El citodiagnstico, tambin llamado examen citolgico o simplemente citologa, es el diagnstico morfolgico basado en los caracteres microscpicos de clulas y componentes

extracelulares, desprendidos de los rganos espontneamente u obtenidos por procedimientos que, en general, son menos invasivos que la biopsia.

Objetivos del Citodiagnstico

1) Colaboracin en el diagnstico y tipificacin de neoplasias malignas, mediante la evaluacin de las alteraciones de la morfologa del ncleo, del citoplasma y de las relaciones entre las clulas. 2) Diagnstico especfico de algunas lesiones benignas, por ejemplo: tumores benignos, hiperplasias, ciertas infecciones virales o micticas. 3) Eleccin de pacientes que deben ser estudiados ms profundamente en grupos de alto riesgo para un tipo especfico de cncer. 4) En hematologa, examen cualitativo y cuantitativo de los elementos figurados de la sangre perifrica (hemograma) y de la mdula sea (mielograma).

Mtodos de Obtencin de la Muestra

1) Citologa exfoliativa Se recoge material desprendido espontneamente o en forma inducida de las superficies de los rganos. En la mayora de los casos, la toma de la muestra se hace recogiendo material de un rea amplia, sin visin directa de una zona sospechosa, como se aprecia en los siguientes ejemplos. Muestra de mucosa crvico-vaginal, por raspado con esptula de madera. Este es el examen citolgico ms usado. Se aplica en programas de deteccin de cncer del cuello uterino, examinando mujeres asintomticas ("examen de Papanicolaou"). Las mujeres cuyo frotis contiene clulas atpicas son luego sometidas a examen clnico dirigido del cuello y biopsia, para confirmar si se trata de lesiones preneoplsicas o carcinoma infiltrante.

Muestra de lquido de una serosa aspirado con aguja, en caso de derrame (acumulacin anormal de lquido) peritoneal, pleural o pericrdico. Se utiliza para el diagnstico diferencial entre inflamacin y tumor maligno. Los tumores malignos generalmente son metstasis de carcinoma en la serosa. El recuento de los diferentes tipos de clulas en el lquido de las serosas y en el cfalorraqudeo es importante tambin para el diagnstico diferencial entre procesos patolgicos benignos, por ejemplo: leucocitos polinucleares neutrfilos, eosinfilos, monocitos, linfocitos. Muestra de superficie del peritoneo por lavado en una intervencin quirrgica para detectar metstasis Muestra de esputo, espontneo o inducido, o de lavado broncoalveolar. Se utiliza para detectar carcinoma bronquial o bien infecciones especficas en pacientes inmunodeprimidos (Pneumocystis carinii, hongos, alteraciones citopticas virales) Muestra de orina obtenida por miccin espontnea. Se usa como mtodo complementario para el dianstico de cncer de la vejiga, en particular el tipo plano, o para el control despus del tratamiento. En otros casos, la toma de muestra se hace con ayuda de un instrumento que permite ver una zona sospechosa, de la que se recoge material mediante cepillado o lavado. Se practica al paciente una endoscopa, del rbol bronquial o del tubo digestivo. Al encontrar una zona sospechosa de la mucosa, el mdico puede introducir un cepillo y obtener material para hacer un frotis. Tambin puede lanzar un chorro de suero a la lesin y aspirar el lquido que contiene clulas desprendidas. Con frecuencia el endoscopista tambin puede introducir una pinza y tomar una pequea biopsia; en estos casos el examen citolgico es complementario de la biopsia. 2) Citologa por aspiracin con aguja fina Se introduce en la lesin una aguja ms fina que las empleadas para biopsia. El corte por el filo de la aguja y la aspiracin por la presin negativa que se produce dentro de ella desprenden un lquido sanguinolento que contiene grupos de clulas; con este lquido se prepara el frotis. Se pueden distinguir dos tipos de muestras por puncin aspirativa con aguja fina: a) Puncin directa de lesiones superficiales palpables. Generalmente la practica un mdico en el consultorio con una aguja fina corriente. Se usa frecuentemente en casos de quistes y ndulos mamarios o tiroideos, para el diagnstico diferencial entre lesin benigna y cncer. Otro ejemplo es la puncin de ganglios linfticos superficiales (linfoadenopatas), como parte del diagnstico diferencial entre inflamacin, hiperplasia, linfoma o metstasis. b) Puncin de lesiones profundas no palpables, dirigida por imgenes.

Es realizada por mdico radilogo en paciente hospitalizado, utilizando agujas finas largas, de diseos especiales. La puncin se practica bajo control de imgenes ecogrficas o de tomografa computada. Se emplea en masas hepticas, pancreticas, pulmonares, mediastnicas o retroperitoneales, para el diagnstico diferencial entre lesiones benignas y malignas.

Preparacin y Examen de la Muestra

El material obtenido por raspado, cepillado o puncin aspirativa se extiende sobre un portaobjeto en forma de una delgada capa y se fija inmediatamente en alcohol de 96. Los lquidos (orina, ascitis, material de lavado) se fijan con un volumen igual de alcohol de 50%; a continuacin se centrifugan. Parte del sedimento se extiende sobre un portaobjeto. Los frotis o extendidos as preparados se colorean con el mtodo de Papanicolaou o con hematoxilina-eosina. En hematologa los frotis se secan al aire y se tien el mtodo de May-Grnwald- Giemsa y se examinan al microscopio.En los laboratorios que procesan muchos exmenes, un citotecnlogo hace un examen preliminar y marca las zonas del extendido que contienen clulas sospechosas (screening); luego el patlogo examina dichos elementos y formula el diagnstico citolgico.Se pueden guardar extendidos adicionales por si es necesario practicar mtodos auxiliares de tincin para identificar elementos especficos como bacterias, hongos, o practicar reacciones de inmunocitqumica.Se recomienda incluir en parafina los grumos de material o sedimento sobrantes, para hacer cortes histolgicos que completan el examen citolgico ("blocks celulares").

Ejemplos de Diagnsticos Citolgicos

Examen citolgico negativo para clulas neoplsicas malignas (Se observan elementos celulares compatibles con fibroadenoma) (Se observan estructuras micticas del gnero Candida) (Se observa abundante exudado purulento compatible con peritonitis aguda) Examen citolgico no concluyente (Se observan atipias celulares sospechosas, pero no diagnsticas, de carcinoma; se sugiere practicar biopsia) Examen citolgico positivo para clulas neoplsicas malignas (Alteraciones compatibles con carcinoma espinocelular) (Alteraciones compatibles con metstasis de melanoma) (Alteraciones compatibles con tumor maligno indiferenciado) Muestra insuficiente para examen citolgico

Ventajas del Examen Citolgico

En comparacin con la biopsia, la toma de muestra citolgica es ms fcil, ms econmica y menos cruenta. El procesamiento es tambin ms sencillo y el resultado se puede obtener con ms rapidez. La muestra citolgica en general, abarca un rea mucho ms amplia que la de una biopsia. En muchos casos permite detectar lesiones no visibles a ojo desnudo (Ejemplos: lavado peritoneal, examen de Papanicolaou).

Limitaciones del Examen Citolgico

Para el diagnstico de tumores malignos, se basa fundamentalmente en los caracteres celulares de malignidad (heterotipa); el extendido no permite ver directamente la distorsin de la microarquitectura ni la invasin. En algunos casos es difcil distinguir entre caracteres citolgicos de cncer y anaplasia de regeneracin. La aplicacin de tcnicas de inmunohistoqumica es ms dificultosa que en los cortes histolgicos. Finalmente, es necesario destacar que un diagnstico negativo para cncer no descarta la existencia de un tumor maligno, especialmente cuando ese diagnstico no demuestra una lesin benigna especfica (tumor benigno, agente etiolgico de un proceso infeccioso). Esta aseveracin es vlida para todos los mtodos de diagnstico.

