ESTERILIZACION DDE MATERIAL Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO INTEGRANTES DE EQUIPO

*DIAZ LIMA NALLELY *FLORES MARTINEZ MONICA IVONNE *LURIA MOCTESUMA DAMARIS D.

TITULAR
*Q.B. EDILBERTA GARCIA SANTOS

MESA NuM. 1 POSICION: B 5A Q.F.B.

INTRODUCCION Desde hace mucho tiempo es un reto el control de enfermedades infecciosas por destruccin, disminucin de su nmero o inhibicin de microorganismos. Se puede llevar a cabo con diferentes mtodos en funcin del lugar a aplicar y el grado de erradicacin microbiana que se pretende conseguir. Por esto es conveniente definir algunos conceptos:

Esterilizacin: proceso fsico o qumico que destruye toda forma de vida de vida microbiana, incluidas las esporas. Desinfeccin: tiene por objeto la destruccin de microorganismos mediante agentes de naturaleza qumica (desinfectantes), con el fin de disminuir el nmero de formas vegetativas a niveles mnimos. Desinfectante: es la sustancia qumica que inhibe o destruye microorganismos al aplicarla sobre material inerte sin alterarlo significativamente. Asepcia: trmino que se aplica a los procedimientos utilizados para prevenir que los microorganismos progresen en un medio determinado (quirfano, laboratorio. etc.) Antispticos: son agentes desinfectantes que se utilizan sobre superficies corporales con el fin de reducir la cantidad de flora normal y de contaminantes microbianos de carcter patgeno. Tienen un menor grado de toxicidad que los desinfectantes y generalmente menor grado de actividad. Determinados preparados pueden utilizarse como antispticos o como desinfectantes indistintamente, pero a diferentes concentraciones en cada caso. Antimicrobianos: son sustancias qumicas producidas por microorganismos o sintetizadas qumicamente que a bajas concentraciones son capaces de inhibir e incluso de destruir microorganismos sin producir efectos txico en el husped.

Control Antimicrobiano: Esterilizacin Agtes. Fsicos Calor seco Flameado Incineracin Estufa Calor hmedo Autoclave Tindalizacin Filtracin Radiaciones U.V Rayos X

Agtes. Qumicos xido de etileno Formol o formaldehdo Glutaraldehdo Desinfeccin Compuestos inorgnicos Nitrato de plata y derivados argncos Derivados mercuriales Agua oxigenada Permanganato de potasio Derivados clorados Derivados yodados Compuestos orgnicos Alcoholes y fenoles Clorohexidina Detergentes aninicos y catinicos 1. Calor Seco 2. Agentes Fsicos 2. Esterilizacin. Los mtodos ms importantes son: a. Flameado: es un procedimiento simple y eficaz, consiste en la exposicin de un objeto a efecto de la llama hasta la incandescencia. Se esteriliza de esta forma, p. ej. ansas de cultivo de siembra. b. Incineracin: es el mejor sistema para esterilizar todas aquellos productos en los que no importe su destruccin, p. ej. material biolgico c. Estufa: calor seco a alta temperatura, 20 minutos durate 180, 60 minutos a 160, siendo suficiente la esterilizacin durante 60 minutos a 100-140, se lo utiliza para esterilizar material de vidrio debidamente envuelto en papel, metal. etc. 1. Calor Hmedo. La esterilizacin con calor hmedo (vapor d agua) es mucho ms rpida y eficaz que el calor seco debido a que las molculas de agua desnaturalizan las protenas de forma irreversible mediante rotura de los uniones H entre los grupos peptdicos a temperaturas relativamente bajas. a. Autoclave: horno a presin, consiste en una cmara en la que el aire puede ser sustitudo por vapor de agua sometida a presin. Se opera a 121C y 1 atm. de presin durante 20 minutos. De esta forma se consigue destruir todas las formas vegetativas y esporas. Se lo utiliza para esterilizar todo material resistente a esa temperatura y es muy utilizado para la esterilizacin de medios de cultivos

b. Tindalizacin: (esterilizacin intermitente) consiste en someter el producto a calentamientos intermitentes entre 56 y 100C durante 30 minutos con lo que se asegura destruir las formas vegetativas. En los intervalos se mantiene a temperatura ambiente o a 37C, las esporas germinan y las bacterias resultantes se hacen ms sensibles al calentamiento posterior. 1. Radiaciones a. Luz UV: es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm por cidos nucleicos causando daos genticos alterando las bases. Se la utiliza en la preparacin de vacunas, cabinas de seguridad biolgica, lugares de trabajo como mesadas de laboratorios, est. b. Radiaciones ionizantes: actan lesionando cidos nucleicos. Se la utiliza sobre todo en procesos industriales para esterilizar dispositivos quirrgicos, guantes, jeringas, etc. 2.2. Agentes Qumicos. Los agentes qumicos como el xido e etileno, formaldehdo o glutaraldehdo reaccionan con gran facilidad con diferentes grupos funcionales de los cidos nucleicos y protenas alquilando estos radicales esenciales. a) xido de etileno. Es un gas inflamable y potencialmente explosivo, muy penetrante que incativa microorganismos sustituyendo tomos de hidrgeno lbiles por otros grupos como hidroxilos, carboxilos, etc. El material se expone a esterilizar a un 5-10% de xido de etileno en dixido de carbono a 50-60 en condiciones de humedad controlada durante 4 a 6 horas. Es necesario someterlo despus a un perodo de aireacin debido a su carcter mutegnico. Es un agente efectivo en la esterilizacin de material termolbil como prtesis, catteres, etc. b) Formol o formaldehdo. Es un gas fcilmente soluble en agua que se utiliza al 40% (formalina). Usado en forma gaseosa y en cmara cerrada se emplea en la esterilizacin hospitalaria y en la industria farmacutica. Tambin es muy utilizado como desinfectante ambiental de salas altamente contaminadas que una vez tratadas deben airearse. c) Glutaraldehdo. S emplea sumergiendo el material limpio en una solucin al 2%, se emplea sobre todo en la esterilizacin de instrumentos pticos y los utilizados en terapia respiratoria.

1. Compuestos inorgnicos. 2. Desinfectantes y antispticos. La actividad de los compuestos derivados de metales pesados (como plata, mercurio, etc.,) se debe a la formacin de sales que se disocian con dificultad de los grupos sulfidrilos de las protenas. a. Son buenos bactericidas. El nitrato de plata se ha utilizado en el tratamiento de quemaduras en soluciones al 0,5% y en la profilaxis de la oftalmia neonatorum por Neisseria gonorrhoeae. b. Nitrato de plata y derivados agnticos El ms utilizado como desinfectante de la piel es el mercuriocromo, no es txico y sigue siendo activo en presencia de materia orgnica. c. Derivados mercuriales Es un agente oxidante de efecto fugaz por ser descompuesto por las catalasas de los tejidos. d. Agua oxigenada (perxido de hidrgeno) Agente oxidante que se inactiva en presencia de materia orgnica. Es poco utilizado. En dermatologa es utilizado por su propiedad antifngica. e. Permanganato de potasio Se inactivan en presencia de materia orgnica. El cloro y derivados son agentes oxidantes muy usados en la potabilizacin del agua en forma de cloro gaseoso en grandes establecimientos, y en forma de hipoclorito es utilizado para descartar material biolgico (sangre, suero, etc.) La cloramina es un antisptico menos potente que el hipoclorito, de accin ms lenta pero mejor tolerada en la aplicacin tpica. f. Derivados clorados. g. Derivados yodados. Son agentes oxidantes que se usan en forma de solucin acuosa, combinndolos con detergentes o sustancias orgnicas. Los yodoformos son compuestos que se liberan progresivamente. El Yodo se encuentra en la polivinilpirrolidona (povidona yodada). Existen tambin soluciones alcohlicas. 1. Compuestos orgnicos. a. Actan desnaturalizando protenas. Su accin es rpida pero se evaporan con facilidad. El alcohol etlico se utiliza en antisepcia a una concentracin del 70%, a esta concentracin se reduce ms la tensin superficial de la clula bacteriana facilitando el proceso de desnaturalizacin.

