Mtodos de estudo de clulas e de tecidos Microscopia ptica

BREVE HISTRICO

O objeto de cristal da rocha conhecido como lente de Lanyard, datado de 721 a.C., pode ter sido a primeira lente criada pelo homem

Zacharias Jansen e um microscpio que, acredita-se, tenha sido fabricado por ele. O modelo foi encontrado na Holanda, no sculo XVII (1590)

Modelo de microscpio italiano, utilizado por volta do ano 1600. Eram simples e pequenos.

O primeiro desenho de um microscpio com trip (1631), e o microscpio de John Yarwell, construdo em 1683

Microscpio solar de projeo, modelo italiano de 1760 Em 1665, o ingls Robert Hooke, publica o livro Micrographia. Hooke fabrica um microscpio ptico composto. O primeiro a fazer observaes microscpicas De materiais biolgicos foi o Antonie van Leeuwenhoek (1632 - 1723).
Fonte: www.invivo.fiocruz.br

Microscpio com espelhos e conjunto de acessrios. Modelo construdo pelo italiano Giovan Battista em 1813

Microscpio de Culpeper

Microscpio de Cuff

Fonte: www.invivo.fiocruz.br

Unidades de medida utilizada em microscopia

Em geral, podem-se dividir as unidades de estruturas biolgicas em macroscpicas e microscpicas, sendo essa ltima invisvel a olho humano nu.

PROGRESSO IMAGINRIA DE UM DEDO AT AGLOMERADO DE ATMOS

Microscopia ptica

Microscopia eletrnica

MICROSCPIOS
Existem duas categorias de microscpios: A) Microscpio ptico: utiliza-se da radiao de ondas luminosas (feixes de luz), sendo esta refratada atravs de sistemas de lentes de vidro. O campo microscpico (ou a rea observada) aparece brilhantemente iluminado e os objetos estudados se apresentam mais escuros. Geralmente, os microscpios desse tipo produzem um aumento til de aproximadamente, 1.000 X. Poder de resoluo: 0,2m B) Microscpio eletrnico: feixes de eltrons A radiao empregada a de feixe de eltrons que se propaga no vcuo, sendo ele refratado por meio de lentes eletromagnticas. O microscpio eletrnico produz aumentos teis de 200 a 400 mil vezes, sendo seu poder de resoluo cerca de 100 vezes maior que o do microscpio de luz. No entanto, impossvel observar material vivo neste tipo de microscpio. MICROSCPIO TICO: sistema composto : oculares + objetivas Campo claro, campo escuro, contraste de fase, fluorescncia imagem duas dimenses ampliao at 1.000 - 2.000 x

COMPONENTES PTICOS E MECNICOS

Na prtica os microscpios modernos tem um grande nmero de outros elementos ticos incorporados ao caminho da luz dentro do tubo, como filtros, analisadores, prismas, espelhos , lentes Zoom, etc. Na microscopia de luz existem vrios tipos de aparelhos, os quais apresentam sistemas de lentes e filtros que selecionam um ou outro tipo de luz, diversificando as imagens formadas.
Charriot

Oculares

Objetivas

Estes aparelhos so Microscpios especiais e so chamados: microscpio de campo claro, campo escuro, fluorescncia, invertido, confocal, etc.

Condensadora

Macro /Micro

Filtros

http://micro.magnet.fsu.edu/optics/intelplay/simulator/index.html

Microscopia de campo claro O microscpio de campo claro o mais comum microscpio de luz. Nesse microscpio, o campo de viso aparece iluminado e os objetos que esto sendo observados

apresentam-se mais escuros .

- A microscopia de campo claro apresenta algumas vantagens como: - menor toxicidade por necessitar de menores concentraes de corantes; baixo

contraste, devido ao uso de baixas concentraes de cromforos naturais ou

especialmente corantes vitais, pode ser grandemente aumentados; observaes feitas no comprimento de onda de mxima absoro aumentam o contraste.

MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE

Luz convencional

Contraste de fase

PROPRIEDADES DO MICROSCPIO PTICO - RESOLUO E AUMENTO Normalmente, a utilidade do microscpio est associada a sua capacidade de ampliao da imagem de um dado objeto. No entanto, a qualidade de um microscpio est, antes de tudo, ligada ao seu poder de resoluo, que pode ser inferido indiretamente, atravs de resoluo do sistema ptico.

Poder de Resoluo : a capacidade de um sistema ptico de revelar detalhes da estrutura.

Limite de Resoluo (LR): corresponde menor distncia entre dois pontos que ainda permite que sejam distinguidos separadamente, individualizados. OUTROS CONCEITOS Profundidade de foco: que corresponde distancia atravs da qual o plano da imagem pode ser movido sem que a imagem perca a nitidez. Em outras palavras profundidade de foco a diferena entre a mxima e a mnima distncia no objeto que podem ser observados com determinada lente. Campo-de-viso: de uma lente uma outra grandeza importante, que descreve o tamanho da rea que enxergada pela lente. Nos microscpios modernos as lentes so projetadas para ter um campo-de-viso compatvel com o ngulo de viso mximo que o olho humano acomoda, que de cerca de 50 . Poder de Ampliao: Aumento da ocular X aumento da objetiva

Processamento de material biolgico para Microscopia ptica Para uma compreenso adequada da estrutura e funcionamento das clulas, tecidos e rgos, essencial o conhecimento das ferramentas e dos mtodos de investigao. O procedimento mais usado no estudo de tecidos ao microscpio consiste na preparao de cortes histolgicos e sua colorao. No microscpio ptico a imagem se forma aps a passagem de um feixe de luz atravs de alguma estrutura. No entanto, na maioria dos casos os tecidos e rgos so espessos, e no permitem a passagem adequada da luz para formao de uma imagem. Alm disso, com poucas excees, os tecidos so

incolores. Desta maneira, antes de examinar um material biolgico, as amostras devem

passar pelos seguintes processos: Fixao, desidratao, incluso, microtomia, montagem dos cortes, colorao, lamnula.

O PREPARO DE AMOSTRAS PARA O MICROSCPIO PTICO DE CAMPO CLARO

Para que possam ser guardadas por muito tempo, as amostras de clulas e tecidos precisam em geral
de um tratamento qumico que garanta sua preservao. Esse tratamento inclui vrias etapas: 1. Fixao: o tratamento da amostra com substncias qumicas, como o formol, que preservem sua

forma original.
2. Desidratao: a substituio da gua presente dentro e fora das clulas por um solvente orgnico, como o etanol ou metanol. Esse solvente tanto pode ser removido, deixando a lmina secar, quanto

pode ser substitudo por parafina ou outra resina que torne o tecido rgido, permitindo que seja
fatiado. 3. Microtomia: tecidos como fgado ou msculo so muito espessos e precisam ser cortados em fatias

mais finas, que permitam a passagem parcial da luz. Uma vez embebidos em parafina, deixa-se
solidificar e o tecido pode ser cortado (fatiado). 4. Colorao: como a maioria das clulas e seus componentes no so naturalmente coloridos, uma srie de corantes foi testada e, devido a sua afinidade qumica por determinados componentes celulares, usada, ajudando na identificao dos diferentes compartimentos celulares. O azul de metileno um desses corantes.

Corantes vitais e corantes seletivos

Preparo das amostras para visualizao em microscopia ptica

Fixao
Desidratao Incluso ou infiltrao
Micrtomo

Microtomia
Montagem dos cortes Colorao Lamnula

10mm

10mm

Microscpio de fluorescncia:

Utiliza uma fonte de luz de comprimento de onda varivel (na faixa do

ultravioleta) e requer o uso de corantes fluorescentes que, em ltima anlise, se ligam a componentes especficos das clulas. Esses corantes so capazes de absorver luz de um determinado comprimento de onda (ultravioleta, por exemplo) e emitir num outro, dentro do espectro visvel. Em algumas situaes as clulas podem ser observadas vivas; em outras, no.

PRTICA