FACESA

Faculdade de Cincias e Educao Sena Aires Portaria MEC n. 1504, publicada no DOU em 28/09/2000.

CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA

Valparaso de Gois-GO, Agosto de 2011. 1

FACESA
Faculdade de Cincias e Educao Sena Aires Portaria MEC n. 1504, publicada no DOU em 28/09/2000.

ANAYARA LOPES TAVARES ALINE CRISTINA PRSPERO RODRIGUES NENIOMAR DE ANDRADE SOUZA ROZILDA MONTEIRO COSTA

CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA

Relatrio apresentado disciplina de Farmacognosia/ Fitoqumica, sob orientao da Professora Sabrina, do curso de Bacharelado em Farmcia 4 Perodo/Matutino.

Valparaso de Gois-GO, Agosto de 2011.

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SUMRIO
Introduo -----------------------------------------------------------------------------------------------04 Materiais-------------------------------------------------------------------------------------------------08 Mtodos -------------------------------------------------------------------------------------------------08 Resultados e Discusso -----------------------------------------------------------------------------10 Anexos ---------------------------------------------------------------------------------------------------11 Concluso -----------------------------------------------------------------------------------------------13 Referncias ---------------------------------------------------------------------------------------------14

INTRODUO Cromatografia uma tcnica de separao de misturas e identificao de seus componentes. Esta separao depende da diferena entre o comportamento dos analitos entre a fase mvel e a fase estacionria. A interao dos componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, bipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade. um mtodo atribudo ao botnico russo Mikhael S. Tswett, que em 1906 utilizou estes termos para descrever suas experincias com extratos de folhas e
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gema de ovo. Tswett usou colunas de vidro contendo vrios slidos finamente divididos atravs das quais filtrou os extratos, lavando-os a seguir com ter de petrleo. Obteve assim, uma separao dos componentes em bandas coloridas ao longo das colunas. Os termos derivam das palavras gregas chrom (cor) e graphe (escrever), embora o processo no dependa da cor, exceto para facilitar a identificao dos componentes separados. Existem vrias tcnicas cromatogrficas, desde as mais simples, como cromatografia em coluna ou camada fina, at as mais sofisticadas, como a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE)1, que exigem aparelhagem complexa. Entre os mtodos de anlises as tcnicas cromatogrficas ocupam um lugar de destaque na qumica e bioqumica devido eficincia e facilidade na separao, identificao e quantificao das espcies qumicas presentes em uma amostra, mesmo que constituda de misturas complexas. Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida em cromatografia em coluna e cromatografia planar. Enquanto a cromatografia planar resume-se cromatografia em papel (CP), cromatografia por centrifugao (Chromatotron) e cromatografia em camada delgada (CCD), so diversos os tipos de cromatografia em coluna, os quais sero mais bem compreendidos quando classificados por outro critrio. A cromatografia , fundamentalmente, um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de uma mistura, realizada por meio da distribuio dos mesmos entre duas fases em ntimo contato. Uma das fases permanece estacionria enquanto a outra se move atravs dela. Durante a passagem da fase mvel pela estacionria, os componentes de uma mistura se distribuem entre elas, de tal forma que cada um dos componentes retido seletivamente na fase estacionria, de acordo com sua maior ou menor interao, resultando em migraes diferenciadas. A cromatografia de adsoro baseia-se no grau de partio relativa das substncias entre uma fase lquida mvel (o eluente) e uma fase slida estacionria (o adsorvente) geralmente a slicagel. Outros adsorventes ocasionalmente usados so o Florisil (um silicato de magnsio), o carvo ativo, o hidrxido de magnsio, o carbonato de clcio, certas poli-amidas e at mesmo o acar. O grau de adsoro depende de vrios fatores, como a quantidade de gua presente na fase slida (que ser mais reativa quanto mais sca estiver), da estrutura da substncia adsorvida (presena de grupos funcionais polares,
