Introduccin Objetivo Fundamento Materiales Procedimiento Resultados Conclusiones Actividades Adicionales

Trabajo Prctico N 2 MTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE PARA EL ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUA

INTRODUCCIN

Bibliografa

El agua es un factor importante en la produccin de los medicamentos, por lo tanto su calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima ms usada y adems est presente en otros procesos relacionados con dicha produccin, como por ejemplo en los de limpieza y sanitarizacin. Es por ello que el agua puede considerarse una fuente potencial de contaminacin bacteriana de los medicamentos. En la industria farmacutica se conocen cinco tipos de agua: agua potable, agua suavizada, agua desionizada, agua destilada y agua producida por smosis reversa. La calidad microbiolgica de cualquier tipo, depender del contenido microbiano del agua utilizada como materia prima, de los mtodos de tratamientos a los que es sometida, y de los sistemas empleados para su almacenamiento y distribucin. Para garantizar la calidad microbiolgica del agua, es necesario realizar el control de la misma, utilizando diferentes mtodos, que nos permitan realizar la numeracin o el recuento de bacterias aerobias mesfilas, mohos y levaduras, coliformes o la investigacin de microorganismos patgenos.

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OBJETIVO Al finalizar, el trabajo prctico, el estudiante estar en capacidad, mediante la consulta bibliogrfica y la aplicacin de las tcnicas microbiolgicas, de realizar el control microbiolgico del agua de proceso, utilizando la tcnica de la Membrana Filtrante. FUNDAMENTO Este mtodo se fundamenta en determinar el nmero y tipo de microorganismos presentes en una muestra de agua de proceso, por medio de la filtracin de la misma a travs de una membrana filtrante con poros de tamao adecuado (0,45 m de dimetro), la consiguiente retencin de los microorganismos sobre dicha membrana y el cultivo de los mismos en diferentes agares de acuerdo al tipo de microorganismo. MATERIALES Muestra de agua de proceso Agua peptonada al 0,1 % Placas estriles con medio ENDO Placas estriles con agar Sabouraud Placas estriles con agar Cetrimide Placas estriles con agar MacConkey Placas estriles con agar para Recuento en Placa (Agar Standard Methods) Equipo de filtracin (Millipore) Membranas filtrantes estriles Bomba de vaco Pinzas estriles Estufa PROCEDIMIENTO 1. Colocar una membrana filtrante estril, bajo condiciones aspticas, sobre el centro del portafitro, usando pinzas estriles, con la superficie cuadriculada hacia arriba.

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2. Ensamblar el equipo, colocando el dispositivo de filtracin y asegurando con una pinza.

3. Verter 100 mL de la muestra de agua, en el portafiltro y proceder a filtrar. 4. Lavar el embudo con aproximadamente 100 mL de agua peptonada al 0,1%. 5. Remover la parte superior del portafiltro, y con una pinza estril transferir la membrana a la placa de Petri que contiene el medio de cultivo correspondiente al microorganismo que se va a identificar: Coliformes en agar endo, bacterias aerobias mesfilas en agar para recuento en placas, mohos y levaduras en agar Sabouraud y Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide. 6. Al colocar la membrana, evitar la formacin de burbujas entre sta y el medio de cultivo. 7. Esperar aproximadamente 20 minutos, para permitir la adhesin de la membrana al medio. 8. Con excepcin de las placas de agar Sabouraud, incubar las placas en forma invertida, a las diferentes temperaturas y tiempos, de acuerdo al microorganismo investigado:

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1. Coliformes: 2. Mohos y Levaduras: 3. Bacterias aerobias mesfilas 4. Pseudomonas aeruginosa

Agar ENDO Agar Sabouraud Agar Recuento en Placas Agar cetrimide

Incubacin 35C 2C x 24-48 h Incubacin 25C 2C x 5-7 das Incubacin 35C 2C x 24-48 h Incubacin 35C 2C x 24-48 h

RESULTADOS Contar las colonias en las membranas. Expresar los resultados como unidades formadoras de colonias (u.f.c.) por mL o por 100 mL de agua, considerando el volumen filtrado y el factor de dilucin. CARACTERSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS RETENIDOS EN LAS MEMBRANAS FILTRANTES, DE ACUERDO A LOS MEDIOS USADOS.

Bacterias aerobias mesfilas en agar para recuento en placas.

Mohos y Levaduras en agar Sabouraud.

Coliformes en agar endo.

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Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide

Anotar los resultados: __________________________________________________________________

CONCLUSIONES __________________________________________________________________

ACTIVIDADES ADICIONALES 1. Investigue el significado de agua de proceso. 2. Seale las diferencias que existen entre los mtodos para el recuento de microorganismos citados en la gua. 3. Investigue para cada medio de cultivo usado en el presente ejercicio prctico, su composicin y las caractersticas que presentan los microorganismos en el medio de cultivo para su numeracin.

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BIBLIOGRAFA Brock T.D. Madigan M.T. Martenko J.J. y Parker J. (Eds) Biologa de los microorganismos. 8 Edicin. Prentice Hall International. (1999). Prescott, L.M. y col. Microbiology. W.C. Brown Publishers. 4 Edicin. (1998). The Official Compendia os Standards USP 24 NF. The United States Pharmacopeia. The National Formulary. Pharmacopeial Convention Inc. Rockville MD (1999). http://www.bme.es/microkit/pic4sp.html

Prof. Norma De Castro Prof. Mara Luisa De Curtis Enero 2002

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