http://escuela.med.puc.cl/publ/patologiageneral/Patol_128.html

Citologa en Base Lquida

La prueba convencional de Papanicolau, ha sido y ser uno de los aportes de mayor importancia que han existido en las ltimas 5 dcadas, en cuanto a la salud de la mujer se refiere, esto porque como ya habamos explicado es el mtodo ms sencillo e indoloro que puede orientarnos en cuanto a la deteccin temprana de anomalas celulares en el crvix o cuello del tero o matriz. Pero aadiendo a este gran aporte, como todo en la ciencia, un poco de tecnologa no le ha venido mal a esta prueba, lo que ha desarrollado la Citologa o Papanicolau en Base Lquida, que es ms certero que el PAP convencional. Esto debido a que la recoleccin y anlisis de la muestra del Papanicolau en Base Lquida (PBL), permite que el laboratorio obtenga una muestra de las clulas del crvix uterino con mejor calidad diagnstica. El beneficio que proporciona el PBL es la deteccin ms temprana de clulas precancerosas, adems se pueden ordenar y realizar pruebas complementarias de la misma muestra sin la necesidad de realizar otra toma de muestra. Despus de aos de trabajo e investigacin la Administracin de Drogas y Alimentos (FDA) de los EEUU aprob el PBL, concluyendo que era significativamente ms efectivo que la tradicional toma de muestra del Papanicolau para la deteccin de clulas atpicas, cncer cervical o lesiones precancerosas en el crvix. El Papanicolau en Base Lquida aumenta la deteccin de lesiones leves o severas en un 65% de las mujeres que se someten a un PAP. Los estudios tambin demuestran que el PBL reduce en un 29% del nmero de muestras inadecuadas que en general llevan a la repeticin del Papanicolau Convencional. El mtodo de recoleccin de la muestra del PBL incrementa la calidad de la muestra facilitando la interpretacin de los resultados al citlogo y/o patlogo.

Mtodo La muestra se Toma del crvix del tero al igual que el PAP convencional, la diferencia radica en que se depositan las clulas desprendidas del crvix en un lquido que preserva estas clulas, las cuales pasan por un proceso de licuefaccin donde se desechan los restos de material y clulas innecesarias. Como ya dijimos de esta misma muestra se pueden realizar pruebas complementarias como: - Prueba de ADN-HPV - Prueba de Clamidia - Tipificacin del HPV http://mujersaludable.blogspot.com/2008/04/citologa-en-base-lquida.html

Citologa de crvix o test de Papanicolaou

Qu es y para qu se utiliza? La citologa de crvix, tambin llamada Prueba de Papanicolau o triple toma de Witt es la tcnica ms utilizada para deteccin precoz de cncer de cuello uterino y para lesiones precancerosas. Se basa en el hecho de que las clulas de las capas superficiales del epitelio cervical se descaman continuamente. Otras indicaciones de esta tcnica son: diagnstico de infecciones genitales y valoracin del nivel hormonal. El factor de riesgo ms importante para padecer cncer de crvix es la infeccin por el VPH , ms probable si ha habido relaciones sexuales a muy temprana edad, nmero elevado de parejas sexuales, y relaciones sexuales con hombre no circuncidados.Otros factores de riesgo para padecer cncer de cuello uterino son: fumar, infeccin por VIH, infeccin por Clamidia, alimentacin pobre en frutas y verduras, ACO largo tiempo, embarazos mltiples, condicin socioeconmica baja, exposicin a Dietilbestrol antes de nacer y antecedentes familiares de cncer de cuello de tero. Material necesario y preparacin Se necesita:

Mesa ginecolgica. Un espculo de metal o plstico (estndar o virginal). Una esptula de aire. Un pequeo cepillo endocervical o torunda de algodn. Porta con banda esmerilada. Fijador. Foco luminoso.

Cmo se hace?. Normas generales, especificas y realizacin del procedimiento Instrucciones a la paciente previas a la citologa:

Abstenerse de relaciones sexuales en las 48 horas previas a la toma. Debe haber finalizado la menstruacin 4-5 das antes. Lavarse externamente con agua y jabn, no hacer lavados internos ni con desodorantes vaginales.

No usar tratamientos topicos en 5-7 das antes a la prueba (vulos, espermicidas, cremas vaginales).

Procedimiento: La mujer ha de estar colocada en posicin ginecolgica, procurando que est relajada. Se separan con una mano los labios vulvares y se introduce el espculo con la otra ,en sentido longitudinal a la vulva.Se rota el espculo 90.Un vez introducido se abre hasta la completa visualizacin del crvix, y se fija el espculo. Se hacen 3 tomas: 1. Fondo de saco vaginal posterior, con la parte semicircular de la esptula, luego se extiende sobre el porta, en la banda de la izquierda. 2. Toma de exocrvix, girando la esptula, en su parte lobulada, alrededor del crvix, extendiendo la muestra en la parte central del porta. 3. Toma del endocrvix con la torunda o cepillo endocervical , una vez introducido en el orificio cervical, y extendemos la muestra en la banda derecha. Despus se procede a la fijacin de las tomas con spray, realizando la pulverizacin a 10 cm del porta. Advertencias:

No hacer exploracin bimanual antes de la toma, puede alterar el resultado. En mujeres virgenes o introito vaginal estrecho, utilizaremos espculo. virginal,podemos lubrificarlo con agua si es necesario. (Es poco frecuente la indicacin de citologa cervical en mujeres vrgenes). No usar lubricantes por posible contaminacin de la muestra. Tras realizar la citologa debemos advertir a la paciente que puede tener un pequeo sangrado, sin significacin patolgica.

Qu podemos observar?. Resultados de la prueba. Los resultados de la prueba de Papanicolau pueden ser: a. Negativo a lesiones intraepiteliales o cncer. b. Anomalas de las clulas epiteliales: a. Clulas escamosas atpicas. b. Displasia leve /CIN 1. c. Displasia moderada o grave/ CIN 2. d. Cncer in situ/ CIN 3. c. Otras neoplasias malignas: melanomas, sarcomas y linfomas (afectan raras veces al cuello uterino). d. Hallazgos que no tienen que ver con cncer de crvix: infecciones por hongos, herpes, tricomonas, etc.

e. Cambios celulares reactivos: son reacciones de las clulas del cuello uterino a las infecciones u otras irritaciones. * CIN corresponde a las iniciales de neoplasia intraepitelial cervical, en ingls. Qu hacer con una citologa anormal? En el caso de hallazgo de clulas escamosas atpicas, se repite el frotis a los 4-6 meses, hasta obtener 3 resultados negativos consecutivos, momento en el que se volver a los controles normales. Si hay inflamacin importante se repetira a los 2-3 meses. Se har lo mismo en el caso de diagnstico de CIN 1 o displasia leve, ya que el 60% de estas lesiones regresan espontneamente. En el caso de que no regresen y se quiera hacer tratamiento, es necesario realizar biopsia dirigida por colposcopia. En el caso de que las clulas escamosas atpicas sean consecuencia de infecciones o cervicitis, s que se har tratamiento. Si el resultado de la citologa es de CIN 2 , CIN 3, o carcinoma in situ, ser necesario realizar pruebas adiccionales (colposcopia, biopsia y algunas veces raspado endocervical), para lo que es necesario derivar a la paciente al gineclogo, que decidir la conducta a seguir , incluida la realizacin del test de VHP si lo considera necesario, teniendo en cuenta las recomendaciones de guas de prctica clnica. Las mujeres VIH positivas o embarazadas con clulas escamosas atpicas o displasia de cualquier grado deben ser evaluadas mediante colposcopia. Las infecciones genitales o los cambios reactivos se podrn tratar desde Atencin Primaria. Limitaciones de la prueba Las limitaciones ms importantes de la citologa de crvix para conseguir una alta sensibilidad se derivan de la recogida y el procesamiento de las muestras y de la lectura e interpretacin. La mayora de los errores ocurren al practicar la toma.Adems la presencia de sangre o inflamacin puede dificultar la visin de las clulas.Por todo ello la sensibilidad y especificidad de la prueba son muy variables (11-99% y 14-97%, respectivamente). La evidencia disponible hasta ahora, muestra que es probable que la Citologa de base lquida reduzca el nmero de falsos negativos, el nmero de muestras incorrectas y el nmero de pruebas que es necesario repetir.Pero este mtodo es ms costoso que el Papanicolau usual y slo est siendo utilizada de forma piloto en algunos pases como Reino Unido.
Autores:

Lorena Anido Redondo Mdico Residente de Medicina Familiar y Comunitaria, Centro de Salud de Elvira-Mesoiro, A Corua.

hematoxilina eosina

Fundamento
La eosina es un compuesto cido cuya propiedad est basada en su polaridad negativa, lo que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva. Por ello colorea componentes y orgnulos citoplasmticos, colgeno y bras musculares, pero no los ncleos (que son bsicamente cidos nucleicos y estn cargados negativamente). Aquellos componentes que se tien con eosina son conocidos como acidlos o eosinlos. La coloracin resultante de la tincin con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos. Es fuertemente uorescente, aunque esta caracterstica es muy poco utilizada. La eosina es un colorante muy usado en tinciones de vitalidad. Al ser un colorante aninico (carga negativa) no penetra en el interior celular a no ser que la membrana sea permeable. Esto solo sucede en clulas muertas. Por tanto, en una tincin con eosina encontraremos clulas con el interior teido (muertas) y clulas solo teidas en su entorno (vivas).