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capacidade de formar ligaes hidrognio, etc.), da ocupao dos stios ativos da fase slida pelo solvente e da fora atrativa entre o soluto e o solvente. A cromatografia em camada delgada (CCD) uma tcnica de fcil execuo, rotineiramente usada no laboratrio de qumica orgnica. Amostras muito pequenas (1-100g) podem ser rapidamente analisadas. Devido convenincia e rapidez usamos a tcnica para: estabelecer se dois compostos so idnticos, verificar a pureza de um composto, determinar o nmero de componentes em uma mistura, determinar o solvente apropriado para separao em uma coluna cromatogrfica, monitorar a separao de uma mistura em uma coluna cromatogrfica ou acompanhar o progresso de uma reao. A tcnica consiste em aplicar uma camada fina do adsorvente finamente pulverizado (geralmente slica ou xido de alumnio, s vezes adicionados de material fluorescente luz ultravioleta) sobre uma placa lisa e plana (vidro ou alumnio). O adsorvente fixado placa por adio de gesso ou lcool poli-vinlico. Alguns micro-litros de soluo da amostra a ser examinada so aplicados prximos a uma das bordas da placa, e a mesma imersa alguns milmetros em um eluente mantido em recipiente fechado. O eluente, por fora da capilaridade, percorre a fase fixa em movimento ascendente, carreando consigo os componentes da amostra. Diferentes compostos ascendem a diferentes alturas dependendo de suas estruturas moleculares. A tcnica especialmente til no caso de compostos pouco volteis ou sensveis ao calor, isto , substncias para as quais a cromatografia em fase gasosa inadequada. A escolha do solvente de eluio (desenvolvimento) adequado realizada da seguinte maneira: uma soluo da amostra nos vrios solventes que se deseja testar aplicada, por meio de tubos capilares, sobre uma camada do adsorvente a ser usado. Quando o crculo do solvente tiver atingido a posio final, o solvente apropriado aquele que tiver arrastado a amostra a cerca de 0,3 a 0,5 do raio do crculo do solvente (caso a amostra seja incolor obviamente necessrio revelar a posio da substncia eluda mediante uso de um reagente adequado!). As amostras so aplicadas nas cromatoplacas em forma de solues (a 1-10% em solvente voltil) a cerca de 1cm da base inferior mediante uso de um tubo capilar. Alguns cuidados devem ser tomados para evitar que a camada do adsorvente seja alterada, ou que o halo de difuso da amostra seja maior que 2 mm. Solues
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diludas da amostra podem ser aplicadas repetidamente, esperando-se a evaporao do solvente antes de nova aplicao, a fim de obter maior concentrao no ponto de partida. Mais de uma amostra pode ser aplicada em uma placa, mantendo-se uma distncia de 1 cm entre os pontos, para evitar contato entre as amostras. A placa, com a extremidade semeada para baixo, ento mergulhada no solvente selecionado, mantido em cuba fechada (cmara). importante observar que o nvel do solvente dever ficar abaixo dos pontos de aplicao. Durante a corrida do solvente o sistema deve permanecer fechado, para garantir saturao da cmara pelo vapor do solvente. Um pedao de papel de filtro, colocado na parede interna da cmara, acelera a saturao. A cromatoplaca dever ser retirada da cuba somente quando a frente do solvente atingir um limite pr-determinado na parte superior da placa (cerca de 1 cm). Aps o desenvolvimento as cromatoplacas so secas e as posies dos componentes da amostra visualizadas por um meio adequado. A visualizao (revelao) pode ser feita por mtodos fsicos ou qumicos. Placas preparadas com adio de um material fluorescente permitem visualizar facilmente compostos UV-ativos, que aparecem como manchas escuras em fundo fluorescente, se a placa for iluminada com lmpada de luz ultravioleta. Reagentes qumicos podem tambm ser usados. Quase todas as classes de substncias orgnicas (exceto alcanos e haletos alifticos) reagem com iodo formando complexos de transferncia de carga. Exposio da placa aos vapores do iodo, revelam manchas marrom, tanto mais escuras quanto maior o tempo de exposio e a concentrao da amostra. A formao desses complexos reversvel (muitas vezes rapidamente), de modo que a posio das manchas escuras deve ser marcada prontamente. A grande vantagem desse mtodo que, na maioria dos casos, o iodo pode ser eliminado posteriormente por aquecimento da placa, a qual pode ser borrifada, a seguir, com outro revelador (cido sulfrico, vanilina sulfrica, tricloreto de antimnio, permanganato de potssio/cido sulfrico, etc.). A literatura qumica traz uma srie de referncias a reveladores, para cromatografia em camada delgada, variando desde os de aplicao muito especfica at os mais gerais. Em geral os mtodos qumicos de revelao so destrutivos e aplicveis a separaes analticas, mas no em separaes preparativas. Quando as condies experimentais so completamente especificadas possvel identificar uma substncia pelo seu valor de Rf. Define-se Rf, como a razo entre a distncia
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percorrida na placa pela substncia e a distncia percorrida pelo solvente. Contudo, para fins de identificao de uma substncia o solvente escolhido para eluio deve carrear o composto a um Rf entre 0,3 e 0,6 e uma amostra autntica deve ser aplicada lado a lado na mesma placa, para assegurar igualdade de condies experimentais. Alm disso, como muitas substncias podem ter o mesmo valor de Rf, assim com podem ter o mesmo ponto de fuso, mtodos adicionais devem ser utilizados para identificao inequvoca do composto.

