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PRÁCTICA Nº 08
Detección de Listeria
ASIGNATURA :
DOCENTE :
ALUMNO :
CICLO :
2007 - II
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PRÁCTICA Nº 08
DETECCIÓN DE Listeria
I. Introducción:
II. Objetivos:
III. Materiales:
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- Medio de aislamiento para Listeria.
- Cuchillo
- Bandeja de plástico
- Placa Petri
- Frasco grande estéril
- Mechero Bunsen
- Asas microbiológicas
IV. Procedimiento:
- En el grupo de usó de muestra 3 mangos. Estos, sin lavar, se los puso en una
bandejita y se les cortó tajadas medianas que tuvieran tanto cáscara como pulpa.
- Luego, en esterilidad, se le colocó en el frasco grande estéril (aprox. 3 g).
- Luego se le agregó al frasco 27 mL de caldo para enriquecimiento para Listeria,
se agita levemente por unos minutos.
- Se incuba por 24 h a Tº ambiente.
- Pasado el tiempo, se siembra un asada del caldo enriquecido en una placa
conteniendo agar para aislamiento de Listeria.
- Se incuba por 24 h a Tº ambiente.
- Pasado el tiempo se observa la formación de colonias. Si se ven colonias verde
fosforescentes (verde-amarillo), se sospecha de Listeria spp.
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V. Resultados:
VI. Preguntas:
- ¿Qué otros métodos estandarizados por la FDA o LA ICMSF existen para aislar
Listeria monocytogenes en alimentos?
o Para alimentos envasados (fiambres cocidos) se realiza por ejemplo el
“criterio de presencia-ausencia en 25 g según USDA/FSIS” (United
Status Departament of Agricultura/Food Safety and Inspection Service,
Office of Public Health and Science):
Se realiza un pre-enriquecimiento en 225 mL de caldo UVM I
(Univesity of Vermont Médium. Oxoid CM863) suplementado
con ácido nalidíxico y acriflavina (Oxoid SR142E).
Se homogeniza durante 2 min. Y se incuba a 30 ºC durante 24 h.
Luego se transfiere 1 mL del caldo de pre-enriquecimiento a 10
mL de caldo Fraser (Oxoid CM895) con ácido nalidíxico,
acriflavina y citrato férrico amónico (Oxoid SE156E), se incuba a
30 ºC durante 24-48 h.
Luego se efectúa el aislamiento en agar Oxford modificado
(Oxoid CM856) con el agregado de Listeria Suplemento
Selectivo (Oxoid SR140E) constituido por cicloheximida, sulfato
de colistina, acriflavina, cefotetan y fosfomicina, incubándose a
30 ºC durante 24-48 h.
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Las colonias sospechosas se repican en agar nutritivo, previa
coloración de Gram, para su posterior identificación.
o Para muestras de queso (de pasta blanda) se utiliza la Norma FIL
(Federación Internacional de Lechería).
Se realiza un enriquecimiento de 25 g de muestra en 225 mL de
caldo base Listeria para enriquecimiento (Oxoid CM862)
suplementado con ácido nalidíxico, cicloheximida y clorhidrato
de acriflavina (Oxoid SR141E).
Se homogeniza durante dos min. y se incuba a 30 ºC durante 48
h..
Luego, se realiza un aislamiento en agar Oxford modificado,
incubándose a 30 ºC por 24-48 h.
Las colonias sospechosas son luego pasados a agar nutritivo, para
luego hacer las prubas bioquímicas respectivas.
VII. Referencias: