no intervalo de 15 dias antes e at 15 dias aps o parto, devero ser retestadas no perodo de 30 a 60 dias aps o parto. Para certificao de propriedade MONITORADA, os testes sero aplicados apenas em fmeas com idade igual ou superior a 24 meses e nos machos reprodutores, de acordo com o estabelecido no regulamento tcnico do PNCEBT.
30. FMEAS VACINADAS (AMOSTRA B19) PODEM SER TESTADAS?

Podem, desde que com idade igual ou superior a 24 meses.

31. ANIMAIS DE PROPRIEDADES QUE NO ESTIVEREM SENDO CERTIFICADAS PODEM SER TESTADOS?

Sim, desde que os animais POSITIVOS sejam marcados, afastados da produo e isolados at serem SACRIFICADOS ou DESTRUDOS, num prazo mximo de 30 dias. Os testes s podem ser realizados por mdicos veterinrios habilitados ou por laboratrios credenciados pelo MAPA.
32. QUAIS TESTES PODEM SER FEITOS PELO MDICO VETERINRIO HABILITADO?

O Teste do Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) e o Teste do Anel em Leite (TAL).

33. COM QUAL FINALIDADE SER UTILIZADO O TESTE DO ANEL EM LEITE?

Para monitorar a condio sanitria de estabelecimentos de criao. Este teste poder ser usado por veterinrios habilitados, por laboratrios credenciados ou, ainda, pelo servio oficial de defesa sanitria animal.
34. QUAL A CONDUTA A SER ADOTADA EM REBANHOS QUE APRESENTAREM O TESTE DO ANEL EM LEITE POSITIVO ?

Em caso de positividade, os animais do estabelecimento de criao devero ser submetidos a TESTES SOROLGICOS individuais para diagnstico de brucelose.
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Esquema 1
Diagnstico da Brucelose

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Diagnstico de Tuberculose
35. QUAIS TESTES PODEM SER FEITOS PELO MDICO VETERINRIO HABILITADO?

So os testes alrgicos: de tuberculinizao cervical simples, cervical comparativo e na prega caudal.

36. EM QUE CIRCUNSTNCIA PERMITIDO O TESTE NA PREGA CAUDAL?

Somente quando o teste aplicado em rebanhos de corte.

37. EM QUE CIRCUNSTNCIA RECOMENDADO O TESTE CERVICAL SIMPLES?

Como diagnstico de rotina, em virtude de ser a prova de tuberculinizao de maior sensibilidade.

38. EM QUAIS CIRCUNSTNCIAS RECOMENDA-SE O TESTE CERVICAL COMPARATIVO?

Em animais reagentes ao Teste da Prega Caudal e ao Teste Cervical Simples. tambm recomendado como teste de rotina para estabelecimentos de criao com ocorrncia de reaes inespecficas, estabelecimentos certificados como livres e para estabelecimentos de criao de bubalinos, visando garantir boa especificidade diagnstica.
39. QUAIS EQUIPAMENTOS DEVEM SER USADOS PARA DIAGNSTICO DE TUBERCULOSE?

Equipamento para tricotomia, cutmetro, agulhas intradrmicas e seringas multidoses especficas para tuberculinizao em bovinos.
40. ANIMAIS DE PROPRIEDADES QUE NO ESTIVEREM EM SANEAMENTO OU CERTIFICADAS PODEM SER TESTADOS?

Podem, desde que os animais POSITIVOS sejam marcados, afastados da produo e isolados at serem SACRIFICADOS ou
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DESTRUDOS, num prazo mximo de 30 dias. Em todos os casos, os testes s podem ser realizados por mdicos veterinrios habilitados no PNCEBT.
41. QUAIS ANIMAIS DEVEM SER TESTADOS?

Todos os bovinos e bubalinos, machos e fmeas, com mais de 6 semanas de idade. As fmeas no reagentes aos testes de diagnstico realizados no intervalo de 15 dias antes do parto e at 15 dias aps o parto, devero ser retestadas no perodo de 60 a 90 dias aps o parto, obedecendo a um intervalo mnimo de 60 dias entre os testes. Para certificao de propriedade MONITORADA, sero testadas as fmeas com idade igual ou superior a 24 meses, e os machos reprodutores da mesma faixa etria.
42. QUAL A CONDUTA QUANDO O RESULTADO FOR INCONCLUSIVO?

Se for realizado Teste Cervical Simples, o animal reagente positivo ou inconclusivo poder ser sacrificado (ou destrudo), em um prazo mximo de 30 dias ou, ainda, ser submetido ao Teste Cervical Comparativo com intervalo de 60 a 90 dias aps o teste anterior. Se for feito teste comparativo e o resultado tambm for inconclusivo, o animal poder ser sacrificado (ou destrudo) em um prazo mximo de 30 dias ou ainda ser submetido a segundo teste comparativo com intervalo mnimo de 60 dias entre os testes. Se o resultado desse segundo teste comparativo tambm for inconclusivo, o animal ser classificado como reagente positivo e DEVER ser marcado a ferro candente com letra P no lado direito da cara, isolado de todo rebanho e sacrificado (ou destrudo) no prazo mximo de 30 dias.

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Esquema 2
Tuberculose Diagnstico da Tuberculose

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Destino dos Animais Reagentes Positivos

43. O QUE FAZER COM OS ANIMAIS POSITIVOS?

Em primeiro lugar, retir-los da produo e isol-los dos demais animais do rebanho. Marcar com ferro candente um P no lado direito da cara. No prazo mximo de 30 dias encaminh-los ao abate em estabelecimento com inspeo sanitria oficial, ou destru-los na propriedade, desde que com acompanhamento do servio oficial de defesa sanitria animal.
44. AS CRIAS RECM-PARIDAS DE FMEAS POSITIVAS PODEM SER APROVEITADAS?

Sim, desde que o animal recm-nascido seja separado imediatamente da me POSITIVA e alimentado com colostro e leite de fmea NEGATIVA. Posteriormente, esse animal dever ser submetido aos testes para diagnstico de brucelose e tuberculose.
45. O LEITE DAS FMEAS POSITIVAS PODE SER APROVEITADO?

No. Os animais POSITIVOS devem ser marcados e afastados da produo imediatamente, at que sejam sacrificados. O leite NO poder ser usado nem para consumo humano, nem para alimentao de qualquer espcie animal.
46. A CARNE DE ANIMAIS POSITIVOS PODE SER CONSUMIDA?

A carne pode ter aproveitamento condicional, segundo critrios estabelecidos pelo Servio de Inspeo de Produtos de Origem Animal. Se o animal for destrudo no estabelecimento de criao, a carne NO deve ser aproveitada para consumo humano, nem como alimento para qualquer espcie animal.

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Trnsito Interestadual e Aglomeraes de Bovinos e Bubalinos (Feiras e Exposies)

47. QUAIS ANIMAIS DEVEM SER TESTADOS EM CASO DE EXPOSIES E LEILES DE REBANHO DE ELITE?

Teste de brucelose: machos e fmeas acima de 8 meses de idade. Excluem-se desse teste os animais cujo destino final seja o abate (animais de corte), fmeas de at 24 meses, desde que vacinadas entre 3 e 8 meses de idade, os animais castrados e os animais procedentes de estabelecimento de criao livre de brucelose. Teste de tuberculose: machos e fmeas com idade igual ou superior a 6 semanas. Excluem-se desse teste os animais cujo destino final seja o abate (animais de corte) e aqueles provenientes de estabelecimento de criao livre de tuberculose.
48. QUANDO ELES DEVEM SER TESTADOS?

At 60 dias antes do transporte ou do incio do evento.

49. QUAL O PRAZO DE VALIDADE DOS TESTES DE BRUCELOSE E TUBERCULOSE?

Valem por 60 dias.

50. QUAL A DOCUMENTAO NECESSRIA PARA TRNSITO INTERESTADUAL DE ANIMAIS DESTINADOS REPRODUO?

Para fins de trnsito interestadual de machos e de fmeas, das espcies bovina e bubalina, destinados reproduo, obrigatria a apresentao de testes NEGATIVOS para brucelose e tuberculose. Para a tuberculose, os animais devem ser testados a partir das 6 semanas de idade e, para a brucelose, a partir dos 8 meses de idade (machos e fmeas no vacinadas). No caso de fmeas de at 24 meses de idade e VACINADAS contra brucelose, necessrio que conste na GTA a vacinao contra brucelose, que ser comprovada na Unidade Veterinria Local onde o documento de trnsito foi emitido. Ficam excludos dos testes os animais oriundos de estabelecimento de criao livre de brucelose e tuberculose ou monitorado para brucelose e tuberculose.
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Certificao de Estabelecimento de Criao Livre de Brucelose e Tuberculose

51. OBRIGATRIA?

No. A certificao voluntria.

52. COMO INICIAR O PROCESSO DE CERTIFICAO?

preciso ter um mdico veterinrio habilitado que se responsabilizar pelo saneamento da propriedade. O proprietrio, ento, dever solicitar formalmente a certificao junto Unidade Veterinria Local do servio oficial de defesa sanitria animal do Estado onde o estabelecimento se encontra cadastrado.
53. QUEM FAZ A CERTIFICAO?

o MAPA, juntamente com o servio oficial de defesa sanitria animal do Estado.

54. ONDE A CERTIFICAO TEM VALIDADE?

Em todo o territrio nacional.

55. A CERTIFICAO TEM PRAZO DE VALIDADE?

Sim. A validade de 12 meses, sendo, portanto, necessria a revalidao, conforme o Regulamento do PNCEBT.
56. QUEM EMITE O DOCUMENTO DE ESTABELECIMENTO CERTIFICADO?

o MAPA, juntamente com o servio oficial de defesa sanitria animal do Estado.

57. QUAIS AS MEDIDAS PARA CERTIFICAR UM ESTABELECIMENTO DE CRIAO COMO LIVRE DE BRUCELOSE E TUBERCULOSE?

Ter assistncia tcnica de um mdico veterinrio habilitado e custear as atividades de controle da brucelose e tuberculose. Utilizar sistema de identificao individual dos animais indicado pelo MAPA, ou, na ausncia deste, possuir sistema de identificao animal prprio, desde que aprovado localmente pelo servio oficial de defesa sanitria animal.
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Vacinar todas as fmeas bovinas e bubalinas entre 3 e 8 meses de idade contra brucelose. Para brucelose: realizar testes de todo o rebanho, num intervalo de 30 a 90 dias entre testes, at que se obtenha resultado negativo em todos os animais testados. Todos os reagentes positivos devero ser sacrificados ou destrudos; aps essa etapa, dever ser obtido um segundo teste de rebanho negativo com intervalo de 90 a 120 dias (do primeiro) e um terceiro teste de rebanho negativo com intervalo de 180 a 240 dias (do segundo). No ltimo exame, a colheita dever ser acompanhada pelo servio oficial de defesa sanitria animal e os testes realizados em laboratrio oficial credenciado. Obtidos os 3 testes de rebanho NEGATIVOS CONSECUTIVOS, o estabelecimento de criao estar apto a receber o certificado de LIVRE de brucelose (Esquema 3).

Esquema 3
Etapas de saneamento Brucelose

AAT Teste do Antgeno Acidificado Tamponado 2-ME Teste do 2-Mercaptoetanol FC Teste de Fixao de Complemento

Quando o rebanho sofre uma reinfeco, perde temporariamente o certificado. Nesse caso, poder recuperar a condio de livre aps a obteno de dois testes de rebanho negativos,
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realizados com intervalo de 30 a 90 dias, sendo o primeiro realizado 30 a 90 dias aps o sacrifcio ou destruio do ltimo animal reagente positivo. Para tuberculose: devero ser realizados testes de rebanho com intervalo de 90 a 120 dias entre testes, at que se obtenha resultado NEGATIVO em todos os animais testados. Todos os reagentes positivos devero ser sacrificados ou destrudos; aps essa etapa, dever ser obtido um segundo teste de rebanho negativo com intervalo de 90 a 120 dias (do primeiro) e um terceiro teste de rebanho negativo com intervalo de 180 a 240 dias (do segundo), sendo este ltimo acompanhado pelo servio oficial de defesa sanitria animal. Obtendo-se os 3 testes CONSECUTIVOS NEGATIVOS, a propriedade estar apta a receber o certificado de LIVRE de tuberculose (Esquema 4).

Esquema 4
Etapas de saneamento Tuberculose

TCS: Teste Cervical Simples TCC: Teste Cervical Comparativo Obs: Os estabelecimentos de criao com rebanho de corte que optem pela certificao de livre de tuberculose, podero, ainda, utilizar o Teste da Prega Caudal (TPC).

Quando o rebanho se reinfecta, perde temporariamente o certificado. Neste caso, poder recuperar a condio de livre aps obteno de dois testes de rebanho negativos, realizados com
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intervalo de 90 a 120 dias, sendo o primeiro realizado 90 a 120 dias aps o sacrifcio ou destruio do ltimo animal reagente positivo.
58. O ESTABELECIMENTO DE CRIAO PODE SER CERTIFICADO COMO LIVRE PARA BRUCELOSE OU PARA TUBERCULOSE SEPARADAMENTE?

Sim. O certificado ser emitido separadamente, conforme o progresso do saneamento para cada enfermidade. Porm, o saneamento dever ser feito, obrigatoriamente para ambas as doenas, at que se alcance a certificao de estabelecimento de criao livre para brucelose e tuberculose.
59. QUAL O TEMPO MNIMO PARA UMA PROPRIEDADE OBTER O CERTIFICADO?

de 270 dias, ou seja, 9 meses aproximadamente.

60. QUAIS SO AS CONDIES PARA INGRESSO DE ANIMAIS EM PROPRIEDADES CERTIFICADAS OU EM PROCESSO DE CERTIFICAO COMO LIVRE DE BRUCELOSE E TUBERCULOSE?

Que sejam oriundos de outra propriedade LIVRE de brucelose e/ou de tuberculose. Caso contrrio, os animais devem apresentar dois testes consecutivos NEGATIVOS para brucelose e/ou tuberculose. Brucelose: o primeiro teste deve ser feito na origem, 30 dias antes do embarque, e o segundo at 30 dias aps a chegada no destino. Os animais devem ser mantidos isolados at o segundo resultado negativo. Caso no seja possvel mant-los isolados no destino, os dois testes podero ser efetuados na origem, com intervalo de 30 a 60 dias entre testes. Tuberculose: o primeiro teste deve ser feito na origem, 30 dias antes do embarque, e o segundo at 90 dias aps a chegada no destino, num intervalo mnimo de 60 dias entre testes. Os animais devem ser mantidos isolados at o segundo resultado negativo. Caso no seja possvel mant-los isolados no destino, os dois testes podero ser efetuados na origem durante os 90 dias que antecedem o embarque, com intervalo mnimo de 60 dias entre testes.
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Certificao de Estabelecimento de Criao Monitorado para Brucelose e Tuberculose

61. OBRIGATRIA?

No. A adeso voluntria.

62. COMO INICIAR O PROCESSO DE CERTIFICAO?

preciso ter um mdico veterinrio habilitado que se responsabilizar pelo saneamento da propriedade. O proprietrio dever, ento, solicitar formalmente a certificao junto Unidade Veterinria Local do servio oficial de defesa sanitria animal do Estado onde o estabelecimento se encontra cadastrado.
63. QUEM FAZ A CERTIFICAO?

o MAPA, juntamente com o servio oficial de defesa sanitria animal do Estado.

64. QUAIS ESTABELECIMENTOS PODERO SER CERTIFICADOS COMO MONITORADOS?

Somente os estabelecimentos especializados em pecuria de corte.

65. A CERTIFICAO TEM PRAZO DE VALIDADE?

Sim. A validade de 12 meses, sendo, portanto, necessria a revalidao, conforme o determinado pelo Regulamento Tcnico do PNCEBT.
66. QUEM EMITE O DOCUMENTO DE ESTABELECIMENTO CERTIFICADO?

o MAPA, juntamente com o servio oficial de defesa sanitria animal do Estado.

67. QUAIS AS MEDIDAS PARA CERTIFICAR UM ESTABELECIMENTO DE CRIAO MONITORADO PARA BRUCELOSE E TUBERCULOSE?

O estabelecimento de criao deve ter assistncia tcnica de um mdico veterinrio habilitado e custear as atividades de controle da brucelose e tuberculose.
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Deve utilizar o sistema de identificao individual dos animais indicado pelo MAPA, ou, na ausncia deste, possuir um sistema de identificao animal prprio, desde que aprovado localmente pelo servio oficial de defesa sanitria animal. Vacinar todas as fmeas bovinas e bubalinas entre 3 e 8 meses de idade contra brucelose. Deve realizar testes de brucelose e tuberculose por amostragem aleatria. Quando forem detectados animais reagentes positivos nos testes por amostragem, ou quando for isolado o agente da tuberculose bovina em leses detectadas na inspeo post-mortem durante o abate, todas as fmeas com idade igual ou superior a 24 meses e todos os machos reprodutores devem ser submetidos a testes de diagnstico, destinando os reagentes positivos ao sacrifcio ou destruio. Os testes de rebanho por amostragem devem ser realizados em intervalos de 10 a 12 meses. Depois de terem sido realizados dois testes de rebanho por amostragem, com resultados negativos, os testes de tuberculose passam a ser realizados em intervalos de 18 a 24 meses. O certificado ser emitido aps a obteno de um teste com 100% da amostragem inicial negativa. Caso existam animais positivos, o certificado somente poder ser emitido aps o exame de todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e machos reprodutores, no includos na amostragem inicial, com a destruio/sacrifcio de todos os positivos.
68. QUAL A CONDUTA EM CASO DE SEREM DETECTADAS LESES SUGESTIVAS DE TUBERCULOSE AO EXAME POST-MORTEM DE ANIMAIS ORIUNDOS DE ESTABELECIMENTOS DE CRIAO MONITORADOS?

O Servio de Inspeo Oficial do estabelecimento de abate dever enviar amostras das leses suspeitas a laboratrio indicado pelo Departamento de Sade Animal. Confirmando-se infeco por Mycobacterium bovis, a Unidade Veterinria Local do servio oficial de defesa sanitria animal ser comunicada e determinar que o estabelecimento de criao de origem dos animais proceda a teste
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de diagnstico para tuberculose em todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e em todos os machos reprodutores. Todos os animais reagentes positivos devem ser destinados ao sacrifcio ou destruio.
69. QUANDO UM ESTABELECIMENTO DE CRIAO PODE OBTER O CERTIFICADO DE MONITORADO?

Aps testar a amostra de animais reprodutores (machos e fmeas com idade igual ou superior a 24 meses) e obtiver todos os resultados negativos ou, em caso de diagnosticar reagentes positivos, todo o restante do plantel de reprodutores for submetido a teste e forem eliminados todos os animais reagentes positivos.
70. O ESTABELECIMENTO DE CRIAO PODE SER CERTIFICADO COMO MONITORADO PARA BRUCELOSE OU PARA TUBERCULOSE SEPARADAMENTE?

No. A certificao de estabelecimento de criao monitorado ser feita de modo obrigatrio para brucelose e tuberculose simultaneamente.
71. O QUE PRECISO PARA INGRESSO DE ANIMAIS EM ESTABELECIMENTO DE CRIAO CERTIFICADO COMO MONITORADO?

Que sejam oriundos de estabelecimento de criao LIVRE de brucelose ou MONITORADO para brucelose e tuberculose ou que tenham, no mnimo, dois testes consecutivos NEGATIVOS para brucelose. O primeiro teste deve ser feito na origem, durante os 30 dias que antecedem o embarque, e o segundo, ser feito at 30 dias aps a chegada no destino, num intervalo mnimo de 30 dias entre testes. Os animais devem ser mantidos isolados at o segundo resultado negativo. Que sejam oriundos de estabelecimento de criao LIVRE de tuberculose ou MONITORADO para brucelose e tuberculose ou que tenham, no mnimo, dois testes consecutivos NEGATIVOS para tuberculose. O primeiro teste deve ser feito na origem, durante os 30 dias que antecedem o embarque, e o segundo, at 90 dias
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aps a chegada no destino, num intervalo mnimo de 60 dias entre testes. Os animais devem ser mantidos isolados at o segundo resultado negativo.

Esquema 5
Etapa de testes para obteno do certificado de monitorado para Brucelose:

AAT: Teste do Antgeno Acidificado Tamponado 2-ME: Teste do 2-Mercaptoetanol FC: Teste de Fixao de Complemento

Se um animal da amostragem inicial (ver Tabela 1, pg. 139) apresentar resultado positivo, todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e machos reprodutores no includos nessa amostragem devero ser examinados. O certificado ser emitido aps a obteno de um teste com 100% da amostragem inicial negativa. Caso existam animais positivos, o certificado somente poder ser emitido aps o exame de todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e machos reprodutores no includos na amostragem inicial, com a destruio/ sacrifcio de todos os positivos. A repetio peridica do teste ser realizada utilizando tabela para esta finalidade (ver Tabela 2, pg. 139), em intervalos de 10 a 12 meses.
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Esquema 6
Etapa de testes para obteno do certificado de monitorado para tuberculose:

*A critrio do proprietrio e/ou do veterinrio habilitado, a amostragem inicial poder ser testada utilizando o TCS ou TCC. TPC: Teste da Prega Caudal TCS: Teste Cervical Simples TCC: Teste Cervical Comparativo

Se algum animal da amostragem inicial (ver Tabela 1, pg. 139) apresentar resultado positivo no TPC, ser realizado o TCC. Caso esse teste seja positivo, todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e machos reprodutores no includos nessa amostragem devero ser examinados. O certificado ser emitido aps a obteno de um teste, com 100% da amostragem inicial negativa. Caso existam animais positivos, o certificado somente poder ser emitido aps o exame de todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e machos reprodutores no includos na amostragem inicial, com a destruio/sacrifcio de todos os positivos. As repeties do teste por amostragem (ver Tabela 2, pg. 139) sero realizadas 10 a 12 meses aps o primeiro teste. Aps obter-se dois resultados negativos consecutivos em todos os animais testados, a repetio peridica do teste ser efetuada em intervalos de 18 a 24 meses.
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Seleo de Animais a Serem Testados

Tabela 1 Tabela de amostragem para o teste inicial em estabelecimento de criao monitorado (Art. 74 - Regulamento PNCEBT) Nmero de fmeas a partir de 24 meses de idade e de machos reprodutores existentes no estabelecimento Nmero de fmeas a partir de 24 meses de idade e de machos reprodutores que devem ser testados (*)

< 350 351 500 501 750 751 1500 1501 5000 > 5000

255 300 350 400 440 460

(*) Parmetros de amostragem: 1) probabilidade de deteco de um ou mais animais reagentes (grau de confiana) = 99%; 2) porcentagem mnima esperada de animais reagentes no rebanho = 1%.

Tabela 2 Tabela de amostragem para a repetio peridica do teste em estabelecimento de criao monitorado (Art.75 - Regulamento PNCEBT) Nmero de fmeas a partir de 24 meses de idade e de machos reprodutores existentes no estabelecimento Nmero de fmeas a partir de 24 meses de idade e de machos reprodutores que devem ser testados (*)

< 350 351 500 501 750 751 1500 1501 5000 > 5000

200 225 250 270 290 300

(*) Parmetros de amostragem: 1) probabilidade de deteco de um ou mais animais reagentes (grau de confiana) = 95%; 2) porcentagem mnima esperada de animais reagentes no rebanho = 1%.

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Uma vez separados os animais na faixa etria especfica para colheita de sangue, necessrio fazer uma seleo aleatria dos que sero testados. Para tanto, dever ser empregado o mtodo exemplificado no quadro abaixo, conhecido como amostragem aleatria sistemtica.

Amostragem aleatria sistemtica

Em uma amostragem aleatria sistemtica, so sorteados n animais, pertencentes a uma populao composta por um total de N animais. Em primeiro lugar, sorteia-se um nmero aleatrio menor ou igual a N/n ao acaso. Depois so sorteados animais em intervalos regulares iguais a N/n. Exemplo: para obter uma amostra de 300 (n) animais com mais de 2 anos, em um rebanho composto por 6000 (N) animais com mais de 2 anos de idade. Sortear um nmero ao acaso entre 1 e 20 (N/n = 6000/300 = 20), por exemplo 05. Sangrar o animal n 05 pela ordem de passagem no brete; depois, testar mais 299 animais em intervalos de 20: 25, 45, 65, 85, 105, 125, 145, 165, ...(at 6.000).

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

LEGISLAO PNCEBT

Contedo
Instruo Normativa Ministerial no 02/2001 ................ 141
Institui o PNCEBT

Instruo Normativa SDA no 06/2004 ............................. 142

Regulamento Tcnico do PNCEBT

Portaria SDA no 10/2003 ....................................................... 176

Institui o Comit Cientfico Consultivo sobre brucelose e tuberculose animal (CCBT)

Portaria DDA no 73/2003 ....................................................... 177

Estabelece a composio do Comit Cientfico Consultivo sobre brucelose (B. abortus) e tuberculose animal (M. bovis)

Portaria DDA no 11/2004 ....................................................... 178

Exclui o Estado de Santa Catarina da obrigatoriedade de vacinao das fmeas bovinas e bubalinas contra a brucelose

Instruo Normativa SDA no 59/2004 ............................... 179

Altera o artigo 32 do Regulamento Tcnico do PNCEBT Obs: 1 - O contedo aqui apresentado no substitui os textos originais publicados no DOU. 2 - Outras normas complementares podem no constar desta coletnea.

Instruo Normativa no 2, de 10 de janeiro de 2001

O MINISTRO DE ESTADO DA AGRICULTURA E DO ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 87, pargrafo nico, inciso II, da Constituio, tendo em vista o disposto no Regulamento de Defesa Sanitria Animal, aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, e o que consta do Processo n 21000.006179/2000-97, resolve:
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Art. 1 Instituir o Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal. Art. 2 Atribuir ao Secretrio de Defesa Agropecuria a incumbncia de baixar o Regulamento Tcnico do Programa e expedir as instrues necessrias plena implementao das atividades de combate s supracitadas doenas no Pas. Art. 3 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao. Art. 4 Fica revogada a Portaria n 23, de 20 de janeiro de 1976.
MARCUS VINICIUS PRATINI DE MORAES
Publicada no DOU n 08, de 11 de janeiro de 2001, Seo I, p. 5

Instruo Normativa SDA no 06, de 8 de janeiro de 2004

O SECRETRIO DE DEFESA AGROPECURIA, DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 15, inciso II, do Decreto 4.629, de 21 de maro de 2003, tendo em vista o disposto no Regulamento do Servio de Defesa Sanitria Animal, aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, Considerando a necessidade de padronizar e garantir a qualidade dos instrumentos e das aes profilticas, de diagnstico, de saneamento de rebanhos e de vigilncia sanitria ativa, relacionadas ao combate brucelose e tuberculose, Considerando a necessidade de definir o papel dos rgos pblicos de defesa e inspeo sanitria animal no combate a essas enfermidades e sua integrao com os pecuaristas, com instituies de ensino ou pesquisa, com mdicos veterinrios que atuam no setor privado e com laboratrios no pertencentes rede do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, e o que consta do Processo 21000.012771/2003-71, resolve: Art. 1 Aprovar o Regulamento Tcnico do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal.
142

Art. 2 Subdelegar ao Diretor do Departamento de Defesa Animal competncia, no que couber, para baixar atos complementares a este Regulamento. Art. 3 Esta Instruo Normativa entra em vigor na data de sua publicao. Art. 4 Fica revogada a Instruo Normativa SDA n 2, de 10 de janeiro de 2001.
MAAO TADANO
Publicada no DOU n 07, de 12 de janeiro de 2004, Seo 1, p. 6-10.

Regulamento Tcnico do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal

Captulo I Das Definies Art. 1 Para efeitos deste Regulamento, considera-se: I brucelose: zoonose causada pela Brucella abortus, caracterizada por causar infertilidade e aborto no final da gestao, afetando principalmente as espcies bovina e bubalina; II tuberculose: zoonose de evoluo crnica, causada pelo Mycobacterium bovis, que provoca leses granulomatosas, afetando principalmente as espcies bovina e bubalina; III servio de defesa oficial: o servio de defesa sanitria animal, nos nveis federal, estadual ou municipal; IV unidade local do servio de defesa oficial: escritrio do servio de defesa animal estadual que, sob coordenao de mdico veterinrio oficial, responsvel pelas aes de vigilncia e ateno veterinria em um ou mais municpios; V servio de inspeo oficial: o servio de inspeo de produtos de origem animal, nos nveis federal, estadual ou municipal; VI sacrifcio: o abate sanitrio de animais reagentes aos testes de diagnstico para brucelose ou tuberculose, realizado em estabelecimento sob servio de inspeo oficial, de acordo com a legislao pertinente;
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VII destruio: o procedimento de eliminao de animais reagentes aos testes de diagnstico para brucelose ou tuberculose no prprio estabelecimento de criao, obedecendo a critrios definidos pelo Departamento de Defesa Animal; VIII estabelecimento de criao: local onde so criados bovinos ou bubalinos sob condies comuns de manejo; IX estabelecimento de criao em certificao: estabelecimento de criao que est cumprindo os procedimentos de saneamento previstos neste Regulamento, visando obter o certificado de livre de brucelose e tuberculose; X estabelecimento de criao livre de brucelose: estabelecimento de criao que obteve certificado de livre de brucelose aps concluir saneamento para esta enfermidade e mantm rotina de diagnstico prevista neste Regulamento; XI estabelecimento de criao livre de tuberculose: estabelecimento de criao que obteve certificado de livre de tuberculose aps concluir saneamento para esta enfermidade e mantm rotina de diagnstico, prevista neste Regulamento; XII estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose: estabelecimento de criao especializado em pecuria de corte que mantm rotina de diagnstico, em fmeas com idade igual ou superior a 24 (vinte e quatro) meses e em machos reprodutores, de acordo com o previsto neste Regulamento; XIII laboratrio credenciado: laboratrio que recebe, por delegao de competncia do Departamento de Defesa Animal, ato de credenciamento para realizao de diagnstico laboratorial de brucelose ou tuberculose; XIV laboratrio oficial credenciado: laboratrio de instituio federal, estadual ou municipal, que tenha sido credenciado pelo Departamento de Defesa Animal, para realizar diagnstico laboratorial de brucelose ou tuberculose; XV laboratrio de referncia: laboratrio pertencente rede do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento; XVI mdico veterinrio cadastrado: mdico veterinrio que atua no setor privado, cadastrado no servio de defesa oficial estadual para executar a vacinao contra a brucelose ou outras
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atividades previstas no Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal; XVII mdico veterinrio habilitado: o mdico veterinrio que atua no setor privado e que, aprovado em Curso de Treinamento em Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose, reconhecido pelo Departamento de Defesa Animal, est apto a executar determinadas atividades previstas no Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal, sob a superviso do servio de defesa oficial estadual e federal; XVIII mdico veterinrio oficial: mdico veterinrio do servio de defesa oficial; XIX proprietrio: todo aquele que seja possuidor, depositrio ou, a qualquer ttulo, mantenha em seu poder ou sob sua guarda bovinos ou bubalinos; XX rebanho: conjunto de animais criados sob condies comuns de manejo, em um mesmo estabelecimento de criao; XXI animais de rebanho geral: animais no registrados em entidades reconhecidas pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento; XXII animais registrados: animais de valor zootcnico, registrados em entidades reconhecidas pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento; XXIII teste de rotina: o primeiro teste de diagnstico para brucelose ou tuberculose, usualmente aplicado em grande nmero de animais com condio sanitria desconhecida para aquelas enfermidades, visando identificar animais com suspeita de infeco ou obter diagnstico conclusivo; XXIV teste(s) confirmatrio(s): um ou mais testes utilizados para obter diagnstico conclusivo em animais que apresentaram previamente reao em teste de rotina; XXV teste de rebanho: um ou mais testes de diagnstico aplicados simultaneamente em todos os animais presentes num rebanho, excluindo-se aqueles que, de acordo com este Regulamento, no devem ser submetidos a testes de diagnstico para brucelose ou tuberculose;
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XXVI prevalncia: nmero total de animais infectados em um determinado momento, dividido pelo nmero total de animais em risco de adquirir a infeo, no mesmo momento; XXVII incidncia: nmero de novos casos de animais infectados em uma determinada populao, durante um perodo de tempo especificado; XXVIII sensibilidade de diagnstico: capacidade de um teste de diagnstico classificar como positivos animais infectados; XXIX especificidade de diagnstico: capacidade de um teste de diagnstico classificar como negativos animais no infectados. Captulo II Dos Objetivos do Programa e da Estratgia de Atuao Art. 2 O Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal tem como objetivos especficos: I baixar a prevalncia e a incidncia da brucelose e da tuberculose; II certificar um nmero elevado de estabelecimentos de criao, nos quais o controle e erradicao destas enfermidades sejam executados com rigor e eficcia, objetivando aumentar a oferta de produtos de baixo risco para a sade pblica. Art. 3 A estratgia de atuao do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal baseada na adoo de procedimentos de defesa sanitria animal compulsrios, complementados por medidas de adeso voluntria que visam proteger a sade pblica e desenvolver os fundamentos de aes futuras para a erradicao dessas enfermidades. Considerando a epidemiologia da brucelose e da tuberculose, as medidas sanitrias deste Programa so principalmente aplicadas populao de bovinos e bubalinos, devendo ser destacadas: I a vacinao obrigatria de fmeas, entre trs e oito meses de idade, contra a brucelose, que visa baixar a prevalncia e a incidncia desta enfermidade; II o controle do trnsito interestadual de animais destinados reproduo e da participao de machos e fmeas reprodutores
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em exposies, feiras, leiles e outras aglomeraes animais, com o objetivo de evitar a disseminao da brucelose e da tuberculose; III a certificao voluntria de estabelecimentos de criao livres de brucelose e tuberculose, nos quais so aplicadas rigorosas medidas de saneamento e vigilncia sanitria ativa, que contribuiro para combater essas doenas, para melhorar o padro sanitrio dos produtos de origem animal, principalmente do leite e derivados, e para agregar valor aos produtos da pecuria; IV a certificao voluntria de estabelecimentos de criao monitorados para brucelose e tuberculose, que procura os mesmos objetivos definidos no inciso anterior, porm utilizando procedimentos de gesto de risco adaptados s condies de manejo e ao tamanho dos rebanhos de corte. Art. 4 Para execuo de atividades previstas neste Programa, o servio de defesa oficial habilitar mdicos veterinrios que atuam no setor privado e credenciar laboratrios que no pertencem rede do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, sendo necessrio capacitar os profissionais envolvidos e padronizar as aes por eles desenvolvidas. 1 Para habilitao de mdicos veterinrios, sero reconhecidos e padronizados cursos especficos de treinamento em mtodos de diagnstico e controle da brucelose e tuberculose, realizados em instituies de ensino ou pesquisa em medicina veterinria. 2 O Departamento de Defesa Animal credenciar laboratrios privados e oficiais para garantir capacidade de diagnstico adequada s necessidades deste Programa. Art. 5 A eficcia das aes sanitrias depende da qualidade e padronizao dos mtodos de diagnstico e dos instrumentos profilticos utilizados. Este Programa contempla e padroniza tcnicas disponveis no pas e referenciadas pela Organizao Mundial de Sade Animal (OIE), que garantem sensibilidade e especificidade de diagnstico adequadas. Prev-se a possibilidade de introduzir novos testes de diagnstico e vacinas, de forma a acompanhar os avanos cientficos e tecnolgicos. Art. 6 A credibilidade das medidas propostas neste Programa est diretamente associada s aes de monitoramento
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e fiscalizao do servio de defesa oficial, realizadas em colaborao com o servio de inspeo oficial. O servio de defesa oficial certificar a qualidade e eficcia das medidas sanitrias, atuando em pontos crticos do Programa. Captulo III Da Vacinao Contra a Brucelose Art. 7 obrigatria a vacinao de todas as fmeas das espcies bovina e bubalina, na faixa etria de trs a oito meses. 1 A marcao das fmeas vacinadas obrigatria, utilizando-se ferro candente, no lado esquerdo da cara, com um V, conforme figura a seguir, acompanhado do algarismo final do ano de vacinao.

2 Excluem-se do disposto no 1 as fmeas destinadas ao Registro Genealgico, quando devidamente identificadas, e as fmeas identificadas individualmente por meio de sistema aprovado pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Art. 8 A vacinao ser efetuada sob a responsabilidade tcnica de mdico veterinrio cadastrado, utilizando dose nica de vacina viva liofilizada, elaborada com amostra 19 de Brucella abortus (B19). Pargrafo nico. Onde no houver mdicos veterinrios cadastrados ou em regies onde eles no atenderem plenamente a demanda do PNCEBT, o servio de defesa oficial poder assumir a responsabilidade tcnica ou mesmo a execuo da vacinao. Art. 9 O cadastro de mdicos veterinrios ser gratuito. Art. 10. proibida a utilizao da vacina B19 em machos de qualquer idade e em fmeas com idade superior a 8 (oito) meses.
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Art. 11. obrigatria a comprovao da vacinao das bezerras na unidade local do servio de defesa oficial, no mnimo uma vez por semestre. Pargrafo nico. A comprovao da vacinao ser feita por meio de atestado emitido por mdico veterinrio cadastrado, de acordo com normas e usando modelo a ser definido pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 12. A vacinao de fmeas com idade superior a oito meses poder ser autorizada com imungenos que no interferem nos testes de diagnstico, nas condies definidas pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 13. O Diretor do Departamento de Defesa Animal poder alterar as estratgias e normas de vacinao de acordo com a evoluo da situao epidemiolgica dos Estados ou parte deles. Captulo IV Da Produo, Controle e Comercializao de Vacinas Contra a Brucelose Art. 14. A produo e o controle de todas as partidas de vacina liofilizada obedecero s normas do Departamento de Defesa Animal. Art. 15. Para comercializao de vacina ser exigida a apresentao de receita emitida por mdico veterinrio cadastrado, a qual ficar retida no estabelecimento comercial disposio da fiscalizao do servio de defesa oficial. Pargrafo nico. O estabelecimento responsvel pela comercializao da vacina fica obrigado a comunicar a compra, venda e estoque de vacina, na unidade local do servio de defesa oficial estadual, utilizando modelo estabelecido pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 16. A demanda anual de vacinas em cada Estado dever ser notificada pelo servio de defesa oficial estadual ao servio de defesa oficial federal no Estado, at o ms de novembro do ano anterior.
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Captulo V Da Produo, Controle e Distribuio de Antgenos para Diagnstico de Brucelose Art. 17. Os antgenos a serem utilizados nos testes sorolgicos para diagnstico de brucelose sero o antgeno acidificado tamponado, o antgeno para soroaglutinao lenta e o antgeno para o teste do anel em leite, produzidos e controlados segundo normas aprovadas pelo Departamento de Defesa Animal. Pargrafo nico. Outros antgenos podero ser utilizados para diagnstico de brucelose, aps aprovao e nas condies definidas pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 18. A distribuio de antgenos ser controlada pelo servio de defesa oficial, devendo os mesmos ser fornecidos somente a mdicos veterinrios habilitados, a laboratrios credenciados, a laboratrios oficiais credenciados e a instituies de ensino ou pesquisa. 1 O mdico veterinrio habilitado responsvel pela aquisio do antgeno dever fornecer ao servio de defesa oficial relatrio de utilizao do mesmo, segundo condies a serem definidas pelo Departamento de Defesa Animal. 2 A partir da data de publicao deste Regulamento, at 31 de julho de 2004, mdicos veterinrios cadastrados sero autorizados a adquirir antgeno para diagnstico sorolgico de brucelose, respeitando as condies estabelecidas pelo Departamento de Defesa Animal. Captulo VI Do Diagnstico Indireto da Brucelose Art. 19. A realizao de testes de diagnstico indireto para brucelose dever obedecer a este Regulamento e seguir recomendaes complementares determinadas pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 20. Os testes sorolgicos de diagnstico para brucelose sero realizados em:
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I fmeas com idade igual ou superior a 24 meses, vacinadas entre trs e oito meses de idade; II fmeas no vacinadas e machos, com idade superior a oito meses. 1 Fmeas submetidas a testes sorolgicos de diagnstico para brucelose no intervalo de 15 dias antes do parto at 15 dias aps o parto devero ser retestadas entre 30 a 60 dias aps o parto. 2 Excluem-se dos testes sorolgicos de diagnstico para brucelose os animais castrados. Art. 21. O teste do Antgeno Acidificado Tamponado (AAT) ser utilizado como teste de rotina, de acordo com as seguintes condies e critrios: I ser realizado por mdico veterinrio habilitado, por laboratrio credenciado, por laboratrio oficial credenciado ou, at 31 de julho de 2004, por mdico veterinrio cadastrado; II a presena de qualquer aglutinao classificar o animal como reagente ao teste; III animais no reagentes so considerados negativos; IV animais reagentes podero ser submetidos a teste confirmatrio ou, a critrio do mdico veterinrio habilitado, ser destinados ao sacrifcio ou destruio, conforme o disposto no Captulo IX. Art. 22. O teste do 2-Mercaptoetanol (2-ME) ser utilizado como teste confirmatrio, em animais reagentes ao teste do AAT, de acordo com as seguintes condies e critrios: I ser realizado por laboratrio credenciado ou laboratrio oficial credenciado; II a interpretao do teste obedecer s Tabelas 1 e 2:

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Tabela 1 Interpretao do teste do 2-ME para fmeas com idade igual ou superior a 24 meses, vacinadas entre trs e oito meses de idade Teste de soroaglutinao lenta (UI/ml) < 50 > 100 > 25
UI - Unidade Internacional

Teste do 2-ME (UI/ml) < 25 < 25 > 25

Interpretao negativo inconclusivo positivo

Tabela 2 Interpretao do teste do 2-ME para fmeas no vacinadas e machos, com idade superior a oito meses Teste de soroaglutinao lenta (UI/ml) < 25 > 50 > 25
UI - Unidade Internacional

Teste do 2-ME (UI/ml) < 25 < 25 > 25

Interpretao negativo inconclusivo positivo

III animais reagentes inconclusivos podero ser, a critrio do mdico veterinrio habilitado: a) submetidos ao teste de fixao de complemento; ou b) retestados em um intervalo de 30 a 60 dias, usando o teste do 2-ME, sendo classificados como reagentes positivos se apresentarem, no reteste, resultado positivo ou segundo resultado inconclusivo; ou c) destinados ao sacrifcio ou destruio, conforme o disposto no Captulo IX. Art. 23. O teste de Fixao de Complemento ser utilizado como teste confirmatrio, realizado e interpretado de acordo com recomendaes do Departamento de Defesa Animal, e dever ser: I realizado por laboratrio oficial credenciado;
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II utilizado para o trnsito internacional de animais; III utilizado para teste de animais reagentes ao teste do AAT ou de animais que apresentaram resultado inconclusivo ao teste do 2-ME. Art. 24. O Teste do Anel em Leite (TAL) poder ser utilizado pelo servio de defesa oficial, ou por mdico veterinrio habilitado, para monitoramento de estabelecimentos de criao certificados como livres de brucelose, ou para outros fins, segundo critrios estabelecidos pelo servio de defesa oficial. 1 Considera-se o resultado do teste como positivo quando a intensidade da cor do anel for igual ou maior que a da coluna de leite. 2 Considera-se o resultado do teste como negativo quando a intensidade da cor do anel for menor que a da coluna de leite. 3 Em casos de positividade, os animais do estabelecimento de criao devero ser submetidos a testes sorolgicos individuais para diagnstico de brucelose. Art. 25. Outros testes de diagnstico para brucelose podero ser utilizados para complementar ou substituir os testes especificados nos arts. 21, 22, 23 e 24, aps aprovao e nas condies estabelecidas pelo Departamento de Defesa Animal. Captulo VII Da Produo, Controle e Distribuio de Tuberculinas Art. 26. Sero utilizadas somente tuberculinas PPD (Derivado Protico Purificado) bovina e aviria, produzidas e controladas de acordo com normas estabelecidas pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 27. O controle da distribuio de tuberculinas ser efetuado pelo servio de defesa oficial, devendo as mesmas ser fornecidas somente a mdicos veterinrios habilitados e a instituies de ensino ou pesquisa.
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 1 O mdico veterinrio habilitado responsvel pela aquisio da tuberculina dever fornecer ao servio de defesa oficial relatrio de utilizao da mesma, segundo condies a serem definidas pelo Departamento de Defesa Animal. 2 A partir da data de publicao deste Regulamento at 31 de julho de 2004, mdicos veterinrios cadastrados sero autorizados a adquirir tuberculina, respeitando as condies estabelecidas pelo Departamento de Defesa Animal. Captulo VIII Do Diagnstico Indireto da Tuberculose Art. 28. Para o diagnstico indireto da tuberculose, sero utilizados testes alrgicos de tuberculinizao intradrmica em bovinos e bubalinos com idade igual ou superior a seis semanas, a serem realizados por mdico veterinrio habilitado ou, at 31 de julho de 2004, por mdico veterinrio cadastrado. Pargrafo nico. Fmeas submetidas a teste de diagnstico para tuberculose no intervalo de 15 dias antes do parto at 15 dias aps o parto devero ser retestadas entre 60 a 90 dias aps o parto, obedecendo a um intervalo mnimo de 60 dias entre testes. Art. 29. obrigatria a utilizao de material prprio para tuberculinizao, seguindo as determinaes do Departamento de Defesa Animal. Art. 30. O Teste Cervical Simples (TCS) o teste de rotina recomendado, observando-se as seguintes condies e critrios: I deve ser realizado com inoculao intradrmica de tuberculina PPD bovina, na dosagem de 0,1 mL, na regio cervical ou na regio escapular de bovinos, devendo a inoculao ser efetuada de um mesmo lado de todos os animais do estabelecimento de criao; II o local da inoculao ser demarcado por tricotomia e a espessura da dobra da pele medida com cutmetro antes da inoculao;
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III aps 72 horas, mais ou menos 6 horas da inoculao, ser realizada nova medida da dobra da pele, no local de inoculao da tuberculina PPD bovina; IV o aumento da espessura da dobra da pele (B) ser calculado subtraindo-se da medida da dobra da pele 72 horas, mais ou menos 6 horas, aps a inoculao, a medida da dobra da pele no dia da inoculao da tuberculina PPD bovina; V os resultados em bovinos sero interpretados de acordo com a Tabela 3:
Tabela 3 Interpretao do teste cervical simples em bovinos Caractersticas da reao B (mm) 0 a 1,9 2,0 a 3,9 2,0 a 3,9 > 4,0 Sensibilidade pouca dor muita dor Consistncia endurecida macia Outras alteraes delimitada exsudato, necrose Interpretao negativo inconclusivo positivo positivo