b. Alcoholes. Actan precipitando protenas. El hexaclorofeno y el fenol no se emplean por su toxicidad. Otros derivados fenlicos son los cresoles, los que unidos a jabones originan compuestos estables. c. Fenoles. Es un derivado fenlico que acta alterando la permeabilidad de la membrana celular bacteriana. Tiene inactivacin rpida y es bien tolerado por la piel. Se emplea mucho en hospitales en el lavado de la superficie cutnea en forma de solucin (acuosa o alcohlica) o asociada a detergentes no inicos. d. Clorohexidina. Actan desorganizando las membranas citoplasmticas. Tienen escaso poder bacteriosttico. Se pueden mejorar combinndolos con desinfectantes u otras sustancias tensoactivas como laurilsulfato. e. Detergentes anionicos. Tienen accin antisptica, se inactivan en contacto con jabn, algodn y materia orgnica. Son poco usados. f. Detergentes cationicos. g. Glicoles. Propilenglicol y Etilenglicol, se aplican por medio de unos aparatos llamados glicosatos o en forma de aerosoles para desinfeccin ambiental.

OBJETIVOS *Al finalizar esta practica debemos haber cumplido los siguientes objetivos *Comprobar la efectividad del proceso de esterilizacin. *Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes. *Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso que se les dara.

FUNDAMENTO *el tamao de los microorganismos no nos permite observalos a simple vista y registrarlos como tal como un individuo es por eso q qumicos y persona dedicadas a este proceso reportara como poblacin o colonias,por eso mismo tenemos q favorecer su crecimiento como tal y darles libertad.

MATERIAL

Matraces Erlenmeyer de 250.500 y 1000 ml. Tubo de Ensaye de 16 x 150 mm y de 175 mm Pipetas de 1 y 10 ml. Cajas de petri Probeta graduada de 100 ml. Esptula, gradilla y agitador de vidrio Mechero Termmetro Extracto y peptona de carne Agar exento de inhibidores Agua destilada soluciones de HCL Y NaOH 0.5 N Mezcla crmico Solucin amortiguadora Potencimetro , autoclave y balanza graduada

DESARROLLO 1.- Lavar toda la cristalera con jabon (de preferencia usar Dextran) para eliminar materia orgnica. Y secarlo a temperatura ambiente o en una estufa. 2.- Envolver con papel las cajas de petri como el indique el profesor , anotar ene le papel el numero de caja, la fecha de preparacin y el nombre del equipo. 3.-Poner en la boquilla de las pipetas un filtro de algodn , de tal manera que el aire pase libremente a trves de cada pipeta. 4.-Envolver con papel cada pipeta y marcar en la envoltura el volumen de cada una de ellas. 5.-Cada equipo prepara el volumen del medio de cultivo indicado (caldo nutritivo, agar nutritivo,gelatina nutritiva,agar EMB, agar sal y manitol , agar Mac Conkey). 6.-Colocar la mitad del volumen total de agua destilada en el recipiente en donde se va apreparar el medio de cultivo. 7.-Pesar en papel de cada uno de los componentes del medio. 8.- Adicionar la otra mitad de agua y homogeneizar el contenido. 9.- Los medios liquidos no se calientan en tanto que los medios fluidos y solidos que llevan agar, es necesario calentarlos, tapar el recipiente con una torunda de algodn para evitar la perdida de agua y concentrar el calor, agitar constantemente para evitar que se queme. 10.- Colocar los tubos en un a gradilla o en un bote y cubrirlos con papel, marcar sobre el papel el numero y el tamao de los tusbos. 11.- meter el material a la estufa durante 20 minutos a una temperatura de 120 C. 12.- Al termino del ciclo de esterilizacin, apagar el auto clave esperar a que la presin del autoclave baje a CERO y sacer el material. 13.-Los medios cuya esterilidadhaya sido comprobada, podrn ser utiloizados en la siguiente prctica. 14.- Los medios en que se haya registrado crecimiento microbiano (contaminados) deben ser desechados, para ello es necesario primero esterilizarlos.

DISCUSION DE RESULTADOS Entre los alumnos y la profesora analizamos las distintas partes y sistemas que conforman el microscopio, recalcando que su uso adecuado es importante para favorecer siempre la eficacia en el trabajo asi como para mantener en buen estado los equipos. Adems la forma de transportar el microscopio es fundamental para evitar accidentes, el cable siempre debe ir enrrollado al momento de transportarlo. Al momento de realizar una observacin se debe tener muy presente empezar a enfocar con el objetivo de menor resolucin y posteriormente se procede con los siguientes hasta alcanzar el enfoque preciso. La morfologa de las asas es un punto clave para saber en que momento utilizarla, existen asas bacteriolgicas, para hongos, asi como para tratamiento de hongos y bacterias. Conocimos los diferentes tipos de cultivo que pueden ser agares y caldos nutritivos. Los tapones realizados para los tubos y matraces se hicieron con el objetivo de evitar la contaminacin al momento de manipularlos con nuestra muestra. En lo que respecta a las pipetas el filtro de algodn colocado es con el fin de evitar que el aire pase libremente a travs de ella. Su envoltura realizada con papel destrasa de forma correcta para poder esterilizarla es de gran importancia para su uso posterior. Las cajas de petri se deben envolver con papel destrasa para poder esterilizarlas, su envoltura es muy parecida a la forma en como se envuelven las tortillas. Las cajas de petri se incuban siempre boca abajo para evitar la entrada de aire o vapor y como consecuencia se prevenga la contaminacin. Los gorros elaborados para todo nuestro material evitan que los tapones se humedezcan. CONCLUSIN El resultado final de esta prctica nos da como aprendizaje el manejo adecuado de los materiales que estaremos manipulando a lo largo de las prximas sesiones, asi como la importancia que tiene la esterilizacin en los diversos aspectos que abarca: medio ambiente, material a utilizar y durante el procesamiento de la muestra.

ANEXOS

Cuestionario: 1.- Qu es un autoclave? Un autoclave es un recipiente metlico de paredes gruesas con un cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La presin elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a su punto de ebullicin. La temperatura y el vapor actuando conjuntamente producen la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproduccin de estos, llevando as a su destruccin.

2.-Qu tipo de material se recomienda esterilizar en un autoclave? Citar ejemplos. Medios de cultivo y esterilizar algn agar o solamente un liquido soluble. 3.-Qu otros mtodos de esterilizacin eficaz se pueden utilizar? Esterilizacin Agtes. Fsicos,Calor seco, Flameado, Incineracin, Estufa, Calor hmedo, Autoclave 4.- Por qu algunos medios de cultivo se esterilizan u otros no? Porque va a depender de a que temperatura se puedan esterilizar unos pueden tener altas o bien a bajas temperaturas, o tambin pueden perder sus propiedades que tienen.

5.- Cmo se clasifican los medios de cultivo? Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia 1) Medios lquidos 2) Medios slidos 3) Medios semislidos

b) Su utilizacin 1) Medios comunes 2) Medios de enriquecimiento 3) Medios selectivos 4) Medios inhibidores 5) Medios diferenciales 6) Medios de identificacin 7) Medios de multiplicacin 8) Medios de conservacin 9) Medios de transporte c) Su composicin 1) Medios complejos 2) Medios sintticos 3) Medios semisintticos d) Su origen a) NATURALES b)SINTTICOS c) SEMISINTTICOS