MATERIAIS

Mentol Cristalizado

Balana Pipeta Automtica Ponteiras de 1ml 03 Bqueres de 100ml Capilar Iso- Octano lcool Etlico gua Lpis Rgua Iodo Metlico
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 Placa cromatogrfica

Cuba Cromatogrfica

MTODOS
Pesamos 0,1g de mentol (0,09-0,11g) em cada bquer. Logo aps, pipetamos 0,1l dos solventes em cada bquer. Fizemos a deteco do solvente que iramos utilizar na faze mvel. Os parmetros utilizados para a escolha do solvente foram: maior dissoluo dos cristais, e o teste com a placa cromatogrfica, ou seja, pegamos uma gota de cada soluo com o capilar e aplicamos sobre a placa e colocamos dentro da cuba com o iodo metlico at corar. O mentol foi arrastado a 0,4 do raio do crculo do solvente, assim, escolhemos o Isso- Octano, que foi o melhor desenvolvido.

Aps estes procedimentos de escolha do solvente, colocamos ao fundo de uma cuba o solvente. Colocamos 01 gota (com o capilar) da extrao a 1,5cm da base da placa de cromatografia, levamos a cuba com o solvente e observamos a corrida. Cerca de 30 minutos depois retiramos a placa de dentro da cuba com o solvente e esperamos secar por 5 minutos. Levamos ento a placa para a cuba cromatogrfica com iodo metlico e aguardamos at a revelao completa.

Medimos ento distncia percorrida do solvente e a distncia percorrida da mancha. Com essas medidas, calculamos ento o Fator de Reteno: Distncia percorrida pela mancha desde a origem (x) Rf = ----------------------------------------------------------------------------------Distncia percorrida pelo solvente desde a origem (y) 1,5 Rf = ------------------------13,5 Rf = 0,11 ou Rf = 0,1

RESULTADOS E DISCUSSO
Com esse experimento observamos os procedimentos necessrios e comuns para a realizao de cromatografia de camada delgada (CCD). Observamos
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que os resultados que obtivemos nesta foram inferiores aos necessrios e esperados. Chegamos a esta concluso devido ao calculo do fator de reteno (Rf), que, quando efetivado, obtivemos o Rf= 0,1 sendo que o esperado seria entre 0,4 e 0,7. Contudo, os principais objetivos deste, foram a compreenso, desenvolvimento e aplicao da cromatografia, e o mesmo foi concludo com xito.

ANEXOS

Figura 1. Diluio e escolha do solvente

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Figura 2. Gotas dos solventes na placa distribudas com capilares

Figura 3. Revelao do solvente na placa. (Escolha do solvente)

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Figura 4. Corrida do Solvente na placa.

Figura 5. Corrida do Solvente na placa.

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CONCLUSO
Entre os mtodos modernos de anlise, a cromatografia ocupa um lugar de destaque devido a sua facilidade em efetuar a separao, identificao e quantificao das espcies qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras tcnicas instrumentais de anlise, como, por exemplo, a espectrofotometria ou a espectrometria de massas. A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. uma tcnica verstil e de grande aplicao, pois possui uma variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias. Esta tcnica foi praticamente ignorada at a dcada de 30, quando foi redescoberta. A partir da, diversos trabalhos na rea possibilitaram seu aperfeioamento e, em conjunto com os avanos tecnolgicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticao, o qual resultou no seu grande potencial de aplicao em muitas reas. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura.

REFERNCIAS
w3.ufsm.br Acessado dia 27 de agosto de 2011 s 14:30h. www.pucrs.br Acessado dia 27 de agosto de 2011 s 14:55h.
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www.qmc.ufsc.br Acessado dia 27 de agosto de 2011 s 16:33h. antigo.univille.br Acessado dia 27 de agosto de 2011 s 18:00h. www.anvisa.com.br Acessado dia 27 de agosto de 2011 s 18:42h. COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, P.S. Introduo a mtodos cromatogrficos. 6 ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1995. CHAVES, M.H.; Anlise de extratos de plantas por CCD: uma metodologia aplicada disciplina Qumica Orgncia . Qumica Nova, v. 20, n. 5, p. 560-562, 1997. DEGANI, A.L.G.; CASS, Q.B.; VIEIRA, P.C., Qumica Nova na Escola, 1998.

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