VI os animais reagentes inconclusivos podero ser submetidos a teste confirmatrio, em um intervalo de 60 a 90 dias ou, a critrio do mdico veterinrio habilitado, ser considerados positivos e destinados ao sacrifcio ou destruio, conforme o disposto no Captulo IX; Art. 31. O teste da prega caudal (TPC) pode ser utilizado como teste de rotina, exclusivamente em estabelecimentos de criao especializados na pecuria de corte e de acordo com as seguintes condies e critrios: I a tuberculina (PPD) bovina ser inoculada por via intradrmica na dosagem de 0,1 mL, seis a dez centmetros da base da cauda, na juno das peles pilosa e glabra, devendo a inoculao ser efetuada de um mesmo lado da prega caudal de todos os animais do estabelecimento de criao;
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II a leitura e interpretao dos resultados sero realizadas 72 horas, mais ou menos 6 horas, aps a inoculao da tuberculina, comparando-se a prega inoculada com a prega do lado oposto, por avaliao visual e palpao; III qualquer aumento de espessura na prega inoculada classificar o animal como reagente; IV os animais reagentes podero ser submetidos a teste confirmatrio, num intervalo de 60 a 90 dias, ou, a critrio do mdico veterinrio habilitado, ser destinados ao sacrifcio ou destruio, conforme o disposto no Captulo IX. Art. 32. O Teste Cervical Comparativo (TCC) o teste confirmatrio utilizado em animais inconclusivos ao Teste Cervical Simples e reagentes ao Teste da Prega Caudal, descritos nos arts. 30 e 31. tambm recomendado como teste de rotina para estabelecimentos de criao com ocorrncia de reaes inespecficas, estabelecimentos certificados como livres e para estabelecimentos de criao de bubalinos, visando garantir boa especificidade diagnstica, devendo ser utilizado de acordo com as seguintes condies e critrios: I as inoculaes das tuberculinas PPD aviria e bovina sero realizadas por via intradrmica, na dosagem de 0,1 mL, na regio cervical ou na regio escapular, a uma distncia entre as duas inoculaes de 15 a 20 cm, sendo a PPD aviria inoculada cranialmente e a PPD bovina caudalmente, devendo a inoculao ser efetuada de um mesmo lado de todos os animais do estabelecimento de criao; II os locais das inoculaes sero demarcados por tricotomia e a espessura da dobra da pele medida com cutmetro, antes da inoculao; III aps 72 horas, mais ou menos 6 horas, da inoculao, ser realizada nova medida da dobra da pele, no local de inoculao das tuberculinas PPD aviria e bovina; IV o aumento da espessura da dobra da pele ser calculado subtraindo-se da medida da dobra da pele 72 horas, mais ou menos 6 horas, aps a inoculao, a medida da dobra da pele no dia da
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inoculao para a tuberculina PPD aviria (A) e a tuberculina PPD bovina (B). A diferena de aumento da dobra da pele provocada pela inoculao da tuberculina PPD bovina (B) e da tuberculina PPD aviria (A) ser calculada subtraindo-se A de B. V os resultados do teste comparativo em bovinos sero interpretados de acordo com a Tabela 4:
Tabela 4 Interpretao do teste cervical comparativo em bovinos

B - A (mm) B < 2,0 B < A B > A B > A B > A <0 0,0 a 1,9 2,0 a 3,9 > 4,0

Interpretao negativo negativo negativo inconclusivo positivo

VI os animais reagentes inconclusivos podero ser submetidos a um segundo teste cervical comparativo, num intervalo mnimo de 60 dias entre os testes, ou, a critrio do mdico veterinrio habilitado, ser considerados positivos e destinados ao sacrifcio ou destruio, conforme disposto no Captulo IX; VII os animais que apresentarem dois resultados inconclusivos consecutivos sero classificados como reagentes positivos; VIII os resultados em bubalinos podero ser interpretados de acordo com a Tabela 4, at a determinao de critrios de interpretao especficos para essa espcie. Art. 33. Outros testes de diagnstico para tuberculose podero ser utilizados para complementar ou substituir os testes especificados nos arts. 30, 31 e 32, aps aprovao e nas condies estabelecidas pelo Departamento de Defesa Animal.

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Captulo IX Dos Animais Reagentes Positivos aos Testes de Diagnstico para Brucelose ou Tuberculose Art. 34. Animais reagentes positivos a teste de diagnstico para brucelose ou tuberculose sero marcados a ferro candente no lado direito da cara com um P contido num crculo de oito centmetros de dimetro, conforme figura a seguir.

Art. 35. Animais reagentes positivos devero ser isolados de todo o rebanho e sacrificados no prazo mximo de 30 (trinta) dias aps o diagnstico, em estabelecimento sob servio de inspeo oficial, indicado pelo servio de defesa oficial federal ou estadual. 1 Animais reagentes positivos devero ser imediatamente afastados da produo leiteira. 2 O servio de inspeo oficial do estabelecimento onde ser realizado o sacrifcio dever ser notificado da chegada dos animais com antecedncia mnima de 12 horas, de forma a permitir a adoo das medidas previstas na legislao pertinente. 3 Animais reagentes positivos devero chegar ao estabelecimento de abate acompanhados de Guia de Trnsito Animal (GTA), informando condio de positivo, conforme previsto na legislao pertinente. Art. 36. Na impossibilidade de sacrifcio em estabelecimento sob servio de inspeo oficial, indicado pelo servio de defesa oficial federal e estadual, os animais sero destrudos no estabelecimento de criao, sob fiscalizao direta da unidade local
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do servio de defesa oficial, respeitando procedimentos estabelecidos pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 37. proibido o egresso de animais reagentes positivos e de animais reagentes inconclusivos do estabelecimento de criao, salvo quando comprovadamente destinados ao sacrifcio em estabelecimento sob servio de inspeo oficial, indicado pelo servio de defesa oficial federal ou estadual. Captulo X Da Habilitao e da Capacitao de Mdicos Veterinrios Art. 38. As Delegacias Federais de Agricultura, em conjunto com os servios de defesa sanitria animal dos Estados, habilitaro mdicos veterinrios que atuam no setor privado para a realizao de testes de diagnstico e atuao no processo de certificao de propriedades, na respectiva Unidade da Federao. Art. 39. O mdico veterinrio habilitado dever: I estar em situao regular com o Conselho de Medicina Veterinria da(s) Unidade(s) Federativa(s) de atuao; II ter sido aprovado em Curso de Treinamento em Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose, reconhecido pelo Departamento de Defesa Animal; III cumprir este Regulamento e outras normas complementares estabelecidas pelo Departamento de Defesa Animal; IV possuir infra-estrutura e material adequado execuo dos testes de diagnstico para brucelose e tuberculose, conforme determinao do Departamento de Defesa Animal; V fornecer informaes e apresentar relatrios de atividade, relacionados com o Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal, na unidade local do servio de defesa oficial, com periodicidade e em modelos estabelecidos pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 40. A habilitao ser suspensa pela Delegacia Federal de Agricultura em caso de descumprimento deste Regulamento
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ou de outras normas estabelecidas em legislao sanitria do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Art. 41. Mdicos veterinrios oficiais devero ser capacitados e aprovados em Curso de Treinamento em Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose, reconhecido pelo Departamento de Defesa Animal. Captulo XI Do Reconhecimento de Cursos de Treinamento para Habilitao e Capacitao de Mdicos Veterinrios Art. 42. As instituies de ensino ou pesquisa em medicina veterinria interessadas em oferecer Cursos de Treinamento em Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose, com o objetivo de capacitar e permitir a habilitao de mdicos veterinrios que desejem participar do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal devero preencher todos os requisitos definidos pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 43. Cada Curso de Treinamento em Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose ter a durao mnima de 40 horas, no podendo ser excedido o nmero de 20 participantes. Art. 44. As matrias terico-prticas lecionadas no Curso de Treinamento em Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose devero estar em conformidade com este Regulamento e com outras normas complementares estabelecidas pelo Departamento de Defesa Animal. Art. 45. A aprovao no Curso de Treinamento em Mtodos de Diagnstico e Controle da Brucelose e Tuberculose fica condicionada avaliao terico-prtica. Art. 46. O Departamento de Defesa Animal realizar seminrios sobre o Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e da Tuberculose Animal, com o objetivo de habilitar mdicos veterinrios instrutores dos cursos de treinamento em
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mtodos de diagnstico e controle da brucelose e tuberculose e de padronizar procedimentos. Captulo XII Do Credenciamento de Laboratrios para o Diagnstico de Brucelose e de Tuberculose Art. 47. O Departamento de Defesa Animal credenciar laboratrios privados, aos quais sero delegadas funes de diagnstico para brucelose ou tuberculose, cabendo-lhe determinar quais os testes de diagnstico que sero realizados nesses laboratrios e quais os requisitos necessrios para obter o credenciamento. Art. 48. O Departamento de Defesa Animal credenciar laboratrios oficiais, aos quais sero delegadas funes de diagnstico para brucelose ou tuberculose, cabendo-lhe determinar quais os testes de diagnstico que sero realizados nesses laboratrios e quais os requisitos necessrios para obter o credenciamento. Captulo XIII Dos Laboratrios de Referncia Art. 49. O Departamento de Defesa Animal designar laboratrios de referncia para brucelose e tuberculose que devero: I ser responsveis pela produo de antgenos de brucelose e tuberculinas de referncia ou para utilizao em programas ou em situaes excepcionais de interesse do Departamento de Defesa Animal; II realizar tcnicas diretas e indiretas de diagnstico para brucelose e tuberculose em situaes a serem definidas pelo Departamento de Defesa Animal; III efetuar o controle oficial das partidas de antgenos de brucelose e tuberculinas produzidas no pas; IV controlar a qualidade das vacinas comerciais contra a brucelose; V realizar o isolamento e a caracterizao epidemiolgica de amostras de campo em situaes a serem definidas pelo Departamento de Defesa Animal;
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VI executar e colaborar em trabalhos de pesquisa e avaliar novos mtodos de diagnstico e novas vacinas. Art. 50. Os laboratrios de referncia devero fornecer amostras padro para a produo de antgenos, alrgenos e imungenos. Captulo XIV Das Disposies Gerais para Estabelecimento de Criao Certificado, ou em Certificao, para a Condio de Livre de Brucelose e de Tuberculose Art. 51. O certificado de estabelecimento de criao livre de brucelose ou de tuberculose ser emitido pela Delegacia Federal de Agricultura. Art. 52. A certificao de estabelecimento de criao livre de brucelose e de tuberculose de adeso voluntria, devendo ser formalmente solicitada na unidade local do servio de defesa oficial, na qual o estabelecimento de criao encontra-se cadastrado. Art. 53. O estabelecimento de criao certificado, ou em certificao, para a condio de livre de brucelose e tuberculose fica obrigado a: I cumprir medidas de controle e erradicao da brucelose e da tuberculose, previstas neste Regulamento; II ter superviso tcnica de mdico veterinrio habilitado; III utilizar sistema de identificao individual dos animais, indicado pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento ou, na ausncia deste, possuir sistema de identificao animal prprio, desde que aprovado pelo servio de defesa oficial; IV custear as atividades de controle e erradicao da brucelose e da tuberculose. Art. 54. O ingresso de animais em estabelecimento de criao certificado, ou em certificao, para a condio de livre de brucelose e tuberculose fica condicionado a:
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I terem origem em estabelecimento de criao livre de brucelose ou realizar 2 (dois) testes de diagnstico para brucelose, cumprindo os seguintes requisitos: a) os dois testes devero ter resultado negativo; b) o primeiro teste dever ser realizado durante os 30 (trinta) dias que antecedem o embarque e o segundo teste at 30 (trinta) dias aps o ingresso no estabelecimento de criao de destino, num intervalo mnimo de 30 dias entre testes, sendo que os animais devero permanecer isolados desde o ingresso no estabelecimento at o segundo resultado negativo; c) caso no seja possvel manter os animais isolados no estabelecimento de criao de destino, os dois testes podero ser efetuados durante os 60 dias que antecedem o embarque, num intervalo de 30 a 60 dias entre testes; d) os testes sero realizados por mdico veterinrio habilitado, por laboratrio credenciado ou por laboratrio oficial credenciado; e) fmeas de at 24 meses de idade, vacinadas entre trs e oito meses de idade, s podem ingressar no estabelecimento de criao se forem provenientes de estabelecimento de criao livre de brucelose. II - terem origem em estabelecimento de criao livre de tuberculose ou realizarem dois testes de diagnstico para tuberculose, cumprindo os seguintes requisitos: a) os dois testes devero ter resultado negativo; b) o primeiro teste dever ser realizado durante os 30 (trinta) dias que antecedem o embarque e o segundo teste at 90 dias aps o ingresso no estabelecimento de criao de destino, num intervalo mnimo de 60 dias entre testes, sendo que os animais devero permanecer isolados desde o ingresso no estabelecimento at o segundo resultado negativo; c) caso no seja possvel manter os animais isolados no estabelecimento de criao de destino, os dois testes podero ser efetuados durante os 90 dias que antecedem o embarque, num intervalo mnimo de 60 dias entre testes; d) os testes sero realizados por mdico veterinrio habilitado.
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Art. 55. O mdico veterinrio oficial poder, em qualquer momento e sem nus para o proprietrio, colher material biolgico para testes de diagnstico para brucelose ou tuberculose e acompanhar ou realizar testes de diagnstico para tuberculose, com o objetivo de verificar e validar a condio sanitria do estabelecimento de criao certificado, ou em certificao. Captulo XV Do Saneamento para Certificao de Estabelecimento de Criao Livre de Brucelose Art 56. O estabelecimento de criao que entra em saneamento para obter certificado de livre de brucelose deve cumprir as medidas seguintes: I realizar testes de rebanho para diagnstico de brucelose, num intervalo de 30 a 90 dias entre testes, at obter um resultado negativo, sendo que os animais reagentes positivos devero ser sacrificados ou destrudos, conforme o disposto no Captulo IX; II o saneamento termina aps obter-se 3 (trs) testes de rebanho negativos consecutivos, num intervalo de 90 a 120 dias entre o primeiro e o segundo testes e de 180 a 240 dias entre o segundo e o terceiro testes; III animais com reao inconclusiva aos testes de diagnstico para brucelose devero ser isolados de todo o rebanho e retestados 30 a 60 dias aps o teste anterior; IV a colheita de sangue para realizao do terceiro teste de rebanho, especificado no inciso II, dever ser acompanhada por mdico veterinrio do servio de defesa oficial estadual e os testes devero ser efetuados em laboratrio oficial credenciado, cabendo ao mdico veterinrio habilitado informar unidade local do servio de defesa oficial a data da colheita de sangue, com antecedncia mnima de 15 dias.

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Captulo XVI Da Certificao de Estabelecimento de Criao Livre de Brucelose Art. 57. O certificado de estabelecimento de criao livre de brucelose ser emitido pela Delegacia Federal de Agricultura, condicionado ao cumprimento dos requisitos seguintes: I todas as fmeas, entre trs e oito meses de idade, devem ser vacinadas contra a brucelose com vacina B19; II devem submeter-se a testes de diagnstico para brucelose todos os animais especificados no art. 20; III obter trs testes de rebanho negativos consecutivos, realizados com intervalo de 90 a 120 dias entre o primeiro e o segundo testes e de 180 a 240 dias entre o segundo e o terceiro testes. Art. 58. O certificado de estabelecimento de criao livre de brucelose tem validade de 12 (doze) meses. Art. 59. A renovao do certificado de estabelecimento de criao livre de brucelose dever ser requerida anualmente na unidade local do servio de defesa oficial, apresentando resultado negativo nos testes de diagnstico para brucelose, realizados em todos os animais especificados no art. 20. Art. 60. O mdico veterinrio habilitado dever informar unidade local do servio de defesa oficial a data de colheita de sangue para realizao dos testes mencionados no art. 59, com antecedncia mnima de 15 dias. Art. 61. A renovao do certificado pode ser prorrogada por um perodo mximo de 90 dias, quando da necessidade de realizar novo teste de diagnstico para brucelose em animais que apresentem resultado inconclusivo no reteste anual. Art. 62. A deteco de um ou mais animais reagentes positivos em teste realizado por mdico veterinrio habilitado ou por mdico veterinrio oficial ou aps confirmao de suspeita
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clnica resultar na suspenso temporria do certificado de estabelecimento de criao livre de brucelose. Para retorno condio de livre necessrio obter 2 (dois) testes de rebanho negativos, realizados com intervalo de 30 a 90 dias, sendo o primeiro efetuado 30 a 90 dias aps o sacrifcio ou destruio do ltimo animal reagente positivo. Pargrafo nico. A colheita de sangue para realizao do segundo teste de rebanho, para retorno condio de livre, dever ser acompanhada por mdico veterinrio do servio de defesa oficial estadual e os testes devero ser efetuados em laboratrio oficial credenciado. O mdico veterinrio habilitado dever informar unidade local do servio de defesa oficial a data da colheita de sangue, com antecedncia mnima de 15 dias. Captulo XVII Do Saneamento para Certificao de Estabelecimento de Criao Livre de Tuberculose Art. 63. O estabelecimento de criao que entra em saneamento para obter certificado de livre de tuberculose deve cumprir as medidas seguintes: I realizar testes de rebanho para diagnstico de tuberculose em todos os animais especificados no art. 28, num intervalo de 90 a 120 dias entre testes, at obter um teste de rebanho negativo, sendo os animais reagentes positivos sacrificados ou destrudos, conforme o disposto no Captulo IX; II o saneamento termina aps obter-se trs testes de rebanho negativos consecutivos, num intervalo de 90 a 120 dias entre o primeiro e o segundo testes e de 180 a 240 dias entre o segundo e o terceiro testes; III animais com reaes inconclusivas aos testes de diagnstico para tuberculose devero ser isolados de todo o rebanho e retestados 60 a 90 dias aps o teste anterior; IV a realizao do terceiro teste de rebanho, especificado no inciso II, dever ser acompanhada por mdico veterinrio do servio de defesa oficial estadual, cabendo ao mdico veterinrio
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habilitado informar unidade local do servio de defesa oficial a data do teste, com antecedncia mnima de 15 dias. Captulo XVIII Da Certificao de Estabelecimento de Criao Livre de Tuberculose Art. 64. O certificado de estabelecimento de criao livre de tuberculose ser emitido pela Delegacia Federal de Agricultura, condicionado obteno de trs testes de rebanho negativos consecutivos, realizados num intervalo de 90 a 120 dias entre o primeiro e o segundo testes e de 180 a 240 dias entre o segundo e o terceiro testes. Art. 65. O certificado de estabelecimento de criao livre de tuberculose tem validade de 12 (doze) meses. Art. 66. A renovao do certificado de estabelecimento de criao livre de tuberculose dever ser requerida anualmente na unidade local do servio de defesa oficial, apresentando resultado negativo nos testes de diagnstico para tuberculose, realizados em todos os animais com idade igual ou superior a seis semanas. Art. 67. O mdico veterinrio habilitado dever informar unidade local do servio de defesa oficial a data de realizao dos testes mencionados no art. 66, com antecedncia mnima de 15 dias. Art. 68. A renovao do certificado pode ser prorrogada por um perodo mximo de 90 dias quando da necessidade de realizar novo teste de diagnstico para tuberculose em animais que apresentem resultado inconclusivo no reteste anual. Art. 69. A deteco de um ou mais animais reagente(s) positivo(s) em teste realizado por mdico veterinrio habilitado ou por mdico veterinrio oficial, ou aps confirmao de suspeita clnica, resultar na suspenso temporria do certificado de estabelecimento de criao livre de tuberculose. Para retorno condio de livre
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necessrio obter dois testes de rebanho negativos, realizados com intervalo de 90 a 120 dias, sendo o primeiro realizado 90 a 120 dias aps o sacrifcio ou destruio do ltimo animal reagente positivo. Pargrafo nico. A realizao do segundo teste de rebanho, para retorno condio de livre, dever ser acompanhada por mdico veterinrio do servio de defesa oficial estadual. O mdico veterinrio habilitado dever informar unidade local do servio de defesa oficial a data da realizao do teste, com antecedncia mnima de 15 dias. Art. 70. A deteco de leses sugestivas de tuberculose durante a inspeo sanitria post-mortem de animais provenientes de estabelecimento de criao livre de tuberculose implica no envio de amostras de leses suspeitas ao laboratrio indicado pelo Departamento de Defesa Animal e, em se confirmando infeco por Mycobacterium bovis, todos os animais de idade igual ou superior a seis semanas devem ser submetidos a testes de diagnstico para tuberculose, destinando os reagentes positivos ao sacrifcio ou destruio, aplicando-se o disposto no art. 69. Captulo XIX Da Certificao de Estabelecimento de Criao Monitorado para Brucelose e Tuberculose Art. 71. O certificado de estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose ser emitido pela Delegacia Federal de Agricultura. Art. 72. A certificao de estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose de adeso voluntria e restrita a estabelecimentos de criao especializados em pecuria de corte, devendo ser formalmente solicitada na unidade local do servio de defesa oficial, na qual o estabelecimento de criao encontra-se cadastrado. Art. 73. O estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose fica obrigado a: I cumprir medidas de controle e erradicao da brucelose e da tuberculose, previstas neste Regulamento;
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II ter superviso tcnica de mdico veterinrio habilitado; III utilizar sistema de identificao individual das fmeas com idade igual ou superior a 24 meses e dos machos reprodutores, indicado pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, ou, na ausncia deste, possuir sistema de identificao animal prprio, desde que aprovado pelo servio de defesa oficial; IV vacinar todas as fmeas entre trs e oito meses de idade contra a brucelose, com vacina B19; V submeter a testes de diagnstico para brucelose e tuberculose as fmeas de idade igual ou superior a 24 meses e os machos reprodutores, sacrificando ou destruindo os animais reagentes positivos, de acordo com o disposto no Captulo IX; VI custear as atividades de controle da brucelose e da tuberculose. Art. 74. O primeiro teste de diagnstico para brucelose e tuberculose efetuado no estabelecimento de criao monitorado ser realizado por amostragem, conforme a Tabela 5, sendo os animais escolhidos por mtodo aleatrio:
Tabela 5 Tabela de amostragem para o teste inicial em estabelecimento de criao monitorado, segundo o nmero de fmeas a partir de 24 meses de idade e de machos reprodutores existentes no estabelecimento

Existentes < 350 351 500 501 750 751 1500 1501 5000 > 5000

Devem ser testados (*) 255 300 350 400 440 460

(*) Parmetros de amostragem: (1) probabilidade de deteco de um ou mais animais reagentes (grau de confiana) = 99%; (2) porcentagem mnima esperada de animais reagentes no rebanho = 1%.

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Art. 75. Aps o primeiro teste por amostragem, especificado no art. 74, o estabelecimento de criao dever manter rotina de diagnstico, realizando reteste peridico tambm por amostragem, nas seguintes condies: I os testes de diagnstico para brucelose devem ser realizados num intervalo de 10 a 12 meses; II os testes de diagnstico para tuberculose devem ser realizados num intervalo de 10 a 12 meses, at obter-se dois resultados negativos consecutivos em todos os animais testados, passando ento a ser realizados num intervalo de 18 a 24 meses; III o reteste peridico ser realizado de acordo com a Tabela 6:
Tabela 6 Tabela de amostragem para o reteste peridico em estabelecimento de criao monitorado, segundo o nmero de fmeas a partir de 24 meses de idade e de machos reprodutores existentes no estabelecimento

Existentes < 350 351 500 501 750 751 1500 1501 5000 > 5000

Devem ser testados (*) 200 225 250 270 290 300

(*) Parmetros de amostragem: (1) probabilidade de deteco de um ou mais animais reagentes (grau de confiana) = 95%; (2) porcentagem mnima esperada de animais reagentes no rebanho = 1%.

Art. 76. No caso de serem detectados um ou mais animais reagentes positivos aos testes de diagnstico para brucelose durante as amostragens, especificadas nos arts. 74 e 75, em outro teste realizado sob responsabilidade de mdico veterinrio habilitado ou oficial, ou aps confirmao de suspeita clnica, todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e todos os machos
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reprodutores, no includos na amostra inicial, devem ser testados para essa enfermidade. Art. 77. No caso de serem detectados um ou mais animais reagentes positivos aos testes de diagnstico para tuberculose durante as amostragens, especificadas nos arts. 74 e 75, em outro teste realizado por mdico veterinrio habilitado ou oficial, ou aps confirmao de suspeita clnica, todas as fmeas a partir de 24 meses de idade e todos os machos reprodutores, no includos na amostra inicial, devem ser testados para essa enfermidade. Art. 78. O certificado de estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose tem validade de 12 meses e ser emitido aps a obteno de um teste com 100% da amostragem inicial negativa. Caso existam animais positivos, o certificado somente poder ser emitido aps o exame de todas as fmeas maiores de 24 meses de idade e machos reprodutores, no includos na amostragem inicial, com a destruio/sacrifcio de todos os positivos. Art. 79. A renovao do certificado de estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose dever ser requerida anualmente na unidade local do servio de defesa oficial, apresentando resultado negativo nos testes de diagnstico realizados e na condio de todos os animais reagentes positivos para brucelose e/ou tuberculose serem sacrificados ou destrudos, conforme o disposto no Captulo IX. Pargrafo nico. A renovao do certificado pode ser prorrogada por um perodo mximo de 90 dias, quando da necessidade de realizar novo teste de diagnstico para brucelose ou tuberculose em animais que apresentem resultados inconclusivos no reteste anual. A prorrogao por igual perodo poder ser autorizada se for necessrio sacrificar ou destruir animais reagentes positivos. Art. 80. O mdico veterinrio habilitado dever informar unidade local do servio de defesa oficial a data de realizao dos testes mencionados no art. 79, com antecedncia mnima de 15 dias.
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Art. 81. A deteco de leses sugestivas de tuberculose durante a inspeo sanitria post-mortem de animais provenientes de estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose implica no envio de amostras de leses suspeitas ao laboratrio indicado pelo Departamento de Defesa Animal e, em se confirmando infeco por Mycobacterium bovis, todas as fmeas com idade igual ou superior a 24 meses e todos os machos reprodutores devem ser submetidos a testes de diagnstico para tuberculose, destinando os reagentes positivos ao sacrifcio ou destruio, conforme o disposto no Captulo IX. Art. 82. O ingresso de fmeas com idade igual ou superior a 24 meses e de machos reprodutores em estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose fica condicionado a: I terem origem em estabelecimento de criao livre de brucelose ou em estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose ou realizar dois testes de diagnstico para brucelose, cumprindo os seguintes requisitos: a) os dois testes devero ter resultado negativo; b) o primeiro teste dever ser realizado durante os 30 dias que antecedem o embarque e o segundo teste at 30 dias aps o ingresso no estabelecimento de criao de destino, num intervalo mnimo de 30 dias entre testes, sendo que os animais devero permanecer isolados desde o ingresso no estabelecimento at o segundo resultado negativo; c) os testes sero realizados por mdico veterinrio habilitado, por laboratrio credenciado ou por laboratrio oficial credenciado. II terem origem em estabelecimento de criao livre de tuberculose ou em estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose ou realizar dois testes de diagnstico para tuberculose, cumprindo os seguintes requisitos: a) os dois testes devero ter resultado negativo; b) o primeiro teste dever ser realizado durante os 30 dias que antecedem o embarque e o segundo teste at 90 dias aps o ingresso no estabelecimento de criao de destino, num intervalo mnimo de 60 dias entre testes, sendo que os animais devero
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permanecer isolados desde o ingresso no estabelecimento at o segundo resultado negativo; c) os testes sero realizados por mdico veterinrio habilitado. Art. 83. O mdico veterinrio oficial poder, em qualquer momento e sem nus para o proprietrio, colher material biolgico para testes de diagnstico para brucelose ou tuberculose e acompanhar ou realizar testes de diagnstico para tuberculose, com o objetivo de verificar e validar a condio sanitria do estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose. Captulo XX Do Controle do Trnsito de Bovinos e Bubalinos Art. 84. Para fins de trnsito interestadual de machos e de fmeas, das espcies bovina e bubalina, destinados reproduo, obrigatria a apresentao de resultados negativos aos testes de diagnstico para brucelose e tuberculose, obedecendo ao que se segue: I a emisso da Guia de Trnsito Animal (GTA) fica condicionada apresentao dos atestados de exames negativos para brucelose e tuberculose, emitidos por mdico veterinrio habilitado ou, at 31 de julho de 2004, por mdico veterinrio cadastrado, os quais devero permanecer anexados via da GTA que acompanha os animais; II os testes de diagnstico devem ter sido realizados por mdico veterinrio habilitado, por laboratrio credenciado, por laboratrio oficial credenciado ou, at 31 de julho de 2004, por mdico veterinrio cadastrado; III os atestados de exames negativos para brucelose e tuberculose sero vlidos por 60 (sessenta) dias, a contar da data da colheita de sangue para diagnstico de brucelose e da realizao do teste para diagnstico de tuberculose; IV os testes de diagnstico para brucelose so obrigatrios para os animais especificados no art. 20, excetuando-se os animais com origem em estabelecimento de criao certificado como livre
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de brucelose ou em estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose; V os testes de diagnstico para tuberculose so obrigatrios para animais de idade igual ou superior a seis semanas, excetuandose os animais com origem em estabelecimento de criao certificado como livre de tuberculose ou em estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose. Pargrafo nico. A partir de data a ser determinada pelo Departamento de Defesa Animal, o trnsito interestadual de bovinos e bubalinos destinados reproduo s ser permitido a animais com origem em estabelecimento de criao certificado como livre de brucelose e de tuberculose ou em estabelecimento de criao monitorado para brucelose e tuberculose. Art. 85. A emisso da GTA para trnsito de bovinos ou bubalinos, qualquer que seja a finalidade, fica condicionada comprovao de vacinao contra a brucelose no estabelecimento de criao de origem dos animais, de acordo com o disposto no Captulo III. Art. 86. O trnsito internacional de animais, smen e embries reger-se- pelas normas dispostas no Cdigo Zoosanitrio Internacional, da Organizao Mundial de Sade Animal (OIE) ou conforme normas especificadas em acordos internacionais firmados. Captulo XXI Da Participao em Exposies, Feiras, Leiles e Outras Aglomeraes de Animais Art. 87. Na emisso da Guia de Trnsito Animal (GTA) para bovinos e bubalinos destinados participao em exposies, feiras, leiles e outras aglomeraes de animais devem ser observados os seguintes requisitos: I para a brucelose: a) atestado com resultado negativo a teste de diagnstico para brucelose, efetuado at 60 dias antes do incio do evento,
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para animais acima de oito meses de idade, emitido por mdico veterinrio habilitado ou, at 31 de julho de 2004, por mdico veterinrio cadastrado; b) excluem-se dos testes os animais cujo destino final seja o abate, as fmeas de at 24 meses de idade, desde que vacinadas entre trs e oito meses de idade, os animais castrados e os animais procedentes de estabelecimento de criao livre de brucelose; c) comprovao de vacinao contra brucelose no estabelecimento de criao de origem dos animais. II para a tuberculose: a) atestado com resultado negativo a teste de diagnstico para tuberculose, efetuado at 60 dias antes do incio do evento, para animais de idade igual ou superior a seis semanas, emitido por mdico veterinrio habilitado ou, at 31 de julho de 2004, por mdico veterinrio cadastrado; b) excluem-se do disposto no item anterior os animais cujo destino final seja o abate e aqueles provenientes de estabelecimento de criao livre de tuberculose. Art. 88. Animais de rebanho geral destinados participao em leiles ficam dispensados da apresentao de atestados com resultado negativo, exceto quando o servio oficial estadual julgar necessrio. Art. 89. A partir de data a ser determinada pelo Departamento de Defesa Animal, a emisso de GTA para participao de bovinos e de bubalinos em exposies, em feiras e em leiles de animais registrados fica condicionada origem em estabelecimento de criao livre de brucelose e tuberculose. Captulo XXII Do Papel do Servio de Inspeo Oficial Art. 90. O servio de inspeo oficial participa do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal, em colaborao com o servio de defesa oficial, visando
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melhorar a eficcia das aes de vigilncia sanitria e de monitoramento deste Programa. Art. 91. So atribuies especficas do servio de inspeo oficial: I realizar o abate sanitrio de animais identificados como positivos para brucelose ou tuberculose; II cumprir procedimentos higinico-sanitrios e fazer o julgamento e destinao de carcaas e vsceras, conforme previsto na legislao pertinente; III comunicar ao servio de defesa oficial os achados de matana, em carcaas e vsceras, sugestivos de tuberculose.

Portaria SDA no 10, de 07 de maro de 2003

O SECRETRIO DE DEFESA AGROPECURIA DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 83, inciso IV, do Regimento Interno da Secretaria, aprovado pela Portaria Ministerial n 574, de 8 de dezembro de 1998, tendo em vista o disposto no Regulamento do Servio de Defesa Sanitria Animal, aprovado pelo Decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, e o que consta do Processo n 21000.000710/2003-61, resolve: Art. 1 Instituir o Comit Cientfico Consultivo sobre Brucelose (B.abortus) e Tuberculose animal (M. bovis) CCBT, cujas atribuies incluiro: I fornecer subsdios tcnico-cientficos ao Departamento de Defesa Animal DDA; II emitir pareceres tcnicos; III elaborar propostas que visem melhorar o sistema de controle da brucelose (B.abortus) e da tuberculose animal (M. bovis) no pas, com destaque para as normas e mtodos de vigilncia, profilaxia, diagnstico e controle dessas enfermidades. Art. 2 O CCBT ser composto por profissionais especializados nas diversas reas relacionadas sade animal, com destaque para a medicina veterinria preventiva, epidemiologia e bioestatstica, sade pblica, planejamento de programas e mtodos de defesa
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sanitria animal, imunologia e tcnicas de diagnstico da brucelose e tuberculose animal. Art. 3 O Departamento de Defesa Animal DDA poder, se necessrio, convocar pessoal tcnico dos setores pblico e privado para prestar assessoramento ao CCBT. Art. 4 O DDA dever estabelecer a composio do referido Comit, definir a programao, as regras de funcionamento e indicar seu coordenador. Art. 5 Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao.
MAAO TADANO
Publicada no DOU n 48, de 11 de maro de 2003, Seo I p. 8

Portaria DDA no 73, de 04 de dezembro de 2003

O DIRETOR DO DEPARTAMENTO DE DEFESA ANIMAL, DA SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA, DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 84, inciso VIII, da Portaria Ministerial n 574, de 8 de dezembro de 1998, tendo em vista o disposto na Portaria SDA n 10, de 7 de maro de 2003 e o que consta no processo n 2100.006978/2003-14, resolve: Art. 1 Estabelecer a composio do Comit Cientfico Consultivo sobre Brucelose (B. abortus) e Tuberculose animal (M. bovis) - CCBT no mbito do Programa Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), especificando a rea de atuao de cada um dos membros constituintes: I Andrey Pereira Lage, especialista em medicina veterinria preventiva - Universidade Federal de Minas Gerais; II Eliana Roxo, especialista em diagnstico e controle de brucelose e tuberculose Instituto Biolgico; III Ernst Eckehardt Muller, especialista em medicina veterinria preventiva Universidade Estadual de Londrina; IV Fernando Padilla Poester, especialista em brucelose Consultor do LARA/MG - MAPA;
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V Joo Crisostomo Mauad Cavallro, especialista em defesa sanitria animal DDA/SDA/MAPA; VI Jos Soares Ferreira Neto, especialista em epidemiologia veterinria e zoonoses Universidade de So Paulo; VII Pedro Moacyr Pinto Coelho Motta, especialista em tuberculose - LARA/MG - MAPA; VIII Vitor Salvador Pico Gonalves, especialista em epidemiologia veterinria e programas de sade animal Universidade de Braslia. Art. 2 O Coordenador do CCBT poder, se necessrio, convocar pessoal tcnico dos setores pblico ou privado para prestar-lhe assessoramento. Art. 3 Devero ser realizadas trs reunies ordinrias do CCBT por ano, podendo haver convocao de reunies extraordinrias, desde que justificadas pelo seu Coordenador. Art. 4 O Comit Cientfico Consultivo de que trata o art. 1 ser coordenado pelo mdico veterinrio Jos Ricardo Lbo, representante do PNCEBT. Art. 5 Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao.
JOO CRISOSTOMO MAUAD CAVALLRO
Publicada no DOU n 238, de 08 de dezembro de 2003, Seo II p. 4

Portaria DDA no 11, de 26 de janeiro de 2004

O DIRETOR DO DEPARTAMENTO DE DEFESA ANIMAL, DA SECRETARIA DE DEFESA AGROPECURIA, DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 84, inciso VIII, do Regimento Interno da Secretaria, aprovado pela Portaria Ministerial n 574, de 8 de dezembro de 1998, o art. 13 da Instruo Normativa SDA n 06, de 8 de janeiro de 2004,
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Considerando que o resultado do inqurito soroepidemiolgico para brucelose bovina, realizado em 2002 pelas autoridades sanitrias do Estado de Santa Catarina, revelou prevalncia muito baixa de propriedades e animais infectados por essa doena; Considerando que diante da prevalncia encontrada a vacinao no trar efeitos benficos e ainda que o uso da vacina elaborada com amostra B19 possa interferir nos resultados dos testes de diagnstico, recurso sistematicamente utilizado em reas em processo de erradicao, e o que consta do Processo n 21000.013020/2003-71, resolve: Art. 1 Excluir o Estado de Santa Catarina da obrigatoriedade de vacinao das fmeas bovinas e bubalinas contra a brucelose. Art. 2 As aes a serem desenvolvidas nas reas em processo de erradicao devero ser definidas em ato normativo especfico do Departamento de Defesa Animal - DDA. Art. 3 Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao.
JOO CRISOSTOMO MAUAD CAVALLRO
Publicada no DOU n 20, de 29 de janeiro de 2004, Seo 1, p. 3

Instruo Normativa SDA no 59, de 24 de agosto de 2004

O SECRETRIO DE DEFESA AGROPECURIA, DO MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO, no uso da atribuio que lhe confere o art. 15, inciso II, do Anexo I, do Decreto n 4.629, de 21 de maro de 2003, tendo em vista o disposto no Regulamento do Servio de Defesa Sanitria Animal, aprovado pelo decreto n 24.548, de 3 de julho de 1934, e que consta do Processo n 21000.01277/2003-71, resolve: Art. 1 Alterar, de 31 de julho de 2004 para 31 de julho de 2005, o prazo previsto nos arts. 18, 2, 21, inciso I, 27, 2, 28, 84, incisos I e II, 87, incisos I-a e II-a, respectivamente nos captulos V, VI, VII, VIII, XX e XXI, do Regulamento Tcnico do Programa
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Nacional de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose Animal, aprovado pela Instruo Normativa DAS n 06, de 8 de janeiros de 2004. Pargrafo nico. Fica facultado ao Servio de Defesa Oficial de cada Estado estabelecer data anterior a 31 de julho de 2005, prevista no caput deste artigo. Art. 2 O Art. 32 passa a vigorar com a seguinte redao: "Art. 32. O teste cervical comparativo (TCC) o teste confirmatrio utilizado em animais reagentes aos testes de rotina, descritos nos arts. 30 e 31. tambm recomendado como teste de rotina para estabelecimento de criao com ocorrncia de reaes inespecficas, estabelecimentos certificados como livres e para estabelecimentos de criao de bubalinos, visando garantir boa especificidade diagnstica, devendo ser utilizado com as seguintes condies e critrios:" (NR) Art. 3 Esta Instruo entra em vigor na data de sua publicao.
MAAO TADANO
Publicada no DOU n 165, de 26 de agosto de 2004, Seo I, p. 10

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

ENDEREOS DAS SUPERINTENDNCIAS FEDERAIS DE AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO SFAs SERVIO DE DEFESA SANITRIA AGROPECURIA SEDESA

SFA/AC SFA/AC

ACRE RODOVIA AC-40, 793 SEGUNDO DISTRITO 69901-180 RIO BRANCO/AC TEL: (68) 3212-1300 / 1324 FAX: 3212-1313 / 1318 ALAGOAS AVENIDA FERNANDES LIMA, 72 BAIRRO FAROL 57050-000 MACEI/AL TEL: (82) 3315-7005 / 7000 FAX: 3221-7047 / 3315-7026 AMAP RUA TIRADENTES, 469 BAIRRO CENTRAL 68906-380 MACAP/AP TEL: (96) 3223-3075 FAX: 3222-4467 AMAZONAS RUA MACEI, 460 ADRIANPOLIS 69057-010 MANAUS/AM TEL: (92) 3232-8073 / 6129 FAX: 3232-8073 BAHIA LARGO DOS AFLITOS, S/N CENTRO 40060-030 SALVADOR/BA TEL: (71) 3320-2406 / 7436 FAX: 3320-7403

SFA/AL SFA/AL

SFA/AP SFA/AP

SFA/AM SFA/AM

SFA/BA SFA/BA

181

SFA/CE

CEAR AV. DOS EXPEDICIONRIOS, 3.442 BENFICA 60410-410 FORTALEZA/CE TEL: (85) 3455-9208 / 9248 FAX: 3455-9268 DISTRITO FEDERAL SBN QUADRA 01, BLOCO D, 5 ANDAR ED. PALCIO DO DESENVOLVIMENTO 70057-900 BRASLIA/DF TEL: (61) 3329-7119 / 7118 FAX: 3326-2565 ESPRITO SANTO AV. NOSSA SENHORA DOS NAVEGANTES, 495, 8 ANDAR EDIFCIO CENTRO EMPRESARIAL ENSEADA ENSEADA DO SU 29050-420 VITRIA/ES TEL: (27) 3137-2720 / 2732 FAX: 3137-2747 GOIS PRAA CVICA, 100, 6 ANDAR CX. POSTAL 149 74003-010 GOINIA/GO TEL: (62) 3221-7282 FAX: 3221-7277 MARANHO PRAA DA REPBLICA, 147 BAIRRO DIAMANTE 65020-150 SO LUS/MA TEL: (98) 2106-1961 / 1965 FAX: 2106-1969 MINAS GERAIS AV. RAJA GABAGLIA, 245 CIDADE JARDIM 30380-090 BELO HORIZONTE/MG TEL: (31) 3250-0416 / 0417 FAX: 3250-0405 MATO GROSSO ALAMEDA DR. ANNIBAL MOLINA, S/N PORTO 78115-140 VRZEA GRANDE/MT TEL: (65) 3685-5598 / 1952 FAX: 3685-1145

SFA/DF SFA/DF

SFA/ES SFA/ES

SFA/GO SFA/GO

SFA/MA SFA/MA

SFA/MG SFA/MG

SFA/MT SFA/MT

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SFA/MS

MATO GROSSO DO SUL RUA DOM AQUINO, 2.696 79002-970 CAMPO GRANDE/MS TEL: (67) 3325-7100 / 8866 FAX: 3325-7666 PAR AV. ALMIRANTE BARROSO, 5.384 SOUZA 66610-000 BELM/PA TEL: (91) 3214-8648 / 8647 PARABA BR-230, KM 14, ESTRADA JOO PESSOA/CABEDELO 58310-000 CABEDELO/PB TEL: (83) 3246-1235 FAX: 3246-2535 PERNAMBUCO AV. GENERAL SAN MARTIN, 1.000 BONGI 50630-260 RECIFE/PE TEL: (81) 3236-8500 / 8515 FAX: 3236-8516 PIAU RUA TAUMATURGO DE AZEVEDO, 2.315 64001-340 TERESINA/PI TEL: (86) 3222-4545 / 4321 FAX: 3222-4324 PARAN RUA JOS VERSSIMO, 420 TARUMA 82820-000 CURITIBA/PR TEL: (41) 3361-4000 / 4082 FAX: 3366-3260 RIO DE JANEIRO AV. RODRIGUES ALVES, 129, 8 ANDAR 20081-250 RIO DE JANEIRO/RJ TEL: (21) 2253-7507 / 2291-4141 FAX: 2253-8182 RIO GRANDE DO NORTE AV. HILDEBRANDO DE GIS, 150 RIBEIRA 59010-000 NATAL/RN TEL: (84) 3221-1741 / 1742 FAX: 3221-5698

SFA/P A/PA SFA/PA

SFA/PB SFA/PB

SFA/PE SFA/PE

SFA/PI SFA/PI

SFA/PR SFA/PR

SFA/RJ SFA/RJ

SFA/RN SFA/RN

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SFA/RO

RONDNIA BR-364, KM 5,5 78913-770 PORTO VELHO/RO TEL: (69) 3216-5600 / 5610 FAX: 3222-2460 RORAIMA AV. SANTOS DUMONT, 1.470 BAIRRO APARECIDA 69306-040 BOA VISTA/RR TEL: (95) 3623-9603 / 9605 FAX: 3623-9364 RIO GRANDE DO SUL AV. LOUREIRO DA SILVA, 515, 5 ANDAR 90010-420 PORTO ALEGRE/RS TEL: (51) 3284-9513 / 9516 FAX: 3284-9512 SANTA CATARINA RUA FELIPE SCHIMIDT, 755 CENTRO EDIFCIO EMBAIXADOR, BLOCO A CAIXA POSTAL 1.502 88010-002 FLORIANPOLIS/SC TEL: (48) 3261-9929 / 9930 FAX: 3261-9931 SERGIPE AV. JOO RIBEIRO, 428 BAIRRO SANTO ANTNIO 49065-000 ARACAJU/SE TEL: (79) 3179-2468 / 2469 FAX: 3179-2466 SO PAULO AV. 13 DE MAIO, 1.558, 3 ANDAR BELA VISTA 01327-002 SO PAULO/SP TEL: (11) 3251-0400 / 5742 FAX: 3287-8988 TOCANTINS AV. NS 1, 201 SUL, CONJ. 2, LOTE 05 77015-202 PALMAS/TO TEL: (63) 3219-4300 / 4330 FAX: 3219-4305

SFA/RR SFA/RR

SFA/RS SFA/RS

SFA/SC SFA/SC

SFA/SE SFA/SE

SFA/SP SFA/SP

SFA/TO SFA/TO

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ANOTAES

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ANOTAES

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ANOTAES

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

Secretaria de Defesa Agropecuria Departamento de Sade Animal Esplanada dos Ministrios, Bloco D, Anexo A, 3o andar CEP 70043-900 Braslia/DF E-mail: tub-bru@agricultura.gov.br

www.agricultura.gov.br Central de Relacionamento: 0800 61 1995

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Assessoria de Comunicao Social

PROGRAMA NACIONAL DE CONTROLE E ERRADICAO DA BRUCELOSE E DA TUBERCULOSE ANIMAL - PNCEBT

Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

Secretaria de Defesa Agropecuria Departamento de Sade Animal Esplanada dos Ministrios, Bloco D, Anexo A, 3o andar CEP 70043-900 Braslia/DF E-mail: tub-bru@agricultura.gov.br www.agricultura.gov.br

Central de Relacionamento: 0800 61 1995